JP2016518841A - 細胞取り込みの向上のための化合物および方法 - Google Patents

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Abstract

本明細書において、標的ＲＮＡに相補的なコンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドが記載される。コンジュゲートは、修飾オリゴヌクレオチドの細胞取り込みを容易にし、改善された効力をもたらす。

Description

本明細書において、修飾オリゴヌクレオチドの細胞取り込みの向上のための化合物および方法が提供される。
ＲＮＡ機能の治療モジュレーションのための方針は、ワトソンクリック塩基対合を介してＲＮＡ標的に結合し、標的に結合するとその機能をモジュレートするように設計されるアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用することが多い。このようなアンチセンスオリゴヌクレオチドは、所望の薬物動態および薬力学特性をオリゴヌクレオチドに付与するために化学修飾されている。修飾オリゴヌクレオチドは、種々の機序、例として、修飾オリゴヌクレオチドの標的ＲＮＡへの結合およびＲＮＡの分解を促進しないその機能の干渉を含む機序（例えば、立体障害）、ならびに修飾オリゴヌクレオチドの結合後に酵素、例えば、ＲＮアーゼＨまたはＡｒｇｏｎａｕｔｅ２による活性によりＲＮＡの分解を促進する機序を介して標的ＲＮＡをモジュレートし得る。多数のタイプのＲＮＡ、例として、メッセンジャーＲＮＡ、プレメッセンジャーＲＮＡ、および非コードＲＮＡ、例えば、マイクロＲＮＡを修飾オリゴヌクレオチドの標的として選択することができる。
マイクロＲＮＡ（ｍｉｃｒｏＲＮＡ）は、「成熟マイクロＲＮＡ」としても公知であり、植物および動物のゲノム中でコードされる小型（約１８〜２４ヌクレオチド長）の非コードＲＮＡ分子である。ある例において、高度に保存される内因的に発現されるマイクロＲＮＡは、特異的ｍＲＮＡの３’非翻訳領域（３’−ＵＴＲ）に結合することにより遺伝子の発現を調節する。１０００個を超える異なるマイクロＲＮＡが、植物および動物において同定されている。ある成熟マイクロＲＮＡは、数百ヌクレオチド長であることが多い長い内因性一次マイクロＲＮＡ転写物（プリマイクロＲＮＡ、プリｍｉｒ、プリｍｉＲまたはプリプレマイクロＲＮＡとしても公知）に由来すると考えられる（Ｌｅｅ，ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，２００２，２１（１７），４６６３−４６７０）。
本明細書において、コンジュゲート部分に共有結合している修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物が提供される。ある実施形態において、化合物は、構造Ｌｎ−リンカー−Ｘ−ＭＯを有し、それぞれのＬは、独立して、リガンドであり、かつｎは、１〜１０であり；Ｘは、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである。
ある実施形態において、化合物は、構造Ｌｎ−リンカー−Ｘ１−Ｎｍ−Ｘ２−ＭＯを有し、それぞれのＬは、独立して、リガンドであり、かつｎは、１〜１０であり；それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、かつｍは、１〜５であり；Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである。
ある実施形態において、化合物は、構造Ｌｎ−リンカー−Ｘ−Ｎｍ−Ｙ−ＭＯを有し、それぞれのＬは、独立して、リガンドであり、かつｎは、１〜１０であり；それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、かつｍは、１〜５であり；Ｘは、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；Ｙは、ホスホジエステル結合であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである。
ある実施形態において、化合物は、構造Ｌｎ−リンカー−Ｙ−Ｎｍ−Ｙ−ＭＯを有し、それぞれのＬは、独立して、リガンドであり、かつｎは、１〜１０であり；それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、かつｍは、１〜５であり；それぞれのＹは、ホスホジエステル結合であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである。
ある実施形態において、ｎが１を上回る場合、Ｌｎ−リンカーは、構造：
［式中、それぞれのＬは、独立して、リガンドであり；ｎは、１〜１０であり；Ｓは、足場であり；ならびにＱ’およびＱ’’は、独立して、結合基である］
を有する。
ある実施形態において、Ｑ’およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸からそれぞれ独立して選択される。
ある実施形態において、足場は、２、３、４、または５つのリガンドを修飾オリゴヌクレオチドに結合させる。ある実施形態において、足場は、３つのリガンドを修飾オリゴヌクレオチドに結合させる。
ある実施形態において、化合物は、構造：
［式中、
Ｂは、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−、−Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−Ｎｍ−Ｘ−、および−Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−Ｎｍ−Ｙ−から選択され；
ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドであり；
ＲＮは、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、およびベンジルから選択され；
Ｚ、Ｚ’、およびＺ’’は、ＯおよびＳからそれぞれ独立して選択され；
それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり；
ｍは、１〜５であり；
Ｘは、ホスホジエステル結合およびホスホロチオエート結合から選択され；
Ｙは、ホスホジエステル結合であり；および
波線は、リンカーおよびリガンドの残部への連結を示す］
を有する。
ある実施形態において、Ｘは、ホスホジエステル結合である。
ある実施形態において、ｎは、１〜５、１〜４、１〜３、または１〜２である。ある実施形態において、ｎは、３である。
ある実施形態において、少なくとも１つのリガンドは、炭水化物である。
ある実施形態において、少なくとも１つのリガンドは、マンノース、グルコース、ガラクトース、リボース、アラビノース、フルクトース、フコース、キシロース、Ｄ−マンノース、Ｌ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ガラクトース、Ｄ−グルコース、Ｌ−グルコース、Ｄ−リボース、Ｌ−リボース、Ｄ−アラビノース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−フルクトース、Ｌ−フルクトース、Ｄ−フコース、Ｌ−フコース、Ｄ−キシロース、Ｌ−キシロース、アルファ−Ｄ−マンノフラノース、ベータ−Ｄ−マンノフラノース、アルファ−Ｄ−マンノピラノース、ベータ−Ｄ−マンノピラノース、アルファ−Ｄ−グルコフラノース、ベータ−Ｄ−グルコフラノース、アルファ−Ｄ−グルコピラノース、ベータ−Ｄ−グルコピラノース、アルファ−Ｄ−ガラクトフラノース、ベータ−Ｄ−ガラクトフラノース、アルファ−Ｄ−ガラクトピラノース、ベータ−Ｄ−ガラクトピラノース、アルファ−Ｄ−リボフラノース、ベータ−Ｄ−リボフラノース、アルファ−Ｄ−リボピラノース、ベータ−Ｄ−リボピラノース、アルファ−Ｄ−フルクトフラノース、アルファ−Ｄ−フルクトピラノース、グルコサミン、ガラクトサミン、シアル酸、Ｎ−アセチルガラクトサミンから選択される。
ある実施形態において、少なくとも１つのリガンドは、Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ−ホルミルガラクトサミン、Ｎ−プロピオニル−ガラクトサミン、Ｎ−ｎ−ブタノイルガラクトサミン、およびＮ−イソ−ブタノイル−ガラクトサミンから選択される。
ある実施形態において、それぞれのリガンドは、Ｎ−アセチルガラクトサミンである。
ある実施形態において、化合物は、構造：
［式中、それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、かつｍは、１〜５であり；Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである］
を有する。
ある実施形態において、Ｘ１およびＸ２の少なくとも一方は、ホスホジエステル結合である。ある実施形態において、Ｘ１およびＸ２のそれぞれは、ホスホジエステル結合である。
ある実施形態において、ｍは、１である。ある実施形態において、ｍは、２である。ある実施形態において、ｍは、２、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍは、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍが１を上回る場合、Ｎｍのそれぞれの修飾または非修飾ヌクレオシドは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合またはホスホロチオエートヌクレオシド間結合によりＮｍの隣接修飾または非修飾ヌクレオシドに連結していてよい。
ある実施形態において、Ｎｍは、Ｎ’ｐＮ’’であり、それぞれのＮ’は、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、かつｐは、０〜４であり；およびＮ’’は、非修飾糖部分を含むヌクレオシドである。ある実施形態において、ｐは、０である。ある実施形態において、ｐは、１、２、３、または４である。
ある実施形態において、それぞれのＮ’は、非修飾糖部分を含む。ある実施形態において、それぞれの非修飾糖部分は、独立して、β−Ｄ−リボースまたはβ−Ｄ−デオキシリボースである。ある実施形態において、Ｎ’’は、プリンヌクレオ塩基を含む。ある実施形態において、少なくとも１つのＮ’は、プリンヌクレオ塩基を含む。ある実施形態において、それぞれのプリンヌクレオ塩基は、アデニン、グアニン、ヒポキサンチン、キサンチン、および７−メチルグアニンから独立して選択される。ある実施形態において、Ｎ’’は、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンまたはβ−Ｄ−デオキシリボグアノシンである。
ある実施形態において、ｐが１、２、３、または４である場合、少なくとも１つのＮ’は、ピリミジンヌクレオ塩基を含む。ある実施形態において、Ｎ’’は、ピリミジンヌクレオ塩基を含む。ある実施形態において、それぞれのピリミジンヌクレオ塩基は、シトシン、５−メチルシトシン、チミン、ウラシル、および５，６−ジヒドロウラシルから独立して選択される。
ある実施形態において、ｐは、１であり、Ｎ’およびＮ’’は、それぞれ、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンであり、ならびにＮ’およびＮ’’は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合により結合している。ある実施形態において、ｐは、１であり、Ｎ’およびＮ’’は、それぞれ、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンであり、ならびにＮ’およびＮ’’は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合により結合している。ある実施形態において、ｐは、１であり、Ｎ’およびＮ’’は、それぞれ、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンであり、ならびにＮ’およびＮ’’は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合により結合している。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、それぞれのＮの糖部分は、β−Ｄ−リボース、β−Ｄ−デオキシリボース、２’−Ｏ−メトキシ糖、２’−Ｏ−メチル糖、２’−フルオロ糖、および二環式糖部分から独立して選択される。ある実施形態において、それぞれの二環式糖部分は、ｃＥｔ糖部分、ＬＮＡ糖部分、およびＥＮＡ糖部分から独立して選択される。ある実施形態において、ｃＥｔ糖部分は、Ｓ−ｃＥｔ糖部分である。ある実施形態において、ｃＥｔ糖部分は、Ｒ−ｃＥｔ糖部分である。本明細書に記載の任意の実施形態において、それぞれのＮの糖部分は、β−Ｄ−リボース、β−Ｄ−デオキシリボース、および２’−フルオロ糖から独立して選択される。
本明細書に提供される実施形態のいずれかにおいて、化合物は、標的ＲＮＡに相補的なヌクレオ塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む。ある実施形態において、標的ＲＮＡは、マイクロＲＮＡである。ある実施形態において、標的ＲＮＡは、メッセンジャーＲＮＡである。ある実施形態において、標的ＲＮＡは、プレメッセンジャーＲＮＡである。ある実施形態において、標的ＲＮＡは、長鎖非コードＲＮＡである。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、第２の修飾オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされ、第２の修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列に相補的である。ある実施形態において、標的ＲＮＡは、ヒト標的ＲＮＡである。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、標的ＲＮＡのヌクレオ塩基配列に少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％相補的である。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、マイクロＲＮＡのヌクレオ塩基配列と部分的に同一である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、マイクロＲＮＡのヌクレオ塩基配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一である。
ある実施形態において、マイクロＲＮＡは、ヒトマイクロＲＮＡである。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、７〜１０個、７〜１２個、８〜２５個、１２〜２５個、１５〜２５個、１５〜２２個、または１７〜２２個の結合ヌクレオシドからなる。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、修飾糖部分を有する少なくとも１つのヌクレオシドを含む。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオシドは、修飾糖部分を含む。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、修飾糖部分を有する複数のヌクレオシド、および非修飾糖部分を有する複数のヌクレオシドを含む。ある実施形態において、それぞれの修飾糖部分は、同一の修飾糖部分である。ある実施形態において、それぞれの修飾糖部分は、２’−Ｏ−メチル糖部分、２’−Ｏ−メトキシエチル糖部分、２’−フルオロ糖部分、および二環式糖部分から独立して選択される。ある実施形態において、それぞれの二環式糖部分は、ｃＥｔ糖部分およびＬＮＡ糖部分から独立して選択される。ある実施形態において、それぞれの非修飾糖部分は、β−Ｄ−デオキシリボースおよびβ−Ｄ−リボースから独立して選択される。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、複数の非二環式ヌクレオシドおよび複数の二環式ヌクレオシドを含む。ある実施形態において、それぞれの非二環式ヌクレオシドは、同一タイプの糖部分を有する。ある実施形態において、少なくとも２つの非二環式ヌクレオシドは、互いに異なる糖部分を含む。ある実施形態において、それぞれの非二環式ヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、β−Ｄ−リボヌクレオシド、２’−Ｏ−メチルヌクレオシド、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド、および２’−フルオロヌクレオシドから独立して選択される。ある実施形態において、それぞれの二環式ヌクレオシドは、同一タイプの糖部分を有する。ある実施形態において、少なくとも２つの二環式ヌクレオシドは、互いに異なる糖部分を有する。ある実施形態において、それぞれの二環式ヌクレオシドは、二環式ヌクレオシドから独立して選択され、ｃＥｔヌクレオシド、およびＬＮＡヌクレオシド、およびＥＮＡヌクレオシドから選択される。ある実施形態において、それぞれのｃＥｔヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドである。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１つの結合は、修飾ヌクレオシド間結合である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオシド間結合は、修飾ヌクレオシド間結合である。ある実施形態において、修飾ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、修飾ヌクレオ塩基を含む。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、５−メチルシトシンを含む。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのシトシンは、５−メチルシトシンである。
本明細書において、細胞を本明細書に提供される化合物のいずれかと接触させることを含む方法が提供される。ある実施形態において、細胞は、インビボである。ある実施形態において、細胞は、インビトロである。ある実施形態において、細胞は、肝臓細胞である。ある実施形態において、細胞は、肝細胞である。
本明細書において、修飾オリゴヌクレオチドの効力を改善することを含む方法であって、
ａ．構造Ｌｎ−リンカー−Ｘ−Ｎｍ−Ｘ−ＭＯを有し、それぞれのＬは、独立して、リガンドであり、かつｎは、１〜１０であり；それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、かつｍは、１〜５であり；それぞれのＸは、独立して、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである化合物を形成すること；ならびに
ｂ．それにより、非コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドに対する修飾オリゴヌクレオチドの効力を改善すること
を含む方法が提供される。
本明細書において、構造：
［式中、それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、かつｍは、１〜５であり；Ｘ１およびＸ２は、それぞれ、独立して、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである］
を有する化合物を作製する方法であって、
式ＩＶ；
に示されるコンジュゲートを含有する固体担体を提供するステップ；
反応性ヒドロキシルを産生するために有効な条件下でＤＭＴ基を脱保護するステップ；
逐次ホスホラミダイトカップリングステップを実施してＮｍを形成するステップ；
逐次ホスホラミダイトカップリングステップを実施して修飾オリゴヌクレオチドを形成するステップ；および
固体担体からコンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドを放出させるステップ
を含む方法が提供される。
本明細書において、対象に本明細書に提供される化合物を投与することを含む方法が提供される。ある実施形態において、対象は、ヒトである。ある実施形態において、化合物は、医薬組成物中に存在する。ある実施形態において、対象は、肝臓細胞中に存在する標的ＲＮＡに関連する疾患を有する。
本明細書に提供される任意の化合物は、治療法において使用することができる。
３つのＧａｌＮＡｃリガンドを含むコンジュゲート部分の構造。 コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチド構造。 ＧａｌＮＡｃコンジュゲート抗ｍｉＲ−１２２修飾オリゴヌクレオチドのインビボ効力。 ＧａｌＮＡｃコンジュゲート抗ｍｉＲ−１２２修飾オリゴヌクレオチドのインビボ効力。 ＧａｌＮＡｃコンジュゲート抗ｍｉＲ−１２２修飾オリゴヌクレオチドのインビボ効力。 ＧａｌＮＡｃコンジュゲート抗ｍｉＲ−１２２修飾オリゴヌクレオチドのインビボ効力。 ＧａｌＮＡｃコンジュゲート抗ｍｉＲ−１２２修飾オリゴヌクレオチドのインビボ効力。 ＧａｌＮＡｃコンジュゲート抗ｍｉＲ−１２２修飾オリゴヌクレオチドのインビボ効力。 ＧａｌＮＡｃコンジュゲート抗ｍｉＲ−２１修飾オリゴヌクレオチドの肝濃度。
特に定義のない限り、本明細書において使用される全ての技術および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般に理解されるものと同一の意味を有する。規定の定義が提供されない限り、本明細書に記載の分析化学、合成有機化学、ならびに医学および薬化学に関連して利用される命名、ならびにそれらの手順および技術は、当技術分野において周知であり、一般に使用されるものである。本明細書の用語について複数の定義が存在する場合、そのセクションにおけるものが優先される。標準的な技術を化学合成、化学分析、医薬調製、配合および送達、ならびに対象の治療に使用することができる。ある技術および手順は、“Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ”Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｓａｎｇｖｉ ａｎｄ Ｃｏｏｋ，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，１９９４；および“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，”Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１８ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９０に見出すことができ、それらは、例えば、任意の目的のために参照により本明細書に組み込まれる。許容される場合、本明細書の全開示にわたり言及される全ての特許、特許出願、公開出願および刊行物、ＧＥＮＢＡＮＫ配列、ウエブサイトならびに他の公開材料は、特に記載のない限り、参照により全体として組み込まれる。ＵＲＬまたは他のそのような識別子もしくはアドレスが参照される場合、そのような識別子は、変化し得、インターネット上の特定の情報は変遷し得るが、インターネットを検索することにより同等の情報を見出すことができることが理解される。その言及は、そのような情報の利用可能性および公的な普及を証明する。
本組成物および方法が開示および記載される前、本明細書において使用される用語は、特定の実施形態を記載する目的のためのものであるにすぎず、限定的なものではないことを理解すべきである。本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、特に文脈が明確に指定しない限り、複数形の参照物を含むことに留意しなければならない。
定義
「標的核酸」は、オリゴヌクレオチドがハイブリダイズするように設計される核酸を意味する。
「標的ＲＮＡ」は、オリゴヌクレオチドが相補的なＲＮＡを意味する。
「標的化」は、標的核酸にハイブリダイズするヌクレオ塩基配列の設計および選択のプロセスを意味する。
「に標的化される」は、標的核酸へのハイブリダイゼーションを可能とするヌクレオ塩基配列を有することを意味する。
「標的エンゲージメント」は、マイクロＲＮＡの活性、発現またはレベルを変化させる様式のオリゴヌクレオチドと、それが相補的なマイクロＲＮＡとの相互作用を意味する。ある実施形態において、標的エンゲージメントは、マイクロＲＮＡの活性が阻害されるような、抗ｍｉＲが相補的なマイクロＲＮＡとの抗ｍｉＲ相互作用を意味する。
「モジュレーション」は、機能、量、または活性の摂動を意味する。ある実施形態において、モジュレーションは、機能、量、または活性の増加を意味する。ある実施形態において、モジュレーションは、機能、量、または活性の減少を意味する。
「発現」は、遺伝子コード情報が細胞中で存在し、作動する構造に変換される任意の機能およびステップを意味する。
「５’標的部位」は、特定のオリゴヌクレオチドの３’末端ヌクレオ塩基に相補的な標的核酸のヌクレオ塩基を意味する。
「３’標的部位」は、特定のオリゴヌクレオチドの５’末端ヌクレオ塩基に相補的な標的核酸のヌクレオ塩基を意味する。
「領域」は、核酸内の結合ヌクレオシドの一部を意味する。ある実施形態において、オリゴヌクレオチドは、標的核酸の領域に相補的なヌクレオ塩基配列を有する。例えば、ある実施形態において、オリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡステムループ配列の領域に相補的である。ある実施形態において、オリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡステムループ配列の領域に完全に相補的である。
「セグメント」は、領域のより小さいまたは下位部分を意味する。
「マイクロＲＮＡ」は、酵素ＤｉｃｅｒによるプレマイクロＲＮＡの開裂の産物である、１８〜２５ヌクレオ塩基長の内因性非コードＲＮＡを意味する。成熟マイクロＲＮＡの例は、ｍｉＲＢａｓｅ（ｈｔｔｐ：／／ｍｉｃｒｏｒｎａ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／）として公知のマイクロＲＮＡデータベースに見出される。ある実施形態において、マイクロＲＮＡは、「ｍｉｃｒｏＲＮＡ」または「ｍｉＲ」と略される。
「プレマイクロＲＮＡ」または「プレｍｉＲ」は、Ｄｒｏｓｈａとして公知の二本鎖ＲＮＡ特異的リボヌクレアーゼによるプリｍｉＲの開裂の産物である、ヘアピン構造を有する非コードＲＮＡを意味する。
「ステムループ配列」は、ヘアピン構造を有し、成熟マイクロＲＮＡ配列を含有するＲＮＡを意味する。プレマイクロＲＮＡ配列およびステムループ配列は、重複し得る。ステムループ配列の例は、ｍｉＲＢａｓｅ（ｈｔｔｐ：／／ｍｉｃｒｏｒｎａ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／）として公知のマイクロＲＮＡデータベースに見出される。
「プリマイクロＲＮＡ」または「プリｍｉＲ」は、二本鎖ＲＮＡ特異的リボヌクレアーゼＤｒｏｓｈａについての基質であるヘアピン構造を有する非コードＲＮＡを意味する。
「マイクロＲＮＡ前駆体」は、ゲノムＤＮＡに由来し、１つ以上のマイクロＲＮＡ配列を含む非コード構造化ＲＮＡを含む転写物を意味する。例えば、ある実施形態において、マイクロＲＮＡ前駆体は、プレマイクロＲＮＡである。ある実施形態において、マイクロＲＮＡ前駆体は、プリマイクロＲＮＡである。
「マイクロＲＮＡ調節転写物」は、マイクロＲＮＡにより調節される転写物を意味する。
「モノシストロン性転写物」は、単一マイクロＲＮＡ配列を含有するマイクロＲＮＡ前駆体を意味する。
「ポリシストロン性転写物」は、２つ以上のマイクロＲＮＡ配列を含有するマイクロＲＮＡ前駆体を意味する。
「シード配列」は、成熟マイクロＲＮＡ配列の５’末端のヌクレオ塩基１〜９の６〜８つの連続ヌクレオ塩基を含むヌクレオ塩基配列を意味する。
「シードマッチ配列」は、シード配列に相補的であり、シード配列と同一の長さであるヌクレオ塩基配列を意味する。
「抗ｍｉＲ」は、マイクロＲＮＡに相補的なヌクレオ塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを意味する。ある実施形態において、抗ｍｉＲは、修飾オリゴヌクレオチドである。
「抗ｍｉＲ−Ｘ」（「ｍｉＲ−Ｘ」は、特定のマイクロＲＮＡを示す）は、ｍｉＲ−Ｘに相補的なヌクレオ塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを意味する。ある実施形態において、抗ｍｉＲ−Ｘは、ｍｉＲ−Ｘに完全に相補的である。ある実施形態において、抗ｍｉＲ−Ｘは、ｍｉＲ−Ｘに少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％相補的である。ある実施形態において、抗ｍｉＲ−Ｘは、修飾オリゴヌクレオチドである。
「完全修飾オリゴヌクレオチド」は、それぞれのヌクレオ塩基、それぞれの糖、および／またはそれぞれのヌクレオシド間結合が修飾されていることを意味する。
「均一修飾オリゴヌクレオチド」は、それぞれのヌクレオ塩基、それぞれの糖、および／またはそれぞれのヌクレオシド間結合が、修飾オリゴヌクレオチド全体にわたる同一の修飾を有することを意味する。
「ギャップマー」は、結合ヌクレオシドの２つの外側領域間に位置する結合β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドの内側領域を有し、それぞれの外側領域のそれぞれのヌクレオシドは修飾糖部分を含む修飾オリゴヌクレオチドを意味する。β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドは、修飾ヌクレオ塩基を有しても有さなくてもよい。
「ギャップ」は、外側領域間に位置するギャップマーの内側領域である。
「ウイング」は、ギャップマーの内側領域の５’または３’末端に隣接するギャップマーの外側領域である。
「対称ギャップマー」は、それぞれの外側領域のそれぞれのヌクレオシドが同一の糖修飾を含むことを意味する。
「非対称ギャップマー」は、一方の外側領域のそれぞれのヌクレオシドが第１の糖修飾を含み、他方の外側領域のそれぞれのヌクレオシドが第２の糖修飾を含むことを意味する。
「ヌクレオ塩基配列」は、オリゴマー化合物または核酸中の連続ヌクレオ塩基の順序を意味し、典型的には、５’から３’配向で、いかなる糖、結合、および／またはヌクレオ塩基修飾からも独立して列記される。
「連続ヌクレオ塩基」は、核酸中の互いに直接隣接するヌクレオ塩基を意味する。
「ヌクレオ塩基相補性」は、水素結合を介して非共有結合により対合する２つのヌクレオ塩基の能力を意味する。
「相補的」は、ある核酸が別の核酸またはオリゴヌクレオチドにハイブリダイズし得ることを意味する。ある実施形態において、相補的は、標的核酸にハイブリダイズし得るオリゴヌクレオチドを指す。
「完全に相補的」は、オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオ塩基が標的核酸中のそれぞれの対応位置におけるヌクレオ塩基と対合し得ることを意味する。ある実施形態において、オリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡに完全に相補的であり、すなわち、オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオ塩基は、マイクロＲＮＡ中の対応位置におけるヌクレオ塩基に相補的である。ある実施形態において、それぞれのヌクレオ塩基がマイクロＲＮＡステムループ配列の領域内のヌクレオ塩基への相補性を有するオリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡステムループ配列に完全に相補的である。
「相補性パーセント」は、標的核酸の等長部分に相補的なオリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基の割合を意味する。相補性パーセントは、標的核酸中の対応位置におけるヌクレオ塩基に相補的なオリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基の数を、オリゴヌクレオチド中のヌクレオ塩基の総数により除すことにより算出される。
「同一性パーセント」は、第２の核酸中の対応位置におけるヌクレオ塩基と同一である第１の核酸中のヌクレオ塩基の数を、第１の核酸中のヌクレオ塩基の総数により除したものを意味する。ある実施形態において、第１の核酸は、マイクロＲＮＡであり、第２の核酸は、マイクロＲＮＡである。ある実施形態において、第１の核酸は、オリゴヌクレオチドであり、第２の核酸は、オリゴヌクレオチドである。
「ハイブリダイズする」は、ヌクレオ塩基相補性を介して生じる相補的核酸のアニーリングを意味する。
「ミスマッチ」は、第２の核酸の対応位置におけるヌクレオ塩基と対合し得ない第１の核酸のヌクレオ塩基を意味する。
ヌクレオ塩基配列に関する「同一」は、糖、結合、および／またはヌクレオ塩基修飾から独立して、ならびに存在するいかなるピリミジンのメチル状態からも独立して同一のヌクレオ塩基配列を有することを意味する。
「オリゴマー化合物」は、複数の結合モノマーサブユニットを含む化合物を意味する。オリゴマー化合物としては、オリゴヌクレオチドが挙げられる。
「オリゴヌクレオチド」は、それぞれが互いに独立して修飾または非修飾であり得る複数の結合ヌクレオシドを含む化合物を意味する。
「天然存在のヌクレオシド間結合」は、ヌクレオシド間の３’から５’ホスホジエステル結合を意味する。
「ヌクレオシド間結合」は、隣接ヌクレオシド間の共有結合を意味する。
「結合ヌクレオシド」は、共有結合により結合しているヌクレオシドを意味する。
「ヌクレオ塩基」は、別のヌクレオ塩基と非共有結合により対合し得る複素環式部分を意味する。
「ヌクレオシド」は、糖部分に結合しているヌクレオ塩基を意味する。
「ヌクレオチド」は、ヌクレオシドの糖部分に共有結合しているリン酸基を有するヌクレオシドを意味する。
ある数の結合ヌクレオシド「からなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物」は、規定数の結合ヌクレオシドを有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を意味する。したがって、化合物は、追加の置換基またはコンジュゲートを含み得る。特に記載のない限り、化合物は、修飾オリゴヌクレオチドのものの他にいかなる付加ヌクレオシドも含まない。
「修飾オリゴヌクレオチド」は、天然存在の末端、糖、ヌクレオ塩基、および／またはヌクレオシド間結合に対して１つ以上の修飾を有するオリゴヌクレオチドを意味する。修飾オリゴヌクレオチドは、非修飾ヌクレオシドを含み得る。
「一本鎖修飾オリゴヌクレオチド」は、相補鎖にハイブリダイズされない修飾ヌクレオチドを意味する。
「修飾ヌクレオシド」は、天然存在のヌクレオシドからの任意の変化を有するヌクレオシドを意味する。修飾ヌクレオシドは、修飾糖、および非修飾ヌクレオ塩基を有し得る。修飾ヌクレオシドは、修飾糖および修飾ヌクレオ塩基を有し得る。修飾ヌクレオシドは、天然糖および修飾ヌクレオ塩基を有し得る。
「２’−修飾ヌクレオシド」は、位置が２−デオキシリボースまたはリボース中で番号付与されるフラノシル環の２’位に等価の位置における任意の修飾を有する糖を含むヌクレオシドを意味する。２’−修飾ヌクレオシドとしては、限定されるものではないが、二環式糖部分を含むヌクレオシドが挙げられることを理解すべきである。
「修飾ヌクレオシド間結合」は、天然存在のヌクレオシド間結合からの任意の変化を意味する。
「ホスホロチオエートヌクレオシド間結合」は、非架橋原子の１つが硫黄原子である、ヌクレオシド間の結合を意味する。
「ホスホロチオエート結合」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合と同一の構造を有する２つの化学部分間の結合、例えば、−ＯＰ（Ｏ）（Ｓ）Ｏ−を意味する。
「ホスホジエステル結合」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合と同一の構造を有する２つの化学部分間の結合、例えば、−ＯＰ（Ｏ）２Ｏ−を意味する。
「非修飾ヌクレオ塩基」は、ＲＮＡまたはＤＮＡの天然存在の複素環式塩基：プリン塩基のアデニン（Ａ）およびグアニン（Ｇ）、ならびにピリミジン塩基のチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）（５−メチルシトシンを含む）、およびウラシル（Ｕ）を意味する。
「５−メチルシトシン」は、５位に結合しているメチル基を含むシトシンを意味する。
「修飾ヌクレオ塩基」は、非修飾ヌクレオ塩基でない任意のヌクレオ塩基を意味する。
「フラノシル」は、４つの炭素原子および１つの酸素原子からなる５員環を含む構造を意味する。
「天然存在のフラノシル」は、天然存在のＲＮＡ中に見出されるリボフラノシルまたは天然存在のＤＮＡ中に見出されるデオキシリボフラノシルを意味する。
「糖部分」は、天然存在のフラノシルまたは修飾糖部分を意味する。
「修飾糖部分」は、置換糖部分または糖サロゲートを意味する。
「置換糖部分」は、天然存在のフラノシルでないフラノシルを意味する。置換糖部分としては、限定されるものではないが、天然存在のフラノシルの２’位、５’位および／または４’位における修飾を含む糖部分が挙げられる。ある置換糖部分は、二環式糖部分である。
「糖サロゲート」は、フラノシルを含まず、得られるヌクレオシドが（１）オリゴヌクレオチド中に取り込まれ、（２）相補的ヌクレオシドにハイブリダイズし得るように、ヌクレオシドの天然存在のフラノシルと置き換わり得る構造を意味する。このような構造としては、フラノシルの比較的単純な変化、例えば、異なる数の原子を含む環（例えば、４、６、または７員環）；フラノシルの酸素の非酸素原子（例えば、炭素、硫黄、または窒素）による置き換え；または原子数の変化および酸素の置き換えの両方が挙げられる。このような構造は、置換糖部分について記載のものと対応する置換（例えば、追加の置換基を任意選択的に含む６員炭素環式二環式糖サロゲート）も含み得る。糖サロゲートとしては、より複雑な糖の置き換え（例えば、ペプチド核酸の非環系）も挙げられる。糖サロゲートとしては、限定されるものではないが、モルホリノ、シクロヘキセニルおよびシクロヘキシトールが挙げられる。
「β−Ｄ−デオキシリボース」は、天然存在のＤＮＡ糖部分を意味する。
「β−Ｄ−リボース」は、天然存在のＲＮＡ糖部分を意味する。
「２’−Ｏ−メチル糖」または「２’−ＯＭｅ糖」は、２’位におけるＯ−メチル修飾を有する糖を意味する。
「２’−Ｏ−メトキシエチル糖」または「２’−ＭＯＥ糖」は、２’位におけるＯ−メトキシエチル修飾を有する糖を意味する。
「２’−Ｏ−フルオロ」または「２’−Ｆ」は、２’位におけるフルオロ修飾を有する糖を意味する。
「二環式糖部分」は、４〜７員環の２つの原子を連結して第２の環を形成し、二環式構造をもたらす架橋を含む４〜７員環（例として、限定されるものではないが、フラノシル）を含む修飾糖部分を意味する。ある実施形態において、４〜７員環は、糖環である。ある実施形態において、４〜７員環は、フラノシルである。あるこのような実施形態において、架橋は、フラノシルの２’炭素および４’炭素を連結する。非限定的な例示的な二環式糖部分としては、ＬＮＡ、ＥＮＡ、ｃＥｔ、Ｓ−ｃＥｔ、およびＲ−ｃＥｔが挙げられる。
「ロックド核酸（ＬＮＡ）糖部分」は、４’および２’フラノース環原子間の（ＣＨ２）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。
「ＥＮＡ糖部分」は、４’および２’フラノース環原子間の（ＣＨ２）２−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。
「拘束エチル（ｃＥｔ）糖部分」は、４’および２’フラノース環原子間のＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。ある実施形態において、ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ架橋は、Ｓ配向で拘束される。ある実施形態において、ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ架橋は、Ｒ配向で拘束される。
「Ｓ−ｃＥｔ糖部分」は、４’および２’フラノース環原子間のＳ−拘束ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。
「Ｒ−ｃＥｔ糖部分」は、４’および２’フラノース環原子間のＲ−拘束ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。
「２’−Ｏ−メチルヌクレオシド」は、２’−Ｏ−メチル糖修飾を有する修飾ヌクレオシドを意味する。
「２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド」は、２’−Ｏ−メトキシエチル糖修飾を有する修飾ヌクレオシドを意味する。２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドは、修飾または非修飾ヌクレオ塩基を含み得る。
「２’−フルオロヌクレオシド」は、２’−フルオロ糖修飾を有する修飾ヌクレオシドを意味する。２’−フルオロヌクレオシドは、修飾または非修飾ヌクレオ塩基を含み得る。
「二環式ヌクレオシド」は、二環式糖部分を有する修飾ヌクレオシドを意味する。二環式ヌクレオシドは、修飾または非修飾ヌクレオ塩基を有し得る。
「ｃＥｔヌクレオシド」は、ｃＥｔ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。ｃＥｔヌクレオシドは、修飾または非修飾ヌクレオ塩基を含み得る。
「Ｓ−ｃＥｔヌクレオシド」は、Ｓ−ｃＥｔ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
「Ｒ−ｃＥｔヌクレオシド」は、Ｒ−ｃＥｔ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
「非二環式ヌクレオシド」は、二環式糖以外の糖を有するヌクレオシドを意味する。ある実施形態において、非二環式ヌクレオシドは、天然存在の糖を含む。ある実施形態において、非二環式ヌクレオシドは、修飾糖を含む。ある実施形態において、二環式ヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。ある実施形態において、非二環式ヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドである。
「β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド」は、天然存在のＤＮＡヌクレオシドを意味する。
「β−Ｄ−リボヌクレオシド」は、天然存在のＲＮＡヌクレオシドを意味する。
「ＬＮＡヌクレオシド」は、ＬＮＡ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
「ＥＮＡヌクレオシド」は、ＥＮＡ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
「モチーフ」は、オリゴヌクレオチド中の修飾および／もしくは非修飾ヌクレオ塩基、糖、ならびに／またはヌクレオシド間結合のパターンを意味する。ある実施形態において、モチーフは、ヌクレオシドパターンである。
「ヌクレオシドパターン」は、オリゴヌクレオチドまたはその領域中のヌクレオシド修飾のパターンを意味する。ヌクレオシドパターンは、オリゴヌクレオチド中のヌクレオシド修飾の配置を記載するモチーフである。
「安定化修飾」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合により結合している２’−デオキシヌクレオシドにより提供されるものに対してヌクレアーゼの存在下の修飾オリゴヌクレオチドに安定性の向上を提供するヌクレオシドへの修飾を意味する。例えば、ある実施形態において、安定化修飾は、安定化ヌクレオシド修飾である。ある実施形態において、安定化修飾は、ヌクレオシド間結合修飾である。
「安定化ヌクレオシド」は、２’−デオキシヌクレオシドにより提供されるものに対してオリゴヌクレオチドにヌクレアーゼ安定性の向上を提供するように修飾されているヌクレオシドを意味する。一実施形態において、安定性ヌクレオシドは、２’−修飾ヌクレオシドである。
「安定化ヌクレオシド間結合」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合により提供されるものに対してオリゴヌクレオチドにヌクレアーゼ安定性の改善を提供するヌクレオシド間結合を意味する。一実施形態において、安定化ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
本明細書において使用される「結合基」は、第１の化学実体を第２の化学実体に１つ以上の共有結合を介して結合させる原子または原子の基を指す。
本明細書において使用される「リンカー」は、１つ以上のリガンドを、修飾または非修飾ヌクレオシドに１つ以上の共有結合を介して結合させる原子または原子の基を指す。修飾または非修飾ヌクレオシドは、本明細書に記載の修飾オリゴヌクレオチドの一部であり得、または修飾オリゴヌクレオチドにホスホジエステルもしくはホスホロチオエート結合を介して結合していてよい。一部の実施形態において、リンカーは、１つ以上のリガンドを修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に結合させる。一部の実施形態において、リンカーは、１つ以上のリガンドを修飾オリゴヌクレオチドの５’末端に結合させる。一部の実施形態において、リンカーは、１つ以上のリガンドを、修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に結合している修飾または非修飾ヌクレオシドに結合させる。一部の実施形態において、リンカーは、１つ以上のリガンドを、修飾オリゴヌクレオチドの５’末端に結合している修飾または非修飾ヌクレオシドに結合させる。リンカーが１つ以上のリガンドを修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に、または修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に結合している修飾もしくは非修飾ヌクレオシドに結合させる場合、一部の実施形態において、リンカーのための結合点は、修飾または非修飾糖部分の３’炭素であり得る。リンカーが１つ以上のリガンドを、修飾オリゴヌクレオチドの５’末端に、または修飾オリゴヌクレオチドの５’末端に結合している修飾もしくは非修飾ヌクレオシドに結合させる場合、一部の実施形態において、リンカーのための結合点は、修飾または非修飾糖部分の５’炭素であり得る。
「対象」は、治療または治療法のために選択されるヒトまたは非ヒト動物を意味する。
「それが必要とされる対象」は、対象が治療法または治療が必要とされると識別される状態を意味する。
「有する疑いのある対象」は、疾患の１つ以上の臨床的指標を呈する対象を意味する。
「投与すること」は、医薬剤または組成物を対象に提供することを意味し、それとしては、限定されるものではないが、医療専門家による投与および自己投与が挙げられる。
「非経口投与」は、注射または注入を介する投与を意味する。非経口投与としては、限定されるものではないが、皮下投与、静脈内投与、または筋肉内投与が挙げられる。
「皮下投与」は、皮膚直下の投与を意味する。
「静脈内投与」は、静脈中への投与を意味する。
「心臓内投与」は、心臓中への投与を意味する。ある実施形態において、心臓内投与は、カテーテルにより行う。ある実施形態において、心臓内投与は、開心術により行う。
「経肺投与」は、肺への投与を意味する。
「同時投与する」は、両方の薬剤の薬理学的効果が対象中に同時に存在する任意の様式における２つの薬剤の対象への共投与を指す。同時投与は、両方の薬剤を単一医薬組成物中で投与することも、同一の剤形において投与することも、同一の投与経路により投与することも要求しない。両方の薬剤の効果は、それら自体同時に存在する必要はない。効果は、一定期間の重複のみを必要とし、同一の広がりである必要はない。
「持続時間」は、活性またはイベントが継続する時間の期間を意味する。ある実施形態において、治療の持続時間は、医薬剤または医薬組成物の用量が投与される時間の期間である。
「治療法」は、疾患治療法を意味する。ある実施形態において、治療法としては、限定されるものではないが、化学療法、放射線療法、または医薬剤の投与が挙げられる。
「治療」は、疾患の治癒または改善に使用される１つ以上の規定の手順の適用を意味する。ある実施形態において、規定の手順は、１つ以上の医薬剤の投与である。
「改善」は、病態または疾患の少なくとも１つの指標の重症度の低下を意味する。ある実施形態において、改善は、病態または疾患の１つ以上の指標の進行の遅延または遅滞を含む。指標の重症度は、当業者に公知の主観または客観的尺度により決定することができる。
「発症するリスクがある」は、対象が病態または疾患を発症しやすい状態を意味する。ある実施形態において、病態または疾患を発症するリスクがある対象は、病態または疾患の１つ以上の症状を呈するが、その病態または疾患と診断するために十分な数の症状を呈さない。ある実施形態において、病態または疾患を発症するリスクがある対象は、病態または疾患の１つ以上の症状を呈するが、その病態または疾患と診断するために要求されるよりも低い程度で呈する。
「の発生を予防する」は、疾患または病態を発症するリスクがある対象における病態または疾患の発症を予防することを意味する。ある実施形態において、疾患または病態を発症するリスクがある対象は、既にその疾患または病態を有する対象が受けた治療と同様の治療を受ける。
「の発生を遅延させる」は、疾患または病態を発症するリスクがある対象における病態または疾患の発症を遅延させることを意味する。ある実施形態において、疾患または病態を発症するリスクがある対象は、既にその疾患または病態を有する対象が受けた治療と同様の治療を受ける。
「治療剤」は、疾患の治癒、改善または予防に使用される医薬剤を意味する。
「用量」は、単回投与において提供される医薬剤の規定量を意味する。ある実施形態において、用量は、２つ以上のボーラス、錠剤、または注射剤中で投与することができる。例えば、皮下投与が望まれるある実施形態において、所望用量は、単回注射により容易に提供されない容量を要求する。このような実施形態において、２つ以上の注射剤を使用して所望用量を達成することができる。ある実施形態において、用量は、２つ以上の注射剤中で投与して個体における注射部位反応を最小化することができる。
「投与量単位」は、医薬剤が提供される形態を意味する。ある実施形態において、投与量単位は、凍結乾燥オリゴヌクレオチドを含有するバイアルである。ある実施形態において、投与量単位は、再構成オリゴヌクレオチドを含有するバイアルである。
「治療有効量」は、治療利益を動物に提供する医薬剤の量を指す。
「医薬組成物」は、医薬剤を含む個体への投与に好適な物質の混合物を意味する。例えば、医薬組成物は、無菌水溶液を含み得る。
「医薬剤」は、対象に投与された場合に治療効果を提供する物質を意味する。
「活性医薬成分」は、所望の効果を提供する医薬組成物中の物質を意味する。
「肝機能の改善」は、肝機能の正常範囲への変化を意味する。ある実施形態において、肝機能は、対象の血液中に見出される分子を計測することにより評価される。例えば、ある実施形態において、肝機能の改善は、血中肝トランスアミナーゼレベルの低減により計測される。
「許容可能な安全性プロファイル」は、臨床的に許容可能な限界値内の副作用のパターンを意味する。
「副作用」は、所望の効果以外の治療に起因する生理学的応答を意味する。ある実施形態において、副作用としては、限定されるものではないが、注射部位反応、肝機能試験異常、腎機能異常、肝毒性、腎毒性、中枢神経系異常、およびミオパシーが挙げられる。このような副作用は、直接または間接的に検出することができる。例えば、血清中のアミノトランスフェラーゼレベルの増加は、肝毒性または肝機能異常を示し得る。例えば、ビリルビンの増加は、肝毒性または肝機能異常を示し得る。
「注射部位反応」は、個体における注射の部位における皮膚の炎症または異常発赤を意味する。
「対象コンプライアンス」は、対象が推奨または処方される治療法に従うことを意味する。
「遵守する」は、対象が推奨される治療法に従うことを意味する。
「推奨される治療法」は、疾患を治療し、改善し、遅延させ、または予防するために医療専門家により推奨される治療を意味する。
概要
修飾オリゴヌクレオチドの活性は、修飾オリゴヌクレオチドおよびその標的ＲＮＡ間で生じ、所望の薬理学的エンドポイントを産生する規定のハイブリダイゼーションイベントに基づく。これが生じるようにするため、ある薬物動態プロセス、例えば、標的細胞または組織へのインタクト薬物の送達、および標的ＲＮＡを含有する細胞中への修飾オリゴヌクレオチドの侵入を行わなければならない。修飾オリゴヌクレオチドは、標的細胞もしくは組織への送達および／またはオリゴヌクレオチドの細胞取り込みを改善する１つ以上の部分にコンジュゲートすることができ、これは最終的に効力の向上をもたらす。例えば、化合物の細胞取り込みの増加は、細胞表面受容体についてのリガンドであるコンジュゲートを利用することにより達成することができる。外因性分子（例えば、薬物）にコンジュゲートしているリガンドの、その細胞表面受容体への結合は、コンジュゲート分子の受容体媒介エンドサイトーシスをもたらし、それにより外因性分子の膜貫通輸送を容易にする。例えば、肝細胞への標的化送達は、炭水化物部分を含むコンジュゲートを修飾オリゴヌクレオチドに共有結合させることにより達成することができる。肝細胞の表面上に存在するアシアロ糖タンパク質受容体による炭水化物部分の認識および結合時、コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドは、細胞膜を越えて肝細胞中に輸送される。この様式で送達を改善することにより、修飾オリゴヌクレオチドの効力を向上させることができる。それというのも、所望の薬理学的エンドポイントを達成するために要求される化合物の用量がより低いためである。
本明細書に記載のあるコンジュゲートは、標的細胞型への改善された送達を提供し、およびさらにはインビボ投与時に非コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドを産生するためにインビボ開裂可能である利点を有する。上記のとおり、特異的組織または細胞型に対するインビボ標的化は、コンジュゲート部分を使用することにより向上させることができる。しかしながら、コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドがその作用部位に到達すると、共有結合コンジュゲート部分の全部または一部の存在があるコンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドの活性を変更し得、または修飾オリゴヌクレオチドのある薬物動態特性、例えば、標的細胞中の半減期を理解するために要求される分析に影響を及ぼし得る。したがって、細胞取り込みを改善するために十分安定であるが、化合物が標的細胞により内在化されたらコンジュゲート部分の開裂も可能とするコンジュゲート部分に結合している修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を投与することが望ましいことがある。したがって、本明細書において、修飾オリゴヌクレオチドの効力を改善し、修飾オリゴヌクレオチドのその非コンジュゲート形態での部分または完全な放出を可能とする開裂可能なコンジュゲート部分に結合している修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物が提供される。
あるコンジュゲート化合物
ある実施形態において、本明細書に提供される化合物は、修飾オリゴヌクレオチドの５’末端または３’末端に結合しているコンジュゲート部分を含む。ある実施形態において、化合物は、修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に結合しているコンジュゲート部分を含む。ある実施形態において、化合物は、修飾オリゴヌクレオチドの５’末端に結合しているコンジュゲート部分を含む。ある実施形態において、化合物は、修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に結合している第１のコンジュゲート部分および修飾オリゴヌクレオチドの５’末端に結合している第２のコンジュゲート部分を含む。
ある実施形態において、コンジュゲート部分は、炭水化物、コレステロール、脂質、リン脂質、抗体、リポタンパク質、ホルモン、ペプチド、ビタミン、ステロイド、またはカチオン脂質から選択される少なくとも１つのリガンドを含む。
リガンドは、修飾オリゴヌクレオチドに任意の好適なリンカーを介して共有結合させることができる。種々のリンカーが当技術分野において公知であり、ある非限定的な例示的なリンカーは、例えば、ＰＣＴ公開の国際公開第２０１３／０３３２３０号パンフレットおよび米国特許第８，１０６，０２２Ｂ２号明細書に記載されている。一部の実施形態において、インビボ酵素的開裂に対して耐性であるリンカーを選択することができる。一部の実施形態において、インビボ加水分解開裂に対して耐性であるリンカーを選択することができる。一部の実施形態において、インビボ酵素的開裂を受けるリンカーを選択することができる。一部の実施形態において、インビボ加水分解開裂を受けるリンカーを選択することができる。
ある実施形態において、本明細書に記載のコンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物は、構造：
Ｌ−Ｘ１−Ｎｍ−Ｘ２−ＭＯ；
を有し、
それぞれのＬは、リガンドであり；それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、ｍは、１〜５であり；Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである。ある実施形態において、ｍは、１である。ある実施形態において、ｍは、２である。ある実施形態において、ｍは、２、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍは、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍが１を上回る場合、Ｎｍのそれぞれの修飾または非修飾ヌクレオシドは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合またはホスホロチオエートヌクレオシド間結合によりＮｍの隣接修飾または非修飾ヌクレオシドに連結していてよい。ある実施形態において、ｍは、１であり、Ｘ１およびＸ２は、それぞれホスホジエステルである。
ある実施形態において、本明細書に記載のコンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物は、構造Ａ：
Ｌｎ−リンカー−ＭＯ；
を有し、
それぞれのＬは、独立して、リガンドであり、ｎは、１〜１０であり；ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである。
ある実施形態において、本明細書に記載のコンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物は、構造Ｂ：
Ｌｎ−リンカー−Ｘ１−Ｎｍ−Ｘ２−ＭＯ；
を有し、
それぞれのＬは、独立して、リガンドであり、ｎは、１〜１０であり；それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、ｍは、１〜５であり；Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである。ある実施形態において、ｍは、１である。ある実施形態において、ｍは、２である。ある実施形態において、ｍは、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍは、２、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍが１を上回る場合、Ｎｍのそれぞれの修飾または非修飾ヌクレオシドは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合またはホスホロチオエートヌクレオシド間結合によりＮｍの隣接修飾または非修飾ヌクレオシドに連結していてよい。
ある実施形態において、本明細書に記載のコンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物は、構造Ｃ：
Ｌｎ−リンカー−Ｘ−Ｎｍ−Ｙ−ＭＯ；
を有し、
それぞれのＬは、独立して、リガンドであり、ｎは、１〜１０であり；それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、ｍは、１〜５であり；Ｘは、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；Ｙは、ホスホジエステル結合であり；ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである。ある実施形態において、ｍは、１である。ある実施形態において、ｍは、２である。ある実施形態において、ｍは、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍは、２、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍが１を上回る場合、Ｎｍのそれぞれの修飾または非修飾ヌクレオシドは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合またはホスホロチオエートヌクレオシド間結合によりＮｍの隣接修飾または非修飾ヌクレオシドに連結していてよい。
ある実施形態において、本明細書に記載のコンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物は、構造Ｄ：
Ｌｎ−リンカー−Ｙ−Ｎｍ−Ｙ−ＭＯ；
を有し、
それぞれのＬは、独立して、リガンドであり、ｎは、１〜１０であり；それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、ｍは、１〜５であり；それぞれのＹは、ホスホジエステル結合であり；ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである。ある実施形態において、ｍは、１である。ある実施形態において、ｍは、２である。ある実施形態において、ｍは、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍは、２、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍが１を上回る場合、Ｎｍのそれぞれの修飾または非修飾ヌクレオシドは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合またはホスホロチオエートヌクレオシド間結合によりＮｍの隣接修飾または非修飾ヌクレオシドに連結していてよい。
ある実施形態において、ｎが１を上回る場合、リンカーは、２つ以上のＬを化合物の残部に結合させ得る足場を含む（すなわち、修飾オリゴヌクレオチド（ＭＯ）に、Ｘ１−Ｎｍ−Ｘ２−ＭＯに、Ｘ−Ｎｍ−Ｙ−ＭＯに、など）。一部のこのような実施形態において、化合物（例えば、構造Ａ、Ｂ、Ｃ、またはＤの化合物）のＬｎ−リンカー部分は、構造Ｅ：
［式中、それぞれのＬは、独立して、リガンドであり；ｎは、１〜１０であり；Ｓは、足場であり；Ｑ’およびＱ’’は、独立して、結合基である］
を含む。
一部の実施形態において、それぞれのＱ’およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸から独立して選択される。
一部の実施形態において、足場は、２、３、４、または５つのリガンドを修飾オリゴヌクレオチドに結合させることができる。一部の実施形態において、足場は、３つのリガンドを修飾オリゴヌクレオチドに結合させることができる。
非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｉ）：
［式中、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、それぞれ独立して、リガンドであり；Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、それぞれ独立して、結合基であり；Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、および置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルからそれぞれ独立して選択される］
である。
一部の実施形態において、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸からそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、およびブチルからそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、Ｈおよびメチルからそれぞれ選択される。
さらなる非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｉｉ）：
［式中、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、それぞれ独立して、リガンドであり；Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、それぞれ独立して、結合基であり；Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、および置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルから選択される］
である。
一部の実施形態において、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸からそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、およびブチルから選択される。一部の実施形態において、Ｒ１は、Ｈまたはメチルである。
さらなる非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｉｉｉ）：
［式中、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、それぞれ独立して、リガンドであり；Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、それぞれ独立して、結合基であり；Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、および置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルからそれぞれ独立して選択される］
である。
一部の実施形態において、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸からそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、およびブチルからそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、Ｈおよびメチルからそれぞれ選択される。
さらなる非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｉｖ）：
［式中、Ｌ１およびＬ２は、それぞれ独立して、リガンドであり；Ｑ’１、Ｑ’２、およびＱ’’は、それぞれ独立して、結合基であり；Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、および置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルからそれぞれ独立して選択される］
である。
一部の実施形態において、Ｑ’１、Ｑ’２、およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸からそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、およびブチルからそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈおよびメチルからそれぞれ選択される。
さらなる非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｖ）：
［式中、Ｌ１およびＬ２は、それぞれ独立して、リガンドであり；Ｑ’１、Ｑ’２、およびＱ’’は、それぞれ独立して、結合基であり；Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、および置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルからそれぞれ独立して選択される］
である。
一部の実施形態において、Ｑ’１、Ｑ’２、およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸からそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、およびブチルからそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈおよびメチルからそれぞれ選択される。
さらなる非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｖｉ）：
［式中、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、それぞれ独立して、リガンドであり；Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、それぞれ独立して、結合基であり；Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、および置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルからそれぞれ独立して選択される］
である。
一部の実施形態において、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸からそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、およびブチルからそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈおよびメチルからそれぞれ選択される。
さらなる非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｖｉｉ）：
［式中、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、それぞれ独立して、リガンドであり；Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、それぞれ独立して、結合基であり；Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、および置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルからそれぞれ独立して選択され；ＺおよびＺ’は、ＯおよびＳからそれぞれ独立して選択される］
である。
一部の実施形態において、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸からそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、およびブチルからそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈおよびメチルからそれぞれ選択される。一部の実施形態において、少なくとも１つのＰ原子上のＺまたはＺ’は、Ｓであり、他のＺまたはＺ’は、Ｏである（すなわち、ホスホロチオエート結合）。一部の実施形態において、それぞれの−ＯＰ（Ｚ）（Ｚ’）Ｏ−は、ホスホロチオエート結合である。一部の実施形態において、ＺおよびＺ’は、両方とも少なくとも１つのＰ原子上のＯである（すなわち、ホスホジエステル結合）。一部の実施形態において、それぞれの−ＯＰ（Ｚ）（Ｚ’）Ｏ−は、ホスホジエステル結合である。
さらなる非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｖｉｉｉ）：
［式中、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、それぞれ独立して、リガンドであり；Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、それぞれ独立して、結合基であり；Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、および置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルからそれぞれ独立して選択される］
である。
一部の実施形態において、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸からそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、およびブチルからそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、Ｈおよびメチルからそれぞれ選択される。
非限定的な例示的な足場および／または足場を含むリンカー、ならびにそれらの合成は、例えば、ＰＣＴ公開の国際公開第２０１３／０３３２３０号パンフレット、米国特許第８，１０６，０２２Ｂ２号明細書、米国特許出願公開第２０１２／０１５７５０９Ａ１号明細書；米国特許第５，９９４，５１７号明細書；米国特許第７，４９１，８０５Ｂ２号明細書；米国特許第８，３１３，７７２Ｂ２号明細書；Ｍａｎｏｈａｒａｎ，Ｍ．，Ｃｈａｐｔｅｒ １６，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｄｒｕｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，２００１，３９１−４６９に記載されている。
一部の実施形態において、化合物のＬｎ−リンカー部分は、構造Ｆ：
［式中、
Ｂは、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−、−Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−Ｎｍ−Ｘ−、および−Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−Ｎｍ−Ｙ−から選択され；
ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドであり；
ＲＮは、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、およびベンジルから選択され；
Ｚ、Ｚ’、およびＺ’’は、ＯおよびＳからそれぞれ独立して選択され；
それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり；
ｍは、１〜５であり；
Ｘは、ホスホジエステル結合およびホスホロチオエート結合から選択され；
Ｙは、ホスホジエステル結合であり；
波線は、リンカーおよびリガンドの残部への連結を示す］
を含む。
ある実施形態において、波線は、上記構造Ｅへの連結を示す。
ある実施形態において、ｎは、１〜５、１〜４、１〜３、または１〜２である。ある実施形態において、ｎは、１である。ある実施形態において、ｎは、２である。ある実施形態において、ｎは、３である。ある実施形態において、ｎは、４である。ある実施形態において、ｎは、５である。
一部の実施形態において、化合物のＬｎ−リンカー部分は、構造Ｇ：
［式中、
Ｂは、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−、−Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−Ｎｍ−Ｘ−、および−Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−Ｎｍ−Ｙ−から選択され；
ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドであり；
ＲＮは、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、およびベンジルから選択され；
Ｚ、Ｚ’、およびＺ’’は、ＯおよびＳからそれぞれ独立して選択され；
それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり；
ｍは、１〜５であり；
Ｘは、ホスホジエステル結合およびホスホロチオエート結合から選択され；
Ｙは、ホスホジエステル結合であり；
それぞれのＬは、独立して、リガンドであり；ｎは、１〜１０であり；Ｓは、足場であり；Ｑ’およびＱ’’は、独立して、結合基である］
を含む。
一部の実施形態において、それぞれのＱ’およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸から独立して選択される。
化合物の非限定的な例示的なＬｎ−リンカー部分（例えば、構造ＦまたはＧの）を、以下の構造Ｈ：
［式中、波線は、修飾オリゴヌクレオチド（ＭＯ）への、例えば、構造Ｂ中のＸ１への、または例えば、構造Ｃ、もしくはＤ中のＸもしくはＹへの結合を示す］
に示す。
ある実施形態において、それぞれのリガンドは、炭水化物である。炭水化物−コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物は、細胞表面レクチンにより認識される場合、細胞膜を通過して細胞中に輸送される。ある実施形態において、細胞表面レクチンは、Ｃ型レクチンである。ある実施形態において、Ｃ型レクチンは、クッパー細胞上に存在する。ある実施形態において、Ｃ型レクチンは、マクロファージ上に存在する。ある実施形態において、Ｃ型レクチンは、内皮細胞上に存在する。ある実施形態において、Ｃ型レクチンは、単球上に存在する。ある実施形態において、Ｃ型レクチンは、白血球上に存在する。ある実施形態において、Ｃ型レクチンは、樹状細胞上に存在する。ある実施形態において、Ｃ型レクチンは、Ｂ細胞上に存在する。コンジュゲートは、Ｃ型レクチンを発現する任意の細胞型中への抗ｍｉＲ−１２２化合物の取り込みを容易にし得る。
ある実施形態において、Ｃ型レクチンは、アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）である。ある実施形態において、コンジュゲートは、ＡＳＧＰＲについての親和性を有する１つ以上のリガンド、例として、限定されるものではないが、ガラクトースまたはガラクトース誘導体を含む。ある実施形態において、ＡＳＧＰＲについての親和性を有するリガンドは、Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ−ホルミルガラクトサミン、Ｎ−プロピオニル−ガラクトサミン、Ｎ−ｎ−ブタノイルガラクトサミン、またはＮ−イソ−ブタノイル−ガラクトサミンである。このようなコンジュゲートは、ＡＳＧＰＲを発現する細胞、例えば、肝細胞および樹状細胞中への化合物の取り込みを容易にする。
ある実施形態において、リガンドは、マンノース、グルコース、ガラクトース、リボース、アラビノース、フルクトース、フコース、キシロース、Ｄ−マンノース、Ｌ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ガラクトース、Ｄ−グルコース、Ｌ−グルコース、Ｄ−リボース、Ｌ−リボース、Ｄ−アラビノース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−フルクトース、Ｌ−フルクトース、Ｄ−フコース、Ｌ−フコース、Ｄ−キシロース、Ｌ−キシロース、アルファ−Ｄ−マンノフラノース、ベータ−Ｄ−マンノフラノース、アルファ−Ｄ−マンノピラノース、ベータ−Ｄ−マンノピラノース、アルファ−Ｄ−グルコフラノース、ベータ−Ｄ−グルコフラノース、アルファ−Ｄ−グルコピラノース、ベータ−Ｄ−グルコピラノース、アルファ−Ｄ−ガラクトフラノース、ベータ−Ｄ−ガラクトフラノース、アルファ−Ｄ−ガラクトピラノース、ベータ−Ｄ−ガラクトピラノース、アルファ−Ｄ−リボフラノース、ベータ−Ｄ−リボフラノース、アルファ−Ｄ−リボピラノース、ベータ−Ｄ−リボピラノース、アルファ−Ｄ−フルクトフラノース、アルファ−Ｄ−フルクトピラノース、グルコサミン、ガラクトサミン、シアル酸、およびＮ−アセチルガラクトサミンから選択される炭水化物である。
ある実施形態において、リガンドは、Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ−ホルミルガラクトサミン、Ｎ−プロピオニル−ガラクトサミン、Ｎ−ｎ−ブタノイルガラクトサミン、およびＮ−イソ−ブタノイル−ガラクトサミンから選択される。
ある実施形態において、リガンドは、Ｎ−アセチルガラクトサミンである。
ある実施形態において、化合物は、構造：
［式中、それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、ｍは、１〜５であり；Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである］を含む。ある実施形態において、ｍは、１である。ある実施形態において、ｍは、２である。ある実施形態において、ｍは、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍは、２、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍが１を上回る場合、Ｎｍのそれぞれの修飾または非修飾ヌクレオシドは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合またはホスホロチオエートヌクレオシド間結合によりＮｍの隣接修飾または非修飾ヌクレオシドに連結していてよい。
ある実施形態において、化合物は、構造：
［式中、Ｘは、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、ｍは、１〜５であり；Ｙは、ホスホジエステル結合であり；ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである］を含む。ある実施形態において、ｍは、１である。ある実施形態において、ｍは、２である。ある実施形態において、ｍは、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍは、２、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍが１を上回る場合、Ｎｍのそれぞれの修飾または非修飾ヌクレオシドは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合またはホスホロチオエートヌクレオシド間結合によりＮｍの隣接修飾または非修飾ヌクレオシドに連結していてよい。
ある実施形態において、化合物は、構造：
［式中、Ｘは、ホスホジエステル結合であり；それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、ｍは、１〜５であり；Ｙは、ホスホジエステル結合であり；ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである］を含む。ある実施形態において、ｍは、１である。ある実施形態において、ｍは、２である。ある実施形態において、ｍは、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍは、２、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍが１を上回る場合、Ｎｍのそれぞれの修飾または非修飾ヌクレオシドは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合またはホスホロチオエートヌクレオシド間結合によりＮｍの隣接修飾または非修飾ヌクレオシドに連結していてよい。
一部の実施形態において、化合物は、構造：
［式中、それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、ｍは、１〜５であり；Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである］
を有する。
ある実施形態において、Ｘ１およびＸ２の少なくとも一方は、ホスホジエステル結合である。ある実施形態において、Ｘ１およびＸ２のそれぞれは、ホスホジエステル結合である。
ある実施形態において、ｍは、１である。ある実施形態において、ｍは、２である。ある実施形態において、ｍは、２、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍは、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍが１を上回る場合、Ｎｍのそれぞれの修飾または非修飾ヌクレオシドは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合またはホスホロチオエートヌクレオシド間結合によりＮｍの隣接修飾または非修飾ヌクレオシドに連結していてよい。ある実施形態において、ｍが２である場合、Ｎｍのヌクレオシドは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合により結合している。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｎｍは、Ｎ’ｐＮ’’であり得、それぞれのＮ’は、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、ｐは、０〜４であり；Ｎ’’は、非修飾糖部分を含むヌクレオシドである。
ある実施形態において、ｐは、０である。ある実施形態において、ｐは、１、２、３、または４である。ある実施形態において、ｐが１、２、３、または４である場合、それぞれのＮ’は、非修飾糖部分を含む。
ある実施形態において、非修飾糖部分は、β−Ｄ−リボースまたはβ−Ｄ−デオキシリボースである。
ある実施形態において、ｐが１、２、３、または４である場合、Ｎ’は、プリンヌクレオ塩基を含む。ある実施形態において、Ｎ’’は、プリンヌクレオ塩基を含む。ある実施形態において、プリンヌクレオ塩基は、アデニン、グアニン、ヒポキサンチン、キサンチン、および７−メチルグアニンから選択される。ある実施形態において、Ｎは、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンまたはβ−Ｄ−デオキシリボグアノシンである。ある実施形態において、Ｎ’’は、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンまたはβ−Ｄ−デオキシリボグアノシンである。一部の実施形態において、ｐは、１であり、Ｎ’およびＮ’’は、それぞれ、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンである。
ある実施形態において、ｐが１、２、３、または４である場合、Ｎ’は、ピリミジンヌクレオ塩基を含む。ある実施形態において、Ｎ’’は、ピリミジンヌクレオ塩基を含む。ある実施形態において、ピリミジンヌクレオ塩基は、シトシン、５−メチルシトシン、チミン、ウラシル、および５，６−ジヒドロウラシルから選択される。
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、それぞれのＮの糖部分は、β−Ｄ−リボース、β−Ｄ−デオキシリボース、２’−Ｏ−メトキシ糖、２’−Ｏ−メチル糖、２’−フルオロ糖、および二環式糖部分から独立して選択される。ある実施形態において、それぞれの二環式糖部分は、ｃＥｔ糖部分、ＬＮＡ糖部分、およびＥＮＡ糖部分から独立して選択される。ある実施形態において、ｃＥｔ糖部分は、Ｓ−ｃＥｔ糖部分である。ある実施形態において、ｃＥｔ糖部分は、Ｒ−ｃＥｔ糖部分である。本明細書に記載の任意の実施形態において、それぞれのＮの糖部分は、β−Ｄ−リボース、β−Ｄ−デオキシリボース、および２’−フルオロ糖から独立して選択することができる。
ある実施形態において、化合物は、構造：
［式中、Ｘは、ホスホジエステル結合であり；ｍは、１であり；Ｎは、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンであり；Ｙは、ホスホジエステル結合であり；ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである］
を含む。
ある実施形態において、化合物は、構造：
［式中、Ｘは、ホスホジエステル結合であり；ｍは、２であり；それぞれのＮは、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンであり；Ｎのヌクレオシドは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合により結合しており；Ｙは、ホスホジエステル結合であり；ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである］
を含む。
修飾オリゴヌクレオチドへのコンジュゲーションのための追加の部分としては、フェナジン、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリン、および色素が挙げられる。ある実施形態において、コンジュゲート基は、修飾オリゴヌクレオチドに直接結合している。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、標的ＲＮＡのヌクレオ塩基配列に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、または１００％相補的である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、標的ＲＮＡに少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、または１００％相補的である。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、修飾糖部分を有する少なくとも１つのヌクレオシドを含む。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、複数の非二環式ヌクレオシドおよび複数の二環式ヌクレオシドを含む。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオシドの少なくとも７０％は、修飾糖部分を含む。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオシドの少なくとも８０％は、修飾糖部分を含む。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオシドの少なくとも９０％は、修飾糖部分を含む。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオシドの少なくとも９５％は、修飾糖部分を含む。
ある実施形態において、少なくとも２つの二環式ヌクレオシドは、互いに異なる糖部分を含む。ある実施形態において、それぞれの二環式ヌクレオシドは、同一タイプの糖部分を有する。ある実施形態において、少なくとも２つの非二環式ヌクレオシドは、互いに異なる糖部分を含む。ある実施形態において、それぞれの非二環式ヌクレオシドは、同一タイプの糖部分を有する。
ある実施形態において、それぞれの非二環式ヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、β−Ｄ−リボヌクレオシド、２’−Ｏ−メチルヌクレオシド、および２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド、および２’−フルオロヌクレオシドから独立して選択される。ある実施形態において、それぞれの非二環式ヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、および２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドから独立して選択される。ある実施形態において、それぞれの非二環式ヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。
ある実施形態において、二環式ヌクレオシドは、ｃＥｔヌクレオシド、およびＬＮＡヌクレオシド、およびＥＮＡヌクレオシドから選択される。ある実施形態において、ｃＥｔヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドである。ある実施形態において、ｃＥｔヌクレオシドは、Ｒ−ｃＥｔヌクレオシドである。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、複数の修飾ヌクレオシドおよび複数のβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを含み、それぞれのβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドは、修飾または非修飾ヌクレオ塩基を含み得る。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。ある実施形態において、それぞれのヌクレオシドの糖部分は、修飾糖部分である。ある実施形態において、修飾ヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドである。ある実施形態において、修飾ヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドである。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、７〜１０個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、８〜１０個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、８〜１２個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、８〜２５個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１２〜２５個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１５〜２５個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１５〜２２個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１７〜２２個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、７つの結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、８つの結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、９つの結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１０個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１１個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１２個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１３個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１４個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１５個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１６個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、８つの結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１７個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１８個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１９個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、２０個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、２１個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、８つの結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、２２個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、２３個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、２４個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、２５個の結合ヌクレオシドからなる。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１つヌクレオシド間結合は、修飾ヌクレオシド間結合である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオシド間結合は、修飾ヌクレオシド間結合である。ある実施形態において、修飾ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオシドは、修飾ヌクレオ塩基を含む。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのピリミジンは、５−メチル基を含む。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオシドは、５−メチルシトシンを含む。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのシトシンは、５−メチルシトシンである。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドが７〜１２個の結合ヌクレオシド長である場合、修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオシドは、修飾糖部分を含む。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドが７〜１０個の結合ヌクレオシド長である場合、修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオシドは、修飾糖部分を含む。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドが８〜１２個の結合ヌクレオシドである場合、修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオシドは、修飾糖部分を含む。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、７つの結合ヌクレオシドからなり、修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオシドは、修飾糖部分を含む。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、８つの結合ヌクレオシドからなり、修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオシドは、修飾糖部分を含む。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、９つの結合ヌクレオシドからなり、修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオシドは、修飾糖部分を含む。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１０個の結合ヌクレオシドからなり、修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオシドは、修飾糖部分を含む。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１１個の結合ヌクレオシドからなり、修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオシドは、修飾糖部分を含む。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１２個の結合ヌクレオシドからなり、修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオシドは、修飾糖部分を含む。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオシドは、二環式糖部分を含む。ある実施形態において、二環式糖部分は、ｃＥｔ糖部分である。ある実施形態において、ｃＥｔ糖部分は、Ｓ−ｃＥｔ糖部分である。ある実施形態において、二環式糖部分は、ＬＮＡ糖部分である。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、ギャップマーである。
ある代謝産物
エキソヌクレアーゼおよび／またはエンドヌクレアーゼへのインビトロまたはインビボ曝露時、化合物は、化合物全体にわたる種々の位置における開裂を受け得る。このような開裂の産物は、親化合物の活性のいくらかの程度を保持し得、したがって、活性代謝産物とみなされる。したがって、化合物の代謝産物を本明細書に記載の方法において使用することができる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチド（非コンジュゲートまたはコンジュゲート）は、５’末端および／または３’末端における開裂を受け、親修飾オリゴヌクレオチドに対して５’末端および／または３’末端におけるヌクレオチドが１、２、または３つ少ない代謝産物をもたらす。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、５’末端における開裂を受け、５’末端ヌクレオチドを放出し、親修飾オリゴヌクレオチドに対して５’末端におけるヌクレオチドが１つ少ない代謝産物をもたらす。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、５’末端における開裂を受け、２つの５’末端ヌクレオシドを放出し、親修飾オリゴヌクレオチドに対して５’末端におけるヌクレオチドが２つ少ない代謝産物をもたらす。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、３’末端における開裂を受け、３’末端ヌクレオチドを放出し、親修飾オリゴヌクレオチドに対して３’末端におけるヌクレオチドが１つ少ない代謝産物をもたらす。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、３’末端における開裂を受け、２つの３’末端ヌクレオシドを放出し、親修飾オリゴヌクレオチドに対して３’末端におけるヌクレオチドが２つ少ない代謝産物をもたらす。
コンジュゲート部分に結合している修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物は、修飾オリゴヌクレオチドおよびリガンド間のリンカー内の部位における開裂も受け得る。ある実施形態において、開裂は、コンジュゲート部分の一部を含む親修飾オリゴヌクレオチドを生じさせる。ある実施形態において、開裂は、修飾オリゴヌクレオチドおよびリガンド間のリンカーの１つ以上のサブユニットを含む親修飾オリゴヌクレオチドを生じさせる。例えば、化合物が構造Ｌｎ−リンカー−Ｎｍ−Ｐ−ＭＯを有する場合、一部の実施形態において、開裂は、Ｎｍの１つ以上のヌクレオチドを含む親修飾オリゴヌクレオチドを生じさせる。一部の実施形態において、コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドの開裂は、親修飾オリゴヌクレオチドを生じさせる。一部のこのような実施形態において、例えば、化合物が構造Ｌｎ−リンカー−Ｎｍ−Ｐ−ＭＯを有する場合、一部の実施形態において、開裂は、いかなるＮｍのヌクレオチドも有さない親修飾オリゴヌクレオチドを生じさせる。
コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドのある使用
ある実施形態において、標的ＲＮＡは、疾患に関連する。したがって、コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチド化合物の対象への投与は、標的ＲＮＡに関連する疾患の発生を治療し、予防し、または遅延させ得る。ある実施形態において、疾患は、肝臓細胞中で発現される標的ＲＮＡに関連する。ある実施形態において、疾患は、肝細胞中で発現される標的ＲＮＡに関連する。ある実施形態において、疾患は、マクロファージ中で発現される標的ＲＮＡに関連する。ある実施形態において、疾患は、樹状細胞中で発現される標的ＲＮＡに関連する。ある実施形態において、標的ＲＮＡは、マイクロＲＮＡである。
本明細書において、治療法において使用されるコンジュゲート化合物が提供される。
ある標的ＲＮＡ
本明細書に提供される化合物のいずれかは、標的ＲＮＡに相補的なヌクレオ塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含み得る。本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、標的ＲＮＡは、治療され得る任意の核酸、例として、限定されるものではないが、マイクロＲＮＡ、プリマイクロＲＮＡ、プレマイクロＲＮＡ、プレメッセンジャーＲＮＡ、メッセンジャーＲＮＡ、長鎖非コードＲＮＡ、低分子トランスファーＲＮＡ、核内低分子ＲＮＡ、核小体低分子ＲＮＡ、低分子リボソームＲＮＡ、低分子ヘアピンＲＮＡ、内因性アンチセンスＲＮＡ、ガイドＲＮＡ、超低分子（ｔｉｎｙ）非コードＲＮＡ、セントロメアにおけるヘテロクロマチンリピートまたは他の染色体起源におけるによりコードされる低分子一本鎖または二本鎖ＲＮＡ、およびそれらの任意の前駆体であり得る。標的ＲＮＡは、コードまたは非コード配列であり得；一本鎖もしくは二本鎖、または部分的な二本鎖特徴を有する一本鎖であり得；メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、またはトランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）のイントロンまたはエキソン内で天然に生じ得；内因的に転写され、または外因的に産生され得る。
修飾オリゴヌクレオチドのその標的ＲＮＡへのハイブリダイゼーション時、標的ＲＮＡの機能を、非分解機序、例えば、ＲＮＡ拮抗、ＲＮＡスプライシングのモジュレーション、ポリアデニル化のモジュレーション、ＲＮＡ二次構造の破壊、および翻訳の阻害を介して、または標的ＲＮＡの分解を促進する機序、例えば、ＲＮアーゼＨ、ＲＮＡ干渉、リボザイム、および二本鎖ＲＮアーゼを介して阻害することができる。
あるマイクロＲＮＡ標的
本明細書に提供される化合物のいずれかは、マイクロＲＮＡに相補的なヌクレオ塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含み得る。
ある成熟マイクロＲＮＡのヌクレオ塩基配列およびそれらの対応するステムループ配列は、ｍｉｃｒｏｒｎａ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋにおいて見出されるマイクロＲＮＡ配列およびアノテーションのオンライン検索可能なデータベースのｍｉＲＢａｓｅに見出される。ｍｉＲＢａｓｅ配列データベース中のエントリーは、マイクロＲＮＡ転写物の予測ヘアピン部分（ステムループ）を、成熟マイクロＲＮＡ配列の局在および配列に関する情報とともに表す。データベース中のマイクロＲＮＡステムループ配列は、厳密に、前駆体マイクロＲＮＡ（プレマイクロＲＮＡ）でなく、一部の例において、想定される一次転写物からのプレマイクロＲＮＡおよび一部のフランキング配列を含み得る。マイクロＲＮＡ標的の配列は、マイクロＲＮＡの任意のバージョン、例として、ｍｉＲＢａｓｅ配列データベースのリリース１５．０に記載の配列およびｍｉＲＢａｓｅ配列データベースの任意の以前のリリースに記載の配列を包含する。配列データベースリリースは、あるマイクロＲＮＡの改名をもたらし得る。本発明の組成物は、マイクロＲＮＡ標的の任意のヌクレオ塩基配列バージョンに相補的な修飾オリゴヌクレオチドを包含する。
ある実施形態において、マイクロＲＮＡに標的化される修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオ塩基は、マイクロＲＮＡ、またはその前駆体のヌクレオ塩基配列中の対応位置におけるヌクレオ塩基との塩基対合を受け得る。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、その標的マイクロＲＮＡまたは前駆体配列に対して１つ以上のミスマッチ塩基対を有し得、その標的配列にハイブリダイズし得るままである。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡ前駆体のヌクレオ塩基配列、例えば、マイクロＲＮＡステムループ配列に相補的なヌクレオ塩基配列を有する。成熟マイクロＲＮＡは、マイクロＲＮＡ前駆体配列内に含有されるため、マイクロＲＮＡに相補的なヌクレオ塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドは、対応するマイクロＲＮＡ前駆体の領域にも相補的である。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、それが相補的なマイクロＲＮＡ配列の長さと等しい数の結合ヌクレオシドからなる。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの結合ヌクレオシドの数は、マイクロＲＮＡ、またはその前駆体の長さ未満である。ある実施形態において、オリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡ、またはその前駆体の領域に相補的なヌクレオ塩基配列を有する。マイクロＲＮＡの長さ未満である結合ヌクレオシドの数を有する修飾オリゴヌクレオチド（修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオ塩基は、マイクロＲＮＡヌクレオ塩基配列中の対応位置におけるそれぞれのヌクレオ塩基に相補的である）は、マイクロＲＮＡヌクレオ塩基配列の領域に完全に相補的なヌクレオ塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドとみなされる。例えば、２２個の結合ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチド（ヌクレオシド１〜２２のヌクレオ塩基は、２３ヌクレオ塩基長であるマイクロＲＮＡの対応位置にそれぞれ相補的である）は、マイクロＲＮＡヌクレオ塩基配列の２２個のヌクレオ塩基領域に完全に相補的である。このような修飾オリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡの２２個のヌクレオ塩基部分に１００％相補的なヌクレオ塩基配列を有する。さらに、このような修飾オリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡに１００％相補的とみなされる。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの結合ヌクレオシドの数は、マイクロＲＮＡの長さよりも１つ少ない。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、５’末端におけるヌクレオシドが１つ少ない。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、３’末端におけるヌクレオシドが１つ少ない。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、５’末端におけるヌクレオシドが２つ少ない。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、３’末端におけるヌクレオシドが２つ少ない。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列の領域は、マイクロＲＮＡのヌクレオ塩基配列の領域に完全に相補的である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの８つの連続ヌクレオ塩基は、マイクロＲＮＡの８つの連続ヌクレオ塩基にそれぞれ相補的である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの９つの連続ヌクレオ塩基は、マイクロＲＮＡの９つの連続ヌクレオ塩基にそれぞれ相補的である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの１０個の連続ヌクレオ塩基は、マイクロＲＮＡの１０個の連続ヌクレオ塩基にそれぞれ相補的である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの１１個の連続ヌクレオ塩基は、マイクロＲＮＡの１１個の連続ヌクレオ塩基にそれぞれ相補的である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの１２個の連続ヌクレオ塩基は、マイクロＲＮＡの１２個の連続ヌクレオ塩基にそれぞれ相補的である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの１３個の連続ヌクレオ塩基は、マイクロＲＮＡの１３個の連続ヌクレオ塩基にそれぞれ相補的である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの１４個の連続ヌクレオ塩基は、マイクロＲＮＡの１４個の連続ヌクレオ塩基にそれぞれ相補的である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの１５個の連続ヌクレオ塩基は、マイクロＲＮＡの１５個の連続ヌクレオ塩基にそれぞれ相補的である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの１６個の連続ヌクレオ塩基は、マイクロＲＮＡの１６個の連続ヌクレオ塩基にそれぞれ相補的である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの１７個の連続ヌクレオ塩基は、マイクロＲＮＡの１７個の連続ヌクレオ塩基にそれぞれ相補的である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの１８個の連続ヌクレオ塩基は、マイクロＲＮＡの１８個の連続ヌクレオ塩基にそれぞれ相補的である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの１９個の連続ヌクレオ塩基は、マイクロＲＮＡの１９個の連続ヌクレオ塩基にそれぞれ相補的である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの２０個の連続ヌクレオ塩基は、マイクロＲＮＡの２０個の連続ヌクレオ塩基にそれぞれ相補的である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの２２個の連続ヌクレオ塩基は、マイクロＲＮＡの２２個の連続ヌクレオ塩基にそれぞれ相補的である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの２３個の連続ヌクレオ塩基は、マイクロＲＮＡの２３個の連続ヌクレオ塩基にそれぞれ相補的である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの２４個の連続ヌクレオ塩基は、マイクロＲＮＡの２４個の連続ヌクレオ塩基にそれぞれ相補的である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの２５個の連続ヌクレオ塩基は、マイクロＲＮＡの２５個の連続ヌクレオ塩基にそれぞれ相補的である。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、シード配列に相補的なヌクレオ塩基配列を含み、すなわち、修飾オリゴヌクレオチドは、シードマッチ配列を含む。ある実施形態において、シード配列は、ヘキサマーシード配列である。ある実施形態において、ヘキサマーシード配列は、マイクロＲＮＡのヌクレオ塩基１〜６である。ある実施形態において、ヘキサマーシード配列は、マイクロＲＮＡのヌクレオ塩基２〜７である。ある実施形態において、ヘキサマーシード配列は、マイクロＲＮＡのヌクレオ塩基３〜８である。ある実施形態において、シード配列は、ヘプタマーシード配列である。ある実施形態において、ヘプタマーシード配列は、マイクロＲＮＡのヌクレオ塩基１〜７である。あるこのような実施形態において、ヘプタマーシード配列は、マイクロＲＮＡのヌクレオ塩基２〜８である。ある実施形態において、シード配列は、オクタマーシード配列である。ある実施形態において、オクタマーシード配列は、マイクロＲＮＡのヌクレオ塩基１〜８である。ある実施形態において、オクタマーシード配列は、マイクロＲＮＡのヌクレオ塩基２〜９である。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、本明細書に列記のマイクロＲＮＡヌクレオ塩基配列、またはその前駆体に１００％相補的である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡのヌクレオ塩基配列、またはその前駆体に対して１つのミスマッチを有するヌクレオ塩基配列を有する。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡのヌクレオ塩基配列、またはその前駆体に対して２つのミスマッチを有するヌクレオ塩基配列を有する。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡのヌクレオ塩基配列、またはその前駆体に対して２つ以下のミスマッチを有するヌクレオ塩基配列を有する。ある実施形態において、ミスマッチヌクレオ塩基は、連続的である。ある実施形態において、ミスマッチヌクレオ塩基は、連続的でない。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの結合ヌクレオシドの数は、マイクロＲＮＡ配列の長さよりも多い。ある実施形態において、付加ヌクレオシドのヌクレオ塩基は、マイクロＲＮＡステムループ配列のヌクレオ塩基に相補的である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの結合ヌクレオシドの数は、マイクロＲＮＡの長さよりも１つ多い。ある実施形態において、付加ヌクレオシドは、修飾オリゴヌクレオチドの５’末端において存在する。ある実施形態において、付加ヌクレオシドは、修飾オリゴヌクレオチドの３’末端において存在する。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの結合ヌクレオシドの数は、マイクロＲＮＡの長さよりも２つ多い。ある実施形態において、２つの付加ヌクレオシドは、修飾オリゴヌクレオチドの５’末端において存在する。ある実施形態において、２つの付加ヌクレオシドは、修飾オリゴヌクレオチドの３’末端において存在する。ある実施形態において、１つの付加ヌクレオシドは、修飾オリゴヌクレオチドの５’末端において局在し、１つの付加ヌクレオシドは、その３’末端において局在する。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのある領域は、マイクロＲＮＡのヌクレオ塩基配列に完全に相補的であり得るが、全修飾オリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡに完全には相補的でない。例えば、２３個の結合ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチド（ヌクレオシド１〜２２のヌクレオ塩基が、２２ヌクレオ塩基長であるマイクロＲＮＡの対応位置にそれぞれ相補的である）は、マイクロＲＮＡのヌクレオ塩基配列に１００％相補的な２２個のヌクレオシド部分を有する。
あるヌクレオ塩基配列
本明細書に記載の任意のヌクレオ塩基配列、例として、限定されるものではないが、実施例および配列表に見出されるものは、核酸へのいかなる修飾からも独立している。したがって、配列番号により定義される核酸は、独立して、１つ以上の糖部分への、１つ以上のヌクレオシド間結合への、および／または１つ以上のヌクレオ塩基への１つ以上の修飾を含み得る。
本出願に付属する配列表は、それぞれのヌクレオ塩基配列を適宜「ＲＮＡ」または「ＤＮＡ」のいずれかとして識別するが、実際、それらの配列は、化学修飾の任意の組合せにより修飾されていてよい。当業者は、修飾オリゴヌクレオチドを記載するための「ＲＮＡ」または「ＤＮＡ」としてのこのような指定が、いくぶん任意であることを容易に認識する。例えば、２’−ＯＨ糖部分およびチミン塩基を含むヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドは、修飾糖（ＤＮＡの天然２’−Ｈについて２’−ＯＨ）を有するＤＮＡとして、または修飾塩基（ＲＮＡの天然ウラシルについてチミン（メチル化ウラシル））を有するＲＮＡとして記載することができる。
したがって、本明細書に提供される核酸配列、例として、限定されるものではないが、配列表中のものは、天然または修飾ＲＮＡおよび／またはＤＮＡの任意の組合せを含有する核酸、例として、限定されるものではないが、修飾ヌクレオ塩基を有するこのような核酸を包含するものとする。さらなる例として、限定されるものではないが、ヌクレオ塩基配列「ＡＴＣＧＡＴＣＧ」を有するオリゴマー化合物は、そのようなヌクレオ塩基配列（修飾または非修飾を問わない）を有する任意のオリゴマー化合物、例として、限定されるものではないが、ＲＮＡ塩基を含むそのような化合物、例えば、配列「ＡＵＣＧＡＵＣＧ」を有するものならびにいくつかのＤＮＡ塩基およびいくつかのＲＮＡ塩基、例えば、「ＡＵＣＧＡＴＣＧ」を有するものならびに他の修飾塩基、例えば、「ＡＴｍｅＣＧＡＵＣＧ」（ｍｅＣは、５位におけるメチル基を含むシトシン塩基を示す）を有するオリゴマー化合物を包含する。
ある合成方法
修飾オリゴヌクレオチドは、当技術分野において公知の自動化固相合成方法により作製することができる。固相合成の間、ホスホラミダイトモノマーを、固体担体に共有結合しているヌクレオシドに連続的にカップリングさせる。このヌクレオシドは、修飾オリゴヌクレオチドの３’末端ヌクレオシドである。典型的には、カップリングサイクルは、４つのステップ：脱トリチル化（酸による５’−ヒドロキシル保護基の除去）、カップリング（担体結合ヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチドへの活性化ホスホロアミダイトの結合）、酸化または硫化（酸化剤または硫化剤による新たに形成されたホスファイトトリメスター（ｔｒｉｍｅｓｔｅｒ）の変換）、およびキャッピング（未反応５’−ヒドロキシル基のアセチル化）を含む。最後のカップリングサイクル後、固体担体結合オリゴヌクレオチドを脱トリチル化ステップに供し、次いでオリゴヌクレオチドを同時に固体担体から放出させ、保護基を塩基から除去する開裂および脱保護ステップを行う。固体担体を濾過により除去し、濾液を濃縮し、得られた溶液をアイデンティティおよび純度について試験する。次いで、例えば、アニオン交換樹脂が充填されたカラムを使用してオリゴヌクレオチドを精製する。
ＧａｌＮＡｃ−コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドは、非コンジュゲートオリゴヌクレオチドを産生した固相合成に類似の自動化固相合成により作製することができる。ＧａｌＮＡｃ−コンジュゲートオリゴヌクレオチドの合成の間、ホスホラミダイトモノマーを、固体担体に共有結合しているＧａｌＮＡｃコンジュゲートに連続的にカップリングする。ＧａｌＮＡｃコンジュゲートの合成およびＧａｌＮＡｃコンジュゲート固体担体は、例えば、米国特許第８，１０６，０２２号明細書（炭水化物含有コンジュゲート、例として、１つ以上のＧａｌＮＡｃ部分を含むコンジュゲートの合成の、および固体担体に共有結合しているコンジュゲートの合成の記載について参照により全体として本明細書に組み込まれる）に記載されている。
本明細書において、式（ＩＶ）：
［式中、それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、ｍは、１〜５であり；Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである］
に示される構造を有するＧａｌＮＡｃコンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドを作製する方法であって、
式ＩＶ；
に示されるコンジュゲートを含む固体担体を提供するステップ；
反応性ヒドロキシルを産生するために有効な条件下でＤＭＴ基を脱保護するステップ；
逐次ホスホラミダイトカップリングステップを実施してＮｍを形成するステップ；
逐次ホスホラミダイトカップリングステップを実施してＭＯを形成するステップ；
および固体担体からコンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドを放出させるステップ
を含む方法が提供される。
ある修飾オリゴヌクレオチド
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、８〜３０個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１５〜３０個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１２〜２５個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１５〜２１個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１５〜１９個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１５〜１６個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１９〜２４個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、２１〜２４個の結合ヌクレオシドからなる。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、８つの結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、９つの結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１０個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１１個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１２個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１３個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１４個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１５個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１６個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１７個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１８個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１９個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、２０個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、２１個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、２２個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、２３個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、２４個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、２５個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、２６個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、２７個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、２８個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、２９個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、３０個の結合ヌクレオシドからなる。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、完全修飾オリゴヌクレオチドである。ある実施形態において、完全修飾オリゴヌクレオチドは、それぞれのヌクレオシドにおける糖修飾を含む。ある実施形態において、完全修飾オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間結合を含む。ある実施形態において、完全修飾オリゴヌクレオチドは、それぞれのヌクレオシドにおける糖修飾を含み、それぞれのヌクレオシド間結合は、修飾ヌクレオシド間結合である。ある実施形態において、完全修飾オリゴヌクレオチドは、それぞれのヌクレオシドにおける糖修飾を含み、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある実施形態において、完全修飾オリゴヌクレオチドは、それぞれのヌクレオシドにおける糖修飾を含み、それぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。ある実施形態において、完全修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオシドは、同一の修飾糖部分を含む。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、均一修飾オリゴヌクレオチドである。ある実施形態において、均一修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオシドは、同一の修飾糖部分を含む。ある実施形態において、均一修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオシド間結合は、同一の修飾ヌクレオシド間結合を含む。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、ギャップマーモチーフを有する。ある実施形態において、それぞれの外側のそれぞれのヌクレオシドは、同一の修飾糖部分を含む。ある実施形態において、１つの外側領域の少なくとも２つのヌクレオシドは、互いに異なる修飾糖部分を含む。ある実施形態において、それぞれの外側領域の少なくとも２つのヌクレオシドは、互いに異なる修飾糖部分を含む。ある実施形態において、それぞれの外側領域のそれぞれのヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチル糖を含む。ある実施形態において、それぞれの外側領域のそれぞれのヌクレオシドは、二環式糖部分を含む。ある実施形態において、二環式糖部分は、ｃＥｔ糖部分である。ある実施形態において、ｃＥｔ糖部分は、Ｓ−ｃＥｔ糖部分である。ある実施形態において、二環式糖部分は、ＬＮＡ糖部分である。
ある実施形態において、ギャップマーのそれぞれの外側領域は、同一数の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、ギャップマーの一方の外側領域は、他方の外側領域と異なる数の結合ヌクレオシドからなる。
ある実施形態において、それぞれの外側領域は、独立して、１〜６つのヌクレオシドを含む。ある実施形態において、外側領域は、１つのヌクレオシドを含む。ある実施形態において、外側領域は、２つのヌクレオシドを含む。ある実施形態において、外側領域は、３つのヌクレオシドを含む。ある実施形態において、外側領域は、４つのヌクレオシドを含む。ある実施形態において、外側領域は、５つのヌクレオシドを含む。ある実施形態において、外側領域は、６つのヌクレオシドを含む。ある実施形態において、内側領域は、１７〜２８個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、内側領域は、１７〜２１個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、内側領域は、１７個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、内側領域は、１８個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、内側領域は、１９個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、内側領域は、２０個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、内側領域は、２１個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、内側領域は、２２個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、内側領域は、２３個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、内側領域は、２４個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、内側領域は、２５個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、内側領域は、２６個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、内側領域は、２７個の結合ヌクレオシドからなる。ある実施形態において、内側領域は、２８個の結合ヌクレオシドからなる。
ある実施形態において、それぞれの外側領域は、５つの結合ヌクレオシドを含み、内側領域は、１０個の結合ヌクレオシドを含む。ある実施形態において、それぞれの外側領域は、４つの結合ヌクレオシドを含み、内側領域は、１０個の結合ヌクレオシドを含む。ある実施形態において、それぞれの外側領域は、３つの結合ヌクレオシドを含み、内側領域は、１０個の結合ヌクレオシドを含む。ある実施形態において、それぞれの外側領域は、２つの結合ヌクレオシドを含み、内側領域は、１０個の結合ヌクレオシドを含む。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、一本鎖ｓｉＲＮＡである。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、二本鎖ｓｉＲＮＡである。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、一本鎖マイクロＲＮＡミミックである。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、二本鎖マイクロＲＮＡミミックである。
ある修飾
本明細書において、コンジュゲート部分に結合している修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物が提供される。修飾オリゴヌクレオチドは、ヌクレオ塩基、糖、および／またはヌクレオシド間結合への１つ以上の修飾を含み得る。修飾ヌクレオ塩基、糖、および／またはヌクレオシド間結合は、所望の特性、例えば、細胞取り込みの向上、他のオリゴヌクレオチドまたは核酸標的についての親和性の向上およびヌクレアーゼ存在下の安定性の増加などのため、非修飾形態を上回って選択することができる。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾ヌクレオシドを含む。ある実施形態において、修飾ヌクレオシドは、安定化ヌクレオシドである。安定化ヌクレオシドの例は、糖修飾ヌクレオシドである。
ある実施形態において、修飾ヌクレオシドは、修飾糖部分を含む。ある実施形態において、修飾糖部分を含む修飾ヌクレオシドは、非修飾ヌクレオ塩基を含む。ある実施形態において、修飾糖は、修飾ヌクレオ塩基を含む。ある実施形態において、修飾ヌクレオシドは、２’−修飾ヌクレオシドである。
ある実施形態において、２’−修飾ヌクレオシドは、二環式糖部分を含む。ある実施形態において、二環式糖部分は、アルファ立体配置のＤ糖である。ある実施形態において、二環式糖部分は、ベータ立体配置のＤ糖である。ある実施形態において、二環式糖部分は、アルファ立体配置のＬ糖である。ある実施形態において、二環式糖部分は、ベータ立体配置のＬ糖である。
ある実施形態において、二環式糖部分は、２’および４’炭素原子間の架橋基を含む。ある実施形態において、架橋基は、１〜８つの結合ビラジカル基を含む。ある実施形態において、二環式糖部分は、１〜４つの結合ビラジカル基を含む。ある実施形態において、二環式糖部分は、２または３つの結合ビラジカル基を含む。ある実施形態において、二環式糖部分は、２つの結合ビラジカル基を含む。このような４’から２’糖置換基の例としては、限定されるものではないが、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−Ｏ−、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−または−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−；４’−ＣＨ２−２’、４’−（ＣＨ２）２−２’、４’−（ＣＨ２）３−２’；４’−（ＣＨ２）−Ｏ−２’（ＬＮＡ）；４’−（ＣＨ２）−Ｓ−２’；４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’（ＥＮＡ）；４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’（ｃＥｔ）および４’−ＣＨ（ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−２’、ならびにそのアナログ（例えば、２００８年７月１５日に発行された米国特許第７，３９９，８４５号明細書参照）；４’−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ３）−Ｏ−２’およびそのアナログ、（例えば、２００９年１月８日に公開された国際公開第２００９／００６４７８号パンフレット参照）；４’−ＣＨ２−Ｎ（ＯＣＨ３）−２’およびそのアナログ（例えば、２００８年１２月１１日に公開された国際公開第２００８／１５０７２９号パンフレット参照）；４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−２’（例えば、２００４年９月２日に公開された米国特許出願公開第２００４／０１７１５７０号明細書参照）；４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’、および４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’−（式中、それぞれのＲは、独立して、Ｈ、保護基、またはＣ１〜Ｃ１２アルキルである）；４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’（式中、Ｒは、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、または保護基である）（２００８年９月２３日に発行された米国特許第７，４２７，６７２号明細書参照）；４’−ＣＨ２−Ｃ-（Ｈ）（ＣＨ３）−２’（例えば、Ｃｈａｔｔｏｐａｄｈｙａｙａ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００９，７４，１１８−１３４参照）；ならびに４’−ＣＨ２−Ｃ（＝ＣＨ２）−２’およびそのアナログ（２００８年１２月８日に公開された公開中のＰＣＴ国際出願の国際公開第２００８／１５４４０１号パンフレット参照）が挙げられる。
ある実施形態において、このような４’から２’架橋は、独立して、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ−、−Ｃ（＝ＮＲａ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｏ−、−Ｓｉ（Ｒａ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）ｘ−、および−Ｎ（Ｒａ）−から独立して選択される１または２〜４つの結合基を含み；
ｘは、０、１、または２であり；
ｎは、１、２、３、または４であり；
それぞれのＲａおよびＲｂは、独立して、Ｈ、保護基、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ５〜Ｃ２０アリール、置換Ｃ５〜Ｃ２０アリール、複素環ラジカル、置換複素環ラジカル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ５〜Ｃ７脂環式ラジカル、置換Ｃ５〜Ｃ７脂環式ラジカル、ハロゲン、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＣＯＯＪ１、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、ＣＮ、スルホニル（Ｓ（＝Ｏ）２−Ｊ１）、またはスルホキシル（Ｓ（＝Ｏ）−Ｊ１）であり；
それぞれのＪ１およびＪ２は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ５〜Ｃ２０アリール、置換Ｃ５〜Ｃ２０アリール、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、複素環ラジカル、置換複素環ラジカル、Ｃ１〜Ｃ１２アミノアルキル、置換Ｃ１〜Ｃ１２アミノアルキル、または保護基である。
二環式糖部分を含むヌクレオシドは、二環式ヌクレオシドまたはＢＮＡと称される。ある実施形態において、二環式ヌクレオシドとしては、限定されるものではないが、以下に示される（Ａ）α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ；（Ｂ）β−Ｄ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ；（Ｃ）エチレンオキシ（４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’）ＢＮＡ；（Ｄ）アミノオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ；（Ｅ）オキシアミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’）ＢＮＡ；（Ｆ）メチル（メチレンオキシ）（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）ＢＮＡ（拘束エチルまたはｃＥｔとも称される）；（Ｇ）メチレン−チオ（４’−ＣＨ２−Ｓ−２’）ＢＮＡ；（Ｈ）メチレン−アミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ；（Ｉ）メチル炭素環式（４’−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−２’）ＢＮＡ；（Ｊ）ｃ−ＭＯＥ（４’−ＣＨ２−ＯＭｅ−２’）ＢＮＡおよび（Ｋ）プロピレン炭素環式（４’−（ＣＨ２）３−２’）ＢＮＡ
［式中、Ｂｘは、ヌクレオ塩基部分であり、Ｒは、独立して、Ｈ、保護基、またはＣ１〜Ｃ１２アルキルである］
が挙げられる。
ある実施形態において、２’−修飾ヌクレオシドは、ハロ、アリル、アミノ、アジド、ＳＨ、ＣＮ、ＯＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｏ−、Ｓ−、またはＮ（Ｒｍ）−アルキル；Ｏ−、Ｓ−、またはＮ（Ｒｍ）−アルケニル；Ｏ−、Ｓ−またはＮ（Ｒｍ）−アルキニル；Ｏ−アルキレニル−Ｏ−アルキル、アルキニル、アルカリール、アラルキル、Ｏ−アルカリール、Ｏ−アラルキル、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）またはＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）から選択される２’−置換基を含み、それぞれのＲｍおよびＲｎは、独立して、Ｈ、アミノ保護基または置換もしくは非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキルである。これらの２’−置換基は、ヒドロキシル、アミノ、アルコキシ、カルボキシ、ベンジル、フェニル、ニトロ（ＮＯ２）、チオール、チオアルコキシ（Ｓ−アルキル）、ハロゲン、アルキル、アリール、アルケニルおよびアルキニルから独立して選択される１つ以上の置換基によりさらに置換されていてよい。
ある実施形態において、２’−修飾ヌクレオシドは、Ｆ、ＮＨ２、Ｎ３、ＯＣＦ３、Ｏ−ＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）３ＮＨ２、ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、およびＮ−置換アセトアミド（Ｏ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）から選択される２’−置換基を含み、それぞれのＲｍおよびＲｎは、独立して、Ｈ、アミノ保護基または置換もしくは非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキルである。
ある実施形態において、２’−修飾ヌクレオシドは、Ｆ、ＯＣＦ３、Ｏ−ＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、およびＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３から選択される２’−置換基を含む。
ある実施形態において、２’−修飾ヌクレオシドは、Ｆ、Ｏ−ＣＨ３、およびＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３から選択される２’−置換基を含む。
ある実施形態において、修飾糖部分を含むヌクレオシドは、４’−チオ修飾ヌクレオシドである。ある実施形態において、修飾糖部分を含むヌクレオシドは、４’−チオ−２’−修飾ヌクレオシドである。４’−チオ修飾ヌクレオシドは、β−Ｄ−リボヌクレオシドを有し、４’−Ｏは、４’−Ｓにより置き換えられている。４’−チオ−２’−修飾ヌクレオシドは、２’−置換基により置き換えられている２’−ＯＨを有する４’−チオ修飾ヌクレオシドである。好適な２’−置換基としては、２’−ＯＣＨ３、２’−Ｏ−（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３、および２’−Ｆが挙げられる。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１つ以上のヌクレオシド間修飾を含む。ある実施形態において、オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオシド間結合は、修飾ヌクレオシド間結合である。ある実施形態において、修飾ヌクレオシド間結合は、リン原子を含む。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
ある実施形態において、修飾ヌクレオシド間結合は、リン原子を含まない。ある実施形態において、ヌクレオシド間結合は、短鎖アルキルヌクレオシド間結合により形成される。ある実施形態において、ヌクレオシド間結合は、シクロアルキルヌクレオシド間結合により形成される。ある実施形態において、ヌクレオシド間結合は、混合ヘテロ原子およびアルキルヌクレオシド間結合により形成される。ある実施形態において、ヌクレオシド間結合は、混合ヘテロ原子およびシクロアルキルヌクレオシド間結合により形成される。ある実施形態において、ヌクレオシド間結合は、１つ以上の短鎖ヘテロ原子ヌクレオシド間結合により形成される。ある実施形態において、ヌクレオシド間結合は、１つ以上の複素環式ヌクレオシド間結合により形成される。ある実施形態において、ヌクレオシド間結合は、アミド骨格を有する。ある実施形態において、ヌクレオシド間結合は、混合Ｎ、Ｏ、ＳおよびＣＨ２構成部分を有する。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾ヌクレオ塩基を含む。
ある実施形態において、修飾ヌクレオ塩基は、５−ヒドロキシメチルシトシン、７−デアザグアニンおよび７−デアザアデニンから選択される。ある実施形態において、修飾ヌクレオ塩基は、７−デアザアデニン、７−デアザグアノシン、２−アミノピリジンおよび２−ピリドンから選択される。ある実施形態において、修飾ヌクレオ塩基は、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジンならびにＮ−２、Ｎ−６およびＯ−６置換プリン、例として、２アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシルおよび５−プロピニルシトシンから選択される。
ある実施形態において、修飾ヌクレオ塩基は、多環式複素環を含む。ある実施形態において、修飾ヌクレオ塩基は、三環式複素環を含む。ある実施形態において、修飾ヌクレオ塩基は、フェノキサジン誘導体を含む。ある実施形態において、フェノキサジンをさらに修飾してＧクランプとして当技術分野において公知のヌクレオ塩基を形成することができる。
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、特性、例えば、ヌクレアーゼ安定性などを向上させるためにオリゴヌクレオチドの一方または両方の末端に結合している１つ以上の安定化基を含む。安定化基には、キャップ構造が含まれる。これらの末端修飾は、オリゴヌクレオチドをエキソヌクレアーゼ分解から保護し、送達および／または細胞内の局在化において役立ち得る。キャップは、５’−末端（５’−キャップ）、もしくは３’−末端（３’−キャップ）において存在し得、または両方の末端上に存在し得る。キャップ構造としては、例えば、逆向きデオキシ非塩基（ａｂａｓｉｃ）キャップが挙げられる。
好適なキャップ構造としては、４’，５’−メチレンヌクレオチド、１−（ベータ−Ｄ−エリスロフラノシル）ヌクレオチド、４’−チオヌクレオチド、炭素環式ヌクレオチド、１，５−アンヒドロヘキシトールヌクレオチド、Ｌ−ヌクレオチド、アルファ−ヌクレオチド、修飾塩基ヌクレオチド、ホスホロジチオエート結合、トレオ−ペントフラノシルヌクレオチド、非環式３’，４’−セコヌクレオチド、非環式３，４−ジヒドロキシブチルヌクレオチド、非環式３，５−ジヒドロキシペンチルヌクレオチド、３’−３’−逆向きヌクレオチド部分、３’−３’−逆向き非塩基部分、３’−２’−逆向きヌクレオチド部分、３’−２’−逆向き非塩基部分、１，４−ブタンジオールホスフェート、３’−ホスホラミデート、ヘキシルホスフェート、アミノヘキシルホスフェート、３’−ホスフェート、３’−ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、架橋メチルホスホネート部分、および非架橋メチルホスホネート部分５’−アミノ−アルキルホスフェート、１，３−ジアミノ−２−プロピルホスフェート、３−アミノプロピルホスフェート、６−アミノヘキシルホスフェート、１，２−アミノドデシルホスフェート、ヒドロキシプロピルホスフェート、５’−５’−逆向きヌクレオチド部分、５’−５’−逆向き非塩基部分、５’−ホスホラミデート、５’−ホスホロチオエート、５’−アミノ、架橋および／または非架橋５’−ホスホラミデート、ホスホロチオエート、ならびに５’−メルカプト部分が挙げられる。
ある医薬組成物
本明細書に提供される化合物のいずれかは、医薬組成物として調製することができる。
ある実施形態において、医薬組成物は、投与量単位（例えば、錠剤、カプセル剤、ボーラスなど）の形態で投与される。一部の実施形態において、医薬組成物は、本明細書に提供される化合物を、２５ｍｇ〜８００ｍｇ、２５ｍｇ〜７００ｍｇ、２５ｍｇ〜６００ｍｇ、２５ｍｇ〜５００ｍｇ、２５ｍｇ〜４００ｍｇ、２５ｍｇ〜３００ｍｇ、２５ｍｇ〜２００ｍｇ、２５ｍｇ〜１００ｍｇ、１００ｍｇ〜８００ｍｇ、２００ｍｇ〜８００ｍｇ、３００ｍｇ〜８００ｍｇ、４００ｍｇ〜８００ｍｇ、５００ｍｇ〜８００ｍｇ、６００ｍｇ〜８００ｍｇ、１００ｍｇ〜７００ｍｇ、１５０ｍｇ〜６５０ｍｇ、２００ｍｇ〜６００ｍｇ、２５０ｍｇ〜５５０ｍｇ、３００ｍｇ〜５００ｍｇ、３００ｍｇ〜４００ｍｇ、および４００ｍｇ〜６００ｍｇから選択される範囲内の用量において含む。ある実施形態において、このような医薬組成物は、本明細書に提供される化合物を、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、１００ｍｇ、１０５ｍｇ、１１０ｍｇ、１１５ｍｇ、１２０ｍｇ、１２５ｍｇ、１３０ｍｇ、１３５ｍｇ、１４０ｍｇ、１４５ｍｇ、１５０ｍｇ、１５５ｍｇ、１６０ｍｇ、１６５ｍｇ、１７０ｍｇ、１７５ｍｇ、１８０ｍｇ、１８５ｍｇ、１９０ｍｇ、１９５ｍｇ、２００ｍｇ、２０５ｍｇ、２１０ｍｇ、２１５ｍｇ、２２０ｍｇ、２２５ｍｇ、２３０ｍｇ、２３５ｍｇ、２４０ｍｇ、２４５ｍｇ、２５０ｍｇ、２５５ｍｇ、２６０ｍｇ、２６５ｍｇ、２７０ｍｇ、２７０ｍｇ、２８０ｍｇ、２８５ｍｇ、２９０ｍｇ、２９５ｍｇ、３００ｍｇ、３０５ｍｇ、３１０ｍｇ、３１５ｍｇ、３２０ｍｇ、３２５ｍｇ、３３０ｍｇ、３３５ｍｇ、３４０ｍｇ、３４５ｍｇ、３５０ｍｇ、３５５ｍｇ、３６０ｍｇ、３６５ｍｇ、３７０ｍｇ、３７５ｍｇ、３８０ｍｇ、３８５ｍｇ、３９０ｍｇ、３９５ｍｇ、４００ｍｇ、４０５ｍｇ、４１０ｍｇ、４１５ｍｇ、４２０ｍｇ、４２５ｍｇ、４３０ｍｇ、４３５ｍｇ、４４０ｍｇ、４４５ｍｇ、４５０ｍｇ、４５５ｍｇ、４６０ｍｇ、４６５ｍｇ、４７０ｍｇ、４７５ｍｇ、４８０ｍｇ、４８５ｍｇ、４９０ｍｇ、４９５ｍｇ、５００ｍｇ、５０５ｍｇ、５１０ｍｇ、５１５ｍｇ、５２０ｍｇ、５２５ｍｇ、５３０ｍｇ、５３５ｍｇ、５４０ｍｇ、５４５ｍｇ、５５０ｍｇ、５５５ｍｇ、５６０ｍｇ、５６５ｍｇ、５７０ｍｇ、５７５ｍｇ、５８０ｍｇ、５８５ｍｇ、５９０ｍｇ、５９５ｍｇ、６００ｍｇ、６０５ｍｇ、６１０ｍｇ、６１５ｍｇ、６２０ｍｇ、６２５ｍｇ、６３０ｍｇ、６３５ｍｇ、６４０ｍｇ、６４５ｍｇ、６５０ｍｇ、６５５ｍｇ、６６０ｍｇ、６６５ｍｇ、６７０ｍｇ、６７５ｍｇ、６８０ｍｇ、６８５ｍｇ、６９０ｍｇ、６９５ｍｇ、７００ｍｇ、７０５ｍｇ、７１０ｍｇ、７１５ｍｇ、７２０ｍｇ、７２５ｍｇ、７３０ｍｇ、７３５ｍｇ、７４０ｍｇ、７４５ｍｇ、７５０ｍｇ、７５５ｍｇ、７６０ｍｇ、７６５ｍｇ、７７０ｍｇ、７７５ｍｇ、７８０ｍｇ、７８５ｍｇ、７９０ｍｇ、７９５ｍｇ、および８００ｍｇから選択される用量において含む。あるこのような実施形態において、医薬組成物は、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、および８００ｍｇから選択される本明細書に提供される化合物の用量を含む。
ある実施形態において、本明細書に提供される化合物を含む医薬組成物は、１０ｍｇ／ｋｇ以下、９ｍｇ／ｋｇ以下、８ｍｇ／ｋｇ以下、７．５ｍｇ／ｋｇ以下、７ｍｇ／ｋｇ以下、６．５ｍｇ／ｋｇ以下、６ｍｇ／ｋｇ以下、５．５ｍｇ／ｋｇ以下、５ｍｇ／ｋｇ以下、４．５ｍｇ／ｋｇ以下、４ｍｇ／ｋｇ以下、３．５ｍｇ／ｋｇ以下、３ｍｇ／ｋｇ以下、２．５ｍｇ／ｋｇ以下、２ｍｇ／ｋｇ以下、１．５ｍｇ／ｋｇ以下、１ｍｇ／ｋｇ以下、０．７５ｍｇ／ｋｇ以下、０．５ｍｇ／ｋｇ以下、または０．２５ｍｇ／ｋｇ以下の用量において投与される。
ある実施形態において、医薬剤は、好適な希釈剤、例えば、注射用無菌水または注射用無菌生理食塩水により再構成される無菌凍結乾燥化合物である。再構成された生成物は、生理食塩水中に希釈された後に皮下注射として、または静脈内注入として投与される。凍結乾燥薬物生成物は、調製の間に酸または塩基によりｐＨ７．０〜９．０に調整された注射用水中で、または注射用生理食塩水中で調製され、次いで凍結乾燥された化合物からなる。凍結乾燥化合物は、２５〜８００ｍｇのオリゴヌクレオチドであり得る。これは、２５、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、６００、６２５、６５０、６７５、７００、７２５、７５０、７７５、および８００ｍｇの修飾凍結乾燥オリゴヌクレオチドを包含することが理解される。さらに、一部の実施形態において、凍結乾燥化合物は、２５ｍｇ〜８００ｍｇ、２５ｍｇ〜７００ｍｇ、２５ｍｇ〜６００ｍｇ、２５ｍｇ〜５００ｍｇ、２５ｍｇ〜４００ｍｇ、２５ｍｇ〜３００ｍｇ、２５ｍｇ〜２００ｍｇ、２５ｍｇ〜１００ｍｇ、１００ｍｇ〜８００ｍｇ、２００ｍｇ〜８００ｍｇ、３００ｍｇ〜８００ｍｇ、４００ｍｇ〜８００ｍｇ、５００ｍｇ〜８００ｍｇ、６００ｍｇ〜８００ｍｇ、１００ｍｇ〜７００ｍｇ、１５０ｍｇ〜６５０ｍｇ、２００ｍｇ〜６００ｍｇ、２５０ｍｇ〜５５０ｍｇ、３００ｍｇ〜５００ｍｇ、３００ｍｇ〜４００ｍｇ、または４００ｍｇ〜６００ｍｇの範囲の量で存在する。凍結乾燥薬物生成物は、２ｍＬのＩ型透明ガラスバイアル（硫酸アンモニウム処理）中で包装し、ブロモブチルゴムクロージャにより封入し、アルミニウムＦＬＩＰ−ＯＦＦ（登録商標）オーバーシールにより密封することができる。
ある実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、治療有効量の化合物を含む。ある実施形態において、治療有効量は、疾患の症状を予防、緩和もしくは改善するため、または治療される対象の生存を持続させるために十分である。治療有効量の決定は、十分に当業者の能力の範囲内である。
ある実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、医薬組成物中に慣用的に見出される他の補助構成成分を、それらの当技術分野において確立された使用レベルにおいてさらに含有し得る。したがって、例えば、組成物は、追加の適合性の薬学的に活性な材料、例えば、鎮痒剤、収斂剤、局所麻酔剤もしくは抗炎症剤などを含有し得、または本発明の組成物の種々の剤形の物理的配合において有用な追加の材料、例えば、色素、着香剤、保存剤、酸化防止剤、乳白剤、増粘剤および安定剤を含有し得る。しかしながら、このような材料は、添加される場合、本発明の組成物の構成成分の生物学的活性と過度に干渉すべきでない。配合物は、滅菌し、所望により、配合物のオリゴヌクレオチドと有害に相互作用しない助剤、例えば、滑沢剤、保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧影響のための塩、緩衝液、着色剤、着香剤および／または芳香物質などと混合することができる。
脂質部分は、種々の方法において核酸療法において使用されている。ある方法においては、核酸を、カチオン脂質および中性脂質の混合物から作製された事前形成リポソームまたはリポプレックス中に導入する。別の方法においては、モノまたはポリカチオン脂質とのＤＮＡ複合体を中性脂質の存在なしで形成する。ある実施形態において、脂質部分は、特定の細胞または組織に対する医薬剤の分布を増加させるように選択する。ある実施形態において、脂質部分は、脂肪組織に対して医薬剤の分布を増加させるように選択する。ある実施形態において、脂質部分は、筋組織に対して医薬剤の分布を増加させるように選択する。
ある実施形態において、ＩＮＴＲＡＬＩＰＩＤを使用してオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物を調製する。Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄは、静脈内投与のために調製された脂肪エマルションである。これは、１０％のダイズ油、１．２％の卵黄リン脂質、２．２５％のグリセリン、および注射用水から構成される。さらに、最終生成物ｐＨ範囲が６〜８．９になるようにｐＨを調整するために水酸化ナトリウムが添加されている。
ある実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、核酸と複合体形成しているポリアミン化合物または脂質部分を含む。このような製剤は、脂質製剤の開示について参照により全体として本明細書に組み込まれるＰＣＴ公開の国際公開第２００８／０４２９７３号パンフレットに記載されている。ある追加の製剤は、脂質製剤の開示について参照により全体として本明細書に組み込まれるＡｋｉｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２６，５６１−５６９（０１ Ｍａｙ ２００８）に記載されている。
ある実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、１つ以上の化合物および１つ以上の賦形剤を含む。あるこのような実施形態において、賦形剤は、水、塩溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミラーゼ、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロースおよびポリビニルピロリドンから選択される。
ある実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、公知の技術、例として、限定されるものではないが、混合、溶解、造粒、糖衣錠作製、粉末化、乳化、カプセル封入、捕捉または製錠プロセスを使用して調製される。
ある実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、液体（例えば、懸濁液、エリキシル剤および／または液剤）である。あるこのような実施形態において、液体医薬組成物は、当技術分野において公知の成分、例として、限定されるものではないが、水、グリコール、油、アルコール、着香剤、保存剤、および着色剤を使用して調製される。
ある実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、固体（例えば、散剤、錠剤および／またはカプセル剤）である。あるこのような実施形態において、１つ以上のオリゴヌクレオチドを含む固体医薬組成物は、当技術分野において公知の成分、例として、限定されるものではないが、デンプン、糖、希釈剤、造粒剤、滑沢剤、結合剤、および崩壊剤を使用して調製される。
ある実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、デポー製剤として配合される。あるこのようなデポー製剤は、典型的には、非デポー製剤よりも長期作用性である。ある実施形態において、このような製剤は、移植（例えば、皮下または筋肉内）により、または筋肉内注射により投与される。ある実施形態において、デポー製剤は、好適なポリマーもしくは疎水性材料（例えば、許容可能な油中のエマルション）もしくはイオン交換樹脂を使用して、または難溶性誘導体として、例えば、難溶性塩として調製される。
ある実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、送達系を含む。送達系の例としては、限定されるものではないが、リポソームまたはエマルションが挙げられる。ある送達系は、疎水性化合物を含むものを含むある医薬組成物の調製に有用である。ある実施形態において、ある有機溶媒、例えば、ジメチルスルホキシドが使用される。
ある実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、本明細書に提供される１つ以上の化合物を特異的な組織または細胞型に送達するように設計された１つ以上の組織特異的送達分子を含む。例えば、ある実施形態において、医薬組成物は、組織特異的抗体によりコーティングされたリポソームを含む。
ある実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、共溶媒系を含む。あるこのような共溶媒系は、例えば、ベンジルアルコール、非極性界面活性剤、水混和性有機ポリマー、および水相を含む。ある実施形態において、このような共溶媒系は、疎水性化合物に使用される。このような共溶媒系の非現実的な例は、３％ｗ／ｖのベンジルアルコール、８％ｗ／ｖの非極性界面活性剤Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ８０（商標）および６５％ｗ／ｖのポリエチレングリコール３００を含む絶対エタノールの溶液であるＶＰＤ共溶媒系である。このような共溶媒系の比率は、それらの溶解度および毒性特性を顕著に変えずにかなり変動させることができる。さらに、共溶媒系構成成分のアイデンティティは、変動させることができる：例えば、他の界面活性剤を、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ８０（商標）に代えて使用することができ；ポリエチレングリコールの分画サイズを変動させることができ；他の生体適合性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドンは、ポリエチレングリコールと置き換わり得；他の糖または多糖はデキストローズの代わりになり得る。
ある実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、徐放系を含む。このような徐放系の非現実的な例は、固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスである。ある実施形態において、徐放系は、それらの化学性質に応じて、医薬剤を数時間、数日間、数週間または数ヵ月間の期間にわたり放出させ得る。
ある実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、経口投与のために調製される。あるこのような実施形態において、医薬組成物は、修飾オリゴヌクレオチドを含む１つ以上の化合物を、１つ以上の薬学的に許容可能な担体と合わせることにより配合される。あるこのような担体により、対象による経口摂取のための錠剤、ピル剤、糖衣錠、カプセル剤、液体、ゲル剤、シロップ剤、スラリー、懸濁液などとしての医薬組成物の配合が可能となる。ある実施形態において、経口使用のための医薬組成物は、オリゴヌクレオチドおよび１つ以上の固体賦形剤を混合することにより得られる。好適な賦形剤としては、限定されるものではないが、増量剤、例えば、糖、例として、ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトール；セルロース調製物、例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、イネデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などが挙げられる。ある実施形態において、このような混合物は任意選択的に粉砕され、助剤が任意選択的に添加される。ある実施形態において、医薬組成物は、錠剤または糖衣錠コアを得るように形成される。ある実施形態において、崩壊剤（例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸またはその塩、例えば、アルギン酸ナトリウム）が添加される。
ある実施形態において、糖衣錠コアには、コーティングが提供される。あるこのような実施形態において、アラビアガム、タルク、ポリビニルピロリドン、ｃａｒｂｏｐｏｌゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、ならびに好適な有機溶媒もしくは溶媒混合物を任意選択的に含有し得る濃縮糖溶液を使用することができる。染料または顔料を錠剤または糖衣錠コーティングに添加することができる。
ある実施形態において、経口投与のための医薬組成物は、ゼラチン製のプッシュフィット（ｐｕｓｈ−ｆｉｔ）カプセル剤である。あるこのようなプッシュフィットカプセル剤は、１つ以上の増量剤、例えば、ラクトース、結合剤、例えば、デンプン、および／または滑沢剤、例えば、タルクもしくはステアリン酸マグネシウム、および任意選択的に安定剤との混合物の本発明の１つ以上の医薬剤を含む。ある実施形態において、経口投与のための医薬組成物は、ゼラチンおよび可塑剤、例えば、グリセロ−ルまたはソルビトール製の軟質密封カプセル剤である。ある軟質カプセル剤において、本発明の１つ以上の医薬剤は、好適な液体、例えば、脂肪油、流動パラフィン、または液体ポリエチレングリコール中で溶解または懸濁している。さらに、安定剤を添加することができる。
ある実施形態において、医薬組成物は、バッカル投与のために調製される。あるこのような医薬組成物は、慣用の様式で配合される錠剤またはトローチ剤である。
ある実施形態において、医薬組成物は、注射（例えば、静脈内、皮下、筋肉内など）による投与のために調製される。あるこのような実施形態において、医薬組成物は、担体を含み、水溶液、例えば、水または生理学的に適合性の緩衝液、例えば、ハンクス液、リンガー液、もしくは生理食塩緩衝液中で配合される。ある実施形態において、他の成分が含まれる（例えば、溶解性を補助し、または保存剤として機能する成分）。ある実施形態において、注射用懸濁液は、適切な液体担体、懸濁化剤などを使用して調製される。ある注射用医薬組成物は、単位剤形、例えば、アンプルまたは多用量容器中で提供される。ある注射用医薬組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、液剤またはエマルションであり、配合剤、例えば、懸濁化剤、安定剤および／または分散剤を含有し得る。注射用医薬組成物における使用に好適なある溶媒としては、限定されるものではないが、親油性溶媒および脂肪油、例えば、ゴマ油、合成脂肪酸エステル、例えば、オレイン酸エチルまたはトリグリセリド、およびリポソームが挙げられる。水性注射懸濁液は、懸濁液の粘度を増加させる物質、例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトール、またはデキストランを含有し得る。任意選択的に、このような懸濁液は、好適な安定剤または高濃縮溶液の調製を可能とするために医薬剤の溶解度を増加させる薬剤も含有し得る。
ある実施形態において、医薬組成物は、経粘膜投与のために調製される。あるこのような実施形態において、障壁の浸透に適切な浸透剤が配合物中で使用される。このような浸透剤は、一般に当技術分野において公知である。
ある実施形態において、本明細書に提供される１つ以上の修飾オリゴヌクレオチは、プロドラッグとして投与される。ある実施形態において、インビボ投与時、プロドラッグは、生物学的、薬学的または治療的により活性形態のオリゴヌクレオチドに化学的または酵素的に変換される。ある実施形態において、プロドラッグは、それらが対応する活性形態よりも投与が容易であるため、有用である。例えば、ある例において、プロドラッグは、対応する活性形態よりもバイオアベイラブル（例えば、経口投与を介して）であり得る。ある実施形態において、プロドラッグは、細胞膜を越える優れた伝達を有する。ある実施形態において、プロドラッグは、所望の細胞型、組織、または臓器への修飾オリゴヌクレオチドの送達を容易にする。ある実施形態において、プロドラッグは、コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物である。ある例において、プロドラッグは、対応する活性形態と比較して改善された溶解度を有し得る。ある実施形態において、プロドラッグは、対応する活性形態よりも水溶性でない。ある実施形態において、プロドラッグは、エステルである。あるこのような実施形態において、エステルは、投与時にカルボン酸に代謝的に加水分解される。ある例において、カルボン酸を含有する化合物は、対応する活性形態である。ある実施形態において、プロドラッグは、酸基に結合している短鎖ペプチド（ポリアミノ酸）を含む。あるこのような実施形態において、ペプチドは、投与時に開裂されて対応する活性形態を形成する。
ある実施形態において、プロドラッグは、活性化合物がインビボ投与時に再生されるように、薬学的に活性な化合物を修飾することにより産生される。プロドラッグは、薬物の代謝安定性もしくは輸送特徴を変えるように、副作用もしくは毒性をマスクするように、薬物の風味を改善するように、および／または薬物の他の特徴もしくは特性を変えるように設計することができる。インビボの薬力学的プロセスおよび薬物代謝の知識から、当業者は、薬学的に活性な化合物が公知になると、その化合物のプロドラッグを設計することができる（例えば、Ｎｏｇｒａｄｙ（１９８５）Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐａｇｅｓ ３８８−３９２参照）。ある実施形態において、プロドラッグは、インビボ投与時のコンジュゲート部分の開裂および修飾オリゴヌクレオチドの再生を可能とするようにコンジュゲート部分に結合している修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物である。開裂可能なコンジュゲート部分に結合している修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物、例えば、本明細書に記載の構造Ｂ、Ｃ、Ｄ、（Ｉ）、または（ＩＩ）の化合物などは、インビボ投与時に修飾オリゴヌクレオチドをその非コンジュゲート形態で放出し得る。
ある投与経路
ある実施形態において、対象への投与は、非経口投与を含む。ある実施形態において、対象への投与は、静脈内投与を含む。ある実施形態において、対象への投与は、皮下投与を含む。
ある実施形態において、対象への投与は、動脈内、経肺、経口、経直腸、経粘膜、経腸、腸内、局所、経皮、坐剤、鞘内、脳室内、腹腔内、鼻腔内、眼内、筋肉内、髄内、および腫瘍内投与を含む。
ある追加の治療法
標的ＲＮＡに関連する疾患のための治療は、２つ以上の治療法を含み得る。したがって、ある実施形態において、本明細書において、標的ＲＮＡに関連する疾患を有し、または有する疑いのある対象を治療する方法であって、ＧａｌＮＡｃコンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドを投与することに加え、少なくとも１つの治療法を施すことを含む方法が提供される。
ある実施形態において、少なくとも１つの追加の治療法は、医薬剤を含む。
ある実施形態において、医薬剤としては、抗炎症剤が挙げられる。ある実施形態において、抗炎症剤は、ステロイド抗炎症剤である。ある実施形態において、ステロイド抗炎症剤は、コルチコステロイドである。ある実施形態において、コルチコステロイドは、プレドニゾンである。ある実施形態において、抗炎症剤は、非ステロイド抗炎症薬である。ある実施形態において、非ステロイド抗炎症剤は、イブプロフェン、ＣＯＸ−Ｉ阻害剤、またはＣＯＸ−２阻害剤である。
ある実施形態において、医薬剤としては、限定されるものではないが、利尿剤（例えば、スプリオノラクトン（ｓｐｒｉｏｎｏｌａｃｔｏｎｅ）、エプレレノン、フロセミド）、循環作動剤（例えば、ドブタミン、ミルリノン）、ジゴキシン、血管拡張剤、アンジオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤（例えば、カプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ベナゼプリル、キナプリル、フォシノプリル、およびラミプリルである）、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断剤（ＡＲＢ）（例えば、カンデサルタン、イルベサルタン、オルメサルタン、ロサルタン、バルサルタン、テルミサルタン、エプロサルタン）、カルシウムチャネル遮断剤、二硝酸イソソルビド、ヒドララジン、硝酸塩（例えば、一硫酸イソソルビド、二硫酸イソソルビド）、ヒドララジン、ベータ遮断剤（例えば、カルベジロール、メトプロロール）、およびナトリウム利尿ペプチド（例えば、ネシリチド）が挙げられる。
ある実施形態において、医薬剤としては、ヘパリノイドが挙げられる。ある実施形態において、ヘパリノイドは、ポリ硫酸ペントサンである。
ある実施形態において、追加の治療法は、生体免疫系を向上させる医薬剤、例として、低用量シクロホスファミド、サイモスティムリン（ｔｈｙｍｏｓｔｉｍｕｌｉｎ）、ビタミンおよび栄養サプリメント（例えば、酸化防止剤、例として、ビタミンＡ、Ｃ、Ｅ、ベータ−カロテン、亜鉛、セレン、グルタチオン、補酵素Ｑ−１０およびエキナセア）、およびワクチン、例えば、抗原のマルチマー提示およびアジュバントを合わせるワクチン配合物を含む免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）であり得る。
ある実施形態において、本発明の１つ以上の医薬組成物の副作用を治療または改善するための追加の治療法が選択される。このような副作用としては、限定されるものではないが、注射部位反応、肝機能試験異常、腎機能異常、肝毒性、腎毒性、中枢神経系異常、およびミオパシーが挙げられる。例えば、血清中のアミノトランスフェラーゼレベルの増加は、肝毒性または肝機能異常を示し得る。例えば、ビリルビンの増加は、肝毒性または肝機能異常を示し得る。
追加の医薬剤のさらなる例としては、限定されるものではないが、免疫グロブリン、例として、限定されるものではないが、静脈内投与用免疫グロブリン（ＩＶＩｇ）；鎮痛剤（例えば、アセトアミノフェン）；サリチル酸塩；抗生物質；抗ウイルス剤；抗真菌剤；アドレナリン性改変剤；ホルモン剤（例えば、アナボリックステロイド、アンドロゲン、エストロゲン、カルシトニン、プロゲスチン、ソマトスタン、および甲状腺ホルモン）；免疫調節剤；筋弛緩剤；抗ヒスタミン剤；骨粗鬆症剤（例えば、ビホスホネート、カルシトニン、およびエストロゲン）；プロスタグランジン、抗新生物剤；精神治療剤；鎮静剤；有毒オークまたは有毒ウルシ生成物；抗体；およびワクチンが挙げられる。
あるキット
本明細書に提供される任意の化合物は、キット中に存在し得る。キットは、本明細書に提供される化合物を使用するための説明書も含有し得る。一部の実施形態において、本明細書に提供される化合物は、バイアル内に存在し得る。複数のバイアル、例えば、１０個が、例えば、調剤パック中に存在し得る。一部の実施形態において、バイアルは、シリンジにより利用可能であるように製造される。
一部の実施形態において、キットは、対象への本明細書に提供される化合物の投与のために使用することができる。本明細書に提供される化合物に加え、キットは、以下のもの：シリンジ、アルコール綿棒、綿ボール、および／またはガーゼパッドの１つ以上をさらに含み得る。一部の実施形態において、化合物は、バイアル中ではなく、プレフィルドシリンジ（例えば、例えば、ニードルガードを有する２７ゲージ、１／２インチ針を有する単回用量シリンジ）中に存在し得る。複数のプレフィルドシリンジ、例えば、１０個が、例えば、調剤パック中に存在し得る。キットは、化合物を投与するための説明書も含有し得る。
ある定量アッセイ
修飾オリゴヌクレオチドの、その標的ＲＮＡの活性に対する効果は、当技術分野において公知の種々の方法により評価することができる。ある実施形態において、これらの方法を使用してインビトロまたはインビボの細胞または組織中のマイクロＲＮＡレベルを定量する。
ある実施形態において、標的レベルおよび／または活性の変化をマイクロアレイ分析により計測する。ある実施形態において、標的レベルおよび／または活性の変化を、いくつかの市販のＰＣＲアッセイの１つ、例えば、ＴａｑＭａｎ（登録商標）ＭｉｃｒｏＲＮＡ Ａｓｓａｙ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）により計測する。
抗ｍｉＲ化合物のインビトロ活性は、ルシフェラーゼ細胞培養アッセイを使用して評価することができる。このアッセイにおいて、マイクロＲＮＡルシフェラーゼセンサ構築物は、目的マイクロＲＮＡの１つ以上の結合部位およびルシフェラーゼ遺伝子を含有するようにエンジニアリングされる。マイクロＲＮＡがルシフェラーゼセンサ構築物中のそのコグネート部位に結合した場合、ルシフェラーゼ発現が抑制される。適切な抗ｍｉＲが細胞中に導入された場合、それは、標的マイクロＲＮＡに結合し、ルシフェラーゼ発現の抑制を緩和させる。したがって、このアッセイにおいて、目的抗ｍｉＲの有効な阻害剤である抗ｍｉＲは、ルシフェラーゼ発現の増加を引き起こす。
抗ｍｉＲ化合物の活性は、マイクロＲＮＡの標的のｍＲＮＡおよび／またはタンパク質レベルを計測することにより評価することができる。マイクロＲＮＡは、１つ以上の標的ＲＮＡ内のそのコグネーと部位に結合し、標的ＲＮＡの抑制をもたらし、したがって、マイクロＲＮＡの阻害はマイクロＲＮＡの標的のｍＲＮＡまたはタンパク質のレベルの増加（すなわち、脱抑制）をもたらす。１つ以上の標的ＲＮＡの脱抑制は、インビボまたはインビトロで計測することができる。
以下の実施例は、本発明の一部の実施形態をより十分に説明するために提供する。しかしながら、これらは、決して本発明の広い範囲を限定するものと解釈すべきでない。
当業者は、本発見の基礎原理を容易に適合させ、本発明の趣旨から逸脱せずに種々の化合物を設計する。
実施例１
コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチド
ＧａｌＮＡｃ含有化合物を、図２の構造を表Ａに示される修飾オリゴヌクレオチドの３’末端にコンジュゲートすることにより形成した。糖部分、ヌクレオシド間結合、およびヌクレオ塩基を以下のとおり示す：上付き文字「Ｍｅ」は、５−メチルシトシンを示し；下付き文字が続かないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；下付き文字「Ｅ」が続くヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり；下付き文字「Ｓ」が続くヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；下付き文字「Ｌ」が続くヌクレオシドは、ＬＮＡヌクレオシドであり；それぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
ＧａｌＮＡｃコンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドを、インビボ効力、全長非コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドの放出、ならびに肝および組織濃度について評価した。
インビボ効力を決定するため、化合物を、ｍｉＲ−１２２活性により通常抑制される遺伝子の肝アルドラーゼＡ（ＡＬＤＯＡ）の発現を脱抑制するそれらの能力について評価した。ｍｉＲ−１２２の阻害は、ＡＬＤＯＡ発現の増加をもたらし、したがって、ＡＬＤＯＡ ｍＲＮＡレベルを使用してインビボｍｉＲ−１２２阻害活性を計測することができる。化合物をマウスに投与し、ＡＬＤＯＡ ｍＲＮＡレベルを定量的ＰＣＲにより肝臓から単離されたＲＮＡ中で計測した。生理食塩水に対するＡＬＤＯＡ ｍＲＮＡの変化倍率を算出してインビボ効力を決定した。
図３Ａおよび３Ｂにおいて確認することができるとおり、表Ａに示されるＧａｌＮＡｃコンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれは、対応する非コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドよりも強力であった。化合物３８８５６および３８８５３は、非コンジュゲート化合物３８１２８および３８５７７に対して約１０倍の効力の増加を示した。
表Ｂに示されるＬＮＡ含有非コンジュゲートおよびコンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドも試験した。
糖および結合部分を以下のとおり示す：下付き文字が続かないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを示し；下付き文字「Ｌ」が続くヌクレオシドは、ＬＮＡヌクレオシドを示し；それぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
化合物３８８４８および３８８５２を、上記と同一のプロトコルに従ってインビボ効力について試験してｍｉＲ−１２２活性を阻害し、ＡＬＤＯＡ発現を増加させる化合物の能力を評価した。図４Ａに示されるとおり、それぞれの化合物はｍｉＲ−１２２の強力な阻害剤であった一方、ＧａｌＮＡｃコンジュゲート化合物３８８５２は、非コンジュゲート化合物３８８４８よりも大きい効力を示した。
化合物３８６３２を、上記と同一のプロトコルに従ってインビボ効力について試験してｍｉＲ−１２２活性を阻害し、ＡＬＤＯＡ発現を増加させる化合物の能力を評価した。図４Ｂに示されるとおり、それぞれの化合物はｍｉＲ−１２２の強力な阻害剤であった一方、ＧａｌＮＡｃコンジュゲート化合物３８６３２は、非コンジュゲート化合物３８８４８およびコンジュゲート化合物３８８５２の両方よりも大きい効力を示した。この実験において、３８８４８のＥＤ５０は４．２４ｍｇ／ｋｇであり、３８６３２のＥＤ５０は０．３１ｍｇ／ｋｇであり、このことは少なくとも２０倍の効力の改善を実証した。
追加のＧａｌＮＡｃ含有化合物を、図２の構造を３８６４９修飾オリゴヌクレオチドの３’末端にコンジュゲートすることにより作製した。修飾オリゴヌクレオチド３８６４９は、構造
ＡＥ ＭｅＣＥＡＥ ＭｅＣＥ ＭｅＣＥＡＥＴＥＴＧＵＳＣＳＡＣＳＡＣＳＴＣＳＣＳ（配列番号５）
を有し、上付き文字「Ｍｅ」は、５−メチルシトシンを示し；下付き文字が続かないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；下付き文字「Ｅ」が続くヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり；下付き文字「Ｓ」が続くヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
ＧａｌＮＡｃ含有部分および３８６４９の３’末端間の結合は、表Ｃに示されるとおり変動した。例えば、化合物３８３６８において、ＧａｌＮＡｃ含有部分は、ホスホジエステル結合を介して３８６４９の３’末端ヌクレオシドに直接結合しており、図２Ｃに示されるとおり、式中、Ｘは、ホスホジエステル結合であり、ＭＯは、３８６４９である。化合物３８４５８において、ＧａｌＮＡｃ含有部分は、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを介して３８６４９の３’末端ヌクレオシドに結合しており、３８６４９の３’末端ヌクレオシド間はホスホロチオエート結合であり、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドおよびＧａｌＮＡｃ含有部分間はホスホジエステル結合であり、図２Ａに示されるとおり、Ｘ２は、ホスホロチオエート結合であり、ｍは、１であり、Ｎｍは、β−Ｄ−デオキシヌクレオシドであり、Ｘ１は、ホスホジエステル結合であり、ＭＯは、３８６４９である。
表５Ａ、５Ｂ、および５Ｃに示されるとおり、表Ｃの３つのＧａｌＮＡｃコンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれは、非コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドよりも強力であった。化合物３８３６８および３８３７１は、非コンジュゲート３８６４９に対して約３倍の効力の増加を示した（図５Ａ）。それぞれβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド結合基を有する化合物３８４５８および３８４５９は、効力の少なくとも１０倍の増加を示した（図５Ｂ）。それぞれ２’糖修飾結合基を有する化合物３８５９７および３８５９８も、効力の少なくとも１０倍の増加を示した（図５Ｃ）。追加の試験において、最大２０倍の効力の増加が、化合物３８４５９、３８４５８、３８５９７、および３８５９８について観察された。
１ｍｇ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇの用量における化合物３８３６８および３８３７１、ならびに０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、および３ｍｇ／ｋｇの用量における化合物３８４５８および３８４５９の単回皮下投与７日後の肝および腎組織中の非コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドの量も計測した。それぞれの試料を高速液体クロマトグラフィー飛行時間型質量分析（ＨＰＬＣ−ＴＯＦ ＭＳ）に供してオリゴヌクレオチドの長さおよび量を計測した。この方法による定量下限（ＬＬＯＱ）は、０．２〜１．０μｇ／ｇである。
ＧａｌＮＡｃ−コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドは、非コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドの形成の変動速度を有することが見出された。例えば、化合物３８３６８の投与後、１０％未満の化合物３８６４９（非コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチド）が肝臓中で検出された。化合物３８３７１の投与後、化合物３８６４９は化合物３８３７１のいずれの用量においても肝臓中で検出されなかった。逆に、化合物３８４５９の皮下投与７日後、検出された唯一の非コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチド種は、非コンジュゲート３８６４９であり；親化合物３８４５９は検出されなかった。化合物３８４５８の投与後、非コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドが２つの形態：３８６４９、および３８６４９−ＰＯ−Ａ（化合物３８４５８の代謝産物）で検出された。この代謝産物は、非コンジュゲート３８６４９よりも高いレベルにおいて検出された。
０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、および３ｍｇ／ｋｇの用量における化合物３８４５８および３８４５９の単回皮下投与２４時間後の肝臓中の非コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドの量も計測した。抗ｍｉＲレベルは、ＬＣ−ＴＯＦにより計測した。この方法による定量下限（ＬＬＯＱ）は、０．２〜１．０μｇ／ｇである。化合物３８４５９の投与後、肝臓中に存在する総化合物の９０％が非コンジュゲート化合物３８６４９であることが観察された。３８４５８の投与後、肝臓中に存在する総化合物の約４６％が、非コンジュゲート化合物３８６４９であった。したがって、非コンジュゲート化合物３８６４９は、化合物３８４５８よりも急速に化合物３８４５９から放出される。
オリゴヌクレオチドは、一般に、腎組織中で最大レベルに蓄積し、次いで肝組織中で蓄積する。非コンジュゲート化合物に対し、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートが腎組織と比較して肝組織中の化合物の蓄積を変更したか否かを決定するため、腎組織中の非コンジュゲート３８６４９の量も計測した。上記のとおり、化合物３８４５９の投与後、肝臓中に見出される総化合物の１００％は、非コンジュゲート３８６４９であり、このことは、ＧａｌＮＡｃ−コンジュゲート化合物３８４５９からの３８６４９の完全な放出を示す。化合物３８４５９の投与後、化合物３８６４９は、化合物３８６４９の投与後の化合物３８６４９の蓄積に対し、肝臓に比べて腎臓中であまり蓄積しなかった（すなわち、より低い腎臓：肝臓比を示した）。したがって、化合物３８４５９は、非コンジュゲート３８６４９と比較して化合物３８６４９を肝臓に優先的に送達し得る一方、腎臓への送達を最小化する。
化合物３８４５９についての作用の発生および持続時間は、インビボ試験において評価した。マウス群に、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、および３ｍｇ／ｋｇにおける単回皮下（ＳＣ）用量の化合物３８４５９を与えた。追加のマウス群に、１０ｍｇ／ｋｇの用量における非コンジュゲート化合物３８６４９を投与した。それぞれの処理からの動物群を、１、２、３、４、５、６、１４、２１、２８、および５６日目のそれぞれで安楽死させた。ＲＮＡを肝臓から単離し、ＡＬＤＯＡ ｍＲＮＡレベルをリアルタイムＰＣＲにより計測した。それぞれの群についての平均ＡＬＤＯＡレベルを算出した。対照群（ＰＢＳ処理）に対する変化倍率を表Ｄに示す。
表Ｄのデータは、化合物３８４５９、および化合物３８６４９が、化合物の単回投与１日後という早さのＡＬＤＯＡ脱抑制により証明されるとおり、作用の急速な発生を有することを実証する。さらに、ＡＬＤＯＡ脱抑制は、化合物の単回投与後少なくとも８週間維持される。
これらのデータは、非コンジュゲート３８６４９化合物よりも少なくとも１０倍強力であるＧａｌＮＡｃ−コンジュゲート化合物３８４５９が、有意に低い肝組織濃度においてこの効力を達成し、肝組織に優先的に送達されることを実証する。さらに、化合物３８４５９は、作用の急速な発生、および少なくとも８週間の作用の持続時間を示す。
実施例２
コンジュゲート短鎖修飾オリゴヌクレオチド
ＧａｌＮＡｃ含有化合物を、図２の構造を表Ｅに示される修飾オリゴヌクレオチドの３’末端にコンジュゲートすることにより形成した。糖部分、ヌクレオシド間結合、およびヌクレオ塩基を以下のとおり示す：下付き文字が続かないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；下付き文字「Ｓ」が続くヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
インビボ効力を決定するため、化合物を、肝アルドラーゼＡ（ＡＬＤＯＡ）の発現を脱抑制するそれらの能力について評価した。化合物をマウスに投与し、ＡＬＤＯＡ ｍＲＮＡレベルを定量的ＰＣＲにより肝臓から単離されたＲＮＡにおいて計測した。生理食塩水に対するＡＬＤＯＡ ｍＲＮＡの変化倍率を算出してインビボ効力を決定した（図６Ａおよび６Ｂならびに７Ａおよび７Ｂ）。それらの実験の結果から算出されたＥＤ５０（ＡＬＤＯＡ脱抑制が最大の５０％である化合物の濃度）およびＥＤ９０（ＡＬＤＯＡ脱抑制が最大の９０％である化合物の濃度）を、表ＦおよびＧに示す。
表Ｆに示されるとおり、本発明によるＧａｌＮＡｃコンジュゲーションは、８ｍｅｒの抗ｍｉＲ−１２２化合物のＥＤ５０およびＥＤ９０を少なくとも１００倍だけ改善した。表Ｇに示されるとおり、本発明によるＧａｌＮＡｃコンジュゲーションは、１３ｍｅｒの抗ｍｉＲ−１２２化合物のＥＤ５０およびＥＤ９０を少なくとも１０倍だけ改善した。
別のｍｉＲ−１２２標的遺伝子、ＣＤ３２０の脱抑制も、化合物３８６３４および３８９９８について決定した。結果は、表Ｆに示されるＡＬＤＯＡについて得られた結果と同様であった：本発明によるＧａｌＮＡｃコンジュゲーションは、実験１および２においてそれぞれＥＤ５０を３４３倍および２７２倍だけを改善し、実験１および２においてそれぞれＥＤ９０を４９２倍および５４５倍だけ改善した。
本明細書に記載のＧａｌＮＡｃコンジュゲーションは、コレステロール低下効力も改善し、これは、ＧａｌＮＡｃを含む化合物についても観察された。実験１からの例示的な結果を図８Ａおよび８Ｂに示す。ＧａｌＮＡｃコンジュゲートである化合物３８６３３および３８６３４は、ＧａｌＮＡｃを欠く化合物３８５９１および３８９９８よりも強力であった。同様の結果が実験２について得られた（データ示さず）。
実施例３
コンジュゲートＲＮアーゼＨ修飾オリゴヌクレオチド
本明細書に記載のＧａｌＮＡｃコンジュゲーションアプローチは、タンパク質コードＲＮＡに標的化される修飾オリゴヌクレオチドの効力も改善した。試験オリゴヌクレオチドは、ＰＴＥＮ ｍＲＮＡに標的化される５−１０−５ ２’−ＭＯＥ修飾「ギャップマー」であった。ＰＴＥＮ ｍＲＮＡへのギャップマー修飾オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションは、ＲＮアーゼＨによるｍＲＮＡの開裂をもたらし、こうしてＰＴＥＮ ｍＲＮＡのレベルを低減させる。化合物の効力を、ＰＴＥＮ ｍＲＮＡのレベルを低減させるその能力により評価する。
ＧａｌＮＡｃ含有化合物を、図２の構造を表Ｈに示される修飾オリゴヌクレオチドの３’末端にコンジュゲートすることにより形成した。
糖部分、ヌクレオシド間結合、およびヌクレオ塩基を以下のとおり示す：上付き文字「Ｍｅ」は、５−メチルシトシンを示し；下付き文字が続かないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；下付き文字「Ｅ」が続くヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；それぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
単回用量の非コンジュゲート化合物を、１、３、および１０ｍｇ／ｋｇの用量においてマウス（ｎ＝３）に皮下投与した。単回用量のコンジュゲート化合物を、０．０３、０．１、０．３、１、３、および１０ｍｇ／ｋｇの用量においてマウス（ｎ＝６）に皮下投与した。投与２日後、試験を終了させ、ＲＮＡをそれぞれの動物から回収された肝組織から抽出した。定量的ＰＣＲを実施してＰＴＥＮ ｍＲＮＡのレベルを計測した。表Ｉに示されるとおり、化合物３８６３１は、３つの試験用量のいずれにおいてもＰＴＥＮ ｍＲＮＡを有意に低減させなかった。しかしながら、３および１０ｍｇ／ｋｇの用量において、ＧａｌＮＡｃ含有化合物は、ＰＴＥＮ ｍＲＮＡを有意に低減させた。
実施例４
コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチド
抗ｍｉＲ−２１修飾オリゴヌクレオチドを、ＧａｌＮＡｃ含有部分にコンジュゲートしてコンジュゲーションがオリゴヌクレオチドの効力を改善するか否かを決定した。
ＧａｌＮＡｃ含有化合物を、図１の構造を３６７３１修飾オリゴヌクレオチドの３’末端にコンジュゲートすることにより形成した。化合物４０６０１において、ＧａｌＮＡｃ含有部分は、β−Ｄ−デオキシヌクレオシドを介して３６７３１の３’末端ヌクレオシドに結合しており、３６７３１の３’末端ヌクレオシドおよびβ−Ｄ−デオキシヌクレオシド間はホスホジエステル（ＰＯ）結合であり、β−Ｄ−デオキシヌクレオシド（β−Ｄ−デオキシアデノシン（Ａ））およびＧａｌＮＡｃ含有部分間はホスホジエステル（ＰＯ）結合であり、図２Ａに示されるとおり、式中、Ｘ２は、ホスホジエステル結合であり、ｍは、１であり、Ｎｍは、β−Ｄ−デオキシヌクレオシド（Ａ）であり、Ｘ１は、ホスホジエステル結合であり、ＭＯは、化合物３６７３１である。化合物４０３７９において、ＧａｌＮＡｃ含有部分は、３６７３１の３’末端ヌクレオシドおよびＧａｌＮＡｃ含有部分間のホスホジエステル（ＰＯ）結合を介して３６７３１の３’末端ヌクレオシドに結合しており、図２Ｃに示されるとおり、式中、Ｘは、ホスホジエステル結合であり、ＭＯは、化合物３６７３１である。
４０６０１：ＡＥＣＳＡＥＴＥＣＳＡＥＧＥＴＥＣＳＴＧＡＵＳＡＡＧＣＳＵＳＡＳ−ＰＯ−Ａ−ＰＯ−ＧａｌＮＡｃ（配列番号８）
４０３７９：ＡＥＣＳＡＥＴＥＣＳＡＥＧＥＴＥＣＳＴＧＡＵＳＡＡＧＣＳＵＳＡＳ−ＰＯ−ＧａｌＮＡｃ（配列番号８）
３６７３１および４０６０１の肝濃度を、３〜５匹の野生型Ｃ７／Ｂｌ６マウス中の化合物の単回皮下投与４８時間および１６８時間後に計測した。３６７３１の修飾オリゴヌクレオチド部分を１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、および１０ｍｇ／ｋｇにおいて投与し、４０６０１を０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、および１０ｍｇ／ｋｇにおいて投与した。それぞれの試料を液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）に供してオリゴヌクレオチドの長さおよび量を計測した。表Ｊおよび図９Ａに示されるとおり、修飾オリゴヌクレオチドの肝濃度は、両方の時点において類似用量の３６７３１の投与後よりも４０６０１の投与後に有意に高かった。図９Ａおよび表Ｊに示される４０６０１のそれぞれの濃度は、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより検出された全ての修飾オリゴヌクレオチド含有種の総濃度である。修飾オリゴヌクレオチドのコンジュゲーションは、肝中の化合物の用量比例増加をもたらした。
修飾オリゴヌクレオチド３６７３１を放出する４０６０１の代謝も評価した。化合物４０６０１の単回皮下投与４８時間後までに、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより同定された優勢種が３６７３１であることが見出された。表Ｊおよび図９Ｂは、化合物３６７３１または化合物４０６０１の単回皮下投与後のマウス肝中の修飾オリゴヌクレオチド３６７３１の濃度を示す。表Ｊは、４０６０１の投与後にマウス肝中で検出された３６７３１種の割合を示す（ＣＶ％＝変動係数）。
４０３７９の肝濃度も、５匹の野生型Ｃ７／Ｂｌ６マウス中の化合物の単回皮下投与４８時間および１６８時間後に計測した。化合物を、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、および１０ｍｇ／ｋｇにおいて投与した。それぞれの試料を液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）に供してオリゴヌクレオチドの長さおよび量を計測した。化合物４０６０１について観察されたのと同様、化合物の肝濃度は、両方の時点において、類似用量の３６７３１の投与後よりも、４０３７９の投与後に有意に高かった。修飾オリゴヌクレオチドのコンジュゲーションは、肝中の化合物の用量比例増加をもたらした。修飾オリゴヌクレオチド３６７３１を放出する４０３７９の代謝も評価した。化合物４０６０１の単回皮下投与４８時間後までに、化合物３６３７１が存在するが、化合物４０３７９の投与後に存在する化合物３６３７１の量に対して低濃度において存在することが見出された（データ示さず）。化合物４０６０１の少なくとも５０％が４８または１６８時間後に化合物３６７３１として存在した一方、化合物４０３７９の約１５〜３０％が化合物３６７３１として存在した。したがって、化合物４０３７９が非コンジュゲート化合物３６７３１の放出をもたらすいくらかの代謝を受ける一方、非コンジュゲート化合物の放出は、化合物４０６０１について観察されるもの未満である。これらのデータは、ＰＯ−Ａ−ＰＯリンカーの存在がＧａｌＮＡｃ含有化合物からの非コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドの放出を容易にすることを示唆する。
公知のｍＲＮＡ標的に対するｍｉＲ−２１の阻害の効果を評価するため、正常マウス肝中のＳＰＧ２０、Ｒｎｆ１６７およびＴａｆ７の脱抑制を、単回用量の３６７３１（１および１０ｍｇ／ｋｇ）または単回用量の４０６０１（０．１、１および１０ｍｇ／ｋｇ）を野生型マウスに投与した後に計測した。肝臓を、投与４または７日後に回収した。表Ｋに示されるとおり、３６７３１の単回投与７日後にＳＰＧ２０およびＴａｆ７について穏やかな標的遺伝子脱抑制が観察された一方、Ｒｎｆ１６７は、両方の時点において最大用量において脱抑制された。４０６０１の単回用量投与は、両方の時点においてＳＰＧ２０およびＴａｆ７の両方の改善された標的脱抑制ならびにＲｎｆ１６７の類似の脱抑制を示した。改善された標的脱抑制は、標的遺伝子発現のより大きい変化倍率および脱抑制の早期発生の両方を含んだ。
抗ｍｉＲ−２１化合物の送達および効力を、マウス中の肝細胞癌腫（ＨＣＣ）のモデリングに使用される肝特異的ドキシサイクリン調節癌遺伝子発現系中で評価した。このモデルにおいて、トランスジェニックマウスは、ドキシサイクリン抑制性の肝特異的プロモーターの制御下で癌遺伝子Ｈ−ｒａｓＧ１２Ｖを発現する（Ｔｅｔ−ｏ−Ｈ−ｒａｓＧ１２Ｖ；ＬＡＰ−ＴＴＡ；例えば、Ｌｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２０１３参照）。ドキシサイクリンを除去した場合、Ｈ−ｒａｓＧ１２Ｖトランス遺伝子発現が肝中で活性化され、マウスは肝腫瘍を発症する。ＧａｌＮＡｃ受容体ＡＳＧＲ１およびＡＳＧＲ２の発現が、ドキシサイクリンの除去後少なくとも６週間高いままである一方、ｍｉＲ−２１発現が形態学的に検出可能な疾患の発生とともに増加することが確認された（データ示さず）。
肝腫瘍への化合物４０６０１および３６７３１の送達を実証するため、マウスが顕著な腫瘍量を有するドキシサイクリン除去４週間後に化合物をマウスに投与した。肝腫瘍組織（腫瘍を含有する全肝）中の３６７３１および４０６０１の濃度を、１群当たり５匹のマウス中の化合物の２回の投与の１６８時間後において計測した。第１の用量を０時間において与え、第２の用量を７２時間において与え、腫瘍組織を１６８時間において回収した。化合物３６７３１を１０ｍｇ／ｋｇにおいて投与した一方、化合物４０６０１を０．１、１、および１０ｍｇ／ｋｇにおいて投与した。表Ｌに示されるとおり、達成された総薬物レベルは、３６７３１と比較して４０６０１について８０％高かった。化合物４０６０１からの３６７３１修飾オリゴヌクレオチドの放出は、総計の４４〜７０％であった。
正常肝中で評価された３つのｍｉＲ−２１標的遺伝子についての標的脱抑制を、肝腫瘍組織中でも評価した。統計的有意性は達成されなかったが、ビヒクルと比較して処理肝腫瘍組織中の脱抑制に向かう傾向が存在した。表Ｍは、化合物４０６０１または化合物３６７３１の投与後の肝腫瘍組織中のＳＰＧ２１、Ｒｎｆ１６７、およびＴａｆ７の脱抑制を示す。
さらに、肝腫瘍組織中のＡＦＰレベルを化合物４０６０１または化合物３６７３１の投与後に評価した。１０ｍｇ／ｋｇの４０６０１の週２回の用量を受けたマウス中のＡＦＰレベルの低減に向かう傾向が存在した。
次に、化合物４０６０１および３６７３１の効力をＴｅｔ−ｏ−Ｈ−ｒａｓＧ１２Ｖ；ＬＡＰ−ＴＴＡトランスジェニックマウス中で試験した。腫瘍進行は、６週齢の雄マウスからドキシサイクリンを除去することにより開始させた。ドキシサイクリン除去２週間後、マウスを５つの処理群に分けた：ビヒクル、３６７３１ ２５ｍｇ／ｋｇ週２回（ＢＩＷ）、４０６０１ ２５ｍｇ／ｋｇ ＢＩＷ、４０６０１ ２５ｍｇ／ｋｇ週１回（Ｑ７Ｄ）、および４０６０１ ５ｍｇ／ｋｇ ＢＩＷ。マウスを４週間処理した。肝形態（斑状外観）を腫瘍形成の指標として使用し、処理群を把握していない調査者により試験の終了時にスコアリングした。表Ｎに示されるとおり、ビヒクル群の動物の大多数（６匹／８匹）が斑状肝を有した一方、２５ｍｇ／ｋｇの３６７３１ ＢＩＷ群の動物の約半数（５匹／９匹）が斑状肝を有した。より斑状外観の発生率の大きい低減は、化合物４０６０１のＢＩＷ投与群において確認され、２５ｍｇ／ｋｇの４０６０１ ＢＩＷ群の３匹／８匹および５ｍｇ／ｋｇの４０６０１ ＢＩＷ群の２匹／８匹が斑状肝を示した。２５ｍｇ／ｋｇの４０６０１の週１回投与は、ビヒクルと類似の斑状外観頻度（８匹／１０匹）をもたらした。
試験終了時、肝腫瘍組織ＡＦＰをβ−アクチンに正規化されるウエスタンブロット分析による試料中の肝腫瘍のマーカーとして評価した。表Ｏに示されるとおり、ＡＦＰは、２５ｍｇ／ｋｇの４０６０１ ＢＩＷによる処理により有意に低減した。
３６７３１または４０６０１投与後の標的脱抑制を、トランスジェニックマウスの肝腫瘍組織中で評価した。表Ｐに示されるとおり、ＳＰＧ２０およびＲｎｆ１６７転写物の両方が、試験終了時に３６７３１および４０６０１ ＢＩＷ投与群からの試料中で脱抑制された。Ｔａｆ７も評価したが、一貫した脱抑制を示さなかった（データ示さず）。
最後に、腫瘍薬物濃度を試験終了時に評価した。表Ｑに示されるとおり、３６７３１および総４０６０１の同等レベルが達成された。４０６０１からの３６７３１修飾オリゴヌクレオチドの放出は、３つ全ての用量における総計の約５０％であった。
より進行した疾患から処理を開始して効力パラメータに対する影響が存在したか否かを評価するため、同等の設計を有する試験を開始し、但し、処理をドキシサイクリン除去の４週間後から開始し、マウスを３週間のみ処理した。この実験において、週１回投与群を含めなかった。ＡＦＰおよび標的遺伝子評価を試験終了時に計測した。４０６０１、２５ｍｇ／ｋｇ ＢＩＷの高用量群において、ＡＦＰレベルの低減に向かう傾向が観察された（データ示さず）。標的エンゲージメントも処理群において観察され、２５ｍｇ／ｋｇの３６７３１および４０６０１におけるＴａｆ７について統計的有意性が達成された（データ示さず）。
本明細書において実証されるとおり、ＧａｌＮＡｃ含有部分への修飾オリゴヌクレオチドのコンジュゲーションは、修飾オリゴヌクレオチドの改善された効力をもたらす。効力は、例えば、図２Ａおよび２Ｂに示されるとおり、ヌクレオシド結合基を介してＧａｌＮＡｃ含有部分を修飾オリゴヌクレオチドに結合させることによりさらに改善することができる。さらに、ヌクレオシド結合基の使用は、コンジュゲート構造からの非コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドのより完全な放出を生じさせる。
実施例５
コンジュゲート短鎖修飾オリゴヌクレオチド
コレステロール含有化合物を、コレステロールを表Ｒに示される修飾オリゴヌクレオチドの３’末端にコンジュゲートすることにより形成した。糖部分、ヌクレオシド間結合、およびヌクレオ塩基を以下のとおり示す：下付き文字が続かないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；下付き文字「Ｓ」が続くヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、但し、ホスホジエステル結合である下付き文字（Ｏ）により示されるヌクレオシド間結合を除く。
インビボ効力を決定するため、化合物を、肝アルドラーゼＡ（ＡＬＤＯＡ）の発現を脱抑制するそれらの能力について評価した。化合物をマウスに投与し、ＡＬＤＯＡ ｍＲＮＡレベルを定量的ＰＣＲにより肝臓から単離されたＲＮＡにおいて計測した。生理食塩水に対するＡＬＤＯＡ ｍＲＮＡの変化倍率を算出してインビボ効力を決定した。それらの実験の結果から算出されたＥＤ５０（ＡＬＤＯＡ脱抑制が最大の５０％である化合物の濃度）およびＥＤ９０（ＡＬＤＯＡ脱抑制が最大の９０％である化合物の濃度）を、表Ｓに示す。
表Ｓに示されるとおり、本発明によるコレステロールコンジュゲーションは、８ｍｅｒの抗ｍｉＲ−１２２化合物のＥＤ５０およびＥＤ９０を少なくとも３０倍だけ改善した。
別のｍｉＲ−１２２標的遺伝子、ＣＤ３２０の脱抑制も、化合物３８０７０および３８９９８について決定した。結果は、ＡＬＤＯＡについて得られた結果と同様であった（データ示さず）。
本明細書に記載のコレステロールコンジュゲーションは、コレステロール低下効力も改善した。ほとんどの試験濃度において、化合物３８０７０は、コレステロールを同一濃度の化合物３８９９８よりも大きい程度で低減させた（データ示さず）。
本明細書に記載のものに加え、本発明の種々の改変形態は、上記説明から当業者に明らかである。このような改変形態も、添付の特許請求の範囲の範囲内であるものとする。本出願において引用されるそれぞれの参照文献（例として、限定されるものではないが、雑誌論文、米国および非米国特許、特許出願公開、国際特許出願公開、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）寄託番号など）は、参照により全体として本明細書に具体的に組み込まれる。

Claims (91)

  1. 構造：
    Ｌｎ−リンカー−Ｘ−Ｎｍ−Ｘ−ＭＯ
    を有し、
    それぞれのＬは、独立して、リガンドであり、かつｎは、１〜１０であり；それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、かつｍは、１〜５であり；それぞれのＸは、独立して、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである化合物。
  2. 構造：
    Ｌｎ−リンカー−Ｘ−Ｎｍ−Ｙ−ＭＯ
    を有し、
    それぞれのＬは、独立して、リガンドであり、かつｎは、１〜１０であり；それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、かつｍは、１〜５であり；Ｘは、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；Ｙは、ホスホジエステル結合であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである、請求項１に記載の化合物。
  3. 構造：
    Ｌｎ−リンカー−Ｙ−Ｎｍ−Ｙ−ＭＯ
    を有し、
    それぞれのＬは、独立して、リガンドであり、かつｎは、１〜１０であり；それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、かつｍは、１〜５であり；それぞれのＹは、ホスホジエステル結合であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである、請求項１または２に記載の化合物。
  4. ｎが１を上回る場合、Ｌｎ−リンカーは、構造：
    ［式中、それぞれのＬは、独立して、リガンドであり；ｎは、１〜１０であり；Ｓは、足場であり；ならびにＱ’およびＱ’’は、独立して、結合基である］
    を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
  5. Ｑ’およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸からそれぞれ独立して選択される、請求項４に記載の化合物。
  6. 前記足場は、２、３、４、または５つのリガンドを修飾オリゴヌクレオチドに結合させる、請求項４または５に記載の化合物。
  7. 前記足場は、３つのリガンドを修飾オリゴヌクレオチドに結合させる、請求項４または５に記載の化合物。
  8. 構造：
    ［式中、
    Ｂは、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−、−Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−Ｎｍ−Ｘ−、および−Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−Ｎｍ−Ｙ−から選択され；
    ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドであり；
    ＲＮは、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、およびベンジルから選択され；
    Ｚ、Ｚ’、およびＺ’’は、ＯおよびＳからそれぞれ独立して選択され；
    それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり；
    ｍは、１〜５であり；
    Ｘは、ホスホジエステル結合およびホスホロチオエート結合から選択され；
    Ｙは、ホスホジエステル結合であり；および
    波線は、前記リンカーおよびリガンドの残部への連結を示す］
    を含む、請求項１〜７または８５〜９１のいずれか一項に記載の化合物。
  9. ｎは、１〜５、１〜４、１〜３、または１〜２である、請求項１〜８または８５〜９１のいずれか一項に記載の化合物。
  10. ｎは、３である、請求項１〜８または８５〜９１のいずれか一項に記載の化合物。
  11. 少なくとも１つのリガンドは、炭水化物、コレステロール、脂質、リン脂質、抗体、リポタンパク質、ホルモン、ペプチド、ビタミン、ステロイド、およびカチオン脂質から選択される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物。
  12. 少なくとも１つのリガンドは、マンノース、グルコース、ガラクトース、リボース、アラビノース、フルクトース、フコース、キシロース、Ｄ−マンノース、Ｌ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ガラクトース、Ｄ−グルコース、Ｌ−グルコース、Ｄ−リボース、Ｌ−リボース、Ｄ−アラビノース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−フルクトース、Ｌ−フルクトース、Ｄ−フコース、Ｌ−フコース、Ｄ−キシロース、Ｌ−キシロース、アルファ−Ｄ−マンノフラノース、ベータ−Ｄ−マンノフラノース、アルファ−Ｄ−マンノピラノース、ベータ−Ｄ−マンノピラノース、アルファ−Ｄ−グルコフラノース、ベータ−Ｄ−グルコフラノース、アルファ−Ｄ−グルコピラノース、ベータ−Ｄ−グルコピラノース、アルファ−Ｄ−ガラクトフラノース、ベータ−Ｄ−ガラクトフラノース、アルファ−Ｄ−ガラクトピラノース、ベータ−Ｄ−ガラクトピラノース、アルファ−Ｄ−リボフラノース、ベータ−Ｄ−リボフラノース、アルファ−Ｄ−リボピラノース、ベータ−Ｄ−リボピラノース、アルファ−Ｄ−フルクトフラノース、アルファ−Ｄ−フルクトピラノース、グルコサミン、ガラクトサミン、シアル酸、およびＮ−アセチルガラクトサミンから選択される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物。
  13. 少なくとも１つのリガンドは、Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ−ホルミルガラクトサミン、Ｎ−プロピオニル−ガラクトサミン、Ｎ−ｎ−ブタノイルガラクトサミン、およびＮ−イソ−ブタノイル−ガラクトサミンから選択される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物。
  14. それぞれのリガンドは、Ｎ−アセチルガラクトサミンである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物。
  15. 構造：
    ［式中、それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、かつｍは、１〜５であり；Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである］
    を有する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物。
  16. Ｘ１およびＸ２の少なくとも一方は、ホスホジエステル結合である、請求項５１または１５に記載の化合物。
  17. Ｘ１およびＸ２のそれぞれは、ホスホジエステル結合である、請求項１５に記載の化合物。
  18. ｍは、１である、請求項１〜１７または８５〜９１のいずれか一項に記載の化合物。
  19. ｍは、２、３、４、または５である、請求項１〜１７または８５〜９１のいずれか一項に記載の化合物。
  20. Ｎｍは、Ｎ’ｐＮ’’であり、それぞれのＮ’は、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、かつｐは、０〜４であり；およびＮ’’は、非修飾糖部分を含むヌクレオシドである、請求項１〜１９または８５〜９１のいずれか一項に記載の化合物。
  21. ｐは、０である、請求項２０に記載の化合物。
  22. ｐは、１、２、３、または４である、請求項２０に記載の化合物。
  23. それぞれのＮ’は、非修飾糖部分を含む、請求項２２のいずれか一項に記載の化合物。
  24. 前記非修飾糖部分は、独立して、β−Ｄ−リボースまたはβ−Ｄ−デオキシリボースである、請求項２０〜２３のいずれか一項に記載の化合物。
  25. Ｎ’’は、プリンヌクレオ塩基を含む、請求項２０〜２４のいずれか一項に記載の化合物。
  26. Ｎ’は、プリンヌクレオ塩基を含む、請求項２０または２２〜２５のいずれか一項に記載の化合物。
  27. 前記プリンヌクレオ塩基は、アデニン、グアニン、ヒポキサンチン、キサンチン、および７−メチルグアニンから選択される、請求項２５または２６に記載の化合物。
  28. Ｎ’’は、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンまたはβ−Ｄ−デオキシリボグアノシンである、請求項２０〜２７のいずれか一項に記載の化合物。
  29. Ｎ’’は、ピリミジンヌクレオ塩基を含む、請求項２０〜２４のいずれか一項に記載の化合物。
  30. Ｎ’は、ピリミジンヌクレオ塩基を含む、請求項２０または２２〜２５のいずれか一項に記載の化合物。
  31. 前記ピリミジンヌクレオ塩基は、シトシン、５−メチルシトシン、チミン、ウラシル、および５，６−ジヒドロウラシルから選択される、請求項２９または３０に記載の化合物。
  32. それぞれのｎの前記糖部分は、β−Ｄ−リボース、β−Ｄ−デオキシリボース、２’−Ｏ−メトキシ糖、２’−Ｏ−メチル糖、２’−フルオロ糖、および二環式糖部分から独立して選択される、請求項１〜３１または８５〜９１のいずれか一項に記載の化合物。
  33. それぞれの二環式糖部分は、ｃＥｔ糖部分、ＬＮＡ糖部分、およびＥＮＡ糖部分から独立して選択される、請求項３２に記載の化合物。
  34. 前記ｃＥｔ糖部分は、Ｓ−ｃＥｔ糖部分である、請求項３３に記載の化合物。
  35. 前記ｃＥｔ糖部分は、Ｒ−ｃＥｔ糖部分である、請求項３３に記載の化合物。
  36. 前記修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、標的ＲＮＡに相補的である、請求項１〜３５または８５〜９１のいずれか一項に記載の化合物。
  37. 前記標的ＲＮＡは、マイクロＲＮＡである、請求項３６に記載の化合物。
  38. 前記標的ＲＮＡは、メッセンジャーＲＮＡである、請求項３６に記載の化合物。
  39. 前記標的ＲＮＡは、プレメッセンジャーＲＮＡである、請求項３６に記載の化合物。
  40. 前記標的ＲＮＡは、長鎖非コードＲＮＡである、請求項３６に記載の化合物。
  41. 前記修飾オリゴヌクレオチドは、第２の修飾オリゴヌクレオチドにハイブリダイズされ、前記第２の修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、前記修飾オリゴヌクレオチドの前記ヌクレオ塩基配列に相補的である、請求項３８〜４１のいずれか一項に記載の化合物。
  42. 前記標的ＲＮＡは、ヒト標的ＲＮＡである、請求項３６〜４０のいずれか一項に記載の化合物。
  43. 前記修飾オリゴヌクレオチドの前記ヌクレオ塩基配列は、前記標的ＲＮＡのヌクレオ塩基配列に少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％相補的である、請求項３６〜４２のいずれか一項に記載の化合物。
  44. 前記修飾オリゴヌクレオチドの前記ヌクレオ塩基配列は、マイクロＲＮＡのヌクレオ塩基配列と部分的に同一である、請求項１〜３５または８５〜９１のいずれか一項に記載の化合物。
  45. 前記修飾オリゴヌクレオチドの前記ヌクレオ塩基配列は、前記マイクロＲＮＡの前記ヌクレオ塩基配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％同一である、請求項４４に記載の化合物。
  46. 前記マイクロＲＮＡは、ヒトマイクロＲＮＡである、請求項４１に記載の化合物。
  47. 前記修飾オリゴヌクレオチドは、７〜１０個、７〜１２個、８〜２５個、１２〜２５個、１５〜２５個、１５〜２２個、または１７〜２２個の結合ヌクレオシドからなる、請求項１〜４６または８５〜９１のいずれか一項に記載の化合物。
  48. 前記修飾オリゴヌクレオチドは、修飾糖部分を有する少なくとも１つのヌクレオシドを含む、請求項１〜４７または８５〜９１のいずれか一項に記載の化合物。
  49. 前記修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオシドは、修飾糖部分を含む、請求項１〜４７または８５〜９１のいずれか一項に記載の化合物。
  50. 前記修飾オリゴヌクレオチドは、修飾糖部分を有する複数のヌクレオシド、および非修飾糖部分を有する複数のヌクレオシドを含む、請求項１〜４８または８５〜９１のいずれか一項に記載の化合物。
  51. それぞれの修飾糖部分は、同一の修飾糖部分である、請求項４８〜５０のいずれか一項に記載の化合物。
  52. それぞれの修飾糖部分は、２’−Ｏ−メチル糖部分、２’−Ｏ−メトキシエチル糖部分、２’−フルオロ糖部分、および二環式糖部分から独立して選択される、請求項４８〜５１のいずれか一項に記載の化合物。
  53. それぞれの二環式糖部分は、ｃＥｔ糖部分およびＬＮＡ糖部分から独立して選択される、請求項５２に記載の化合物。
  54. それぞれの非修飾糖部分は、β−Ｄ−デオキシリボースおよびβ−Ｄ−リボースから独立して選択される、請求項５０または５０〜５３のいずれか一項に記載の化合物。
  55. 前記修飾オリゴヌクレオチドは、複数の非二環式ヌクレオシドおよび複数の二環式ヌクレオシドを含む、請求項１〜５０、５２〜５４、または８５〜９１のいずれか一項に記載の化合物。
  56. それぞれの非二環式ヌクレオシドは、同一タイプの糖部分を有する、請求項５５に記載の化合物。
  57. 少なくとも２つの非二環式ヌクレオシドは、互いに異なる糖部分を含む、請求項５５に記載の化合物。
  58. それぞれの非二環式ヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、β−Ｄ−リボヌクレオシド、２’−Ｏ−メチルヌクレオシド、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド、および２’−フルオロヌクレオシドから独立して選択される、請求項５５〜５７のいずれか一項に記載の化合物。
  59. それぞれの二環式ヌクレオシドは、同一タイプの糖部分を有する、請求項５５〜５７のいずれか一項に記載の化合物。
  60. 少なくとも２つの二環式ヌクレオシドは、互いに異なる糖部分を有する、請求項５５〜５７のいずれか一項に記載の化合物。
  61. それぞれの二環式ヌクレオシドは、二環式ヌクレオシドから独立して選択され、ｃＥｔヌクレオシド、およびＬＮＡヌクレオシド、およびＥＮＡヌクレオシドから選択される、請求項５９または６０に記載の化合物。
  62. それぞれのｃＥｔヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドである、請求項６１に記載の化合物。
  63. 前記修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１つの結合は、修飾ヌクレオシド間結合である、請求項１〜６２または８５〜９１のいずれか一項に記載の化合物。
  64. 前記修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオシド間結合は、修飾ヌクレオシド間結合である、請求項１〜６２または８５〜９１のいずれか一項に記載の化合物。
  65. 前記修飾ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項６３または６４に記載の化合物。
  66. 前記修飾オリゴヌクレオチドは、修飾ヌクレオ塩基を含む、請求項１〜６５または８５〜９１のいずれか一項に記載の化合物。
  67. 前記修飾オリゴヌクレオチドは、５−メチルシトシンを含む、請求項１〜６５または８５〜９１のいずれか一項に記載の化合物。
  68. 前記修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのシトシンは、５−メチルシトシンである、請求項１〜６５または８５〜９１のいずれか一項に記載の化合物。
  69. 細胞を請求項１〜６８または８５〜９１のいずれか一項に記載の化合物と接触させることを含む方法。
  70. 前記細胞は、インビボである、請求項６９に記載の方法。
  71. 前記細胞は、インビトロである、請求項６９に記載の方法。
  72. 前記細胞は、肝臓細胞である、請求項６９〜７１のいずれか一項に記載の方法。
  73. 前記細胞は、肝細胞である、請求項６９〜７１のいずれか一項に記載の方法。
  74. 修飾オリゴヌクレオチドの効力を改善する方法であって、
    ａ．構造Ｌｎ−リンカー−Ｘ−Ｎｍ−Ｘ−ＭＯを有し、それぞれのＬは、独立して、リガンドであり、かつｎは、１〜１０であり；それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、かつｍは、１〜５であり；それぞれのＸは、独立して、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである化合物を形成すること；
    ｂ．それにより、非コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドに対する前記修飾オリゴヌクレオチドの効力を改善すること
    を含む方法。
  75. 構造
    ［式中、それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、かつｍは、１〜５であり；Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである］
    を有する化合物を作製する方法であって、
    式ＩＶ；
    に示されるコンジュゲートを含有する固体担体を提供するステップ；
    反応性ヒドロキシルを産生するために有効な条件下でＤＭＴ基を脱保護するステップ；
    逐次ホスホラミダイトカップリングステップを実施してＮｍを形成するステップ；
    逐次ホスホラミダイトカップリングステップを実施して前記修飾オリゴヌクレオチドを形成するステップ；および
    前記固体担体からコンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドを放出させるステップ
    を含む方法。
  76. 対象に請求項１〜６８または８５〜９１のいずれか一項に記載の化合物を投与することを含む方法。
  77. 前記対象は、ヒトである、請求項７６に記載の方法。
  78. 前記化合物は、医薬組成物中に存在する、請求項７６または７７に記載の方法。
  79. 前記対象は、肝臓細胞中に存在する標的ＲＮＡに関連する疾患を有する、請求項７６〜７８のいずれか一項に記載の方法。
  80. 治療法において使用される、請求項１〜６８または８５〜９１のいずれか一項に記載の化合物。
  81. ｍは、２である、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の化合物。
  82. ｐは、１であり、Ｎ’およびＮ’’は、それぞれ、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンである、請求項２１に記載の化合物。
  83. Ｎ’およびＮ’’は、ホスホジエステル結合により結合している、請求項８２に記載の化合物。
  84. ｐは、１、２、３、または４であり、およびＮｍのそれぞれのＮは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合により結合している、請求項２１に記載の化合物。
  85. ［式中、それぞれのＬは、独立して、リガンドであり；それぞれのＱ’およびＱ’’は、独立して、結合基であり；それぞれのＲは、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、および置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルから独立して選択され；ならびにＺおよびＺ’は、ＯおよびＳからそれぞれ独立して選択される］
    から選択される構造を含む、請求項４〜７のいずれか一項に記載の化合物。
  86. それぞれのＱ’およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸から独立して選択される、請求項８５に記載の化合物。
  87. それぞれのＲは、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、およびブチルから独立して選択される、請求項８５または８６に記載の化合物。
  88. それぞれのＲは、Ｈおよびメチルから独立して選択される、請求項８７に記載の化合物。
  89. 少なくとも１つのリガンドは、マンノース、グルコース、ガラクトース、リボース、アラビノース、フルクトース、フコース、キシロース、Ｄ−マンノース、Ｌ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ガラクトース、Ｄ−グルコース、Ｌ−グルコース、Ｄ−リボース、Ｌ−リボース、Ｄ−アラビノース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−フルクトース、Ｌ−フルクトース、Ｄ−フコース、Ｌ−フコース、Ｄ−キシロース、Ｌ−キシロース、アルファ−Ｄ−マンノフラノース、ベータ−Ｄ−マンノフラノース、アルファ−Ｄ−マンノピラノース、ベータ−Ｄ−マンノピラノース、アルファ−Ｄ−グルコフラノース、ベータ−Ｄ−グルコフラノース、アルファ−Ｄ−グルコピラノース、ベータ−Ｄ−グルコピラノース、アルファ−Ｄ−ガラクトフラノース、ベータ−Ｄ−ガラクトフラノース、アルファ−Ｄ−ガラクトピラノース、ベータ−Ｄ−ガラクトピラノース、アルファ−Ｄ−リボフラノース、ベータ−Ｄ−リボフラノース、アルファ−Ｄ−リボピラノース、ベータ−Ｄ−リボピラノース、アルファ−Ｄ−フルクトフラノース、アルファ−Ｄ−フルクトピラノース、グルコサミン、ガラクトサミン、シアル酸、Ｎ−アセチルガラクトサミンから選択される、請求項８５〜８８のいずれか一項に記載の化合物。
  90. 少なくとも１つのリガンドは、Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ−ホルミルガラクトサミン、Ｎ−プロピオニル−ガラクトサミン、Ｎ−ｎ−ブタノイルガラクトサミン、およびＮ−イソ−ブタノイル−ガラクトサミンから選択される、請求項８５〜８８のいずれか一項に記載の化合物。
  91. それぞれのリガンドは、Ｎ−アセチルガラクトサミンである、請求項８５〜８８のいずれか一項に記載の化合物。
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