JP2016505722A - ヒアルロナンの疎水化誘導体をベースとする繊維，その調製及び使用方法，それをベースとする織物，並びにその使用 - Google Patents

ヒアルロナンの疎水化誘導体をベースとする繊維，その調製及び使用方法，それをベースとする織物，並びにその使用 Download PDF

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Abstract

本発明は，ヒアルロナンの疎水性誘導体，特にヒアルロン酸のヒドロキシル基上でＣ１１‐Ｃ１８‐アシル化されたヒアルロナン誘導体をベースとする生分解性繊維，及びその使用に関する。更に本発明は，有機酸の水溶液を含む凝固槽中での湿式紡糸法を利用して行うこれらの繊維の調製，及び，その後に糸，更に織物，編地，又は不織布へと加工できる連続単繊条の製造に関する。これらの織物，編地，又は不織布はヒト医学及び獣医学用の移植可能な外科材料を製造する為の実例に使用可能である。【選択図】図１

Description

本発明はヒアルロナンの疎水性誘導体をベースとする生分解性繊維の調製に関する。繊維の調製は湿式紡糸法を利用して行い，その後，連続的な単繊条の製造品は糸，更には織物，編地又は不織布へと加工可能である。得られた繊維の加工性（強度，伸長性）は優れている。これらの繊維の応用は医療，特に外科用材料分野，組織工学及び徐放性薬物システムを対象としている。
ヒアルロナンはβ‐１，３グリコシド結合を介してＮ‐アセチル‐グルコサミンと結合したグルクロン酸から形成される繰り返し二糖単位から成る直鎖状の多糖である。二糖サブユニットはβ‐１，４‐結合を介して次々に連結する。それは生体内で，特に細胞外マトリックス（ＥＭＳ）を組織化する役割を担う場所で自然に発生する物質に関連している。更に，細胞受容体との相互作用のおかげで，ヒアルロナンは該受容体がＥＭＳに結合することを可能にするだけでなく，この細胞相互作用を介して特定の方法で該受容体を制御することを可能にする。更に，その組成のおかげで，ヒアルロナンは相当量の水と結合し，よって組織を水和化し，従って特定の細胞に栄養や酸素を移送するだけでなく細胞間調節因子の移送をも可能にする［１］。連鎖球菌発酵を利用し，事実上制限のない量で非常に高い純度のヒアルロナンを合成できるというところも非常に有利である［２］。
ヒアルロナンは生体に本来存在する物質であり，更に，免疫原性，催奇形性，又は毒性はなく，特異的な細胞受容体と相互作用し，組織を強く水和化し，関節又は眼球上の瞼運動を円滑にする。このことにより，ヒアルロナンは多くの医薬用途に処方されている［３〜５］。興味深い利用形態としては体外又は体内で使用する為の多様な織物製品，織物，編地又は不織布となるものもある。
しかしこの為には，その表面に結合するか，或いはその構造内に生物学的活性物質を運ぶことが可能な繊維，並びに織物加工が可能な物理的及び化学的特性を有する繊維が必要である。近年，ヒアルロン酸カリウム（Rupprecht［６］）又はヒアルロン酸カルシウム（Sheehan［７］）から繊維及びフィルムを製造する為に湿式紡糸を利用する記述が文献において見られる。この場合，紡糸は０．１MのＫＣｌ又は個々のカルシウム塩を含むエタノール溶液中で行う。調製された繊維は水中に，また湿度環境にもよく溶解し，崩壊する一方で，数十秒以内にその形態及び機械的特性の両方が失われる。上述の特性は基本的に天然ヒアルロナンを適用できる可能性を制限している。これまで，ヒアルロナンから調製した天然繊維を使用している調剤は市販されていなかった。
天然ヒアルロナン由来の繊維の調製は，特許WO2009/050389により保護されている。繊維は濃酢酸（８０〜９０%）槽中の沈殿により得られる。その後，繊維を乾燥させ，伸長させる。天然ヒアルロナンからの調製に関しては，その繊維は水によく溶解する。著者らは，植物又は動物起源の疎水性物質を使用して繊維表面を処理することにより溶解性が限定的になり得ると述べている。これに対して，疎水化ヒアルロナンから本発明者らが調製した繊維は調製直後は不溶であるので，後に他の薬剤を添加して表面を処理する必要がなく，従って，この工程は技術的及び経済的両方の観点から，かなり簡単になっている。
特許出願PV2010‐1001では，ヒアルロン酸から繊維を調製する為に１〜９９重量%の濃度の酸も使用するが，繊維の強度を高める為に酸は１〜９９%アルコールと混合する。また，リン酸と金属被覆槽の使用も特許請求されている。凝固にはメタノール，エタノール，１‐プロパノール又は２‐プロパノールと混合したギ酸，酢酸，プロピオン酸が好ましい。これらの繊維も，本発明者らが使用した疎水化ＨＡと比べて溶解性が高い。同様の記述が特許出願US2011/0263724A1にある。
上述した天然ヒアルロナンの溶解性は，ヒアルロナンをベースとする適当な化学修飾誘導体の使用により解消できる。
特許EP216453A2では，著者らは湿式紡糸を利用したエタノール＋ＤＭＳＯ槽中でヒアルロン酸エステルを紡糸した。より具体的には，エチルエステル（HYAFF7）及びベンジルエステル（HYAFF11）に関連している。カルボキシル基をエステル化し，そのエステル化はグルクロン酸のカルボキシル基に活性化アルキルを結合させることによって進行するものであり，これは現在の知識［８］によれば，ヒアルロン酸と細胞受容体（CD44）との特異的な結合の為に重要である。
これに対して，本特許出願の範囲内で本発明者らが由来とする誘導体はヒドロキシル基上でのみ修飾され，従ってカルボキシル基の生物学的特性は天然ヒアルロナンの場合と同様に完全に維持される。
上記特許で使用された槽を用いた連続単繊条の製造に必要となる機械的特性を得ることが不可能であることから，特許の著者らは不織布の製造にのみそれを使用している。
また，Fidia Advanced Biopolymers社の他の特許でも，ヒアルロン酸エステルからの繊維及び不織布の製造を取り上げている；これらの特許は以下の通りである：WO93/11803，WO98/08876，US5658582，US006632802B2，US2004/0192643A1。これら全ての特許において繊維の製造は同じである。初めに，ヒアルロン酸エステルをＤＭＳＯに溶解し，その後，無水エタノール中で凝固させる。繊維の長さは５〜１００mmの範囲である。本明細書の実施例２０でも説明しているように，繊維が相当に脆弱であれば繊維は短くなるが；その脆弱性は使用する凝固槽，無水エタノールに起因している。従って，その著者らは，技術的工程により，特に選択した凝固槽により連続繊維を製造することができないことから，不織布のみを特許請求している。本特許出願の場合，完成とは，モノフィラメントの均質な分布や高い引張特性及び柔軟性が期待できる連続繊維の調製，及び通常の構造（織物，編地）を有する織物形態への加工である。
ヒアルロナン誘導体が最大含有量１０重量%の非主要成分である混合繊維も特許に保護されている。紡糸材料のその他の成分は他の多糖，例えばジェランから成る（特許出願WO2007/006403）。この著者らは彼らの技術工程では支持ポリマーとしてヒアルロナンを紡糸できず；従って彼らは，より支持力の高い別のポリマーに比して少ない量でヒアルロナンを繊維に添加している。
WO2007/009728A2では，同様の状況が記載されている；著者らはヒアルロン酸誘導体と共にカルボキシメチルセルロースを紡糸している。その成分をＤＭＳＯに溶解し，エタノール中の塩化亜鉛又はエタノール中の臭化亜鉛の凝固槽で紡糸した。著者らは繊維に残留した亜鉛の量については記述していない。しかし，重金属である亜鉛は含有量が高いと毒性がある。このことは実施例６で調製された繊維，及び添付の生存率の図表No.５により明らかになっている。
特許出願US2011/0237539A1は多糖ベースの止血用繊維の製造を特許請求している。この著者らは材料：アルギン酸塩，キトサン，ヒアルロン酸及びゼラチンの混合物を報告している。著者らはヒアルロン酸及びキトサンの混合物用の凝固槽として水酸化ナトリウム，メタノール及び水の懸濁液を特許請求している。ゼラチン及びキトサンの混合物用にも水酸化ナトリウム，メタノール及び水の同様の槽を特許請求している。ヒアルロン酸及びアルギン酸塩の混合物の紡糸用には塩化カルシウム，エタノール及び水の懸濁液を特許請求している。しかし，彼らは成分の１つとしてヒアルロン酸も使用しているだけであり，よってこのヒアルロン酸は製造された繊維の支持ポリマーであるとは考えられない。
ヒアルロナンエステルから調製した繊維の用途に関しては，短繊維，特に不織布（US5658582）が特許取得されており，短繊維はガーゼ，裁縫材料，ネット及び不織布の調製（WO98/08876，US006632802B2），或いは包帯材料の調製（WO2007/003905）にも使用されている。特許出願US2004/0192643A1もまた術後癒着を防ぐ為のHYAFF7及びHYAFF11材料の前臨床及び臨床研究の結果を報告している。材料はガーゼ及び不織布の形態で試験されている。
発明の概要
天然ヒアルロナンから調製した繊維の即時溶解性など，当技術水準に起因する欠陥は，疎水化ヒアルロナンを使用して本発明により解決される。ヒアルロナンはＮ‐アセチル‐グルコサミンの第１級アルコールで修飾されることが好ましいが，グルクロン酸の第２級アルコールでもアシル化が起こり得る。好ましくはＣ１１‐Ｃ１８の鎖長を有する脂肪酸の無水物はアシル化剤として働く。紡糸に有用な誘導体の置換度は以下の通りである：
好ましくは３０%以上のＣ１１‐Ｃ１２誘導体，
好ましくは２０%以上のＣ１３‐Ｃ１５誘導体，
好ましくは５%以上のＣ１６‐Ｃ１８誘導体。
本発明によると，ヒアルロン酸のヒドロキシル基上でＣ１１‐Ｃ１８‐アシル化，好ましくはＮ‐アセチル‐グルコサミンの第１級アルコールでアシル化されたヒアルロナンをベースとする繊維の調製方法は，該繊維は水及び２‐プロパノールの混合液中，０．０１〜１５重量%の濃度範囲であるヒアルロナンのアシル化誘導体を含む紡糸用溶液で調製され，ここでは水分は３０〜９０体積%の範囲であり，２‐プロパノールの含有量は１０〜７０体積%であり，その後，紡糸用溶液を，乳酸，酒石酸，クエン酸，リンゴ酸，アスコルビン酸，シュウ酸又はこれらの組み合わせから成る群より選択される有機酸又はそのアルカリ金属若しくはアルカリ土類金属の塩を含む凝固槽に入れ，繊維を形成することにより達成される。次いで，繊維をアルコール，例えばエタノール，１‐プロパノール又は２ロパノールで洗浄し，乾燥させる。最終的に，前記繊維は乾燥後に伸長される。前記凝固槽中の有機酸の水溶液の濃度は，乳酸では０．５〜３０重量%，酒石酸では０．０１〜５７重量%，クエン酸では０．５〜４２重量%，リンゴ酸では０．５〜５０重量%，アスコルビン酸では０．５〜２５重量%，シュウ酸では０．５〜６０重量%である。好ましくは，前記凝固槽は有機酸の飽和水溶液を含む。１つの好ましい実施態様では，前記凝固槽は乳酸の飽和水溶液を含む。好ましくは，前記紡糸用溶液は凝固槽に入る前に脱気される。前記凝固槽の温度は１５〜４５℃の範囲であり，凝固槽中に繊維を保持する時間は１０秒〜２４時間の範囲である。
更に，本発明は，ヒアルロン酸のヒドロキシル基上でＣ１１‐Ｃ１８‐アシル化されたヒアルロナン誘導体をベースとする繊維に関し，該繊維は直径が５０〜３００μmであり，張力が０．３〜１cN/dtexの範囲であり，伸長度が１０〜４０%の範囲である。この繊維は編地，織布又は不織布を製造する為に使用され得る。本発明の繊維から製造された織物は，例えばヒト医学及び獣医学用の移植可能な外科材料を製造する為に使用され得る。
重要なことは，EP216453A2，WO93/11803，WO98/08876，US5658582，US006632802B2，US2004/0192643A1と比較して，生物学的特性を担うヒアルロン酸に存在する全てのカルボキシル基が維持されているということである。
更に，ヒトの健康や環境に害の少ない新規かつ効果的な沈殿槽が使用される。この槽はPV2010‐1001で使用される槽と比較して非毒性，非爆発性，不燃性の溶液に関連している。
Figure 2016505722
疎水化ヒアルロナン由来の繊維は天然ヒアルロナン由来の繊維と比較して，織物加工する為の特性が大幅に優れており；これは主に向上された伸張性に起因する。この実施態様では，これ以上繊維は切断されることはなく，数百メートル又は数キロメートル長の繊維を製造することが可能であり，一方，繊維は機織，編物等の一般的な織物手法により操作機で更に加工することが可能である。
伸張性は繊維加工に非常に重要である。機織の際，縦糸及び横糸に動的応力が発生し，このときに目こぼれが形成され，横糸推進力が掛かる。編織の際，ボビンの引き戻し及びループの引きつりがある場合に，糸の動的応力が発生する［学習テキスト，Technical University of Liberec］。繊維の伸張性の数値は主に使用の誘導体から求められ，張力が良好である場合の特性はその化学構造に起因する［Rogovin Z.A.Chemie a technologie umelych vlaken，１９５６年］。
沈殿槽としての本請求の有機酸の使用は，特許出願PV2010‐1001における上記の固体の酸（ギ酸，酢酸，プロピオン酸）と比較して明らかに自明という訳ではない。水又はアルコール中でのみ繊維を調製する試みは成功に至らなかった。従って，得られた繊維を操作可能な織物機で加工することができるように，繊維の強度及び伸張性に最も有用な混合物を経験的に見出すことが必要であった。
不明瞭性の別の例としては，沈殿槽用の乳酸の使用が挙げられる。乳酸は一般的に８０%水溶液として利用可能であり，この溶液は非常に粘性があり；従って繊維をこの溶液中に沈殿させることは不可能である。
実験的に，この濃縮組成は以下の濃度が最適であることが判明した：
乳酸 ― 好ましくは０．５%〜３０%水溶液
酒石酸 ― 好ましくは０．０１%〜飽和溶液（５７%）
クエン酸 ― 好ましくは０．５%〜飽和溶液（４２%）
リンゴ酸 ― 好ましくは０．５%〜５０%
アスコルビン酸 ― 好ましくは０．５%〜飽和溶液（２５%）
或いはこれらの任意の組み合わせ。
驚くべきことに，強めの酸（ギ酸，クエン酸，乳酸，リンゴ酸，酒石酸）を使用すると，酸の強度がヒアルロン酸誘導体の分子量の減少に影響を及ぼすことが予想できた（サッカリドの酸加水分解）。分子量の減少により繊維強度が低下する［Hladik V.,Textilni vlakna，１９７０年］。しかし，ギ酸又はギ酸とアルコールとの混合物の水溶液を使用した場合，製造される疎水化ＨＡ由来繊維は次の操作の為の巻取ローラーを使用してうまく巻き上げられなかった。繊維は巻き上げようとした際に切断された（増強の必要性）。分子量が減少すると強度が低下する。
しかし，本請求の槽（酒石酸，クエン酸，乳酸，リンゴ酸，アスコルビン酸）を使用すれば強度は低下しない。様々な槽を使用して調製した繊維のＳＥＣ‐ＭＡＬＬＳによる測定結果から，クエン酸，乳酸，リンゴ酸，酒石酸の使用により調製した繊維のＭｗは減少するが繊維の特性は維持されることが分かる。
Figure 2016505722
従って，本発明の要旨は，上記の槽と組み合わせたヒアルロナンの上記疎水化誘導体の使用にあり，その為，これらの繊維は，伸張性が促進された不溶性で生分解性の連続繊維の形態で新たに向上された特性を示す。この為，これらの繊維は機織，編織などの従来の織物技術で加工できる。加工は天然ＨＡ又はＨＡ誘導体由来の繊維にはこれまで使用できなかった従来の操作器具で行うことが可能になっている（実施例２９）。特許出願PV2010‐1001では手製の織物しか報告されていない。しかし，織機で加工された繊維では強度，特に伸張性が非常に求められている。
生物の分解性に関し，パルミトイルヒアルロナンが最も重要な開始ヒアルロナン誘導体であると思われる。パルミチン酸は動物（体）脂肪の一部である。パルミタン（palmitane）鎖は通常，体内でβ酸化により分解される。
繊維は湿式紡糸法を利用して調製する。これら繊維の調製用の凝固槽は特異的であり，以下の成分から成る：
‐ 有機酸の水溶液，
‐ 有機酸塩の水溶液
‐ 又はこれらの任意の組み合わせ。
繊維調製用溶液の濃度は０．０１%から飽和溶液の範囲である。
沈殿槽から製造した繊維は低級アルコール（エタノール，１‐プロパノール，２‐プロパノール）で更に洗浄し，延伸可能であることが好ましい。使用した紡糸パラメータ（紡糸ノズル，押出速度，巻取速度及び延伸速度）に従えば，製造した繊維の直径は５０〜３００μmであり，それらは連続フィラメントとして製造され，更に，織物技術による機械加工に適したツイストケーブルの形態になるように撚糸される。繊維は水不溶性であり，膨張のみ起こる。繊維には細胞毒性は無く，酵素により分解可能である。強度も張力も撚糸などの繊維の更なる加工に，或いは編地，織布又は不織布の調製に適している。
実施例１２に従って調製した単繊条を示し，その単繊条は走査電子顕微鏡を使用して撮像している。 繊維の製造に使用した誘導体の，細胞生存率に対する影響を示す図表である。具体的には，実施例１に従って調製したパルミトイルヒアルロナン誘導体の，生存率に対する影響の試験結果を示す。図表では，細胞生存率（時間０での対照の割合）対時間（h）をプロットしている。 繊維の製造に使用した誘導体の，細胞生存率に対する影響を示す図表である。具体的には，実施例４に従って調製したパルミトイルヒアルロナン誘導体の，生存率に対する影響の試験結果を示す。図表では，細胞生存率（時間０での対照の割合）対時間（h）をプロットしている。 様々な沈殿槽から製造した繊維の，細胞生存率に対する影響の結果を示す図表である。具体的には，実施例３に従って調製した（沈殿槽はクエン酸の水溶液）繊維の，細胞生存率に対する影響の結果を示す。 様々な沈殿槽から製造した繊維の，細胞生存率に対する影響の結果を示す図表である。具体的には，実施例１２に従って調製した（沈殿槽は乳酸の水溶液）繊維の，細胞生存率に対する影響の結果を示す。 様々な沈殿槽から製造した繊維の，細胞生存率に対する影響の結果を示す図表である。具体的には，実施例８に従って調製した（沈殿槽は酒石酸の水溶液）繊維の，細胞生存率に対する影響の結果を示す。 様々な沈殿槽から製造した繊維の，細胞生存率に対する影響の結果を示す図表である。具体的には，実施例１１に従って調製した（沈殿槽はリンゴ酸の水溶液）繊維の，細胞生存率に対する影響の結果を示す。 繊維分解生成物の，細胞生存率に対する影響を示す図表である。 パルミトイルヒアルロナンから得た糸を示す。左側の糸は２本の単繊条から作成したものであり，右側の糸は３本の単繊条から作成したものである。 疎水性ヒアルロナン由来繊維が一面横編地へと加工される過程の例を示す（白地部分）。 疎水性ヒアルロナン由来繊維が二本横編地へと加工される過程の例を示す。 疎水性ヒアルロナン由来繊維が筒状生地へと加工される過程の例を示す。
Watt Technologies製のminiDAWN光散乱検出器を備えるShimadzu製のＨＰＬＣにより分子量を測定した（いわゆるＳＥＣ‐ＭＡＬＬＳ法）。特段の記述がない限り，前記分子量は重量平均である。
置換度の特定及び測定はＮＭＲにより行った。置換度（ＤＳ）は適当な置換基のシグナル（すなわちＣ１６アシル）及びＣＨ３‐ＧｌｃＮのシグナルの積分から，２．０ppmで計算した。置換度１００%とは１つの置換基が１つのヒアルロナン二量体単位に結合していることに相当する。誘導体のＮＭＲスペクトルは，Ｄ２Ｏ／２‐プロパノール‐ｄ８の混合液（比率４：１）中，Ｄ２ＯでBRUKER AVANCE 500（５００MHz）により測定した。化学シフトは重水素化した３‐トリメチルシリルプロパン酸（ＴＳＰＡ）を内部標準にして較正した。次のスペクトルを測定した：１Ｈ ＮＭＲ，１３Ｃ ＮＭＲ，ＨＨ ＣＯＳＹ，ＨＳＱＣ及びＤＯＳＹ‐ＮＭＲ。実験データの処理にはBruker製のソフトウエアTOPSPIN1.2及びソフトウエアSpinWorks3.1を使用した。
アシル化誘導体（パルミトイルヒアルロナン，ステアロイルヒアルロナン）を実施例１と同様の方法で調製した。置換度は使用当量に依存し，その範囲は以下の通りである：
Figure 2016505722
ウンデカノイルヒアルロナンのアシル化誘導体は，実施例２と同様の方法で調製した。
ウォルフラム陰極を備えたTescan VEGA II LSU機を使用し，最大解像度３nmで走査電子顕微鏡からの画像を作成した。初期ビームの加速電圧は５kVであり，ワーク距離３＝４mmであり，画像は高真空状態で作成した。
実施例１
ヒアルロナンナトリウム（ＨＡ‐Ｎａ，１５g；２５０kDa）を３００mlの蒸留水に溶解し，完全に溶解させた後，溶液に３００mlのテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）を添加した。その後，トリエチルアミン（ＴＥＡ）（２．５eq），ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（０．０４eq）及び無水パルミチン酸（ＨＤＡ）（２eq）を溶液に添加した。この溶液を室温で２時間，その後４５℃（溶液温度）で０．５時間撹拌した。次いで５eqのＮａＣｌ（ＨＡ‐Ｎａベース）を含む蒸留水３００ml，及び反応フラスコ洗浄用蒸留水３００mlを同質の溶液に添加した。該溶液を撹拌した後，１００%の２‐プロパノール９００mlで沈殿させ，１００%の２‐プロパノール（５００ml）で１回洗浄し，８０%の２‐プロパノール（５００ml）で４回洗浄し，１００%の２‐プロパノール（５００ml）で２回洗浄した。湿った誘導体を乾燥オーブン中，４０℃で４８時間乾燥させた。それにより調製されたパルミトイルヒアルロナンの誘導体の置換度は３６%（ＮＭＲにて測定），Ｍｗは２５０kDaであった。
実施例２
５．０gのヒアルロナンナトリウム（１２．５mmol；２５０kDa）を１００mlの蒸留水に溶解した。次に７０mlのＴＨＦを添加した。その後，ＴＥＡ（７．０ml；４eq）及びＤＭＡＰ（１５３．０mg；０．１eq）を溶液に添加した。同時に，ウンデカン酸（９．３g；４eq）を３０mlのＴＨＦに溶解した後，ＴＥＡ（７．０ml；４eq）及びクロロギ酸エチル（４．７６ml，４eq）を溶液に添加した。酸を０〜５℃で１５分間活性化させた。酸の活性化後，沈殿物，すなわちウンデカン酸とクロロギ酸エチルとの混合無水物を濾過し，ＨＡの調製溶液に入れた。反応は室温で５時間行った。その後，反応混合液を４．０gのＮａＣｌを含む５０mlの水で希釈した。４倍の無水２‐プロパノールを用い，沈殿によりアシル化誘導体を反応混合液から単離した。デカンテーションの後，初めに２‐プロパノール（８０体積%）水溶液で，その後，無水２‐プロパノールで沈殿物を繰り返し洗浄した。次いで，沈殿物を４０℃で４８時間乾燥させた。置換度は３７%と測定された（ＮＭＲにて測定）。
実施例３
置換度３６%でＭｗが２５０kDaである分量１gのパルミトイルヒアルロナンを，１０mlの脱塩水と１０mlの２‐プロパノールとの混合液に溶解した。得られた５．３%溶液を遠心分離にて脱気し，押出速度２００μl・min-1でNEXUS6000チャージャを使用して凝固槽に入れた。凝固槽には室温のクエン酸の飽和水溶液が入っていた。繊維を長さ０．４mの槽に１．２m・min-1の速度で通し，巻取ローラー一式を使用して円錐状にしながら巻き取った。ローラーの一部は１００%の２‐プロパノールに浸漬しており，ここで繊維を約１時間洗浄した。
実施例４
置換度１５%でＭｗが２５０kDaである分量１．３gのパルミトイルヒアルロナンを，１０mlの脱塩水と１０mlの２‐プロパノールとの混合液に溶解した。得られた６．８%溶液を遠心分離にて脱気し，押出速度２００μl・min-1でNEXUS6000チャージャを使用して凝固槽に入れた。凝固槽には室温のクエン酸の飽和水溶液が入っていた。繊維を長さ０．４ｍの槽に１．２m・min-1の速度で通し，巻取ローラー一式を使用して円錐状にしながら巻き取った。ローラーの一部は１００%の２‐プロパノールに浸漬しており，ここで繊維を約１時間洗浄した。
実施例５
置換度４６%でＭｗが２５０kDaである分量１．３２gのパルミトイルヒアルロナンを，１１mlの脱塩水と１１mlの２‐プロパノールとの混合液に溶解した。得られた６．３%溶液を遠心分離にて脱気し，押出速度２００μl・min-1でNEXUS6000チャージャを使用して凝固槽に入れた。凝固槽には室温のクエン酸の飽和水溶液が入っていた。繊維を長さ０．４mの槽に１．２m・min-1の速度で通し，巻取ローラー一式を使用して円錐状にしながら巻き取った。ローラーの一部は１００%の２‐プロパノールに浸漬しており，ここで繊維を約１時間洗浄した。
実施例６
置換度３５%でＭｗが１３０kDaである分量０．９５gのステアロイルヒアルロナンを，１０mlの脱塩水と１０mlの２‐プロパノールとの混合液に溶解した。得られた５%溶液を遠心分離にて脱気し，押出速度２００μl・min-1でNEXUS6000チャージャを使用して凝固槽に入れた。凝固槽には室温のクエン酸の飽和水溶液が入っていた。繊維を長さ０．４mの槽に１．２m・min-1の速度で通し，巻取ローラー一式を使用して円錐状にしながら巻き取った。ローラーの一部は１００%の２‐プロパノールに浸漬しており，ここで繊維を約１時間洗浄した。
実施例７
置換度３７%でＭｗが２５０kDaである分量０．５gのウンデカノイルヒアルロナンを，１０mlの脱塩水と１０mlの２‐プロパノールとの混合液に溶解した。得られた２．７%溶液を遠心分離にて脱気し，押出速度２００μl・min-1でNEXUS6000チャージャを使用して凝固槽に入れた。凝固槽には室温のクエン酸の飽和水溶液が入っていた。繊維を長さ０．４mの槽に１．２m・min-1の速度で通し，巻取ローラー一式を使用して円錐状にしながら巻き取った。ローラーの一部は１００%の２‐プロパノールに浸漬しており，ここで繊維を約１時間洗浄した。
実施例８
置換度４６%でＭｗが２５０kDaである分量１．３２gのパルミトイルヒアルロナンを，１１mlの脱塩水と１１mlの２‐プロパノールとの混合液に溶解した。得られた６．３%溶液を遠心分離にて脱気し，押出速度２００μl・min-1でNEXUS6000チャージャを使用して凝固槽に入れた。凝固槽には室温の酒石酸の飽和水溶液が入っていた。繊維を長さ０．４mの槽に１．２m・min-1の速度で通し，巻取ローラー一式を使用して円錐状にしながら巻き取った。ローラーの一部は１００%の２‐プロパノールに浸漬しており，ここで繊維を約１時間洗浄した。
実施例９
置換度５２%でＭｗが２５０kDaである分量１．１gのパルミトイルヒアルロナンを，１０mlの脱塩水と１０mlの２‐プロパノールとの混合液に溶解した。得られた５．７%溶液を遠心分離にて脱気し，押出速度２００μl・min-1でNEXUS6000チャージャを使用して凝固槽に入れた。凝固槽には室温のクエン酸の飽和水溶液が入っていた。繊維を長さ０．４mの槽に１．２m・min-1の速度で通し，巻取ローラー一式を使用して円錐状にしながら巻き取った。ローラーの一部は１００%の２‐プロパノールに浸漬しており，ここで繊維を約１時間洗浄した。
実施例１０
置換度４６%でＭｗが２５０kDaである分量１．３２gのパルミトイルヒアルロナンを，１１mlの脱塩水と１１mlの２‐プロパノールとの混合液に溶解した。得られた６．３%溶液を遠心分離にて脱気し，押出速度２００μl・min-1でNEXUS6000チャージャを使用して凝固槽に入れた。凝固槽には室温のアスコルビン酸の飽和水溶液が入っていた。繊維を長さ０．４mの槽に１．２m・min-1の速度で通し，巻取ローラー一式を使用して円錐状にしながら巻き取った。ローラーの一部は１００%の２‐プロパノールに浸漬しており，ここで繊維を約１時間洗浄した。
実施例１１
置換度４６%でＭｗが２５０kDaである分量１．３２gのパルミトイルヒアルロナンを，１１mlの脱塩水と１１mlの２‐プロパノールとの混合液に溶解した。得られた６．３%溶液を遠心分離にて脱気し，押出速度２００μl・min-1でNEXUS6000チャージャを使用して凝固槽に入れた。凝固槽には室温のリンゴ酸の飽和水溶液が入っていた。繊維を長さ０．４mの槽に１．２m・min-1の速度で通し，巻取ローラー一式を使用して円錐状にしながら巻き取った。ローラーの一部は１００%の２‐プロパノールに浸漬しており，ここで繊維を約１時間洗浄した。
実施例１２
置換度４６%でＭｗが２５０kDaである分量１．３２gのパルミトイルヒアルロナンを，１１mlの脱塩水と１１mlの２‐プロパノールとの混合液に溶解した。得られた６．３%溶液を遠心分離にて脱気し，押出速度２００μl・min-1でNEXUS6000チャージャを使用して凝固槽に入れた。凝固槽には室温の乳酸の２０%水溶液が入っていた。繊維を長さ０．４mの槽に１．２m・min-1の速度で通し，巻取ローラー一式を使用して円錐状にしながら巻き取った。ローラーの一部は１００%の２‐プロパノールに浸漬しており，ここで繊維を約１時間洗浄した。
実施例１３
置換度４６%でＭｗが２５０kDaである分量１．３２gのパルミトイルヒアルロナンを，１１mlの脱塩水と１１mlの２‐プロパノールとの混合液に溶解した。得られた６．３%溶液を遠心分離にて脱気し，押出速度２００μl・min-1でNEXUS6000チャージャを使用して凝固槽に入れた。凝固槽には室温の乳酸の２０%水溶液が入っていた。繊維を長さ０．４mの槽に１．２m・min-1の速度で通し，巻取ローラー一式を使用して円錐状にしながら巻き取った。ローラーの一部は１００%の２‐プロパノールに浸漬しており，ここで繊維を約１時間洗浄した。最後のローラーの速度を，最後から１つ手前のローラーと比べて１．４m・min-1まで高め，そうすることで繊維が約２０%延伸された。
実施例１４
置換度４６%でＭｗが２５０kDaである分量１．３２gのパルミトイルヒアルロナンを，１１mlの脱塩水と１１mlの２‐プロパノールとの混合液に溶解した。得られた６．３%溶液を遠心分離にて脱気し，押出速度２００μl・min-1でNEXUS6000チャージャを使用して凝固槽に入れた。凝固槽には室温のシュウ酸の５０%水溶液が入っていた。繊維を長さ０．４mの槽に１．２m・min-1の速度で通し，巻取ローラー一式を使用して円錐状にしながら巻き取った。ローラーの一部は１００%の２‐プロパノールに浸漬しており，ここで繊維を約１時間洗浄した。
実施例１５
置換度１５%でＭｗが２５０kDaである分量１．３gのパルミトイルヒアルロナンを，１０mlの脱塩水と１０mlの２‐プロパノールとの混合液に溶解した。得られた６．８%溶液を遠心分離にて脱気し，押出速度２００μl・min-1でNEXUS6000チャージャを使用して凝固槽に入れた。凝固槽には室温の８０重量%の２‐プロパノール，１８重量%の乳酸，２重量%の水から成る乳酸溶液が入っていた。繊維を長さ０．４mの槽に１．２m・min-1の速度で通し，巻取ローラー一式を使用して円錐状にしながら巻き取った。ローラーの一部は１００%の２‐プロパノールに浸漬しており，ここで繊維を約１時間洗浄した。
実施例１６
置換度３５%でＭｗが１３０kDaである分量０．９５gのステアロイルヒアルロナンを，１０mlの脱塩水と１０mlの２‐プロパノールとの混合液に溶解した。得られた５%溶液を遠心分離にて脱気し，押出速度２００μl・min-1でNEXUS6000チャージャを使用して凝固槽に入れた。凝固槽には室温の８０重量%の２‐プロパノール，１８重量%の乳酸，２重量%の水から成る乳酸溶液が入っていた。繊維を長さ０．４mの槽に１．２m・min-1の速度で通し，巻取ローラー一式を使用して円錐状にしながら巻き取った。ローラーの一部は１００%の２‐プロパノールに浸漬しており，ここで繊維を約１時間洗浄した。
実施例１７
置換度３７%でＭｗが２５０kDaである分量０．５gのウンデカノイルヒアルロナンを，１０mlの脱塩水と１０mlの２‐プロパノールとの混合液に溶解した。得られた２．７%溶液を遠心分離にて脱気し，押出速度２００μl・min-1でNEXUS6000チャージャを使用して凝固槽に入れた。凝固槽には室温の８０重量%の２‐プロパノール，１８重量%の乳酸，２重量%の水から成る乳酸溶液が入っていた。繊維を長さ０．４mの槽に１．２m・min-1の速度で通し，巻取ローラー一式を使用して円錐状にしながら巻き取った。ローラーの一部は１００%の２‐プロパノールに浸漬しており，ここで繊維を約１時間洗浄した。
実施例１８
置換度１５%でＭｗが２５０kDaである分量１．３gのパルミトイルヒアルロナンを，１０mlの脱塩水と１０mlの２‐プロパノールとの混合液に溶解した。得られた６．８%溶液を遠心分離にて脱気し，押出速度２００μl・min-1でNEXUS6000チャージャを使用して凝固槽に入れた。凝固槽には室温の３３重量%の安息香酸及び６７重量%の２‐プロパノールから成る溶液が入っていた。繊維を長さ０．４mの槽に１．２m・min-1の速度で通し，巻取ローラー一式を使用して円錐状にしながら巻き取った。ローラーの一部は１００%の２‐プロパノールに浸漬しており，ここで繊維を約１時間洗浄した。
有機酸の塩
実施例１９
置換度３６%でＭｗが２５０kDaである分量１gのパルミトイルヒアルロナンを，１０mlの脱塩水と１０mlの２‐プロパノールとの混合液に溶解した。得られた５．３%溶液を遠心分離にて脱気し，押出速度２００μl・min-1でNEXUS6000チャージャを使用して凝固槽に入れた。凝固槽には室温のクエン酸（三）ナトリウムの飽和水溶液が入っていた。繊維を長さ０．４mの槽に１．２m・min-1の速度で通し，巻取ローラー一式を使用して円錐状にしながら巻き取った。ローラーの一部は１００%の２‐プロパノールに浸漬しており，ここで繊維を約１時間洗浄した。
実施例２０
置換度３６%でＭｗが２５０kDaである分量１gのパルミトイルヒアルロナンを，１０mlの脱塩水と１０mlの２‐プロパノールとの混合液に溶解した。得られた５．３%溶液を遠心分離にて脱気し，押出速度２００μl・min-1でNEXUS6000チャージャを使用して凝固槽に入れた。凝固槽には室温の酢酸マグネシウムの飽和水溶液が入っていた。繊維を長さ０．４mの槽に１．２m・min-1の速度で通し，巻取ローラー一式を使用して円錐状にしながら巻き取った。ローラーの一部は１００%の２‐プロパノールに浸漬しており，ここで繊維を約１時間洗浄した。
実施例２１
置換度３６%でＭｗが２５０kDaである分量１gのパルミトイルヒアルロナンを，１０mlの脱塩水と１０mlの２‐プロパノールとの混合液に溶解した。得られた５．３%溶液を遠心分離にて脱気し，押出速度２００μl・min-1でNEXUS6000チャージャを使用して凝固槽に入れた。凝固槽には室温の酢酸ナトリウの飽和水溶液が入っていた。繊維を長さ０．４mの槽に１．２m・min-1の速度で通し，巻取ローラー一式を使用して円錐状にしながら巻き取った。ローラーの一部は１００%の２‐プロパノールに浸漬しており，ここで繊維を約１時間洗浄した。
比較例２２〜２４
実施例２２
文献WO93/11803，WO98/08876，US5658582，US006632802B2，US2004/0192643A1で使用した槽との比較。
置換度３６%でＭｗが２５０kDaである分量１gのパルミトイルヒアルロナンを，１０mlの脱塩水と１０mlの２‐プロパノールとの混合液に溶解した。得られた５．３%溶液を遠心分離にて脱気し，押出速度２００μl・min-1でNEXUS6000チャージャを使用して凝固槽に入れた。凝固槽には無水エタノール溶液が入っていた。得られた繊維は切断されたことから，巻取ローラー一式を用いて円錐状に巻くことは不可能であった。最大１００mmの長さの１片が得られ，鉗子を用いて取り出した。
実施例２３
文献WO2009/050389，PV2010‐1001で使用した槽との比較。
置換度４６%でＭｗが２５０kDaである分量１．３２gのパルミトイルヒアルロナンを，１１mlの脱塩水と１１mlの２‐プロパノールとの混合液に溶解した。得られた６．３%溶液を遠心分離にて脱気し，押出速度２００μl・min-1でNEXUS6000チャージャを使用して凝固槽に入れた。凝固槽には室温の９８%の酢酸及び１００%の２‐プロパノール（体積比４：１）から成るアルコール溶液が入っていた。繊維を長さ０．４mの槽に１．２m・min-1の速度で通し，巻取ローラー一式を使用して円錐状にしながら巻き取った。ローラーの一部は１００%の２‐プロパノールに浸漬しており，ここで繊維を約１時間洗浄した。
実施例２４
文献PV2010‐1001で使用した槽との比較。
置換度４６%でＭｗが２５０kDaである分量１．３２gのパルミトイルヒアルロナンを，１１mlの脱塩水と１１mlの２‐プロパノールとの混合液に溶解した。得られた６．３%溶液を遠心分離にて脱気し，押出速度２００μl・min-1でNEXUS6000チャージャを使用して凝固槽に入れた。凝固槽は室温の９８%のギ酸及び１００%の２‐プロパノール（体積比４：１）から成るアルコール溶液で形成されていた。繊維を長さ０．４mの槽に１．２m・min-1の速度で通し，巻取ローラー一式を使用して円錐状にした。繊維は円錐状にする際，高頻度に切断され（強度の欠如）；長さ３００mmの断片が得られた。
実施例２５
置換度４６%でＭｗが２５０kDaである分量１．３２gのパルミトイルヒアルロナンを，１１mlの脱塩水と１１mlの２‐プロパノールとの混合液に溶解した。得られた６．３%溶液を遠心分離にて脱気し，押出速度２００μl・min-1でNEXUS6000チャージャを使用して凝固槽に入れた。凝固槽には室温の８０%プロピオン酸水溶液が入っていた。繊維を長さ０．４mの槽に１．２m・min-1の速度で通し，巻取ローラー一式を使用して円錐状にしながら巻き取った。ローラーの一部は１００%の２‐プロパノールに浸漬しており，ここで繊維を約１時間洗浄した。
実施例２６
置換度４６%でＭｗが２５０kDaである分量１．３２gのパルミトイルヒアルロナンを，１１mlの脱塩水と１１mlの２‐プロパノールとの混合液に溶解した。得られた６．３%溶液を遠心分離にて脱気し，押出速度２００μl・min-1でNEXUS6000チャージャを使用して凝固槽に入れた。凝固槽には室温の８０%酢酸水溶液が入っていた。繊維を長さ０．４mの槽に１．２m・min-1の速度で通し，巻取ローラー一式を使用して円錐状にしながら巻き取った。ローラーの一部は１００%の２‐プロパノールに浸漬しており，ここで繊維を約１時間洗浄した。
実施例２７
置換度４６%でＭｗが２５０kDaである分量１．３２gのパルミトイルヒアルロナンを，１１mlの脱塩水と１１mlの２‐プロパノールとの混合液に溶解した。得られた６．３%溶液を遠心分離にて脱気し，押出速度２００μl・min-1でNEXUS6000チャージャを使用して凝固槽に入れた。凝固槽には室温の８０%ギ酸水溶液が入っていた。繊維を長さ０．４mの槽に１．２m・min-1の速度で通し，巻取ローラー一式を使用して円錐状にした。繊維は円錐状にする際，高頻度に切断され（強度の欠如）；長さ３００mmの断片が得られた。
実施例２８
ヒアルロニダーゼ（ウシ精巣ヒアルロニダーゼ，Sigma Aldrich）及びエステラーゼ（ウサギ肝臓酵素，Sigma Aldrich）の酵素媒体で繊維の生分解性を試験した。
酵素の存在下で繊維分解を検討する為に使用した方法はソモギー・ネルソン試薬［９］を使用した可溶部分（ヒアルロナンオリゴ糖）の測定である。繊維の酵素分解の測定は以下の通りに行った：
実施例１２と同様の方法で調製した繊維を固定長４００mm，固定重量１０mgに計り分け，コイル状に巻いてジャガード紐を形成し，５００μｌのエッペンドルフ・マイクロチューブに入れ，滅菌ＰＢＳに２４時間埋設し，繊維を洗浄した。洗浄ＰＢＳを吸引した後，新たな緩衝液（５００μl）をチューブに添加した。各繊維から３つの試料を調製した：
Ａ）ＰＢＳ中の繊維のみ（対照）；
Ｂ）ＰＢＳ中の繊維及びウシ精巣ヒアルロニダーゼ（２００Ｕ）；
Ｃ）ＰＢＳ中の繊維，ヒアルロニダーゼ（ＢＴＨ；２００Ｕ）及びウサギ肝臓エステラーゼ
これらの酵素は還元性末端の供給源として作用し得るので，バックグラウンド対照，すなわちＰＢＳのみ，ＰＢＳ＋ＢＴＨ，及びＰＢＳ＋ＢＴＨ＋ＣＨＥを全ての繊維用に調整した。測定中，バックグラウンドの吸光度を，繊維が入った試料の吸光度から差し引いた。
繊維に酵素を添加し，撹拌した後，０，２，４及び６時間目に試料を取り出した。取り出した試料（６０μl）を−２０℃の２００μlマイクロチューブに入れた。その分析に先立って，試料を熱分解し（６０分，１００℃），切断した断片の多様なＭＷの影響を最小限にした。自由還元性末端は以下の修飾を行ってソモギー・ネルソン試薬［９］での反応により測定した：５０μｌの試料と，新たに調製した同量のソモギー試薬とを混合した。１５分間撹拌した後，混合液をサーモブロック中，１００℃でインキュベートした。冷却後，１００μlのネルソン試薬を添加し，試料を撹拌し，短時間遠心分離し，染色された生成物１２５μlをマイクロタイトレーション９６ウェルプレートに移し，５４０nmの吸光度を測定した。バックグラウンドを差し引いた後，グルコース当量の値（＝還元性末端の数）を較正曲線から測定した。
分解の結果 ― 酵素反応率と誘導体の置換度との関係
Figure 2016505722
調製した繊維は生分解性であるという結果となった。分解率は使用した誘導体及びその置換度に依存している。
実施例２９
誘導体及び繊維の細胞毒性は，マウス皮膚線維芽細胞培地３Ｔ３で７２時間ＭＴＴ試験を行って検討した。誘導体及び繊維を秤量し，イソプロパノールが蒸発するまで層状の箱に入ったイソプロパノールに浸漬しておいた。乾燥している誘導体／繊維を増殖培地（３６００μg/mlの繊維及び１０００μg/mlの誘導体）に移し，一晩維持し，膨張させた。繊維をUltrathuraxにより崩壊させ，均質な懸濁液を得た。繊維からの抽出物，又は１００μmフィルターで濾過した混合液の濾液も試験したが，これらの修飾は生存率に影響を及ぼさず，従って次の繊維は崩壊させた懸濁液の形態でのみ試験した。
生存率の試験結果から，誘導体も調製繊維も細胞生存率に有意に影響を及ぼさないことが分かる。
実施例３０
繊維をヒアルロニダーゼ及びエステラーゼ酵素により分解した。７５０μlのＰＢＳに入った繊維の芯(wicks)２０mgに２０Ｕのエステラーゼ及び２００Ｕのヒアルロニダーゼを添加した。酵素を含む繊維を３７℃で７２時間維持した。その後，細胞に影響を与える為にこの混合液を利用した。試験での濃度は上清を調製した繊維濃度に従って１０００，５００及び１００μg/mlであった。細胞株及び生存率試験の手順は実施例２５と同様である。その手順は３回個別に行い，データはスチューデントｔ‐検定を利用して統計的に評価した。
生存率の試験結果から，繊維分解生成物も細胞生存率に有意に影響を及ぼさないことが分かる。
分解生成物の生存率試験の結果：
Figure 2016505722
実施例３１
１カラム張力テスターInstron3343を使用して機械的に張力を試験した；１００Nのヘッドを使用した。試験では，初めに１mm・min-1の速度で最大０．０５Nの応力で繊維を事前に強化した。強化後，応力及び変形量を自動的にリセットした後，１０mm・min-1の速度で，繊維が切断されるまで試験を行った。室温で，かつ室内相対湿度で張力試験を行った。
切断時の強度及び変形量を少なくとも５回の有効な測定の中央値として計算した。繊維は誘導体の濃度及び置換度に，また延伸率にも依存して強度３〜１０cN・dtex-1にまで達する。変形量は上記パラメータに依存して５〜４０%の値にまで達する。表は強度及び伸張性の値を示し，これらの数値は中央値である。
Figure 2016505722
実施例１２及び１３と同様の方法でヒアルロナンから調製した繊維の強度及び変形量の値を示す表
Figure 2016505722
これは繊維の機械的特性の測定，及び繊維が織物加工で処理可能である実験に起因している。
実施例３２
パルミトイルヒアルロナンから形成された繊維（実施例１２と同様の方法で調製された繊維）を主軸速度１４００RPM，モノフィラメント送り速度４m・min-1の撚糸装置で撚糸した。パルミトイルヒアルロナンから得た糸を図９に示す。
実施例３３
実施例１２と同様の方法で調製した繊維を，自動針選択機能のある平織り横編み機Shima‐Seikuで，１面横編み生地の形態（図１０）及び二重横編み生地の形態（図１１）へと織物加工した。
実施例１２と同様の方法で調製した繊維を，筒織り横編み機Harry Lucasで，筒状生地の形態（図１２）へと織物加工した。

Claims (15)

  1. ヒアルロン酸のヒドロキシル基上でＣ１１‐Ｃ１８‐アシル化されたヒアルロナン誘導体をベースとする繊維の調製方法であって，前記繊維は水及び２‐プロパノールの混合液中，０．０１〜１５重量%の濃度範囲であるヒアルロナンのアシル化誘導体を含む紡糸用溶液で調製され，ここでは水分は３０〜９０体積%の範囲であり，２‐プロパノールの含有量は１０〜７０体積%であり，その後，前記紡糸用溶液を，乳酸，酒石酸，クエン酸，リンゴ酸，アスコルビン酸，シュウ酸又はこれらの組み合わせから成る群より選択される有機酸又はそのアルカリ金属若しくはアルカリ土類金属の塩を含む凝固槽に入れ，繊維を形成し，次いで繊維をアルコールで洗浄し，乾燥させることを特徴とする調製方法。
  2. 前記ヒアルロナン誘導体が，好ましくはＮ‐アセチル‐グルコサミンの第１級アルコールでアシル化されることを特徴とする請求項１記載の調製方法。
  3. 前記ヒアルロナン誘導体が，置換度３０%以上のＣ１１‐Ｃ１２‐アシル化誘導体，置換度２０%以上のＣ１３‐Ｃ１５‐アシル化誘導体，及び置換度５%以上のＣ１６‐Ｃ１８‐アシル化誘導体から成る群より選択されることを特徴とする請求項１又は２記載の調製方法。
  4. 前記ヒアルロナン誘導体がパルミトイルヒアルロナンであることを特徴とする請求項１〜３いずれか１項記載の調製方法。
  5. 前記凝固槽中の前記有機酸の水溶液の濃度は，乳酸では０．５〜３０重量%，酒石酸では０．０１〜５７重量%，クエン酸では０．５〜４２重量%，リンゴ酸では０．５〜５０重量%，アスコルビン酸では０．５〜２５重量%，シュウ酸では０．５〜６０重量%であることを特徴とする請求項１〜４いずれか１項記載の調製方法。
  6. 前記凝固槽が前記有機酸の水溶液から形成されることを特徴とする請求項１〜５いずれか１項記載の調製方法。
  7. 前記凝固槽が乳酸の飽和水溶液を含むことを特徴とする請求項１〜６いずれか１項記載の調製方法。
  8. 前記紡糸用溶液が前記凝固槽に入る前に脱気されることを特徴とする請求項１〜７いずれか１項記載の調製方法。
  9. 前記凝固槽の温度は１５〜４５℃の範囲であり，前記凝固槽中に前記繊維を保持する時間は１０秒〜２４時間の範囲であることを特徴とする請求項１〜８いずれか１項記載の調製方法。
  10. 前記繊維がエタノール，１‐プロパノール及び２‐プロパノールから成る群より選択されるアルコールで洗浄されることを特徴とする請求項１〜９いずれか１項記載の調製方法。
  11. アルコールで洗浄した後に前記繊維を延伸することを特徴とする請求項１〜１０いずれか１項記載の調製方法。
  12. ヒアルロン酸のヒドロキシル基上でＣ１１‐Ｃ１８‐アシル化されたヒアルロナン誘導体をベースとする繊維であって，直径が５０〜３００μmであり，張力が０．３〜１cN/dtexの範囲であり，伸長度が１０〜４０%の範囲であることを特徴とする繊維。
  13. 編地，織布又は不織布を製造する為の，請求項１２で定義した繊維の使用。
  14. 請求項１２で定義した前記繊維をベースとする織物。
  15. ヒト医学及び獣医学用の移植可能な外科材料を製造する為の，請求項１２で定義した繊維をベースとする織物の使用。

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