JP2016512429A5

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Publication number: JP2016512429A5
Application number: JP2016501461A
Authority: JP
Filing date: 2014-03-12
Publication date: 2017-03-23
Anticipated expiration: 2034-03-12

Claims

試料中の目的の分析物の検出のためのキットであって、１つまたはそれ以上のバイアル、容器、またはコンパートメントにおいて、
ａ．（ｉ）分析物に関する捕捉試薬、および（ｉｉ）アンカーオリゴヌクレオチド配列を含むアンカー試薬を含む表面；
ｂ．第１の核酸プローブに連結された、該分析物に関する第１の検出試薬；ならびに
ｃ．第２の核酸プローブに連結された、該分析物に関する第２の検出試薬
を含む、前記キット。
捕捉試薬、または第１の検出試薬、または第２の検出試薬は、抗体、抗原、リガンド、受容体、オリゴヌクレオチド、ハプテン、エピトープ、ミミトープ、またはアプタマーを含む、特に、抗体を含む、請求項１に記載のキット。
試料中の目的の分析物を検出する方法であって、
ａ．該分析物を、（ｉ）該分析物に関する捕捉試薬を含む表面上の該捕捉試薬、およびアンカーオリゴヌクレオチド配列を含むアンカー試薬；（ｉｉ）第１の核酸プローブに連結された、該分析物に関する第１の検出試薬；ならびに（ｉｉｉ）第２の核酸プローブに連結された、該分析物に関する第２の検出試薬に結合させ；それにより、結合試薬、該分析物ならびに該第１および第２の検出試薬を含む該表面上の複合体を形成させること；
ｂ．該第１および第２のプローブが近接されることを必要とする伸長プロセスを用いて、該第２のプローブを伸長して、該アンカー配列に対して相補的であるアンカー配列相補体を含む伸長配列を形成させること；
ｃ．該アンカー配列を該アンカー配列相補体にハイブリダイズさせること；ならびに
ｄ．該表面に結合した伸長配列の量を測定すること
を含み、
ここで前記方法は請求項１に記載のキットを用いて実施される、
前記方法。
捕捉試薬、または第１の検出試薬、または第２の検出試薬は、抗体、抗原、リガンド、受容体、オリゴヌクレオチド、ハプテン、エピトープ、ミミトープ、またはアプタマーで
あり、特に抗体である、請求項３に記載の方法。
捕捉試薬ならびに第１および第２の検出試薬は分析物に対する抗体である、請求項３に記載の方法。
アンカーオリゴヌクレオチド配列は１本鎖オリゴヌクレオチド配列、または２本鎖オリゴヌクレオチド配列を含む、請求項３に記載の方法。
伸長配列は１つまたはそれ以上の検出配列をさらに含み、測定工程は伸長配列を１つまたはそれ以上の検出配列に対して相補的な複数の標識プローブと接触させることをさらに含む、または、
伸長配列は１つまたはそれ以上の標識塩基をさらに含み、測定工程は１つまたはそれ以上の標識塩基の存在を検出することをさらに含む、
請求項３に記載の方法。
伸長配列は１つまたはそれ以上の修飾塩基をさらに含み、測定工程は伸長配列を１つまたはそれ以上の修飾塩基と結合することが可能な複数の検出可能な部分と接触させることをさらに含む、請求項３に記載の方法。
１つまたはそれ以上の修飾塩基はアプタマー、アプタマーリガンド、抗体、抗原、リガンド、受容体、ハプテン、エピトープ、またはミメトープを含み、複数の検出可能な部分は１つまたはそれ以上の修飾塩基および検出可能な標識の結合パートナーを各々含む、請求項８に記載の方法。
１つまたはそれ以上の修飾塩基はストレプトアビジンを含み、複数の検出可能な部分はビオチンおよび検出可能な標識を各々含む、または、
１つまたはそれ以上の修飾塩基はビオチンを含み、複数の検出可能な部分はストレプトアビジンおよび検出可能な標識を各々含む、または、
１つまたはそれ以上の修飾塩基はアビジンを含み、複数の検出可能な部分はビオチンおよび検出可能な標識を各々含む、または、
１つまたはそれ以上の修飾塩基はビオチンを含み、複数の検出可能な部分はアビジンおよび検出可能な標識を各々含む、
請求項９に記載の方法。
工程（ａ）は分析物を以下の種に以下の順序で結合させることを含む、請求項３に記載の方法：
（ｉ）表面上の捕捉試薬；および（ｉｉ）分析物に関する検出試薬、または、
（ｉ）分析物に関する検出試薬；および（ｉｉ）表面上の捕捉試薬。
工程（ａ）は分析物を以下の種に同時にまたは実質的に同時に結合させることを含む、請求項３に記載の方法：
（ｉ）表面上の捕捉試薬；および（ｉｉ）分析物に関する検出試薬。
伸長工程はプローブを鋳型核酸配列に結合させることおよびプローブをポリメラーゼ連鎖反応法によって伸長させることを含む、または、
伸長工程はプローブを鋳型核酸配列に結合させること、環状の核酸鋳型を形成させること、および環状の鋳型をローリングサークル増幅によって伸長させることを含む、
請求項３に記載の方法。
伸長されるプローブはプローブ伸長後に表面上に局在化したままで残る、請求項３に記
載の方法。
複合体は伸長工程後に表面に結合したままで残り、
必要に応じて、伸長されるプローブは表面上の複合体の位置の１０〜１００ｕｍ内のポジションでアンカー試薬に結合される、
請求項１４に記載の方法。
伸長工程はＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）、ＬＣＲ（リガーゼ連鎖反応）、ＳＤＡ（鎖置換増幅）、３ＳＲ（自己持続合成反応）、または等温性の増幅方法を含む、請求項３に記載の方法。
伸長工程は等温性の増幅方法を含み、
必要に応じて、等温性の増幅方法はヘリカーゼ依存的な増幅またはローリングサークル増幅（ＲＣＡ）である、
請求項１６に記載の方法。
伸長プロセスは、工程（ａ）において形成される複合体を、（ｉ）第２のプローブに対して相補的な内部配列および（ｉｉ）第１のプローブの非オーバーラップ領域に対して相補的な２つの末端配列を含むコネクター配列と接触させることを含み、
必要に応じて、コネクターオリゴヌクレオチドの２つの末端配列をライゲーションして、第１および第２のプローブの両方にハイブリダイズする環状の標的配列を形成させることをさらに含む、
請求項３に記載の方法。
伸長プロセスは、工程（ａ）において形成される複合体を、第１のプローブの第１の領域および第２のプローブにおける第１の領域に対して相補的な第１のコネクタープローブ配列を含む第１のコネクターオリゴヌクレオチド配列、および第１のプローブの第２の非オーバーラップ領域および第２のプローブの第２の非オーバーラップ領域に対して相補的な第２のプローブ配列を含む第２のコネクターオリゴヌクレオチドと接触させることを含み、
必要に応じて、第１および第２のコネクターオリゴヌクレオチドをライゲーションして、第１および第２のプローブの両方にハイブリダイズする環状の標的配列を形成させることをさらに含む、
請求項３に記載の方法。
表面は電極を含み、測定工程は電位波形を電極に適用して、エレクトロケミルミネッセンスシグナルを生成することをさらに含み、
必要に応じて、粒子を電極上で採取することおよび電位波形を電極に適用して、エレクトロケミルミネッセンスシグナルを生成することをさらに含む、
請求項３に記載の方法。
測定工程は伸長配列を検出可能な標識を有する検出プローブに結合させること、検出可能な標識を測定すること、および測定値を試料中の分析物の量と相関させることをさらに含み、検出プローブは伸長配列の領域に対して相補的である核酸配列を含み、
必要に応じて、検出可能な標識は、光散乱、光学的な吸光度、蛍光、化学発光、エレクトロケミルミネッセンス、バイオルミネセンス、リン光、放射能、磁場、またはその組み合わせの測定によって測定される、または、検出可能な標識はＥＣＬ標識であり、測定工程はＥＣＬシグナルを測定することを含む、
請求項３に記載の方法。
表面は粒子を含む、または、
表面は複数の別個の結合ドメインを含み、捕捉試薬およびアンカー試薬は表面上の２つの別個の結合ドメインに位置する、または、
表面は複数の別個の結合ドメインを含み、捕捉試薬およびアンカー試薬は表面上の同じ結合ドメインに位置する、
請求項１に記載のキット、または請求項３に記載の方法。
表面はマルチウェルプレートのウェルを含み、
必要に応じて、ウェルは複数の別個の結合ドメインを含み、捕捉試薬およびアンカー試薬はウェル内に２つの別個の結合ドメインに位置する、または、
ウェルは複数の別個の結合ドメインを含み、捕捉試薬およびアンカー試薬はウェル内の同じ結合ドメインに位置する、
請求項１に記載のキット、または請求項３に記載の方法。
捕捉試薬およびアンカー試薬は表面上で１０〜１００ｎｍ内にある、請求項１に記載のキット、または請求項３に記載の方法。
表面は電極を含む、請求項１に記載のキット。