JP2017193571A

JP2017193571A - 病理学的タウタンパク質の免疫学的標的化方法

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Publication number: JP2017193571A
Application number: JP2017132595A
Authority: JP
Inventors: アイナーエム．シグルドソン; M Sigurdsson Einar
Original assignee: New York University NYU
Current assignee: New York University NYU
Priority date: 2009-06-10
Filing date: 2017-07-06
Publication date: 2017-10-26
Anticipated expiration: 2030-06-10
Also published as: JP5917394B2; CN106390107A; JP2019163268A; US20210061894A1; US20100316564A1; EA032675B1; JP6518727B2; JP6174667B2; CN102596221B; JP2012530055A; JP2016094426A; CA2765099A1; JP6795649B2; JP2022180615A; EP3329932A1; US20140302046A1; JP2021042219A; US11787854B2; JP7539446B2; CA3239368A1

Abstract

【課題】アルツハイマー病又は他のタウオパシーを治療、予防、及び診断するための方法及び組成物の提供。【解決手段】特定のアミノ酸配列からなる免疫原性タウペプチド、又は前記免疫原性タウペプチドのエピトープを特異的に認識する１つ以上の抗体で、免疫原性タウペプチドでの免疫によって誘導された抗体、又は、そのようにして誘導された抗体に由来する抗体を含む組成物。前記免疫原性タウペプチドは、好ましくは１つ以上のアミノ酸残基においてリン酸化されており、かつリン酸化された免疫原性タウペプチドを認識する抗体が好ましい。【選択図】なし

Description

本出願は、その全体が参照により組み込まれる、２００９年６月１０日に出願された米国特許仮出願第６１／１８５，８９５号の利益を主張する。

本出願の主題は、米国国立衛生研究所（ｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ）、補助金番号ＡＧ０３２６１１の下、米国政府からの援助でなされた。米国政府は一定の権利を有する。

本発明は、被験体において、アルツハイマー病および関連するタウオパシーを予防、治療、および診断するため、ならびにタウ神経原線維タングルおよび／またはそれらの病理学的タウ前駆体の蓄積を阻害するための免疫学的方法および組成物に関する。

アルツハイマー病（ＡＤ）のにおいて新進の治療は、アミロイドβ（Ａβ）を取り除くための免疫治療である。ＡＤおよび前頭側頭型認知症における別の重要な標的は、タウ神経原線維タングルおよび／またはそれらの病理学的タウタンパク質コンフォーマーであり、その存在は認知症の程度と良好に相関している（ＴｅｒｒｙＲ．，「ＮｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌＣｈａｎｇｅｓｉｎＡｌｚｈｅｉｍｅｒＤｉｓｅａｓｅ」ＰｒｏｇＢｒａｉｎＲｅｓ．１０１：３８３−３９０（１９９４）（非特許文献1）；ＧｏｅｄｅｒｔＭ．，「ＴａｕＰｒｏｔｅｉｎａｎｄＮｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ」ＳｅｍｉｎＣｅｌｌＤｅｖＢｉｏｌ．１５：４５−４９（２００４）（非特許文献2））。タウ病理における免疫治療の目的は、抗タウ抗体が、神経細胞の生存能力に影響を与える可能性があるタウ凝集物を取り除くことができることである。免疫系の他の成分は、クリアランスにおいて同様に役割を果たす可能性がある。タウは、チューブリン集合、微小管安定性、および細胞骨格完全性を促進する可溶性タンパク質である。ダウン症候群研究によると、Ａβ凝集後にタウ病理が起こるようであるが、ＡＤ脳およびマウスモデルの分析は、これらの病理が相乗作用的であるようであることを示す（Ｓｉｇｕｒｄｓｓｏｎｅｔａｌ．，「ＬｏｃａｌａｎｄＤｉｓｔａｎｔＨｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌＥｆｆｅｃｔｓｏｆＵｎｉｌａｔｅｒａｌＡｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ２５−３５ＩｎｊｅｃｔｉｏｎｓｉｎｔｏｔｈｅＡｍｙｇｄａｌａｏｆＹｏｕｎｇＦ３４４Ｒａｔｓ」ＮｅｕｒｏｂｉｏｌＡｇｉｎｇ１７：８９３−９０１（１９９６）（非特許文献3）；Ｓｉｇｕｒｄｓｓｏｎｅｔａｌ．，「ＢｉｌａｔｅｒａｌＩｎｊｅｃｔｉｏｎｓｏｆＡｍｙｌｏｉｄ−β ２５−３５ｉｎｔｏｔｈｅＡｍｙｇｄａｌａｏｆＹｏｕｎｇＦｉｓｃｈｅｒＲａｔｓ：Ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ，Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ，ａｎｄＴｉｍｅＤｅｐｅｎｄｅｎｔＨｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌＥｆｆｅｃｔｓ」ＮｅｕｒｏｂｉｏｌＡｇｉｎｇ１８：５９１−６０８（１９９７）（非特許文献4）；Ｌｅｗｉｓｅｔａｌ．，「ＥｎｈａｎｃｅｄＮｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙＤｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｉｎＴｒａｎｓｇｅｎｉｃＭｉｃｅＥｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｕｔａｎｔＴａｕａｎｄＡＰＰ」Ｓｃｉｅｎｃｅ２９３（５５３４）：１４８７−９１（２００１）（非特許文献5）；Ｇｏｔｚｅｔａｌ．，「ＦｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＮｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙＴａｎｇｌｅｓｉｎＰ３０１ＬＴａｕＴｒａｎｓｇｅｎｉｃＭｉｃｅＩｎｄｕｃｅｄｂｙＡ−ｂｅｔａ４２Ｆｉｂｒｉｌｓ」Ｓｃｉｅｎｃｅ２９３：１４９１−１４９５（２００１）（非特許文献6）；Ｄｅｌａｃｏｕｒｔｅｅｔａｌ．，「ＮｏｎｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇｂｕｔＳｙｎｅｒｇｅｔｉｃＴａｕａｎｄＡＰＰＰａｔｈｏｌｏｇｉｅｓｉｎＳｐｏｒａｄｉｃＡｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓＤｉｓｅａｓｅ」Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ．５９：３９８−４０７（２００２）（非特許文献7）；Ｏｄｄｏｅｔａｌ．，「ＡｂｅｔａＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙＬｅａｄｓｔｏＣｌｅａｒａｎｃｅｏｆＥａｒｌｙ，ＢｕｔＮｏｔＬａｔｅ，ＨｙｐｅｒｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄＴａｕＡｇｇｒｅｇａｔｅｓｖｉａｔｈｅＰｒｏｔｅａｓｏｍｅ」Ｎｅｕｒｏｎ４３：３２１−３３２（２００４）（非特許文献8）；Ｒｉｂｅｅｔａｌ．，「ＡｃｃｅｌｅｒａｔｅｄＡｍｙｌｏｉｄＤｅｐｏｓｉｔｉｏｎ，ＮｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙＤｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｎｄＮｅｕｒｏｎａｌＬｏｓｓｉｎＤｏｕｂｌｅＭｕｔａｎｔＡＰＰ／ＴａｕＴｒａｎｓｇｅｎｉｃＭｉｃｅ」ＮｅｕｒｏｂｉｏｌＤｉｓ．（２００５）（非特許文献9））。従って、両方の病理を標的とすることは、治療の効力を実質的に増加させる可能性がある。今日まで、ＡＤにおいてタウ変異は観察されていないが、しかし、前頭側頭型認知症において、第１７染色体のタウタンパク質の変異（ＦＴＤＰ−１７）が原因因子であり、これは、タウベースの治療的アプローチをさらに支持する（Ｐｏｏｒｋａｊｅｔａｌ．，「ＴａｕｉｓａＣａｎｄｉｄａｔｅＧｅｎｅｆｏｒＣｈｒｏｍｏｓｏｍｅ１７ＦｒｏｎｔｏｔｅｍｐｏｒａｌＤｅｍｅｎｔｉａ」ＡｎｎＮｅｕｒｏｌ．４３：８１５−８２５（１９９８）（非特許文献10）；Ｓｐｉｌｌａｎｔｉｎｉｅｔａｌ．，「ＦｒｏｎｔｏｔｅｍｐｏｒａｌＤｅｍｅｎｔｉａａｎｄＰａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍＬｉｎｋｅｄｔｏＣｈｒｏｍｏｓｏｍｅ１７：ＡＮｅｗＧｒｏｕｐｏｆＴａｕｏｐａｔｈｉｅｓ」ＢｒａｉｎＰａｔｈｏｌ．８：３８７−４０２（１９９８）（非特許文献11））。これらの変異を発現するトランスジェニックマウスは、この疾患の多くの態様をモデル化し、タウ病理関連の神経変性の病因を研究するため、および潜在的な治療を評価するための価値のあるツールである。これらのモデルの１つである、Ｐ３０１Ｌマウスモデル（Ｌｅｗｉｓｅｔａｌ．，「ＮｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙＴａｎｇｌｅｓ，ＡｍｙｏｔｒｏｐｈｙａｎｄＰｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅＭｏｔｏｒＤｉｓｔｕｒｂａｎｃｅｉｎＭｉｃｅＥｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｕｔａｎｔ（Ｐ３０１Ｌ）ＴａｕＰｒｏｔｅｉｎ」ＮａｔＧｅｎｅｔ．２５：４０２−４０５（２０００）（非特許文献12））は、前頭側頭型認知症の特徴の多くを反復するが、タウ凝集物のＣＮＳ分布は、認知機能評価を複雑にする感覚運動の異常を主として生じる。このマウスモデルのホモ接合性系統はＣＮＳ病理の初期の発症および関連する機能障害を有し、このことは、病理学的タウコンフォーマーを標的とする免疫治療の実行可能性の初期の評価においてこの系統を理想的にする。

他のタウ関連の治療的アプローチには以下が含まれる：（１）タウリン酸化の状態に影響を与える、キナーゼを阻害するかまたはホスファターゼを活性化する薬物（Ｉｑｂａｌｅｔａｌ．，「ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＮｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙＤｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ：ＡＰｒｏｍｉｓｉｎｇＡｐｐｒｏａｃｈｔｏＡｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓＤｉｓｅａｓｅａｎｄＯｔｈｅｒＴａｕｏｐａｔｈｉｅｓ」ＣｕｒｒＤｒｕｇＴａｒｇｅｔｓ５：４９５−５０２（２００４）（非特許文献13）；Ｎｏｂｌｅｅｔａｌ．「ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＧｌｙｃｏｇｅｎＳｙｎｔｈａｓｅＫｉｎａｓｅ−３ｂｙＬｉｔｈｉｕｍＣｏｒｒｅｌａｔｅｓｗｉｔｈＲｅｄｕｃｅｄＴａｕｏｐａｔｈｙａｎｄＤｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎＩｎＶｉｖｏ」ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ１０２：６９９０−６９９５（２００５）（非特許文献14））；（２）微小管安定化薬物（Ｍｉｃｈａｅｌｉｓｅｔａｌ．，「｛ｂｅｔａ｝−Ａｍｙｌｏｉｄ−ＩｎｄｕｃｅｄＮｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｎｄＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎｂｙＳｔｒｕｃｔｕｒａｌｌｙＤｉｖｅｒｓｅＭｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ−ＳｔａｂｉｌｉｚｉｎｇＡｇｅｎｔｓ」ＪＰｈａｒｍａｃｏｌＥｘｐＴｈｅｒ．３１２：６５９−６６８（２００５）（非特許文献15）；Ｚｈａｎｇｅｔａｌ．，「Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ−ＢｉｎｄｉｎｇＤｒｕｇｓＯｆｆｓｅｔＴａｕＳｅｑｕｅｓｔｒａｔｉｏｎｂｙＳｔａｂｉｌｉｚｉｎｇＭｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅｓａｎｄＲｅｖｅｒｓｉｎｇＦａｓｔＡｘｏｎａｌＴｒａｎｓｐｏｒｔＤｅｆｉｃｉｔｓｉｎａＴａｕｏｐａｔｈｙＭｏｄｅｌ」ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ１０２：２２７−２３１（２００５）（非特許文献16））；（３）タウ凝集に干渉する化合物（Ｐｉｃｋｈａｒｄｔｅｔａｌ．，「ＡｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓＩｎｈｉｂｉｔＴａｕＡｇｇｒｅｇａｔｉｏｎａｎｄＤｉｓｓｏｌｖｅＡｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓＰａｉｒｅｄＨｅｌｉｃａｌＦｉｌａｍｅｎｔｓＩｎＶｉｔｒｏａｎｄｉｎＣｅｌｌｓ」ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．２８０：３６２８−３６３５（２００５）（非特許文献17））；および（４）熱ショックタンパク質媒介性のタウのクリアランスを促進する薬物（Ｄｉｃｋｅｙｅｔａｌ．，「ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆａＨｉｇｈＴｈｒｏｕｇｈｐｕｔＤｒｕｇＳｃｒｅｅｎｉｎｇＡｓｓａｙｆｏｒｔｈｅＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＣｈａｎｇｅｓｉｎＴａｕＬｅｖｅｌｓ −− ＰｒｏｏｆｏｆＣｏｎｃｅｐｔｗｉｔｈＨＳＰ９０Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」ＣｕｒｒＡｌｚｈｅｉｍｅｒＲｅｓ．２：２３１−２３８（２００５）（非特許文献18））。これらのアプローチのすべては、確かに追求する価値があるが、標的の特異性および毒性を懸念とし、このことは、免疫治療などの他のタイプのタウ標的化処理を同時に開発する重要性を強調する。

本発明は、当該技術分野におけるこれらおよび他の欠点を克服することに関する。

ＴｅｒｒｙＲ．，「ＮｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌＣｈａｎｇｅｓｉｎＡｌｚｈｅｉｍｅｒＤｉｓｅａｓｅ」ＰｒｏｇＢｒａｉｎＲｅｓ．１０１：３８３−３９０（１９９４）ＧｏｅｄｅｒｔＭ．，「ＴａｕＰｒｏｔｅｉｎａｎｄＮｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ」ＳｅｍｉｎＣｅｌｌＤｅｖＢｉｏｌ．１５：４５−４９（２００４）Ｓｉｇｕｒｄｓｓｏｎｅｔａｌ．，「ＬｏｃａｌａｎｄＤｉｓｔａｎｔＨｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌＥｆｆｅｃｔｓｏｆＵｎｉｌａｔｅｒａｌＡｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ２５−３５ＩｎｊｅｃｔｉｏｎｓｉｎｔｏｔｈｅＡｍｙｇｄａｌａｏｆＹｏｕｎｇＦ３４４Ｒａｔｓ」ＮｅｕｒｏｂｉｏｌＡｇｉｎｇ１７：８９３−９０１（１９９６）Ｓｉｇｕｒｄｓｓｏｎｅｔａｌ．，「ＢｉｌａｔｅｒａｌＩｎｊｅｃｔｉｏｎｓｏｆＡｍｙｌｏｉｄ−β ２５−３５ｉｎｔｏｔｈｅＡｍｙｇｄａｌａｏｆＹｏｕｎｇＦｉｓｃｈｅｒＲａｔｓ：Ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ，Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ，ａｎｄＴｉｍｅＤｅｐｅｎｄｅｎｔＨｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌＥｆｆｅｃｔｓ」ＮｅｕｒｏｂｉｏｌＡｇｉｎｇ１８：５９１−６０８（１９９７）Ｌｅｗｉｓｅｔａｌ．，「ＥｎｈａｎｃｅｄＮｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙＤｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｉｎＴｒａｎｓｇｅｎｉｃＭｉｃｅＥｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｕｔａｎｔＴａｕａｎｄＡＰＰ」Ｓｃｉｅｎｃｅ２９３（５５３４）：１４８７−９１（２００１）Ｇｏｔｚｅｔａｌ．，「ＦｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＮｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙＴａｎｇｌｅｓｉｎＰ３０１ＬＴａｕＴｒａｎｓｇｅｎｉｃＭｉｃｅＩｎｄｕｃｅｄｂｙＡ−ｂｅｔａ４２Ｆｉｂｒｉｌｓ」Ｓｃｉｅｎｃｅ２９３：１４９１−１４９５（２００１）Ｄｅｌａｃｏｕｒｔｅｅｔａｌ．，「ＮｏｎｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇｂｕｔＳｙｎｅｒｇｅｔｉｃＴａｕａｎｄＡＰＰＰａｔｈｏｌｏｇｉｅｓｉｎＳｐｏｒａｄｉｃＡｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓＤｉｓｅａｓｅ」Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ．５９：３９８−４０７（２００２）Ｏｄｄｏｅｔａｌ．，「ＡｂｅｔａＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙＬｅａｄｓｔｏＣｌｅａｒａｎｃｅｏｆＥａｒｌｙ，ＢｕｔＮｏｔＬａｔｅ，ＨｙｐｅｒｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄＴａｕＡｇｇｒｅｇａｔｅｓｖｉａｔｈｅＰｒｏｔｅａｓｏｍｅ」Ｎｅｕｒｏｎ４３：３２１−３３２（２００４）Ｒｉｂｅｅｔａｌ．，「ＡｃｃｅｌｅｒａｔｅｄＡｍｙｌｏｉｄＤｅｐｏｓｉｔｉｏｎ，ＮｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙＤｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｎｄＮｅｕｒｏｎａｌＬｏｓｓｉｎＤｏｕｂｌｅＭｕｔａｎｔＡＰＰ／ＴａｕＴｒａｎｓｇｅｎｉｃＭｉｃｅ」ＮｅｕｒｏｂｉｏｌＤｉｓ．（２００５Ｐｏｏｒｋａｊｅｔａｌ．，「ＴａｕｉｓａＣａｎｄｉｄａｔｅＧｅｎｅｆｏｒＣｈｒｏｍｏｓｏｍｅ１７ＦｒｏｎｔｏｔｅｍｐｏｒａｌＤｅｍｅｎｔｉａ」ＡｎｎＮｅｕｒｏｌ．４３：８１５−８２５（１９９８Ｓｐｉｌｌａｎｔｉｎｉｅｔａｌ．，「ＦｒｏｎｔｏｔｅｍｐｏｒａｌＤｅｍｅｎｔｉａａｎｄＰａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍＬｉｎｋｅｄｔｏＣｈｒｏｍｏｓｏｍｅ１７：ＡＮｅｗＧｒｏｕｐｏｆＴａｕｏｐａｔｈｉｅｓ」ＢｒａｉｎＰａｔｈｏｌ．８：３８７−４０２（１９９８）Ｌｅｗｉｓｅｔａｌ．，「ＮｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙＴａｎｇｌｅｓ，ＡｍｙｏｔｒｏｐｈｙａｎｄＰｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅＭｏｔｏｒＤｉｓｔｕｒｂａｎｃｅｉｎＭｉｃｅＥｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｕｔａｎｔ（Ｐ３０１Ｌ）ＴａｕＰｒｏｔｅｉｎ」ＮａｔＧｅｎｅｔ．２５：４０２−４０５（２０００）Ｉｑｂａｌｅｔａｌ．，「ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＮｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙＤｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ：ＡＰｒｏｍｉｓｉｎｇＡｐｐｒｏａｃｈｔｏＡｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓＤｉｓｅａｓｅａｎｄＯｔｈｅｒＴａｕｏｐａｔｈｉｅｓ」ＣｕｒｒＤｒｕｇＴａｒｇｅｔｓ５：４９５−５０２（２００４）Ｎｏｂｌｅｅｔａｌ．「ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＧｌｙｃｏｇｅｎＳｙｎｔｈａｓｅＫｉｎａｓｅ−３ｂｙＬｉｔｈｉｕｍＣｏｒｒｅｌａｔｅｓｗｉｔｈＲｅｄｕｃｅｄＴａｕｏｐａｔｈｙａｎｄＤｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎＩｎＶｉｖｏ」ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ１０２：６９９０−６９９５（２００５）Ｍｉｃｈａｅｌｉｓｅｔａｌ．，「｛ｂｅｔａ｝−Ａｍｙｌｏｉｄ−ＩｎｄｕｃｅｄＮｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｎｄＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎｂｙＳｔｒｕｃｔｕｒａｌｌｙＤｉｖｅｒｓｅＭｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ−ＳｔａｂｉｌｉｚｉｎｇＡｇｅｎｔｓ」ＪＰｈａｒｍａｃｏｌＥｘｐＴｈｅｒ．３１２：６５９−６６８（２００５）Ｚｈａｎｇｅｔａｌ．，「Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ−ＢｉｎｄｉｎｇＤｒｕｇｓＯｆｆｓｅｔＴａｕＳｅｑｕｅｓｔｒａｔｉｏｎｂｙＳｔａｂｉｌｉｚｉｎｇＭｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅｓａｎｄＲｅｖｅｒｓｉｎｇＦａｓｔＡｘｏｎａｌＴｒａｎｓｐｏｒｔＤｅｆｉｃｉｔｓｉｎａＴａｕｏｐａｔｈｙＭｏｄｅｌ」ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ１０２：２２７−２３１（２００５）Ｐｉｃｋｈａｒｄｔｅｔａｌ．，「ＡｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓＩｎｈｉｂｉｔＴａｕＡｇｇｒｅｇａｔｉｏｎａｎｄＤｉｓｓｏｌｖｅＡｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓＰａｉｒｅｄＨｅｌｉｃａｌＦｉｌａｍｅｎｔｓＩｎＶｉｔｒｏａｎｄｉｎＣｅｌｌｓ」ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．２８０：３６２８−３６３５（２００５）Ｄｉｃｋｅｙｅｔａｌ．，「ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆａＨｉｇｈＴｈｒｏｕｇｈｐｕｔＤｒｕｇＳｃｒｅｅｎｉｎｇＡｓｓａｙｆｏｒｔｈｅＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＣｈａｎｇｅｓｉｎＴａｕＬｅｖｅｌｓ −− ＰｒｏｏｆｏｆＣｏｎｃｅｐｔｗｉｔｈＨＳＰ９０Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」ＣｕｒｒＡｌｚｈｅｉｍｅｒＲｅｓ．２：２３１−２３８（２００５）

本発明の第１の態様は、被験体におけるアルツハイマー病または他のタウオパシーを予防または治療する方法に関する。この方法は、配列番号２−７５からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する任意の１つ以上の免疫原性タウペプチド、または配列番号２−７５および１０１−１０３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む免疫原性タウエピトープを認識する１つ以上の抗体を、被験体におけるアルツハイマー病または他のタウオパシーを予防または治療するために有効な条件下で、被験体に投与することを包含する。

本発明の別の態様は、被験体の脳からのタウ凝集物のクリアランスを促進する方法に関する。この方法は、配列番号２−７５からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する任意の１つ以上の免疫原性タウペプチド、または配列番号２−７５および１０１−１０３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む免疫原性タウエピトープを認識する１つ以上の抗体を、被験体の脳からのタウ凝集物のクリアランスを促進するために有効な条件下で、被験体に投与することを包含する。

本発明の第３の態様は、被験体におけるタウ病理学関連行動表現型の進行を遅延させる方法に関する。この方法は、配列番号２−７５からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する任意の１つ以上の免疫原性タウペプチド、または配列番号２−７５および１０１−１０３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む免疫原性タウエピトープを認識する１つ以上の抗体を、被験体におけるタウ病理学関連行動表現型の進行を遅延させるために有効な条件下で、被験体に投与することを包含する。

本発明の第４の態様は、配列番号２−７５および１０１−１０３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む単離されたタウペプチドに関する。この免疫原性タウペプチドは、被験体におけるアルツハイマー病または他のタウオパシーを予防または治療する際、被験体の脳からのタウ凝集物のクリアランスを促進する際、および被験体におけるタウ病理学関連行動表現型の進行を遅延させる際に有効である。

神経原線維タングルおよびそれらの病理学的タウタンパク質コンフォーマーは、被験体におけるアルツハイマー病または他のタウ関連神経変性疾患を予防または治療するための重要な標的である。しかし、高い標的特異性を有し、かつ毒性が最小限から毒性なしまでである、神経原線維タングルおよび／または病理学的タウタンパク質コンフォーマーを標的とし、かつ取り除くためのストラテジーが欠けている。本明細書に記載される免疫原性タウペプチドおよび抗体は、この欠損を克服するために設計された。本発明の免疫原性タウペプチドは、病理学的タウの狭いホスホエピトープを模倣し、これらのタウ抗体は、これらの同じ狭いホスホエピトープを認識するので、特異性および安全性の増強が達成される。このシナリオは、病理学的タウフラグメントの遊離のＮ末端またはＣ末端に対して生成される本明細書に記載される抗体にも適合する。従って、本明細書に記載される免疫治療アプローチを使用することは、正常なタウタンパク質に向けて有害な免疫応答を生じるリスクを最小にしながら、病理学的タウタンパク質に対する強固な免疫応答を生じさせることができる。
[本発明1001]
被験体におけるアルツハイマー病または他のタウオパシーを治療または予防する方法であって、
配列番号2−75からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む1つ以上の免疫原性タウペプチド、または配列番号2−75および101−103からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む免疫原性タウエピトープを認識する1つ以上の抗体を、被験体におけるアルツハイマー病または他のタウオパシーを治療または予防するために有効な条件下で、被験体に投与する段階
を包含する、方法。
[本発明1002]
アルツハイマー病もしくは他のタウオパシーを有するか、またはそのリスクがある被験体を選択する段階をさらに包含し、ここで、1つ以上の免疫原性タウペプチド、または免疫原性タウエピトープを認識する1つ以上の抗体が、選択された被験体に投与される、
本発明1001の方法。
[本発明1003]
前記1つ以上の免疫原性タウペプチドが、1つ以上のアミノ酸残基においてリン酸化されており、かつ前記1つ以上の抗体が、リン酸化された免疫原性タウペプチドを認識する、本発明1001の方法。
[本発明1004]
免疫原性キャリアが免疫原性タウペプチドに連結されている、本発明1001の方法。
[本発明1005]
アジュバントが、前記1つ以上の免疫原性タウペプチドまたは抗体を投与する段階の前、その後、またはそれと同時に投与される、本発明1001の方法。
[本発明1006]
1つ以上のさらなる免疫原性タウペプチドが、前記1つ以上の免疫原性タウペプチドを投与する段階の前、その後、またはそれと同時に投与される、本発明1001の方法。
[本発明1007]
前記1つ以上のさらなる免疫原性タウペプチドが、配列番号81−100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、本発明1006の方法。
[本発明1008]
前頭側頭型認知症、第17染色体に連鎖するパーキンソニズム（ＦＴＤＰ−17）、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、進行性皮質下グリオーシス、タングル限定認知症（ｔａｎｇｌｅｏｎｌｙｄｅｍｅｎｔｉａ）、石灰沈着を伴うびまん性神経原線維変化病、嗜銀性グレイン型認知症、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン認知症複合体、ボクサー認知症、ダウン症候群、ゲルストマン−シュトロイスラー−シャインカー病、ハレルフォルデン−スパッツ病、封入体筋炎、クロイツフェルト−ヤコブ病、多系統萎縮症、Ｃ型ニーマン−ピック病、プリオンタンパク質脳アミロイドアンギオパシー、亜急性硬化性全脳炎、筋強直性ジストロフィー、神経原線維タングルを伴う非グアム型運動ニューロン疾患、慢性外傷性脳障害、および脳炎後パーキンソニズムからなる群より選択されるタウオパシーが、治療または予防される、
本発明1001の方法。
[本発明1009]
被験体の脳からのタウ凝集物のクリアランスを促進する方法であって、
配列番号2−75からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む1つ以上の免疫原性タウペプチド、または配列番号2−75および101−103からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む免疫原性タウエピトープを認識する1つ以上の抗体を、被験体の脳からのタウ凝集物のクリアランスを促進するために有効な条件下で、被験体に投与する段階
を包含する、方法。
[本発明1010]
脳におけるタウ凝集物を有する被験体を選択する段階をさらに包含し、ここで、1つ以上の免疫原性タウペプチド、または免疫原性タウエピトープを認識する1つ以上の抗体が、選択された被験体に投与される、
本発明1009の方法。
[本発明1011]
前記1つ以上の免疫原性タウペプチドが、1つ以上のアミノ酸残基においてリン酸化されており、かつ前記1つ以上の抗体が、リン酸化された免疫原性タウペプチドを認識する、本発明1009の方法。
[本発明1012]
免疫原性キャリアが免疫原性タウペプチドに連結されている、本発明1009の方法。
[本発明1013]
アジュバントが、前記1つ以上の免疫原性タウペプチドまたは抗体を投与する段階の前、その後、またはそれと同時に投与される、本発明1009の方法。
[本発明1014]
1つ以上のさらなる免疫原性タウペプチドが、前記1つ以上の免疫原性タウペプチドを投与する段階の前、その後、またはそれと同時に投与される、本発明1009の方法。
[本発明1015]
前記1つ以上のさらなる免疫原性タウペプチドが、配列番号81−100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、本発明1014の方法。
[本発明1016]
凝集物が神経原線維タングルまたはそれらの病理学的タウ前駆体である、本発明1009の方法。
[本発明1017]
被験体におけるタウ病理学関連行動表現型の進行を遅延させる方法であって、
配列番号2−75からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む1つ以上の免疫原性タウペプチド、または配列番号2−75および101−103からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む免疫原性タウエピトープを認識する1つ以上の抗体を、被験体におけるタウ病理学関連行動表現型の進行を遅延させるために有効な条件下で、被験体に投与する段階
を包含する、方法。
[本発明1018]
タウ病理学関連行動表現型を有する被験体を選択する段階をさらに包含し、ここで、1つ以上の免疫原性タウペプチド、または免疫原性タウエピトープを認識する1つ以上の抗体が、選択された被験体に投与される、
本発明1017の方法。
[本発明1019]
前記1つ以上の免疫原性タウペプチドが、1つ以上のアミノ酸残基においてリン酸化されており、かつ前記1つ以上の抗体が、リン酸化された免疫原性タウペプチドを認識する、本発明1017の方法。
[本発明1020]
免疫原性キャリアが免疫原性タウペプチドに連結されている、本発明1017の方法。
[本発明1021]
アジュバントが、前記1つ以上の免疫原性タウペプチドまたは抗体を投与する段階の前、その後、またはそれと同時に投与される、本発明1017の方法。
[本発明1022]
1つ以上のさらなる免疫原性タウペプチドが、前記1つ以上の免疫原性タウペプチドを投与する段階の前、その後、またはそれと同時に投与される、本発明1017の方法。
[本発明1023]
前記1つ以上のさらなる免疫原性タウペプチドが、配列番号81−100からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、本発明1022の方法。
[本発明1024]
配列番号2−75および101−103からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、単離されたタウペプチド。
[本発明1025]
1つ以上のアミノ酸残基においてリン酸化されている、本発明1024の単離されたタウペプチド。
[本発明1026]
前記単離されたペプチドに連結された免疫原性キャリアをさらに含む、本発明1024の単離されたタウペプチド。
[本発明1027]
1つ以上の本発明1024の単離されたペプチドおよび薬学的キャリアを含む薬学的組成物。
[本発明1028]
薬学的に許容可能なアジュバントをさらに含む、本発明1027の薬学的組成物。
[本発明1029]
配列番号81−100からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する1つ以上のさらなる免疫原性タウペプチドをさらに含む、本発明1027の薬学的組成物。
[本発明1030]
本発明1024の単離されたタウペプチドについての抗原特異性を有する、抗体またはその結合部分。
[本発明1031]
単離されたペプチドがリン酸化されている、本発明1030の抗体またはその結合部分。
[本発明1032]
抗体がモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、またはその活性結合部分である、本発明1030の抗体またはその結合部分。
[本発明1033]
本発明1030の抗体、および
1つ以上の異なるアミロイド形成タンパク質またはペプチドを認識する1つ以上の抗体またはその結合部分
を含む、組み合わせ免疫治療剤。
[本発明1034]
1つ以上のアミロイド形成タンパク質またはペプチドが、ベータタンパク質前駆体、プリオンおよびプリオンタンパク質、αシヌクレイン、アミロイドβ、島アミロイドポリペプチド、アポリポプロテインＡＩ、アポリポプロテインＡＩＩ、リゾチーム、シスタチンＣ、ゲルソリン、心房性ナトリウム利尿因子、カルシトニン、ケラトエピセリン、ラクトフェリン、免疫グロブリン軽鎖、トランスサイレチン、Ａアミロイドーシス、β2マイクログロブリン、免疫グロブリン重鎖、フィブリノーゲンアルファ鎖、プロラクチン、ケラチン、およびメディン（ｍｅｄｉｎ）からなる群より選択される、本発明1033の組み合わせ免疫治療剤。
[本発明1035]
被験体におけるアルツハイマー病または他のタウオパシーを診断する方法であって、
本発明1030の抗体またはその活性結合フラグメントを含む診断用試薬を使用して病理学的タウタンパク質コンフォーマーの存在を被験体において検出する段階、および
前記検出に基づいて被験体におけるアルツハイマー病または他のタウオパシーを診断する段階
を包含する、方法。
[本発明1036]
前記検出する段階が、
被験体から生物学的サンプルを入手すること；
診断用試薬が前記サンプル中の病理学的タウタンパク質コンフォーマーに結合するために有効な条件下で、前記被験体からの生物学的サンプルを、診断用試薬と接触させること；および
サンプル中の病理学的タウタンパク質コンフォーマーへの診断用試薬の結合を検出すること
を包含する、本発明1035の方法。
[本発明1037]
前記検出する段階が、
検出可能な標識を含有する診断用試薬を被験体に投与すること、および
インビボ画像化デバイスを使用して、被験体において標識された診断用試薬を検出すること
を包含する、本発明1035の方法。
[本発明1038]
本発明1030の単離された抗体および検出可能な標識を備える、診断キット。

図１Ａ−１Ｂは、本発明の免疫原性タウペプチドに対する、ＪＮＰＬ３Ｐ３０１Ｌタングルマウスモデルにおける免疫応答を示す。２−３ヶ月齢のマウスは、２週間間隔をあけて最初の２回免疫を受容し、次いで、その後毎月、免疫を受容した。抗体応答を評価するために、マウスは最初の免疫前に採血され、その後、ワクチン投与の１週間後に定期的に採血され、そして８−９ヶ月齢で組織収集のために屠殺された。図１Ａおよび１Ｂに示されるＩｇＧおよびＩｇＭ抗体応答は、６回目の免疫（Ｔ３）の１週間後に測定され、８−９ヶ月齢で再度測定され、これは屠殺の時点であった（Ｔｆ＝Ｔ最終）。図１Ａは、ＧＰＳＬリンカーを介して破傷風毒素ヘルパーＴ細胞エピトープ（ＴＴ９４７−９６７）に連結されたＴａｕ２１０−２１６［Ｐ−Ｔｈｒ_２１２−Ｓｅｒ_２１４］（配列番号２）で免疫されたＪＮＰＬ３Ｐ３０１Ｌマウスにおける強固なＩｇＧおよびＩｇＭ免疫応答を示す。図１Ｂは、ＧＰＳＬを介してＴＴ９４７−９６７に連結された関連性のないタウエピトープＴａｕ２６０−２６４［Ｐ−Ｓｅｒ_２６２］に結合しているＩｇＧおよびＩｇＭによって評価されるように、強力な抗体応答が破傷風毒素エピトープに対して生成されることを示す。ＥＬＩＳＡプレートは、ウェルあたり０．５μｇペプチドでコートされ、血漿は１：２００で希釈された。図２Ａ−Ｃは、ＧＰＳＬリンカーを介して破傷風毒素ヘルパーＴ細胞エピトープ（ＴＴ９４７−９６７）（Ｔ２９９ペプチドとも呼ばれる）に連結されたＴａｕ２６０−２６４［Ｐ−Ｓｅｒ_２６２］（配列番号３）で免疫されたＪＮＰＬ３Ｐ３０１Ｌマウスが免疫原に対する強固なＩｇＧ応答を生じることを示す。図２Ａは、Ｔａｕ２６０−２６４［Ｐ−Ｓｅｒ_２６２］ペプチドを用いる免疫後のマウスにおけるＩｇＧ抗体応答を示す。上記と同様に、マウスは最初の２回の免疫は２週間間隔をあけて受容し、次いで、その後、８−９ヶ月齢になるまで２−３ヶ月毎月免疫を受容した。図２Ｂは、抗体応答の良好な部分が、ＧＰＳＬを介してＴＴ９４７−９６７に連結された関連性のないタウエピトープＴａｕ２１０−２１６［Ｐ−Ｔｈｒ_２１２−Ｓｅｒ_２１４］へのＩｇＧ結合によって評価されるように、破傷風毒素エピトープに対して生成されることを示す。図２Ｃは、抗体応答の良好な部分が、Ｔａｕ２６０−２６４［Ｐ−Ｓｅｒ_２６２］領域を含む、より大きなタウエピトープＴａｕ２４０−２７０［Ｐ−Ｓｅｒ_２６２］へのＩｇＧ結合によって評価されるように、タウエピトープに対して生成されることを示す。ＥＬＩＳＡプレートは、ウェルあたり０．５μｇペプチドでコートされ、血漿は１：２００希釈された。Ｔ０−Ｔ最終：ワクチン接種の前の採血（Ｔ０）、３回目の免疫の１週間後の採血（Ｔ１）、６回目の免疫の１週間後の採血（Ｔ２）、７回目の免疫の１週間後の採血（Ｔ３）、および組織収集時の採血（Ｔｆ）。図３は、破傷風毒素ヘルパーＴ細胞エピトープ（ＴＴ９４７−９６７）に連結されたＴａｕ２２９−２３７［Ｐ−Ｔｈｒ_２３１−Ｓｅｒ_２３５］（配列番号４）を用いて免疫されたＪＮＰＬ３Ｐ３０１Ｌタングルマウスにおいて生成された強固な抗体（ＩｇＧ）応答を示す。これらのマウスは、２−３ヶ月齢で、２週間間隔をあけて、次いで、１ヶ月後免疫され、そして３回目の免疫の１週間後に採血された（Ｔ１）。ＥＬＩＳＡプレートは、ウェルあたり０．５μｇペプチドでコートされ、血漿は１：２００で希釈された。図４は、ミョウバンアジュバント中の擬リン酸化免疫原であるＴａｕ３７９−４０８［Ａｓｐ_{３９６，４０４}］（配列番号５７）を用いて免疫されたＪＮＰＬ３Ｐ３０１Ｌタングルモデルマウスにおいて生成された強固な抗体（ＩｇＧ）応答を示す。重要なことに、これらの抗体は、ホスホエピトープであるＴａｕ３７９−４０８［Ｐ−Ｓｅｒ_{３９６，４０４}］を同程度まで認識する。これらのマウスは、２−３ヶ月齢で、最初の２回の免疫から２週間間隔をあけて、その後１ヶ月に１回免疫した。これらのマウスは、８−９ヶ月齢での組織採集の時点で採血された（Ｔｆ＝Ｔ採集）。ＥＬＩＳＡプレートは、ウェルあたり０．５μｇペプチドでコートされ、血漿は１：２００で希釈された。図５Ａ−５Ｂは、タウ免疫治療後のタングルマウスモデルの脳幹（図５Ａ）および歯状回（図５Ｂ）において観察された病理学的タウの減少を示す。ホモ接合性ＪＮＰＬ３タウＰ３０１Ｌマウスは、ＧＰＳＬリンカー配列を介して破傷風毒素ヘルパーＴ細胞エピトープ（ＴＴ９４７−９６７）に連結されたＴ２９９（Ｔａｕ２６０−２６４［Ｐ−Ｓｅｒ_２６２］（配列番号３））を用いて免疫された。脳幹と歯状回の両方で病理学的タウがＰＨＦ１抗体免疫染色によって評価された。ＰＨＦ１は、Ｃ末端のセリンアミノ酸４０４および３９６上でリン酸化される、タウを認識するモノクローナル抗体である（Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇｅｔａｌ．，「ＨｙｄｒｏｆｌｕｏｒｉｃＡｃｉｄ−ＴｒｅａｔｅｄＴａｕＰＨＦＰｒｏｔｅｉｎｓＤｉｓｐｌａｙｔｈｅＳａｍｅＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＰｒｏｐｅｒｔｉｅｓａｓＮｏｒｍａｌＴａｕ」ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２６７：５６４−５６９（１９９２）、これは、その全体が参照により組み込まれる）。病理学的タウ染色は、アジュバントのみを受容する対照動物と比較して、Ｔ２９９ペプチドで積極的に免疫した動物の脳幹と歯状回の両方で観察された。図６は、リン酸化Ｔａｕ３７９−４０８［Ｐ−Ｓｅｒ_{３９６，４０４}］（配列番号８２）を用いるｈｔａｕ／ＰＳ１マウスの免疫が梨状皮質（ｐｙｒｉｆｏｒｍｃｏｒｔｅｘ）中で５６％までタウ凝集の量を減じることを示す。免疫群と対照群の間で有意な違いが観察された（片側ＡＮＯＶＡ、ｐ＜０．０１）。ポストホック分析もまた、免疫したｈｔａｕ／ＰＳ１マウスがそれらのｈｔａｕ／ＰＳ１対照とは異なったことを示した（ｐ＜０．０１）＊＊ｐ＜０．０１。図７Ａ−７Ｂは、タウ免疫治療がタングルマウスモデルにおいて機能障害を予防することを示す。ホモ接合性ＪＮＰＬ３Ｐ３０１Ｌマウスは、ＧＰＳＬリンカー配列を介して破傷風毒素ヘルパーＴ細胞エピトープ（ＴＴ９４７−９６７）に連結されたリン酸化された免疫原性Ｔａｕ２９９ペプチド（Ｔａｕ２６０−２６４［Ｐ−Ｓｅｒ_２６２］（配列番号３））を用いて免疫された。対照動物はアジュバント単独を受容した。Ｔａｕ２６０−２６４［Ｐ−Ｓｅｒ_２６２］ペプチドワクチンの投与は、対照動物と比較して、免疫された動物について記録された、足を滑らせることがより少ないことによって示されるような、８ヶ月齢における横方向ビームによって評価される機能障害を予防した（図７Ａ）。同様に、Ｔａｕ２６０−２６４［Ｐ−Ｓｅｒ_２６２］ペプチドワクチンの投与は、５−６ヶ月齢と８−９ヶ月齢の両方においてロータロッドテストによって評価される機能障害を予防した（図７Ｂ）。図８Ａ−８Ｂは、リン酸化Ｔａｕ３７９−４０８［Ｐ−Ｓｅｒ_{３９６，４０４}］（配列番号８２）を用いるｈｔａｕ／ＰＳ１マウスの免疫が、放射状アーム迷路（図８Ａ）および物体認識テスト（図８Ｂ）における成績を改善することを示す。図８Ａにおいて示されるように、放射状アーム迷路において免疫群と対照群の間で有意な違いが観察された（二元ＡＮＯＶＡ反復測定、ｐ＜０．０００１）。Ｎｅｕｍａｎ−Ｋｅｕｌｓポストホック検定は、すべての日数に対して、対照ｈｔａｕ／ＰＳ１よりも、免疫ｈｔａｕ／ＰＳ１マウスがよりよい成績であった（すなわち、より少ないエラーを犯した）ことを明らかにした（ｐ＜０．０１−０．００１）。有意な違いは、物体認識テストにおける群間においてもまた観察された（一元ＡＮＯＶＡ、ｐ＝０．００５）（図８Ｂ）。Ｎｅｕｍａｎ−Ｋｅｕｌｓポストホック検定は、免疫したｈｔａｕ／ＰＳ１マウスが、同一の対照マウスよりもより良好な短期記憶を有したことを明らかにした（ｐ＜０．０１）。認知能力が正常のマウスは、古い物体と比較して、それらの時間の約７０％を新たな物体に費やすことは十分に確立されている。＊＊ｐ＜０．０１。図９Ａ−９Ｃは、リン酸化されたＴａｕ３７９−４０８［Ｐ−Ｓｅｒ_{３９６，４０４}］（配列番号８２）を用いるｈｔａｕ／ＰＳ１マウスの免疫が、閉鎖フィールド対称迷路（ｃｌｏｓｅｄｆｉｅｌｄｓｙｍｍｅｔｒｉｃａｌｍａｚｅ）における成績を改善することを示す。９Ａ−９Ｃの各迷路において、犯したエラーの数に関して、免疫群と対照群の間で有意な違いが観察された（一元ＡＮＯＶＡ、迷路Ａ：ｐ＜０．００１、迷路Ｂ：ｐ＜０．０００１、迷路Ｃ：ｐ＜０．０１）。ポストホック分析は、処理されたｈｔａｕ／ＰＳ１群が、それらの同一の対照マウス（ｈｔａｕ／ＰＳ１対照）よりもより良好な成績であったことを明らかにした（迷路Ａ：ｐ＜０．０１、迷路Ｂ、Ｃ：ｐ＜０．００１）。ポストホック分析は、迷路に依存して他の群のいくつかとの間で有意な違いを明らかにしたが、これらの違いは、関連性がより少なく、それゆえに、ここでは詳述されない。これらの３つの迷路は、エラーの数によって示されているように、複雑度が増加しているものであった（Ｙ軸のスケールが異なることに注目のこと）。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。図１０Ａ−１０Ｆは、リン酸化Ｔａｕ３７９−４０８［Ｐ−Ｓｅｒ_{３９６，４０４}］（配列番号８２）および対応する対照で免疫されたｈｔａｕ／ＰＳ１マウスにおけるウェスタンブロット分析によって検出された可溶性および不溶性Ｔａｕ（全体のタウおよび病理学的タウ）のレベルを示すグラフである。タウ免疫治療は、全体のタウと比較して、病理学的タウを３５−４３％減少させる（図１０Ｃおよび１０Ｄ）。この免疫治療は、Ｂ１９抗体を用いて評価されるような全体のタウレベルに影響を与えず（図１０Ａおよび１０Ｂ）、このことは、このアプローチの安全性のために重要である。ｈｔａｕ／ＰＳ１対照と比較すると、ＰＨＦ１可溶性タウはわずかに減少され（ｐ＜０．００１）、そして可溶性タウ比率（ＰＨＦ１／全体のタウ）は３５％減少された（ｐ＜０．０５）（図１０Ｅ）。ＰＨＦ１不溶性タウの減少についての強力な傾向が同様に観察され（ｐ＝０．０６）、不溶性タウ比率（ＰＨＦ１／全体のタウ）は４３％減少された（ｐ＝０．０８）（図１０Ｆ）。＊ｐ＜０．０５，＊＊＊ｐ＜０．００１。図１１Ａ−１１Ｃは、リン酸化されたタウ３９６および４０４エピトープを標的とする受動的免疫治療が、Ｐ３０１Ｌタングルマウスにおいて、機能低下を予防し、そしてタウ病理を減少することを実証する。図１１Ａは、ＩｇＧ注射対照およびＰＨＦ１免疫Ｐ３０１Ｌマウスによって横方向ビームに取られた足を滑らせることの回数の有意な違いを示すグラフであり、対照動物は、ビームと交差するときにより多く足を滑らせた（試行を合わせた、ｐ＝０．０３）。図１１Ｂは、免疫マウスおよび対照Ｐ３０１Ｌマウスの歯状回におけるタウ免疫染色のパーセンテージを示すグラフである。ＰＨＦ１免疫Ｐ３０１Ｌマウスは、歯状回においてＰＨＦ１染色されたタウ病理が対照と比較して５８％少なかった（ｐ＝０．０２）。図１１Ｃに示されるように、血漿中のＰＨＦ−１抗体の量（μｇ／μＬ）は、２週間の間に４分の１に減少した。対照には検出可能な抗体が観察されなかったのに対して、免疫動物におけるレベルは時間の経過とともに減少した。これらは、免疫マウスについての平均値である。Ｔ０：初回免疫前、Ｔ１：１２回目の注射の２４時間後、Ｔ２：１３回目および最後の注射の７日後、Ｔ３：最後の注射の１４日後。ＥＬＩＳＡプレートはＴａｕ３７９−４０８［Ｐ−Ｓｅｒ_{３９６，４０４}］でコートされた。図１２Ａ−１２Ｂは、ＰＨＦ１抗体の血漿レベルとタウ病理の間の逆相関を示すグラフである。有意な相関は脳幹において観察され（図１２Ａ；ｐ＜０．０１）、運動皮質において相関の強い傾向が観察された（図１２Ｂ；ｐ＝０．０６）。図１３Ａ−１３Ｂは、アミノ酸３９６位および４０４位においてリン酸化セリンエピトープを含有するアミノ酸３８６−４０８を含む免疫原性タウペプチド（配列番号１３）に対するモノクローナル抗体の生成を示すグラフである。図１３Ａに示されるように、非常に強力な力価が、血漿の段階希釈によって検出されるように、免疫原性Ｔａｕ−３８６−４０８［Ｐ−Ｓｅｒ_{３９６，４０４}］（赤色）のタウ部分に対して生成された。血漿抗体は、好ましくは、ホスホＳｅｒ４０４エピトープ（青色）および非ホスホエピトープ（白色）を認識した。ホスホＳｅｒ３９６エピトープ（緑色）はより低い程度まで認識された。多くの強力にポジティブなクローンが検出された（＞５０）。これらの中で、８個のホスホ特異的クローンが最初のサブクローニングのために選択された（図１３Ｂ）。すべてが安定であるように見え、３個が２回目のサブクローニングのために選択された（すべてＩｇＧ１）。リン酸化エピトープを特異的に認識しなかったクローンのうち、６個が最初のサブクローニングのために選択された。すべてが安定であるように見え、３個が２回目のサブクローニングのために選択された（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、およびＩｇＭ）。図１４Ａ−１４Ｂは、ＥＬＩＳＡによる３回目のサブクローニング後の安定なホスホ特異的（図１４Ａ）および非ホスホ特異的（図１４Ｂ）Ｔａｕ−３８６−４０８［Ｐ−Ｓｅｒ_{３９６，４０４}］抗体クローンのエピトープ結合を示すグラフである。さらなるサブクローニングのために選択されたホスホ特異的モノクローナル抗体のうち、６個のうちの４個がホスホ−Ｓｅｒ_４０４エピトープについてのそれらの特異性を保持していた（図１４Ａにおけるクローン１Ｆ１２Ｃ２、１Ｆ１２Ｇ６、４Ｅ６Ｅ３、および４Ｅ６Ｇ７を参照のこと）。２個のクローンは、ホスホ特異性が低いか（８Ｂ２Ｄ１）またはホスホ非特異的であった（８Ｂ２Ｄ４）（図１４Ａ）。非ホスホ特異的モノクローナル抗体のうち、特に、６Ｂ２Ｅ９および６Ｂ２Ｇ１２は、さらなるサブクローニング後にそれらの特異性を保持した（図１４Ｂ）。提示されたデータは、培養上清の１：８１０希釈で得られた。図１５Ａ−１５Ｂは、４個のＴａｕ−３８６−４０８［Ｐ−Ｓｅｒ_{３９６，４０４}］ホスホ特異的（図１５Ａ）および非ホスホ特異的（図１５Ｂ）モノクローナル抗体クローンの、ＪＮＰＬ３Ｐ３０１Ｌマウスおよび野生型（Ｗｔ）マウスからの脳ホモジネートとの反応性を示すウェスタンブロットである。４個のホスホ特異的クローンのうち、４Ｅ６Ｇ７は、最も強い反応性を示し、これは、図１４ＡのＥＬＩＳＡ結果と一貫している。タウＰ−Ｓｅｒ_{３９６，４０４}エピトープもまた認識するＰＨＦ−１抗体とは対照的に、すべてのクローンは、ＷｔホモジネートよりもＪＮＰＬ３Ｐ３０１Ｌ脳ホモジネートとより良好に反応する。大部分のタウは非リン酸化型であるので、予測されたように、非ホスホ特異的クローンはより速く反応した。図１６Ａ−１６Ｂは、アミノ酸２６０−２７１（配列番号１２）を含み、リン酸化セリン２６２エピトープを含有する免疫原性タウペプチドに対するモノクローナル抗体の生成を図示する。図１６Ａに示されるように、強力な力価は、免疫原性Ｔａｕ２６０−２７１［Ｐ−Ｓｅｒ_２６２］（紫色）に対して生成されたが、血漿抗体は非ホスホペプチドＴａｕ２６０−２７１を同様に認識した（Ｎｏ−Ｐ；白色）。８個の安定なホスホ特異的クローンがさらなる分析のために選択された（図１６Ｂ）。図１７は、３個のホスホ特異的Ｔａｕ２６０−２７１［Ｐ−Ｓｅｒ_２６２］モノクローナル抗体クローンの反応性を示すウェスタンブロットである。２Ｃ１１抗体クローンは、他のホスホ特異的クローンよりも高分子量バンドを認識し、野生型とＰ３０１Ｌ組織の間を区別しない。５Ｆ７Ｄ１０および５Ｆ７Ｅ９は、他のクローンを代表するものである。Ｔａｕ−５は全体のタウを認識し、タウのアミノ酸２１６−２２７周辺のエピトープに結合する。ＣＰ２７はヒトのタウを認識するがマウスのタウを認識しない。図１８Ａ−１８Ｅは、Ｐ３０１Ｌタングルマウス脳切片において５Ｆ７Ｄ１０抗体クローンを使用してタウ病理の検出を示す免疫組織化学顕微鏡写真である。５Ｆ７Ｄ１０モノクローナル抗体は、野生型（図１８Ｂ）と比較して、Ｐ３０１Ｌ脳切片（図１８Ａ）において強力な組織学的染色を示す。ＰＨＦ１抗体は同じタングルマウスにおいてタウ病理を捕捉したが（図１８Ｃ）、このパターンは５Ｆ７Ｄ１０を用いるものとは異なっており、このことは、これらの抗体が異なるタウエピトープを認識するので驚くべきことではない。図１８Ｄは、凝集したタウを伴う神経細胞を示す図１８Ａにおけるボックスを付した領域の拡大画像である。図１８Ｅは、異なるＪＮＰＬ３Ｐ３０１Ｌマウスにおいて５Ｆ７Ｄ１０を用いて検出されたタングル様病理のより高度な拡大画像である。

本明細書で使用されるとき、「タウオパシー」とは、脳の中で微小管タンパク質タウの病理学的凝集を含む任意の神経変性疾患を包含する。従って、本発明の方法を使用して治療できる他のタウオパシーには、家族性と散発性の両方のアルツハイマー病に加えて、非限定的に、前頭側頭型認知症、第１７染色体に連鎖するパーキンソニズム（ＦＴＤＰ−１７）、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、進行性皮質下グリオーシス、タングル限定認知症（ｔａｎｇｌｅｏｎｌｙｄｅｍｅｎｔｉａ）、石灰沈着を伴うびまん性神経原線維変化病、嗜銀性グレイン型認知症、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン認知症複合体、ボクサー認知症、ダウン症候群、ゲルストマン−シュトロイスラー−シャインカー病、ハレルフォルデン−スパッツ病、封入体筋炎、クロイツフェルト−ヤコブ病、多系統萎縮症、Ｃ型ニーマン−ピック病、プリオンタンパク質脳アミロイドアンギオパシー、亜急性硬化性全脳炎、筋強直性ジストロフィー、神経原線維タングルを伴う非グアム型（non-guanamian）運動ニューロン疾患、脳炎後パーキンソニズム、および慢性外傷性脳障害が含まれる。

タウ凝集物のクリアランスには、神経原線維タングル、および／または神経原線維タングルに至る病理学的タウ前駆体のクリアランスが含まれる。神経原線維タングルは、しばしば、家族性および散発性のアルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、嗜銀性グレイン型認知症、ボクサー認知症、慢性外傷性脳障害、石灰沈着を伴うびまん性神経原線維変化病、ダウン症候群、ゲルストマン−シュトロイスラー−シャインカー病、ハレルフォルデン−スパッツ病、遺伝性前頭側頭型認知症、第１７染色体に連鎖するパーキンソニズム（ＦＴＤＰ−１７）、封入体筋炎、クロイツフェルト−ヤコブ病、多系統萎縮症、Ｃ型ニーマン−ピック病、ピック病、プリオンタンパク質脳アミロイドアンギオパシー、散発性大脳皮質基底核変性症、進行性核上麻痺、亜急性硬化性全脳炎、筋強直性ジストロフィー、神経原線維タングルを伴う運動ニューロン疾患、タングル限定認知症、および進行性皮質下グリオーシスを含む神経変性疾患に付随する。

本発明の別の態様は、被験体におけるタウ病理学関連行動表現型の進行を遅延させる方法に関する。この方法は、配列番号２−７５からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する任意の１つ以上の免疫原性タウペプチド、または配列番号２−７５および１０１−１０３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む免疫原性タウエピトープを認識する１つ以上の抗体を、被験体におけるタウ病理学関連行動表現型の進行を遅延させるために有効な条件下で、被験体に投与することを包含する。

本明細書で使用されるとき、タウ病理学的関連行動表現型には、非限定的に、認知機能障害、早発性人格変化および脱抑制、無気力、無為、無言症、失行症、固執、常同運動／行動、口愛過度、無秩序、逐次的な仕事を計画または組織化できないこと、身勝手／無神経、反社会的形質、共感の欠如、たどたどしさ、頻繁な錯語的な誤りを伴うが比較的理解は保たれている失文的なスピーチ、理解障害および言葉を探すことの欠損、遅進行性の歩行不安定、後方突進、すくみ、頻繁な落下、非レボドパ応答性軸方向硬直、核上性注視麻痺、矩形波眼球運動、遅垂直性の持続性運動、偽性球麻痺、四肢失行、筋失調症、皮質感覚の喪失、およびふるえが含まれる。

本発明の方法に従うと、１つの実施形態において、免疫原性タウペプチドまたは免疫原性タウペプチドの組み合わせが必要のある被験体に投与される。タウタンパク質の適切な免疫原性タウペプチドフラグメントは、病理学的型のタウタンパク質を模倣する１つ以上の抗原性エピトープを含有する。例示的な免疫原性タウエピトープは、タウの病理学的型においてリン酸化されている１つ以上のアミノ酸においてリン酸化されているが、タウの正常型または非病理学的においてはリン酸化されていない。

本発明の好ましい実施形態において、免疫原性タウペプチドの投与は、被験体において免疫原性タウペプチドに対する活発な免疫応答を誘導し、それによって、関連するタウ凝集物のクリアランスを容易にし、タウ病理学関連行動の進行を遅延させ、そして根底にあるタウオパシーを治療する。本発明のこの態様に従って、免疫応答は、免疫原性タウペプチドに対して指向される体液性（抗体媒介性）および／または細胞性（抗原特異性Ｔ細胞および／またはそれらの分泌生成物によって媒介される）応答の発展を含む。

体液性免疫学的応答の存在は、免疫原性タウペプチドに指向される抗体の存在について、被験体からの生物学的サンプル（例えば、血液、血漿、血清、尿、唾液、糞便、ＣＳＦ、またはリンパ液）を試験することによって決定およびモニターできる。生物学的サンプル中で抗体を検出するための方法は当該技術分野において周知であり、例えば、ＥＬＩＳＡ、ドットブロット、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル、またはＥＬＩＳＰＯＴである。細胞媒介性免疫学的応答の存在は、当該技術分野において容易に公知である、増殖アッセイ（ＣＤ４^＋Ｔ細胞）またはＣＴＬ（細胞傷害性Ｔリンパ球）アッセイによって決定できる。

本発明の単離された免疫原性タウペプチドには、以下の表１に示される配列番号２−３０のアミノ酸配列のいずれか１つが挙げられる。リン酸化されている各配列のアミノ酸残基は太字で示され、アスタリスクでマークされている。表１におけるペプチドの名称は、以下に示されるような配列番号１のアミノ酸配列を有するヒトタウタンパク質の最長のアイソフォームの中のこれらのペプチドのアミノ酸位置に対応する。

（表１）免疫原性タウペプチド

タウタンパク質の好ましいエピトープに対する抗体を誘導し、および／またはそれと相互作用する上記の免疫原性ペプチドの変異体および類似体もまた使用できる。対立遺伝子変異体、種変異体、および誘導された変異体を含む類似体は、典型的には、しばしば、保存性置換により、１個、２個、または数個の位置において、天然に存在するペプチドとは異なる。類似体は、天然のペプチドと、少なくとも８０％または９０％の配列同一性を示す。ある類似体は、１個、２個、または数個の位置において、非天然アミノ酸またはＮ末端もしくはＣ末端の修飾もまた含む。

本発明の１つの実施形態において、変異体タウペプチドは、擬リン酸化ペプチドである。この擬リン酸化ペプチドは、タウペプチドの１つ以上のリン酸化されたセリン残基、スレオニン残基、およびチロシン残基を、グルタミン酸およびアスパラギン酸などの酸性アミノ酸残基で置換することによって生成される（Ｈｕａｎｇｅｔａｌ．，「ＣｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅＡｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＭｅｋ１ｂｙＭｕｔａｔｉｏｎｏｆＳｅｒｉｎｅＰｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎＳｉｔｅｓ，」Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１（１９）：８９６０−３（１９９４）、これは参照によりその全体が組み込まれる）。本発明の例示的な単離された免疫原性擬リン酸化タウペプチドは以下の表２に示される。アミノ酸残基置換の位置は表２の各配列において「Ｘ」で示され、ここで、Ｘはグルタミン酸またはアスパラギン酸残基の置換である。

（表２）免疫原性擬リン酸化タウペプチド

本発明の各タウペプチド、すなわち、配列番号２−７５および８７−８８（以下の表３）は、好ましくは、全長タウタンパク質の同じ内部アミノ酸により密接に似るように、Ｎ末端上でアセチル化され、Ｃ末端上でアミド化される。本発明のタウペプチドは、ペプチドの安定性を増強するために１つ以上のＤアミノ酸残基もまた含むことができる。これらのＤアミノ酸は、ネイティブ配列の全体のトポロジーを維持するために、Ｌ型のペプチドと同じ順序であり得、またはＬ型配列から逆の順序でアセンブルされ得る（Ｂｅｎ−Ｙｅｄｉｄｉａｅｔａｌ．，「ＡＲｅｔｒｏ−ＩｎｖｅｒｓｏＰｅｐｔｉｄｅＡｎａｌｏｇｕｅｏｆＩｎｆｌｕｅｎｚａＶｉｒｕｓＨｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎＢ−ｃｅｌｌＥｐｉｔｏｐｅ９１−１０８ＩｎｄｕｃｅｓａＳｔｒｏｎｇＭｕｃｏｓａｌａｎｄＳｙｓｔｅｍｉｃＩｍｍｕｎｅＲｅｓｐｏｎｓｅａｎｄＣｏｎｆｅｒｓＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎｉｎＭｉｃｅａｆｔｅｒＩｎｔｒａｎａｓａｌＩｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ，」ＭｏｌＩｍｍｕｎｏｌ．３９：３２３（２００２）；Ｇｕｉｃｈａｒｄ，ｅｔａｌ．，「ＡｎｔｉｇｅｎｉｃＭｉｍｉｃｒｙｏｆＮａｔｕｒａｌＬ−ｐｅｐｔｉｄｅｓｗｉｔｈＲｅｔｒｏ−Ｉｎｖｅｒｓｏ−Ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ，」ＰＮＡＳ９１：９７６５−９７６９（１９９４）；Ｂｅｎｋｉｒａｎｅ，ｅｔａｌ．，「ＡｎｔｉｇｅｎｉｃｉｔｙａｎｄＩｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙｏｆＭｏｄｉｆｉｅｄＳｙｎｔｈｅｔｉｃＰｅｐｔｉｄｅｓＣｏｎｔａｉｎｉｎｇＤ−ＡｍｉｎｏＡｃｉｄＲｅｓｉｄｕｅｓ，」Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２６８（３５）：２６２７９−２６２８５（１９９３）、これらはそれらの全体が参照により組み込まれる）。

上記のペプチド配列の各々は、その免疫原性を増強するために、免疫原性キャリア分子に連結されてもよい。適切な免疫原性キャリアには、ヘルパーＴ細胞エピトープ、例えば、破傷風トキソイド（例えば、Ｐ２およびＰ３０エピトープ）、Ｂ型肝炎表面抗原、コレラ毒素Ｂ、トキソイド、ジフテリアトキソイド、麻疹ウイルスＦタンパク質、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ主要外膜タンパク質、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍスポロゾイト周囲Ｔ、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍＣＳ抗原、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａｍａｎｓｏｎｉトリオースリン酸イソメラーゼ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｔｅｔａｎｉ、Ｐｅｒｔｕｓａｒｉａｔｒａｃｈｙｔｈａｌｌｉｎａ、ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＴｒａＴ、およびインフルエンザウイルスヘマグルチニン（ＨＡ）が挙げられるがこれらに限定されない（Ｗａｎｇへの米国特許第６，９０６，１６９号；Ｗａｎｇへの米国特許出願公開第２００３００６８３２５号、およびＷａｎｇへの国際特許第２００２／０９６３５０号を参照のこと、これらは、それらの全体が参照により組み込まれる）。本発明の好ましい実施形態において、Ｔヘルパー細胞エピトープは、ＦＮＮＦＴＶＳＦＷＬＲＶＰＫＶＳＡＳＨＬＥ（配列番号７６）のアミノ酸配列を有する破傷風毒素９４７−９６７（Ｐ３０）エピトープである。別の実施形態において、Ｔヘルパー細胞エピトープは、ＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴ（配列番号７７）のアミノ酸配列を有する破傷風毒素８３０−８４３（Ｐ２）エピトープである。

本発明の免疫原性タウペプチドは、短いアミノ酸リンカー配列を使用して免疫原キャリア分子に連結できる。本発明の好ましい実施形態において、ＧＰＳＬ（配列番号７８）リンカー配列は、免疫原性タウペプチドを免疫原性キャリア分子に連結するために使用される。他の適切なリンカー配列には、グリシンリッチ（例えば、Ｇ_３−５）またはセリンリッチ（例えば、ＧＳＧ，ＧＳＧＳ（配列番号７９）、ＧＳＧＳＧ（配列番号８０）、ＧＳ_ＮＧ）リンカー配列、またはＨｕａｎｇｅｔａｌへの米国特許第５，５１６，６３７号に開示されるようなフレキシブル免疫グロブリンリンカーが挙げられ、この特許は全体が参照により組み込まれる。

あるいは、本発明の免疫原性タウペプチドは、化学架橋を使用して免疫原性キャリア分子に連結できる。ペプチド免疫原を免疫原性キャリア分子に連結するための技術には、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジル−チオ）プロピオン酸（ＳＰＤＰ）およびスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）（ペプチドがスルフヒドリル基を欠く場合、これはシステイン残基の付加によって提供できる）を使用するジスルフィド結合の形成が挙げられる。これらの試薬は、それら自体と、あるタンパク質上のペプチドシステイン残基との間でジスルフィド結合を、およびリジン上のイプシロンアミノを通して、または他のアミノ酸における他の遊離のアミノ基を通してアミド結合を作る。様々なこのようなジスルフィド／アミド形成剤がＪａｎｓｅｎｅｔａｌ．，「Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｎｓ：ＨｙｂｒｉｄＭｏｌｅｃｕｌｅｓＣｏｍｂｉｎｉｎｇＨｉｇｈＳｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙａｎｄＰｏｔｅｎｔＣｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ，」ＩｍｍｕｎＲｅｖ６２：１８５−２１６（１９８２）によって記載されており、これは、その全体が参照により組み込まれる。他の二官能カップリング剤は、ジスルフィド結合ではなくチオエーテルを形成する。これらのチオエーテル形成剤の多くは市販されており、６−マレイミドカプロン酸、２−ブロモ酢酸、および２−ヨード酢酸、４−（Ｎ−マレイミド−メチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸の反応性エステルを含む。カルボキシル基は、これらをスクシンイミドまたは１−ヒドロキシ−２−ニトロ−４−スルホン酸、ナトリウム塩と合わせることによって活性化できる。

本発明の免疫原性タウペプチドは、固相ペプチド合成または組換え発現系によって合成できる。自動ペプチドシンセサイザーはＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（ＦｏｓｔｅｒＣｉｔｙ，Ｃａ．）などの多くの供給業者から市販されている。組換え発現系は、Ｅ．ｃｏｌｉなどの細菌、酵母、昆虫細胞、または哺乳動物細胞を含むことができる。組換え発現のための手順は、Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ（Ｃ．Ｓ．Ｈ．Ｐ．Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ２ｄｅｄ．，１９８９）によって記載されており、これはその全体が参照により組み込まれる。

本発明の免疫原性タウペプチドは、単独で、または他の本発明の免疫原性タウペプチドと組み合わせて、必要がある被験体に投与できる。１つの実施形態において、本発明の免疫原性タウペプチドは、全体が参照により組み込まれるＳｉｇｕｒｄｓｓｏｎへの米国特許出願公開第２００８００５０３８３号に開示されるような、以下の表３に示される１つ以上の免疫原性タウペプチドと組み合わせて投与される。表３におけるペプチド名称は、配列番号１のアミノ酸配列を有するタウタンパク質の最長のアイソフォームの中のこれらのペプチドのアミノ酸の位置に一致する。リン酸化されている各配列のアミノ酸残基は太字で示され、アスタリスクでマークされている。

（表３）組み合わせ投与のための免疫原性タウペプチド配列

本発明の免疫原性タウペプチドは、被験体における所望の免疫応答を達成するために適切なアジュバントと組み合わせて投与できる。適切なアジュバントは、本発明の免疫原性タウペプチドの投与前、投与後、または投与と同時に投与できる。好ましいアジュバントは、応答の定性的な型に影響を与える免疫原のコンホメーション変化を引き起こすことなく、免疫原に固有の応答を増大する。

好ましい種類のアジュバントは、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、および硫酸アルミニウムなどのアルミニウム塩（ミョウバン）である。このようなアジュバントは、３Ｄｅ−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）もしくは３−ＤＭＰなどの他の免疫刺激剤、ポリグルタミン酸もしくはポリリジンなどのポリマー性もしくはモノマー性アミノ酸とともに、またはこれらを伴わずに使用できる。このようなアジュバントは、ムラミルペプチド（例えば、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ノル−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１'−２'ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）、Ｎ−アセチルグルコサミニル（ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｓａｍｉｎｙｌ）−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌ−Ｄ−イソｇｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−ジパルミトイルプロピルアミド（ＤＴＰ−ＤＰＰ）テラミド（ｔｈｅｒａｍｉｄｅ）（登録商標））、または他の細菌細胞壁成分などの他の特定の免疫刺激剤とともに、またはこれらを伴わずに使用できる。水中油エマルジョンには、マイクロフルイダイザーを使用してサブマイクロメートル粒子に製剤化された、５％スクアレン、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０、および０．５％Ｓｐａｎ８５（任意に様々な量のＭＴＰ−ＰＥを含有する）を含有するＭＦ５９（ＶａｎＮｅｓｔｅｔａｌ．への国際特許第９０／１４８３７号を参照のこと、これは、その全体が参照により組み込まれる）；サブマイクロメートルエマルジョンに微小流動化されるかまたはより大きな粒径のエマルジョンを生成するためにボルテックスされるかのいずれかである、１０％スクアレン、０．４％Ｔｗｅｅｎ８０，５％プルロニック−ブロックポリマーＬ１２１およびｔｈｒ−ＭＤＰを含有するＳＡＦ；ならびに、２％スクアレン、０．２％Ｔｗｅｅｎ８０、ならびに、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）からなる群より選択される１つ以上の細菌細胞壁成分、好ましくは、ＭＰＬ＋ＣＷＳ（Ｄｅｔｏｘ（登録商標））を含有するＲｉｂｉ（登録商標）アジュバントシステム（ＲＡＳ）（ＲｉｂｉＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ｍｏｎｔ．）が挙げられる。他のアジュバントには、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）、およびサイトカイン、例えば、インターロイキン（ＩＬ−１、ＩＬ−２、およびＩＬ−１２）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）が挙げられる。

アジュバントの選択は、アジュバントを含有する免疫原性製剤の安定性、投与の経路、投薬スケジュール、ワクチン接種される種についてのアジュバントの効力に依存し、および、ヒトにおいては、薬学的に許容可能なアジュバントは、妥当な規制機関によってヒトへの投与のために認可されたか、認可されるものである。例えば、ミョウバン、ＭＰＬ、または不完全フロイントアジュバントは、単独で、または任意のそれらのすべての組み合わせにおいて、ヒト投与のために適切である（Ｃｈａｎｇｅｔａｌ．，ＡｄｖａｎｃｅｄＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＲｅｖｉｅｗｓ３２：１７３−１８６（１９９８）、これは、その全体が参照により組み込まれる）。

本発明の別の態様は、前出に記載された１つ以上の免疫原性タウペプチドおよび薬学的キャリア（以下に記載する）を含有する薬学的組成物に関する。あるいは、薬学的組成物は、本発明の１つ以上の異なる免疫原性タウペプチドの混合物を含有する。好ましい実施形態において、本発明の薬学的組成物は、前出に記載されたような１つ以上の適切なアジュバントを含有する。

本発明の別の実施形態において、本発明の１つ以上の免疫原性タウエピトープを認識する抗体は必要のある被験体に投与される。本発明の適切な抗体は、配列番号２−７５および１０１−１０３の任意の１つのアミノ酸配列を含む免疫原性タウエピトープに特異的に結合する任意の免疫グロブリン分子を包含する。好ましい実施形態において、本発明の抗体は、病理学的型のタウに特異的なエピトープを認識および結合し、そして正常なタウタンパク質または非タウタンパク質との交差反応性はほとんどないか、または交差反応性は全くない。

本明細書に記載されるように、配列番号１３（タウ３８６−４０８［Ｐ−Ｓｅｒ_{３９６，４０４}］）および配列番号１２（タウ２６０−２７１［Ｐ−Ｓｅｒ_２６２］）を含む免疫原性タウエピトープを認識するモノクローナル抗体が生成された。これらの抗体はホスホ特異的であり、それゆえに、病理学的タウ型に特異的であり、正常なタウタンパク質に対しては、交差反応性をほとんど有さないか、全く有さない。

タウタンパク質のリン酸化された病理学的エピトープを認識する抗体に加えて、本発明は、神経細胞毒性の促進および／またはタウ凝集の播種にも向けられる。例えば、優先的にタウタンパク質のアスパラギン酸残基４２（Ｄ４２１）におけるタウのカスパーゼ切断は、タングルと共局在化する短縮型分子を作り、これは、アルツハイマー病およびタウオパシーの動物モデルにおける進行と相関する（Ｃａｌｉｇｎｏｎｅｔａｌ．，「ＣａｓｐａｓｅＡｃｔｉｖａｔｉｏｎＰｒｅｃｅｄｅｓａｎｄＬｅａｄｓｔｏＴａｎｇｌｅｓ，」Ｎａｔｕｒｅ４６４：１２０１−１２０５（２０１０）を参照のこと、これはその全体が参照により組み込まれる）。切断されたタウタンパク質の遊離のＤ４２１末端に指向される抗体は、病理学的タウに特異的であり、病理学的タウの除去を容易にするが、正常タウには特異的ではなく、正常タウの除去を容易にするのではない。従って、本発明は、正常タウタンパク質中には存在していない、切断された病理学的タウタンパク質の遊離のＣ末端上のＤ４２１に指向される抗体、好ましくは、モノクローナル抗体に向けられる。本発明の１つの実施形態において、抗体は、ＨＬＳＮＶＳＳＴＧＳＩＤＭＶＤ（配列番号１０１）のアミノ酸配列を含む免疫原性タウペプチドを用いて、本明細書に記載される方法を使用して生成される。

グルタミン残基３１９（Ｅ３９１）上でのタウの切断は、アルツハイマー病における神経原線維タングルの形成ともまた関連する（Ｂａｓｕｒｔｏ−Ｉｓｌａｓｅｔａｌ．，「ＡｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｏｆＡｓｐａｒｔｉｃＡｃｉｄ^４２１− ａｎｄＧｌｕｔａｍｉｃＡｃｉｄ^３９１−ＣｌｅａｖｅｄＴａｕｉｎＮｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙＴａｎｇｌｅｓＣｏｒｒｅｌａｔｅｓｗｉｔｈＰｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｉｎＡｌｚｈｅｉｍｅｒＤｉｓｅａｓｅ，」ＪＮｅｕｒｏｐａｔｈｏｌＥｘｐＮｅｕｒｏｌ６７：４７０−４８３（２００８）、これはその全体が参照により組み込まれる）。従って、本発明はまた、正常タウタンパク質中には存在していない、切断された病理学的タウタンパク質の遊離のＣ末端上のＥ３９１に指向される抗体、好ましくは、モノクローナル抗体に向けられる。本発明の１つの実施形態において、抗体は、ＲＥＮＡＫＡＫＴＤＨＧＡＥ（配列番号１０２）のアミノ酸配列を含む免疫原性タウペプチドを用いて、本明細書に記載される方法を使用して生成される。

カルパイン−１もまた、Ａβ−誘導性神経毒性を促進する毒性１７ｋＤａタウフラグメントを生成する、タウの切断を媒介する（Ｐａｒｋｅｔａｌ．，「ＴｈｅＧｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆａ１７ｋＤａＮｅｕｒｏｔｏｘｉｃＦｒａｇｍｅｎｔ：ＡｎＡｌｔｅｒｎａｔｉｖｅＭｅｃｈａｎｉｓｍｂｙｗｈｉｃｈＴａｕＭｅｄｉａｔｅｓ β−Ａｍｙｌｏｉｄ−ＩｎｄｕｃｅｄＮｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，」ＪＮｅｕｒｏｓｃｉ２５（２２）：５３６５−７５（２００５）、これはその全体が参照により組み込まれる）。従って、本発明の実施形態は、以下の配列番号１０３として示されるタウのアミノ酸残基４５−２３０（配列番号１）を含む、この毒性タウフラグメントの遊離のＮ末端および／または遊離のＣ末端を特異的に認識するが、正常タウタンパク質は認識しない抗体、好ましくは、モノクローナル抗体に向けられる。

本明細書で使用されるとき、「抗体」という用語は、天然の供給源、または組換えの供給源から誘導されるインタクトな免疫グロブリン、ならびにインタクトな免疫グロブリンの免疫反応性部分（すなわち、抗原結合部分）を含む。本発明の抗体は、例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、細胞内抗体（「イントラボディー」）、抗体フラグメント（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、およびＦ（ａｂ）２）、ならびに単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、キメラ抗体およびヒト化抗体を含む様々な型で存在してもよい（ＥｄＨａｒｌｏｗａｎｄＤａｖｉｄＬａｎｅ，ＵＳＩＮＧＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：ＡＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹＭＡＮＵＡＬ（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，１９９９）；Ｈｏｕｓｔｏｎｅｔａｌ．，「ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｏｆＡｎｔｉｂｏｄｙＢｉｎｄｉｎｇＳｉｔｅｓ：ＲｅｃｏｖｅｒｙｏｆＳｐｅｃｉｆｉｃＡｃｔｉｖｉｔｙｉｎａｎＡｎｔｉ−ＤｉｇｏｘｉｎＳｉｎｇｌｅ−ＣｈａｉｎＦｖＡｎａｌｏｇｕｅＰｒｏｄｕｃｅｄｉｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ，」ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ８５：５８７９−５８８３（１９８８）；Ｂｉｒｄｅｔａｌ，「Ｓｉｎｇｌｅ−ＣｈａｉｎＡｎｔｉｇｅｎ−ＢｉｎｄｉｎｇＰｒｏｔｅｉｎｓ，」Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３−４２６（１９８８））。

モノクローナル抗体産生のための方法は、本明細書に記載されている技術または当該技術分野において周知である他の技術を使用して実行されてもよい（ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ−ＰＲＯＤＵＣＴＩＯＮ，ＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧＡＮＤＣＬＩＮＩＣＡＬＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＳ（ＭａｒｙＡ．ＲｉｔｔｅｒａｎｄＨｅａｔｈｅｒＭ．Ｌａｄｙｍａｎｅｄｓ．，１９９５）、これはその全体が参照により組み込まれる）。一般的に、このプロセスは、インビボまたはインビトロのいずれかで関心対象の抗原（すなわち、免疫原性タウペプチド）で以前に免疫された哺乳動物の脾臓から免疫細胞（リンパ球）を得ることを包含する。例示的なタウペプチドは上記に記載されている。配列番号２−７５のタウペプチドまたは配列番号１０１−１０３のタウペプチドを使用するモノクローナル抗体を生成するために、システイン残基が各配列のＮ末端またはＣ末端に加えられ、免疫の際に抗体産生を増強するキャリアタンパク質の連結を容易にしてもよい。適切なキャリアタンパク質には、非限定的に、キーホールリンペットヘモシアニン、ブルーキャリア免疫原タンパク質（ｂｌｕｅｃａｒｒｉｅｒｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｐｒｏｔｅｉｎ）（Ｃｏｎｃｈｏｌｅｐａｓｃｏｎｃｈｏｌｅｐａｓ由来）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、オボアルブミン、およびカチオン化ＢＳＡが挙げられる。

抗体分泌リンパ球は、細胞培養中に無制限に複製することが可能であるミエローマ細胞または形質転換細胞と融合され、それによって、不死化免疫グロブリン分泌細胞を産生する。細胞培養中で無制限に複製することが可能である哺乳動物ミエローマ細胞または他の融合パートナーとの融合は、標準的技術および周知技術によって、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）または他の融合剤を使用することによって達成される（ＭｉｌｓｔｅｉｎａｎｄＫｏｈｌｅｒ，「ＤｅｒｉｖａｔｉｏｎｏｆＳｐｅｃｉｆｉｃＡｎｔｉｂｏｄｙ−ＰｒｏｄｕｃｉｎｇＴｉｓｓｕｅＣｕｌｔｕｒｅａｎｄＴｕｍｏｒＬｉｎｅｓｂｙＣｅｌｌＦｕｓｉｏｎ」，ＥｕｒＪＩｍｍｕｎｏｌ６：５１１（１９７６）、これはその全体が参照により組み込まれる）。好ましくはマウスであるが、他の哺乳動物種の細胞からもまた誘導されてもよい不死化細胞系統は、特定の栄養の利用のために必要な酵素が欠損しているように、急速な増殖が可能であるように選択され、そして良好な融合能力を有する。得られる誘導細胞またはハイブリドーマは培養され、そして得られるコロニーは所望のモノクローナル抗体の産生についてスクリーニングされる。このような抗体を産生するコロニーはクローニングされ、大量の抗体を産生するためにインビボまたはインビトロのいずれかで増殖される。

あるいは、モノクローナル抗体は、全体が参照により組み込まれる、Ｃａｂｉｌｌｙｅｔａｌへの米国特許第４，８１６，５６７号に記載されるように、組換えＤＮＡ法を使用して作製できる。モノクローナル抗体をコードするポリヌクレオチドは、例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子を特異的に増幅するオリゴヌクレオチドプライマーを使用するＲＴ−ＰＣＲによって、成熟Ｂ細胞またはハイブリドーマ細胞から単離される。次いで、重鎖および軽鎖をコードする単離されたポリヌクレオチドは、適切な発現ベクターにクローニングされ、これらは、さもなくば免疫グロブリンタンパク質を産生しないＥ．ｃｏｌｉ細胞、シミアンＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、またはミエローマ細胞などの宿主細胞にトランスフェクトされたときに、モノクローナル抗体が宿主細胞によって生成される。また、所望の種の組換えモノクローナル抗体またはそのフラグメントがファージディスプレイライブラリーから単離できる（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙｅｔａｌ．，「ＰｈａｇｅＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＦｉｌａｍｅｎｔｏｕｓＰｈａｇｅＤｉｓｐｌａｙｉｎｇＡｎｔｉｂｏｄｙＶａｒｉａｂｌｅＤｏｍａｉｎｓ」，Ｎａｔｕｒｅ３４８：５５２−５５４（１９９０）；Ｃｌａｃｋｓｏｎｅｔａｌ．，「ＭａｋｉｎｇＡｎｔｉｂｏｄｙＦｒａｇｍｅｎｔｓｕｓｉｎｇＰｈａｇｅＤｉｓｐｌａｙＬｉｂｒａｒｉｅｓ」，Ｎａｔｕｒｅ３５２：６２４−６２８（１９９１）；およびＭａｒｋｓｅｔａｌ．，「Ｂｙ−ＰａｓｓｉｎｇＩｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ．ＨｕｍａｎＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓｆｒｏｍＶ−ＧｅｎｅＬｉｂｒａｒｉｅｓＤｉｓｐｌａｙｅｄｏｎＰｈａｇｅ」，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１）、これらは、それらの全体が参照により組み込まれる）。

モノクローナル抗体をコードするポリヌクレオチドは、代替の抗体を生成するために組換えＤＮＡ技術を使用してさらに修飾できる。例えば、マウスモノクローナル抗体の軽鎖および重鎖の定常ドメインは、キメラ抗体を生成するためにヒト抗体のこれらの領域について置換できる。あるいは、マウスモノクローナル抗体の軽鎖および重鎖の定常ドメインは、融合タンパク質を生成するために非免疫グロブリンポリペプチドについて置き換えできる。他の実施形態において、定常領域は、モノクローナル抗体の所望の抗体フラグメントを生成するために短縮または除去される。さらに、可変領域の部位特異的または高密度変異誘発が、モノクローナル抗体の特異性および親和性を最適化するために使用できる。

本発明のモノクローナル抗体はヒト化抗体であり得る、ヒト化抗体は、可変領域の中に非ヒト（例えば、マウス）からの最小限の配列を含む抗体である。このような抗体は、ヒト被験体に投与されたときに、抗原性およびヒト抗マウス抗体応答を減少させるために治療的に使用される。

抗体は、ヒト抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）を非ヒト抗体（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスターなど）のそれの代わりに置換することによってヒト化できる（Ｊｏｎｅｓｅｔａｌ．，「ＲｅｐｌａｃｉｎｇｔｈｅＣｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ−ＤｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇＲｅｇｉｏｎｓｉｎａＨｕｍａｎＡｎｔｉｂｏｄｙＷｉｔｈＴｈｏｓｅＦｒｏｍａＭｏｕｓｅ」，Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎｅｔａｌ．，「ＲｅｓｈａｐｉｎｇＨｕｍａｎＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓｆｏｒＴｈｅｒａｐｙ」，Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎｅｔａｌ．，「ＲｅｓｈａｐｉｎｇＨｕｍａｎＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＧｒａｆｔｉｎｇａｎＡｎｔｉｌｙｓｏｚｙｍｅＡｃｔｉｖｉｔｙ」，Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９：１５３４−１５３６（１９８８）、これらは、それらの全体が参照により組み込まれる）。ヒト化抗体は、抗体の特異性、親和性、および／または能力を洗練および最適化するために、Ｆｖフレームワーク領域および／または置き換えられた非ヒト残基のいずれかの中でさらなる残基の置換によってさらに修飾できる。

ヒト抗体は、当該技術分野において公知である種々の技術を使用して産生できる。インビトロで免疫されたか、または標的抗原に対して指向される抗体を産生する免疫された個体から単離された不死化ヒトＢ細胞が生成できる（例えば、Ｒｅｉｓｆｅｌｄｅｔａｌ．，ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳＡＮＤＣＡＮＣＥＲＴＨＥＲＡＰＹ７７（ＡｌａｎＲ．Ｌｉｓｓｅｄ．，１９８５）および米国特許第５，７５０，３７３号を参照のこと、これらは、それらの全体が参照により組み込まれる）。あるいは、ヒト抗体は、ファージライブラリーがヒト抗体を発現するファージライブラリーから選択できる（Ｖａｕｇｈａｎｅｔａｌ．，「ＨｕｍａｎＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓｗｉｔｈＳｕｂ−ＮａｎｏｍｏｌａｒＡｆｆｉｎｉｔｉｅｓＩｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍａＬａｒｇｅＮｏｎ−ｉｍｍｕｎｉｚｅｄＰｈａｇｅＤｉｓｐｌａｙＬｉｂｒａｒｙ」，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１４：３０９−３１４（１９９６）；Ｓｈｅｅｔｓｅｔａｌ．，「ＥｆｆｉｃｉｅｎｔＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆａＬａｒｇｅＮｏｎｉｍｍｕｎｅＰｈａｇｅＡｎｔｉｂｏｄｙＬｉｂｒａｒｙ：ＴｈｅＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＨｉｇｈ−ＡｆｆｉｎｉｔｙＨｕｍａｎＳｉｎｇｌｅ−ＣｈａｉｎＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓｔｏＰｒｏｔｅｉｎＡｎｔｉｇｅｎｓ」，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９５：６１５７−６１６２（１９９８）；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍｅｔａｌ．，「Ｂｙ−ｐａｓｓｉｎｇＩｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ．ＨｕｍａｎＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓＦｒｏｍＳｙｎｔｈｅｔｉｃＲｅｐｅｒｔｏｉｒｅｓｏｆＧｅｒｍｌｉｎｅＶＨＧｅｎｅＳｅｇｍｅｎｔｓＲｅａｒｒａｎｇｅｄＩｎＶｉｔｒｏ」，ＪＭｏｌＢｉｏｌ２２７：３８１−８（１９９２）；Ｍａｒｋｓｅｔａｌ．，「Ｂｙ−ｐａｓｓｉｎｇＩｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ．ＨｕｍａｎＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓｆｒｏｍＶ−ｇｅｎｅＬｉｂｒａｒｉｅｓＤｉｓｐｌａｙｅｄｏｎＰｈａｇｅ」，ＪＭｏｌＢｉｏｌ２２２：５８１−９７（１９９１）を参照のこと、これらはそれらの全体が参照により組み込まれる）。ヒト抗体はまた、内因性免疫グロブリン産生の非存在下で、ヒト抗体の全レパートリーを産生する免疫に際して可能であるヒト免疫グロブリンを含有するトランスジェニックマウスにおいてもまた作製できる。このアプローチは、Ｓｕｒａｎｉｅｔａｌ．への米国特許第５，５４５，８０７号；Ｌｏｎｂｅｒｇｅｔａｌ．への同第５，５４５，８０６号；Ｌｏｎｂｅｒｇｅｔａｌ．への同第５，５６９，８２５号；Ｌｏｎｂｅｒｇｅｔａｌ．への同第５，６２５，１２６号；Ｌｏｎｂｅｒｇｅｔａｌ．への同第５，６３３，４２５号；およびＬｏｎｂｅｒｇｅｔａｌ．への同第５，６６１，０１６号において記載されており、これらはそれらの全体が参照により組み込まれる。

ポリクローナル抗体を惹起するための手順もまた当該技術分野において周知である。典型的には、このような抗体は、関心対象のエピトープを含有するペプチド（すなわち、配列番号２−７５または配列番号１０１−１０３からなる群より選択される任意のタウペプチド）を、免疫前血清を得るために採血されたニュージーランドシロウサギに皮下投与することによって惹起できる。抗原はアジュバントと組み合わせて注射できる。ウサギは最初の注射後約２週間毎に採血され、６週間毎に３回同じ抗原で定期的に追加免疫される。ポリクローナル抗体は、抗体を捕捉するための対応する抗原を使用するアフィニティークロマトグラフィーによって血清から回収される。ポリクローナル抗体を惹起するためのこの手順および他の手順は、ＥｄＨａｒｌｏｗａｎｄＤａｖｉｄＬａｎｅ，ＵＳＩＮＧＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：ＡＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹＭＡＮＵＡＬ（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，１９８８）に記載されており、これはその全体が参照により組み込まれる。

全体の抗体に加えて、本発明は、このような抗体の結合部分を包含する。このような結合部分には、一価Ｆａｂフラグメント、Ｆｖフラグメント（例えば、単鎖抗体、ｓｃＦｖ）、および単一の可変Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌドメイン、および二価Ｆ（ａｂ'）_２フラグメント、ビス−ｓｃＦｖ、ジアボディー、トリアボディー、ミニボディーなどが挙げられる。これらの抗体フラグメントは、全体が参照により組み込まれるＪａｍｅｓＧｏｄｉｎｇ，ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：ＰＲＩＮＣＩＰＬＥＳＡＮＤＰＲＡＣＴＩＣＥ９８−１１８（ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，１９８３）およびＥｄＨａｒｌｏｗａｎｄＤａｖｉｄＬａｎｅ，ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：ＡＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹＭＡＮＵＡＬ（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８）に記載されるように、タンパク質加水分解フラグメント化手順などの従来的な手順によって、または当該技術分野において公知である他の方法によって作製できる。

細胞内タンパク質に結合するように操作された抗体フラグメント、すなわち、イントラボディーもまた、本発明における使用のために適切である。配列番号２−７５または（ｏｆ）配列番号１０１−１０３のいずれか１つを含む免疫原性タウエピトープを指向するイントラボディーは、神経細胞もしくはグリア細胞の中で病理学的タウの凝集および蓄積を妨害し、ならびに／または凝集のクリアランスを容易にする。タウオパシー含む、神経学的障害の治療のためのイントラボディー技術の適用は、全体が参照により組み込まれるＭｉｌｌｅｒｅｔａｌ．，「ＩｎｔｒａｂｏｄｙＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｉｎＮｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌＤｉｓｏｒｄｅｒｓ：ＰｒｏｇｒｅｓｓａｎｄＦｕｔｕｒｅＰｒｏｓｐｅｃｔｓ」，ＭｏｌＴｈｅｒａｐｙ１２：３９４−４０１（２００５）において概説されている。

イントラボディーは、一般的には、２つの可変ドメインを有する抗体の可変領域から単鎖可変ドメインを選択することによって得られる（すなわち、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインのヘテロダイマー）。単鎖Ｆｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、ＳｃＦｖ−Ｃｋ融合タンパク質、単鎖ジアボディー、Ｖ_Ｈ−Ｃ_Ｈ１フラグメント、および全体のＩｇＧ分子さえもがイントラボディー開発のための適切な形式である（ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎＲ．Ｅ．，「ＩｎｔｒａｂｏｄｉｅｓａｓＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＡｇｅｎｔｓ」，Ｍｅｔｈｏｄｓ３４：１６３−７０（２００４）これは、その全体が参照により組み込まれる）。

病理学的タウタンパク質エピトープに対する抗原特異性を有するイントラボディーは、ファージディスプレイ、酵母表面ディスプレイ、またはリボソーム表面ディスプレイから得ることができる。イントラボディーのライブラリーを作製するため、および関心対象のイントラボディーを単離するための方法は、Ｚａｕｄｅｒｅｒへの米国特許出願公開第２００３０１０４４０２号およびＲａｂｂｉｔｔｓらへの米国特許出願公開第２００５０２７６８００号にさらに記載され、これらはそれらの全体が参照により組み込まれる。イントラボディーの安定性および親和性結合特性を改善するための方法は、Ｚｈｅｎｐｉｎｇへの国際特許第２００８０７０３６３号、およびＣｏｎｔｒｅｒａｓ−Ｍａｒｔｉｎｅｚｅｔａｌ．「ＩｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒＲｉｂｏｓｏｍｅＤｉｓｐｌａｙｖｉａＳｅｃＭＴｒａｎｓｌａｔｉｏｎＡｒｒｅｓｔａｓａＳｅｌｅｃｔｉｏｎｆｏｒＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓｗｉｔｈＥｎｈａｎｃｅｄＣｙｔｏｓｏｌｉｃＳｔａｂｉｌｉｔｙ」，ＪＭｏｌＢｉｏｌ３７２（２）：５１３−２４（２００７）に記載されており、これらはそれらの全体が参照により組み込まれる。

とりわけ、抗体フラグメントの場合において、抗体の血清半減期を増加させるために、抗体を修飾することがさらに所望されるかもしれない。これは、例えば、抗体フラグメントの中の適切な領域の変異による、抗体フラグメントへのサルベージ受容体結合エピトープの取り込みによって、またはいずれかの末端もしくは中間部において抗体フラグメントに次いで融合される（例えば、ＤＮＡまたはペプチド合成によって）ペプチドにエピトープを取り込むことによって達成できる。

抗体模倣物もまた、本発明に従う使用のために適切である。多数の抗体模倣物が当該技術分野において公知であり、これには、１０番目のヒトフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン（^１０Ｆｎ３）から誘導される、モノボディーとして知られているもの（Ｋｏｉｄｅｅｔａｌ．，「ＴｈｅＦｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎＴｙｐｅＩＩＩＤｏｍａｉｎａｓａＳｃａｆｆｏｌｄｆｏｒＮｏｖｅｌＢｉｎｄｉｎｇＰｒｏｔｅｉｎｓ」，ＪＭｏｌＢｉｏｌ２８４：１１４１−１１５１（１９９８）；Ｋｏｉｄｅｅｔａｌ．，「ＰｒｏｂｉｎｇＰｒｏｔｅｉｎＣｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌＣｈａｎｇｅｓｉｎＬｉｖｉｎｇＣｅｌｌｓｂｙＵｓｉｎｇＤｅｓｉｇｎｅｒＢｉｎｄｉｎｇＰｒｏｔｅｉｎｓ：ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｔｏｔｈｅＥｓｔｒｏｇｅｎＲｅｃｅｐｔｏｒ」，ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ９９：１２５３−１２５８（２００２）、これらはそれらの全体が参照により組み込まれる）、およびスタフィロコッカスプロテインＡの安定なαへリックス細菌受容体ドメインＺから誘導される、アフィボディーとして知られるもの（Ｎｏｒｄｅｔａｌ．，「ＢｉｎｄｉｎｇＰｒｏｔｅｉｎｓＳｅｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍＣｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌＬｉｂｒａｒｉｅｓｏｆａｎａｌｐｈａ−ｈｅｌｉｃａｌＢａｃｔｅｒｉａｌＲｅｃｅｐｔｏｒＤｏｍａｉｎ」，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ１５（８）：７７２−７７７（１９９７）、これはその全体が参照により組み込まれる）が非限定的に挙げられる。

本発明はさらに、上記に記載されるような本発明の免疫原性タウペプチドを認識する１つ以上の抗体を含有する薬学的組成物に向けられる。この薬学的組成物は、同じタウエピトープを認識する同じ抗体の混合物を含んでもよい。あるいは、この薬学的組成物は、１つ以上の異なるタウエピトープを認識する１つ以上の抗体の混合物を含んでもよい。本発明の薬学的組成物は、下記に記載されるような薬学的に許容可能なキャリアまたは他の薬学的に許容可能な成分をさらに含む。

免疫原性タウペプチドまたは免疫原性タウペプチドを認識する抗体を含有する本発明の薬学的組成物は、活性な治療剤に加えて、種々の他の薬学的に許容可能な成分を含む（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ（１５ｔｈｅｄ．，ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８０）を参照のこと、これはその全体が参照により組み込まれる）。薬学的組成物の好ましい処方は、意図される投与の様式および治療的適用に依存する。これらの組成物は、動物またはヒトへの投与のための薬学的組成物を製剤化するために一般的に使用されるビヒクルとして定義される、薬学的に許容可能な、非毒性のキャリアまたは希釈剤を含むことができる。この希釈剤は、組み合わせ（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）の生物学的活性に影響を与えないように選択される。このような希釈剤の例は、蒸留水、リン酸緩衝化生理食塩水、リンガー液、デキストロース溶液、およびハンクス溶液である。加えて、薬学的組成物または製剤は、他のキャリア、アジュバント、または非毒性、非治療的、非免疫原性の安定剤などもまた含んでもよい。

薬学的組成物は、大きな、ゆっくりと代謝される高分子、例えば、タンパク質、キトサンのようなポリサッカリド、ポリ乳酸、ポリグリコール酸およびコポリマー（例えば、ラテックス官能基化セファロース、アガロース、セルロースなど）、ポリマー性アミノ酸、アミノ酸コポリマー、および脂質凝集物（例えば、油滴またはリポソーム）もまた含むことができる。加えて、これらのキャリアは、免疫刺激剤として機能できる（すなわち、アジュバント）。

本発明の薬学的組成物は、適切な送達ビヒクルをさらに含むことができる。適切な送達ビヒクルには、ウイルス、細菌、生分解性ミクロスフェア、微粒子、ナノ粒子、リポソーム、コラーゲンミニペレット、およびコクリエート（ｃｏｃｈｌｅａｔｅ）が含まれる。

本発明の薬学的組成物の１つの実施形態において、送達ビヒクルはウイルスまたは細菌であり、免疫原性タウペプチドは、ウイルスまたは細菌によって免疫原性組成物の一部として提示される。本発明のこの実施形態に従って、免疫原性ペプチドをコードする核酸分子は、ウイルスまたは細菌のゲノムまたはエピソームに取り込まれる。任意に、核酸分子は、免疫原性ペプチドが分泌タンパク質としてまたはウイルスの表層タンパク質もしくは細菌の膜貫通タンパク質との融合タンパク質として発現されるような様式で取り込まれ、その結果、ペプチドがディスプレイされる。このような方法において使用されるウイルスまたは細菌は、非病原性でありまたは弱毒化されているべきである。適切なウイルスには、アデノウイルス、ＨＳＶ、ベネズエラウマ脳脊髄炎ウイルスおよび他のアルファウイルス、水疱性口内炎ウイルスおよび他のラブドウイルス、ワクシニア、ならびに鶏痘が含まれる。適切な細菌にはサルモネラ属および赤痢菌属が含まれる。ＨＢＶのＨＢｓＡｇへの免疫原性ペプチドの融合が特に適切である。

本発明の別の実施形態において、薬学的組成物は、リポソーム送達ビヒクルを含有する。リポソームは、水相をカプセル化している１つ以上の同心円上に順序付けられた脂質二重層から構成されている。免疫原性タウペプチドまたは本発明の免疫原性タウペプチドに対して惹起された抗体は、リポソームビヒクルの膜と表面結合され、これでカプセル化され、またはこれに付随できる。タウペプチドのワクチン送達のために適切な種々の型のリポソームが当該技術分野において公知である（例えば、Ｈａｙａｓｈｉｅｔａｌ．，「ＡＮｏｖｅｌＶａｃｃｉｎｅＤｅｌｉｖｅｒｙＳｙｓｔｅｍＵｓｉｎｇＩｍｍｕｎｏｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｎｇＦｕｓｏｇｅｎｉｃＬｉｐｏｓｏｍｅｓ」，ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎ２６１（３）：８２４−２８（１９９９）およびＭｉｃｈａｅｌｉｅｔａｌ．への米国特許出願公開第２００７００８２０４３号を参照のこと、これらはそれらの全体が参照により組み込まれる）。本発明における使用のためにリポソームを調製するための他の方法には、Ｂａｎｇｈａｍｅｔａｌ．，「ＤｉｆｆｕｓｉｏｎｏｆＵｎｉｖａｌｅｎｔＩｏｎｓＡｃｒｏｓｓｔｈｅＬａｍｅｌｌａｅｏｆＳｗｏｌｌｅｎＰｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ」，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１３：２３８−５２（１９６５）；Ｈｓｕへの米国特許第５，６５３，９９６号；Ｌｅｅｅｔａｌ．への同第５，６４３，５９９号；Ｈｏｌｌａｎｄｅｔａｌ．への同第５，８８５，６１３号；Ｄｚａｕ＆Ｋａｎｅｄａへの同第５，６３１，２３７号；およびＬｏｕｇｈｒｅｙｅｔａｌ．への同第５，０５９，４２１号に開示されているものが含まれ、これらはそれらの全体が参照により組み込まれる。

本発明の別の実施形態において、本発明の免疫原性タウペプチドまたはタウ抗体をコードする核酸分子は遺伝子治療送達系を使用して投与される。適切な遺伝子治療ベクターには、非限定的に、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、およびヘルペスウイルスベクターが含まれる。

アデノウイルスベクター送達ビヒクルは、全体が参照により組み込まれる、Ｂｅｒｋｎｅｒ，「ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＡｄｅｎｏｖｉｒｕｓＶｅｃｔｏｒｓｆｏｒｔｈｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓＧｅｎｅｓ」，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ６：６１６−６２７（１９８８）およびＲｏｓｅｎｆｅｌｄｅｔａｌ．，「Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−ＭｅｄｉａｔｅｄＴｒａｎｓｆｅｒｏｆａＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＡｌｐｈａ１−ＡｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎＧｅｎｅｔｏｔｈｅＬｕｎｇＥｐｉｔｈｅｌｉｕｍＩｎＶｉｖｏ」，Ｓｃｉｅｎｃｅ２５２：４３１−４３４（１９９１）、Ｃｕｒｉｅｌｅｔａｌ．への国際特許第９３／０７２８３号、Ｐｅｒｒｉｃａｕｄｅｔｅｔａｌ．への国際特許第９３／０６２２３号、およびＣｕｒｉｅｌｅｔａｌ．への国際特許第９３／０７２８２号に記載されるように容易に調製および利用できる。アデノ随伴ウイルス送達ビヒクルは、全体が参照により組み込まれる、Ｓｈｉｅｔａｌ．，「ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｎＡｎｔｉ−ＤｅａｔｈＲｅｃｅｐｔｏｒ−５Ｓｉｎｇｌｅ−ＣｈａｉｎＦｉｘｅｄＶａｒｉａｂｌｅＲｅｇｉｏｎＰｒｅｖｅｎｔｓＴｕｍｏｒＧｒｏｗｔｈｉｎＭｉｃｅ」，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．６６：１１９４６−５３（２００６）；Ｆｕｋｕｃｈｉｅｔａｌ．，「Ａｎｔｉ−Ａβ Ｓｉｎｇｌｅ−ＣｈａｉｎＡｎｔｉｂｏｄｙＤｅｌｉｖｅｒｙｖｉａＡｄｅｎｏ−ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓｆｏｒＴｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＡｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓＤｉｓｅａｓｅ」，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ｄｉｓ．２３：５０２−５１１（２００６）；Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅｅｔａｌ．，「Ｄｕａｌ−ＴａｒｇｅｔＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＨＩＶ−１ＩｎＶｉｔｒｏｂｙＭｅａｎｓｏｆａｎＡｄｅｎｏ−ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓＡｎｔｉｓｅｎｓｅＶｅｃｔｏｒ」，Ｓｃｉｅｎｃｅ２５８：１４８５−１４８８（１９９２）；Ｐｏｎｎａｚｈａｇａｎｅｔａｌ．，「ＳｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨｕｍａｎＡｌｐｈａ−ＧｌｏｂｉｎＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＭｅｄｉａｔｅｄｂｙｔｈｅＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＡｄｅｎｏ−ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓ２−ＢａｓｅｄＡｎｔｉｓｅｎｓｅＶｅｃｔｏｒｓ」，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７９：７３３−７３８（１９９４）；およびＺｈｏｕｅｔａｌ．，「Ａｄｅｎｏ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓ２−ＭｅｄｉａｔｅｄＴｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎａｎｄＥｒｙｔｈｒｏｉｄＣｅｌｌ−ＳｐｅｃｉｆｉｃＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａＨｕｍａｎＢｅｔａ−ＧｌｏｂｉｎＧｅｎｅ」，ＧｅｎｅＴｈｅｒ．３：２２３−２２９（１９９６）に記載されるように、本発明のタウ抗体をコードする核酸を送達するために構築および使用できる。これらのビヒクルのインビボ使用は、全体が参照により組み込まれる、Ｆｌｏｔｔｅｅｔａｌ．，「ＳｔａｂｌｅｉｎＶｉｖｏＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅＣｙｓｔｉｃＦｉｂｒｏｓｉｓＴｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅＣｏｎｄｕｃｔａｎｃｅＲｅｇｕｌａｔｏｒＷｉｔｈａｎＡｄｅｎｏ−ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓＶｅｃｔｏｒ」，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ'ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０：１０６１３−１０６１７（１９９３）およびＫａｐｌｉｔｔｅｔａｌ．，「Ｌｏｎｇ−ＴｅｒｍＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄＰｈｅｎｏｔｙｐｉｃＣｏｒｒｅｃｔｉｏｎＵｓｉｎｇＡｄｅｎｏ−ＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＶｉｒｕｓＶｅｃｔｏｒｓｉｎｔｈｅＭａｍｍａｌｉａｎＢｒａｉｎ」，ＮａｔｕｒｅＧｅｎｅｔ．８：１４８−１５３（１９９４）に記載されている。アデノウイルスベクターのさらなる型は、全体が参照により組み込まれる、Ｗｉｃｋｈａｍｅｔａｌ．への米国特許第６，０５７，１５５号；Ｂｏｕｔｅｔａｌ．への同第６，０３３，９０８号；Ｗｉｌｓｏｎｅｔａｌ．への同第６，００１，５５７号；Ｃｈａｍｂｅｒｌａｉｎｅｔａｌ．への同第５，９９４，１３２号；Ｋｏｃｈａｎｅｋｅｔａｌ．への同第５，９８１，２２５号；Ｓｐｏｏｎｅｒｅｔａｌ．への同第５，８８５，８０８号；およびＣｕｒｉｅｌへの同第５，８７１，７２７号に記載されている。

感染トランスフェクション系を形成するために改変されているレトロウイルスベクターもまた、所望のペプチドまたは抗体をコードする核酸分子を標的細胞に送達するために使用できる。１つのこのような型のレトロウイルスベクターは、全体が参照により組み込まれる、Ｋｒｉｅｇｌｅｒｅｔａｌ．への米国特許第５，８４９，５８６号に開示されている。

免疫原性タウペプチドまたはタウ抗体をコードする核酸分子を保有する遺伝子治療ベクターは、例えば、静脈内注射、局所投与（全体が参照により組み込まれるＮａｂｅｌｅｔａｌ．への米国特許第５，３２８，４７０号）、または定位注射（例えば、全体が参照により組み込まれる、Ｃｈｅｎｅｔａｌ．，「ＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙｆｏｒＢｒａｉｎＴｕｍｏｒｓ：ＲｅｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＧｌｉｏｍａｓｂｙＡｄｅｎｏｖｉｒｕｓＭｅｄｉａｔｅｄＧｅｎｅＴｒａｎｓｆｅｒＩｎＶｉｖｏ」，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ'ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１：３０５４−３０５７（１９９４）を参照のこと）によって被験体に投与される。遺伝子治療ベクターの薬学的調製物は、許容可能な希釈剤中に遺伝子治療ベクターを含むことができ、または遺伝子送達ビヒクルが埋め込まれている遅延放出マトリックスを含むことができる。

本発明の方法を実行する際に、アルツハイマー病もしくは他のタウオパシーであるかもしくはそのリスクがある被験体、脳の中にタウ凝集物がある被験体、または本発明の免疫原性ペプチドもしくは抗体を投与する前にタングル関連行動表現型を示している被験体を選択することが好ましい。治療に対して敏感な被験体には、疾患のリスクがあるが徴候を示していない個体、ならびに現在徴候を示している患者が含まれる。アルツハイマー病の場合には、実質的に誰でもアルツハイマー病のリスクがある。従って、本発明の方法は、被験体患者のリスクのいかなる評価の必要も伴わずに、一般的な集団に対して予防的に投与できる。本発明の方法は、既知のアルツハイマー病の遺伝的リスクがある個体のためにとりわけ有用である。このような個体には、この疾患を経験した血縁者がいる個体、および遺伝マーカーまたは生化学マーカーの分析によってリスクが決定された個体が含まれる。アルツハイマー病に向けたリスクの遺伝マーカーには、ＡＰＰ遺伝子における変異、特に、それぞれ、Ｈａｒｄｙ変異およびＳｗｅｄｉｓｈ変異と呼ばれる、７１７位ならびに６７０位および６７１位における変異が含まれる。他のリスクのマーカーには、プレセニリン遺伝子ＰＳ１およびＰＳ２、ならびにＡｐｏＥ４における突然変異、アルツハイマー病の家族歴、高コレステロール血症またはアテローム性動脈硬化症が含まれる。現在アルツハイマー病に罹患している個体を、特徴的な認知症から上記の危険因子の存在によって認識することができる。加えて、多くの診断試験が、ＡＤの個体を同定するために利用可能である。これらには、ＣＳＦタウおよびＡβ４２レベルの測定が含まれる。タウの上昇およびＡβ４２レベルの減少は、ＡＤの存在の現れである。アルツハイマー病に罹患している個体は、アルツハイマー病および関連障害協会診断基準（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓＤｉｓｅａｓｅａｎｄＲｅｌａｔｅｄＤｉｓｏｒｄｅｒｓＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｃｒｉｔｅｒｉａ）によってもまた診断できる。

無症候性の患者において、治療は、あらゆる年齢（例えば１０歳、２０歳、３０歳の年齢）において開始できる。しかし、通常、患者が４０歳、５０歳、６０歳または７０歳の年齢に達するまで治療を開始する必要はない。治療は、典型的には、一定の期間にわたって複数の投薬を必要とする。治療は、抗体、または活性化されたＴ細胞もしくはＢ細胞応答を治療剤に対して経時的にアッセイすることによりモニターできる。応答が低下する場合、追加免疫が示される。潜在的なダウン症候群患者の場合においては、治療は、母体治療剤を投与することによって出産前に、または誕生直後に開始できる。

予防的適用において、免疫原性タウペプチドを含有する薬学的組成物は、アルツハイマー病または他のタウオパシーに感受性であるか、またはさもなくばそのリスクがある患者に、そのリスクを排除もしくは低減し、重篤度を軽減し、またはその疾患の生化学的、組織学的および／または行動的徴候、その合併症およびこの疾患の発症の間に提示される疾患の中間的な病理学的表現型を含む疾患の発生を遅延させるために十分な量で投与される。治療的適用において、タウ抗体を含有する組成物は、このような疾患の疑いがあり、またはすでにこのような疾患に罹患している患者に、その合併症およびこの疾患の発症における中間的な病理学的表現型を含む疾患の徴候（生化学的、組織学的および／または行動的徴候）を治癒し、または少なくとも停止させるために十分な量で投与される。ある方法においては、薬剤の投与は、特徴的なアルツハイマー病理をまだ発症していない患者において軽度の認知障害を減少または排除する。治療的または予防的処置を達成するために積雪な量は、治療的または予防的に有効な用量として定義される。予防レジメンと治療レジメンの両方において、薬剤は、通常、十分な免疫応答が達成されるまで数回の投薬で投与される。典型的には、免疫応答はモニターされ、免疫応答が減弱し始める場合、反復用量が与えられる。

上記に記載された条件の治療のために、本発明の組成物の有効用量は、投与の様式、標的部位、患者の生理学的状態、投与される他の医薬、および治療が予防的であるかまたは治療的であるかを含む多くの異なる因子に依存して変化する。治療用量は、安全性および効力を最適化するように力価測定される必要がある。免疫原の量は、アジュバントもまた投与されるか、アジュバントの非存在下で必要とされる、より多い用量を用いるかに依存する。投与のための免疫原の量は、時折、患者あたり１−５００μｇで変動し、より通常には、ヒト投与のために注射あたり５−５００μｇである。たまに、より多い用量である注射あたり１−２ｍｇが使用される。典型的には、約１０、２０、５０、または１００μｇが各ヒト注射のために使用される。免疫原の質量はまた、免疫原中の免疫原性エピトープ対全体としての免疫原の質量の質量比に依存する。典型的には、１０^−３〜１０^−５マイクロモルの免疫原性エピトープが各マイクログラムの免疫原のために使用される。注射のタイミングは、１日に１回から、１年に１回まで、１０年に１回まで顕著に変動できる。免疫原の投薬量が与えられる任意の所定の日において、アジュバントもまた投与されるならば、投薬量は１μｇ／患者よりも多く、通常、１０μｇ／患者よりも多く、そしてアジュバントの非存在下では、１０μｇ／患者よりも多く、通常、１００μｇ／患者より多い。典型的なレジメンは、免疫、続いて、６週間間隔などの時間間隔での追加免疫注射からなる。別のレジメンは、免疫、続いて１、２、および１２ヶ月後の追加免疫注射からなる。別のレジメンは、一生涯の間、２ヶ月に１回の注射を伴う。あるいは、追加免疫注射は、免疫応答のモニタリングによって示されるような不規則ベースであり得る。

抗体を用いる受動免疫のために、投薬量は、宿主体重の約０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、およびより通常には０．０１〜５ｍｇ／ｋｇの範囲である。例えば、投薬量は、１ｍｇ／ｋｇ体重または１０ｍｇ／ｋｇ体重、または１−１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。例示的な治療レジメンは、２週間毎または１ヶ月に１回または３〜６ヶ月毎に１回の投与を伴う。ある方法において、異なる結合特異性を有する２種以上のモノクローナル抗体が同時に投与され、この場合において、投与される各抗体の投薬量は示された範囲内に収まる。抗体は、通常は、複数の場合に対して投与される。単回の投薬の間の間隔は、毎週、毎月、または毎年であり得る。ある方法において、投薬量は、１−１０００μｇ／ｍＬの血漿抗体濃度、およびある方法においては２５−３００μｇ／ｍＬを達成するように調整される。あるいは、抗体は、持続放出製剤として投与でき、この場合において、より頻度が少ない投与が必要とされる。投薬量および頻度は、患者における抗体の半減期に依存して変動する。一般的に、ヒト抗体が最長の半減期を示し、以下、ヒト化抗体、キメラ抗体、そして非ヒト抗体の順となる。投与の用量および頻度は、治療が予防的であるかまたは治療的であるかに依存して変動し得る。予防的適用において、比較的低い投薬量が、長期間の時間にわたって比較的頻繁でない間隔で投与された。このような患者は、彼らの残りの生涯の間、継続して治療を受ける。治療的適用において、比較的短い間隔での比較的高い投薬量が、疾患の進行が減少または終了するまで、および好ましくは、患者が疾患の徴候の部分的または完全な改善を示すまで、時折必要とされる。その後、患者は予防的レジメを投与できる。

免疫原をコードする核酸についての用量は、患者あたり約１０ｎｇ〜約１ｇ、約１００ｎｇ〜約１００ｍｇ、約１μｇ〜約１０ｍｇ、または約３０〜約３００μｇＤＮＡの範囲である。感染性ウイルスベクターについての用量は、用量あたり、１０−１００ビリオンまたはそれ以上変動する。

免疫応答を誘導するための因子は、予防的および／または治療的処置のための非経口的、局所的、静脈内、経口、皮下、動脈内、頭蓋内、腹腔内、鼻内、または筋肉内手段によって投与できる。免疫原性因子の投与の最も典型的な経路は皮下であるが、他の経路も同程度に有効であり得る。次に最も一般的な経路は筋肉内注射である。この型の注射は、最も典型的には、腕または足の筋肉において実施される。ある場合において、本発明の治療剤を、沈着が蓄積している特定の組織に直接注射すること、例えば、頭蓋内注射が所望され得る。筋肉内注射または静脈内注入が抗体の投与のために好ましい。ある方法において、特定の治療抗体は頭蓋に直接的に注射される。ある方法において、抗体は、持続放出組成物またはデバイス、例えば、Ｍｅｄｉｐａｄ（登録商標）デバイス（ＥｌａｎＰｈａｒｍ．Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｄｕｂｌｉｎ，Ｉｒｅｌａｎｄ）として投与される。

本発明の別の態様は、免疫原性タウペプチドまたは免疫原性タウエピトープを認識する抗体が、アミロイド形成性タンパク質またはペプチドの沈着に関連しまたはそれから生じる他の状態または疾患の予防または治療のために有効である薬剤と組み合わせて投与される、組み合わせ治療に向けられる。沈着を受けるアミロイド形成性タンパク質／ペプチドには、非限定的に、ベータタンパク質前駆体、プリオンおよびプリオンタンパク質、αシヌクレイン、タウ、ＡＢｒｉ前駆体タンパク質、ＡＤａｎ前駆体タンパク質、島アミロイドポリペプチド、アポリポプロテインＡＩ、アポリポプロテインＡＩＩ、リゾチーム、シスタチンＣ、ゲルソリン、心房性ナトリウム利尿因子、カルシトニン、ケラトエピセリン、ラクトフェリン、免疫グロブリン軽鎖、トランスサイレチン、Ａアミロイドーシス、β２マイクログロブリン、免疫グロブリン重鎖、フィブリノーゲンアルファ鎖、プロラクチン、ケラチン、およびメディン（ｍｅｄｉｎ）が含まれる。従って、本発明の組み合わせ治療剤は、免疫原性タウペプチドまたは免疫原性タウエピトープを認識する抗体、および上述のアミロイド形成性タンパク質またはペプチドの１つ以上を標的とする薬剤を含む。

アルツハイマー病およびダウン症候群などのアミロイド形成性疾患の場合において、アミロイドベータ（Ａβ）沈着を取り除くための免疫調節が新興の治療である。Ａβを標的とする免疫治療は、一貫して認知の改善を生じた。タウおよびＡβ病理は相乗作用的である。従って、タウとＡβおよびＡβ関連病理の両方のクリアランスを同時に標的とする組み合わせ治療は、各々個別に標的化するよりも有効であり得る。

パーキンソン病および関連する神経変性疾患の場合において、凝集型のαシヌクレインタンパク質を取り除くための免疫修飾もまた新興の治療である。タウとαシヌクレインの両方のクリアランスを同時に標的とする組み合わせ治療は、いずれかのタンパク質を個別に標的とするよりも有効であり得る。

プリオン病および関連する神経変性疾患の場合において、疾患関連型のプリオンタンパク質ＰｒＰ^Ｓｃを取り除くための免疫修飾もまた新興の治療である。従って、タウと病理学的ＰｒＰ^Ｓｃタンパク質の両方のクリアランスを同時に標的とする組み合わせ治療は、いずれかのタンパク質を個別に標的とするよりも有効であり得る。

２型糖尿病の個体はアルツハイマー病の発症に対する傾向がより大きい可能性がある。従って、島アミロイドポリペプチドのクリアランスを標的とする薬剤と、アルツハイマー病の発症または進行を予防する（すなわち、タウ沈着を予防する）薬剤を含む組み合わせ治療は、個体に対して治療的利点を増強する。

本発明の別の態様は、アルツハイマー病または他のタウオパシーを被験体において診断する方法に関する。この方法は、診断試薬を使用して病理学的タウコンフォーマーの存在を被験体において検出することを包含し、ここで、この診断試薬は、本発明の抗体またはその活性結合フラグメントである。上記に記載されるように、抗体は、配列番号２−７５または配列番号１０１−１０３から選択されるアミノ酸配列を有する単離されたタウペプチドについての抗原特異性を有する。アルツハイマー病または他のタウオパシーの診断は、被験体における病理学的タウコンフォーマーの検出に基づく。

本発明の診断用抗体試薬を使用する、被験体における病理学的タウコンフォーマーの存在の検出は、被験体からの生物学的サンプル（例えば、血液、尿、脳脊髄液）を入手すること、診断用抗体試薬と生物学的サンプルを接触させること、および被験体からのサンプル中の病理学的タウタンパク質コンフォーマーへの診断用抗体試薬の結合を検出することによって達成できる。本発明の診断用抗体を使用して生物学的サンプル中の病理学的タウタンパク質の検出を実行するためのアッセイは当該技術分野において周知であり、これには、非限定的に、ＥＬＩＳＡ、免疫組織化学、ウェスタンブロットが含まれる。

あるいは、本発明の診断用抗体試薬を使用する、被験体における病理学的タウタンパク質コンフォーマーの存在の検出は、インビボ画像化技術を使用して達成できる。インビボ画像化技術は、病理学的タウペプチドまたはエピトープ（すなわち、配列番号２−７５および１０１−１０３）についての抗原特異性を有する診断用抗体を被験体に投与すること、および病理学的タウコンフォーマーへの診断用抗体試薬の結合をインビボで検出することを包含する。上記に記載されるように、好ましい抗体は、非タウタンパク質に結合することなく、かつタウの非病理学的型に結合することなく、病理学的タウタンパク質に結合する。

診断用抗体または同様の試薬は、静脈内注射によって患者の身体に、または頭蓋内注射によって脳に直接的に投与できる。抗体の投薬量は、治療方法用と同じ範囲内であるべきである。典型的には、抗体は標識されるが、ある方法においては、病理学的タウタンパク質についての親和性を有する一次抗体は標識されておらず、そして二次標識剤は一次抗体に結合するために使用される。標識の選択は検出の手段に依存する。例えば、蛍光標識が光学検出のために適切である。常磁性標識の使用は、外科的介入なしでの断層撮影検出のために適切である。放射性標識もまた、ＰＥＴまたはＳＰＥＣＴを使用して検出できる。

診断は、被験体からのサンプル中または被験体における、標識されたタウコンフォーマー、タウ凝集物、および／または神経原線維タングルの数、サイズ、および／または強度を、対応するベースライン値に対して比較することによって実施される。これらのベースラインの値は、疾患ではない個体の集団における平均レベルを表すことができる。ベースライン値はまた、同じ被験体において決定された以前のレベルを表すこともできる。

上記の診断方法はまた、治療に対する被験体の応答をモニターするためにも使用できる。この実施形態において、被験体における病理学的タウの存在の検出は、治療の開始前に決定される。この時点での被験体における病理学的タウのレベルは、ベースライン値として使用される。治療の過程の間の種々の時点において、病理学的タウタンパク質コンフォーマー、タウ凝集物、および／または神経原線維タングルの検出が反復され、その後、測定値はベースライン値と比較される。ベースラインと比較した値の減少は治療に対するポジティブな応答のシグナルである。病理学的タウは脳から取り除かれるので、値はまた、生物学的液体の中で一次的に増加することもあり得る。

本発明はまた、上記の診断方法およびモニタリング方法を実施するためのキットに向けられる。典型的には、このようなキットは、診断用試薬、好ましくは、病理学的タウペプチド（すなわち、配列番号２−７５および１０１−１０３）について抗原特異性を有する本発明の抗体を含む。本キットはまた、検出可能な標識を含むことができる。診断用抗体それ自体が、直接的に検出可能であるかまたは二次反応（例えば、ストレプトアビジンとの反応）を介して検出可能である検出可能な標識（例えば、蛍光分子、ビオチンなど）を含んでもよい。あるいは、検出可能な標識を含む第２の試薬が利用されてもよく、ここで、この第２の試薬は、一次抗体に結合特異性を有する。生物学的サンプル中の病理学的タウタンパク質を測定するために適切な診断用キットにおいて、キットの抗体は、マイクロタイターディッシュのウェルなどの固相にあらかじめ結合されて供給されてもよい。

本発明の診断キットはまた、本発明の免疫原性タウペプチドの投与後に被験体における抗体産生を検出するために有用であるキットもまた含む。典型的には、このようなキットは、被験体によって生成される抗体の抗原性エピトープを含有する試薬を含む。このキットは検出可能な標識もまた含む。好ましい実施形態において、この標識は、典型的には、抗イディオタイプ抗体の型である。このキットの型は、固相、例えば、マイクロタイタープレートのウェルに前もって結合されて供給できる。

以下の実施例は、本発明の治療方法における組成物のための種々の方法を例示する。これらの実施例は、例示することが意図されるが、本発明の範囲を限定することはいかなる場合においても意図されない。

実施例１−ペプチド
ペプチド免疫原は、Ｋｅｃｋ施設（ｔｈｅＫｅｃｋｆａｃｉｌｉｔｙ）（ＹａｌｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）において、ｐ−メチル−ベンズヒドリルアミン樹脂上での固相技術によって、ＢｉｏｓｅａｒｃｈＳＡＭ２合成装置（Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．，ＳａｎＲａｆａｅｌ，Ｃａ．）を使用して合成された。これらのペプチドは、ＨＦを用いて樹脂から切断され、次いで、エーテルおよび酢酸を用いて抽出され、その後凍結乾燥された。続いて、ペプチドは、０．７８×３０ｃｍカラム上での逆相支持媒体（Ｄｅｌｔａ−Ｂｏｎｄａｐａｋ）の使用を伴い、０．１％ＴＦＡ中のアセトニトリルの０−６６％直線状グラジエントを用いるＨＰＬＣによって精製された。

実施例２−研究に使用された動物
研究は、いくつかの脳領域および脊髄に神経原線維タングルを発生するトランスジェニック（Ｔｇ）ＪＮＰＬ３Ｐ３０１Ｌマウスモデルにおいて実施された（Ｔａｃｏｎｉｃ，Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ，ＮＹ）（Ｌｅｗｉｓｅｔａｌ．，「ＮｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙＴａｎｇｌｅｓ，ＡｍｙｏｔｒｏｐｈｙａｎｄＰｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅＭｏｔｏｒＤｉｓｔｕｒｂａｎｃｅｉｎＭｉｃｅＥｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｕｔａｎｔ（Ｐ３０１Ｌ）ＴａｕＰｒｏｔｅｉｎ」，ＮａｔＧｅｎｅｔ２５：４０２−４０５（２０００）、これはその全体が参照により組み込まれる）。このモデルは、ＡＤのために理想的ではないが、これは、タングルの発生の結果を研究するため、およびこれらの凝集物の生成を妨害し得る治療をスクリーニングするための優秀なモデルである。これらの動物の別の利点は、比較的初期の病理の発症である。ホモ接合性系統において、タウ病理に付随する行動の異常は、少なくとも３ヶ月まで初期に観察できるが、動物は、少なくとも８ヶ月齢まで比較的健常のままである。換言すれば、８ヶ月目において、動物は、治療の効果がモニターされることを可能にするために十分良好に移動し、それら自体で摂食し、そして行動学的な作業を実施できる。

ＪＮＰＬ３Ｐ３０１Ｌモデルに加えて、研究は、ｈｔａｕ／ＰＳ１（Ｍ１４６Ｌ）マウスモデルを使用してもまた実行された（Ｂｏｕｔａｊａｎｇｏｕｔｅｔａｌ．，「Ｐｒｅｓｅｎｉｌｉｎ１ＭｕｔａｔｉｏｎＰｒｏｍｏｔｅｓＴａｕＰｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎａｎｄＡｇｇｒｅｇａｔｉｏｎｉｎａＮｏｖｅｌＡｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓＤｉｓｅａｓｅＭｏｕｓｅＭｏｄｅｌ，」Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓａｎｄＤｅｍｅｎｔｉａ４：Ｔ１８５（２００８）、これはその全体が参照により組み込まれる）。ｈｔａｕマウスは、ヌルマウスタウバックグラウンド上で変異されていないヒトタウタンパク質を発現し、発症の齢および脳分布におけるアルツハイマータウ病理に良好に類似する（Ａｎｄｏｒｆｅｒｅｔａｌ．，「ＨｙｐｅｒｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎａｎｄＡｇｇｒｅｇａｔｉｏｎｏｆＴａｕｉｎＭｉｃｅＥｘｐｒｅｓｓｉｎｇＮｏｒｍａｌＨｕｍａｎＴａｕＩｓｏｆｏｒｍｓ，」ＪＮｅｕｒｏｃｈｅｍ８６：５８２−９０（２００３）、これはその全体が参照により組み込まれる）。プレセニリン（Ｐｒｅｓｅｎｌｉｎ）１タンパク質中に変異（Ｍ１４６Ｌ）を保有するＰＳ１モデルは、Ｔｇ２５７６マウスと交雑させた場合に、Ａβレベルを増加し、およびＡβ沈着を促進したことが示された（Ｄｕｆｆｅｔａｌ．，「ＩｎｃｒｅａｓｅｄＡｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａ４２（４３）ｉｎＢｒａｉｎｓｏｆＭｉｃｅＥｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｕｔａｎｔＰｒｅｓｅｎｉｌｉｎ１，」Ｎａｔｕｒｅ３８３：７１０−７１３（１９９６）およびＨｏｌｃｏｍｂｅｔａｌ．，「ＡｃｃｅｌｅｒａｔｅｄＡｌｚｈｅｉｍｅｒ−ＴｙｐｅＰｈｅｎｏｔｙｐｅｉｎＴｒａｎｓｇｅｎｉｃＭｉｃｅＣａｒｒｙｉｎｇＢｏｔｈＭｕｔａｎｔＡｍｙｌｏｉｄＰｒｅｃｕｒｓｏｒＰｒｏｔｅｉｎａｎｄＰｒｅｓｅｎｉｌｉｎ１Ｔｒａｎｓｇｅｎｅｓ，」ＮａｔｕｒｅＭｅｄ４：９７−１００（１９９８）、これはその全体が参照により組み込まれる）。

タウの６種すべてのヒトアイソフォームを発現するｈｔａｕマウスは、ＰＳ１（Ｍ１４６Ｌ）マウスと交雑され、マウスタウノックアウトバックグラウンド（ｈｔａｕ／ＰＳ１／ｍｔａｕ−／−）に維持された。ＰＳ１変異は、ｈｔａｕモデルにおけるよりも初期の発症を伴う、より攻撃的なタウ病理に導くこのモデルにおいてタウの過剰リン酸化を促進する（Ｂｏｕｔａｊａｎｇｏｕｔｅｔａｌ．，「Ｐｒｅｓｅｎｉｌｉｎ１ＭｕｔａｔｉｏｎＰｒｏｍｏｔｅｓＴａｕＰｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎａｎｄＡｇｇｒｅｇａｔｉｏｎｉｎａＮｏｖｅｌＡｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓＤｉｓｅａｓｅＭｏｕｓｅＭｏｄｅｌ，」Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓａｎｄＤｅｍｅｎｔｉａ４：Ｔ１８５（２００８）、これはその全体が参照により組み込まれる）。

実施例３−ワクチン投与
Ｐｈｏｓ−タウペプチドは、Ａｄｊｕ−Ｐｈｏｓアジュバント（ＢｒｅｎｎｔａｇＢｉｏｓｅｃｔｏｒ，Ｄｅｎｍａｒｋ）と１ｍｇ／ｍＬの濃度で混合され、この溶液は、投与の前に４℃で一晩回転され、リン酸アルミニウム粒子にペプチドが吸着することを可能にした。

ＪＮＰＬ３Ｐ３０１Ｌマウスは、１００μｌの皮下注射、続いて２週間後の２度目の注射、次いで、その後毎月（他に示されない限り）の注射を受容した。ワクチン接種は２−３月齢で開始し、動物が８−９月齢になるまで継続し、その時点で、動物は潅流され、それらの器官は分析のために収集された。マウスは一連の感覚運動試験を５−６ヶ月齢で経験し、そして８−９ヶ月齢で再度経験し、その後屠殺された。対象マウスはアジュバント単独を受容した。

ｈｔａｕ／ＰＳ１／ｍｔａｕ−／−マウス（ｎ＝１２）は、リン酸化タウ免疫原タウ３７９−４０８［Ｐ−Ｓｅｒ３９６，４０４］で免疫された。アジュバント単独を受容した３つの非免疫対照群が含まれた。主要な対照群には、免疫されなかった同一のマウス（ｈｔａｕ／ＰＳ１対照；ｎ＝１６）からなった。他の対照群は、マウスタウを発現したｈｔａｕ／ＰＳ１マウス（ｈｔａｕ／ＰＳ１／ｍｔａｕ；ｎ＝８）ならびにマウスタウノックアウトバックグラウンドのｈｔａｕ同腹子（ｈｔａｕ対照；ｎ＝１０）からなった。

ｈｔａｕ／ＰＳ１／ｍｔａｕ−／−マウス（３−４月齢）は、ミョウバンアジュバント中で１００μｇのリン酸化タウ誘導体を腹腔内（ｉ．ｐ．）で、最初の３回注射を２週間毎に受容した。引き続く投与は、毎月の間隔であった。対照群はアジュバント単独を受容した。７−８ヶ月目において、マウスは、治療効力を決定するための行動試験を経験し、引き続いて、８−９ヶ月齢で分析のために屠殺された。運動能力、横方向ビーム、およびロータロッドテストは、学習および記憶課題における測定された認知欠損が感覚運動異常に寄与できるか否かを決定するために実施された。認知試験は、放射状アーム迷路、閉鎖されたフィールド対称迷路、および物体認識テストを使用して実施された（Ｓｉｇｕｒｄｓｓｏｎｅｔａｌ．，「ＡｎＡｔｔｅｎｕａｔｅｄＩｍｍｕｎｅＲｅｓｐｏｎｓｅｉｓＳｕｆｆｉｃｉｅｎｔｔｏＥｎｈａｎｃｅＣｏｇｎｉｔｉｏｎｉｎａｎＡｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓＤｉｓｅａｓｅＭｏｕｓｅＭｏｄｅｌＩｍｍｕｎｉｚｅｄｗｉｔｈＡｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａＤｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ」，ＪＮｅｕｒｏｓｃｉ２４：６２７７−６２８２（２００４），Ａｓｕｎｉｅｔａｌ．，「ＶａｃｃｉｎａｔｉｏｎｏｆＡｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓＭｏｄｅｌＭｉｃｅｗｉｔｈＡｂｅｔａＤｅｒｉｖａｔｉｖｅｉｎＡｌｕｍＡｄｊｕｖａｎｔＲｅｄｕｃｅｓＡｂｅｔａＢｕｒｄｅｎＷｉｔｈｏｕｔＭｉｃｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｅｓ．」ＥｕｒＪＮｅｕｒｏｓｃｉ．２４：２５３０−４２（２００６），ａｎｄＡｓｕｎｉｅｔａｌ．，「ＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙＴａｒｇｅｔｉｎｇＰａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌＴａｕＣｏｎｆｏｒｍｅｒｓｉｎａＴａｎｇｌｅＭｏｕｓｅＭｏｄｅｌＲｅｄｕｃｅｓＢｒａｉｎＰａｔｈｏｌｏｇｙｗｉｔｈＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＩｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｓ」，ＪＮｅｕｒｏｓｃｉ２７：９１１５−９１２９（２００７）、これらはそれらの全体が参照により組み込まれる）。

実施例４−Ｔａｕ免疫治療は強固な抗体応答を生成する
マウスは研究の開始前（Ｔ０）、３回目の注射の１週間後、その後定期的に、そして屠殺の際（Ｔｆ）に採血された。ワクチンに対する抗体応答は、血漿の希釈により（他に示されない場合、１：２００）、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して、以前に記載されたように決定され（Ｓｉｇｕｒｄｓｓｏｎｅｔａｌ．，「ＩｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎｗｉｔｈａＮｏｎ−Ｔｏｘｉｃ／Ｎｏｎ−ＦｉｂｒｉｌｌａｒＡｍｙｌｏｉｄ−β ＨｏｍｏｌｏｇｏｕｓＰｅｐｔｉｄｅＲｅｄｕｃｅｓＡｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓＤｉｓｅａｓｅＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＰａｔｈｏｌｏｇｙｉｎＴｒａｎｓｇｅｎｉｃＭｉｃｅ」ＡｍＪＰａｔｈｏｌ．１５９：４３９−４４７（２００１）ａｎｄＳｉｇｕｒｄｓｓｏｎｅｔａｌ．，「ＡｎＡｔｔｅｎｕａｔｅｄＩｍｍｕｎｅＲｅｓｐｏｎｓｅｉｓＳｕｆｆｉｃｉｅｎｔｔｏＥｎｈａｎｃｅＣｏｇｎｉｔｉｏｎｉｎａｎＡｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓＤｉｓｅａｓｅＭｏｕｓｅＭｏｄｅｌＩｍｍｕｎｉｚｅｄｗｉｔｈＡｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａＤｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ」ＪＮｅｕｒｏｓｃｉ．２４：６２７７−６２８２（２００４）、これらはそれらの全体が参照により組み込まれる）、ここで、免疫原はＩｍｍｕｌｏｎ（登録商標）マイクロタイターウェル（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，）にコートされた。検出のために、西洋ワサビペルオキシダーゼに連結されたヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）または抗マウスＩｇＭ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）が１：３０００希釈で使用された。テトラメチルベンジジン（Ｐｉｅｒｃｅ）が基質であった。

図１Ａは、ＧＰＳＬリンカーを介して破傷風毒素ヘルパーＴ細胞エピトープ（ＴＴ９４７−９６７）に連結されたＴａｕ２１０−２１６［Ｐ−Ｔｈｒ_２１２−Ｓｅｒ_２１４］（配列番号２）で免疫されたＪＮＰＬ３Ｐ３０１Ｌタングルマウスにおける強固なＩｇＧおよびＩｇＭ免疫応答を示す。２−３ヶ月齢のマウスは、２週間間隔をあけて最初の２回の免疫を受容し、次いで、その後毎月、免疫を受容した。抗体応答を評価するために、マウスは最初の免疫前に採血され、その後、ワクチン投与の１週間後に定期的に採血され、そして８−９ヶ月齢で組織収集のために屠殺された。図１Ａは、ＩｇＧおよびＩｇＭ抗体応答が、６回目の免疫（Ｔ３）の１週間後に測定され、８−９ヶ月齢で再度測定され、これは屠殺の時点であった（Ｔｆ＝Ｔ最終）ことを示す。図１Ｂは、ＧＰＳＬを介してＴＴ９４７−９６７に連結された関連性のないタウエピトープＴａｕ２６０−２６４［Ｐ−Ｓｅｒ_２６２］に結合しているＩｇＧおよびＩｇＭによって評価されるように、強力な抗体応答が破傷風毒素エピトープに対して生成されることを示す。

図２Ａに示されるように、ＧＰＳＬリンカーを介して破傷風毒素ヘルパーＴ細胞エピトープ（ＴＴ９４７−９６７）に連結されたＴａｕ２６０−２６４［Ｐ−Ｓｅｒ_２６２］（配列番号３）で免疫されたＪＮＰＬ３Ｐ３０１Ｌタングルマウスは、免疫原に対する強固なＩｇＧ応答を生じることを示す。上記と同様に、マウスは、２−３ヶ月齢から８−９ヶ月齢になるまで、最初の２回の免疫は２週間間隔をあけて受容し、次いでその後は毎月、免疫を受容した。抗体応答の良好な部分は、ＧＰＳＬを介してＴＴ９４７−９６７（図２Ｂ）に連結された関連性のないタウエピトープＴａｕ２１０−２１６［Ｐ−Ｔｈｒ_２１２−Ｓｅｒ_２１４］へのＩｇＧ結合によって評価されるように、破傷風毒素エピトープに対して生成される。しかし、図２Ｃに示されるように、抗体応答の良好な部分は、Ｔａｕ２６０−２６４［Ｐ−Ｓｅｒ_２６２］領域を含む、より大きなタウエピトープＴａｕ２４０−２７０［Ｐ−Ｓｅｒ_２６２］へのＩｇＧ結合によって評価されるように、タウエピトープに対して生成される。Ｔ０−Ｔ最終：ワクチン接種の前の採血（Ｔ０）、３回目の免疫の１週間後の採血（Ｔ１）、６回目の免疫の１週間後の採血（Ｔ２）、７回目の免疫の１週間後の採血（Ｔ３）、および組織収集時の採血（Ｔｆ）。

強固な抗体（ＩｇＧ）応答が、破傷風毒素ヘルパーＴ細胞エピトープ（ＴＴ９４７−９６７）に連結されたＴａｕ２２９−２３７［Ｐ−Ｔｈｒ_２３１−Ｓｅｒ_２３５］（配列番号４）を用いて免疫されたＪＮＰＬ３Ｐ３０１Ｌタングルマウスにおいて生成された（図３）。これらのマウスは、２−３ヶ月齢で、２週間間隔をあけて、次いで、１ヶ月後免疫され、そして３回目の免疫の１週間後に採血された（Ｔ１）。

強固な抗体（ＩｇＧ）応答は、ミョウバンアジュバント中の擬リン酸化免疫原であるＴａｕ３７９−４０８［Ａｓｐ_{３９６，４０４}］（配列番号５７）を用いて免疫されたＪＮＰＬ３Ｐ３０１Ｌタングルモデルマウスにおいてもまた生成された。重要なことに、これらの抗体は、ホスホエピトープであるＴａｕ３７９−４０８［Ｐ−Ｓｅｒ_{３９６，４０４}］を同程度まで認識する。これらのマウスは、２−３ヶ月齢から、最初の２回の免疫については２週間毎に、その後は１ヶ月に１回免疫した。これらのマウスは、７−８ヶ月齢での組織採集の時点で採血された（Ｔｆ＝Ｔ最終）。

実施例５−免疫治療は脳におけるタウ凝集を減少する
タウ病理の組織学的分析のために、マウスは、フェノバルビタールナトリウム（１２０ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．）で麻酔され、動脈を横切ってＰＢＳで潅流され、そして以前に記載されたように脳が処理された（Ｓｉｇｕｒｄｓｓｏｎｅｔａｌ．，「ＩｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎｗｉｔｈａＮｏｎ−Ｔｏｘｉｃ／Ｎｏｎ−ＦｉｂｒｉｌｌａｒＡｍｙｌｏｉｄ−β ＨｏｍｏｌｏｇｏｕｓＰｅｐｔｉｄｅＲｅｄｕｃｅｓＡｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓＤｉｓｅａｓｅＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＰａｔｈｏｌｏｇｙｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃＭｉｃｅ」ＡｍＪＰａｔｈｏｌ１５９：４３９−４４７（２００１）；Ｓｉｇｕｒｄｓｓｏｎｅｔａｌ．，「ＡｎＡｔｔｅｎｕａｔｅｄＩｍｍｕｎｅＲｅｓｐｏｎｓｅｉｓＳｕｆｆｉｃｉｅｎｔｔｏＥｎｈａｎｃｅＣｏｇｎｉｔｉｏｎｉｎａｎＡｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓＤｉｓｅａｓｅＭｏｕｓｅＭｏｄｅｌＩｍｍｕｎｉｚｅｄｗｉｔｈＡｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａＤｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ」ＪＮｅｕｒｏｓｃｉ２４：６２７７−６２８２（２００４）；およびＳｉｇｕｒｄｓｓｏｎＥ．，「ＨｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌＳｔａｉｎｉｎｇｏｆＡｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａｉｎＭｏｕｓｅＢｒａｉｎｓ」ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｌＢｉｏｌ２９９：２９９−３０８（２００５）これらはそれらの全体が参照により組み込まれる）。手短に述べると、右半球が、過ヨウ素酸−リジン−パラホルムアルデヒド（ＰＬＰ）中で一晩浸漬固定され、一方、左半球は、タウタンパク質分析のために素早く凍結された。固定後、脳は、２０％グリセロールおよび２％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含有するリン酸緩衝液に移され、切片化するまで４℃で保存された。連続冠状脳切片（４０μｍ）が切断され、１０番目毎に、ＰＨＦタウタンパク質のＣ末端上の微小管結合反復の中に位置するリン酸化セリン３９６および４０４を認識するＰＨＦ１モノクローナル抗体で染色された（Ｏｔｖｏｓｅｔａｌ．，「ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｙＰＨＦ−１ＲｅｃｏｇｎｉｚｅｓＴａｕＰｒｏｔｅｉｎＰｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄａｔＳｅｒｉｎｅＲｅｓｉｄｕｅｓ３９６ａｎｄ４０４」ＪＮｅｕｒｏｓｃｉＲｅｓ３９：６６９−６７３（１９９４），これはその全体が参照により組み込まれる）。

タウ抗体染色は、全体が参照により組み込まれる、Ｓｉｇｕｒｄｓｓｏｎｅｔａｌ．，「ＩｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎｗｉｔｈａＮｏｎ−Ｔｏｘｉｃ／Ｎｏｎ−ＦｉｂｒｉｌｌａｒＡｍｙｌｏｉｄ−β ＨｏｍｏｌｏｇｏｕｓＰｅｐｔｉｄｅＲｅｄｕｃｅｓＡｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓＤｉｓｅａｓｅＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＰａｔｈｏｌｏｇｙｉｎＴｒａｎｓｇｅｎｉｃＭｉｃｅ」ＡｍＪＰａｔｈｏｌ１５９：４３９−４４７（２００１）およびＳｉｇｕｒｄｓｓｏｎｅｔａｌ．，「ＡｎＡｔｔｅｎｕａｔｅｄＩｍｍｕｎｅＲｅｓｐｏｎｓｅｉｓＳｕｆｆｉｃｉｅｎｔｔｏＥｎｈａｎｃｅＣｏｇｎｉｔｉｏｎｉｎａｎＡｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓＤｉｓｅａｓｅＭｏｕｓｅＭｏｄｅｌＩｍｍｕｎｉｚｅｄｗｉｔｈＡｍｙｌｏｉｄ−ｂｅｔａＤｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ」ＪＮｅｕｒｏｓｃｉ２４：６２７７−６２８２（２００４）に記載されるように実施された。手短に述べると、切片は、１：１００〜１：１０００希釈で一次ＰＨＦ１抗体中でインキュベートされた。マウスオンマウス免疫検出キット（ａｍｏｕｓｅｏｎｍｏｕｓｅｉｍｍｕｎｏｄｅｔｅｃｔｉｏｎｋｉｔ）（ＶｅｃｔｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）が使用され、ここでは、抗マウスＩｇＧ二次抗体が１：２０００希釈で使用された。

組織切片の分析は、Ｂｉｏｑｕａｎｔ画像解析システムを用いて定量された。このソフトウェアは、画像フィールドの中の物体をセグメント化するために、色調、彩度、および強度を使用する。閾値は、標準のスライドセット上で正確に同定された物体を用いて確立され、これらのセグメント化閾値は、分析セッションの全体を通して一定のままであった。閾値パラメーターの確立後、画像フィールドはフレームグラバーでデジタル化された。Ｂｉｏｑｕａｎｔソフトウェアは、バックグラウンド照射における不均一性を補正し（ブランクフィールド補正）、全体のフィールドの測定パラメーターを計算する。免疫組織化学の定量的画像分析のために、歯状回の顆粒層が最初に選択され、これは、ニューロン内タウ凝集物（前タングル（ｐｒｅｔａｎｇｌｅｓ）およびタングル（ｔａｎｇｌｅｓ））を一貫して含んだ。この観察は、このモデルのもともとの特徴と一致する（Ｌｅｗｉｓｅｔａｌ．，「ＮｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙＴａｎｇｌｅｓ，ＡｍｙｏｔｒｏｐｈｙａｎｄＰｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅＭｏｔｏｒＤｉｓｔｕｒｂａｎｃｅｉｎＭｉｃｅＥｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｕｔａｎｔ（Ｐ３０１Ｌ）ＴａｕＰｒｏｔｅｉｎ」ＮａｔＧｅｎｅｔ２５：４０２−４０５（２０００）、これはその全体が参照により組み込まれる）。すべての手順は、研究の実験条件に対して盲検的である個人によって実施された。サンプル番号は組織処理の開始前にランダム化され、暗号は分析が完了した後のみに破られた。マウス脳からの各１０番目の切片がサンプリングされ、測定は、フィールドの左端において歯状回の先端を有する反応生成物によって占められた×２００拡大の測定フィールド中の領域のパーセントであった。動物あたり４〜５個の切片が分析された。

ＴＴ９４７−９６７（Ｔ２９９）に連結されたＴａｕ２６０−２６４［Ｐ−Ｓｅｒ_２６２］（配列番号３）を用いるホモ接合性ＪＮＰＬ３タウＰ３０１Ｌマウスの免疫は、アジュバントのみを受容する対照マウスと比較して、脳幹（図５Ａ）と歯状回（図５Ｂ）の両方において病理学的タウを減少した。同様に、リン酸化Ｔａｕ３７９−４０８［Ｐ−Ｓｅｒ_{３９６，４０４}］免疫原性ペプチドを用いるｈｔａｕ／ＰＳ１マウスの免疫は、梨状皮質（ｐｙｒｉｆｏｒｍｃｏｒｔｅｘ）中で５６％までタウ凝集の量を減じた（図６、ｈｔａｕ／ＰＳ１免疫をｈｔａｕ／ＰＳ１対照に対して比較）。免疫群と対照群の間で有意な違いが観察された（片側ＡＮＯＶＡ、ｐ＜０．０１）。ポストホック分析もまた、免疫したｈｔａｕ／ＰＳ１マウスがそれらのｈｔａｕ／ＰＳ１対照とは異なったことを示した（ｐ＜０．０１）＊＊ｐ＜０．０１。

実施例６−Ｔａｕ免疫治療は認知低下を予防する
タウ免疫治療がＰ３０１Ｌにおいて観察される加齢関連感覚運動異常を予防もしくは逆転するか否か、またはこれがｈｔａｕ／ＰＳ１マウスにおいていかなる運動不全も引き起こすか否かを決定するために、免疫原性Ｔａｕ２６０−２６４［Ｐ−Ｓｅｒ_２６２］（配列番号３）またはＴａｕ３７９−４０８［Ｐ−Ｓｅｒ_{３９６，４０４}］（配列番号８２）を投与された動物が、以下に記載される種々の感覚運動試験および認知試験を使用して評価された。

ロータロッドテスト：動物はロッド（直径３．６ｃｍ）装置上に配置され、前肢および後肢の運動神経およびバランスを測定することによって、運動神経およびバランスの違いを評価した（Ｒｏｔａｒｏｄ７６５０加速（ａｃｃｅｌｅｒａｔｉｎｇ）モデル；ＵｇｏＢａｓｉｌｅ，ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈＡｐｐａｒａｔｕｓ，Ｖａｒｅｓｅ，Ｉｔａｌｙ）。この手順は、混乱した訓練を伴うことなく運動行動を評価するために設計された。動物は、実演のベースラインレベルに達するために十分である２回の試行の訓練セッションを受容することによって、この装置に慣らされた。次いで、マウスは、速度を増加させながら、３回の追加の回数、試験された。慣熟の間、ロータロッドは１．０ｒｐｍに設定され、これは、３０秒ごとに徐々に上昇され、そして各セッション後には３０％エタノール溶液で清浄にふき取られた。柔らかい発泡クッションが装置の下に配置され、落下による潜在的な傷害を防いだ。各動物は３回のセッションについて試験され（続く分析のためにデータは合わせられた）、各セッションは１５分間離され、そして測定は、回転バレルの上端から落下または転倒（しがみつきによる）するための待ち時間について取られた。

横方向ビーム：この課題は、バランスおよび一般的な運動神経および機能の統合を試験する。マウスは、ゴールボックスに到達するために段階付けした木製ビームを横切るそれらの能力を測定することによって評価される（Ｔｏｒｒｅｓｅｔａｌ．，「Ｂｅｈａｖｉｏｕｒａｌ，ＨｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎｄＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＣｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＳｅｌｅｃｔｉｖｅＩｍｍｕｎｏｌｅｓｉｏｎｓｉｎＤｉｓｃｒｅｔｅＲｅｇｉｏｎｓｏｆｔｈｅＢａｓａｌＦｏｒｅｂｒａｉｎＣｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃＳｙｓｔｅｍ」Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ６３：９５−１２２（１９９４），これはその全体が参照により組み込まれる）。マウスは、５０．８ｃｍ長であり、パッドを詰めた表面の３０ｃｍ上に２つの同一の柱によって吊されている１．１ｃｍ幅のビーム上に配置される。ビームの各端には遮光したゴールボックスが付属している。マウスは、慣れるために垂直方向でビーム上に配置され、次いで、最大で６０秒間モニターされた。落下前の各マウスの足のすべりの数、またはゴールボックスに達する数が、４回の連続する試行の各々について記録された。エラーは足のすべりとして定義され、数値として記録された。

放射状アーム迷路：この迷路装置は、プレキシグラスから構築された８アーム上昇放射状迷路である。各アームは３５ｃｍ長および７ｃｍ幅であり、１ｃｍ直径の水カップが各アームの端に位置している。１５ｃｍの高さの側壁が各アームに向けて１２ｃｍ伸びており、動物をアーム間の交差から防いでいる。中心領域は、直径１４ｃｍの八角形形状のハブである。プーリーシステムによって遠隔操作される透明なプレキシグラスギロチンドアがアームへの接近を制御する。この迷路は、床レベルの７５ｃｍ上に上昇しており、定められた位置のいくつかの独特な物体が、迷路の特別な手がかりとして働く。試験の前に、マウスは５日間適合された。この期間の間、マウスは、１日あたり１時間の間、水中０．１％サッカリンを受容し、次いで、各アームの端に配置されたカップから糖溶液にアクセスするように、その後１６時間適合された。適合の最初の２日間は、マウスが自由に探索することが許容されたＹ迷路で行われた。次の３日間の適合は、放射状アーム迷路において実施され、ここでは、ドアは定期的に上げられ、および下げられて、それらの操作に付随する音に対して動物を慣れさせた。同じ水枯渇スケジュールは、９日間の試験期間の間維持された。マウスは、このスケジュール上で良好な健康を維持する。各試験の試行は、中心領域にマウスを配置すること、およびすべてのドアを上げることによって開始された。アームが入られたときに、すべてのドアは下げられた。マウスがサッカリン水を消費した後、そのアームへのドアが上げられ、マウスが中心領域に戻ることを可能にした。５秒間間隔後、次の試行が、すべてのドアを再度同時に上げることによって開始された。この手順は、動物が８個すべてのアームに入るか、または１０分間が経過するかまで継続された。１日の習得セッションは９日間継続された。エラーの数（以前に訪問したアームに入ること）および各セッションを完了するための時間が記録された。

物体認識：利用された自発的物体認識テストは短期記憶の欠損を測定し、床から５０ｃｍに上げられた正方形形状のオープンフィールドボックス（４８ｃｍ正方形、黒色プレキシグラスから構築された１８ｃｍの高さの壁を有する）の中で実施された。光強度は３０ルクスに設定された。テストの前日に、マウスは個別にセッションに慣らされ、ここで、これらは、１５分間の間、空のボックスを探索させられた。訓練セッションの間、２つの新たな物体がオープンフィールドの対角線の角に配置され、動物は１５分間探索された。任意の所定の試行のために、一対の物体は１０ｃｍの高さであり、同じ材料からなり、その結果、これらは、嗅覚的な手がかりによって容易に区別できなかった。各物体の探索に費やされた時間は追跡システムによって記録され（ＳａｎＤｉｅｇｏＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ）、訓練フェーズの最後において、マウスは、保持遅延の期間の間（ＲＤ＝３ｈ）、ボックスから取り外された。正常マウスは、１時間までの遅延後に特定の物体を覚えており、保持試行の間に新規な物体を調べることにそれらの時間の大部分を費やす。保持テストの間、動物は、同じボックスに戻して配置され、ここでは、訓練の間に使用される以前によく知っている物体の１つが第２の新規な物体によって置き換えられ、６分間の間、自由に探索させられた。異なる物体の対は、所定の動物についての各試行のために使用され、物体の対に対する曝露の順序、ならびに各対のための指定されたサンプルおよび新規な物体は、群の中でおよび群を横切ってバランスが保たれた。新規な物体およびよく知っている物体を探索するために費やされた時間が６分間の間記録された。

閉鎖フィールド対称迷路：この装置は、長方形フィールド、３６に分割された９ｃｍ高さの壁を有する３０ｃｍ正方形、９．５ｃｍの正方形であり、透明なプレキシグラスの上端によって覆われている。各１１×１６×９ｃｍのエンドボックスは、フィールドの対角線の角に位置される。対称迷路は、以前に議論されたような、Ｈｅｂｂ−ＷｉｌｌｉａｍｓおよびＲａｂｉｎｏｖｉｔｃｈ−Ｒｏｓｖｏｌｄ型のテストの改変である（Ａｓｕｎｉｅｔａｌ．，「ＶａｃｃｉｎａｔｉｏｎｏｆＡｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓＭｏｄｅｌＭｉｃｅｗｉｔｈＡｂｅｔａＤｅｒｉｖａｔｉｖｅｉｎＡｌｕｍＡｄｊｕｖａｎｔＲｅｄｕｃｅｓＡｂｅｔａＢｕｒｄｅｎｗｉｔｈｏｕｔＭｉｃｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｅｓ」，ＥｕｒＪＮｅｕｒｏｓｃｉ２４：２５３０−２５４２（２００６）、これはその全体が参照により組み込まれる）。手短に述べると、主な違いは、各末端コンパートメントが、スタートボックスとゴールボックスの両方として機能し、マウスが代替試行に対して反対方向に走り、それによって、試行間の操作を排除することである。障壁は対称パターンでフィールドに配置され、その結果、マウスは同じターンに面し、与えられた問題の中でのいずれかの方向に行く。試験の前に、マウスは、水制限スケジュールに適合された（１日に２時間の水へのアクセス）。マウスは、試験の開始前に２回の適合セッションを与えられた。最初のセッションにおいて、すべての動物は、ゴールボックスにおいて、１０分間、サッカリンフレーバーの水を与えられた。セッション２において、これらは、開始チャンバーに配置され、フィールドを探索することが許可され、そして水報酬（０．０５ｍＬ）が利用可能であるゴールボックスに入る。マウスがスタートチャンバーからゴールボックスまで確実に走っていた場合、これらは、３つの練習セッションが与えられ、ここでは、ゴールボックスまでの直接的なアクセスを妨害するために、フィールドの中の異なる位置に１つまたは２つの障壁が配置された。正式の試験は、以前のデータ（Ａｓｕｎｉｅｔａｌ．，「ＶａｃｃｉｎａｔｉｏｎｏｆＡｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓＭｏｄｅｌＭｉｃｅｗｉｔｈＡｂｅｔａＤｅｒｉｖａｔｉｖｅｉｎＡｌｕｍＡｄｊｕｖａｎｔＲｅｄｕｃｅｓＡｂｅｔａＢｕｒｄｅｎｗｉｔｈｏｕｔＭｉｃｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｅｓ」，ＥｕｒＪＮｅｕｒｏｓｃｉ２４：２５３０−２５４２（２００６）、これはその全体が参照により組み込まれる）および公開されているマウスについての基準に基づいて、困難さが等級付けられた３つの課題の提示からなった。１つの課題は１日あたりに提示され、そしてマウスは２分間の試行間間隔で各課題に対して５回の試行が与えられた。成績は同じ観察者によってエラー（すなわち、指定されたエラーゾーンへのエントリーおよび再エントリー）、および各試行を完了するための時間により手動で点数付けされた。

これらの実験の目的は、選択された感覚運動（すなわち、横方向ビームおよびロータロッド）および認知行動（すなわち、放射状アーム迷路、物体認識テスト、および閉鎖フィールド対称迷路テスト）に対するワクチン接種の効果を評価することであった。ホモ接合性Ｐ３０１Ｌマウスは３ヶ月齢まで初期にタングル病理を有し、これらの動物は５および８ヶ月齢で試験された。ｈｔａｕ／ＰＳ１動物は７−８ヶ月齢で試験された。

破傷風毒素ヘルパーＴ細胞エピトープ（ＴＴ９４７−９６７）に連結されたリン酸化された免疫原性タウペプチドＴａｕ２６０−２６４［Ｐ−Ｓｅｒ_２６２］を用いるホモ接合性ＪＮＰＬ３タウＰ３０１Ｌマウスの免疫は、８ヶ月齢における横方向ビームテストを使用して評価されるように、神経原線維タングルの発生に伴う機能障害（図７Ａ）、ならびに５−６ヶ月齢および８−９ヶ月齢におけるロータロッドテストによって評価される機能障害（図７Ｂ）を予防した。対照ＪＮＰＬ３タウＰ３０１Ｌマウスはアジュバント単独を受容した。

リン酸化Ｔａｕ３７９−４０８［Ｐ−Ｓｅｒ３９６，４０４］を用いるｈｔａｕ／ＰＳ１マウスの免疫は、利用された３種すべてのテスト：１）放射状アーム迷路（ＲＡＭ；二元ＡＮＯＶＡ反復測定、ｐ＜０．０００１、図８Ａ）、２）物体認識テスト（ＯＲＴ；一元ＡＮＯＶＡ、ｐ＝０．００５、図８Ｂ）、および３）閉鎖フィールド対称迷路（ＣＦＳＭ；一元ＡＮＯＶＡ、迷路Ａ：ｐ＜０．００１、迷路Ｂ：ｐ＜０．０００１、迷路Ｃ：ｐ＜０．０１、図９Ａ−９Ｃ）において認知の低下を予防した。ＲＡＭおよびＣＦＳＭにおいて、免疫されたｈｔａｕ／ＰＳ１マウスは、すべての日に（ＲＡＭ；ｐ＜０．０１−０．００１）およびエラーの数によって示されるような複雑さが増加しているものである迷路のすべておいて、対照ｈｔａｕ／ＰＳ１よりも良好な性能であった（注記：Ｙ軸スケールは異なる；ＣＦＳＭ迷路Ａ：ｐ＜０．０１、迷路Ｂ，Ｃ：ｐ＜０．００１）。ＯＲＴにおいて、ポストホック分析は、処理されたｈｔａｕ／ＰＳ１群が、それらの同一の対照マウスよりもより良好な短期記憶を有した（ｐ＜０．０１）。認知的に正常なマウスが、古い物体と比較して、新しい物体にそれらの時間の約７０％を費やすことは十分に確立されている（Ａｓｕｎｉｅｔａｌ．，「ＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙＴａｒｇｅｔｉｎｇＰａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌＴａｕＣｏｎｆｏｒｍｅｒｓｉｎａＴａｎｇｌｅＭｏｕｓｅＭｏｄｅｌＲｅｄｕｃｅｓＢｒａｉｎＰａｔｈｏｌｏｇｙｗｉｔｈＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＩｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｓ」，ＪＮｅｕｒｏｓｃｉ２７：９１１５−９１２９（２００７），これはその全体が参照により組み込まれる）。免疫されたｈｔａｕ／ＰＳ１マウスは、感覚運動課題（ロータロッド、横方向ビーム、運動活動）のいずれかにおいて、それらの免疫されていない同一の対照マウスとな有意に異なっていなかった。これらの知見は、免疫後に観察された認知の改善が、結果をさらに強化する感覚運動効果によって説明できないことを示す。

実施例７−タウ免疫治療は病理学的タウのレベルを減少する
脳組織は、０．１ｍＭ２−（Ｎ−モルホリノ）エタン（ｅｔｈａｎｏ）スルホン酸、０．５ｍＭＭｇＳＯ_４、１ｍＭＥＧＴＡ、２ｍＭジチオスレイトール、ｐＨ６．８、０．７５ｍＭＮａＣｌ、２ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオリド、完全ミニプロテアーゼ阻害剤混合物（Ｃｏｍｐｌｅｔｅｍｉｎｉｐｒｏｔｅａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｍｉｘｔｕｒｅ）（１０ｍＬの水中に１タブレット；Ｒｏｃｈｅ）、およびホスファターゼ阻害剤（２０ｍＭＮａＦおよび０．５ｍＭオルトバナジウム酸ナトリウム）を含む緩衝液中で均質化された。次いで、このホモジネートは、４℃で３０分間遠心分離され（２０，０００×ｇ）、可溶性細胞質画分（上清１）および不溶性画分（ペレット１）を分離する。このペレットは、プロテアーゼ阻害剤およびホスファターゼ阻害剤を有さないが、１％（ｖ／ｖ）ＴｒｉｔｏｎＸ−１００および０．２５％（ｗ／ｖ）デオキシ（ｄｅｓｏｘｙ）コール酸ナトリウムを含んだ同じ体積の緩衝液に再懸濁され、５０，０００で３０分間超遠心分離を行って、不溶性画分として分析された、界面活性剤で抽出された上清２を得た。上清１および２は１００℃で５分間加熱され、同じ量のタンパク質が１２％（ｗ／ｖ）ポリアクリルアミドゲル上で電気泳動された。ブロットはＴＢＳ中０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０を有する５％ノンファットミルクでブロックされ、様々な抗体とともに一晩インキュベートされ、次いで、ペルオキシダーゼ結合体化抗マウスまたは抗ウサギＩｇＧとともに室温で１時間インキュベートされた。続いて、結合した抗体は、ＥＣＬ（Ｐｉｅｒｃｅ）によって検出された。イムノブロットのデンシトメトリー分析は、ＮＩＨＩｍａｇｅＪプログラムによって実施された。ある研究は、病理生理学的条件の変化および細胞外マトリックス成分との相互作用はアクチンタンパク質合成を変化し得、アクチンを内部標準として不適切にすると報告しているので、病理学的タウのレベルはアクチンレベルの代わりに全体のタウタンパク質の量と比較して正常化された。

ウェスタンブロット分析のために、全体のタウはポリクローナルＢ１９抗体を用いて測定されたのに対し、病理学的タウはモノクローナルＰＨＦ１抗体を用いて検出された（図１０Ａ−１０Ｆ）。全体の可溶性および不溶性タウのレベルは群の間で有意に異なっていないのに対して（図１０Ａ−１０Ｂ）、可溶性ＰＨＦ１染色されたタウのレベルは、免疫されたマウスにおいて、それらの同一の対照と比較して、有意に減少した（４１％、ｐ＜０．００１）（図１０Ｃ）。不溶性ＰＨＦ１反応性タウの減少（２２％）の傾向が観察された（図１０Ｄ）。さらなる分析は、免疫治療が、ＰＨＦ１／Ｂ１９の比率を、可溶性画分および不溶性画分において、それぞれ、３５％および４３％に減少させるという非常に強い傾向を示した（図１０Ｅおよび１０Ｆ）。これらの知見は、病理学的タウが優先的に取り除かれたことを示す。

重要なことに、免疫治療を受容したｈｔａｕ／ＰＳ１マウスにおいて観察された認知改善は、免疫組織化学によって評価されたＰＨＦ１染色されたタウ凝集物の減少と良好に相関していた。有意な相関は、３つすべての記憶テストにおいて観察された（ＲＡＭ（分析された試験の最終日）：ｒ＝０．３６，ｐ＝０．０１；ＣＦＳＭ：迷路Ａ、ｒ＝０．３３、ｐ＝０．０２；迷路Ｃ、ｒ＝０．４０、ｐ＝０．０１；ＯＲＴ：ｒ＝−０．３１、ｐ＝０．０３）。ウェスタンブロット画分に関しては、有意な相関は、可溶性と不溶性の両方の画分、および放射状アーム迷路における全体のタウと比較したそれらの比率において観察されたが（可溶性ＰＨＦ１：ｒ＝０．４１，ｐ＜０．０１；可溶性ＰＨＦ１／全体の可溶性タウ：ｒ＝０．３４、ｐ＜０．０５；不溶性ＰＨＦ１：ｒ＝０．５２、ｐ＜０．００１；不溶性ＰＨＦ１／全体の不溶性タウ：ｒ＝０．３３，ｐ＜０．０５）、しかし、２つの他の認知テストにいては観察されなかった。

実施例８−Ｐ−３９６、４０４エピトープを標的とする受動免疫治療は、脳における機能低下を予防し、タウ凝集を減少する
受動免疫の実行可能性を決定するために、ホモ接合性Ｐ３０１Ｌマウスは、Ｐ３０１Ｌ（ＪＮＰＬ３）マウスモデルおよびＡＤにおいてＮＦＴおよび前タングルを認識するモノクローナルタウ抗体であるＰＨＦ１（Ｄｒ．ＰｅｔｅｒＤａｖｉｅｓより恵与）を腹腔内（ｉ．ｐ．）注射された（Ｌｅｗｉｓｅｔａｌ，「ＮｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙＴａｎｇｌｅｓ，ＡｍｙｏｔｒｏｐｈｙａｎｄＰｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅＭｏｔｏｒＤｉｓｔｕｒｂａｎｃｅｉｎＭｉｃｅＥｘｐｒｅｓｓｉｎｇＭｕｔａｎｔ（Ｐ３０１Ｌ）ＴａｕＰｒｏｔｅｉｎ」，ＮａｔＧｅｎｅｔ２５：４０２−４０５２２（２０００），これはその全体が参照により組み込まれる）。このモノクローナル抗体は、タウのＣ末端におけるセリンアミノ酸４０４および３９６上でリン酸化されたタウを認識する（Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇｅｔａｌ．，「ＨｙｄｒｏｆｌｕｏｒｉｃＡｃｉｄ−ＴｒｅａｔｅｄＴａｕＰＨＦＰｒｏｔｅｉｎｓＤｉｓｐｌａｙｔｈｅＳａｍｅＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＰｒｏｐｅｒｔｉｅｓａｓＮｏｒｍａｌＴａｕ」，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２６７：５６４−５６９（１９９２）これはその全体が参照により組み込まれる）。従って、これは、１つの積極的な免疫アプローチの表現型のモノクローナル類似体である（Ａｓｕｎｉｅｔａｌ．，「ＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙＴａｒｇｅｔｉｎｇＰａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌＴａｕＣｏｎｆｏｒｍｅｒｓｉｎａＴａｎｇｌｅＭｏｕｓｅＭｏｄｅｌＲｅｄｕｃｅｓＢｒａｉｎＰａｔｈｏｌｏｇｙｗｉｔｈＡｓｓｏｃｉａｔｅｄＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＩｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｓ」，ＪＮｅｕｒｏｓｃｉ２７：９１１５−９１２９（２００７），これはその全体が参照により組み込まれる）、ＰＨＦ１抗体エピトープを含有するＴａｕ３７９−４０８［Ｐ−Ｓｅｒ３９６，４０４］である。

ＰＨＦ１の用量はＰＢＳに溶解された２５０μｇ／１２５μＬであった。対照は、ＰＢＳ中の同じ用量のマウスＩｇＧをｉ．ｐ．注射された。１回目の注射は９−１２週齢の間に投与された。続いて、動物は、総計１３回の注射で毎週受容され、続いて、５−６ヶ月の行動テスト、引き続き６−７ヶ月の組織分析を行った。

ＰＨＦ１抗体を用いる受動免疫は、Ｐ３０１Ｌマウスモデルにおけるタウ病理関連運動低下を予防した。図１１Ａに示されるように、横方向ビームに対して、ＩｇＧ注射対照とＰＨＦ１免疫動物の間に有意な違いが存在し、対照動物は、ビームと交差するときにより多く足を滑らせた（試行を合わせた、ｐ＝０．０３）。同様に、ＰＨＦ１免疫Ｐ３０１Ｌマウスは、歯状回においてＰＨＦ１染色されたタウ病理が対照よりも５８％少なかった（ｐ＝０．０２）（図１１Ｂ）。血漿レベルのＰＨＦ１抗体とタウ病理の間の逆相関が、脳幹において観察され（図１２Ａ；ｐ＜０．０１）、運動皮質において相関の強い傾向が観察された（図１２Ｂ；ｐ＝０．０６）。

免疫された動物の血漿中のＰＨＦ−１抗体の量（μｇ／μＬ）は、２週間の間に４分の１に減少した（図１１Ｃ）。対照には検出可能な抗体が観察されなかった。これらは、免疫マウスについての平均値である。

実施例９−モノクローナルタウ抗体の生成
１０匹のｂａｌｂ／ｃマウスは、Ｎ末端に加えられたシステイン残基を介してＫＬＨに連結されたＴａｕ３８６−４０８［Ｐ−Ｓｅｒ_{３９６，４０４}］（配列番号１３）で免疫される。血漿の段階希釈によって検出されるように、免疫原のタウ部分に対して強力な抗体力価が生成された（図１３Ａ）。２匹のマウスが細胞融合のために選択され、最初のスクリーニングが、ＫＬＨなしの同免疫ペプチドを用いて実施された。二次スクリーニングが、同じペプチド、ならびにＴａｕ３８６−４０８［Ｐ−Ｓｅｒ_３９６］，Ｔａｕ３８６−４０８［Ｐ−Ｓｅｒ_４０４］、および非ホスホペプチドＴａｕ３８６−４０８（図１３Ｂ）を用いて実施された。このスクリーニングに基づいて、クローンが最初および２回目のサブクローニングのために選択された。重要なことに、多数の強力にポジティブなクローンが同定され（＞５０）、そして、この領域の中でホスホ−エピトープを特異的に認識し、またはこの領域の中のリン酸化されていない部位に結合し、それによって、分子の同じ領域の中のホスホまたは非ホスホタウエピトープに結合する抗体の効力および安全性のプロフィールの比較を可能にする、安定なクローンが同定された。

さらなるサブクローニングのために選択されたホスホ特異的モノクローナル抗体の中で、６個のうちの４個がホスホ−Ｓｅｒ_４０４エピトープについての特異性を保持していた（図１４Ａのクローン１Ｆ１２Ｃ２、１Ｆ１２Ｇ６、４Ｅ６Ｅ３、および４Ｅ６Ｇ７を参照のこと）。２個のクローンはホスホ−特異性が弱いか（８Ｂ２Ｄ１）、または非特異的であった（８Ｂ２Ｄ４）（図１４Ａ）。非ホスホ特異的モノクローナル抗体のうち、特に、６Ｂ２Ｅ９および６Ｂ２Ｇ１２は、さらなるサブクローニングの後でそれらの非特異性を保持していた（図１４Ｂ）。

４個のＰ−Ｓｅｒ_{３９６，４０４}タウホスホ−特異的（図１５Ａ）および非ホスホ−特異的（図１５Ｂ）モノクローナル抗体クローンの反応性は、ＪＮＰＬ３Ｐ３０１Ｌマウスおよび野生型（Ｗｔ）マウスからの脳ホモジネートに対して試験された。４個のホスホ−特異的クローンのうち、４Ｅ６Ｇ７は最強の反応性を示し（図１５Ａ）、これは、図１４ＡのＥＬＩＳＡの結果と一致している。タウＰ−Ｓｅｒ_{３９６，４０４}エピトープもまた認識するＰＨＦ−１抗体とは対照的に、すべてのクローンは、ＷｔホモジネートよりもＪＮＰＬ３Ｐ３０１Ｌ脳ホモジネートとより良好に反応する。タウの大部分はリン酸化されていないので、非ホスホ特異的クローンは、予測されたように、より速く反応する。

別のセットの１０匹のｂａｌｂ／ｃマウスは、Ｃ末端上のシステイン残基を介してＫＬＨに連結されたＴａｕ２６０−２７１［Ｐ−Ｓｅｒ_２６２］（配列番号１２）で免疫された。強力な力価がＴａｕ２６０−２７１［Ｐ−Ｓｅｒ_２６２］免疫原に対して生成されたが、血漿抗体は非ホスホペプチドＴａｕ２６０−２７１を同様に認識した（図１６Ａ）。８個の安定なホスホ−特異的クローンが、さらなる分析のための２回目のサブクローニングから選択され（図１６Ｂ）、そして２Ｃ１１クローンが、そのままでＩｇＧ２ａアイソタイプの抗体産生のために選択された。ＩｇＧ３はより短い半減期を有し、それゆえに、受動免疫研究のために理想的とは見なされていない。

ＪＮＰＬ３Ｐ３０１Ｌおよび野生型（Ｗｔ）マウスからの脳ホモジネートに対する３個のホスホ−特異的Ｐ−Ｓｅｒ_２６２タウモノクローナル抗体クローンの反応性が評価された（図１７）。２Ｃ１１抗体クローンは、他のホスホ−特異的クローンよりも高分子量バンドを認識し、これは、野生型とＰ３０１Ｌ組織を区別する。５Ｆ７Ｄ１０および５Ｆ７Ｅ９は他のクローンの代表的なものである。Ｔａｕ−５は全体のタウを認識し、タウのアミノ酸２１６−２２７の周辺のエピトープに結合する。ＣＰ２７はヒトタウを認識するが、マウスタウを認識しない。

５Ｆ７Ｄ１０抗体クローンは、図１８Ａ−１８Ｅに示されるように、Ｐ３０１Ｌタングルマウス脳切片におけるタウ病理を容易に検出した。５Ｆ７Ｄ１０モノクローナル抗体は、野生型（図１８Ｂ）と比較して、Ｐ３０１Ｌ脳切片（図１８Ａ）において強力な組織学的染色を示す。ＰＨＦ１抗体は、同じタングルマウスの中でタウ病理を捕捉するが（図１８Ｃ）、このパターンは５Ｆ７Ｄ１０抗体とは異なっており、このことは、これらが異なるタウエピトープを認識するので、驚くべきことではない。図１８Ｄは、凝集したタウを有する神経細胞を示す図１８Ａにおけるボックスを付した領域の拡大画像である。図１８Ｅは、異なるＪＮＰＬ３Ｐ３０１Ｌマウスにおいて５Ｆ７Ｄ１０を用いて検出されたタングル様病理のより高度な拡大画像である。

好ましい実施形態が本明細書においてより詳細に表現され、記載されてきたが、種々の改変、付加、置換などが本発明の技術思想から逸脱することなくなされ得ること、従って、これらは以下に続く特許請求の範囲において規定されるような本発明の範囲内にあると見なされることが関連分野における当業者には明白である。

Claims

１つ以上の組換えにより産生された抗体、または、１つ以上のその活性結合部分を含む薬学的組成物であって、ここで、該組換えにより産生された抗体が、以下からなるアミノ酸配列の免疫原性タウペプチドで免疫されて誘導された抗体の活性結合部分のアミノ酸配列を含む；
(1) アミノ酸配列RENAKAKTDHGAEIVYKXPVVSGDTXPRHL（配列番号５７）、
(2) TDHGAEIVYKS^*PVVSGDTS^*PRHL（配列番号１３）およびTDHGAEIVYKXPVVSGDTXPRHL（配列番号４２）からなる群より選択されるアミノ酸配列、
(3) アミノ酸配列AEIVXKXPVVXGDXXPRHLXNVXXTGSIDMV（配列番号７４）、
(4) YKS^*PVVSGDTS^*PR（配列番号５）およびYKXPVVSGDTXPR（配列番号３４）からなる群より選択されるアミノ酸配列、もしくは
(5) VVS^*GDT^*SPRHLS^*NVS^*S^*T^*GS（配列番号２３）およびVVXGDXSPRHLXNVXXXGS（配列番号５２）からなる群より選択されるアミノ酸配列、
ここで、Xはグルタミン酸もしくはアスパラギン酸残基；
S^*はリン酸化セリン残基；
T^*はリン酸化スレオニン残基；
被験体におけるアルツハイマー病または他のタウオパシーの治療または予防用薬学的組成物。
前記免疫原性タウペプチドが、
アミノ酸配列RENAKAKTDHGAEIVYKXPVVSGDTXPRHL（配列番号５７）、ここでXはアスパラギン酸残基；
からなるアミノ酸配列を有する、請求項１記載の薬学的組成物。
以下を含む、請求項１記載の薬学的組成物：
１つ以上の組換えにより産生された抗体、または、１つ以上のその活性結合部分、ここで、該組換えにより産生された抗体が、以下からなるアミノ酸配列の免疫原性タウペプチドで免疫されて誘導された抗体の活性結合部分のアミノ酸配列を含む；
(1) アミノ酸配列RENAKAKTDHGAEIVYKXPVVSGDTXPRHL（配列番号５７）、
(2) アミノ酸配列TDHGAEIVYKS^*PVVSGDTS^*PRHL（配列番号１３）、
(4) アミノ酸配列YKS^*PVVSGDTS^*PR（配列番号５）、または
(5) アミノ酸配列VVS^*GDT^*SPRHLS^*NVS^*S^*T^*GS（配列番号２３）。
以下を含む、請求項１記載の薬学的組成物：
１つ以上の組換えにより産生された抗体、または、１つ以上のその活性結合部分、ここで、該組換えにより産生された抗体が、以下からなるアミノ酸配列の免疫原性タウペプチドで免疫されて誘導された抗体の活性結合部分のアミノ酸配列を含む；
(1) アミノ酸配列RENAKAKTDHGAEIVYKXPVVSGDTXPRHL（配列番号５７）、または
(2) アミノ酸配列TDHGAEIVYKS^*PVVSGDTS^*PRHL（配列番号１３）。
前記１つ以上の組換えにより産生された抗体が、正常なタウタンパク質に対して交差反応性をほとんど有さないか、全く有さない病理学的タウ型に特異的である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
前記治療または予防用が、前頭側頭型認知症、第１７染色体に連鎖するパーキンソニズム（ＦＴＤＰ−１７）、進行性核上麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、進行性皮質下グリオーシス、タングル限定認知症（ｔａｎｇｌｅｏｎｌｙｄｅｍｅｎｔｉａ）、石灰沈着を伴うびまん性神経原線維変化病、嗜銀性グレイン型認知症、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン認知症複合体、ボクサー認知症、ダウン症候群、ゲルストマン−シュトロイスラー−シャインカー病、ハレルフォルデン−スパッツ病、封入体筋炎、クロイツフェルト−ヤコブ病、多系統萎縮症、Ｃ型ニーマン−ピック病、プリオンタンパク質脳アミロイドアンギオパシー、亜急性硬化性全脳炎、筋強直性ジストロフィー、神経原線維タングルを伴う非グアム型運動ニューロン疾患、慢性外傷性脳障害、および脳炎後パーキンソニズムからなる群より選択されるタウオパシーの治療用である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
前記薬学的組成物が、被験体におけるアルツハイマー病の治療用である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
１つ以上の組換えにより産生された抗体、または、１つ以上のその活性結合部分を含む薬学的組成物であって、ここで、該組換えにより産生された抗体が、以下からなるアミノ酸配列の免疫原性タウペプチドで免疫されて誘導された抗体の活性結合部分のアミノ酸配列を含む；
(1) アミノ酸配列RENAKAKTDHGAEIVYKXPVVSGDTXPRHL（配列番号５７）、
(2) TDHGAEIVYKS^*PVVSGDTS^*PRHL（配列番号１３）およびTDHGAEIVYKXPVVSGDTXPRHL（配列番号４２）からなる群より選択されるアミノ酸配列、
(3) アミノ酸配列AEIVXKXPVVXGDXXPRHLXNVXXTGSIDMV（配列番号７４）、
(4) YKS^*PVVSGDTS^*PR（配列番号５）およびYKXPVVSGDTXPR（配列番号３４）からなる群より選択されるアミノ酸配列、もしくは
(5) VVS^*GDT^*SPRHLS^*NVS^*S^*T^*GS（配列番号２３）およびVVXGDXSPRHLXNVXXXGS（配列番号５２）からなる群より選択されるアミノ酸配列、
ここで、Xはグルタミン酸もしくはアスパラギン酸残基；
S^*はリン酸化セリン残基；
T^*はリン酸化スレオニン残基；
被験体の脳からのタウ凝集物のクリアランス促進用薬学的組成物。
前記免疫原性タウペプチドが、
アミノ酸配列RENAKAKTDHGAEIVYKXPVVSGDTXPRHL（配列番号５７）、ここでXはアスパラギン酸残基；
からなるアミノ酸配列を有する、請求項８記載の薬学的組成物。
以下を含む、請求項８記載の薬学的組成物：
１つ以上の組換えにより産生された抗体、または、１つ以上のその活性結合部分、ここで、該組換えにより産生された抗体が、以下からなるアミノ酸配列の免疫原性タウペプチドで免疫されて誘導された抗体の活性結合部分のアミノ酸配列を含む；
(1) アミノ酸配列RENAKAKTDHGAEIVYKXPVVSGDTXPRHL（配列番号５７）、
(2) アミノ酸配列TDHGAEIVYKS^*PVVSGDTS^*PRHL（配列番号１３）、
(4) アミノ酸配列YKS^*PVVSGDTS^*PR（配列番号５）、または
(5) アミノ酸配列VVS^*GDT^*SPRHLS^*NVS^*S^*T^*GS（配列番号２３）。
以下を含む、請求項８記載の薬学的組成物：
１つ以上の組換えにより産生された抗体、または、１つ以上のその活性結合部分、ここで、該組換えにより産生された抗体が、以下からなるアミノ酸配列の免疫原性タウペプチドで免疫されて誘導された抗体の活性結合部分のアミノ酸配列を含む；
(1) アミノ酸配列RENAKAKTDHGAEIVYKXPVVSGDTXPRHL（配列番号５７）、または
(2) アミノ酸配列TDHGAEIVYKS^*PVVSGDTS^*PRHL（配列番号１３）。
前記１つ以上の組換えにより産生された抗体が、正常なタウタンパク質に対して交差反応性をほとんど有さないか、全く有さない病理学的タウ型に特異的である、請求項８〜１１のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
該タウ凝集物が神経原線維タングルまたはそれらの病理学的タウ前駆体である、請求項８〜１２のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
前記薬学的組成物が、被験体におけるアルツハイマー病の治療用である、請求項８〜１２のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
１つ以上の組換えにより産生された抗体、または、１つ以上のその活性結合部分を含む薬学的組成物であって、ここで、該組換えにより産生された抗体が、以下からなるアミノ酸配列の免疫原性タウペプチドで免疫されて誘導された抗体の活性結合部分のアミノ酸配列を含む；
(1) アミノ酸配列RENAKAKTDHGAEIVYKXPVVSGDTXPRHL（配列番号５７）、
(2) TDHGAEIVYKS^*PVVSGDTS^*PRHL（配列番号１３）およびTDHGAEIVYKXPVVSGDTXPRHL（配列番号４２）からなる群より選択されるアミノ酸配列、
(3) アミノ酸配列AEIVXKXPVVXGDXXPRHLXNVXXTGSIDMV（配列番号７４）、
(4) YKS^*PVVSGDTS^*PR（配列番号５）およびYKXPVVSGDTXPR（配列番号３４）からなる群より選択されるアミノ酸配列、もしくは
(5) VVS^*GDT^*SPRHLS^*NVS^*S^*T^*GS（配列番号２３）およびVVXGDXSPRHLXNVXXXGS（配列番号５２）からなる群より選択されるアミノ酸配列、
ここで、Xはグルタミン酸もしくはアスパラギン酸残基；
S^*はリン酸化セリン残基；
T^*はリン酸化スレオニン残基；
被験体におけるタウ病理学関連行動表現型の進行遅延用薬学的組成物。
前記免疫原性タウペプチドが、
アミノ酸配列RENAKAKTDHGAEIVYKXPVVSGDTXPRHL（配列番号５７）、ここでXはアスパラギン酸残基；
からなるアミノ酸配列を有する、請求項１５記載の薬学的組成物。
以下を含む、請求項１５記載の薬学的組成物：
１つ以上の組換えにより産生された抗体、または、１つ以上のその活性結合部分、ここで、該組換えにより産生された抗体が、以下からなるアミノ酸配列の免疫原性タウペプチドで免疫されて誘導された抗体の活性結合部分のアミノ酸配列を含む；
(1) アミノ酸配列RENAKAKTDHGAEIVYKXPVVSGDTXPRHL（配列番号５７）、
(2) アミノ酸配列TDHGAEIVYKS^*PVVSGDTS^*PRHL（配列番号１３）、
(4) アミノ酸配列YKS^*PVVSGDTS^*PR（配列番号５）、または
(5) アミノ酸配列VVS^*GDT^*SPRHLS^*NVS^*S^*T^*GS（配列番号２３）。
以下を含む、請求項１５記載の薬学的組成物：
１つ以上の組換えにより産生された抗体、または、１つ以上のその活性結合部分、ここで、該組換えにより産生された抗体が、以下からなるアミノ酸配列の免疫原性タウペプチドで免疫されて誘導された抗体の活性結合部分のアミノ酸配列を含む；
(1) アミノ酸配列RENAKAKTDHGAEIVYKXPVVSGDTXPRHL（配列番号５７）、または
(2) アミノ酸配列TDHGAEIVYKS^*PVVSGDTS^*PRHL（配列番号１３）。
前記１つ以上の組換えにより産生された抗体が、正常なタウタンパク質に対して交差反応性をほとんど有さないか、全く有さない病理学的タウ型に特異的である、請求項１５〜１８のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
前記薬学的組成物が、被験体におけるアルツハイマー病の治療用である、請求項１５〜１９のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
１つ以上の組換えにより産生された抗体、または、１つ以上のその活性結合部分を含む薬学的組成物であって、ここで、該組換えにより産生された抗体が、以下からなるアミノ酸配列の免疫原性タウペプチドで免疫されて誘導された抗体の活性結合部分のアミノ酸配列を含む；
(1) アミノ酸配列RENAKAKTDHGAEIVYKXPVVSGDTXPRHL（配列番号５７）、
(2) TDHGAEIVYKS^*PVVSGDTS^*PRHL（配列番号１３）およびTDHGAEIVYKXPVVSGDTXPRHL（配列番号４２）からなる群より選択されるアミノ酸配列、
(3) アミノ酸配列AEIVXKXPVVXGDXXPRHLXNVXXTGSIDMV（配列番号７４）、
(4) YKS^*PVVSGDTS^*PR（配列番号５）およびYKXPVVSGDTXPR（配列番号３４）からなる群より選択されるアミノ酸配列、もしくは
(5) VVS^*GDT^*SPRHLS^*NVS^*S^*T^*GS（配列番号２３）およびVVXGDXSPRHLXNVXXXGS（配列番号５２）からなる群より選択されるアミノ酸配列、
ここで、Xはグルタミン酸もしくはアスパラギン酸残基；
S^*はリン酸化セリン残基；
T^*はリン酸化スレオニン残基；
アルツハイマー病の疑いがある患者、または、アルツハイマー病を既に罹患している患者における軽度の認知障害の治療用薬学的組成物。
前記免疫原性タウペプチドが、
アミノ酸配列RENAKAKTDHGAEIVYKXPVVSGDTXPRHL（配列番号５７）、ここでXはアスパラギン酸残基；
からなるアミノ酸配列を有する、請求項２１記載の薬学的組成物。
以下を含む、請求項２１記載の薬学的組成物：
１つ以上の組換えにより産生された抗体、または、１つ以上のその活性結合部分、ここで、該組換えにより産生された抗体が、以下からなるアミノ酸配列の免疫原性タウペプチドで免疫されて誘導された抗体の活性結合部分のアミノ酸配列を含む；
(1) アミノ酸配列RENAKAKTDHGAEIVYKXPVVSGDTXPRHL（配列番号５７）、
(2) アミノ酸配列TDHGAEIVYKS^*PVVSGDTS^*PRHL（配列番号１３）、
(4) アミノ酸配列YKS^*PVVSGDTS^*PR（配列番号５）、または
(5) アミノ酸配列VVS^*GDT^*SPRHLS^*NVS^*S^*T^*GS（配列番号２３）。
以下を含む、請求項２１記載の薬学的組成物：
１つ以上の組換えにより産生された抗体、または、１つ以上のその活性結合部分、ここで、該組換えにより産生された抗体が、以下からなるアミノ酸配列の免疫原性タウペプチドで免疫されて誘導された抗体の活性結合部分のアミノ酸配列を含む；
(1) アミノ酸配列RENAKAKTDHGAEIVYKXPVVSGDTXPRHL（配列番号５７）、または
(2) アミノ酸配列TDHGAEIVYKS^*PVVSGDTS^*PRHL（配列番号１３）。
前記１つ以上の組換えにより産生された抗体が、正常なタウタンパク質に対して交差反応性をほとんど有さないか、全く有さない病理学的タウ型に特異的である、請求項２１〜２４のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
前記薬学的組成物が、アルツハイマー病を既に罹患している被験体におけるアルツハイマー病の治療用である、請求項２１〜２５のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
前記薬学的組成物が、前記組換えにより産生された１つ以上の抗体を含む、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
前記薬学的組成物が、前記組換えにより産生された抗体の１つ以上の活性結合部分を含む、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
前記組換えにより産生された抗体もしくは前記その活性結合部分がヒト化された、または、前記抗体がヒト抗体である、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
組換えにより産生された抗体、またはその活性結合部分であって、
ここで、該組換えにより産生された抗体は、以下からなるアミノ酸配列の免疫原性タウペプチドで免疫されて誘導された抗体の活性結合部分のアミノ酸配列を含む；
(1) アミノ酸配列RENAKAKTDHGAEIVYKXPVVSGDTXPRHL（配列番号５７）、
(2) TDHGAEIVYKS^*PVVSGDTS^*PRHL（配列番号１３）およびTDHGAEIVYKXPVVSGDTXPRHL（配列番号４２）からなる群より選択されるアミノ酸配列、
(3) アミノ酸配列AEIVXKXPVVXGDXXPRHLXNVXXTGSIDMV（配列番号７４）、
(4) YKS^*PVVSGDTS^*PR（配列番号５）およびYKXPVVSGDTXPR（配列番号３４）からなる群より選択されるアミノ酸配列、もしくは
(5) VVS^*GDT^*SPRHLS^*NVS^*S^*T^*GS（配列番号２３）およびVVXGDXSPRHLXNVXXXGS（配列番号５２）からなる群より選択されるアミノ酸配列、
ここで、Xはグルタミン酸もしくはアスパラギン酸残基；
S^*はリン酸化セリン残基；
T^*はリン酸化スレオニン残基。
前記免疫原性タウペプチドが、
アミノ酸配列RENAKAKTDHGAEIVYKXPVVSGDTXPRHL（配列番号５７）、ここでXはアスパラギン酸残基；
からなるアミノ酸配列を有する、請求項３０記載の組換えにより産生された抗体またはその活性結合部分。
以下を含む、請求項３０記載の組換えにより産生された抗体またはその活性結合部分：
１つ以上の組換えにより産生された抗体、または、１つ以上のその活性結合部分、ここで、該組換えにより産生された抗体が、以下からなるアミノ酸配列の免疫原性タウペプチドで免疫されて誘導された抗体の活性結合部分のアミノ酸配列を含む；
(1) アミノ酸配列RENAKAKTDHGAEIVYKXPVVSGDTXPRHL（配列番号５７）、
(2) アミノ酸配列TDHGAEIVYKS^*PVVSGDTS^*PRHL（配列番号１３）、
(4) アミノ酸配列YKS^*PVVSGDTS^*PR（配列番号５）、または
(5) アミノ酸配列VVS^*GDT^*SPRHLS^*NVS^*S^*T^*GS（配列番号２３）。
以下を含む、請求項３０記載の組換えにより産生された抗体またはその活性結合部分：
１つ以上の組換えにより産生された抗体、または、１つ以上のその活性結合部分、ここで、該組換えにより産生された抗体が、以下からなるアミノ酸配列の免疫原性タウペプチドで免疫されて誘導された抗体の活性結合部分のアミノ酸配列を含む；
(1) アミノ酸配列RENAKAKTDHGAEIVYKXPVVSGDTXPRHL（配列番号５７）、または
(2) アミノ酸配列TDHGAEIVYKS^*PVVSGDTS^*PRHL（配列番号１３）。
前記１つ以上の組換えにより産生された抗体が、正常なタウタンパク質に対して交差反応性をほとんど有さないか、全く有さない病理学的タウ型に特異的である、請求項３０〜３３のいずれか一項に記載の組換えにより産生された抗体またはその活性結合部分。
前記組換えにより産生された抗体もしくは前記その活性結合部分がヒト化された、または、前記抗体がヒト抗体である、請求項３０〜３４のいずれか一項に記載の組換えにより産生された抗体またはその活性結合部分。
前記組換えにより産生された抗体もしくは前記その活性結合部分が、被験体におけるアルツハイマー病の治療用である、請求項３０〜３５のいずれか一項に記載の組換えにより産生された抗体またはその活性結合部分。
請求項３０〜３６のいずれか一項に記載の組換えにより産生された抗体またはその活性結合部分、および
１つ以上の異なるアミロイド形成タンパク質またはペプチドを認識する１つ以上の抗体またはその結合部分
を含む、組み合わせ免疫治療剤。
１つ以上のアミロイド形成タンパク質またはペプチドが、ベータタンパク質前駆体、プリオンおよびプリオンタンパク質、αシヌクレイン、アミロイドβ、島アミロイドポリペプチド、アポリポプロテインＡＩ、アポリポプロテインＡＩＩ、リゾチーム、シスタチンＣ、ゲルソリン、心房性ナトリウム利尿因子、カルシトニン、ケラトエピセリン、ラクトフェリン、免疫グロブリン軽鎖、トランスサイレチン、Ａアミロイドーシス、β２マイクログロブリン、免疫グロブリン重鎖、フィブリノーゲンアルファ鎖、プロラクチン、ケラチン、およびメディン（ｍｅｄｉｎ）からなる群より選択される、請求項３７に記載の組み合わせ免疫治療剤。
請求項３０〜３５のいずれか一項に記載の１つ以上の組換えにより産生された抗体またはその活性結合部分を含む、アルツハイマー病または他のタウオパシーの診断用薬学的組成物であって、ここで、該抗体もしくはその活性結合部分は検出可能なように標識されている、薬学的組成物。
前記薬学的組成物が、前記組換えにより産生された１つ以上の抗体を含む、請求項３９に記載の薬学的組成物。
前記薬学的組成物が、前記組換えにより産生された抗体の１つ以上の活性結合部分を含む、請求項３９に記載の薬学的組成物。
請求項３９〜４１のいずれか一項に記載の薬学的組成物を含む、アルツハイマー病または他のタウオパシーの診断用キット。
前記薬学的組成物が、前記組換えにより産生される抗体を含む、請求項４２に記載のキット。
前記薬学的組成物が、前記組換えにより産生される抗体の活性結合部分を含む、請求項４２に記載のキット。
前記組換えにより産生された抗体がヒト化された、またはヒト抗体である、請求項４２〜４４のいずれか一項に記載のキット。