JP2006129866A5 - - Google Patents

Claims (12)

1. 試料中の被検物質を検出する方法であって、
   第１固相に固定され且つ一本鎖部分を有する第１核酸プローブと、該第１核酸プローブの該一本鎖部分にハイブリダイズ可能な塩基配列の相補塩基配列部及び被検物質を特異的に捕捉できる認識結合部を含む核酸リガンドと、前記被検物質と、該被検物質に結合可能な標識物質と、からなる第１複合体を形成させる工程；
   第１複合体から、前記核酸リガンドと前記標識物質と前記被検物質とが結合した第２複合体を、鎖置換型ＤＮＡポリメラーゼと、ｄＡＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰ及びｄＣＴＰからなる群より選択される少なくとも１種のデオキシヌクレオチドとの存在下で、前記第１核酸プローブを鋳型とする伸長反応により解離させる工程；及び
   解離された第２複合体の標識物質に基づいて被検物質を検出する工程
   を含む核酸プローブを用いる被検物質の検出方法。
2. 検出工程が、解離された第２複合体と、第２固相に固定され且つ前記核酸リガンドの相補塩基配列部にハイブリダイズ可能な一本鎖を有する第２核酸プローブとからなる第３複合体を形成し、第３複合体の標識物質に基づいて被検物質を検出する、請求項１に記載の検出方法。
3. 前記第１複合体形成工程は、
   第１核酸プローブと核酸リガンドを接触させ、第１核酸プローブ−核酸リガンド複合体を形成させた後に、第１核酸プローブ−核酸リガンド複合体に、被検物質及び標識物質を結合させることにより行なわれる請求項１又は２に記載の検出方法。
4. 前記第１複合体形成工程は、
   核酸リガンドと、被検物質と、標識物質を接触させ、第２複合体を形成させた後に、前記第１核酸プローブに、第２複合体を結合させることにより行なわれる請求項１又は２に記載の検出方法。
5. 前記認識結合部は、被検物質と結合できるアプタマー、抗体、及び受容体からなる群より選ばれる１種である請求項１〜４のいずれかに記載の測定方法。
6. 前記相補塩基配列部はＤＮＡ又はＲＮＡで構成され、
   前記認識結合部は、前記相補塩基配列部の３’末端に結合している請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
7. 前記標識物質は、
   前記被検物質に結合可能な第２認識結合部と、
   放射性同位元素、酵素、蛍光物質、及び発光物質からなる群より選択される少なくとも１種とを有する請求項１〜６のいずれかに記載の検出方法。
8. 前記標識物質は、
   前記被検物質に結合可能な第１物質と、
   前記第１物質に結合可能であり、放射性同位元素、酵素、蛍光物質、及び発光物質からなる群より選択される少なくとも１種を有する第２物質とからなる請求項１〜７のいずれかに記載の検出方法。
9. 試料から被検物質を採取する方法であって、
   固相に固定され且つ一本鎖部分を有する第１核酸プローブと、該第１核酸プローブの該一本鎖部分にハイブリダイズ可能な塩基配列の相補塩基配列部及び被検物質を特異的に捕捉できる認識結合部を含む核酸リガンドと、前記被検物質とを結合させて、被検物質−核酸リガンド−第１核酸プローブ複合体を形成させる工程；
   前記被検物質−核酸リガンド−第１核酸プローブ複合体から、被検物質−核酸リガンド複合体を解離させる工程；及び
   解離された被検物質−核酸リガンド複合体を採取する工程；
   を含む被検物質の採取方法。
10. 試料中の被検物質を検出するために用いられる試薬キットであって、
    一本鎖部分を有する第１核酸プローブを固定化した第１固相；
    前記第１核酸プローブの一本鎖部分にハイブリダイズ可能な相補塩基配列部と、前記被検物質に結合可能な認識結合部とを有する核酸リガンド；
    前記被検物質に結合可能な標識物質；
    鎖置換型ＤＮＡポリメラーゼ；及び
    ｄＡＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰ及びｄＣＴＰからなる群より選択される少なくとも１種のデオキシヌクレオチド；
    を含む被検物質検出用試薬キット。
11. さらに、前記第１固相を洗浄するための洗浄液を含む請求項１０に記載の試薬キット。
12. 前記核酸リガンドの認識結合部にハイブリダイズ可能な一本鎖部分を有する第２核酸プローブを固定化した第２固相を、さらに含む請求項１０又は１１に記載の試薬キット。