JP2008501319A - 2−アリールプロピル部分を含む1本鎖及び2本鎖オリゴヌクレオチド - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、その両方の内容が参照により本明細書に援用されている2004年4月27日付けの米国仮特許出願第60/565,627号及び2004年9月20日付けの米国仮特許出願第60/611,532号に対する優先権の利益を請求するものである。
RNA干渉(RNAi)は、当初線虫シノラブディス・エレガンス(Caenorhabditis elegans)の研究において発見された革新的に保存された遺伝子サイレンシング機序である(非特許文献1;非特許文献2)である。それは、適切な分子機序を発現する細胞内にdsRNAを導入することによってひき起こされ、これが次に対応する内因性mRNAを分解する。該機序には、相同のmRNA標的にリボヌクレアーゼを導く短かいRNAへのdsRNAの転換が関与する(要約あり、非特許文献3)。このプロセスは、ウイルスに対する正常な防御及びトランスポゾンの動員に関連するものである。
アンチセンス方法論は、細胞内核酸のタンパク質合成といったような正常な基本的な機能が分断されるような形でのmRNA又はDNAに対する比較的短かいオリゴヌクレオチドの相補的ハイブリダイゼーションである。ハイブリダイゼーションは、RNA又は1本鎖DNAに対するオリゴヌクレオチドのワトソン・クリック塩基対を介した配列特異的水素結合である。かかる塩基対は、互いに相補的であると言われている。
マイクロRNAは、生体の中で天然に産生される小さいRNAの大群であり、そのうちの少なくとも一部分は標的遺伝子の発現を調節する。マイクロRNAは、およそ70ヌクレオチドの1本鎖ヘヤピン前駆体写しからDicerによって形成される。非特許文献28。数多くのケースにおいて、マイクロRNAは、以前いかなる既知の機能も有していなかったDNA配列の一部分から転写される。マイクロRNAはタンパク質へと翻訳されず、むしろ翻訳を遮断する特定の伝令RNAに結合する。マイクロRNAは、翻訳を阻害するべくその標的と不精確に塩基対合すると考えられている。最初に発見されたマイクロRNAファミリーの成員はlet−7及びlin−4である。let−7遺伝子は、蠕虫の発達中内因性タンパク質コーティング遺伝子の発現を調節する小さなきわめて保存度の高いRNA種をコードする。活性RNA種は、最初約70ntの前駆体として転写され、これは転写後に成熟した約21ntの形態へとプロセシングされる。let−7及びlin−4は両方共、Dicer酵素によりその成熟形態へとプロセシングされるヘヤピンRNA前駆体として転写される(非特許文献29)。
リー(Lee)ら、Cell、75:843(1993年) ラインハルト(Reinhart)ら、Nature、403:901(2000年) ラヴクン(Ruvkun)、Science、2294:797(2001年) デクレルク(Declerq)ら、Meth.Enzymol.、78:291(1981年) ウーリ(Wu−Li)、Biol.Chem.、265:5470(1990年) オーベル(Aubel)ら、Proc.Natl.Acad.Sci、USA、88:906(1991年) レビー(Levy)ら、Proc.Nat.Acad.Sci.USA、62:357−361(1969年) ゼレズニック(Zeleznick)ら、Proc.Soc.Exp.Biol.Med.、130:126〜128(1969年) ゲルボイン(Gelboin)ら、Science、167:205〜207(1970年) ジトヴェヴァ(Dzitoveva)ら、Mol.Psychiatry、6(6):665〜670(2001年) エルバシャー(Elbashir)ら、Genes Dev.、15(2):188〜200(2001年) バーステッド(Barstead)、Curr.Opin.Chem.Biol.、5(1):63−66(2001年) タベルナラキス(Tavernarakis)、Nat.Genet.、24(2):180−183(2000年) ザモアー(Zamore)、Nat.Struct.Biol.、8(9):746〜750(2001年) ピアノ(Piano)ら、Curr.Biol.、10(24):1619−1622(2000年) ニシカワ(Nishikawa)ら、Eur.J.Biochem.、268(20):5295〜5299(2001年) ベルンスタイン(Bernstein)ら、Nature、409(6818):295−296(2001年) ヴォーシュレ(Vaucheret)ら、J.Cell Sci.、114(Pt17):3083〜3091(2001年) エスコバール(Escobar)ら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA、98(23):13437〜13442(2001年) ハモンド(Hammond)ら、Science、293(5532):1146〜1150(2001年8月) スヴォボダ(Svoboda)ら、Development、127(19):4147〜4156(2000年) スヴォボダ(Svoboda)ら、Biochem.Biophys.Res.Commun.、287(5):1099〜1104(2001年) L.L.カミンズ(Cummins)ら、Nucleic Acids Res.、1995年、23、2019 ウールマン(Uhlmann)、E.、ペイマン(Peyman)、A.Chem.Rev.、1990年、90、544 M.マノハラン(Manoharan)、ChemBio Chem.、2002年、3、1257 コーエン(Cohen)、Oligonucleotides:Antisense Inhibitors of Gene Expression、CRC Press,Inc.、1989年、Boca Raton、Fla. ミラー(Miller)ら、(1987年)Anti−Cancer Drug Design、2:117〜128 V.アンブロス(Ambros)ら、Current Biology、2003年、13、807 ラゴス・キンタナ(Lagos−Quintana)ら、2001年
リガンド−[リンカー]optional−[テザー]optional−オリゴヌクレオチド作用物質、
という式により表わされる式を有する。
リガンド−[リンカー]optional−[テザー]optional−単量体
という構造をもつ単量体サブユニットをも内含している。
オリゴヌクレオチド作用物質はマイクロRNA(miRNA)を内含する。マイクロRNAは、翻訳の阻害によってか又は標的されたmRNAの分解を通してといった方法により、細胞内の特定の遺伝子の転写後サイレンシングをひき起こす能力をもつ小さい非コーディングRNA分子である。miRNAは完全に相補的であり得、そうでなければ標的核酸との非相補性領域を有し、その結果非相補性領域において「バルジ」をもたらし得る。非相補性領域(バルジ)は、2重鎖形成を可能にするのに充分な相補性、好ましくは完全な相補性をもつ領域によりフランキングされ得る。好ましくは、相補性領域は少なくとも長さが8〜10ヌクレオチド(例えば8、9又は10ヌクレオチド)である。miRNAは、ミクロRNAが標的核酸に対して完全な相補性をもたない場合といったように翻訳をサイレンシングすることにより、或いは又miRNAが完全な相補性でその標的を結合させる場合にのみ起こると考えられている標的RNA分解をひき起こすことによって、遺伝子の発現を阻害することができる。該発明は同様にその標的に結合された場合にバルジを形成してもしなくてもよいmiRNAの2本鎖前駆体をも含んでいる。
該発明の特徴である1本鎖オリゴヌクレオチドは、アンチセンス核酸を含んでいる。「アンチセンス」核酸は、遺伝子発現産物をコードする「センス」核酸に対し相補的な、例えば2本鎖cDNA分子のコーディングストランドに相補的な、又は例えばpre−mRNA、mRNA、miRNA又はプレ−miRNAといったRNA配列に相補的なヌクレオチド配列を含む。従って、アンチセンス核酸は、センス核酸標的と水素結合を形成することができる。
該発明の特徴であるオリゴヌクレオチド作用物質は、デコイRNAといったようなデコイ核酸であり得る。デコイ核酸は天然の核酸に似ているが、天然核酸の活性を阻害又は中断するために修飾される。例えば、デコイRNAはリガンドのための天然結合ドメインを模擬し、特定のリガンドの結合のために天然結合標的と競合し得る。HIV転写促進応答(TAR)RNAの過剰発現が「デコイ」として作用し、HIVtatタンパク質と効率良く結合してそれがHIVRNA内でコードされたTAR配列に結合するのを防ぐことができるということが示されてきた。一実施形態においては、デコイRNAは、ターゲティングを改善させる修飾を内含する。miRNA及びアンチセンスRNAについて上記で記載され本明細書の他の箇所で記載されている化学的修飾は同様に、デコイ核酸において使用するためにも適切である。
該発明のオリゴヌクレオチド作用物質は同様にアプタマーも内含する。アプタマーは、例えば転写又は翻訳因子などの小さい有機分子又はタンパク質といった非核酸リガンドに結合し、その後その活性を修飾する。アプタマーは非核酸リガンド上のターゲティングされた結合部位の認識を導く特異的構造へと折畳むことができる。アプタマーは、本明細書に記載されている修飾のいずれかを含有することができる。一部のケースでは、アプタマーはターゲティングを改善する修飾、例えばターゲティング修飾を含む。miRNA及びアンチセンスRNAについて上記で記載され本明細書の他の箇所で記載された化学的修飾は、同様に、デコイ核酸において使用するためにも適している。
NAT(「核酸ターゲティング」)性あるオリゴヌクレオチド作用物質は、標的遺伝子に対する充分な相補性をもつ領域を含み、ヌクレオチドに関し充分な長を有し、かくして標的核酸と1つの2重鎖を形成するようになっている。オリゴヌクレオチド作用物質は、ターゲティングされた分子の機能を変調させることができる。例えば、ターゲティングされた分子がmRNA又はpre−mRNAである場合、NATは遺伝子発現を阻害することができる。標的がmiRNAである場合、NATはmiRNA機能を阻害しかくして特定のmiRNAによりターゲティングされるmRNAの発現をアップレギュレートすることになる。代替的には標的がスプライシングに影響するpre−mRNAの1領域である場合、NATはスプライス部位ひいてはmRNA配列の選択を改善することができる。NATがmiRNAとして機能する場合、ターゲティングされたmRNAの発現が阻害される。説明を容易にするため、ヌクレオチド又はリボヌクレオチドといった用語は本明細書において時としてオリゴヌクレオチド作用物質の1つ以上の単量体サブユニットに関係して使用されている。「リボヌクレオチド」又は「ヌクレオチド」という用語は、修飾RNA又はヌクレオチドの代理の場合に、1つ以上の位置における修飾ヌクレオチド又は代理交換部分をも意味し得ると理解されることになる。
サブユニットの糖がこのように交換されたヌクレオチドサブユニットはここでは糖交換修飾サブユニット(SRMS)と呼ばれている。SRMSは2つの「主鎖付着点」(ヒドロキシル基)、「テザー付着点」及び介入するテザーを介してSRMSに対し間接的に連結されているリガンドを含む。SRMSは、オリゴヌクレオチド作用物質の5’又は3’末端サブユニットであり得、2つ以上の未修飾又は修飾リボヌクレオチドに隣接して位置設定されている。代替的には、SRMSは、1つ以上の未修飾又は修飾リボヌクレオチドに隣接して位置設定された内部位置を占有し得る。2つ以上のSRMSがオリゴヌクレオチド作用物質内に存在し得る。1部分(例えばコレステロールといった脂肪親和性部分)にテザーされたSRMSの内含のために好ましい位置は、3’末端、5’末端又は内部位置にある。
さまざまな実体をオリゴヌクレオチド作用物質に対しテザーすることができる。オリゴヌクレオチド作用物質に対してテザーされたリガンドは作用物質に対し有利な効果を及ぼすことができる。例えば、該リガンドは、エンドサイトーシス依存性又は非依存性機序により、安定性、標的核酸とのハイブリッド形成熱力学、特定の組織又は細胞型に対するターゲティング又は細胞透過性を改善することができる。リガンド及びそれに付随する修飾は同じく、配列の特異性を増大させ、その結果としてオフサイトターゲティングを減少させることができる。テザーされたリガンドは、インターカレータとして機能し得る1つ以上の修飾された塩基又は糖を内含することができる。これらはmiRNA/標的2重鎖のバルジ内といったような内部領域内に位置設定される。インターカレータは、多環式芳香族又は複素環芳香族基を含めた芳香族基であり得る。多環式インターカレータは、積み重ね能力をもち得、2、3又は4個の融合環をもつ系を含み得る。リガンド上にユニバーサル塩基を内含することが可能である。
ペプチド接合体を担持するオリゴヌクレオチドは、アラルキル基を担持するオリゴヌクレオチドの調製のために以下で記載するものと類似の手順を用いて調製可能である。オリゴヌクレオチドペプチド接合体の合成及び精製は、確立された方法により実施可能である。各々参照により本明細書に援用されているツルファート(Trufert)ら、Tetrahedron、1996年、第52号、3005頁;及びマノハラン、「Oligonucleotide Conjugates in Antisense Technology」、Antisense Drug Technology中、S.T.クルーク(Crooke)編、Marcel Dekker、Inc.、2001年を参照のこと。一部のケースでは、ペプチドの効力及び選択性を増大させ得る1つの全く異なる特異的な好ましい立体構造を採用する制約されたペプチドを作り出すようにペプチドミメティックを修飾することができる。例えば制約されたペプチドはアザペプチドであり得る(ガント(Gante) Synthesis中、1989年、405−413)。アザペプチドは、アミノ酸側鎖の構造を変えることなくアミノ酸のα−炭素を窒素原子で交換させることによって合成される。例えば、フェニルクロロホルマートといった「カネボニル供与体」でヒドラジンを反応させることなどによって、従来のペプチド合成カップリング方法においてヒドラジンを使用することにより、アザペプチドを合成することができる。
細胞内への進入例えばエンドサイトーシス又は非エンドサイトーシス機序を増強させるためにオリゴヌクレオチド作用物質を修飾させることができる。細胞透過性を増大させるリガンドを、数多くのやり方でオリゴヌクレオチド作用物質に付着させることができる。リガンド付着の一例は、SRMS例えばピロリンベースのSRMSに対する結合によるものである。
該発明のオリゴヌクレオチド化合物は溶液相又は固相有機合成を用いて調製可能である。有機合成は、核酸塩基に対しテザーされたアラルキルリガンドを含むオリゴヌクレオチドストランドを容易に調製できるという利点を提供する。核酸塩基にテザーされたアラルキルリガンドを含む該発明の2本鎖オリゴヌクレオチド化合物は、2段階手順を用いて調製可能である。まず第1に2本鎖分子の個々のストランドを別々に調製する。次に構成要素ストランドをアニールする。
本発明の好ましい実施形態においては、ヌクレオシドに付着されたリガンドは、オリゴヌクレオチド治療又は診断薬の薬物動態特性を増強させる。好ましい実施形態においては、該オリゴヌクレオチドはsiRNAである。かかる改良型薬物動態特性には、血清タンパク質に対するアンチセンス化合物の結合の増加、アンチセンス化合物の血漿濃度の増加、組織分配の増加、血清タンパク質に対するアンチセンス化合物の結合能力の増加、及び半減期の増加が含まれる。
該発明の1つの態様は、望ましくない細胞増殖例えば悪性又は非悪性細胞増殖のリスクのある又はそれを患っている対象の治療方法に関する。該方法は、望ましくない細胞増殖を促進する遺伝子と相同でありかつこの遺伝子をオリゴヌクレオチドが切断などによりサイレンシングできる、アラルキル−リガンド接合型オリゴヌクレオチド作用物質を提供する工程;及び対象、好ましくはヒトの対象に対し治療上有効な用量のアラルキル−リガンド接合型オリゴヌクレオチド作用物質を投与する工程を含んでいる。
該発明の化合物は、少なくとも1つのアラルキルリガンドを担持するオリゴヌクレオチドに関係する。アラルキルリガンドは該オリゴヌクレオチド化合物を血清、肝臓、脳及び眼の中に存在するヌクレアーゼによる分解を受けにくいものにする。一部の実施形態においては、該発明の化合物は、アラルキルリガンドが2つのストランドのうちの1つのみに結合されている2本鎖オリゴヌクレオチド配列に関する。一部の実施形態においては、該発明の化合物は、少なくとも1つのアラルキルリガンドが両方のストランドに結合されている2本鎖オリゴヌクレオチド配列に関するものである。一部の実施形態においては、該オリゴヌクレオチドの主鎖はオリゴヌクレオチド化合物の治療又は診断特性を改善させるべく修飾されている。一部の実施形態においては、オリゴヌクレオチド化合物の治療又は診断特性を改善させるべく、オリゴヌクレオチドの少なくとも1つの糖又は少なくとも1つの塩基が修飾された。オリゴヌクレオチド化合物の2つのストランドは相補的又は部分的に相補的である。いずれかのストランド又は両方のストランドがキメラオリゴヌクレオチドを含み得る。一部の実施形態においては、2本鎖オリゴヌクレオチドはsiRNAである。本発明の別の態様は、少なくとも1つのアラルキルリガンドを含む1本鎖オリゴヌクレオチドに関する。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは少なくとも1つの修飾された糖部分を含む。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド内のリン酸塩連結はホスホロチオアート連結で置換されてきた。好ましい実施形態においては、アラルキルリガンドはナプロキセン又はイブプロフェンである。
(2)たとえ非常に多数の又は全てのヌクレオシドに対するものであっても、その修飾に関わらず、それはなおも「RNA様の」特性を有することになる、すなわちそれは、たとえ排他的でなくても、又は部分的でさえあっても、リボヌクレオチドベースの含有率のRNA分子の全体的な構造的、化学的及び物理的特性を有することになる。例えば、siRNA作用物質は、例えば、全てのヌクレオチド糖が2’ヒドロキシルの代りに例えば2’フルオロを含んでいるようなセンス及び/又はアンチセンスストランドを含有することができる。このデオキシリボヌクレオチド含有作用物質はさらに、RNA様の特性を示すものと予想され得る。理論による束縛は望まないものの、電気陰性フッ素は、リボースのC2’位に付着させれられた時点で軸方向の配向を好む。フッ素のこの空間的選択性は、それ自体糖に強制的にC3’−endoパッカーを採用させる。これは、RNA分子内に見られるものと同じパッカリングモードであり、RNA−特徴的A−ファミリータイプらせんを発生させる。さらに、フッ素は、優れた水素結合アクセプタであることから、RNA構造を安定化させるものとして知られている水分子と同じ水素結合相互作用に参加できる。一般的に、2’糖位にある修飾された部分が、デオキシリボヌクレオチドのH部分よりもさらにリボヌクレオチドのOH部分に特徴的であるH結合の中に進入できることが好ましい。好ましいsiRNA作用物質は、その糖の全て又は少なくとも50、75、80、85、90又は95%においてC3’−endoパッカーを示し;RNA特徴的A−ファミリタイプらせんを発生させ得るほどの充分な量のその糖の中でC3’−endoパッカーを示し;C3’−endoパッカー構造でない20、10、5、4、3、2又は1以下の糖を有することになる。
本発明では、リガンドはアラルキル基例えば2−アリールプロパノイル部分である。リガンドの構造的特徴は、リガンドがインビボで少なくとも1つのタンパク質に結合することになるような形で選択される。一部の実施形態においては、リガンドの構造的特徴は、血清、血管又は細胞タンパク質にリガンドが結合するような形で選択される。一部の実施形態においては、リガンドの構造的特徴は、アルブミン、免疫グロブリン、リポタンパク質、α−2−マクログロブリン又はα−1−糖タンパク質に対する結合を促進する。
ヌクレオシドは、含リン又は非含リンの共有結合によるヌクレオシド間連結によって連結される。同定を目的として、かかる接合ヌクレオシドをリガンド担持ヌクレオシド又はリガンドヌクレオシド接合体として特徴づけすることができる。その配列内部でヌクレオシドに抱合されたアラルキルリガンドを有する連結されたヌクレオシドは、抱合されていない同様のオリゴヌクレオチドと比較した場合に、増強されたオリゴヌクレオチド活性を示すことになる。
EはC1−C10アルキル、N(Q3)(Q4)又はN=C(Q3)(Q4)であり、各Q3及びQ4は独立してH、C1−C10アルキル、ジアルキルアミノアルキル、窒素保護基、テザーされた又はテザーされていない接合体基、固体支持体に対するリンカーであるか、又はQ3とQ4は合わさって窒素保護基又は場合によってN及びOから選択された少なくとも1つの付加的ヘテロ原子を含む環状構造を形成し;
q1は1〜10の整数であり;
q2は1〜10の整数であり;
q3は0又は1であり;
q4は0、1又は2であり;
各Z1、Z2及びZ3は独立してC4−C7シクロアルキル、C5−C14アリール又はC3−C15ヘテロシクリルであって、ここで前記ヘテロシクリル基内のヘテロ原子は酸素、窒素及び硫黄の中から選択されており;
Z4はOM1、SM1又はN(M1)2であり;各々のM1は独立してH、C1−C8アルキル、C1−C8ハロアルキル、C(=NH)N(H)M2、C(=O)N(H)M2又はOC(=O)N(H)M2であり、M2はH又はC1−C8アルキルであり、
Z5はC1−C10アルキル、C1−C10ハロアルキル、C2−C10アルケニル、C2−C10アルキニル、C6−C14アリール、N(Q3)(Q4)、OQ3、ハロ、SQ3又はCNである。
該発明の好ましい実施形態においては、アラルキルリガンドは、リガンド接合オリゴヌクレオチドを形成するべくテザー及び連結基を介してオリゴヌクレオチドに付着される。該発明の好ましいテザーとしては、6−アミノアルコキシリンカー、6−アミノアルキルアミノリンカー、システアミン、ヘテロ2官能リンカー、ホモ2官能リンカー及びユニバーサルテザー(3−ジメトキシトリチルオキシ−2−アミノプロパノールから誘導されたもの)が含まれるが、これらに限定されるわけではない。該発明のリガンド接合オリゴヌクレオチドの合成のための特に好ましいテザーは、6−アミノヘキシルオキシ基である。さまざまなヘテロ2官能及びホモ2官能テザーがピアス社(Pierce Co.)(イリノイ州、Rockford)から入手可能である。このようなヘテロ2官能及びホモ2官能テザーは、ヌクレオシドに対してリガンドを連結させるために有用な拡張されたテザーを形成させる目的で6−アミノアルコキシ及び6−アミノアルキルアミノ部分と併わせて特に有用である。市販されているさらなる有用なテザーは、共にグレン・リサーチ・コーポレーション(Glen Research Corporation)(Sterling、ヴァージニア州)から入手可能である5’−Amino−Modifier C6及び3’−Amino−Modifier試薬である。5’−Amino−Modifier C6は同様に、Aminolink−2としてABI (アプライド・バイオシステムズ Inc.、Foster City、カリフォルニア州からも入手可能であり、一方3’−Amino−Modifierは、クローンテック・ラボラトリーズ(Clontech Laboratorie)Inc.(Palo Alto、カリフォルニア州)からも入手可能である。さらに、ヌクレオシドに予め付着されたテザーを担持するヌクレオチド類似体がグレン・リサーチ・コーポレーションから「Amino−Modifier−dT」という商標名で市販されている。このヌクレオシド−テザー試薬つまり、ピリミジン環の5位に[N−(7−トリフルオロアセチルアミノ−ヘプチル)−3−アクリルアミド]置換基を有するウリジン誘導体は、ヤブロンスキー(Jablonski)ら、(Nucleic Acid Research、1986年、14:6115)の手順に従って合成される。
式中
Xは、H、−P(O)(OM)2、−P(O)(OM)−O−P(O)(OM)2、−P(O)(Oアルキル)2、−P(O)(Oアルキル)−O−P(O)(Oアルキル)2、又は−A6−[A7−(A5)w]yであり;
X1は
Z1は、各出現について独立してO又はSを表わし;
Z2は、各出現について独立して−OH、−OM、−Oアルキル、−Oアリール、−Oアラルキル、−SH、−SM、−Sアルキル、−Sアリール、−Sアラルキル、−N(R3)R4、−(C(R11)2)mN(R11)2、−N(R11)(C(R11)2)mN(R11)2、又はアルキルを表わし;
R1及びR2は各出現について独立してH、OH、F、−Oアルキル、−Oアリル、−O(CR11)2)vOR11、−O(C(R11)2)vSR11、−O(C(R11)2)vN(R11)2、−O(C(R11)2)vC(O)N(R11)2、−N(R11)2、−S(C1−C6)アルキル、−O(C(R11)2)vO(C1−C6)アルキル、−O(C(R11)2)vS(C1−C6)アルキル、−O(C(R11)2)vO(C(R11)2)vN((C1−C6)アルキル)2、−O(C(R11)2)vON((C1−C6)アルキル)2、又は−O−A10−[A11−(A5)w]yを表わし、
R3及びR4は、H又はアルキルを表わすか;そうでなければR3及びR4は一緒になって3−、4−、5−、6−又は7−員環を形成し;
R5は各出現について独立してH、OH、F、−Oアルキル、−Oアリル、−O(C(R11)2)vOR11、−O(C(R11)2)vSR11、−O(C(R11)2)vN(R11)2、−O(C(R11)2)vC(O)N(R11)2、−N(R11)2、−S(C1−C6)アルキル、−O(C(R11)2)vO(C1−C6)アルキル、−O(C(R11)2)vS(C1−C6)アルキル、−O(C(R11)2)vO(C(R11)2)vN((C1−C6)アルキル)2、又は−O(C(R11)2)vON((C1−C6)アルキル)2を表わし;
R6は、各出現について独立してH、アルキル又は−NHCH2CH=CH2を表わし;
R7は、各出現について独立してH、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アシル、シリル又はB3を表わし;
R8は、各出現について独立してアルキル、アリール、アラルキル、アシル、又はシリルを表わし;
R9は、各出現について独立して水素、アルキル、アリール、アラルキル、アシル、アルキルスルホニル、アルキルスルホキシド、アリールスルホニル、アリールスルホキシド又はシリルを表わし;
R10はシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール又はヘテロアリールであり;
R11は各出現について独立して水素又はアルキルを表わし;
n1及びn2は独立して0以上21以下を表わし;
mは各出現について独立して1、2、3、4、5、6、7又は8を表わし;
m1は各出現について独立して0、1、2、3、4、5、6、7又は8を表わし;
vは各出現について独立して1、2、3、又は4を表わし;
wは、原子価の法則に合致して各出現について独立して1、2又は3を表わし;
yは、原子価の法則に合致して各出現について独立して1、2、3、4又は5を表わし;
Mは各出現について独立して+1という全体的電荷をもつアルカリ金属又は遷移金属を表わし;
A1は各出現について独立して
A2は各出現について独立して
A3は各出現について独立して
A4は各出現について独立して1つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アルキニルジラジカル、アルキルアルキニルジラジカル、アミノアルキルジラジカル、チオエーテル、−C(O)−、−S(O)−、−S(O)2−、B1C(R2)B2、B1C(R)(B2)2、B1C(B2)3、B1N(R)(B2)、B1N(B2)2を表わすか又は、
B1はA3とA4の間の結合であり;
B2はA4とA5の間の結合であり;
Rは各出現について独立して水素又はアルキルであり;
A5はアラルキルであり;
A6は1つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アミノアルキル、−C(O)−、−S(O)−、−S(O2)−であるか又は
B3は、A6とA7の間の結合であり;
B4は、A6とA1の間の結合であり;
n3は、各出現について独立して1以上15以下であり;
n4は、原子価の法則に合致して1、2、3、4又は5であり、
A7は1つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−C(O)−、−S(O)−、−S(O)2−、B3C(R)2B5、B3C(R)(B5)2、B3C(B5)3、B3N(R)(B5)、B3N(B5)2であるか又は、
Pは各出現について独立して1、2、3又は4を表わし;
B5はA5とA7の間の結合であり;
A8は、
という式、又は
X2は1つの結合であるか又は式
B6はA8とA1の間の結合であり;
B7はA8とA9の間の結合であり;
A9は1つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−C(O)−、−S(O)−、−S(O)2−、B7C(R)2B8、B7C(R)(B8)2、B7C(B8)3、B7N(R)(B8)、B7N(B8)2であるか又は、
B8はA5とA9の間の結合であり;
A10は1つの結合であるか又は、
R12及びR13は各出現について独立してH、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アシル、シリル、又はB9を表わし;
B9はA10とA11の間の結合であり;
B10はA10とOの間の結合であり;
A11は1つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−C(O)−、−S(O)−、−S(O)2−、B9C(R2)B11、B9C(R)(B11)2、B9C(B11)3、B9N(R)(B11)、B9N(B11)2であるか又は、
B11はA5とA11の間の結合であり;かつ
A5が少なくとも1回出現することを条件とする、2本鎖オリゴヌクレオチドに関する。
R1−IIA、R1−IIB、R2−II及びR3−IIが各出現について独立してH、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、アルキル、アルコキシル、アミノアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、チオール、チオアルキル、シリル、ニトロ、ニトリル、アシル、アシルアミノ、−COR又は−CO2Rを表わす、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
R1−IIIA、R1−IIIB、R2−III、及びR3−IIIが各出現について独立してH、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、アルキル、アルコキシル、アミノアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、チオール、チオアルキル、シリル、ニトロ、ニトリル、アシル、アシルアミノ、−COR又は−CO2Rを表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
Xは、H、−P(O)(OM)2、−P(O)(OM)−O−P(O)(OM)2、−P(O)(Oアルキル)2、−P(O)(Oアルキル)−O−P(O)(Oアルキル)2、又は−A6−[A7−(A5)w]yであり;
X1は
Z1は、各出現について独立してO又はSを表わし;
Z2は、各出現について独立して−OH、−OM、−Oアルキル、−Oアリール、−Oアラルキル、−SH、−SM、−Sアルキル、−Sアリール、−Sアラルキル、−N(R3)R4、−(C(R11)2)mN(R11)2、−N(R11)(C(R11)2)mN(R11)2、又はアルキルを表わし;
R1及びR2は各出現について独立してH、OH、F、−Oアルキル、−Oアリル、−O(CR11)2)vOR11、−O(C(R11)2)vSR11、−O(C(R11)2)vN(R11)2、−O(C(R11)2)vC(O)N(R11)2、−N(R11)2、−S(C1−C6)アルキル、−O(C(R11)2)vO(C1−C6)アルキル、−O(C(R11)2)vS(C1−C6)アルキル、−O(C(R11)2)vO(C(R11)2)vN((C1−C6)アルキル)2、−O(C(R11)2)vON((C1−C6)アルキル)2、又は−O−A10−[A11−(A5)w]yを表わし;
R3及びR4は、H又はアルキルを表わすか;そうでなければR3及びR4は一緒になって3−、4−、5−、6−又は7−員環を形成し;
R5は各出現について独立してH、OH、F、−Oアルキル、−Oアリル、−O(C(R11)2)vOR11、−O(C(R11)2)vSR11、−O(C(R11)2)vN(R11)2、−O(C(R11)2)vC(O)N(R11)2、−N(R11)2、−S(C1−C6)アルキル、−O(C(R11)2)vO(C1−C6)アルキル、−O(C(R11)2)vS(C1−C6)アルキル、−O(C(R11)2)vO(C(R11)2)vN((C1−C6)アルキル)2、又は−O(C(R11)2)vON((C1−C6)アルキル)2を表わし;
R6は、各出現について独立してH、アルキル又は−NHCH2CH=CH2を表わし;
R7は、各出現について独立してH、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アシル、シリル又はB3を表わし;
R8は、各出現について独立してアルキル、アリール、アラルキル、アシル、又はシリルを表わし;
R9は、各出現について独立して水素、アルキル、アリール、アラルキル、アシル、アルキルスルホニル、アルキルスルホキシド、アリールスルホニル、アリールスルホキシド又はシリルを表わし;
R10はシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール又はヘテロアリールであり;
R11は各出現について独立して水素又はアルキルを表わし;
n1及びn2は独立して0以上21以下を表わし;
mは各出現について独立して1、2、3、4、5、6、7又は8を表わし;
m1は各出現について独立して0、1、2、3、4、5、6、7又は8を表わし;
vは各出現について独立して1、2、3、又は4を表わし;
wは、原子価の法則に合致して各出現について独立して1、2又は3を表わし;
yは、原子価の法則に合致して各出現について独立して1、2、3、4又は5を表わし;
Mは各出現について独立して+1という全体的電荷をもつアルカリ金属又は遷移金属を表わし;
A1は各出現について独立して
A2は各出現について独立して
A3は各出現について独立して
A4は各出現について独立して1つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アルキニルジラジカル、アルキルアルキニルジラジカル、アミノアルキルジラジカル、チオエーテル、−C(O)−、−S(O)−、−S(O)2−、B1C(R2)B2、B1C(R)(B2)2、B1C(B2)3、B1N(R)(B2)、B1N(B2)2を表わすか又は、
B1はA3とA4の間の結合であり;
B2はA4とA5の間の結合であり;
Rは各出現について独立して水素又はアルキルであり;
A5はアラルキルであり;
A6は1つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アミノアルキル、−C(O)−、−S(O)−、−S(O2)−であるか又は、
B3は、A6とA7の間の結合であり;
B4は、A6とA1の間の結合であり;
n3は、各出現について独立して1以上15以下であり;
n4は、原子価の法則に合致して1、2、3、4又は5であり、
A7は1つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−C(O)−、−S(O)−、−S(O)2−、B3C(R)2B5、B3C(R)(B5)2、B3C(B5)3、B3N(R)(B5)、B3N(B5)2であるか又は
Pは各出現について独立して1、2、3又は4を表わし;
B5はA5とA7の間の結合であり;
A8は、
という式、又は
X2は1つの結合であるか又は式
B6はA8とA1の間の結合であり;
B7はA8とA9の間の結合であり;
A9は1つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−C(O)−、−S(O)−、−S(O)2−、B7C(R)2B8、B7C(R)(B8)2、B7C(B8)3、B7N(R)(B8)、B7N(B8)2であるか又は
B8はA5とA9の間の結合であり;
A10は1つの結合であるか又は、
R12及びR13は各出現について独立してH、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アシル、シリル、又はB9を表わし;
B9はA10とA11の間の結合であり;
B10はA10とOの間の結合であり;
A11は1つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−C(O)−、−S(O)−、−S(O)2−、B9C(R2)B11、B9C(R)(B11)2、B9C(B11)3、B9N(R)(B11)、B9N(B11)2であるか又は、
B11はA5とA11の間の結合であり;かつ
A5が少なくとも1回出現することを条件とする、1本鎖オリゴヌクレオチドに関する。
式中
R1−VA、R1−VB、R2−V及びR3−Vが各出現について独立してH、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、アルキル、アルコキシル、アミノアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、チオール、チオアルキル、シリル、ニトロ、ニトリル、アシル、アシルアミノ、−COR、又は−CO2Rを表わす、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
R1−VIA、R1−VIB、R2−VI、及びR3−VIが各出現について独立してH、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、アルキル、アルコキシル、アミノアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、チオール、チオアルキル、シリル、ニトロ、ニトリル、アシル、アシルアミノ、−COR又は−CO2Rを表わしている、前述のオリゴヌクレオチドに関する。
本発明の一態様は、望ましくない細胞増殖、関節炎、網膜血管新生、ウイルス感染、細菌感染、アメーバ感染、寄生虫感染、真菌感染、望ましくない免疫応答、喘息、狼瘡、多発性硬化症、糖尿病、急性疼痛、慢性疼痛、神経系疾患及びヘテロ接合性の喪失を特徴とする障害より成る群から選択された疾患を患う患者を治療する方法であって、治療上有効な量のオリゴヌクレオチドを、それを必要とする患者に対し投与する工程を含み、前記オリゴヌクレオチドが上述の通りの式IVにより表された1本鎖オリゴヌクレオチドであるかそうでなければ前記オリゴヌクレオチドは第1のストランドと第2のストランドを含む2本鎖オリゴヌクレオチドであり、ここで前記第1のストランドと第2のストランドは独立して上述の式Iにより表わされている方法に関する。
便宜上、該明細書、実施例及び添付クレームの中で使用されているいくつかの用語をここにまとめる。
により表わすことができる一つの部分を意味する。その他の実施形態においては、R50及びR51(そして任意にはR52)は各々独立して水素、アルキル、アルケニル又は−(CH2)m−R61を表わす。かくして、「アルキルアミン」という用語には、置換又は未置換アルキルが付着された、すなわちR50とR51のうちの少なくとも1つがアルキル基である上記で定義づけした通りのアミン基が含まれる。
により表わすことができる一つの部分を意味する。
により表わすことのできる1つの部分を含む。本発明におけるアミドの一部の実施形態は、不安定なものであり得るイミドを含まない。
により表され得るような部分を含む。X50が酸素でR55又はR56が水素でない場合、該一般式は「エステル」を表わす。X50が酸素でありR55が上記で定義された通りである場合、該部分は本明細書ではカルボキシ基と呼ばれ、特にR55が水素である場合、該一般式は「カルボン酸」を表わす。X50が酸素で、R56が水素である場合、該一般式は「ギ酸塩」を表わす。一般に、上述の一般式の酸素原子が硫黄によって置換されている場合には、該一般式は「チオールカルボニル」基を表わす。X50が硫黄であり、R55又はR56が水素でない場合、該一般式は「チオールエステル」を表わす。X50が硫黄でありR55が水素である場合、該一般式は「チオールカルボン酸」を表わす。X50が硫黄でありR56が水素であり、該一般式が「チオールギ酸塩」を表わす。一方、X50が1つの結合でありR55が水素である場合、上述の一般式は「ケトン」基を表わす。X50が1つの結合でありR55が水素である場合、上述の一般式は「アルデヒド」基を表わす。
により表わされる部分を意味する。該部分は、RがHである場合に「オキシム」であり、Rがアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル又は−(CH2)m−R61である場合「オキシムエーテル」である。
により表わすことのできる一部分を意味する。
により表わされ得る。例えばアルキルを置換するために使用される場合、ホスホリルアルキルのホスホリル基を、一般式
により表され得る。
別の態様においては、本発明は、1つ以上の薬学的に受容可能な担体(添加剤)及び/又は希釈剤と共に処方される上述の化合物のうちの1つ以上のものを治療上有効な量だけ含む薬学的に受容可能な組成物を提供する。以下で詳述されるように、本発明の薬学組成物は、(1)例えば飲薬(水性又は非水性溶液又は懸濁液)、錠剤例えば口腔、舌下及び全身的吸収を標的としたもの、ボーラス、粉末、顆粒、舌に塗布するためのペーストといった経口投与向け、(2)例えば無菌溶液又は懸濁液又は持続放出型処方物といった皮下、筋内、静脈内又は硬膜外注射による非経口投与向け;(3)皮膚に塗布されたクリーム、軟こう又は制御放出パッチ又はスプレーといった局所施用向け;(4)例えばペッサリ、クリーム又はフォームとしての膣内又は直腸内向け;(5)舌下向け (6)眼科向け;(7)経皮向け又は(8)経鼻向けに適合されたものを含めた固体又は液体形態での投与のため特別に処方され得る。
近年、薬学業界は、一部の脂肪親和性(不水溶性)薬学作用物質の生物学的利用能を改善させるべくマイクロ乳化技術を導入した。例としてはトリメトリン(ドルドヌー(Dordunoo)、S.K.、ら、Drug Development and Industrial Pharmacy、第17(12)号、1685〜1713頁、1991年)及びREV5901(シーン(Sheen)、P.C、ら、J Pharm Sci 第80(7)号、712〜714頁、1991年)が含まれる。なかでもマイクロ乳化は、循環系の代りにリンパ系に吸収を優先的に誘導し、かくして肝臓を迂回して肝胆道循環内の化合物の破壊を防止することによって、生物学的利用能を増強した。
本発明において使用するのに適した親水性ポリマーは、容易に水溶性を示し、小胞形成性脂質に対し共有結合により付着され得、しかも毒性効果無くインビボで寛容される(すなわち生体適合性ある)ものである。適切なポリマーとしては、ポリエチレングリコール(PEG)、ポリ乳酸(ポリラクチドとも呼ばれる)、ポリグリコール酸(ポリグリコリドとも呼ばれる)ポリ乳酸−ポリグリコール酸コポリマー及びポリビニルアルコールが含まれる。好ましいポリマーは、約100又は120ダルトンから最高約5,000又は10,000ダルトンまで、そしてより好ましくは約300ダルトンから約5,000ダルトンまでの分子量をもつものである。特に好ましい実施形態においては、該ポリマーは、約100〜約5,000ダルトンの分子量をもつ、そしてより好ましくは約300〜約5,000ダルトンの分子量をもつポリエチレングリコールである。特に好ましい実施形態においては、ポリマーは750ダルトン(PEG(750))のポリエチレングリコールである。ポリマーは、その中の単量体の数によって定義づけすることもできる。本発明の好ましい実施形態は、少なくとも約3つの単量体のポリマー、例えば3つの単量体から成るPEGポリマー(約150ダルトン)を利用する。
シクロデキストリンは、それぞれアルファ、ベータ又はガンマと呼称される6、7又は8個のグリコース単位から成る環式オリゴ糖である。6個未満のグリコース単位を有するシクロデキストリンの存在は分かっていない。グルコース単位は、アルファ−1,4−グリコシド結合により連結される。糖単位のいす形配座の結果として、全ての二次的ヒドロキシル基(C−2、C−3にある)は、環の片側に位置設定され、一方C−6にある全ての一次的ヒドロキシル基はもう一方の側に位置づけられている。その結果、外部面は親水性であり、シクロデキストリンを水溶性にしている。これとは対照的に、シクロデキストリンのキャビティは、原子C−3及びC−5の水素及びエーテル様の酸素によりライニングされているため、疎水性である。これらのマトリクスは、例えば17−ベータエストラジオールといったようなステロイド化合物を含めたさまざまな比較的疎水性の化合物との複合体形成を可能にする(例えばヴァン・ウーデン(van Uden)ら、Plant Cell Tiss.Org.Cult.第38号:1〜3〜113頁(1994年)参照)。複合体形成は、ファンデルワールス相互作用によって及び水素結合形成によって起こる。シクロデキストリン化学の一般的再考についてはウェンツ、Agnew.Chem.Int.Ed.Engl.、第33号:803〜822頁(1994年)を参照のこと。
リポソームは、水性内部区画をとり囲む少なくとも1つの脂質2重層から成る。リポソームは膜のタイプ及びサイズにより特徴づけされ得る。小さな単層小胞(SUV)は単一の膜を有し、一般的に直径が0.02〜0.05μmの範囲内にある。大きい単層小胞(LUVS)は一般的に0.05μm超のオリゴ層状の大きな小胞であり、多層状の小胞は多数の通常は同心的な膜層を有し、一般的には0.1μmより大きい。複数の非同心膜すなわちより大きな小胞内に収納された複数のより小さな小胞を伴うリポソームは多胞性小胞と呼ばれる。
本発明の処方物の放出特性は、封入材料、封入された薬物の濃度、及び放出修飾物質の存在によって左右される。例えば、放出は、胃内といった低pHで又は腸内といった高pHでのみ放出するpH感応性コーティングを用いて、pH依存性となるように操作可能である。胃内を通過してしまうまで放出が起こらないようにするため、腸溶性コーティングを使用することができる。異なる材料の中に封入されたシアンアミドの多重コーティング又は混合物を用いて、胃内の初期放出とそれに続く腸内の晩期放出を得ることができる。放出は同様に、カプセルからの拡散により薬物の放出又は水摂取を増大させることのできる塩又は細孔形成剤の内含によって操作することもできる。放出速度を制御するために、薬物の溶解度を修飾する賦形剤を使用することもできる。マトリクスの分解又はマトリクスからの放出を増強させる作用物質も取込むことができる。これらは、化合物に応じて、薬物に添加するか又は別の相として(すなわち微粒子として)添加するか、又はポリマー相に同時溶解させることができる。あらゆるケースにおいて、その量は0.1〜30パーセント(w/wポリマー)であるべきである。分解エンハンサのタイプには、硫酸アンモニウム及び塩化アンモニウムといったような無機塩、クエン酸、安息香酸及びアスコルビン酸といったような有機酸、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、炭酸亜鉛、及び水酸化亜鉛といった無機塩基及び硫酸プロタミン、スペルミン、コリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン及びトリエタノールアミンといったような有機塩基、Tween(登録商標)及びPluronic(登録商標)といった表面活性剤が含まれる。マトリクスに微細構造を添加する細孔形成剤(すなわち無機塩及び糖といった水溶性化合物)が、微粒子として添加される。その範囲は1〜30パーセント(ポリマーw/w)の間とするべきである。
ナプロキセン担持テザーの合成
文献(Org.Syn.、1984年、第63号、183頁)由来の報告済み手順に従ってエステル3aを調製した。ナプロキセン(1a、10.00g、43.427mmol、アルドリッチから購入)及び4−(ジメチルアミノ)ピリジン(DMAP、0.53g、4.338mmol、アルドリッチから購入)を無水N,N−ジメチルホルムアミド(DMF)中に溶解させ、1,3−ジイソプロピルカルボジイミド(DICC、6.8mL、43.914mmol、アルドリッチから購入)を溶液中に加えて5分間周囲温度で撹拌した。6−アミノヘキサン酸メチルエステルヒドロクロリド(2、10.00g、57.408mmol、フルカから購入)及びジイソプロピルエチルアミン(DIEA、10mL、アルドリッチから購入)を、DICC添加の5分後に撹拌溶液中に加え一晩周囲温度で撹拌した。DMFを真空下で反応から除去し、生成物を酢酸エチル(EtOAc、200mL)中に抽出し、KHSO4水溶液、水、重炭酸ナトリウム溶液及び水で連続的に洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウム(Na2SO4)上で乾燥させ、ろ過した。ヘキサンを添加することによってEtOAc抽出物から白色固体を沈殿させ所望の化合物3a11.20g(72.14%)を得た。1H NMR(400MHz、[D6]DMSO、25℃):δ7.95−7.92(t、J(H、H)=5.2&5.6Hz、1H)、7.76−7.68(m、3H)、7.43−7,40(dd、J’(H、H)=1.6及びJ’’(H、H)=8.4Hz、1H)、7.25−7.24(d、J(H、H)=2.0Hz、1H)、7.13−7.11(dd、J’(H、H)=2.4及びJ’’(H、H)=8.8Hz、1H)、3.84(s、3H)、3.70−3.65(q、J(H、H)=6.8及び7.2Hz、1H)、3.54(s、3H)、3.00−2.97(q、J(H、H)=6.8Hz、2H)、2.21−2.17(t、2H)、1.48−1.29(m、7H)、1.19−1.13(m、2H)。
エステル3aの加水分解を、以前に報告された通り(ラジーブ(Rajeev)ら、2002年、第4号、4395頁)に実施した。化合物3a(10.80g、30.24mmol)をテトラヒドロフラン−水(THF−H2O)混合物(4:1、40mL)中に懸濁させ、LiOH(1.65g、39.32mmol)と共に周囲温度で4時間撹拌した。THFを真空下で反応から除去し、濃KHSO4溶液を添加することによって水から遊離酸を沈殿させ、水で徹底的に洗浄し、焼結フィルタを通してろ過し、ジエチルエーテルと共に研和しP2O5上で一晩真空下にて乾燥させて酸4aを白色固体、10.22g(98.4%)として得た。1H NMR(400MHz、[D6]DMSO、25℃):δ11.96(bs、1H)、7.95−7.92(t、J(H、H)=5.37Hz、1H)、7.77−7.68(m、3H)、7.43−7.41(d、J(H、H)=8.3Hz、1H)、7.25−7.24(d、J(H、H)=2.44Hz、1H)、7.13−7.11(dd、J’(H、H)=1.95、2.44及びJ’’(H、H)=8.79、9.27Hz、1H)、3.84(s、3H)、3.71−3.65(q、J(H、H)=6.84、7.33Hz、1H)、3.02−2.97(m、2H)、2.13−2.09(t、J(H、H)=7.33Hz、2H)、1.46−1.30(m、7H)、1.21−1.15(m、2H)。
化合物4a(5.00g、14.57mmol)、DMAP(0.18g、1.47mmol)及びペンタフルオロフェノール(3.50g、19.02mmol、アルドリッチから購入)をジクロロメタン(40mL)中に取り込み、DCC(3.00g、14.54mmol)を溶液中に加えた。反応混合物を周囲温度で8時間撹拌した。EtOAcを添加することにより該反応混合物を100mLまで希釈し、沈殿したDCUをろ過により除去した。続いてシリカゲルカラム(溶離剤ヘキサン/EtOAc4:1)を通して残渣をろ過しろ液を組合せ、真空下で溶媒を蒸発させ、所望のエステル5a及び反応由来の余剰のペンタフルオロフェノールの混合物(7.90g)を得た。かくして得られた粗製生成物をさらなる精製なく実験を継続するために直接使用した。
ペンタフルオロフェノールエステル5aをTEAの存在下でセリノールと共に撹拌し化合物6aを得た(J.Org.Chem.、1991年、第56号、1713頁)。化合物5a(4.00g、7.86mmol)とセリノール(1.5g、16.46mmol、アルドリッチから購入)をジクロロメタン(30mL)中で懸濁させて、トリエチルアミン(TEA、2.3mL、アルドリッチから購入)を懸濁液中に加え、周囲温度で2時間撹拌した。反応の進行中に白色の沈殿物が形成された。2時間後、焼結フィルタを通して沈殿物をろ過し、余剰のジクロロメタン、水及びジエチルエーテルで連続的に洗浄して所望の生成物6a(2.82g、86.2%)を得た。1H NMR(400MHz、[D6]DMSO、25℃):δ7.95−7.92(t、J(H、H)=5.49Hz、1H、D2Oで交換可能)、7.77−7.68(m、3H)、7.43−7.39(m、2H、D2O交換後の1Hについて計上)、7.26−7.25(d、J(H、H)=2.14Hz、1H)、7.13−7.11(dd、J’(H、H)=2.44及びJ’’(H、H)=8.85Hz、1H)、4.58−4.55(t、J(H、H)=5.49Hz、2H、D2Oで交換可能)、3.84(s、3H)、3.71−3.65(m、2H)、3.37−3.35(t、D2O交換後にダブレットになった、4H)、3.02−2.95(m、2H)、2.03−2.01(t、J(H、H)=7.32、7.63Hz、2H)、1.46−1.30(m、7H)、1.20−1.12(m、2H)。
報告済の文献の手順(ラジーブ(Rajeev)ら、Org.Lett.、2003年、第5号、3005頁)を修正することによって化合物6aを調製した。化合物6a(2.50g、6.01mmol)とDMAP(0.075g、0.61mmol)の固体混合物をP2O5上で一晩真空下にて乾燥させた。該固体混合物をアルゴン下で無水ピリジン(100mL)中に懸濁させ、加熱して均質な溶液を得た。混合物の温度を室温にしてから撹拌した。4,4’−ジ−O−メチルトリチルクロリド(2.24g、6.61mmol、ケム・ジーン・コーポレーション(Chem Genes Corporation)から購入)を20mLの無水ジクロロメタン中に別途溶解させ、撹拌ピリジン溶液中にアルゴン下で45分間にわたり滴下により加えた。反応混合物をさらに一晩撹拌した。溶媒を該反応混合物から除去し、生成物をEtOAc(150mL)中に抽出し、水、NaHCO3溶液及び水で連続的に洗浄し、無水Na2SO4上で乾燥させて固体塊になるまで蒸発させた。所望の生成物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製した:(a)溶離剤:ジクロロメタン中の1%メチルアルコール(MeOH)−1.60gの望ましくないビスDMT誘導体(26.1%)及び(b)ジクロロメタン中の5%MeOH−2.50gの所望の生成物7a(57.9%)。1H NMR(400MHz、[D6]DMSO、25℃):δ7.94−7.91(t、J(H、H)=5.49Hz、IH、D2Oで交換可能)、7.7−7.68(m、3H)、7.60−7.58(d、J(H、H)=8.55Hz、1H、D2Oで交換可能)、7.43−7.10(m、12H)、6.86−6.84(d、4H)、4.62−4.59(t、J(H、H)=5.18、5.49Hz、1H、D2Oで交換可能)、4.01−3.96(m、1H)、3.83(s、3H)、3.71−3.65(m、7H)、3.44−3.42(t、J(H、H)=5.19、5.49Hz、2H)、3.03−2.87(m、4H)、2.05−2.01(t、J(H、H)=7.33、7.63Hz、2H)、1.48−1.30(m、7H)、1.21−1.14(m、2H)。
報告済みの手順(スクシニル化についての参考文献:ラジーブら、Org.Lett.、2003年、第5号、3005頁、及びCPGへの抱合についての参考文献:クマール(Kumar)ら、Nucleosides Nucleotides、1996年、第15号、879頁)に従って所望の固体支持体8aを調製した。化合物7a(1.00g、1.39mmol)、無水コハク酸(0.17g、1.69mmol、アルドリッチから購入)及びDMAP(0.21g、1.72mmol)の混合物を、7mLの無水エチレンジクロリド中に24時間懸濁させた。ジクロロメタンを添加することによって反応混合物を50mLまで希釈させ、希クエン酸水溶液(20mL)で洗浄し、無水Na2SO4上で乾燥させて乾燥状態に至るまで蒸発させた。得られた残渣をさらにP2O5上で真空下にて乾燥させて、ほぼ純粋であるが粗製のモノスクシナートを白色固体として得た(1.10g、96.5%)。得られた生成物をさらなる精製なく後続の反応用のために直接使用した。1H NMR(400MHz、[D6]DMSO、25℃):δ7.94−7.91(t、J(H、H)=5.19、5.49Hz、1H、D2Oで交換可能)、7.83−7.81(d、J(H、H)=7.94Hz、1H、D2Oで交換可能)、7.76−7.68(m、3H)、7.42−7.10(m、12H)、6.88−6.86(d、4H)、4.18−4.12(m、2H)、4.07−3.98(m、2H)、3.83(s、3H)、3.71−3.66(m、7H)、3.00−2.91(m、4H)、2.40(s、4H)、2.04−2.00(t、J(H、H)=7.32Hz、2H)、1.44−1.22(m、7H)、1.19−1.15(m、2H)。
文献(ラジーブら、Org.Lett.、2003年、第5号、3005頁及び同書中で引用されている参照文献)中で報告されている通りにホスホルアミダイトを調製した。化合物7a(1.00g、1.39mmol)及びジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド(0.12g、0.70mmol)をP2O5上で一晩真空にて乾燥させ、その後アルゴン大気下で無水アセトニトリル(5mL)中で懸濁させた。2−シアノエチル−N,N,N’,N’−テトライソプロピルホスファン(0.69mL、2.09mmol)を該懸濁液中に加え、周囲温度で14時間撹拌した。溶媒を真空下で反応から除去し、残渣をEtOAc(40mL)中で懸濁させ、希NaHCO3溶液で洗浄し、それに続けて標準的な処理を行った。フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィにより所望のアミダイト9aを精製した;溶離剤:EtOAc;収量0.79g(61.8%)。31P NMR(161.8MHz、CDCl3、25℃):δ146.01、145.69。
ナプロキセン(1、11.25g、48.86mmol)、ペンタフルオロフェノール(10.00g、54.33mmol)及びDMAP(0.60g、4.91mmol)をDMF(40mL)中に溶解させて周囲温度で撹拌した。l,3−ジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC、11.00g、53.31mmol)を該溶液中に加え、撹拌を一晩継続した。反応の進行中に1,3−ジシクロヘキシル尿素(DCU)が沈殿した。該沈殿したDCUをろ過し、DMFで洗浄し、ろ液を組合せて真空下でDMFを除去した。得られた油性の残渣を、シリカゲルの小カラム(溶離剤:ヘキサン中10%EtOAc)を通してろ過して溶解したDCUを除去し、所望のエステル1cと余剰のペンタフルオロフェノールの混合物を得た(20.30g)。かくして得られた粗製生成物を実験を進めるためにさらなる精製なく直接使用した。1H NMR(400MHz、[D6]DMSO、25℃):δ7.85−7.81(m、3H)、7.48−7.46(dd、J’(H、H)=1.53及びJ’’(H、H)=8.55Hz、1H)、7.32−7.31(d、J(H、H)=2.44Hz、1H)、7.18−7.16(dd、J’(H、H)=2.44及びJ’’(H、H)=8.85Hz、1H)、4.47−4.44(q、J(H、H)=7.02Hz)、3.86(s、3H)、1.63−1.61(d、J(H、H)=7.34Hz、3H)。
イブプロフェン担持テザーの合成
イブプロフェン(1b、5.0g、24.23mmol、アクロス・オーガニック(Acros Organic)から購入)、メチル6−アミノヘキサン酸モノヒドロクロリド(2、6.60g、36.33mmol、フルカから購入)及びDMAP(0.30g、2.46mmol))を200mLの丸底フラスコ内でジクロロメタン(60mL)中に懸濁させ、DCC(5.00g、24.23mmol)を懸濁液中に加えて3分間撹拌した。3分後、3.6mL(25.83mmol)のTEAを該反応中に加え18時間周囲温度で撹拌を続けた。溶媒及び余剰のTEAを真空下で反応から除去し、得られた残渣をジエチルエーテルで研和し、焼結漏斗を通してろ過してDCUを除去した。ろ液を組合せ、回転蒸発器上で蒸発させた。残渣をEtOAc(100mL)中に再溶解させ、KHSO4溶液、水、NaHCO3溶液及び水で連続的に洗浄し、その後に無水Na2SO4上で乾燥させ、真空下で溶媒を蒸発させて化合物3bの黄色味がかった粘性残渣を得た(8.0g)。かくして得られた粗製生成物を後続の反応のためにさらなる精製なく直接使用した。1H NMR(400MHz、[D6]DMSO、25℃):δ7.86−7.84(bt、J(H、H)=5.39、5.00Hz、1H、D2Oで交換可能)、7.19−7.03(m、4H)、3.56(s、3H)、3.53−3.47(q、J(H、H)=7.05Hz、1H)、3.00−2.95(q、J(H、H)=6.64、5.81Hz、2H)、2.39−2.37(m、2H、回転異性体の混合物)、2.23−2.20(t、J(H、H)=7.45、7.05Hz、2H)、1.81−1.74(m、1H)、1.49−1.41(m、2H)、1.36−1.26(m、5H)、1.19−1.11(m、2H)、0.84−0.82(m、6H、回転異性体の混合物)。
化合物3b(8.00g、24.01mmol)を、THF−H2O(4:1、40mL)中のLiOH(1.21g、28.84mmol)と共に4時間撹拌した。該反応混合物から溶媒を真空下で除去し、残渣を濃KHSO4溶液で洗浄した。対応するナプロキセン類似体4aとは異なり、遊離酸4bは水相から沈殿せず、従って該水相をEtOAcを用いて繰り返し抽出し、抽出物を組合せ、Na2SO4上で乾燥させ、かつ真空下で蒸発させて僅かに黄色味がかったの粘性残渣6.60g(86.1%)を得た。かくして得られた酸4bをその後の実験のためにさらなる精製なく直接使用した。1H NMR(400MHz、[D6]DMSO、25℃):δ11.96(bs、1H、D2Oで交換可能)、7.87−7.84(t、J(H、H)=5.39Hz、1H、D2Oで交換可能)、7.19−7.04(m、4H)、4.04−3.99(q、J(H、H)=7.05Hz、1H)、3.62−3.57(q、J(H、H)=7.05Hz、0.1H、小回転異性体)、3.53−3.47(q、J(H、H)=7.05Hz、1.9H)、3.00−2.95(q、J(H、H)=6.22Hz、2H)、2.41−2.37(m、2H、回転異性体の混合物)、2.14−2.10(t、J(H、H)=7.47、7.05Hz、2H)、1.81−1.74(m、1H)、1.46−1.40(m、2H)、1.36−1.26(m、5H)、1.20−1.12(m、2H)、0.85−.82(m、6H、回転異性体の混合物)。
化合物4b(6.60g、20.676mmol)、DMAP(0.26g、2.128mmol)及びペンタフルオロフェノール(5.70g、30.97mmol)をジクロロメタン(60mL)中に溶解させ、撹拌溶液中にDCC(4.27g、20.70mmol)を加えた。該反応混合物を8時間撹拌させた。沈殿したDCUをろ過により除去し、ろ液を蒸発させて所望のエステル5bを含有する粗製油を得た。かくして得られた粗製の5bを、TEA(8mL)の存在下でジクロロメタン中のセリノール(3.5g、38.42mmol)と共に2時間撹拌した。反応の進行中に白色の沈殿物が形成され、これをろ過し、ジクロロメタン、水及びジエチルエーテルで連続的に洗浄し、P2O5上で乾燥させて2.4gの生成物6bを得た。EtOAcを用いた水相の抽出により、さらに1.05gの所望の生成物6bを得た。組合せ収量は42.5%であった。1H NMR(400MHz、[D6]DMSO、25℃):δ7.87−7.84(t、J(H、H)=5.86、5.37Hz、1H、D2Oで交換可能)、7.42−7.40(d、J(H、H)=7.81Hz、1H、D2Oで交換可能)、7.19−7.17(d、J(H、H)=8.30Hz、2H)、7.06−7.04(d、J(H、H)=8.30Hz、2H)、4.57(bs、2H、D2Oで交換可能)、3.69−3.63(m、1H)、3.53−3.47(q、J(H、H)=6.83Hz、1H)、3.36−3.34(d、J(H、H)=5.37Hz、4H)、3.02−2.91(m、2H)、2.39−2.37(d、J(H、H)=7.34Hz、2H)、2.04−2.00(t、J(H、H)=7.33Hz、2H)、1.81−1.75(m、1H)、1.44−1.26(m、7H)、1.18−1.12(m、2H)、0.84−0.83(d、J(H、H)=6.35Hz、6H)。
化合物6b(3.00g、7.65mmol)、4,4’−ジメトキシトリチルクロリド(2.85g、8.41mmol)及びDMAP(0.20g、1.64mmol)の固体混合物を200mLのRB中に取り込み、P2O5上で一晩真空下にて乾燥させた。アルゴン下で該混合物中に無水ピリジン(40mL)を加え、一晩撹拌した。ピリジンを反応から除去し、残渣をEtOAc(100mL)中で懸濁させ、標準的な処理を続けた。所望のモノDMT及びビスDMT生成物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィにより分離した(溶離剤:ジクロロメタン中の2〜3%メタノール、170g(22.3%、ビスDMT誘導体)及び溶離剤:ジクロロメタン中の4%メタノール、1.89g(35.6%、所望のモノDMT生成物7b))。1H NMR(400MHz、[D6]DMSO、25℃):δ7.83−7.80(t、J(H、H)=5.37Hz、1H、D2Oで交換可能)、7.58−7.55(d、J(H、H)=8.79Hz、1H、D2Oで交換可能)、7.34−7.32(d、J(H、H)=7.33Hz、2H)、7.26−7.14(m、9H)、7.02−7.00(d、J(H、H)=7.81Hz、2H)、6.83−6.81(d、J(H、H)=8.79Hz、4H)、4.58−4.56(t、J(H、H)=5.37、4.88Hz、1H、D2Oで交換可能)、3.95−3.93(m、1H)、3.68(s、6H)、3.48−3.45(q、J(H、H)=7.34Hz、1H)、3.41−3.38(t、J(H、H)=5.37Hz、2H)、2.96−2.84(m、4H)、2.34−2.33(d、J(H、H)=7.33Hz、2H)、2.02−1.98(t、J(H、H)=7.33、7.81Hz、2H)、1.76−1.69(m、1H)、1.44−1.36(m、2H)、1.33−1.23(m、5H)、1.16−1.08(m、2H)、0.80−0.78(d、J(H、H)=6.35Hz、6H)。13C NMR (100MHz、[D6]DMSO、25℃):δ174.0、172.8、158.3、145.4、139.9、139.7、136.2、130.1、129.2、128.2、128.1、127.3、113.5、85.5、61.0、55.4、51.1、45.1、44.6、35.7、30.0、29.1、26.3、25.4、22.5、18.8。
対応するナプロキセン誘導体について記載される通りに、対応する前駆体7b(1.00g、1.44mmol)、DMAP(0.27g、2.21mmol)及び無水コハク酸(0.22g、2.20mmol)から所望のスクシナート(0.98g、85.7%)を合成した。コハク酸誘導体を、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィ(溶離剤:ジクロロメタン中の5%メタノール)により精製した。1H NMR(400MHz、[D6]DMSO、25℃):δ7.86−7−80(m、2H、D2Oで交換可能)、7.34−7.32(d、J(H、H)=7.33Hz、2H)、7.28−7.13(m、9H)、7.02−7.00(d、J(H、H)=8.30Hz、2H)、6.85−6.83(d、J(H、H)=8.79Hz、4H)、4.14−1.10(bm、2H)、4.02−3.98(m、1H)、3.68(s、6H)、3.50−3.44(q、J(H、H)=7.33、6.83Hz、2H)、2.96−2.87(m、2H)、2.35−2.33(m、6H)、2.51−2.45(m、7H、2H及びDMSO−d6)、2.01−1.96(t、J(H、H)=7.32Hz、2H)、1.77−1.69(m、1H)、1.42−1.22(m、7H)、1.15−1.07(m、2H)、0.80−0.78(d、J(H、H)=6,35Hz、6H)。13C NMR(100MHz、[D6]DMSO、25℃):δ174.9、174.3、173.2、158.5,145.3、139.9、139.8、136.0、130.2、129.3、128.4、128.1、127.4、113.6、85.8、55.5、46.1、46.1、45.3、44.7、35.6、30.1、29.0、26.2、25.4、22.6、18.8。
イブプロフェンペンタフルオロフェノールエステル(1d)を、イブプロフェン(1b、5.00g、24.23mmol)、ペンタフルオロフェノール(5.4g、29.02mmol)、DCC(5.00g、24.23mmol)及びDMAP(0.30g、2.46mmol)から、ナプロキセン(1a)のペンタフルオロフェノールエステル(1c)の合成について記載された通りに調製した。
ナプロキセン担持リンカーの合成
N−Cbz−6−アミノヘキサン酸(10、30.31g、114.25mmol、ノババイオケム(Novabiochem)から購入)、ペンタフルオロフェノール(25.00g、135.83mmol)及びDMAP(1.54g、12.60mmol)をジクロロメタン(100mL)中に取り込み、これに対してDCC(26.00g、121.01mmol)を撹拌下でゆっくりと加えた。添加中に、該反応の温度が上昇し、ジクロロメタンは沸騰し始め、従ってこれを室温まで冷却して、一晩撹拌させた。反応混合物にジエチルエーテルを添加して200mLまで希釈し、その後に焼結漏斗を通してろ過してDCUを除去し、残渣をジエチルエーテルで洗浄し、洗浄液を組合せ、乾燥状態まで蒸発させた。フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィ(溶離剤:ヘキサン/EtOAc 2:1)により所望の生成物11bを精製した(収量43.54g(88.4%))。1H NMR(400MHz、[D6]DMSO、25℃):δ7.36−7.23(m、6H)、4.99(s、2H)、3.01−2.96(q、J(H、H)=6.35Hz、2H)、2.78−2.52(q、J(H、H)=7.33Hz、2H)、1.69−1.61(m、2H)、1.47−1.29(m、4H)。
化合物11b(26.00g、60.31mmol)及びセリノール(5.00g、54.88mmol)を200mLのジクロロメタン中に懸濁させて、TEA(17mL、121.97mmol)の存在下で一晩周囲温度にて撹拌した。反応中に濃厚な白色沈殿物が形成された。ジエチルエーテル200mLを添加することによって該反応混合物を希釈し、研和させかつろ過した。沈殿物をジエチルエーテルで徹底的に洗浄し、P2O5上で真空下にて乾燥させて、16.51g(81.0%)の所望の化合物12を白色固体として得た。1H NMR(400MHz、[D6]DMSO、25℃):δ7.44−7.42(d、J(H、H)=7.81Hz、1H、D2Oで交換可能)、7.37−7.27(m、5H)、7.24−7.20(t、J(H、H)=5.86、5.37Hz、1H、D2Oで交換可能)、4.99(s、2H)、4.58−4.55(t、J(H、H)=5.37Hz、2H、D2Oで交換可能)、3.70−3.65(m、1H)、3.37−3.34(t、J(H、H)=5.86、3.37Hz、D2O交換後ダブレットに変った、J(H、H、D2O交換後)=5.37Hz、4H)、2.98−2.92(q、J(H、H)=6.84、6.35Hz、2H)、2.06−2.02(t、J(H、H)=7.33Hz、2H)、1.49−1.33(m、4H)、1.24−1.16(m、2H)。
化合物12(14.10g、41.66mmol)及びDMAP(0.60g、4.91mmol)を200mLのRB中に取り込み、P2O5上で真空下にて乾燥させた。次に固体混合物を、アルゴン下で50mLの無水ピリジン中で懸濁させた。4,4−ジメトキシトリチルクロリド(15.5g、44.27mmol)を別途40mLの無水ジクロロメタン中に溶解させ、アルゴン下で撹拌ピリジン溶液に加えた。該反応混合物を一晩周囲温度で撹拌させた。該反応混合物から溶媒を除去し、残渣をEtOAC(200mL)中に抽出させ、NaHCO3溶液で洗浄し、その後、標準的な処理を行った。フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィにより所望の生成物13を精製した(溶離剤:ヘキサン/EtOAc 3:2、8.62g(28.0%、ビスDMT誘導体)及びクロロホルム中の3−4%MeOH、15.28g(57.3%、所望のモノDMT誘導体13))。1H NMR(400MHz、[D6]DMSO、25℃):δ7.63−7.60(d、J(H、H)=8.79Hz、1H、D2Oで交換可能)、7.38−7.17(m、15H、D2O交換後14Hについて計上)、6.87−6.84(d、J(H、H)=8.79Hz、4H)、4.98(s、2H)、4.62−4.59(t、J(H、H)=5.37Hz、1H、D2Oで交換可能)、4.00−3.95(m、1H)、3.72(s、6H)、3.46−3.41(t、J(H、H)=5.37Hz、2H)、3.00−2.87(m、4H)、2.08−2.04(t、J(H、H)=7.33Hz、2H)1.50−1.33(m、4H)、1.25−1.16(m、2H)。
周囲温度で80mLのDMF中のナプロキセン(15.00g、65.14mmol)、DMAP(0.80g、6.55mmol)及びN−ヒドロキシスクシンイミド(10.00g、86.82mmol)の撹拌混合物中にDCC(14.80g、71.73mmol)を加え、撹拌を一晩継続した。沈殿したDCUを該反応からろ過し、DMFで洗浄し、該洗浄液を組合せ、乾燥状態まで真空下で蒸発させた。得られた残渣をジエチルエーテルで研和し、ろ過し、該残渣をジエチルエーテルで徹底的に洗浄し、乾燥させて白色固体のナプロキセンN−ヒドロキシスクシンイミドエステル、22.00g(理論値21.31g)を得た。1H ΝMR(400MHz、[D6]DMSO、25℃):δ7.83−7.78(m、3H)、7.46−7.43(dd、J’(H、H)=1.95、1.46及びJ’’(H、H)=8.79、8.30Hz、1H)、7.32−7.31(d、J(H、H)=2.44Hz、1H)、7.17−7.15(dd、J’(H、H)=2.44及びJ’’(H、H)=8.79Hz、1H)、4.41−4.35(q、J(H、H)=6.84、7.33Hz、1H)、3.86(s、3H)、2.74(s、4H)、1.59−1.57(d、J(H、H)=6.84Hz、3H)。
化合物13及びギ酸アンモニウムを、メタノール−EtOAcの1:1混合物中で懸濁させ、10重量%のPd−C(10%)を該懸濁液中に加え、ヒートガンを用いて該反応混合物を僅かに暖め、2時間周囲温度で撹拌させた。ろ過によりPd−C及び不溶性ギ酸アンモニウムを除去し、ろ液を組合せかつ蒸発させた。残渣をEtOAc中で懸濁させ、NaHCO3水溶液で洗浄して化合物13aを得た。
実施例1中で対応するペンタフルオロフェノールエステル1cの合成について記載された通りに、DMAP(0.80g、6.55mmol)の存在下で、カップリング剤としてDCC(14.80g、71.73mmol)を用いて、ナプロキセン(1a、15.00g、65.14mmol)及びN−ヒドロキシスクシンイミド(10.00g、86.82mmol)からナプロキセンN−ヒドロキシスクシンイミドエステル(21.0g)を調製した。1H NMR(400MHz、[D6]DMSO、25℃):δ7.83−7.78(m、3H)、7.46−7.43(dd、J’(H、H)=1.95、1.46及びJ’’(H、H)=8.79、8.30Hz、1H)、7.32−7.31(d、J(H、H)=2.44Hz、1H)、7.17−7.15(dd、J’(H、H)=2.44及びJ’’(H、H)=8.79Hz、1H)、4.41−4.35(q、J(H、H)=6.84、7.33Hz、1H)、3.86(s、3H)、2.74(s、4H)、1.59−1.57(d、J(H、H)=6.84Hz、3H)。ナプロキセンN−ヒドロキシスクシンイミドエステルを化合物13aと共に撹拌し、化合物7aを得た。分析データについては実施例1を参照のこと。
30mLのDMF中のイブプロフェン(6.00g、29.09mmol)、DMAP(40g、3.27mmol)及びN−ヒドロキシスクシンイミド(4.40g、38.23mmol)の撹拌混合物中にDCC(6.60g、31.99mmol)を加え、一晩撹拌させた。対応するナプロキセン誘導体の合成について記載された通りにDCUをろ過した。得られた残渣をジエチルエーテルと共に研和しろ過して、生成物をエーテル中に溶解させた。ろ液を組合せて、回転蒸発器上で小さい体積まで減量した。ヘキサンを濃縮された溶液中に加えて所望の生成物を沈殿させ、これをろ過し、ヘキサンで洗浄し乾燥させて所望のエステル7.48gを得た(収量84.8%)。1H ΝMR(400MHz、[D6]DMSO、25℃):δ7.28−7.25(d、J(H、H)=8.30Hz、2H)、7.16−7.13(d、J(H、H)=8.30Hz、2H)、4.24−4.18(q、J(H、H)=6.84、7.32Hz、1H)、2.77(s、4H)、2.43−2.41(d、J(H、H)=7.32Hz、2H)、1.84−1.77(m、1H)、1.49−1.47(d、J(H、H)=7.32Hz、3H)、0.85−0.83(d、J(H、H)=6.84Hz、6H)。ナプロキセンN−ヒドロキシスクシンイミドエステルを化合物13aと共に撹拌して化合物7bを得た。分析データについては実施例2を参照のこと。
固体支持体に結合したナプロキセンの合成
化合物5a(2.90g、5.70mmol)及び市販のトランス−4−ヒドロキシ−L−プロリンメチルエステルヒドロクロリド(1.25g、6.88mmol、CNHテクノロジー(CNH Technologies Inc.)から入手)をジクロロメタン(30mL)中に懸濁させ、余剰のTEAを該懸濁液中に加えて2時間周囲温度で撹拌した。溶媒及び余剰のTEAを真空下で該反応混合物から除去し、生成物をEtOAc(100mL)中で抽出した。有機層をKHSO4水溶液、水、NaHCO3溶液及び水で連続的に洗浄し、その後標準的な後処理を行った。得られた残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィ(溶離剤ジクロロメタン中の5%MeOH)により精製して、化合物6cを得た(2.1g(78.4%))。1H NMR(400MHz、[D6]DMSO、25℃):δ7.94−7.92(bt、1H、D2Oで交換可能)、7.77−7.68(m、3H)、7.43−7.41(dd、J’(H、H)=1.66、1.40及びJ’’(H、H)=8.30Hz、1H)、7.26−7.25(d、J(H、H)=2.10Hz、1H)、7.14−7.11(dd、J’(H、H)=2.49及びJ’’(H、H)=8.71Hz、1H)、5.16−5.15(d、0.85H、D2Oで交換可能、主回転異性体)、5.09−5.08(d、0.15H、D2Oで交換可能、小回転異性体)、4.59−4.57(m、0.15H)、4.30−4.20(m、1.85H)、3.84(s、3H)、3.69−3.52(m、6H、溶媒由来のH2Oを含む)、3.34−3.32(bd、2.5H、D2O交換後1Hについて計上した)、3.02−2.97(m、2H)、2.15−2.04(m、3H)、1.89−1.82(m、1H)、1.44−1.30(m、7H)、1.15−1.14(m、2H)。13C NMR(100MHz、[D6]DMSO、25℃):δ173.9、173.0、171.7、157.3、137.8、133.4、129.4、128.7、126.9、126.7、125.5、118.9、106.0、69.1、57.5、55.5、55.0、52.1、45.5、38.7、33.7、29.0、26.1、24.1、18.7。
化合物6cをメタノール中のLliBH4で処置して対応するジオールを得る(ラジーブら、J.Org.Chem.、1997年、第62号、5169頁)。かくして得られたジオールを、DMAPの存在下で無水ピリジン中でDMT−Clと共に撹拌して化合物7cを得る。
化合物8aの合成について実施例1中に記載された通りに、所望のCPG8cを化合物7cから調製する。
化合物9aの合成について実施例1中に記載された通り、所望のホスホルアミダイト9cを化合物7cから調製する。
固体支持体に結合されたナプロキセンの合成
文献中で報告されている通りに化合物14を調製する。アミン15を合成するための一般手順(参:アベル・マギッド(Abdel−Magid)ら、J.Org.Chem.1996年、第61(11)号、3849−3862頁)。この還元アミノ化の代表例が、アミン14とグリオキサル酸エチルの反応を用いて示されている。すなわち、グリオキサル酸エチル(トルエン中の45%溶液;1当量)及びアミン(1当量)を無水THF中で混合し、次にトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(1.5当量)で処置する。該混合物を周囲温度で24時間撹拌する。該反応混合物を飽和NaHCO3溶液の添加によって急冷し、生成物をEtOAc中に抽出する。有機層の濃縮によりアミン15を得る。
ジエステル16の合成(参:サンドニ(St−Denis)ら.Can.J.Chem.2000年、776頁)。すなわちトルエン中の調製されたばかりのアミン15(1当量)の溶液に対して、トルエン中のエチル3−ブロモプロピオナート(1.2当量)を加える。該懸濁液を6時間60℃で加熱し、炭酸ナトリウム水溶液中に注ぎ込む。クロロホルムを用いて該水相を抽出し、濃縮してジエステル16を得る。
ケトエステル17及び18の合成(参:ブレーク(Blake)ら、J.Org.Chem.1964年、5293頁)。
化合物19を得るための18のパン酵母還元(参:サンドニら、Can.J.Chem.2000年、776頁)。蒸留水中のスクロースの溶液(2重量当量)に対して、パン酵母(1.5重量当量)を加える。該懸濁液を回転蒸発器内で32℃で加熱する。次にフラスコの中身をジエステル18(1重量当量)中に注ぎ込む。撹拌を一日間継続し、その後に暖かい(40℃)蒸留水中の追加のスクロースを加える。2日後に混合物に対してセライトを加え、焼結ガラス漏斗を通してろ過する。該ろ液を珪藻土パッドを通してを再ろ過する。洗浄の後、水性層をジクロロメタンで抽出する。有機層を組合せ、蒸発させてエステルアルコール19を得る。
化合物19(1当量)を無水THF中に溶解させ、0℃で無水THF中の1Mの水素化ホウ素リチウム(1当量)に加える。該反応混合物を出発材料が消失するまで0℃で撹拌する。余剰の水素化ホウ素リチウムを水の添加により急冷する。該反応混合物を減圧下で濃縮する。該残渣に対して3Nの塩酸を加え3時間撹拌する。結果としての水性層を酢酸エチルを用いて抽出する。組合さった有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮しジオール20を生成し、カラムクロマトグラフィによりこれを精製する。
ジオール6aからの化合物7aの調製について実施例1中で記載された通りに、ジオール20から化合物21を得る。
化合物7aからの化合物8aの調製について実施例1中で記載された通りに、化合物21から化合物22を得る。
化合物7aからの化合物9aの調製について実施例1中で記載された通りに、化合物21からホスホルアミダイト22を得る。
固体支持体に結合されたナプロキセンの合成
文献(フィリチェフ(Filichev)及びペダーセン(Pedersen)、Tetrahedron、2001年、第57号、9163−68頁)中で報告されている通りに化合物24を調製する。化合物6aからの化合物7aの調製について実施例1で記載された通りに、化合物24からモノDMT化合物25を調製する。
文献(アサートン(Atherton)及びシェパード(Sheppard)、The Peptides、1987年、第9号、1頁、ユーデンフレンド(Udenfriend)及びメイアンホッファー(Meienhofer)編、Academic Press、New York)中で報告されている通りに、ピペリジンで処置することによってFmoc基を化合物25から除去する。Fmocの除去後、得られた遊離アミンをTEAの存在下で化合物11aと共に撹拌し、化合物26を得る。
化合物26の接触水素化により化合物27を得る。
化合物27を、TEAの存在下でエステル1c(スキーム1)と共に撹拌し、化合物28を得る。
7aからのホスホルアミダイト9aの調製について実施例1中で記載された通りに、化合物28からホスホルアミダイト29を調製する。
7aからの支持体8aの調製について実施例1中で記載された通りに、28から固体支持体30を得る。
文献中で報告されている通りに、THF中の1,1’−カルボニルジイミダゾール及び市販のDL−6−メトキシ−α−メチル−2−ナフタレンメタノール(アクロス・オルガニックス(Acros Organics))で化合物27を処置し、化合物31を得る(ヘルナンデス(Hernandez)及びホッジス(Hodges)、J.Org.Chem.、1997年、第62号、3153頁)。
化合物7aからの化合物9aの調製について実施例1中で記載された通りに化合物31からホスホルアミダイト32を調製する。
化合物7aからの支持体8aを調製する目的で実施例中に記載される通りに、化合物31から該固体支持体33を得る。
固体支持体に結合されたナプロキセンの合成
化合物13(12.91g、20.16mmol)を、6時間アルゴン下で周囲温度にてイミダゾール(6.30g、92.54mmol)の存在下でピリジン中のTBDMS−Cl(4.60g、30.52mmol)と共に撹拌した。ピリジンを真空下で反応混合物から除去し、残渣をEtOAc(100mL)中に抽出し、NaHCO3溶液で洗浄し、その後標準的な処理を行った。残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して化合物34を得た(溶離剤:2〜3%ジクロロメタン中のメタノール、収量:15.10g(99.3%))。1H NMR(400MHz、[D6]DMSO、25℃):δ7.65−7.63(d、J(H、H)=8.30Hz、1H、D2Oで交換可能)、7.38−7.17(m、15H、D2O交換後の14Hについてを計上)、6.86−6.84(d、J(H、H)=8.79Hz)、4.01−3.96(m、1H)、3.71(s、6H)、3.58−3.54(m、2H)、3.04−2.88(m、4H)、2.08−2.04(t、J(H、H)=7.33Hz、2H)、1.49−1.31(m、4H)、1.23−1.17(m、2H)、0.72(s、9H)、−0.08(s、3H)、−0.10(s、3H)。
化合物13からの化合物13aの調製について実施例3中で記載された通りに、化合物34をギ酸アンモニウム及びPd−Cと共に撹拌して、化合物35を得る。
化合物27からの化合物31の調製について実施例6中で記載された通りに、化合物35を1,1’−カルボニルジイミダゾール及びDL−6−メトキシ−α−メチル−2−ナフタレンメタンアミンで処置する。文献(ウォルバー(Wolber)及びルーチャート(Ruechardt)、Chem.Ber.、1991年、第124号、1667頁)の手順に従ってDL−6−メトキシ−α−メチル−2−ナフタレンメタンアミンを調製する。完全に保護された尿素誘導体を作製した後、得られた生成物を、余剰のTHF中のTEA存在下で、TEA.3HF(ニストロム(Nystrom)ら、Tetrahedron Lett、1985年、第26号、5393頁)を用いて処置し、化合物36aを得る。
化合物27からの化合物31の調製について実施例6中で記載された通りに、化合物35を1,1’−カルボニルジイミダゾール及び市販のDL−6−メトキシ−α−メチル−2−ナフタレンメタノール(アクロス・オーガニックス)で処置する。完全に保護されたカルバマート誘導体を作製した後、得られた生成物を、余剰のTHF中のTEAの存在下で、TEA.3HF(ニストロームら、Tetrahedron Lett.、1985年、第26号、5393頁)を用いて処置し、化合物36bを得る。
7aからのホスホルアミダイト9aの調製について実施例1中で記載された通りに、化合物36からホスホルアミダイト37aを調製する。
7aからの支持体8aの調製について実施例1中で記載された通りに、36aから固体支持体38aを得る。
化合物7aからの化合物9aの調製について実施例1中で記載された通りに、化合物36bからホスホルアミダイト37bを調製する。
化合物7aからの支持体8aの調製について実施例中に記載された通りに、化合物36bから固体支持体38bを得る。
化合物39をケム・ジーン・コーポレーションから購入した。化合物39(1.50g、2.15mmol)及び化合物1c(1.30g、3.28mmol、1cの調製についての実施例1を参照)を、ジクロロメタン(10mL)中で4時間余剰のTEAの存在下で撹拌した。その後、さらなるジクロロメタンを加わえることによって該反応混合物を80mLまで希釈し、NaHCO3溶液で洗浄し、有機層を乾燥状態まで蒸発させた。得られた残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して化合物42aを得た(0.85g、43.5%、溶離剤:ジクロロメタン中の4%MeOH)。1H NMR(400MHz、[D6]DMSO、25℃):δ11.61(s、IH、D2Oで交換可能)、8.00−7.91(bm、3H、部分的にD2Oで交換可能)、7.76−7.68(m、3H)、7.43−7.01(m、15H)、6.87−6.83(m、4H)、6.17−6.14(t、J(H、H)=6.41、6.71Hz、1H)、5.28−5.27(d、J(H、H)=4.88Hz、1H、D2Oで交換可能)、4.23−4.19(m、1H)、3.89−3.82(m、4H)、3.71−3.65(m、8H)、3.32(s、3H)、3.32−2.90(m、6H)、2.49−2.31(m、1H)、2.29−2.13(m、1H)、1.38−1.18(m、9H)。
化合物42a(0.65g、0.71mmol)の3’−O−スクシナート(0.67g、92.8%)を実施例1中で記載される通りに調製した。1H NMR(400MHz、[D6]DMSO、25℃):δ12.19(bs、1H、D2Oで交換可能)、11.64−11.60(bm、1H、D2Oで交換可能)、8.03−7.75(m、3H)、7.76−7.67(m、3H)、7.42−7.01(m、15H)、6.87−6.76(m、4H)、6.16−6.12(t、J(H、H)=6.71、7.02Hz、1H)、5.17−5.15(m、1H)、4.08−3.99(m、2H)、3.84−3.82(m、3H)、3.71−3.65(m、9H)、3.30−3.19(m、2H)、3.11−2.98(m、6H)、2.65−2.40(11H)、2.34−2.28(m、1H)、1.37−1.28(m、9H)、1.17−1.13(m、10H)。
オリゴヌクレオチドの合成、精製及び分析
合成:
以下に記載される通り幾つかの待機工程に対する修正を加えた上でメーカーが記した標準の93工程サイクルを用いて、394ABI機上でRNA分子を合成した。該固体支持体は社内で入手可能であり、該単量体はピアース・ニュークレイック・アッシド・テクノロジー(Pierce Nucleic Acids Technologies)製の高速保護基(5’−O−ジメトキシトリチル N6−フェノキシアセチル−2’−O−t−ブチルジメチルシリルアデノシン−3’−O−N,N’−ジイソプロピル−シアノエチルホスホルアミダイト、5’−O−ジメトキシトリチル−N4−アセチル−2’−O−t−ブチルメチルシリルシチジン−3’−Ο−N,N’−ジイソプロピル−2− シアノエチルホスホルアミダイト、5’−O−ジメトキシトリチル−N2−p−イソプロピルフェノキシアセチル−2’−O−t−ブチルジメチルシリルグアノシン−3’−O−N,N’−ジイソプロピル−2−シアノエチルホスホルアミダイト、及び5’−O−ジメトキシトリチル−2’−O−t−ブチルジメチルシリルウリジン−3’−O−N,N’−ジイソプロピル−2−シアノエチルホスホルアミダイトを伴うRNAホスホルアミダイトであった。全ての2’−O−Meアミダイトはグレン・リサーチ(Glen Research)から受領した。全てのアミダイトは、アセトニトリル(CH3CN)中で0.15Mの濃度及び12〜15分のカップリング時間で使用した。活性化剤は5−(エチルチオ)−1H−テトラゾール(0.25M)であり、PO−酸化についてはイオジン/水/ピリジンを使用し、PS−酸化については、無水アセトニトリル中の2%ボーケージ(Beaucage)試薬(アイアー(Iyer)ら、J.Am.Chem.Soc、1990年、第112号、1253頁)を用いた。硫化時間は約6分であった。
合成の完了後、支持体を、ねじ蓋式バイアル(VWRカタログ番号20170−229)又はねじ蓋式のRNアーゼを含まないマイクロフュージュ試験管に移した。55℃で15時間にわたりエタノール中のアンモニア混合物[アンモニア:エタノール(3:1)]1.0mLを用い、塩基及びリン酸基の同時脱保護を伴って、オリゴヌクレオチドを支持体から切断させた。バイアルを氷上で手短に冷却し、次にエタノール中のアンモニア混合物を新しいマイクロフュージュ試験管に移した。CPGを2×0.1mL分量のRNアーゼを含まない脱イオン水で洗浄した。洗浄液を組合せ、ドライアイス浴上で10分間冷却し、その後にスピードバック内で乾燥させた。
得られた白色の残渣をトリエチルアミン、トリエチルアミントリヒドロフルオリド(TEA.3ΗF)及びNMP(4:3:7)400μl中に再懸濁させ、一晩50℃で加熱し、2’位でtert−ブチルジメチルシリル(TBDMS)基を除去した(ウィンコット(Wincott)ら、Nucleic Acids Res.、1995年、第23号、2677頁)。次に該反応を400μlのイソプロポキシトリメチルシラン(iPrOMe3Si、アルドリッチから購入)で急冷し、さらにキャップを開放状態にしたまま加熱ブロック上で10分間インキュベートした(これにより揮発性イソプロポキシトリメチルシリルフルオリドアダクツが蒸発した)。残留する急冷試薬をスピードバック内での乾燥によりにより除去した。ジエチルエーテル中の3%トリエチルアミン1.5mLを加え、遠心分離により沈殿させた。沈殿物を混乱させずに上清をピペット採取し、沈殿物をスピードバック内で乾燥させた。粗製RNAを、マイクロフュージュ試験管中において白色の綿毛状の材料として得た。
RNアーゼを含まない脱イオン水(1.0mL)中に試料を溶解させ、以下の通り定量した。最初に水単独(1mL)でブランキングを実施し、マイクロフュージュ試験管中で20μLの試料と980μLの水を充分に混合し、キュベットに移して260nmで吸光度の読取値を得た。該粗製材料を乾燥させて−20℃で保存した。
PAGE精製
合成オリゴマーのPAGE精製をサンブルックらにより報告された通りに実施した(「Molecular Cloning: a Laboratory Manual」、第2版、Cold Spring Harbor Laboratory Press、Cold Spring Harbor、New York、1989年)。未修飾及び修飾オリゴリボヌクレオチドの精製のために12%変性ゲルを調製した。120mLの濃縮液+105mLの希釈剤+25mLの緩衝液(ナショナル・ダイアグノースティックス(National Diagnostics))を取り上げ、次に50μLのTEMED及び1.5mLの10%APSを加えた。ゲルを注ぎ込み、1/2時間放置して重合させる。RNAを水20μL及びホルムアミド80μL中に懸濁させた。左レーン上にゲル追跡染料を投入し、続いてゲル上にゆっくりと試料を投入した。ゲルを、4〜6時間36Wで1倍TBE緩衝液上にランさせる。ひとたびランが完了したら、ゲルを分取TLCプレート上に移し、UV光下で見る。バンドを切断する。水中に浸し圧壊させる。一晩振盪器内に放置する。溶離剤を除去する、スピードバック内で乾燥させる。
次に精製された乾燥オリゴマーをSephadex G−25M(アマーシャム・バイオサイエンシーズ(Amersham Biosciences))を用いて脱塩した。10mLのRNアーゼを含まない脱イオン水を用いてカートリッジを3回状態調節した。最後に、精製オリゴマーを2.5mLのRNアーゼを含まない水中に溶解させ、非常に緩慢な滴下溶離で共にカートリッジを通過させた。塩を含まないオリゴマーを3.5mLのRNアーゼを含まない水を用いてねじ蓋式バイアル中に直接溶離させた。
キャピラリーゲル電気泳動(CGE)及び電気スプレーLC/Ms
およそ0.10ODのオリゴマーを最初に乾燥させ、次に水(50μL)中に再溶解させて、その後CGE及びLC/MS分析用の特殊バイアル中にピペット採取する。ナプロキセン−抱合されたオリゴリボヌクレオチドのCGE分析については図16を参照のこと。ナプロキセン−抱合されたオリゴリボヌクレオチドのLC−MS電気スプレー分析については図17を参照のこと。
デュアルルシフェラーゼ遺伝子サイレンシングアッセイ
アッセイ:
ハイスループット96−ウェル平板フォーマットルシフェラーゼサイレンシングアッセイを用いてsiRNAインビトロ活性を判定した。可能な2つのフォーマットのうちの1つでアッセイを実施した。第1のフォーマットでは、先ず最初に、蛍(標的)及びウミシイタケ(対照)ルシフェラーゼをコードするプラスミドを用いてHeLaSS6細胞を過渡的にトランスフェクトする。リポフェクタミン2000(インビトロジェン(Invitrogen)及びプラスミドgWiz−Luc(アルデブロン(Aldevron)、Fargo、ノースダコタ州)(200ng/ウェル)及びpRL−CMV(プロメガ(Promega)、Madison、ウィスコンシン州)(200 ng/well)用いてDNAトランスフェクションを実施した。2時間後、該プラスミドトランスフェクション媒体を除去し、該蛍ルシフェラーゼターゲティングsiRNAを、細胞に対して様々な濃度で加えた。第2のフォーマットでは、HeLaデュアル−luc細胞(蛍及びウミシイタケルシフェラーゼの両方を安定して発現)に蛍ルシフェラーゼターゲティングsiRNAを直接トランスフェクトした。メーカーのプロトコルに従ってTransIT−TKO(ミラス(Mirus)、Madison、ウィスコンシン州)又はリポフェクタミン2000のいずれかを用いてSiRNAトランスフェクションを実施した。24時間後、プレートルミノメータ(VICTOR2、パーキンエルマー(PerkinElmer)、Boston、マサチューセッツ州)及びデュアル−Gloルシフェラーゼアッセイキット(プロメガ)を用いて、蛍及びウミシイタケルシフェラーゼ発現の両方について細胞を分析した。擬似処置された(siRNA無し)対照との関係におけるパーセント遺伝子サイレンシングを判定するために蛍/ウミシイタケルシフェラーゼ発現率を使用した。
図20及び21を参照。
siRNAの全遺伝子サイレンシング活性を保持しながら、センス及びアンチセンスストランドのいずれか又は両方の3’ナプロキセン抱合を達成することが可能である。同様に、イブプロフェンは、活性の喪失無くsiRNAに対して抱合され得る。
アラルキルリガンド抱合されたsiRNAの血清安定性
アッセイ:
センス(S)又はアンチセンスストランド(AS)のいずれかが5’−32P標識された微量の材料(例えば、32P−S/AS及びS/32P−AS)を含有するsiRNA2重鎖を、1μMの貯蔵濃度で調製する。末端標識されたセンス又はアンチセンスストランドの存在によって、siRNA2重鎖との関連において個々のストランドを監視することが可能になる。従ってテストされた各siRNA配列について2つの2重鎖調製物が作られる。100nMの2重鎖最終濃度でsiRNA2重鎖を90%ヒト血清中でインキュベートする。簡単にいうと、1μMのsiRNA2重鎖2μlを37℃で18μlの100%凝血塊外ヒト血清と混合させる。標準的な経時変化について、2μlアリコートを10秒、15分、30分、1時間、2時間及び4時間で取り出し、90%のホルムアミド、50mMのEDTA、10mMのDTT及び染料キシレンシアノール及びブロモフェノールブルーを含有する18μlの停止混合物内で直ちにこれを急冷する。試料を、対照試料(緩衝液単独で4時間のインキュベーション)と共に変性ポリアクリルアミドゲル上で分離し、部分的アルカリ加水分解ラダーをマーカーとして用いる。該ゲルを放射線標識されたsiRNA及びその分解フラグメントの検出を可能にするフジイメージプレートに曝露する。
図22−28を参照のこと。
ナプロキセン抱合されたsiRNA
方法:
siRNAに対するナプロキセンの抱合が、血清アルブミンに対するsiRNAの結合親和力に及ぼす効果が評価されてきた。該抱合体は、siRNA薬物の薬物動態分布を改善するための化学的解決法を提供している。
アルブミンに対するsiRNAの結合親和力を測定するために、標準的手順を用いT4ポリヌクレオチドキナーゼを使用してsiRNA2重鎖のセンスストランドの5’末端に32Pで標識する。表I中に示されているsiRNA2重鎖の各々をこのアッセイにおいて試験することになる。取り込まれていない標識を、G25カラムを用いて除去し、標識付けをポリアクリルアミドゲル電気泳動により確認する。標識されたRNA(50nM)及び相補的ストランド(50nM)の固定濃度を、増大するアルブミン濃度でインキュベートし(脂肪酸を含まないヒト血清アルブミン、シグマA3782、ロット番号94H9318、シグマケミカル、St.Louis、ミズーリ州)かつ、0.1mMのEDTA及び0.005%のTween80を含有するリン酸緩衝生理食塩緩衝液中において1時間25℃でインキュベートする。インキュベーションの後、試料を、30,000の分子量カットオフを伴う低結合再生セルロースろ過膜(ミリポア)上に投入する。試料を、マイクロフュージュ(NYセントリフュージュ(NYCentrifuge)5415C;エッペンドルフ(Eppendorf)、Westbury、ニューヨーク州)中で3〜6分間3000rpm(735g)で穏やかに回転させ、ろ液中に投入された体積の約20%の収集を可能にする。
式中、Oは未結合siRNA、Aは未結合アルブミン、OAはsiRNA−アルブミン複合体そしてKAは平衡会合定数である。試験対象のオリゴヌクレオチドは表I中に列記されている。
ナプロキセンは、アルブミンに対するsiRNAの結合能力に対しても同様に効果を有するはずである。アルブミンの固定濃度(50μM)を利用しかつ標識されたsiRNA2重鎖の濃度を変動させるという点を除き、結合曲線用に用いられたものと類似の技術を用いて容量曲線を測定する。
b PTEN配列は、薬学活性を伴うアンチセンスオリゴヌクレオチドのものとアンチセンスストランド上において(3’dTdTを例外として)同一である[36]。
c c−raf配列は、薬学活性を伴うアンチセンスオリゴヌクレオチドのものとアンチセンスストランド上において(3’dTdTを例外として)同一である[37]。
d H−ras配列は、薬学活性を伴うアンチセンスオリゴヌクレオチドのものとアンチセンスストランド上において(3’dTdTを例外として)同一である[38]。
e Apo−B配列は、薬学活性を伴うアンチセンスオリゴヌクレオチドのものとアンチセンスストランド上において(3’dTdTを例外として)同一である[38]。
メスのBALB/cマウス(6週齢、ハーラン・スプラーグ・ドーレイ(Harlan Sprague Dawley)、Indianapolis、インディアナ州)を、国立衛生研究所(National Institue of Health)規則に合致する条件下で1ケージあたり3匹収容した。抱合されていない及びスクランブルされた対照を含むsiRNA(表I、siRNA1〜16)、及びsiRNAを全く含有しないビークルを、指示された用量レベルで1日1回3日間、0.9%NaCl中で腹腔内投与し、分析用に組織を収獲する。
ヒト肺癌腫A549細胞を収獲し、5×106の細胞(200μL)をヌードマウスの内腿に皮下注入する。およそ1ヶ月で蝕知可能な腫瘍が発達する。ナプロキセン抱合されたRNA及びスクランブルされた対照(表I、siRNA5〜12)を含めた、c−raf及びH−rasメッセージをターゲティングするsiRNA、及びsiRNAを全く含有しないビークルを、およそ10週の間隔日に体重1kgあたり20mgの投薬量でマウスに腹腔内投与する。この期間中、腫瘍の成長についてマウスを監視する。
ヒト乳癌腫MDA−MB−231細胞を収獲し、5×105細胞(200μL)を胸腺欠損ヌードマウスの乳房体脂肪中に皮下注入する。およそ1ヶ月で蝕知可能な腫瘍が発達する。ナプロキセン抱合されたRNA及びスクランブルされた対照(表I、siRNA5〜12)を含めた、c−raf及びH−rasメッセージをターゲティングするsiRNA、及びsiRNAを全く含有しないビークルを、体重1kgあたり1日5、10及び25mgの投薬量で毎日およそ20日間マウスに腹腔内投与する。この期間中、腫瘍の成長についてマウスを監視する。
ヒト肺癌腫A549細胞を収獲し、5×106細胞(200μL)をヌードマウスの内腿に皮下注入する。およそ1ヶ月で触知可能な腫瘍が発達する。ナプロキセン抱合されたRNA及びスクランブルされた対照(表I、siRNA5〜12)を含めた、c−raf及びH−rasメッセージをターゲティングするsiRNA、及びsiRNAを含有しないビークルを、腫瘍部位でマウスに皮下投与する。薬物処置は腫瘍細胞接種の1週間後に開始し、週に2回4週間にわたり行う。合計で9週間、腫瘍成長についてマウスを監視する。
siRNAによるAop−BmRNA発現の阻害(表I、siRNA13〜16)をインビトロ及びインビボで評価することになる。(ヨー(Yao)ZQ、シュー(Zhou)YX、グォ(Guo)J、フェン(Feng)ZH、フェン(Feng)XM、チェン(Chen)CX、ジョー(Jiao)JZ、ワン(Wang)SQ Acta Virol.1996年2月;第40(1)号:35〜9頁。「Inhibition of hepatitis B virus in vitro by antisense oligonucleotides」の手順に従った)処置の後、HEP−G2細胞内のメッセージレベルに及ぼすsiRNA処置の影響を分析する。
ナプロキセン−ヒドロキシプロリノール・構築ブロックの合成
6−ベンジルオキシアミノヘキサン酸(1001、13.25g、50mmol)を、無水ジクロロメタン(50mL)中に溶解させ、0℃まで冷却した。該溶液に対して、ジイソプロピルカルボジイミド(6.31g、7.7mL、50mmol)及びトリエチルアミン(10.2g、13.7mL、100mmol)を加えた。0℃で20分間撹拌した後、4−ヒドロキシ−L−プロリンメチルエステルヒドロクロリド(1002、9.6g、50mmol)を加え、一晩アルゴン下で室温にて撹拌を継続した。反応混合物を乾燥状態まで蒸発させた。残渣に酢酸エチル(100mL)を加え、ろ過してジイソプロピル尿素を除去した。沈殿物を酢酸エチル(50mL)で洗浄した。組合さった有機層を2NのHCl、飽和重炭酸ナトリウム及び水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過して乾燥状態まで蒸発させた。化合物1003(Rf=10%MeOH/CHCl3中0.6、22g)を得、それをさらなる精製なく次の段階用に直接使用した。
無水テトラヒドロフラン(50mL)中のリチウムボロヒドリド(1.34g)の溶液に対して、0℃で30分間にわたりTHF(50mL)中のメチルエステル1003の溶液を加えた。添加後、反応混合物を室温にし、アルゴン下でさらに撹拌した。反応の完了を4時間後にTLCにより確認した。(Rf=10%MeOH/CHCl3中0.4)。反応混合物を乾燥状態まで蒸発させ、0℃に冷却した。残渣に対して3NのHCl(100mL)をゆっくりと加えた。30分間撹拌した後、生成物をジクロロメタン(3×100mL)で抽出した。組合わさった有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。有機層をろ過し、乾燥状態まで蒸発させた。化合物1004を、最初に不純物を除去するため酢酸エチルで溶離することによって精製し、次にジクロロメタン/メタノール(5%)で溶離することにより、カラムクロマトグラフィを用いて精製し14.3g(70%)を得た。1H NMR(400MHz、DMSO−d6):環におけるアミド結合に起因する観察された回転異性体。δ7.35(m、5H)、5.0(s、2H)、4.92(d、OH、D2O交換可能、4.78(t、OH、D2O交換可能)4.28(m、1H)、3.95(m、1H)、3.2−3.48(m、5H)、2.92−3.0(m、2H)、2.1−2.3(m、2H)、1.7−2.0(2H)、1.34−1.52(m、4H)、1.2−1.3(m、2H)。13C NMR(100MHz、DMSO−d6):δ171.3、171.1(80℃での実施の間に消失する回転異性体に起因する小規模)、156.1、137.3、128.3、127.7、68.2、65.1、61.9、57.5、55.1、36.1、34.2、29.3、26.1、25.9、24.6、24.1、20.77、14.09。
化合物1004(14g、38.4mmol)を無水ピリジンと共に3回同時蒸発させ、次にピリジン(60mL)中に溶解させた。この溶液に対して、ジメチルアミノピリジン(0.488g、4mmol)及びDMT−Cl(13.6g、40.3mmol、1.05当量)を室温で加えた。反応混合物を16時間室温で撹拌した。余剰のDMT−Clをメタノール(25mL)の添加により急冷した。溶液を減圧下で乾燥させた。残渣を酢酸エチル(300mL)中に懸濁させて、飽和重炭酸溶液、塩水及び水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し蒸発させた。溶媒の除去後に24.2gの粗製生成物を得た。2%MeOH/DCMを用いたシリカゲル上での精製時点で、白色の泡状固体として化合物1005を得た(21.3g、83%)。1H NMR(400MHz、DMSO−d6):δ7.18−7.38(m、14H)、6.2−6.5(m、4H)、5.0(s、2H)、4.9(d、−OH、D2Oで交換可能)、4.4(m、1H)、4.15(m、1H)、3.7(s、6H)、3.56(m、1H)、3.32(m、1H)、3.14(m、1H)、2.9−3.0(m、4H)、2.18(m、2H)、1.8−2.1(m、2H)、1.1−1.5(m、6H)。13C NMR(100MHz、CDCl3):δ174.7、172.7、171.9、171.3、171.2、158.8、158.7、158.6、158.5、158.4、158.3、156.7、156.7、156.6、147.5、145.8、145.2、144.9、144.7、144.4、139.6、137.1、137.04、137.01、136.9、136.82、136.78、136.55、136.47、136.45、136.3、136.28、135.93、135.85、135.81、130.2、130.1、130.0、129.9、129.3、128.69、128.66、128.22、128.16、128.0、127.99、127.94、127.91、127.77、113.52、113.43、113.35、113.3、113.24、113.19、113.03、86.8、86.1、85.9、73.0、71.6、71.5、70.5、69.3、67.3、67.1、68.76、68.71、64.38、63.7、60.58、60.0、56.4、55.8、55.7、55.45、55.41、55.35、55.33、40.97、40.87、40.77、37.13、36.83、35.13、35.00、34.81、34.6、33.3、29.8、26.73、25.5、26.4、26.2、24.9、24.6、24.5、24.3、24.2、21.1、14.3。
化合物1005(4.90g、7.353mmol)を、酢酸エチル−メタノール(9:1、40mL)中に溶解させ、アルゴンでパージした。該溶液に対して10%の炭素上のパラジウム(0.5g、湿潤デグサ(Degussa)タイプE101NE/W)を加えた。フラスコを水素で2回パージし、2時間水素雰囲気下において室温でさらに撹拌した。出発材料の消失をTLCによって確認した。反応混合物をセライトのパッドを通してろ過し、酢酸エチル−メタノール(9:1)で洗浄した。組合わさった有機層を減圧下で濃縮させ、白色の固体として化合物1006を得た(3.80g、97%)。これをそのまま次の段階のために使用した。1H NMR(400MHz、DMSO−d6):δ7.16−7.32(m、9H)、6.86(m、4H)、5.0(bs、1H)、4.4(m、1H)、3.9−4.25(m、2H)、3.72(s、6H)、3.56(m、1H)、3.32(m、1H)、3.14(m、1H)、2.98−3.0(m、2H)、2.45(m、2H)、2.2(m、2H)、1.8−2.04(m、3H)、1.1−1.45(m、4H)。13C NMR(100MHz、DMSO−d6):δ17.9、157.9、145.1、144.76、135.8、135.7、129.5、127.8、127.7、127.5、126.5、113.2、113.1、85.7、85.0、68.5、67.4、63.3、54.9、41.6、36.2、34.2、33.3、32.5、26.2、24.7、24.4。
化合物1006(3.80g、7.14mmol)を、1時間トリエチルアミンの存在下でジクロロメタン中の化合物1c(3.1g、7.83mmol)と共に撹拌した。標準的な後処理の後、残渣を、溶離剤として3〜4%メタノールを含有するジクロロメタンを用いたフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィに付し白色の発泡体として化合物7cを得た(5.45g、99.56%)。1H NMR(500MHz、[D6]DMSO、25℃):δ7.91−7.89(bm、1H、D2Oで交換可能);7.76−7.68(m、3H)、7.43−7.41(d、J(H、H)=8.5Hz、1H);7.31−7.15(m、10H);7.11−7.09(m、1H);6.86−6.83(m、4H);5.95(d、0.7H、D2Oで交換可能);4.89(d、0.3H、D2Oで交換可能);4.39−4.37(m、0.7H);4.29−4.27(m、0.3H);4.14−4.10(m、0.7H)、4.03−4.00(m、0.3H);3.83−3.82(d、J(H、H)=2Hz、3H);3.71−3.67(m、7H);3.52−3.50(m、0.7H):3.44−3.40(m、0.3H);3.29−3.21(m、1.4H);3.12−3.10(m、0.7H);3.00−2.94(m、3H);2.11−1.79(m、4H);1.41−1.14(m、9H)。
化合物7c(1.04g、1.39mmol)を、DMAP(0.52g、4.25mmol)の存在下でエチレンジクロリド(10mL)中の無水コハク酸(0.21g、2.09mmol)と共に48時間周囲温度で撹拌した。ジクロロメタンを添加することによって反応混合物を20mLまで希釈し、氷冷クエン酸溶液で洗浄した。真空下で溶媒を除去して粗製スクシナートを得、それをさらなる精製なく直接使用した。かくして得られたスクシナートをアセトニトリル(10mL)を中に取り込み、これに対してDMAP(0.17g、1.39mmol)及びPh3P(0.36g、1.37mmol)を加え、その後エチレンジクロリド(3mL)中のDTNP(0.43g、1.38mmol)の溶液を加えた。結果としての混合物をその後、155μM/gという投入量、平均細孔サイズ484A(5.8g)でミリポア製のlcaa CPGを用いて、実施例1中に記載される通りに処置し、58.34μM/gという投入量で所望のCPG8cを得た。
化合物7c(2.61g、3.49mmol)を無水ジクロロメタン(15mL)中に取り込み、DIEA(2.0mL、11.48mmol)をアルゴン大気下周囲温度で該溶液中に加えた。N,N−ジイソプロピルアミノβ−シアノエチルホスホンアミディッククロリド(ケム・ジーン・コーポレーションから購入)(1.3g、5.49mmol)を滴下により該撹拌中の溶液に加え、撹拌を3時間継続した。さらなるジクロロメタンを加えることによって反応混合物を40mLまで希釈し、有機層を希NaHCO3溶液で洗浄し、その後標準的な後処理を行う。フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィ(溶離剤:ヘキサン/酢酸エチル(1:2))の後に、所望の化合物9cを白色の発泡体として得た(2.47g、74.8%)。1H NMR(160MHz、CDCl3、25℃):δ145.87、145.78、145.40、144.99。
ナプロキセン抱合されたsiRNAを用いたインビボApoB遺伝子サイレンシング
アッセイ:
マウス−メスC57/BL6;投薬量−単回静脈内注入;断首−注入後72時間;グループ−1グループあたり6匹。投薬から72時間後に血液、肝臓及び空腸の収集し、その後bDNAアッセイによりmRNAレベルを監視する。
結果は以下の表III及び表IVに示されている。
本明細書中で引用されている全ての特許文献及び刊行物は、参照として本明細書中に内含される。
当業者であれば、本明細書中に記載されている該発明の特定の実施形態に対する数多くの等価物を認識するか、又は日常的なものを超えない実験を用いてそれを認識できることであろう。かかる等価物は以下の特許請求の範囲により包含されるよう意図されている。
Claims (120)
- 第1のストランドと第2のストランドを含み、該第1のストランド及び第2のストランドが独立して下記の化学式Iで表されることを特徴とする2本鎖オリゴヌクレオチド。
Xは、H、−P(O)(OM)2、−P(O)(OM)−O−P(O)(OM)2、−P(O)(Oアルキル)2、−P(O)(Oアルキル)−O−P(O)(Oアルキル)2、又は−A6−[A7−(A5)w]yであり;
X1は
Z1は、各出現について独立してO又はSを表わし;
Z2は、各出現について独立して−OH、−OM、−Oアルキル、−Oアリール、−Oアラルキル、−SH、−SM、−Sアルキル、−Sアリール、−Sアラルキル、−N(R3)R4、−(C(R11)2)mN(R11)2、−N(R11)(C(R11)2)mN(R11)2、又はアルキルを表わし;
R1及びR2は各出現について独立してH、OH、F、−Oアルキル、−Oアリル、−O(CR11)2)vOR11、−O(C(R11)2)vSR11、−O(C(R11)2)vN(R11)2、−O(C(R11)2)vC(O)N(R11)2、−N(R11)2、−S(C1−C6)アルキル、−O(C(R11)2)vO(C1−C6)アルキル、−O(C(R11)2)vS(C1−C6)アルキル、−O(C(R11)2)vO(C(R11)2)vN((C1−C6)アルキル)2、−O(C(R11)2)vON((C1−C6)アルキル)2、又は−O−A10−[A11−(A5)w]yを表わし;
R3及びR4は、H又はアルキルを表わすか;そうでなければR3及びR4は一緒になって3−、4−、5−、6−又は7−員環を形成し;
R5は各出現について独立してH、OH、F、−Oアルキル、−Oアリル、−O(C(R11)2)vOR11、−O(C(R11)2)vSR11、−O(C(R11)2)vN(R11)2、−O(C(R11)2)vC(O)N(R11)2、−N(R11)2、−S(C1−C6)アルキル、−O(C(R11)2)vO(C1−C6)アルキル、−O(C(R11)2)vS(C1−C6)アルキル、−O(C(R11)2)vO(C(R11)2)vN((C1−C6)アルキル)2、又は−O(C(R11)2)vON((C1−C6)アルキル)2を表わし;
R6は、各出現について独立してH、アルキル又は−NHCH2CH=CH2を表わし;
R7は、各出現について独立してH、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アシル、シリル又はB3を表わし;
R8は、各出現について独立してアルキル、アリール、アラルキル、アシル、又はシリルを表わし;
R9は、各出現について独立して水素、アルキル、アリール、アラルキル、アシル、アルキルスルホニル、アルキルスルホキシド、アリールスルホニル、アリールスルホキシド又はシリルを表わし;
R10はシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール又はヘテロアリールであり;
R11は各出現について独立して水素又はアルキルを表わし;
n1及びn2は独立して0以上21以下を表わし;
mは各出現について独立して1、2、3、4、5、6、7又は8を表わし;
m1は各出現について独立して0、1、2、3、4、5、6、7又は8を表わし;
vは各出現について独立して1、2、3、又は4を表わし;
wは、原子価の法則に合致して各出現について独立して1、2又は3を表わし;
yは、原子価の法則に合致して各出現について独立して1、2、3、4又は5を表わし;
Mは各出現について独立して+1という全体的電荷をもつアルカリ金属又は遷移金属を表わし;
A1は各出現について独立して
A2は各出現について独立して
A3は各出現について独立して
A4は各出現について独立して1つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アルキニルジラジカル、アルキルアルキニルジラジカル、アミノアルキルジラジカル、チオエーテル、−C(O)−、−S(O)−、−S(O)2−、B1C(R2)B2、B1C(R)(B2)2、B1C(B2)3、B1N(R)(B2)、B1N(B2)2を表わすか又は、
B1はA3とA4の間の結合であり;
B2はA4とA5の間の結合であり;
Rは各出現について独立して水素又はアルキルを表わし;
A5はアラルキルであり;
A6は1つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アミノアルキル、−C(O)−、−S(O)−、−S(O2)−であるか又は
B3は、A6とA7の間の結合であり;
B4は、A6とA1の間の結合であり;
n3は、各出現について独立して1以上15以下を表わし;
n4は、原子価の法則に合致して1、2、3、4又は5であり、
A7は1つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−C(O)−、−S(O)−、−S(O)2−、B3C(R)2B5、B3C(R)(B5)2、B3C(B5)3、B3N(R)(B5)、B3N(B5)2であるか又は、
pは各出現について独立して1、2、3又は4を表わし;
B5はA5とA7の間の結合であり;
A8は、
という式、又は
X2は1つの結合であるか又は式
B6はA8とA1の間の結合であり;
B7はA8とA9の間の結合であり;
A9は1つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−C(O)−、−S(O)−、−S(O)2−、B7C(R)2B8、B7C(R)(B8)2、B7C(B8)3、B7N(R)(B8)、B7N(B8)2であるか又は、
B8はA5とA9の間の結合であり;
A10は1つの結合であるか又は、
R12及びR13は各出現について独立してH、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アシル、シリル、又はB9を表わし;
B9はA10とA11の間の結合であり;
B10はA10とOの間の結合であり;
A11は1つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−C(O)−、−S(O)−、−S(O)2−、B9C(R2)B11、B9C(R)(B11)2、B9C(B11)3、B9N(R)(B11)、B9N(B11)2であるか又は
B11はA5とA11の間の結合であり;かつ
A5が少なくとも1回出現することを条件とする。) - A5が、−(C(R)2)m−A99であり、式中A99は任意には置換されているフェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナントレニル、ピレニル、ピリジニル、キノリニル、アクリジニル、フェナトリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、1,7−フェナントロリニル、インドリル、チアナフテニル、ベンゾキサゾリル、ベンゾフラニル、1,2−ベンズイソキサゾリル、ベンズイミダゾリル、ピロリル、チオフェニル、イソキサゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、又はテトラゾリルであることを特徴とする請求項1記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R1−IIAがアルキルであることを特徴とする請求項3記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R1−IIAが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、sec−ブチル、イソブチル又はtert−ブチルであることを特徴とする請求項3記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R1−IIAがメチルであることを特徴とする請求項3記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R1−IIBが水素であることを特徴とする請求項3記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R1−IIAがメチルであり、R1−IIBが水素であることを特徴とする請求項3記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R2−IIが、水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル又はアミノであることを特徴とする請求項3記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R2−IIがHであることを特徴とする請求項3記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R3−IIがアルコキシルであることを特徴とする請求項3記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R3−IIが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、sec−ブトキシ、イソブトキシ又はtert−ブトキシであることを特徴とする請求項3記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R3−IIがメトキシであることを特徴とする請求項3記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R1−IIAがメチル、R1−IIBがH、R2−IIがH、及びR3−IIがメトキシであることを特徴とする請求項3記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R1−IIAがメチル、R1−IIBがH、R2−IIがH、R3−IIがメトキシであり、wが1、yが1、A6が結合、A8がB6−[C(R14)2]n 3−B6、n3が1、R14がA8とA9の間の結合、A10が結合、A7が−CH2−、A9が結合、そしてA11が−CH2−であることを特徴とする請求項3記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R1−IIIAがアルキルであることを特徴とする請求項16記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R1−IIIAが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、sec−ブチル、イソブチル又はtert−ブチルであることを特徴とする請求項16記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R1−IIIAがメチルであることを特徴とする請求項16記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R1−IIIBが水素であることを特徴とする請求項16記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R1−IIIAがメチルであり、R1−IIIBが水素であることを特徴とする請求項16記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R2−IIIが、水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル又はアミノであることを特徴とする請求項16記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R2−IIIがHであることを特徴とする請求項16記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R3−IIIがアルキルであることを特徴とする請求項16記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R3−IIIが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、sec−ブチル、イソブチル、tert−ブチル、ペンチル、ヘキシル又はヘプチルであることを特徴とする請求項16記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R3−IIIがイソブチルであることを特徴とする請求項16記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R1−IIIAがメチルであり、R1−IIIBがH、R2−IIIがH、R3−IIIがイソブチルであることを特徴とする請求項16記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R1−IIIAがメチル、R1−IIIBがH、R2−IIIがH、R3−IIIがイソブチルであり、wが1、yが1、A6が結合、A8がB6−[C(R14)2]n 3−B6、n3が1、R14がA8とA9の間の結合、A10が結合、A7が−CH2−、A9が結合、そしてA11が−CH2−であることを特徴とする請求項16記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R2が各出現について独立して、H、OH、F、−Oアルキル又は−N(R11)2を表わしていることを特徴とする請求項1記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R2が各出現について独立して、H、OH、F、−OCH3、−O(CH2)2OR11、−O(CH2)2SR11、−O(CH2)2N(R11)2、−OCH2C(O)N(H)CH3、−NH2、−N(CH3)2、−N(H)CH3、−SCH3、−O(CH2)2OCH3、−O(CH2)2SCH3、−O(CH2)2O(CH2)2N(CH3)2、又は−O(CH2)2ON(CH3)2を表わしていることを特徴とする請求項1記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R2が各出現について独立して、−NH2、−N(CH3)2又は−N(H)CH3を表わしていることを特徴とする請求項1記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R5が各出現について独立して、H、OH、F、−OCH3、−O(CH2)2OR11、−O(CH2)2SR11、−O(CH2)2N(R11)2、−OCH2C(O)N(H)CH3、−NH2、−N(CH3)2、−N(H)CH3、−SCH3、−O(CH2)2OCH3、−O(CH2)2SCH3、−O(CH2)2O(CH2)2N(CH3)2、又は−O(CH2)2ON(CH3)2を表わしていることを特徴とする請求項1記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- R5が各出現について独立して、−NH2、−N(CH3)2又はN(H)CH3を表わしていることを特徴とする請求項1記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- Z2が各出現について独立して、−OH、−OM、−Oアルキル、−Oアリール又はOアラルキルを表わしていることを特徴とする請求項1記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- n1とn2の和が17、18、19、20、21、22又は23であることを特徴とする請求項1記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- n1とn2の和が20であることを特徴とする請求項1記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- n1とn2の和が20であり、第1のストランドと第2のストランドは、前記第1のストランドと前記第2のストランドの上に2つのハイブリッド形成されていないヌクレオチドが存在するような形でハイブリッド形成されていることを特徴とする請求項1記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- n1とn2の和が前記第1のストランドについては20であり、n1とn2の和が前記第2のストランドについて22であることを特徴とする請求項1記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- 前記第1のストランド及び前記第2のストランドが各々少なくとも1回のA5の出現を含んでいることを特徴とする請求項1記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- 前記第1のストランドが少なくとも1回のA5の出現を含み、前記第2のストランドがこれを含まないことを特徴とする請求項1記載の2本鎖オリゴヌクレオチド。
- 以下の式IVで表わされる1本鎖オリゴヌクレオチド。
Xは、H、−P(O)(OM)2、−P(O)(OM)−O−P(O)(OM)2、−P(O)(Oアルキル)2、−P(O)(Oアルキル)−O−P(O)(Oアルキル)2、又は−A6−[A7−(A5)w]yであり、
X1は
Z1は、各出現について独立してO又はSを表わし;
Z2は、各出現について独立して−OH、−OM、−Oアルキル、−Oアリール、−Oアラルキル、−SH、−SM、−Sアルキル、−Sアリール、−Sアラルキル、−N(R3)R4、−(C(R11)2)mN(R11)2、−N(R11)(C(R11)2)mN(R11)2、又はアルキルを表わし;
R1及びR2は各出現について独立してH、OH、F、−Oアルキル、−Oアリル、−O(CR11)2)vOR11、−O(C(R11)2)vSR11、−O(C(R11)2)vN(R11)2、−O(C(R11)2)vC(O)N(R11)2、−N(R11)2、−S(C1−C6)アルキル、−O(C(R11)2)vO(C1−C6)アルキル、−O(C(R11)2)vS(C1−C6)アルキル、−O(C(R11)2)vO(C(R11)2)vN((C1−C6)アルキル)2、−O(C(R11)2)vON((C1−C6)アルキル)2、又は−O−A10−[A11−(A5)w]yを表わし;
R3及びR4は、H又はアルキルを表わすか;そうでなければR3及びR4は一緒になって3−、4−、5−、6−又は7−員環を形成し;
R5は各出現について独立してH、OH、F、−Oアルキル、−Oアリル、−O(C(R11)2)vOR11、−O(C(R11)2)vSR11、−O(C(R11)2)vN(R11)2、−O(C(R11)2)vC(O)N(R11)2、−N(R11)2、−S(C1−C6)アルキル、−O(C(R11)2)vO(C1−C6)アルキル、−O(C(R11)2)vS(C1−C6)アルキル、−O(C(R11)2)vO(C(R11)2)vN((C1−C6)アルキル)2、又は−O(C(R11)2)vON((C1−C6)アルキル)2を表わし;
R6は、各出現について独立してH、アルキル又は−NHCH2CH=CH2を表わし;
R7は、各出現について独立してH、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アシル、シリル又はB3を表わし;
R8は、各出現について独立してアルキル、アリール、アラルキル、アシル、又はシリルを表わし;
R9は、各出現について独立して水素、アルキル、アリール、アラルキル、アシル、アルキルスルホニル、アルキルスルホキシド、アリールスルホニル、アリールスルホキシド又はシリルを表わし;
R10はシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール又はヘテロアリールであり;
R11は各出現について独立して水素又はアルキルを表わし;
n1及びn2は独立して0以上21以下を表わし;
mは各出現について独立して1、2、3、4、5、6、7又は8を表わし;
m1は各出現について独立して0、1、2、3、4、5、6、7又は8を表わし;
vは各出現について独立して1、2、3、又は4を表わし;
wは、原子価の法則に合致して各出現について独立して1、2又は3を表わし;
yは、原子価の法則に合致して各出現について独立して1、2、3、4又は5を表わし;
Mは各出現について独立して+1という全体的電荷をもつアルカリ金属又は遷移金属を表わし;
A1は各出現について独立して
A2は各出現について独立して
A3は各出現について独立して
A4は各出現について独立して1つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アルキニルジラジカル、アルキルアルキニルジラジカル、アミノアルキルジラジカル、チオエーテル、−C(O)−、−S(O)−、−S(O)2−、B1C(R2)B2、B1C(R)(B2)2、B1C(B2)3、B1N(R)(B2)、B1N(B2)2を表わすか又は、
B1はA3とA4の間の結合であり;
B2はA4とA5の間の結合であり;
Rは各出現について独立して水素又はアルキルを表わし;
A5はアラルキルであり;
A6は1つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、アルケニルジラジカル、アミノアルキル、−C(O)−、−S(O)−、−S(O2)−であるか又は
B3は、A6とA7の間の結合であり;
B4は、A6とA1の間の結合であり;
n3は、各出現について独立して1以上15以下を表わし;
n4は、原子価の法則に合致して1、2、3、4又は5であり、
A7は1つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−C(O)−、−S(O)−、−S(O)2−、B3C(R)2B5、B3C(R)(B5)2、B3C(B5)3、B3N(R)(B5)、B3N(B5)2であるか又は、
pは各出現について独立して1、2、3又は4を表わし;
B5はA5とA7の間の結合であり;
A8は、
という式、又は
X2は1つの結合であるか又は式
B6はA8とA1の間の結合であり;
B7はA8とA9の間の結合であり;
A9は1つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−C(O)−、−S(O)−、−S(O)2−、B7C(R)2B8、B7C(R)(B8)2、B7C(B8)3、B7N(R)(B8)、B7N(B8)2であるか又は、
B8はA5とA9の間の結合であり;
A10は1つの結合であるか又は、
R12及びR13は各出現について独立してH、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、アシル、シリル、又はB9を表わし;
B9はA10とA11の間の結合であり;
B10はA10とOの間の結合であり;
A11は1つの結合、アルキルジラジカル、ヘテロアルキルジラジカル、−C(O)−、−S(O)−、−S(O)2−、B9C(R2)B11、B9C(R)(B11)2、B9C(B11)3、B9N(R)(B11)、B9N(B11)2であるか又は、
B11はA5とA11の間の結合であり;かつ
A5が少なくとも1回出現することを条件とする。) - A5が、−(C(R)2)m−A99であり、式中A99は任意には置換されているフェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナントレニル、ピレニル、ピリジニル、キノリニル、アクリジニル、フェナトリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、1,7−フェナントロリニル、インドリル、チアナフテニル、ベンゾキサゾリル、ベンゾフラニル、1,2−ベンズイソキサゾリル、ベンズイミダゾリル、ピロリル、チオフェニル、イソキサゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、又はテトラゾリルであることを特徴とする請求項49記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R1−VAがアルキルであることを特徴とする請求項51記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R1−VAが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、sec−ブチル、イソブチル又はtert−ブチルであることを特徴とする請求項51記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R1−VAがメチルであることを特徴とする請求項51記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R1−VBが水素であることを特徴とする請求項51記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R1−VAがメチルであり、R1−VBが水素であることを特徴とする請求項51記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R2−Vが水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル又はアミノであることを特徴とする請求項51記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R2−VがHであることを特徴とする請求項51記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R3−Vがアルコキシルであることを特徴とする請求項51記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R3−Vが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、sec−ブトキシ、イソブトキシ又はtert−ブトキシであることを特徴とする請求項51記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R3−Vがメトキシであることを特徴とする請求項51記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R1−VAがメチル、R1−VBがH、R2−VがH、及びR3−Vがメトキシであることを特徴とする請求項51記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R1−Vがメチル、R1−VBがH、R2−VがH、R3−Vがメトキシであり、wが1、yが1、A6が結合、A8がB6−[C(R14)2]n 3−B6、n3が1、R14がA8とA9の間の結合、A10が結合、A7が−CH2−、A9が結合、そしてA11が−CH2−であることを特徴とする請求項51記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R1−VIAがアルキルであることを特徴とする請求項64記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R1−VIAが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、sec−ブチル、イソブチル又はtert−ブチルであることを特徴とする請求項64記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R1−VIAがメチルであることを特徴とする請求項64記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R1−VIBが水素であることを特徴とする請求項64記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R1−VIAがメチルであり、R1−VIBが水素であることを特徴とする請求項64記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R2−VIが水素、アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル又はアミノであることを特徴とする請求項64記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R2−VIがHであることを特徴とする請求項64記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R3−VIがアルキルであることを特徴とする請求項64記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R3−VIが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、sec−ブチル、イソブチル、tert−ブチル、ペンチル、ヘキシル又はヘプチルであることを特徴とする請求項64記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R3−VIがイソブチルであることを特徴とする請求項64記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R1−VIAがメチルであり、R1−VIBがH、R2−VIがH、R3−VIがイソブチルであることを特徴とする請求項64記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R1−VIAがメチル、R1−VIBがH、R2−VIがH、R3−VIがイソブチルであり、wが1、yが1、A6が結合、A8がB6−[C(R14)2]n 3−B6、n3が1、R14がA8とA9の間の結合、A10が結合、A7が−CH2−、A9が結合、そしてA11が−CH2−であることを特徴とする請求項64記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R2が各出現について独立して、H、OH、F、−Oアルキル又は−N(R11)2を表わしていることを特徴とする請求項49記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R2が各出現について独立して、H、OH、F、−OCH3、−O(CH2)2OR11、−O(CH2)2SR11、−O(CH2)2N(R11)2、−OCH2C(O)N(H)CH3、−NH2、−N(CH3)2、−N(H)CH3、−SCH3、−O(CH2)2OCH3、−O(CH2)2SCH3、−O(CH2)2O(CH2)2N(CH3)2、又は−O(CH2)2ON(CH3)2を表わしていることを特徴とする請求項49記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R2が各出現について独立して、−NH2、−N(CH3)2又は−N(H)CH3を表わしていることを特徴とする請求項49記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R5が各出現について独立して、H、OH、F、−OCH3、−O(CH2)2OR11、−O(CH2)2SR11、−O(CH2)2N(R11)2、−OCH2C(O)N(H)CH3、−NH2、−N(CH3)2、−N(H)CH3、−SCH3、−O(CH2)2OCH3、−O(CH2)2SCH3、−O(CH2)2O(CH2)2N(CH3)2、又は−O(CH2)2ON(CH3)2を表わしていることを特徴とする請求項49記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- R5が各出現について独立して、−NH2、−N(CH3)2又はN(H)CH3を表わしていることを特徴とする請求項49記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- Z2が各出現について独立して、−OH、−OM、−Oアルキル、−Oアリール又は−Oアラルキルを表わしていることを特徴とする請求項49記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- n1とn2の和が、17、18、19、20、21、22又は23であることを特徴とする請求項49記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- n1とn2の和が20であることを特徴とする請求項49記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- A5が少なくとも2回出現することを特徴とする請求項49記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- A5が少なくとも5回出現することを特徴とする請求項49記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- A5が少なくとも10回出現することを特徴とする請求項49記載の1本鎖オリゴヌクレオチド。
- 望ましくない細胞増殖、関節炎、網膜血管新生、ウイルス感染、細菌感染、アメーバ感染、寄生虫感染、真菌感染、望ましくない免疫応答、喘息、狼瘡、多発性硬化症、糖尿病、急性疼痛、慢性疼痛、神経系疾患及びヘテロ接合性の喪失を特徴とする障害より成る群から選択された疾患を患う患者を治療する方法であって、治療上有効な量の請求項1又は49記載のオリゴヌクレオチドを、それを必要とする患者に投与する工程を含むことを特徴とする方法。
- 前記疾患が望ましくない細胞増殖であることを特徴とする請求項96記載の方法。
- 前記疾患が、睾丸癌、肺癌、乳癌、結腸癌、扁平上皮細胞癌腫、膵癌、白血病、黒色腫、バーキットリンパ腫、神経芽細胞腫、卵巣癌、前立腺癌、皮膚癌、非ホジキンリンパ腫、食道癌、子宮頸癌、基底細胞癌腫、腺癌腫、肝細胞癌腫、直腸結腸腺癌、肝癌、男性乳癌、食道の腺癌、胃の腺癌、結腸の腺癌、直腸の腺癌、胆嚢癌、過誤腫、神経膠腫、子宮内膜癌、急性白血病、慢性白血病、小児急性白血病、ユーイング肉腫、粘液性脂肪肉腫、脳腫瘍又は上皮由来の腫瘍であることを特徴とする請求項96記載の方法。
- 前記疾患が、関節リウマチ又は網膜血管新生であることを特徴とする請求項96記載の方法。
- 前記疾患がウイルス感染であることを特徴とする請求項96記載の方法。
- 前記疾患が、ヒト乳頭腫ウイルス、ヒト免疫不全症ウイルス、A型肝炎ウイルス、B型肝炎ウイルス、C型肝炎ウイルス、D型肝炎ウイルス、E型肝炎ウイルス、F型肝炎ウイルス、G型肝炎ウイルス、H型肝炎ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、単純ヘルペスウイルス、ヘルペスサイトメガロウイルス、ヘルペスエプスタインバールウイルス、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、JCウイルス、ミクソウイルス、ライノウイルス、コロナウイルス、西ナイルウイルス、セントルイス脳炎、ダニ媒介性脳炎ウイルス遺伝子、マリーバレー脳炎ウイルス遺伝子、デング熱ウイルス遺伝子、シミアンウイルス40、ヒトT細胞白血病ウイルス、モロニーマウス白血病ウイルス、脳心筋炎ウイルス、麻疹ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、アデノウイルス、黄熱病ウイルス、ポリオウイルス又はポックスウイルスを媒介とする障害であることを特徴とする請求項96記載の方法。
- 前記疾患が、細菌感染、アメーバ感染、寄生虫感染又は真菌感染であることを特徴とする請求項96記載の方法。
- 前記疾患が、マラリア原虫(plasmodium)、マイコバクテリウム・アルセランス(Mycobacterium ulcerans)、ヒト結核菌(Mycobacterium tuberculosis)、ハンセン菌(Mycobacterium leprae)、黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)、肺炎連鎖球菌(Streptococcus pneumoniae)、化膿連鎖球菌(Streptococcus pyogenes)、クラミジア肺炎病原体(Chlamydia pneumoniae)又は肺炎マイコプラズマ(Mycoplasma pneumoniae)を媒介とする障害であることを特徴とする請求項96記載の方法。
- 前記疾患が、望ましくない免疫応答、喘息、狼瘡、多発性硬化症又は糖尿病であることを特徴とする請求項96記載の方法。
- 前記疾患が、虚血、再潅流傷害、移植臓器又は組織に対する応答、再狭窄又は炎症性大腸炎であることを特徴とする請求項96記載の方法。
- 前記疾患が、急性疼痛又は慢性疼痛であることを特徴とする請求項96記載の方法。
- 前記疾患が神経系疾患であることを特徴とする請求項96記載の方法。
- 前記疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病又は神経変性トリヌクレオチド反復障害であることを特徴とする請求項96記載の方法。
- 前記疾患が、ヘテロ接合性の喪失を特徴とする障害であることを特徴とする請求項96記載の方法。
- 前記オリゴヌクレオチドが、請求項1記載の2本鎖オリゴヌクレオチドであることを特徴とする請求項96記載の方法。
- 遺伝子サイレンシング法であって、請求項1又は49記載のオリゴヌクレオチドの治療上有効な量を哺乳動物細胞に投与して、望ましくない細胞増殖を促進する遺伝子、成長因子遺伝子、成長因子レセプタ遺伝子、キナーゼ遺伝子、Gタンパク質スーパーファミリー分子をコードする遺伝子、転写因子をコードする遺伝子、血管形成を媒介する遺伝子、ウイルス機能を媒介する細胞遺伝子のウイルス遺伝子、病原菌の遺伝子、病原アメーバの遺伝子、寄生性病原体の遺伝子、真菌病原体の遺伝子、望ましくない免疫応答を媒介する遺伝子、疼痛のプロセシングを媒介する遺伝子、神経系疾患を媒介する遺伝子、ヘテロ接合性の喪失を特徴とする細胞内に見られる対立遺伝子、又は多型遺伝子の1つの対立遺伝子の、遺伝子発現を抑制することを特徴とする方法。
- 前記オリゴヌクレオチドが請求項1記載の2本鎖オリゴヌクレオチドであることを特徴とする請求項111記載の方法。
- 遺伝子サイレンシング法であって、請求項1又は49記載のオリゴヌクレオチドの治療上有効な量を哺乳動物細胞に投与して、PDGFベータ遺伝子、Erb−B遺伝子、Src遺伝子、CRK遺伝子、GRB2遺伝子、RAS遺伝子、MEKK遺伝子、JNK遺伝子、RAF遺伝子、Erk1/2遺伝子、PCNA(p21)遺伝子、MYB遺伝子、JUN遺伝子、FOS遺伝子、BCL−2遺伝子、サイクリンD遺伝子、VEGF遺伝子、EGFR遺伝子、サイクリンA遺伝子、サイクリンE遺伝子、WNT−1遺伝子、ベータカテニン遺伝子、c−MET遺伝子、PKC遺伝子、NFKB遺伝子、STAT3遺伝子、サービビン遺伝子、Her2/Neu遺伝子、トポイソメラーゼI遺伝子、トポイソメラーゼIIアルファ遺伝子、p73遺伝子内の突然変異、p21(WAF1/CIP1)遺伝子内の突然変異、p27(KIP1)遺伝子内の突然変異、PPM1D遺伝子内の突然変異、RAS遺伝子内の突然変異、カベオリンI遺伝子内の突然変異、MIBI遺伝子内の突然変異、MTAI遺伝子内の突然変異、M68遺伝子内の突然変異、腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、p53腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、p53ファミリー成員DN−p63内の突然変異、pRb腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、APC1腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、BRCA1腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、PTEN腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、mLL融合遺伝子、BCR/ABL融合遺伝子、TEL/AML1融合遺伝子、EWS/FLI1融合遺伝子、TLS/FUS1融合遺伝子、PAX3/FKHR融合遺伝子、AML1/ETO融合遺伝子、アルファv−インテグリン遺伝子、Flt−1レセプタ遺伝子、チューブリン遺伝子、ヒト乳頭腫ウイルス遺伝子、ヒト乳頭腫ウイルス複製に必要とされる遺伝子、ヒト免疫不全症ウイルス遺伝子、ヒト免疫不全症ウイルス複製に必要とされる遺伝子、A型肝炎ウイルス遺伝子、A型肝炎ウイルス複製に必要とされる遺伝子、B型肝炎ウイルス遺伝子、B型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、C型肝炎ウイルス遺伝子、C型肝炎ウイルス複製に必要とされる遺伝子、D型肝炎ウイルス遺伝子、D型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、E型肝炎ウイルス遺伝子、E型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、F型肝炎ウイルス遺伝子、F型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、G型肝炎ウイルス遺伝子、G型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、H型肝炎ウイルス遺伝子、H型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、呼吸器合胞体ウイルス遺伝子、呼吸器合胞体ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、単純ヘルペスウイルス遺伝子、単純ヘルペスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルス遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ヘルペスエプスタインバールウイルス遺伝子、ヘルペスエプスタインバールウイルスの複製に必要とされる遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、JCウイルス遺伝子、JCウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ミクソウイルス遺伝子、ミクソウイルス遺伝子の複製に必要とされる遺伝子、ライノウイルス遺伝子、ライノウイルスの複製に必要とされる遺伝子、コロナウイルス遺伝子、コロナウイルスの複製に必要とされる遺伝子、西ナイルウイルス遺伝子、西ナイルウイルスの複製に必要とされる遺伝子、セントルイス脳炎遺伝子、セントルイス脳炎の複製に必要とされる遺伝子、ダニ媒介性脳炎ウイルス遺伝子、ダニ媒介性脳炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、マリーバレー脳炎ウイルス遺伝子、マリーバレー脳炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、デング熱ウイルス遺伝子、デング熱ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、シミアンウイルス40遺伝子、シミアンウイルス40の複製に必要とされる遺伝子、ヒトT細胞白血病ウイルス遺伝子、ヒトT細胞白血病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、モロニーマウス白血病ウイルス遺伝子、モロニーマウス白血病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、脳心筋炎ウイルス遺伝子、脳心筋炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、麻疹ウイルス遺伝子、麻疹ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルス遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、アデノウイルス遺伝子、アデノウイルスの複製に必要とされる遺伝子、黄熱病ウイルス遺伝子、黄熱病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ポリオウイルス遺伝子、ポリオウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ポックスウイルス遺伝子、ポックスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、マラリア原虫遺伝子、マラリア原虫遺伝子の複製に必要とされる遺伝子、マイコバクテリウム・アルセランス遺伝子、マイコバクテリウム・アルセランスの複製に必要とされる遺伝子、ヒト結核菌遺伝子、ヒト結核菌の複製に必要とされる遺伝子、ハンセン菌遺伝子、ハンセン菌の複製に必要とされる遺伝子、黄色ブドウ球菌遺伝子、黄色ブドウ球菌の複製に必要とされる遺伝子、肺炎連鎖球菌遺伝子、肺炎連鎖球菌の複製に必要とされる遺伝子、化膿連鎖球菌遺伝子、化膿連鎖球菌の複製に必要とされる遺伝子、クラミジア肺炎病原体遺伝子、クラミジア肺炎病原体の複製に必要とされる遺伝子、肺炎マイコプラズマ遺伝子、肺炎マイコプラズマの複製に必要とされる遺伝子、インテグリン遺伝子、セレクチン遺伝子、補体系遺伝子、ケモカイン遺伝子、ケモカインレセプタ遺伝子、GCSF遺伝子、Gro1遺伝子、Gro2遺伝子、Gro3遺伝子、PF4遺伝子、MIG遺伝子、プロ−血小板塩基性タンパク質遺伝子、MIP−1I遺伝子、MIP−1J遺伝子、RANTES遺伝子、MCP−1遺伝子、MCP−2遺伝子、MCP−3遺伝子、CMBKR1遺伝子、CMBKR2遺伝子、CMBKR3遺伝子、CMBKR5v、AIF−1遺伝子、I−309遺伝子、イオンチャンネルの構成要素に対する遺伝子、神経伝達物質レセプタに対する遺伝子、神経伝達物質リガンドに対する遺伝子、アミロイドファミリー遺伝子、プレセニリン遺伝子、HD遺伝子、DRPLA遺伝子、SCA1遺伝子、SCA2遺伝子、MJD1遺伝子、CACNL1A4遺伝子、SCA7遺伝子、SCA8遺伝子、LOH細胞内に見い出される対立遺伝子、又は多型遺伝子の1つの対立遺伝子の、遺伝子発現を抑制することを特徴とする方法。
- 前記オリゴヌクレオチドが請求項1記載の2本鎖オリゴヌクレオチドであることを特徴とする請求項113記載の方法。
- 遺伝子サイレンシング法であって、請求項1又は49記載のオリゴヌクレオチドの治療上有効な量を哺乳動物に投与して、望ましくない細胞増殖を促進する遺伝子、成長因子又は成長因子レセプタ遺伝子、キナーゼ遺伝子、Gタンパク質スーパーファミリー分子をコードする遺伝子、転写因子をコードする遺伝子、血管形成を媒介する遺伝子、ウイルス機能を媒介する細胞遺伝子のウイルス遺伝子、病原菌の遺伝子、病原アメーバの遺伝子、寄生性病原体の遺伝子、真菌病原体の遺伝子、望ましくない免疫応答を媒介する遺伝子、疼痛のプロセシングを媒介する遺伝子、神経系疾患を媒介する遺伝子、ヘテロ接合性の喪失を特徴とする細胞内に見られる対立遺伝子、又は多型遺伝子の1つの対立遺伝子の、遺伝子発現を抑制することを特徴とする方法。
- 前記オリゴヌクレオチドが請求項1記載の2本鎖オリゴヌクレオチドであることを特徴とする請求項115記載の方法。
- 遺伝子サイレンシング法であって、請求項1又は49記載のオリゴヌクレオチドの治療上有効な量を哺乳動物に投与して、PDGFベータ遺伝子、Erb−B遺伝子、Src遺伝子、CRK遺伝子、GRB2遺伝子、RAS遺伝子、MEKK遺伝子、JNK遺伝子、RAF遺伝子、Erk1/2遺伝子、PCNA(p21)遺伝子、MYB遺伝子、JUN遺伝子、FOS遺伝子、BCL−2遺伝子、サイクリンD遺伝子、VEGF遺伝子、EGFR遺伝子、サイクリンA遺伝子、サイクリンE遺伝子、WNT−1遺伝子、ベータカテニン遺伝子、c−MET遺伝子、PKC遺伝子、NFKB遺伝子、STAT3遺伝子、サービビン遺伝子、Her2/Neu遺伝子、トポイソメラーゼI遺伝子、トポイソメラーゼIIアルファ遺伝子、p73遺伝子内の突然変異、p21(WAF1/CIP1)遺伝子内の突然変異、p27(KIP1)遺伝子内の突然変異、PPM1D遺伝子内の突然変異、RAS遺伝子内の突然変異、カベオリンI遺伝子内の突然変異、MIBI遺伝子内の突然変異、MTAI遺伝子内の突然変異、M68遺伝子内の突然変異、腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、p53腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、p53ファミリー成員DN−p63内の突然変異、pRb腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、APC1腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、BRCA1腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、PTEN腫瘍抑制遺伝子内の突然変異、mLL融合遺伝子、BCR/ABL融合遺伝子、TEL/AML1融合遺伝子、EWS/FLI1融合遺伝子、TLS/FUS1融合遺伝子、PAX3/FKHR融合遺伝子、AML1/ETO融合遺伝子、アルファv−インテグリン遺伝子、Flt−1レセプタ遺伝子、チューブリン遺伝子、ヒト乳頭腫ウイルス遺伝子、ヒト乳頭腫ウイルス複製に必要とされる遺伝子、ヒト免疫不全症ウイルス遺伝子、ヒト免疫不全症ウイルス複製に必要とされる遺伝子、A型肝炎ウイルス遺伝子、A型肝炎ウイルス複製に必要とされる遺伝子、B型肝炎ウイルス遺伝子、B型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、C型肝炎ウイルス遺伝子、C型肝炎ウイルス複製に必要とされる遺伝子、D型肝炎ウイルス遺伝子、D型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、E型肝炎ウイルス遺伝子、E型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、F型肝炎ウイルス遺伝子、F型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、G型肝炎ウイルス遺伝子、G型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、H型肝炎ウイルス遺伝子、H型肝炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、呼吸器合胞体ウイルス遺伝子、呼吸器合胞体ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、単純ヘルペスウイルス遺伝子、単純ヘルペスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルス遺伝子、ヘルペスサイトメガロウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ヘルペスエプスタインバールウイルス遺伝子、ヘルペスエプスタインバールウイルスの複製に必要とされる遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス遺伝子、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、JCウイルス遺伝子、JCウイルスの複製に必要とされるヒト遺伝子、ミクソウイルス遺伝子、ミクソウイルス遺伝子の複製に必要とされる遺伝子、ライノウイルス遺伝子、ライノウイルス遺伝子の複製に必要とされる遺伝子、コロナウイルス遺伝子、コロナウイルスの複製に必要とされる遺伝子、西ナイルウイルス遺伝子、西ナイルウイルスの複製に必要とされる遺伝子、セントルイス脳炎遺伝子、セントルイス脳炎の複製に必要とされる遺伝子、ダニ媒介性脳炎ウイルス遺伝子、ダニ媒介性脳炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、マリーバレー脳炎ウイルス遺伝子、マリーバレー脳炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、デング熱ウイルス遺伝子、デング熱ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、シミアンウイルス40遺伝子、シミアンウイルス40の複製に必要とされる遺伝子、ヒトT細胞白血病ウイルス遺伝子、ヒトT細胞白血病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、モロニーマウス白血病ウイルス遺伝子、モロニーマウス白血病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、脳心筋炎ウイルス遺伝子、脳心筋炎ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、麻疹ウイルス遺伝子、麻疹ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルス遺伝子、水痘帯状疱疹ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、アデノウイルス遺伝子、アデノウイルスの複製に必要とされる遺伝子、黄熱病ウイルス遺伝子、黄熱病ウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ポリオウイルス遺伝子、ポリオウイルスの複製に必要とされる遺伝子、ポックスウイルス遺伝子、ポックスウイルスの複製に必要とされる遺伝子、マラリア原虫遺伝子、マラリア原虫遺伝子の複製に必要とされる遺伝子、マイコバクテリウム・アルセランス遺伝子、マイコバクテリウム・アルセランスの複製に必要とされる遺伝子、ヒト結核菌遺伝子、ヒト結核菌の複製に必要とされる遺伝子、ハンセン菌遺伝子、ハンセン菌の複製に必要とされる遺伝子、黄色ブドウ球菌遺伝子、黄色ブドウ球菌の複製に必要とされる遺伝子、肺炎連鎖球菌遺伝子、肺炎連鎖球菌の複製に必要とされる遺伝子、化膿連鎖球菌遺伝子、化膿連鎖球菌の複製に必要とされる遺伝子、クラミジア肺炎病原体遺伝子、クラミジア肺炎病原体の複製に必要とされる遺伝子、肺炎マイコプラズマ遺伝子、肺炎マイコプラズマの複製に必要とされる遺伝子、インテグリン遺伝子、セレクチン遺伝子、補体系遺伝子、ケモカイン遺伝子、ケモカインレセプタ遺伝子、GCSF遺伝子、Gro1遺伝子、Gro2遺伝子、Gro3遺伝子、PF4遺伝子、MIG遺伝子、プロ−血小板塩基性タンパク質遺伝子、MIP−1I遺伝子、MIP−1J遺伝子、RANTES遺伝子、MCP−1遺伝子、MCP−2遺伝子、MCP−3遺伝子、CMBKR1遺伝子、CMBKR2遺伝子、CMBKR3遺伝子、CMBKR5v、AIF−1遺伝子、I−309遺伝子、イオンチャンネルの構成要素に対する遺伝子、神経伝達物質レセプタに対する遺伝子、神経伝達物質リガンドに対する遺伝子、アミロイドファミリー遺伝子、プレセニリン遺伝子、HD遺伝子、DRPLA遺伝子、SCA1遺伝子、SCA2遺伝子、MJD1遺伝子、CACNL1A4遺伝子、SCA7遺伝子、SCA8遺伝子、LOH細胞内に見い出される対立遺伝子、又は多型遺伝子の1つの対立遺伝子の、遺伝子発現を抑制することを特徴とする方法。
- 前記哺乳動物が霊長類、ウマ、イヌ又はネコであることを特徴とする請求項117記載の方法。
- 前記哺乳動物がヒトであることを特徴とする請求項117記載の方法。
- 前記オリゴヌクレオチドが請求項1記載の2本鎖オリゴヌクレオチドであることを特徴とする請求項117記載の方法。
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Cited By (5)
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---|---|---|---|---|
JP2011505425A (ja) * | 2007-12-04 | 2011-02-24 | アルニラム ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド | オリゴヌクレオチドの送達剤としての糖質コンジュゲート |
JP2011518784A (ja) * | 2008-04-11 | 2011-06-30 | アルニラム ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド | 標的リガンドをエンドソーム分解性成分と組み合わせることによる核酸の部位特異的送達 |
JP2011155914A (ja) * | 2010-02-01 | 2011-08-18 | Osaka Univ | 脂質異常症治療薬剤としての化学修飾siRNA |
JP2016518841A (ja) * | 2013-05-01 | 2016-06-30 | レグルス セラピューティクス インコーポレイテッド | 細胞取り込みの向上のための化合物および方法 |
JP2021510698A (ja) * | 2018-01-12 | 2021-04-30 | ソニー株式会社 | 生物学的に活性な化合物を含むホスホアルキルリボースポリマー |
Families Citing this family (111)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20060009409A1 (en) | 2002-02-01 | 2006-01-12 | Woolf Tod M | Double-stranded oligonucleotides |
US20030166282A1 (en) | 2002-02-01 | 2003-09-04 | David Brown | High potency siRNAS for reducing the expression of target genes |
EP3415625A1 (en) | 2002-02-01 | 2018-12-19 | Life Technologies Corporation | Double-stranded oligonucleotides |
US9492400B2 (en) | 2004-11-04 | 2016-11-15 | Massachusetts Institute Of Technology | Coated controlled release polymer particles as efficient oral delivery vehicles for biopharmaceuticals |
CA2587411A1 (en) * | 2004-11-17 | 2006-05-26 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Sirna silencing of apolipoprotein b |
WO2007070682A2 (en) | 2005-12-15 | 2007-06-21 | Massachusetts Institute Of Technology | System for screening particles |
EP1986609A2 (en) * | 2006-01-26 | 2008-11-05 | University of Massachusetts | Rna silencing agents for use in therapy and nanotransporters for efficient delivery of same |
US8367113B2 (en) | 2006-05-15 | 2013-02-05 | Massachusetts Institute Of Technology | Polymers for functional particles |
WO2007150030A2 (en) | 2006-06-23 | 2007-12-27 | Massachusetts Institute Of Technology | Microfluidic synthesis of organic nanoparticles |
US9217129B2 (en) | 2007-02-09 | 2015-12-22 | Massachusetts Institute Of Technology | Oscillating cell culture bioreactor |
WO2008124632A1 (en) | 2007-04-04 | 2008-10-16 | Massachusetts Institute Of Technology | Amphiphilic compound assisted nanoparticles for targeted delivery |
WO2008131129A2 (en) * | 2007-04-17 | 2008-10-30 | Baxter International Inc. | Nucleic acid microparticles for pulmonary delivery |
US8877917B2 (en) | 2007-04-23 | 2014-11-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Glycoconjugates of RNA interference agents |
WO2009018332A1 (en) * | 2007-08-01 | 2009-02-05 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Single-stranded and double-stranded oligonucleotides comprising a metal-chelating ligand |
HUE035101T2 (hu) | 2007-09-28 | 2018-05-02 | Pfizer | Ráksejtek célzása nanorészecskék alkalmazásával |
MX350501B (es) | 2007-10-12 | 2017-09-07 | Massachusetts Inst Technology | Nanotecnologia de vacuna. |
WO2009082606A2 (en) * | 2007-12-04 | 2009-07-02 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Folate conjugates |
AU2014208251B2 (en) * | 2007-12-04 | 2016-07-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Carbohydrate conjugates as delivery agents for oligonucleotides |
CN104524590B (zh) | 2008-04-30 | 2019-06-21 | 伊缪诺金公司 | 交联剂和它们的用途 |
EP2326351B1 (en) * | 2008-08-19 | 2017-12-27 | Nektar Therapeutics | Conjugates of small-interfering nucleic acids |
WO2010028079A2 (en) * | 2008-09-02 | 2010-03-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc | Synthetic methods and derivatives of triphosphate oligonucleotides |
US8591905B2 (en) | 2008-10-12 | 2013-11-26 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Nicotine immunonanotherapeutics |
US8343497B2 (en) | 2008-10-12 | 2013-01-01 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Targeting of antigen presenting cells with immunonanotherapeutics |
US8343498B2 (en) | 2008-10-12 | 2013-01-01 | Massachusetts Institute Of Technology | Adjuvant incorporation in immunonanotherapeutics |
US8277812B2 (en) | 2008-10-12 | 2012-10-02 | Massachusetts Institute Of Technology | Immunonanotherapeutics that provide IgG humoral response without T-cell antigen |
CA3039251C (en) | 2008-11-10 | 2024-01-09 | Arbutus Biopharma Corporation | Novel lipids and compositions for the delivery of therapeutics |
EP2376633A1 (en) | 2008-12-17 | 2011-10-19 | AVI BioPharma, Inc. | Antisense compositions and methods for modulating contact hypersensitivity or contact dermatitis |
WO2010141511A2 (en) | 2009-06-01 | 2010-12-09 | Halo-Bio Rnai Therapeutics, Inc. | Polynucleotides for multivalent rna interference, compositions and methods of use thereof |
SI2437790T1 (sl) | 2009-06-03 | 2019-07-31 | Immunogen, Inc. | Konjugacijske metode |
WO2011035065A1 (en) | 2009-09-17 | 2011-03-24 | Nektar Therapeutics | Monoconjugated chitosans as delivery agents for small interfering nucleic acids |
US8394948B2 (en) * | 2009-09-30 | 2013-03-12 | Glen Research Corporation | Reagents utilizing a serinol scaffold for labeling synthetic oligonucleotides |
TWI495473B (zh) | 2009-11-13 | 2015-08-11 | Sarepta Therapeutics Inc | 反義抗病毒化合物及治療流感病毒感染的方法 |
ES2749426T3 (es) | 2009-12-18 | 2020-03-20 | Univ British Columbia | Métodos y composiciones para administración de ácidos nucleicos |
WO2011100131A2 (en) * | 2010-01-28 | 2011-08-18 | Alnylam Pharmacuticals, Inc. | Monomers and oligonucleotides comprising cycloaddition adduct(s) |
EP2545173A2 (en) | 2010-03-12 | 2013-01-16 | Sarepta Therapeutics, Inc. | Antisense modulation of nuclear hormone receptors |
US9725479B2 (en) | 2010-04-22 | 2017-08-08 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | 5′-end derivatives |
WO2011139714A2 (en) | 2010-04-26 | 2011-11-10 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of cysteinyl-trna synthetase |
AU2011248614B2 (en) | 2010-04-27 | 2017-02-16 | Pangu Biopharma Limited | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of isoleucyl tRNA synthetases |
WO2011139853A2 (en) | 2010-04-28 | 2011-11-10 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of alanyl trna synthetases |
EP2563383B1 (en) | 2010-04-29 | 2017-03-01 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of valyl trna synthetases |
US9068177B2 (en) | 2010-04-29 | 2015-06-30 | Atyr Pharma, Inc | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of glutaminyl-tRNA synthetases |
CA2797374C (en) | 2010-04-29 | 2021-02-16 | Pangu Biopharma Limited | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of asparaginyl trna synthetases |
WO2011139986A2 (en) | 2010-05-03 | 2011-11-10 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of arginyl-trna synthetases |
CA2797977C (en) | 2010-05-03 | 2019-08-20 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of phenylalanyl-alpha-trna synthetases |
JP6008841B2 (ja) | 2010-05-03 | 2016-10-19 | エータイアー ファーマ, インコーポレイテッド | メチオニルtRNA合成酵素のタンパク質フラグメントに関連した治療用、診断用および抗体組成物の革新的発見 |
EP2566499B1 (en) | 2010-05-04 | 2017-01-25 | aTyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of p38 multi-trna synthetase complex |
EP3023496B1 (en) | 2010-05-13 | 2020-07-29 | Sarepta Therapeutics, Inc. | Compounds which modulate interleukins 17 and 23 signaling activity |
CA2799197C (en) | 2010-05-14 | 2019-10-29 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of phenylalanyl-beta-trna synthetases |
CA2799480C (en) | 2010-05-17 | 2020-12-15 | Atyr Pharma, Inc. | Innovative discovery of therapeutic, diagnostic, and antibody compositions related to protein fragments of leucyl-trna synthetases |
KR20130108983A (ko) | 2010-05-26 | 2013-10-07 | 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. | 커플링되지 않은 애주번트를 갖는 나노담체 조성물 |
CN103118695B (zh) | 2010-07-12 | 2016-08-03 | Atyr医药公司 | 与甘氨酰-tRNA合成酶的蛋白片段相关的治疗、诊断和抗体组合物的发现 |
US20130202652A1 (en) | 2010-07-30 | 2013-08-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for delivery of active agents |
WO2012016184A2 (en) | 2010-07-30 | 2012-02-02 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for delivery of active agents |
EP2608801B1 (en) | 2010-08-25 | 2019-08-21 | aTyr Pharma, Inc. | INNOVATIVE DISCOVERY OF THERAPEUTIC, DIAGNOSTIC, AND ANTIBODY COMPOSITIONS RELATED TO PROTEIN FRAGMENTS OF TYROSYL-tRNA SYNTHETASES |
CA2824526C (en) | 2011-01-11 | 2020-07-07 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Pegylated lipids and their use for drug delivery |
EP3456317A1 (en) | 2011-09-27 | 2019-03-20 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Di-aliphatic substituted pegylated lipids |
US9556432B2 (en) | 2012-01-10 | 2017-01-31 | The Research Foundation For The State University Of New York | Method of treating hyperlipidemia and atherosclerosis with miR-30C |
EP2908849B1 (en) * | 2012-08-31 | 2019-04-17 | Board Of Regents, The University Of Texas System | A method to improve pharmacokinetics of drugs |
US9029342B2 (en) | 2012-09-17 | 2015-05-12 | Board Of Regents Of The University Of Texas System | Compositions of matter that reduce pain, shock, and inflammation by blocking linoleic acid metabolites and uses thereof |
US20160138014A1 (en) * | 2012-10-12 | 2016-05-19 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense compounds and uses thereof |
EP2992095B1 (en) | 2013-05-01 | 2019-01-09 | Regulus Therapeutics Inc. | Microrna compounds and methods for modulating mir-122 |
US9765220B2 (en) | 2013-08-22 | 2017-09-19 | Sony Corporation | Water soluble fluorescent or colored dyes and methods for their use |
EP3060664B1 (en) | 2013-10-25 | 2021-07-07 | Sanofi | Microrna compounds and methods for modulating mir-21 activity |
US9549914B2 (en) | 2014-04-03 | 2017-01-24 | The Johns Hopkins University | Treatment of human cytomegalovirus by modulating Wnt |
MX2017001493A (es) | 2014-08-07 | 2017-05-09 | Regulus Therapeutics Inc | Eleccion de micro acidos ribonucleicos (arn) como diana para trastornos metabolicos. |
JOP20200092A1 (ar) | 2014-11-10 | 2017-06-16 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | تركيبات iRNA لفيروس الكبد B (HBV) وطرق لاستخدامها |
US11827661B2 (en) | 2015-02-26 | 2023-11-28 | Sony Group Corporation | Water soluble fluorescent or colored dyes comprising conjugating groups |
JP6982500B2 (ja) | 2015-02-26 | 2021-12-17 | ソニーグループ株式会社 | フェニルエチニルナフタレン染料およびそれらの使用方法 |
WO2016183185A1 (en) | 2015-05-11 | 2016-11-17 | Sony Corporation | Ultra bright dimeric or polymeric dyes |
AU2016312530A1 (en) | 2015-08-24 | 2018-03-01 | Halo-Bio Rnai Therapeutics, Inc. | Polynucleotide nanoparticles for the modulation of gene expression and uses thereof |
EP3426781B1 (en) | 2016-03-07 | 2024-06-26 | The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services | Micrornas and methods of their use |
CA3231845A1 (en) | 2016-04-01 | 2017-10-05 | Sony Group Corporation | Ultra bright dimeric or polymeric fluorescent and colored dyes |
EP3436528A1 (en) | 2016-04-01 | 2019-02-06 | Sony Corporation | Ultra bright dimeric or polymeric dyes with rigid spacing groups |
CN109153860B (zh) | 2016-04-06 | 2021-04-23 | 索尼公司 | 具有间隔连接体基团的超高亮二聚体或聚合物染料 |
EP3455299B1 (en) | 2016-05-10 | 2024-01-17 | Sony Group Corporation | Compositions comprising a polymeric dye and a cyclodextrin and uses thereof |
US11370922B2 (en) | 2016-05-10 | 2022-06-28 | Sony Corporation | Ultra bright polymeric dyes with peptide backbones |
AU2017264861B2 (en) | 2016-05-11 | 2021-09-23 | Sony Group Corporation | Ultra bright dimeric or polymeric dyes |
JP7068191B2 (ja) | 2016-06-06 | 2022-05-16 | ソニーグループ株式会社 | 蛍光または有色レポーター基を含むイオン性ポリマー |
WO2018022925A1 (en) | 2016-07-29 | 2018-02-01 | Sony Corporation | Ultra bright dimeric or polymeric dyes and methods for preparation of the same |
EP3548005A4 (en) | 2016-11-29 | 2020-06-17 | Puretech Health LLC | EXOSOMES FOR THE ADMINISTRATION OF THERAPEUTIC AGENTS |
JOP20170192A1 (ar) | 2016-12-01 | 2019-01-30 | Takeda Pharmaceuticals Co | داي نوكليوتيد حلقي |
US11324820B2 (en) | 2017-04-18 | 2022-05-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods for the treatment of subjects having a hepatitis b virus (HBV) infection |
WO2018195338A1 (en) | 2017-04-20 | 2018-10-25 | Atyr Pharma, Inc. | Compositions and methods for treating lung inflammation |
EP3691690A1 (en) | 2017-10-05 | 2020-08-12 | Sony Corporation | Programmable polymeric drugs |
WO2019099789A1 (en) | 2017-11-16 | 2019-05-23 | Sony Corporation | Programmable polymeric drugs |
EP3749288A1 (en) | 2018-02-10 | 2020-12-16 | The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services | Nanoparticle-hydrogel composite for nucleic acid molecule delivery |
EP3769085B1 (en) | 2018-03-19 | 2022-08-24 | Sony Group Corporation | Use of divalent metals for enhancement of fluorescent signals |
EP3768689A1 (en) | 2018-03-21 | 2021-01-27 | Sony Corporation | Polymeric tandem dyes with linker groups |
EP3549610A1 (en) * | 2018-04-05 | 2019-10-09 | Silence Therapeutics GmbH | Nucleic acid conjugates |
EP3550021A1 (en) * | 2018-04-05 | 2019-10-09 | Silence Therapeutics GmbH | Products and compositions for inhibiting expression of a target gene |
EP3775209A1 (en) * | 2018-04-05 | 2021-02-17 | Silence Therapeutics GmbH | Sirnas with at least two ligands at different ends |
SG11202010910QA (en) | 2018-05-07 | 2020-12-30 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Extrahepatic delivery |
TW202016302A (zh) | 2018-05-08 | 2020-05-01 | 美商雷格勒斯治療公司 | 用於調節mir-122之微小rna化合物及方法 |
JP2021529194A (ja) | 2018-06-27 | 2021-10-28 | ソニーグループ株式会社 | デオキシリボースを含むリンカー基を有するポリマー色素 |
CN112673103A (zh) | 2018-08-13 | 2021-04-16 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 乙型肝炎病毒(HBV)dsRNA剂组合物及其使用方法 |
TW202028465A (zh) | 2018-09-28 | 2020-08-01 | 美商阿尼拉製藥公司 | 甲狀腺素運載蛋白(TTR)iRNA組成物及其治療或預防TTR相關眼部疾病之使用方法 |
EP3911632A1 (en) | 2019-01-15 | 2021-11-24 | Empirico Inc. | Prodrugs of alox-15 inhibitors and methods of using the same |
US20220211743A1 (en) | 2019-05-17 | 2022-07-07 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Oral delivery of oligonucleotides |
JP7239904B2 (ja) | 2019-09-26 | 2023-03-15 | ソニーグループ株式会社 | リンカー基を有するポリマータンデム色素 |
US20230016929A1 (en) | 2019-11-06 | 2023-01-19 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Extrahepatic delivery |
EP4055165A1 (en) | 2019-11-06 | 2022-09-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Transthyretin (ttr) irna compositions and methods of use thereof for treating or preventing ttr-associated ocular diseases |
EP4061945A1 (en) | 2019-11-22 | 2022-09-28 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Ataxin3 (atxn3) rnai agent compositions and methods of use thereof |
WO2021163066A1 (en) | 2020-02-10 | 2021-08-19 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for silencing vegf-a expression |
EP4114947A1 (en) | 2020-03-05 | 2023-01-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Complement component c3 irna compositions and methods of use thereof for treating or preventing complement component c3-associated diseases |
AR121769A1 (es) | 2020-04-06 | 2022-07-06 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composiciones y métodos para el silenciamiento de la expresión de myoc |
MX2022012561A (es) | 2020-04-07 | 2022-11-07 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composiciones y metodos para silenciar la expresion de la subunidad alfa tipo ix dependiente del voltaje del canal de sodio (scn9a). |
US20230257745A1 (en) | 2020-07-10 | 2023-08-17 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Circular siRNAs |
EP4367237A2 (en) | 2021-07-09 | 2024-05-15 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Bis-rnai compounds for cns delivery |
WO2023178144A2 (en) | 2022-03-16 | 2023-09-21 | Empirico Inc. | Galnac compositions for improving sirna bioavailability |
WO2023220744A2 (en) | 2022-05-13 | 2023-11-16 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Single-stranded loop oligonucleotides |
WO2024073732A1 (en) | 2022-09-30 | 2024-04-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Modified double-stranded rna agents |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001075164A2 (en) * | 2000-03-30 | 2001-10-11 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Rna sequence-specific mediators of rna interference |
US20040147470A1 (en) * | 1996-06-06 | 2004-07-29 | Muthiah Manoharan | Cross-linked oligomeric compounds and their use in gene modulation |
US20050074801A1 (en) * | 2003-09-09 | 2005-04-07 | Monia Brett P. | Chimeric oligomeric compounds comprising alternating regions of northern and southern conformational geometry |
Family Cites Families (171)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5391723A (en) * | 1989-05-31 | 1995-02-21 | Neorx Corporation | Oligonucleotide conjugates |
JP3256539B2 (ja) * | 1990-08-28 | 2002-02-12 | エポック・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | 連結分子を介する3’―尾分子付オリゴヌクレオチドの固体支持体合成 |
WO1993014217A1 (en) | 1992-01-10 | 1993-07-22 | Life Technologies, Inc. | Use of predetermined nucleotides having altered base pairing characteristics in the amplification of nucleic acid molecules |
US5977343A (en) | 1992-05-14 | 1999-11-02 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Synthesis, deprotection, analysis and purification of RNA and ribozymes |
US20030206887A1 (en) | 1992-05-14 | 2003-11-06 | David Morrissey | RNA interference mediated inhibition of hepatitis B virus (HBV) using short interfering nucleic acid (siNA) |
ES2186690T3 (es) | 1993-09-02 | 2003-05-16 | Ribozyme Pharm Inc | Acido nucleico enzimatico que contiene no-nucleotidos. |
US5519134A (en) * | 1994-01-11 | 1996-05-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Pyrrolidine-containing monomers and oligomers |
US5716824A (en) | 1995-04-20 | 1998-02-10 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | 2'-O-alkylthioalkyl and 2-C-alkylthioalkyl-containing enzymatic nucleic acids (ribozymes) |
US6361999B1 (en) | 1995-04-27 | 2002-03-26 | Life Technologies, Inc. | Auxinic analogues of indole-3- acetic acid |
US6346398B1 (en) | 1995-10-26 | 2002-02-12 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Method and reagent for the treatment of diseases or conditions related to levels of vascular endothelial growth factor receptor |
US20040142895A1 (en) | 1995-10-26 | 2004-07-22 | Sirna Therapeutics, Inc. | Nucleic acid-based modulation of gene expression in the vascular endothelial growth factor pathway |
US20040220128A1 (en) | 1995-10-26 | 2004-11-04 | Sirna Therapeutics, Inc. | Nucleic acid based modulation of female reproductive diseases and conditions |
US6972330B2 (en) | 1996-02-13 | 2005-12-06 | Sirna Therapeutics, Inc. | Chemical synthesis of methoxy nucleosides |
US20040161777A1 (en) | 1996-06-06 | 2004-08-19 | Baker Brenda F. | Modified oligonucleotides for use in RNA interference |
US20040203024A1 (en) | 1996-06-06 | 2004-10-14 | Baker Brenda F. | Modified oligonucleotides for use in RNA interference |
US5677124A (en) | 1996-07-03 | 1997-10-14 | Ambion, Inc. | Ribonuclease resistant viral RNA standards |
US5939262A (en) | 1996-07-03 | 1999-08-17 | Ambion, Inc. | Ribonuclease resistant RNA preparation and utilization |
US6057134A (en) | 1996-10-07 | 2000-05-02 | Ambion, Inc. | Modulating the efficiency of nucleic acid amplification reactions with 3' modified oligonucleotides |
US6057156A (en) | 1997-01-31 | 2000-05-02 | Robozyme Pharmaceuticals, Inc. | Enzymatic nucleic acid treatment of diseases or conditions related to levels of epidermal growth factor receptors |
US6369237B1 (en) * | 1997-03-07 | 2002-04-09 | President And Fellows Of Harvard College | DNA glycosylase inhibitors, and uses related thereto |
JP2001524820A (ja) | 1997-04-10 | 2001-12-04 | ライフ テクノロジーズ,インコーポレイテッド | Rna単離試薬および方法 |
US6410225B1 (en) | 1997-06-27 | 2002-06-25 | Yale University | Purification of oligomers |
US20030073640A1 (en) | 1997-07-23 | 2003-04-17 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Novel compositions for the delivery of negatively charged molecules |
US6316612B1 (en) | 1997-08-22 | 2001-11-13 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Xylofuranosly-containing nucleoside phosphoramidites and polynucleotides |
US6399334B1 (en) | 1997-09-24 | 2002-06-04 | Invitrogen Corporation | Normalized nucleic acid libraries and methods of production thereof |
US6054576A (en) | 1997-10-02 | 2000-04-25 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Deprotection of RNA |
AU3199699A (en) | 1998-03-23 | 1999-10-18 | Invitrogen Corporation | Modified nucleotides and methods useful for nucleic acid sequencing |
CA2326823A1 (en) | 1998-04-20 | 1999-10-28 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Nucleic acid molecules with novel chemical compositions capable of modulating gene expression |
WO2000063365A1 (en) | 1999-04-21 | 2000-10-26 | Pangene Corporation | Locked nucleic acid hybrids and methods of use |
NZ515673A (en) | 1999-05-21 | 2004-03-26 | Invitrogen Corp | Compositions and methods for labeling of nucleic acid molecules |
JP2003522119A (ja) | 1999-05-24 | 2003-07-22 | インビトロジェン コーポレイション | 標識されたオリゴヌクレオチドの脱ブロック化方法 |
US6656730B1 (en) * | 1999-06-15 | 2003-12-02 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides conjugated to protein-binding drugs |
US6830902B1 (en) | 1999-07-02 | 2004-12-14 | Invitrogen Corporation | Compositions and methods for enhanced sensitivity and specificity of nucleic acid synthesis |
US20050032733A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-02-10 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (SiNA) |
US8202979B2 (en) | 2002-02-20 | 2012-06-19 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid |
US20050182008A1 (en) | 2000-02-11 | 2005-08-18 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of NOGO and NOGO receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7491805B2 (en) | 2001-05-18 | 2009-02-17 | Sirna Therapeutics, Inc. | Conjugates and compositions for cellular delivery |
US20070026394A1 (en) | 2000-02-11 | 2007-02-01 | Lawrence Blatt | Modulation of gene expression associated with inflammation proliferation and neurite outgrowth using nucleic acid based technologies |
US20050020525A1 (en) | 2002-02-20 | 2005-01-27 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050233329A1 (en) | 2002-02-20 | 2005-10-20 | Sirna Therapeutics, Inc. | Inhibition of gene expression using duplex forming oligonucleotides |
JP2003526367A (ja) | 2000-03-16 | 2003-09-09 | ジェネティカ インコーポレイテッド | Rna干渉の方法とrna干渉組成物 |
US20030084471A1 (en) | 2000-03-16 | 2003-05-01 | David Beach | Methods and compositions for RNA interference |
US20030190635A1 (en) | 2002-02-20 | 2003-10-09 | Mcswiggen James A. | RNA interference mediated treatment of Alzheimer's disease using short interfering RNA |
US20050209179A1 (en) | 2000-08-30 | 2005-09-22 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated treatment of Alzheimer's disease using short interfering nucleic acid (siNA) |
ATE506372T1 (de) | 2000-09-01 | 2011-05-15 | Ribozyme Pharm Inc | Verfahren zur herstellung von nukleosidderivate |
US20020150936A1 (en) | 2000-09-01 | 2002-10-17 | Leonid Beigelman | Methods for synthesizing nucleosides, nucleoside derivatives and non-nucleoside derivatives |
US20040018181A1 (en) | 2000-09-11 | 2004-01-29 | KUFE Donald W. | MUC1 interference RNA compositions and methods derived therefrom |
NZ525683A (en) | 2000-11-09 | 2004-10-29 | Invitrogen Corp | Method for removing a universal linker from an oligonucleotide |
CZ302719B6 (cs) | 2000-12-01 | 2011-09-21 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Izolovaná molekula dvouretezcové RNA, zpusob její výroby a její použití |
AU2002258477A1 (en) | 2001-03-08 | 2002-09-24 | Advanced Cell Technology, Inc. | Use of rna interference for the creation of lineage specific es and other undifferentiated cells and production of differentiated cells in vitro by co-culture |
US20050153915A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-07-14 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of early growth response gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050282188A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-12-22 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050148530A1 (en) | 2002-02-20 | 2005-07-07 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050176025A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-08-11 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of B-cell CLL/Lymphoma-2 (BCL-2) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050070497A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-03-31 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibtion of tyrosine phosphatase-1B (PTP-1B) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050256068A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-11-17 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of stearoyl-CoA desaturase (SCD) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050048529A1 (en) | 2002-02-20 | 2005-03-03 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of intercellular adhesion molecule (ICAM) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050287128A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-12-29 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of TGF-beta and TGF-beta receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050176024A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-08-11 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of epidermal growth factor receptor (EGFR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050164968A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-07-28 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of ADAM33 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20040219671A1 (en) | 2002-02-20 | 2004-11-04 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated treatment of parkinson disease using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050191618A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-09-01 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of human immunodeficiency virus (HIV) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050203040A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-09-15 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of vascular cell adhesion molecule (VCAM) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050182006A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-08-18 | Sirna Therapeutics, Inc | RNA interference mediated inhibition of protein kinase C alpha (PKC-alpha) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050137155A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-06-23 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated treatment of Parkinson disease using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050143333A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-06-30 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (SINA) |
US20050176664A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-08-11 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of cholinergic muscarinic receptor (CHRM3) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050158735A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-07-21 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7109165B2 (en) | 2001-05-18 | 2006-09-19 | Sirna Therapeutics, Inc. | Conjugates and compositions for cellular delivery |
US20050153916A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-07-14 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of telomerase gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050159381A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-07-21 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of chromosome translocation gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050054596A1 (en) | 2001-11-30 | 2005-03-10 | Mcswiggen James | RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050136436A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-06-23 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of G72 and D-amino acid oxidase (DAAO) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050054598A1 (en) | 2002-02-20 | 2005-03-10 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition hairless (HR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050153914A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-07-14 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of MDR P-glycoprotein gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050182007A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-08-18 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (SINA) |
US20050227935A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-10-13 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of TNF and TNF receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050239731A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-10-27 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of MAP kinase gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050176665A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-08-11 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of hairless (HR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050164966A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-07-28 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of type 1 insulin-like growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050196767A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-09-08 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of GRB2 associated binding protein (GAB2) gene expression using short interfering nucleic acis (siNA) |
US20050159379A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-07-21 | Sirna Therapeutics, Inc | RNA interference mediated inhibition of gastric inhibitory polypeptide (GIP) and gastric inhibitory polypeptide receptor (GIPR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050233997A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-10-20 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of matrix metalloproteinase 13 (MMP13) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050119212A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-06-02 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of FAS and FASL gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050209180A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-09-22 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of hepatitis C virus (HCV) expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050014172A1 (en) | 2002-02-20 | 2005-01-20 | Ivan Richards | RNA interference mediated inhibition of muscarinic cholinergic receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20030170891A1 (en) | 2001-06-06 | 2003-09-11 | Mcswiggen James A. | RNA interference mediated inhibition of epidermal growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050227936A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-10-13 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of TGF-beta and TGF-beta receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050124568A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-06-09 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of acetyl-CoA-carboxylase gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050196781A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-09-08 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of STAT3 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050187174A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-08-25 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of intercellular adhesion molecule (ICAM) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20040198682A1 (en) | 2001-11-30 | 2004-10-07 | Mcswiggen James | RNA interference mediated inhibition of placental growth factor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050170371A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-08-04 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of 5-alpha reductase and androgen receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050277133A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-12-15 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated treatment of polyglutamine (polyQ) repeat expansion diseases using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050124569A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-06-09 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of CXCR4 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050164967A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-07-28 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of platelet-derived endothelial cell growth factor (ECGF1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20040209832A1 (en) | 2001-11-30 | 2004-10-21 | Mcswiggen James | RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050130181A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-06-16 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of wingless gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050164224A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-07-28 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of cyclin D1 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050261219A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-11-24 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
AU2004266311B2 (en) | 2001-05-18 | 2009-07-23 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050176663A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-08-11 | Sima Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of protein tyrosine phosphatase type IVA (PRL3) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050191638A1 (en) | 2002-02-20 | 2005-09-01 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated treatment of polyglutamine (polyQ) repeat expansion diseases using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050171040A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-08-04 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of cholesteryl ester transfer protein (CEPT) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050233344A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-10-20 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of platelet derived growth factor (PDGF) and platelet derived growth factor receptor (PDGFR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20040209831A1 (en) | 2002-02-20 | 2004-10-21 | Mcswiggen James | RNA interference mediated inhibition of hepatitis C virus (HCV) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050260620A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-11-24 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of retinolblastoma (RBI) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050119211A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-06-02 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA mediated inhibition connexin gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
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US20030175950A1 (en) | 2001-05-29 | 2003-09-18 | Mcswiggen James A. | RNA interference mediated inhibition of HIV gene expression using short interfering RNA |
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US20050159378A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-07-21 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of Myc and/or Myb gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20040019001A1 (en) | 2002-02-20 | 2004-01-29 | Mcswiggen James A. | RNA interference mediated inhibition of protein typrosine phosphatase-1B (PTP-1B) gene expression using short interfering RNA |
US20050233996A1 (en) | 2002-02-20 | 2005-10-20 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of hairless (HR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050124567A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-06-09 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of TRPM7 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050159382A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-07-21 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of polycomb group protein EZH2 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20030130186A1 (en) * | 2001-07-20 | 2003-07-10 | Chandra Vargeese | Conjugates and compositions for cellular delivery |
US20050277608A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-12-15 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibtion of vitamin D receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050182009A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-08-18 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of NF-Kappa B / REL-A gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050124566A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-06-09 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of myostatin gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050159376A1 (en) | 2002-02-20 | 2005-07-21 | Slrna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition 5-alpha reductase and androgen receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050079610A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-04-14 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of Fos gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050222066A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-10-06 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050196765A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-09-08 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of checkpoint Kinase-1 (CHK-1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050176666A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-08-11 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of GPRA and AAA1 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050267058A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-12-01 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of placental growth factor gene expression using short interfering nucleic acid (sINA) |
US20020182590A1 (en) | 2001-05-25 | 2002-12-05 | Vanderbilt University | Determining protein function in cell culture using RNA interference |
WO2003023049A2 (en) | 2001-09-12 | 2003-03-20 | Invitrogen Corporation | Methods of selecting 5'-capped nucleic acid molecules |
EP2325193A3 (en) | 2001-11-02 | 2012-05-02 | Insert Therapeutics, Inc. | Methods and compositions for therapeutic use of RNA interference |
US20040063654A1 (en) | 2001-11-02 | 2004-04-01 | Davis Mark E. | Methods and compositions for therapeutic use of RNA interference |
US20030167490A1 (en) | 2001-11-26 | 2003-09-04 | Hunter Craig P. | Gene silencing by systemic RNA interference |
US20050075304A1 (en) | 2001-11-30 | 2005-04-07 | Mcswiggen James | RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20040138163A1 (en) | 2002-05-29 | 2004-07-15 | Mcswiggen James | RNA interference mediated inhibition of vascular edothelial growth factor and vascular edothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050096284A1 (en) | 2002-02-20 | 2005-05-05 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated treatment of polyglutamine (polyQ) repeat expansion diseases using short interfering nucleic acid (siNA) |
WO2003106476A1 (en) | 2002-02-20 | 2003-12-24 | Sirna Therapeutics, Inc | Nucleic acid mediated inhibition of enterococcus infection and cytolysin toxin activity |
US20050137153A1 (en) | 2002-02-20 | 2005-06-23 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of alpha-1 antitrypsin (AAT) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050222064A1 (en) | 2002-02-20 | 2005-10-06 | Sirna Therapeutics, Inc. | Polycationic compositions for cellular delivery of polynucleotides |
JP2005517450A (ja) | 2002-02-20 | 2005-06-16 | サーナ・セラピューティクス・インコーポレイテッド | 短干渉核酸(siNA)を用いるRNA干渉媒介性標的発見および標的評価 |
US20050266422A1 (en) | 2002-02-20 | 2005-12-01 | Sirna Therapeutics, Inc. | Fluoroalkoxy, nucleosides, nucleotides, and polynucleotides |
EP1352960A1 (en) | 2002-04-12 | 2003-10-15 | Viruvation B.V. | Antiviral therapy on the basis of RNA interference |
CA2525976A1 (en) | 2002-05-23 | 2003-12-04 | Ceptyr, Inc. | Modulation of ptp1b signal transduction by rna interference |
ATE458064T1 (de) | 2002-05-31 | 2010-03-15 | Univ California | Verfahren zur wirksamen rna-interferenz in säugerzellen |
US7655790B2 (en) | 2002-07-12 | 2010-02-02 | Sirna Therapeutics, Inc. | Deprotection and purification of oligonucleotides and their derivatives |
AU2003299531A1 (en) | 2002-08-05 | 2004-06-07 | University Of Massachusetts | Compounds for modulating rna interference |
US20050042646A1 (en) | 2002-08-05 | 2005-02-24 | Davidson Beverly L. | RNA interference suppresion of neurodegenerative diseases and methods of use thereof |
WO2004014933A1 (en) | 2002-08-07 | 2004-02-19 | University Of Massachusetts | Compositions for rna interference and methods of use thereof |
AU2003256857A1 (en) | 2002-08-08 | 2004-02-25 | Dharmacon, Inc. | Short interfering rnas having a hairpin structure containing a non-nucleotide loop |
AU2003259735A1 (en) | 2002-08-08 | 2004-02-25 | Sirna Therapeutics, Inc. | Small-mer compositions and methods of use |
DE60329416D1 (de) | 2002-11-04 | 2009-11-05 | Univ Massachusetts | Allelspezifische rna-interferenz |
ATE517992T1 (de) | 2002-11-14 | 2011-08-15 | Dharmacon Inc | Funktionelle und hyperfunktionelle sirna |
US20040214198A1 (en) | 2002-11-15 | 2004-10-28 | University Of Massachusetts | Allele-targeted RNA interference |
US20040191905A1 (en) | 2002-11-22 | 2004-09-30 | University Of Massachusetts | Modulation of HIV replication by RNA interference |
AU2003297474A1 (en) | 2002-12-18 | 2004-07-14 | Salk Institute For Biological Studies | Methods of inhibiting gene expression by rna interference |
US20040198640A1 (en) | 2003-04-02 | 2004-10-07 | Dharmacon, Inc. | Stabilized polynucleotides for use in RNA interference |
US20040224405A1 (en) | 2003-05-06 | 2004-11-11 | Dharmacon Inc. | siRNA induced systemic gene silencing in mammalian systems |
US7129223B2 (en) | 2003-05-19 | 2006-10-31 | The University Of Hongkong | Inhibition of SARS-associated coronavirus (SCoV) infection and replication by RNA interference |
US7067249B2 (en) | 2003-05-19 | 2006-06-27 | The University Of Hong Kong | Inhibition of hepatitis B virus (HBV) replication by RNA interference |
EP1660631B1 (en) | 2003-08-01 | 2013-04-24 | Life Technologies Corporation | Compositions and methods for purifying short rna molecules |
US20050287668A1 (en) | 2003-11-04 | 2005-12-29 | Cell Therapeutics, Inc. (Cti) | RNA interference compositions and screening methods for the identification of novel genes and biological pathways |
US20050208658A1 (en) | 2003-11-21 | 2005-09-22 | The University Of Maryland | RNA interference mediated inhibition of 11beta hydroxysteriod dehydrogenase-1 (11beta HSD-1) gene expression |
US20050176045A1 (en) | 2004-02-06 | 2005-08-11 | Dharmacon, Inc. | SNP discriminatory siRNA |
CA2558682A1 (en) | 2004-02-20 | 2005-09-01 | Genesis Research And Development Corporation Limited | Targeted delivery of rna interference molecules for the treatment of ige-mediated disorders |
DE102004010547A1 (de) | 2004-03-03 | 2005-11-17 | Beiersdorf Ag | Oligoribonukleotide zur Behandlung von irritativen und/oder entzündlichen Hauterscheinungen durch RNA-Interferenz |
US20050197312A1 (en) | 2004-03-03 | 2005-09-08 | Kevin Fitzgerald | Transcription factor RNA interference reagents and methods of use thereof |
DK1730280T3 (en) | 2004-03-26 | 2019-02-04 | Curis Inc | RNA interference modulators for hedgehog signaling and applications thereof |
KR101147147B1 (ko) | 2004-04-01 | 2012-05-25 | 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 | Rna 간섭의 오프 타겟 효과 감소를 위한 변형된폴리뉴클레오타이드 |
US7498316B2 (en) | 2004-04-06 | 2009-03-03 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for treating gain-of-function disorders using RNA interference |
US20050260652A1 (en) | 2004-04-15 | 2005-11-24 | The General Hospital Corporation | Compositions and methods that modulate RNA interference |
EP1750776A2 (en) | 2004-04-30 | 2007-02-14 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Oligonucleotides comprising a c5-modified pyrimidine |
US20050260214A1 (en) | 2004-05-12 | 2005-11-24 | Simon Michael R | Composition and method for introduction of RNA interference sequences into targeted cells and tissues |
US20050255120A1 (en) | 2004-05-12 | 2005-11-17 | Simon Michael R | Composition and method for introduction of DNA directed RNA interference sequences into targeted cells and tissues |
-
2005
- 2005-04-27 WO PCT/US2005/014472 patent/WO2006078278A2/en active Application Filing
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-
2009
- 2009-10-23 US US12/604,897 patent/US8470988B2/en active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20040147470A1 (en) * | 1996-06-06 | 2004-07-29 | Muthiah Manoharan | Cross-linked oligomeric compounds and their use in gene modulation |
WO2001075164A2 (en) * | 2000-03-30 | 2001-10-11 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Rna sequence-specific mediators of rna interference |
US20050074801A1 (en) * | 2003-09-09 | 2005-04-07 | Monia Brett P. | Chimeric oligomeric compounds comprising alternating regions of northern and southern conformational geometry |
Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2011505425A (ja) * | 2007-12-04 | 2011-02-24 | アルニラム ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド | オリゴヌクレオチドの送達剤としての糖質コンジュゲート |
JP2011518784A (ja) * | 2008-04-11 | 2011-06-30 | アルニラム ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド | 標的リガンドをエンドソーム分解性成分と組み合わせることによる核酸の部位特異的送達 |
JP2015187138A (ja) * | 2008-04-11 | 2015-10-29 | アルニラム ファーマスーティカルズ インコーポレイテッドAlnylam Pharmaceuticals, Inc. | 標的リガンドをエンドソーム分解性成分と組み合わせることによる核酸の部位特異的送達 |
JP2017214383A (ja) * | 2008-04-11 | 2017-12-07 | アルニラム ファーマスーティカルズ インコーポレイテッドAlnylam Pharmaceuticals, Inc. | 標的リガンドをエンドソーム分解性成分と組み合わせることによる核酸の部位特異的送達 |
JP2019123735A (ja) * | 2008-04-11 | 2019-07-25 | アルニラム ファーマスーティカルズ インコーポレイテッドAlnylam Pharmaceuticals, Inc. | 標的リガンドをエンドソーム分解性成分と組み合わせることによる核酸の部位特異的送達 |
JP2011155914A (ja) * | 2010-02-01 | 2011-08-18 | Osaka Univ | 脂質異常症治療薬剤としての化学修飾siRNA |
JP2016518841A (ja) * | 2013-05-01 | 2016-06-30 | レグルス セラピューティクス インコーポレイテッド | 細胞取り込みの向上のための化合物および方法 |
JP2021510698A (ja) * | 2018-01-12 | 2021-04-30 | ソニー株式会社 | 生物学的に活性な化合物を含むホスホアルキルリボースポリマー |
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