JP2018514222A5

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Info

Publication number: JP2018514222A5
Application number: JP2017557995A
Authority: JP
Filing date: 2016-05-04
Publication date: 2019-06-06
Anticipated expiration: 2036-05-04

Description

１０発酵槽
２０滅菌タンク

本発明は次の実施態様を含む。
［１］１つまたは複数のラムノリピッドを含む複数の発酵物を生産する半連続方法であって、
（ａ）グルコース、脂肪アルコール、脂肪酸、または植物油、例えばオリーブ油、菜種油、オリーブ油、トウモロコシ油、ヒマワリ油、キャノーラ油および大豆油などの少なくとも１つの炭素源、ＮａＮＯ _３、尿素およびＮＨ _４Ｃｌなどの少なくとも１つの窒素源、Ｈ _３ＰＯ _４およびＫ _２ＨＰＯ _４などの少なくとも１つのリン源、ＭｇＳＯ _４＊７Ｈ _２ＯおよびＭｇＣｌ _２などの少なくとも１つのマグネシウム源、ＫＣｌおよびＫＯＨなどの少なくとも１つのカリウム源、Ｈ _２ＳＯ _４などの少なくとも１つの硫黄源、ＫＣｌおよびＮａＣｌなどの少なくとも１つの塩化物源、ならびにＮａＣｌ、ＮａＮＯ _３、およびＮａＯＨなどの少なくとも１つのナトリウム源、ならびに場合によりアラビアゴム、グアーゴムおよびラムノリピッドなどの乳化剤を含む培養培地で、約２から約５日間、ラムノリピッド生産微生物を培養して、ラムノリピッドを含む第１の発酵培地を得ること、
（ｂ）（ａ）で得られた１つまたは複数のラムノリピッドを含む前記発酵培地の少なくとも約７０％を除去すること、
（ｃ）（ｂ）で除去された１つまたは複数のラムノリピッドを含む前記発酵培地を、ステップ（ａ）に記載の組成を有する培養培地で置き換えること、
（ｄ）ステップ（ａ）〜（ｃ）を少なくとも１回反復し、ラムノリピッドを含む次の発酵物を得ること
を含み、
前記ステップ（ａ）〜（ｃ）は、少なくとも約３０日間反復可能であり、
前記方法が、ステップ（ａ）の前記培養培地に、（１）１日あたり全発酵物体積の０．１％ｖ／ｖで、微量栄養素溶液において２０ｍｇ／Ｌ以下の濃度で１つまたは複数の微量栄養素を含む組成物を添加すること、および／または（２）炭素ベースまたはシリコンベースの消泡剤などの消泡剤を場合により添加することをさらに含む、半連続方法。
［２］前記ラムノリピッド生産微生物が、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）などのシュードモナス属（Pseudomonas）微生物である、上記［１］に記載の方法。
［３］前記乳化剤が約０．１〜２０重量％の量で存在し、前記炭素源が約６〜１２重量％の濃度で存在し、前記窒素源が約１〜４ｇ／Ｌの量で存在し、前記リン源が約１〜３ｇ／Ｌの量で存在し、前記マグネシウムイオンが約０．００１〜０．２ｇ／Ｌの量で存在し、前記カリウムイオンが約０．１から約１ｇ／Ｌの量で存在し、前記ナトリウムイオンが約１〜１０ｇ／Ｌの量で存在し、前記塩化物イオンが約０．１〜１ｇ／Ｌの量で存在し、前記硫黄イオンが約０．１〜１ｇ／Ｌの量で存在する、上記［１］〜［２］に記載の方法。
［４］前記微量栄養素が、ＦｅＣｌ _３＊６Ｈ _２ＯもしくはＦｅＳＯ _４などのＦｅ塩、ＭｎＳＯ _４＊Ｈ _２ＯおよびＭｎＣｌ _２・４Ｈ _２ＯなどのＭｎ塩、ＺｎＳＯ _４＊７Ｈ _２ＯもしくはＺｎＣｌ _２などのＺｎ、Ｎａ _３Ｃ _６Ｈ _５Ｏ _７＊２Ｈ _２Ｏ、ＮａＣ _６Ｈ _７Ｏ _７およびＮａ _２Ｃ _６Ｈ _６Ｏ _７などのＮａ塩、またはＣｕＣｌ _２＊２Ｈ _２ＯおよびＣｕＳＯ _４＊５Ｈ _２ＯなどのＣｕ塩である、上記［１］〜［３］に記載の方法。
［５］前記Ｃｕ塩が微量栄養素溶液において約０．５〜３ｇ／Ｌの量で存在し、前記Ｍｎが微量栄養素溶液において約０．１〜１．５ｇ／Ｌの量で存在し、前記Ｚｎ塩が微量栄養素溶液において約０．５ｇ／Ｌの量で存在し、前記Ｆｅ塩が微量栄養素溶液において約０．１〜１ｇ／Ｌの量で存在し、および／または前記ナトリウム塩が微量栄養素溶液において約１〜５ｇ／Ｌの量で存在する、上記［４］に記載の方法。
［６］前記微量栄養素組成物を連続的に添加する、上記［１］〜［５］に記載の方法。
［７］前記微量栄養素組成物を毎日添加する、上記［１］〜［６］に記載の方法。
［８］前記シュードモナス属（Pseudomonas）を約３０〜３７℃の温度および／または約６〜８．６のｐＨで培養する、上記［１］〜［７］に記載の方法。
［９］ステップ（ｄ）を少なくとも約３０日間反復する、上記［１］〜［８］に記載の方法。

Claims

１つまたは複数のラムノリピッドを含む複数の発酵物を生産する半連続方法であって、
（ａ）グルコース、脂肪アルコール、脂肪酸、または植物油、例えばオリーブ油、菜種油、オリーブ油、トウモロコシ油、ヒマワリ油、キャノーラ油および大豆油などの少なくとも１つの炭素源、ＮａＮＯ_３、尿素およびＮＨ_４Ｃｌなどの少なくとも１つの窒素源、Ｈ_３ＰＯ_４およびＫ_２ＨＰＯ_４などの少なくとも１つのリン源、ＭｇＳＯ_４＊７Ｈ_２ＯおよびＭｇＣｌ_２などの少なくとも１つのマグネシウム源、ＫＣｌおよびＫＯＨなどの少なくとも１つのカリウム源、Ｈ_２ＳＯ_４などの少なくとも１つの硫黄源、ＫＣｌおよびＮａＣｌなどの少なくとも１つの塩化物源、ならびにＮａＣｌ、ＮａＮＯ_３、およびＮａＯＨなどの少なくとも１つのナトリウム源、ならびに場合によりアラビアゴム、グアーゴムおよびラムノリピッドなどの乳化剤を含む培養培地で、約２から約５日間、ラムノリピッドを生産する、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）などのシュードモナス属（Pseudomonas）微生物を培養して、ラムノリピッドを含む第１の発酵培地を得ること、
（ｂ）（ａ）で得られた１つまたは複数のラムノリピッドを含む前記発酵培地の少なくとも約７０％を除去すること、
（ｃ）（ｂ）で除去された１つまたは複数のラムノリピッドを含む前記発酵培地を、ステップ（ａ）に記載の組成を有する培養培地で置き換えること、
（ｄ）ステップ（ａ）〜（ｃ）を少なくとも１回反復し、ラムノリピッドを含む次の発酵物を得ること
を含み、
少なくとも約４５ｇ／Ｌのラムノリピッドが生産される、
半連続方法。
前記方法が、ステップ（ａ）の前記培養培地に、（１）１日あたり全発酵物体積の０．１％ｖ／ｖで、微量栄養素溶液において２０ｍｇ／Ｌ以下の濃度で１つまたは複数の微量栄養素を含む組成物を添加すること、および／または（２）炭素ベースまたはシリコンベースの消泡剤などの消泡剤を添加することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
前記乳化剤が約０．１〜２０重量％の量で存在し、前記炭素源が約６〜１２重量％の濃度で存在し、前記窒素源が約１〜４ｇ／Ｌの量で存在し、前記リン源が約１〜３ｇ／Ｌの量で存在し、前記マグネシウムイオンが約０．００１〜０．２ｇ／Ｌの量で存在し、前記カリウムイオンが約０．１から約１ｇ／Ｌの量で存在し、前記ナトリウムイオンが約１〜１０ｇ／Ｌの量で存在し、前記塩化物イオンが約０．１〜１ｇ／Ｌの量で存在し、前記硫黄イオンが約０．１〜１ｇ／Ｌの量で存在する、請求項１に記載の方法。
前記微量栄養素が、ＦｅＣｌ_３＊６Ｈ_２ＯもしくはＦｅＳＯ_４などのＦｅ塩、ＭｎＳＯ_４＊Ｈ_２ＯおよびＭｎＣｌ_２・４Ｈ_２ＯなどのＭｎ塩、ＺｎＳＯ_４＊７Ｈ_２ＯもしくはＺｎＣｌ_２などのＺｎ、Ｎａ_３Ｃ_６Ｈ_５Ｏ_７＊２Ｈ_２Ｏ、ＮａＣ_６Ｈ_７Ｏ_７およびＮａ_２Ｃ_６Ｈ_６Ｏ_７などのＮａ塩、またはＣｕＣｌ_２＊２Ｈ_２ＯおよびＣｕＳＯ_４＊５Ｈ_２ＯなどのＣｕ塩である、請求項２に記載の方法。
前記Ｃｕ塩が微量栄養素溶液において約０．５〜３ｇ／Ｌの量で存在し、前記Ｍｎが微量栄養素溶液において約０．１〜１．５ｇ／Ｌの量で存在し、前記Ｚｎ塩が微量栄養素溶液において約０．５ｇ／Ｌの量で存在し、前記Ｆｅ塩が微量栄養素溶液において約０．１〜１ｇ／Ｌの量で存在し、および／または前記ナトリウム塩が微量栄養素溶液において約１〜５ｇ／Ｌの量で存在する、請求項４に記載の方法。
前記微量栄養素組成物を連続的に添加する、請求項２、４又は５に記載の方法。
前記微量栄養素組成物を毎日添加する、請求項２、４又は５に記載の方法。
前記シュードモナス属（Pseudomonas）を約３０〜３７℃の温度および／または約６〜８．６のｐＨで培養する、請求項１に記載の方法。
ステップ（ｄ）を少なくとも約３０日間反復する、請求項１に記載の方法。