JP2016519137A5

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Publication number: JP2016519137A5
Application number: JP2016512344A
Authority: JP
Filing date: 2014-05-06
Publication date: 2017-06-01
Anticipated expiration: 2034-05-06

Claims

溶液からタンパク質を精製するための方法であって、
（ａ）前記溶液を第１のクロマトグラフィー用マトリックスに通す工程、
第１の溶出バッファーを使用して第１のクロマトグラフィー用マトリックスから粗製タンパク質溶出物を溶出する工程、
を含む第１のクロマトグラフィー工程、
（ｂ）工程（ａ）の最後で得た粗製タンパク質溶出物を第２のクロマトグラフィー用マトリックスに通す工程、
第２の溶出バッファーを使用して第２のクロマトグラフィー用マトリックスからタンパク質溶出液を溶出する工程、
を含む第２のクロマトグラフィー工程、および
（ｃ）工程（ｂ）の最後で得たタンパク質溶出液をフロースルー形式で第３のクロマトグラフィー用マトリックスに通す工程、
第３のクロマトグラフィー用マトリックスのフロースルーから精製タンパク質を回収する工程、
を含む第３のクロマトグラフィー工程を含み、
バッファーのそれぞれがＢｉｓＴｒｉｓを含む方法。
工程（ａ）の最後で得た粗製タンパク質溶出物を、ｐＨ調節、バッファー交換または希釈などの如何なる処置も施さずに第２のクロマトグラフィー用マトリックスに直接通す、請求項１に記載の方法。
工程（ｂ）の最後で得たタンパク質溶出液を、ｐＨ調節、バッファー交換または希釈などの如何なる処置も施さずに第３のクロマトグラフィー用マトリックスに直接通す、請求項１または２に記載の方法。
第１の工程から最後の工程まで閉鎖系中で実行する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
最初の２つのクロマトグラフィー工程のそれぞれの工程が、
平衡化バッファーをクロマトグラフィー用マトリックスに通す工程、
溶液または粗製タンパク質溶出物をクロマトグラフィー用マトリックスに通す工程、
平衡化バッファーをクロマトグラフィー用マトリックスに通す工程、
場合により洗浄バッファーをクロマトグラフィー用マトリックスに通す工程、
場合により平衡化バッファーをクロマトグラフィー用マトリックスに通す工程、
溶出バッファーを使用してクロマトグラフィー用マトリックスから粗製タンパク質溶出物またはタンパク質溶出液を溶出する工程を含み、
バッファーのそれぞれがＢｉｓＴｒｉｓを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
バッファーのそれぞれがＢｉｓＴｒｉｓ、酢酸、ＮａＣｌ、水、および場合によりＮＨ_４Ｃｌからなる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
（ａ）（ｉ）平衡化バッファーを第１のクロマトグラフィー用マトリックスに通す工程、
（ｉｉ）溶液を第１のクロマトグラフィー用マトリックスに通す工程、
（ｉｉｉ）平衡化バッファーを第１のクロマトグラフィー用マトリックスに通す工程、
（ｉｖ）洗浄バッファーを第１のクロマトグラフィー用マトリックスに通す工程、
（ｖ）平衡化バッファーを第１のクロマトグラフィー用マトリックスに通す工程、および
（ｖｉ）第１の溶出バッファーを使用して第１のクロマトグラフィー用マトリックスから粗製タンパク質溶出物を溶出する工程、
を含む第１のクロマトグラフィー工程、
（ｂ）（ｉ）平衡化バッファーを第２のクロマトグラフィー用マトリックスに通す工程、
（ｉｉ）工程（ａ）からの粗製タンパク質溶出物を第２のクロマトグラフィー用マトリックスに通す工程、
（ｉｉｉ）平衡化バッファーを第２のクロマトグラフィー用マトリックスに通す工程、および
（ｉｖ）第２の溶出バッファーを使用して第２のクロマトグラフィー用マトリックスからタンパク質溶出液を溶出する工程、
を含む第２のクロマトグラフィー工程、ならびに
（ｃ）（ｉ）平衡化バッファーを第３のクロマトグラフィー用マトリックスに通す工程、
（ｉｉ）工程（ｂ）からのタンパク質溶出液をフロースルー形式で第３のクロマトグラフィー用マトリックスに通す工程、
（ｉｉｉ）場合により洗浄バッファーを第３のクロマトグラフィー用マトリックスに通す工程、および
（ｉｖ）第３のクロマトグラフィー用マトリックスのフロースルーから精製タンパク質を回収する工程、
を含む第３のクロマトグラフィー工程の工程を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
第１、第２および第３のクロマトグラフィー用マトリックスがクロマトグラフィー用カラムである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
第１、第２および第３のクロマトグラフィー用マトリックスがクロマトグラフィー用膜吸着剤である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
第１のクロマトグラフィー用マトリックスがアフィニティークロマトグラフィー用マトリックスである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
前記アフィニティークロマトグラフィー用マトリックスがプロテインＡマトリックスである、請求項１０に記載の方法。
第２のクロマトグラフィー用マトリックスがマルチモード樹脂クロマトグラフィー用マトリックスまたは陽イオン交換クロマトグラフィー用マトリックスである、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
第３のクロマトグラフィー用マトリックスが陰イオン交換クロマトグラフィー用マトリックスである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
タンパク質がモノクローナル抗体である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
前記モノクローナル抗体が、筋原線維原型のヒトβ−アミロイドタンパク質に特異的に結合する抗体、細菌表面多糖ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＰＮＡＧ）に特異的に結合する抗体、癌胎児性抗原関連細胞接着分子５（ＣＥＡＣＡＭ５）に特異的に結合する抗体、およびＣＤ３８膜貫通型糖タンパク質に特異的に結合する抗体からなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
工程（ｃ）の後にナノ濾過工程をさらに含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
ナノ濾過工程の後に限外濾過およびダイアフィルトレーション工程をさらに含む、請求項１６に記載の方法。
第１の溶出バッファーが１５〜２５ｍＭのＢｉｓＴｒｉｓと１５〜２５ｍＭのＮａＣｌを含み、酢酸で３と４の間の範囲に含まれるｐＨに調節された、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
第２の溶出バッファーが１５〜２５ｍＭのＢｉｓＴｒｉｓ、４０〜５０ｍＭのＮａＣｌ、および２０〜３０ｍＭのＮＨ_４Ｃｌを含み、酢酸で７と８の間の範囲に含まれるｐＨに調節された、請求項１〜８または１０〜１８のいずれか１項に記載の方法。
第２の溶出バッファーが１５〜２５ｍＭのＢｉｓＴｒｉｓ、５０〜１５０ｍＭのＮａＣｌ、および２０〜３０ｍＭのＮＨ_４Ｃｌを含み、酢酸で６と７の間の範囲に含まれるｐＨに調節された、請求項１〜７または９〜１８のいずれか１項に記載の方法。
平衡化バッファーが１５〜２５ｍＭのＢｉｓＴｒｉｓと１５〜２５ｍＭのＮａＣｌを含み、酢酸で７と８の間の範囲に含まれるｐＨに調節された、請求項５〜２０のいずれか１項に記載の方法。
洗浄バッファーが１５〜２５ｍＭのＢｉｓＴｒｉｓと０．９〜１．１ＭのＮａＣｌを含み、酢酸で７と８の間の範囲に含まれるｐＨに調節された、請求項５〜２１のいずれか１項に記載の方法。
精製タンパク質を少なくとも９５％の収率で回収する、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
回収した精製タンパク質が少なくとも９９％の純度を示す、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
回収した精製タンパク質を医薬組成物に配合する工程をさらに含む、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の方法。