JP2017516474A - 細胞内エネルギーレベルが向上した微生物、及びそれを利用してl−アミノ酸を生産する方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本実施例においては、野生型大腸菌W3110(ATCC(登録商標) 39936TM)のfhuC,fhuD,fhuB遺伝子を相同組換えによってそれぞれ欠失させた。
本実施例においては、実施例1で作製された菌株を利用して、実際細胞内ATPレベルを測定した。
本実施例においては、野生株由来のL−トリプトファン生産菌株である大腸菌W3110trpΔ2/pCL−Dtrp_att−trpEDCBA菌株(大韓民国公開特許10−2013−0082121号)のfhuC,fhuD,fhuB遺伝子を、実施例1に記載されているように、相同組換えによって、単独で、あるいはいずれも欠失され、W3110trpΔ2_ΔfhuC/pCL−Dtrp_att−trpEDCBA,W3110trpΔ2_ΔfhuD/pCL−Dtrp_att−trpEDCBA,W3110trpΔ2_ΔfhuB/pCL−Dtrp_att−trpEDCBA及びW3110trpΔ2_ΔfhuCDB/pCL−Dtrp_att−trpEDCBA菌株を作製した。かように作製された菌株に対して、実施例2と同一方法で、細胞内ATPレベルを測定し、その結果を図2に示した。
実施例3で記述されているように、野生株由来のL−トリプトファン生産菌株であるW3110trpΔ2/pCL−Dtrp_att−trpEDCBA遺伝子とfhuC,fhuD,fhuB遺伝子とを、単独で、あるいはいずれも欠失させ、細胞内のATPを増加させた菌株を対象に、グルコースを炭素源として使用して、力価評価を行った。
本実施例においては、L−トリプトファン生産菌株である大腸菌KCCM10812P(大韓民国登録特許第0792095号)と、L−トレオニン生産菌株であるKCCM10541P(大韓民国登録特許第0576342号)とのfhuC,fhuD,fhuB遺伝子を、実施例1に記載されているように相同組換えによってそれぞれ欠失させた。
本実施例においては、実施例5で作製された菌株を利用して、実際細胞内ATPレベルを測定した。
実施例5で記述されているように、L−トレオニン生産微生物である大腸菌KCCM10541P(大韓民国登録特許第0576342号)から、fhuC,fhuD,fhuB遺伝子を欠失させ、細胞内のATPを増加させた菌株を対象に、グルコースを炭素源として使用して力価評価を行った。ysa遺伝子及びydaS遺伝子が欠失されたL−トレオニン生産菌株(大腸菌KCCM10541P_△ysa△ydaS)を対照群として含めて力価評価の結果を比較した。
実施例5で記述されているように、L−トリプトファン生産菌であるKCCM10812P(大韓民国登録特許第0792095号)から、fhuC,fhuD,fhuB遺伝子を欠失させ、細胞内のATPを増加させた菌株を対象に、グルコースを炭素源として使用して力価評価を遂行した。ysa遺伝子及びydaS遺伝子が欠失されたL−トリプトファン生産菌株(大腸菌KCCM10812P_△ysa△ydaS)を対照群として含め、実施例4と同一方法で力価評価を行った。
本明細書に記載された配列番号1ないし配列番号21の配列は、添付された配列リストに表示される。
Claims (7)
- 鉄吸収システムを構成する配列番号5のアミノ酸配列を有するタンパク質、配列番号6のアミノ酸配列を有するタンパク質、及び配列番号7のアミノ酸配列を有するタンパク質のうち選択される1以上の活性が不活性化され、非変形菌株に比べて上昇した細胞内ATP濃度を有するエシェリキア属微生物。
- 前記エシェリキア属微生物は、配列番号5,6及び7のアミノ酸配列を有するタンパク質の活性がいずれも不活性化されたものであることを特徴とする、請求項1に記載のエシェリキア属微生物。
- 前記微生物は、大腸菌であることを特徴とする、請求項1に記載のエシェリキア属微生物。
- 前記エシェリキア属微生物は、非変形菌株に比べて向上したL−アミノ酸生産能を有することを特徴とする、請求項1に記載のエシェリキア属微生物。
- 前記L−アミノ酸は、L−トレオニンまたはL−トリプトファンであることを特徴とする、請求項4に記載のエシェリキア属微生物。
- 請求項1ないし5のうちいずれか1項に記載のエシェリキア属微生物を培養する段階、及び得られた培養物からL−アミノ酸を分離する段階を含む、L−アミノ酸を生産する方法。
- 前記L−アミノ酸は、L−トレオニンまたはL−トリプトファンであることを特徴とする、請求項6に記載の方法。
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C11 | Written invitation by the commissioner to file amendments |
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A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
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C21 | Notice of transfer of a case for reconsideration by examiners before appeal proceedings |
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A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
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C211 | Notice of termination of reconsideration by examiners before appeal proceedings |
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C22 | Notice of designation (change) of administrative judge |
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C27C | Written answer of applicant after an oral proceeding |
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C13 | Notice of reasons for refusal |
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C22 | Notice of designation (change) of administrative judge |
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A521 | Request for written amendment filed |
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C30A | Notification sent |
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