JP2016121148A - イチジク漿液画分を含む生理活性組成物および皮膚の色素沈着過剰の外観を低減するための方法 - Google Patents

Abstract

【課題】皮膚の色素沈着過剰を低減させることができる生物学的活性を示す組成物、及び、それを調製するプロセスの提供。化粧用組成物の皮膚への局所適用による皮膚の美白の分野に関する。
【解決手段】新鮮イチジク葉のイチジク細胞汁から得られるイチジク漿液画分を含む生理活性組成物。該イチジク漿液画分は、清浄で新鮮な萎凋していないイチジク葉からイチジク細胞汁を分離して、新鮮なイチジク細胞汁を得るステップ；該新鮮なイチジク細胞汁をろ過して、繊維を含有しない細胞汁を得るステップ；該繊維を含有しない細胞汁からクロロフィルを除去して得た上清Ｉから色素およびタンパク質を除去して、イチジク漿液画分を形成するステップとを含むプロセスにより生成される。
【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１０年９月１０日出願の米国仮特許出願第６１／３８１，４４２号の優
先権の利益を主張し、その開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。

本発明は、化粧用組成物の皮膚への局所適用による皮膚の美白の分野に関する。さらに
、本発明は、イチジク漿液画分を含む、皮膚を美白する局所用組成物にも関する。また、
本発明は、メラニン合成における１つまたは複数のステップを妨害するための化粧用組成
物を色素沈着過剰領域に局所適用することによって、皮膚の色素沈着過剰の外観を低減す
るための方法にも関する。

ヒト皮膚は、３つの主要な層、すなわち、表皮、真皮および皮下脂肪層を含む。表皮は
、４つの層、すなわち、（上から下へ）角質層、顆粒層、有棘層および基底層を含む。別
個の第５の層、すなわち、透明層は、角質層と顆粒層との間に存在し得る。基底層は、上
方へ徐々に遊走して、他の上皮層を形成する細胞を産生する。これらの細胞は、上方へ遊
走するにつれて、それらの中心核を喪失し、皮膚のタンパク質（ケラチン）および脂肪（
脂質）を産生し始める。これらの細胞は、表皮の上層中に存在する場合には、角化細胞と
同定される。メラニン形成細胞は、表皮の基底層中に位置する別のクラスの細胞である。
メラニン形成細胞は、メラニンの産生に関与し、メラニンは、皮膚の色素沈着における主
要な因子である。

メラニンは、メラニン形成細胞内の複雑なセットの反応により産生され、基礎的レベル
では、酵素チロシナーゼ、および基質としてのＬ−チロシンが関与する。チロシナーゼが
、Ｌ−チロシンからＤＯＰＡ（Ｌ−３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン）への変換お
よびＤＯＰＡからドーパキノンへの変換を触媒する。ドーパキノンは、さらなる変換を経
て、メラニンを形成する。メラニンは、メラノソームとして知られているオルガネラ中に
凝集し、メラノソームは、樹状突起として知られている、メラニン形成細胞の細長いフィ
ラメントに沿って、角化細胞に移される。およそ１５００個の遺伝子産物がメラノソーム
中で発現し、それらのうちの６００個は常に発現しており、それらのうちの１００個はメ
ラノソームに特有であると考えられている。さらに、シグナル伝達、メラニン形成細胞内
におけるメラノソームの輸送、およびメラノソームの角化細胞への移動に関与する多くの
調節エレメントもある。

メラニンの産生は、多様な外部および内部の事象により誘発され得る。例えば、皮膚が
ＵＶ放射線に曝されると、メラニン形成細胞は追加のメラニンを産生する。次いで、メラ
ニンは、メラノソームを介して角化細胞に輸送され、次いで、皮膚に「日に焼けた」外観
を残す。ＵＶ光が除去されると、メラニン形成細胞は、メラニン産生の正常レベルに戻る
。炎症は、メディエーター、例として、ＩＬ−１、エンドセリン−１および／または幹細
胞因子によるメラニン形成細胞の直接的な刺激によって、色素沈着過剰を開始し得る。損
傷皮膚中で生成されたまたは炎症細胞から副産物として放出された反応性の酸素種、例と
して、スーパーオキシドおよび一酸化窒素が、メラニン形成細胞の刺激物質となり得る。

経時的に、慢性のＵＶ曝露、ならびに他の内因性および外因性の加齢因子が、角化細胞
および／またはメラニン形成細胞の永久的な遺伝子発現の変化を起こし得、結果として、
加齢関連性の色素沈着過剰性シミが生じる。いくつかのメラニン形成関連遺伝子（例えば
、チロシナーゼ、ＴＹＲＰ１）のｍＲＮＡレベルが日射性黒子（加齢によるシミ）を増加
させることが報告されている。また、色素沈着過剰においては、上皮のエンドセリンカス
ケードおよび幹細胞因子の役割も強調され得る。これらの変化により、侵襲、例として、
ＵＶ曝露が回避されても持続するメラニンの過剰産生および結果として得られる色素沈着
過剰性シミが生じ得る。色素沈着過剰性シミ以外にも、慢性のＵＶ曝露、ならびに他の内
因性および外因性の加齢因子により、皮膚色調のより多くの微妙な変化が生じ得る。しば
しば、これらの変化は、まだらな色調または斑状の外観と記載される。少なくとも１つの
研究によって、加齢によるシミにより、時には人が１０〜１２歳老けて見られる場合があ
り、メラニンの分布が、色調に依存する年齢の判断の基になる場合があることが示唆され
ている。したがって、色素沈着過剰皮膚の外観、例として、加齢によるシミを改善するこ
とができる組成物および処置方法の提供が望まれている。

ここ数年、消費者はますます、「自然」の化粧用製品を求めるようになってきた。結果
として、化粧品の製造元は、より多くの植物に基づいた材料を、自社の化粧用製剤中に組
み込んでいる。種々の植物が、多様な、よく知られている適応について数百年にまたは数
千年にもわたり使用されてきたが、最近になってようやく、意図される有効性を臨床的に
確かめることまたは植物の生理活性の根底にある科学に基づいて新しい潜在的な使用を同
定することが可能になった。科学の最近の進歩に伴って、研究者らは今では、最近までは
民間伝承により支持されるに過ぎなかった植物についての有効性および／または潜在的な
新しい使用をより良好に評価することができる。この科学の新しさにより、かつ化粧用の
生理活性物質として潜在的に活用され得るであろう植物の数が極めて膨大であることによ
り、まだ圧倒的多数の植物が十分には検討されていない。

植物から植物学的構成成分を抽出するために使用される方法のうちの多くには、植物組
織の組成および／またはその組織中に含有される目的の生理活性構成成分に有害である技
法が関与する。したがって、従来の抽出方法はしばしば、植物細胞内に存在する活性の完
全なスペクトルを取り出すことができず、したがって、植物学に基づいた化粧用製剤の十
分な可能性が実現されない。さらに、多くの従来の抽出方法が、過酷な化学溶媒を活用し
、これらの化学溶媒は、「自然」ではなく、したがって、消費者が皮膚への適用の回避を
望む材料である。さらに、これらの溶媒に基づいたプロセスは、有害廃棄物として適切に
取り扱い、処分しない場合、環境を害する可能性がある毒性の化学廃棄物を生成する。

しかし、材料が「自然」であるという理由だけでは、そうした材料が望まれない物質を
含有せず、そのことにより、材料が皮膚上での使用に適しているものになるとは限らない
。例えば、多くの植物が、光感受性物質、例として、フェオフォルビド、および／または
接触アレルゲン、例として、タンパク質を含有する。多くの一般的な植物中に自然に見出
されるレベルでは、フェオフォルビドおよび／またはタンパク質は、ほとんどの人にとっ
て懸念はない。しかし、植物材料が、極めて濃縮された形態に、例として、抽出により縮
合される場合、これらの材料は、皮膚刺激性、および発疹を含めた、アレルギー反応を引
き起こすレベルで存在し得る。しかし、これらの材料が、それらの自然のレベルで存在す
る場合でさえ、依然として、望ましくない皮膚反応を経験する多くの感受性の個体がいる
。

さらに、自然の製品に対する需要が増加するにつれて、地球の天然資源の保護について
の懸念も増加している。消費者が望む「自然」の成分のうちの多くが、消費者製品中で使
用するために収穫されると、枯渇し、かつ／または破壊される生物資源から得られる。し
たがって、消費者が自然の、より地球に優しい製品を望むことが皮肉なことに、消費者が
保存することを目指す生物資源自体の破壊をもたらす場合がある。

したがって、自然の、生理活性を示す植物学的組成物であって、所望の生理活性のスペ
クトルを維持し、皮膚への局所適用に適しており、過酷な化学溶媒は使用せずに調製され
る組成物が求められている。さらに、皮膚の色素沈着過剰の領域を低減させるのに有効で
ある、そのような生理活性物質を含有する化粧用組成物も求められている。さらに、生態
学的に妥当な、持続可能な様式で収穫および加工することができる、そのような生理活性
材料も求められている。

本発明のこれらおよび他の目的が、以下の開示に照らして明らかになるであろう。

本発明は、新鮮イチジク葉の細胞汁から得られるイチジク漿液画分を提供する。また、
本発明は、イチジク漿液画分を含む化粧用組成物も提供する。イチジク漿液画分は、組成
物中に、皮膚を美白する所望の結果を達成するのに有効な量で存在する。

また、本発明は、メラニン形成における１つまたは複数のステップを妨害するための化
粧用組成物を色素沈着過剰領域に局所適用することによって、皮膚の色素沈着過剰の外観
を低減するための方法にも関する。

本発明は、付属の図面も併せて利用すると、以下の記載からより良好に理解されると考
えられる。参照する図面により、本発明の範囲が限定されると解釈してはならない。

新鮮イチジク葉から得られる、生理活性を示す漿液画分を調製するためのプロセスを示す概略図である。 イチジク漿液画分のＬＣ／ＵＶクロマトグラムの上に重ね合わせた従来のイチジク抽出物のＬＣ／ＵＶクロマトグラムであり、従来の抽出物は、イチジク漿液画分中には検出されない、より高いレベルの溶出の遅い（より疎水性の）化合物を含有することを示している。 従来のイチジク抽出物の溶出の遅い化合物のＬＣ／ＵＶクロマトグラムおよびそれらの対応する抽出したイオンクロマトグラムであり、それらを、フェオフォルビド、すなわち、クロロフィルの分解産物である色素化合物と同定している。 イチジク漿液画分のＬＣ／ＵＶクロマトグラムの上に重ね合わせた従来のイチジク抽出物のＬＣ／ＵＶクロマトグラムであり、従来の抽出物は、より高いレベルのフラボノール配糖体を含有することを示している。 イチジク漿液画分のクロマトグラムの上に重ね合わせた従来のイチジク抽出物のＬＣ／ＵＶクロマトグラムの一部および対応する抽出したイオンクロマトグラムであり、イチジク漿液画分は、従来のイチジク抽出物中に含有されるレベルと比して、ほぼ１０倍（１０×）のレベルのカテキンおよび関連の縮合タンニンを含有することを示している イチジク漿液画分のクロマトグラムの上に重ね合わせた従来のイチジク抽出物のＬＣ／ＵＶクロマトグラムの一部および対応する抽出したイオンクロマトグラムであり、３つのカフェオイルキナ酸の異性体のレベルは、２つの試料の間で実質的に異なるようには見えなかったことを示している。 イチジク漿液画分のＬＣ／ＭＳクロマトグラムの上に重ね合わせた従来のイチジク抽出物のＬＣ／ＭＳクロマトグラムの一部であり、遊離のチロシン、フェニルアラニンおよびトリプトファンのレベルは、イチジク漿液画分中でより高いことを示している。 加速劣化研究から得られた２つのカラー写真であり、乾燥葉イチジク抽出物とＦＳＦとを比べた色の安定性を示している。２つの異なる化粧用組成物は、異なるレベルのイチジク漿液画分および異なる防腐剤を含む。 図８の加速劣化研究についての較正プロットである。 加速劣化研究から得られたカラー写真であり、０．５５％ＦＳＦおよび種々の濃度の防腐剤を含有するビヒクルを比較している。

別段の指定がない限り、本明細書において使用するパーセントおよび比は全て、組成物
全体の重量に関し、測定は全て、２５℃で行う。

本発明の組成物は、本明細書に記載する必須の構成成分および任意選択の成分を含むこ
と、本明細書に記載する必須の構成成分および任意選択の成分から本質的になること、ま
たは本明細書に記載する必須の構成成分および任意選択の成分からなることができる。本
明細書で使用する場合、「本質的になる」は、組成物または構成成分が追加の成分を含む
ことができるが、追加の成分が、請求する組成物または方法の基本的なかつ新規の特徴を
実質的に変化させない場合に限られることを意味する。

「適用する」または「適用」という用語は、組成物に関して使用する場合、本発明の組
成物を、ヒト皮膚表面、例として、表皮上に適用または塗布することを意味する。

「皮膚科学的に許容できる」という用語は、本明細書で使用する場合、記載する組成物
または構成成分が、ヒト皮膚組織と接触させて使用するのに適しており、過度の毒性、不
和合性、不安定性、アレルギー応答等を生じないことを意味する。

「安全かつ有効な量」という用語は、本明細書で使用する場合、有益な利益を顕著に誘
発するのに十分な化合物または組成物の量を意味する。

「炎症後の色素沈着過剰」という用語は、本明細書で使用する場合、一過性の炎症性事
象に対する応答としての、色素沈着の急性から慢性の増加を指す。炎症後の色素沈着過剰
は、これらに限定されないが、暗色皮膚の対象において特に優勢である。炎症後の色素沈
着過剰は典型的には、一過性の炎症性事象が消散すると弱まる。一過性の炎症性事象の例
として、これらに限定されないが、挫瘡病変、中に成長した毛、引っ掻き傷、昆虫の咬傷
、表面活性物質による損傷、および短期のＵＶ曝露が挙げられる。

「色素沈着過剰性シミ」という用語は、本明細書で使用する場合、皮膚の画定された領
域であって、色素沈着が、局部的な、かつ慢性または全身性のメラニンの過剰産生に起因
して、隣接する領域の皮膚の色素沈着よりも多い領域を指す。色素沈着過剰性シミは典型
的には、直径が約２ｍｍ〜約１０ｍｍの間であるが、より小さなシミまたはより大きなシ
ミも存在するであろう。色素沈着過剰性シミは、加齢によるシミ、日光シミ、日光黒子、
低黒色性病変（hypo-melanotic lesion）、そばかす、および黒皮症のシミのうちの１つ
または複数を含むことができる。

「加齢によるシミ」という用語は、本明細書で使用する場合、色素沈着が、内因性また
は外因性の加齢因子により引き起こされる、局部的なかつ慢性のメラニンの過剰産生に起
因する色素沈着過剰性シミを指す。

「皮膚色調作用剤」という用語は、本明細書で使用する場合、メラニン産生シグナル、
メラニンの合成、メラニン形成細胞と角化細胞との間のメラニンの全身性の移動、および
／またはメラニンの分解を制御する作用剤を指す。皮膚色調作用剤は、美白または色素沈
着低減の化粧用作用剤として作用することによって、まだらな皮膚色調の外観を改善する
ことができる。

「皮膚色調」という用語は、本明細書で使用する場合、全身性の、むしろ一過性ではな
い、メラニンの合成により引き起こされる、皮膚中のメラニンの全体的な外観を指す。皮
膚色調は典型的には、皮膚のより大きな領域にわたり特徴付けられる。領域は理想的には
、１００ｍｍ^２超であり得るが、より大きな領域、例として、顔面皮膚の全体または顔面
皮膚表面のうちのいずれかを想定する。皮膚色調は、画像解析により測定することができ
る。例えば、全体的な明るさを、Ｌ^＊ａ^＊ｂ^＊の色空間におけるＬ^＊座標により測定する
ことができる（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ ｏｎ Ｉｌｌｕｍ
ｉｎａｔｉｏｎ）。発色団マッピング、例として、メラニンマッピング、およびメラニン
濃度を、全体的な皮膚色調の指標として使用することができる。平均メラニンを、発色団
マップデータから計算することができる。さらに、皮膚色調の均一性も、メラニンの均一
性により決定することができ、メラニンの均一性もまた、発色団マップデータから計算す
ることができる。適切な発色団マッピングの技法を、下記の実施例で論じる。

「顔面皮膚表面」という用語は、本明細書で使用する場合、前頭部、眼窩周囲、頬、口
周囲、顎および鼻の皮膚表面のうちの１つまたは複数を指す。

「従来の抽出物」という用語は、本明細書で使用する場合、植物材料からの化合物の溶
媒抽出により生成される抽出物を指す。植物材料は、脱水状態（すなわち、乾燥状態）の
植物材料であっても、かつ／または非脱水状態（例えば、新鮮なもしくは部分的にのみ脱
水状態の）植物材料であってもよい。

Ｉ．組成物
本発明は、種々の組成物、より具体的には、皮膚表面に適用するための組成物に関する
。組成物は、多種多様な製品形態をとることができ、それらとして、これらに限定されな
いが、溶液、懸濁液、ローション、クリーム、ジェル、化粧水、スティック、ペンシル、
スプレー、エアロゾル、軟膏、クレンジング液体洗浄剤および固体のバー、シャンプーお
よびヘアコンディショナー、ペースト、フォーム、粉末、ムース、シェービングクリーム
、ワイプ、ストリップ、パッチ、電動パッチ、創傷ドレッシングおよび接着性包帯、ヒド
ロゲル、フィルム形成製品、顔面および皮膚のマスク（不溶性シートを有する場合および
有さない場合がある）、メーキャップ、例として、ファンデーション、アイライナーおよ
びアイシャドウ等が挙げられる。組成物の形態は、選ばれた特定の皮膚科学的に許容でき
る担体に、それが組成物中に存在する場合には従う場合がある。

本発明の組成物は、メラニンと関連がある皮膚の色素沈着過剰の外観を低減するのに有
用である。本明細書で使用する場合、「皮膚の色素沈着過剰の目に見える外観の低減」は
、皮膚の美白を含む。皮膚の美白には、皮膚の色素沈着過剰域を含めて、皮膚中に現存す
るメラニンを、減少させること、最低限に留めることおよび／もしくは消すこと（処置的
）、ならびに／または皮膚中におけるメラニンの形成を、遅延させること、最低限に留め
ることおよび／もしくは予防すること（予防的）が関与する。本明細書で使用する場合、
「色素沈着過剰域」は、高いメラニン含有量の局部的帯域を意味し、加齢によるシミ、肝
斑、シミだらけの状態、斑点形成、黒皮症、褐色斑、そばかす、炎症後色素沈着、または
日光誘発性の色素性斑点を含む。

Ａ．イチジク漿液画分
イチジク、すなわち、イチジク属は、多数の種からなり、世界中で見出される。イチジ
ク属を、フィカス（Ficus）種、すなわち、ウチワサボテン（prickly pear cactus）、和
名：ウチワサボテン（Opuntia ficus-indica (L.) Mill）、サボテン科と混同してはなら
ない（Barberaら、Past and Present Role of the Indian-fig Prickly-Pear (Opuntia f
icus-indica (L.) Miller, Cactaceae) in the Agriculture of Sicily、Economic Botan
y 46(1):10〜20、1992）。イチジク属の注目に値する種には、イチジク（Ficus carica）
（一般的なイチジク）、ボダイジュ（Ficus religiosa）（釈迦が「真理」を探り当てた
際に居したインドボダイジュ）、フィカス・エラスティカ（Ficus elastica） Roxb. exH
orneum.（インドゴムノキ）、ベンガルボダイジュ（Ficus behghalensis）（バンヤンノ
キ）、およびフィカス・ラセモサ（Ficus racemosa）（異名：グロメラタ（glomerata）
；フサナリイチジク）が含まれる。

イチジクは、果実の一般的なカテゴリーに属し、無花果花序の、独特の「裏返し」構造
を有する複数の果実の例である。これらは、小石果の集合体を含み、小石果は、果肉質の
中空の花托であり、それぞれが、小孔と呼ばれる、尖部に小型の開口部を有する。微小な
花が、内壁上に集合し、外部からは目に見えない。

知られているものの中では最古のヒトの食品のうちの１つとして、イチジク属種（イチ
ジク）は、積年の安全性プロファイルを有する。イチジクの新鮮なまたは乾燥した果実、
樹木の樹皮、葉、小枝、ラテックスおよび若い枝が、歴史を通して種々の目的で使用され
てきた。これらの歴史的な使用のうちの一部として、傷、潰瘍、癌性の増殖、腫瘍、膿瘍
、痛風、慢性の咳、肺の問題、慢性の下痢、便秘、リウマチ、淋病、痔核、糖尿病、嘔吐
、湿疹、ハンセン病およびいぼについての治療が挙げられる。

本発明のイチジク漿液画分（以下「ＦＳＦ」）は、新鮮イチジク葉の細胞汁から得られ
る。新鮮葉から機械により分離した細胞汁を、ｐＨ調節、集束マイクロ波放射、遠心分離
および滅菌ろ過を使用して分画し、フェオフォルビドおよびタンパク質を含有しない、イ
チジク漿液画分を得る。結果として生じるイチジク漿液画分は、本質的にイチジク葉細胞
の細胞質からなる。特定の実施形態では、イチジク細胞汁を、ベンガルボダイジュ（F. b
enghalensis）、イチジク（F. carica）、フィカス・エラスティカ（F. elastica）、ガ
ジュマル（F. microcarpa）、フィカス・トリゴナタ（F. trigonata）、およびそれらの
組合せからなる群から選択されるフィカス属種から得る。

本発明の組成物は、安全かつ有効な量のイチジク漿液画分を含む。組成物は、ＦＳＦを
、組成物の重量に関して、０．０１％〜５０％の量で含有し、一実施形態では、０．０５
％〜２０％の量で含有し、別の実施形態では、０．２％〜１０％の量で含有することがで
きる。さらに別の実施形態では、組成物は、組成物全体の重量に関して、１％〜５％のＦ
ＳＦを含み、さらに別の実施形態では、１％〜３％のＦＳＦを含む。

本研究者らは、イチジク漿液画分が、皮膚に局所適用する場合、従来のイチジク抽出物
と比較して、哺乳動物皮膚中の色素沈着過剰域の美白を含めて、優れた皮膚の美白作用を
もたらすことを見出すに至った。対象の発明は、理論により制限されるべきでないが、メ
ラニン産生（メラニン形成）に関与するプロセスの阻害により作動すると考えられ、これ
には、（例えば、ＵＶ曝露または太陽光曝露に伴って生じ得る）メラニン形成細胞内にお
けるメラニン産生経路を開始させる、メラニン形成細胞の反応性酸素／酸素ラジカルによ
る刺激（酸化ストレス）を予防することが含まれる。

イチジク漿液画分の調製
溶媒を用いる抽出による等、植物体から化合物を分離するために使用する方法によって
、どの化合物が単離されるかが決定される。「似たものどうしはよく溶ける」の一般原則
に従って、抽出溶媒の選択が主として、任意の特定の抽出技法の結果得られる化合物のタ
イプおよび数を決定する。例えば、極性化合物は、極性溶媒を使用することによって抽出
して得、一方、非極性化合物は、非極性溶媒を使用することによって抽出して得る。この
結果、存在し得る化合物のスペクトル全体から狭い範囲の化合物のみが単離される。下記
の表１ｘに、異なる極性の範囲にわたり、一般的な溶媒を使用して通常抽出される異なる
タイプの化合物を要約する。

現在の発明のイチジク漿液画分は、溶媒抽出によって調製せず、それどころか、植物葉
中に見出される新鮮な細胞汁と残りの植物体とを分離することによって調製する。この細
胞汁は、抽出プロセスに曝されていないので、新鮮イチジク葉中に見出される化合物の完
全なスペクトルを含有する。対照的に、抽出物は、特定の溶媒を用いて分離することがで
きる狭い範囲の化合物のみを含有する。したがって、結果として生じるイチジク漿液画分
は、抽出物が含有するよりも、潜在的に活性な化合物のはるかに広い範囲を含有する。

さらに、多くの抽出物は、新鮮葉から調製されず、それどころか、乾燥状態の植物材料
から調製され、乾燥状態の植物材料は、脱水に起因する分解を受けている。脱水の間に、
細胞壁が損なわれ、加水分解、酸化、重合、メイラード反応および異性化等の機構を通し
て化合物の分解が生じる。したがって、乾燥状態の葉を抽出する場合には、結果として生
じる抽出物は、新鮮な植物体中に当初は存在しなかった、これらの分解産物を含有する。
さらに、抽出物は、特定の溶媒により単離することができる範囲の化合物のみを含有する
。したがって、結果として生じる乾燥葉の抽出物の組成は、イチジク漿液画分の組成とは
大いに異なる。

イチジク漿液画分の組成物を作製するための方法は、（ａ）清浄で新鮮な萎凋していな
いイチジク葉からイチジク細胞汁を分離して、新鮮なイチジク細胞汁を得るステップであ
って、前記分離の前または間に外来の液体が添加されないステップと、（ｂ）前記新鮮な
イチジク細胞汁をろ過して、繊維を含有しない細胞汁を得るステップと、（ｃ）前記繊維
を含有しない細胞汁を分画して、イチジク漿液画分を得るステップとを含む。分画ステッ
プは、（１）前記繊維を含有しない細胞汁からクロロフィルを除去して、上清Ｉを得るス
テップと、（２）上清Ｉから色素およびタンパク質を除去して、イチジク漿液画分を形成
するステップと、（３）場合により、安定化剤を前記イチジク漿液画分に添加するステッ
プとを含む。

いくつかの実施形態では、安定化剤は、抗酸化剤、キレート化剤、防腐剤、およびそれ
らの混合物からなる群から選択される。特定の実施形態では、安定化剤は、メタ重亜硫酸
ナトリウム、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、メチルパラベンナトリウム、ペ
ンチレングリコール、およびそれらの混合物からなる群から選択される。

特定の実施形態では、繊維を含有しない細胞汁からクロロフィルを除去するステップは
、（ｉ）前記繊維を含有しない細胞汁のｐＨを約３に調節して、ｐＨを調節した、繊維を
含有しない細胞汁を得ること、（ｉｉ）前記ｐＨを調節した、繊維を含有しない細胞汁を
約１分かけて約９０Ｃまで加熱すること、（ｉｉｉ）前記ｐＨを調節した、繊維を含有し
ない細胞汁を約３０Ｃまで冷却すること、および（ｉｖ）前記ｐＨを調節した、繊維を含
有しない細胞汁を沈殿物Ｉおよび上清Ｉに分離することを含む。

特定の実施形態では、上清Ｉからの色素およびタンパク質の除去は、（ｉ）上清Ｉのｐ
Ｈを７．５に調節して、ｐＨを調節した上清Ｉを形成すること、（ｉｉ）ｐＨを調節した
上清Ｉを、沈殿物ＩＩおよび上清ＩＩに分離すること、（ｉｉｉ）上清ＩＩのｐＨを３．
６に調節して、ｐＨを調節した上清ＩＩを形成すること、および（ｉｖ）ｐＨを調節した
上清ＩＩを、沈殿物ＩＩＩおよびイチジク漿液画分に分離することを含む。

新鮮イチジク葉を使用して、イチジク漿液画分を調製する。本明細書における調製方法
は、イチジク葉中に本質的に存在する生理活性構成成分の完全性を維持し、結果として、
優れた活性を示すイチジク漿液画分をもたらす。収穫および輸送の間は、環境要因、例と
して、水分喪失および生物学的分解を最小限に留めるように、注意を払って、葉の完全性
を保存する。全てのステップを可能な最も短い期間で完了して、新鮮葉の、日光、高い温
度、および他の望ましくない環境要因に対する曝露を最小限に留める。

特定の実施形態では、イチジク葉は、ベンガルボダイジュ（F. benghalensis）、イチ
ジク（F. carica）、フィカス・エラスティカ（F. elastica）、ガジュマル（F. microca
rpa）、フィカス・トリゴナタ（F. trigonata）、およびそれらの組合せからなるフィカ
ス属種の群から選択される。

手動または機械による切断等の収穫を、たたき切ること、すりつぶすこと、破砕するこ
と、または葉に対する他のタイプの傷害を回避するまたは最小限に留めるように実施する
。収穫および輸送は、水分喪失に起因する萎凋を回避するように実施すべきである。一実
施形態では、新鮮イチジク葉を使用して、それらの元々の水分含量の少なくとも９０％を
含有するイチジク漿液画分を調製し、別の実施形態では、収穫時に存在した元々の水分含
量の少なくとも９５％を、別の実施形態では、少なくとも９８％を含有するイチジク漿液
画分を調製する。

イチジク植物の葉の最高３０％を、植物の生存、すなわち、その後の葉の再成長に不利
な影響を及ぼすことなく、一度に収穫することができるので、収穫を同じ植物から多数回
行うことができる。したがって、イチジク植物は、その完全な自然寿命全体を通して、成
長し、周囲の生態系の一部であり続け、生理活性を示す化粧用組成物を調製するために、
葉の収穫を繰り返して提供することができる。この収穫方法が、天然資源の持続可能性を
促すので好ましい。

あまり好ましくないが、大量の植物を除去し、生存可能な部分を再成長のために残さな
い大規模な機械による収穫を用いる等、持続可能性がより低い収集方法もまた、使用する
ことができる。しかし、このより侵襲性の収穫方法を用いる場合であっても、注意を払っ
て、イチジク葉の傷害を最小限に留める。イチジク葉の傷害は、微生物の増殖、水分喪失
、酸化、重合、異性化および加水分解プロセス（すなわち、望まれない異化プロセス）の
激化を収集する葉にもたらす可能性があるであろう。例えば、本発明の一実施形態では、
イチジク植物を、植物全体として、手動で切断し収集する。別の実施形態では、植物葉を
、収穫用機器を使用して切断する。

切断した植物材料の加工施設までの配達時間、ならびに日光、高い温度、および他の望
ましくない環境要因に対する葉の曝露を最小限に留めて、上記に記載した望まれない分解
プロセスの影響を阻止すべきである。例えば、本発明の一実施形態では、切断時からさら
に加工するまでの植物の配達時間は、３０分を上回らない。別の実施形態では、長距離輸
送を経る植物を、切断後の手順に従って処理し、この手順には、イチジク葉を凍結ゲルパ
ックのバッグを含有する発砲スチロール製クーラー中に直ちに置いて、加工施設まで一晩
かけて配達する間の新鮮さおよび自然の水分含量の維持を支援することを含む。同様に、
上記に記載した結果を達成する他の切断後の手順も使用することができる。

次いで、イチジク葉を、加工する前に、土壌粒子および他のデブリを除去するために、
穏やかに洗浄する。一実施形態では、洗浄を、葉から細胞汁が放出し始めること、傷害を
引き起こすこと、または貴重な構成成分を除去することを阻止する条件下で、低圧の濯ぎ
を短い期間使用して達成する。例えば、本発明の一実施形態では、イチジク葉の洗浄を、
１ｋｇ／ｃｍ^２以下の水圧を用いて５分以内に達成する。残余の洗浄水は、いずれの緑色
または黄色の色素も含有してはならない。そのような色素が存在しないことは、続発の傷
害が生じなかったことを示す。次いで、乾燥物質含有量を自然のレベルにできるだけ近い
状態に保つために、過剰な水を、洗浄した葉から除去する。

次いで、洗浄した新鮮イチジク葉を機械により分離して、細胞壁を主に含有する、繊維
に富む材料から、実質細胞の細胞内材料のうちのほとんどを含有する、細胞汁を遊離させ
る。外来の溶媒（例えば、水、ヘキサン、アセトン、エタノール）を、分離プロセスの間
に添加しないことが重要である。本明細書で使用する場合、「外来の溶媒」は、植物材料
中には本質的に存在しないが、植物材料から化合物を分離する（例えば、抽出する）目的
で植物材料と接触させる任意の溶媒を意味する。

洗浄した葉からの細胞汁の遊離は、液体の細胞内内容物（すなわち、細胞汁）を得、細
胞内内容物と、繊維に富む材料とを分離するための粉砕、浸軟およびプレスを含む。一実
施形態では、５ＨＰのエンジンおよび一連のスクリーンを有するハンマーミル（Ｍｏｄｅ
ｌ ＶＳ３５、Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｔａｍｐａ、ＦＬ）を使用し
て、葉を粉砕して、適切な小さなサイズの葉組織の粒子を、最短の時間内に、バイオマス
温度を顕著に増加させることなく得る。この実施形態では、≦２．０センチメートルの最
大サイズの浸軟した葉の粒子を、≦１０秒の処理の間に生成するように、ハンマーミルを
設定し、この場合、浸軟した新鮮葉の温度は、≦２℃以下だけ増加するに過ぎない。

上記に記載したように、粉砕および浸軟したイチジク葉の曝露を最小限に留めて、望ま
れない異化プロセスの影響を阻止する。イチジク葉を、短時間で、温度を顕著に増加させ
ることなく加工する。粉砕および浸軟の直後に、イチジク葉をプレスして、浸軟した新鮮
葉から細胞汁を得る。一実施形態では、これを、圧縮空気により支持されるコーンが装備
されている水平式連続型スクリュープレス（Ｃｏｍｐａｃｔ Ｐｒｅｓｓ「ＣＰ−６」、
Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｔａｍｐａ、ＦＬ）を使用して達成する。こ
の実施形態では、コーン上の圧力を、１５ｋｇ／ｃｍ^２以上のレベルで維持し、スクリュ
ー速度は１２ｒｐｍであり、細胞汁の温度の増加は５℃以下である。

この処理により、繊維に富む材料、および細胞汁が得られる。次いで、残余の小さな繊
維粒子を、細胞汁から除去する。これは、これらの繊維粒子が、貴重な細胞汁の構成成分
を吸収する可能性があり、また、機器のホースおよびポンプを遮断する可能性もあるから
である。例えば、これらの粒子を、ろ過または低速の遠心分離により除去することができ
る。一実施形態では、完全自動排出ユニットを有する連続流型遠心分離機（Ｍｏｄｅｌ
１２−４１３Ｖ、ＡＭＬ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｈａｔｂｏｒｏ、ＰＡ）を
使用する浄化により、これらの粒子を除去する。２リットル／分の流速では、≦２，２５
０ｇにおける、細胞汁の浄化ための保持時間は、≧１００秒である。このレジメンにより
、繊維を含有しない、細胞汁が生成される。小さな繊維粒子を含有する沈殿物を、収集し
、新鮮葉のプレスの後に生じた残りの、繊維に富む材料と合わせる。

所望により、この時点で、細胞汁を、後に加工するために、気密の、非反応性容器中に
凍結して、保存することができる。一実施形態では、細胞汁を、しっかり閉じる１５リッ
トルの長方形のＨＤＰＥ製容器中に遅滞なく置き、−３０℃で凍結する。固体状態の凍結
した細胞汁を、さらに活用するために、この低い温度で保つ。

次いで、凍結した細胞汁は、好ましくは、短期間（例えば、２分以下）にわたる流動化
により変換して液体状態に戻すことができ、流動化の間、細胞汁の温度の増加を最低限に
留める（例えば、２０Ｃ以下）。短い流動化の期間および低い温度上昇が、細胞汁に対す
る変性および酸化による損傷の両方を最小限に留める。この結果、凍結の前に測定した特
性と本質的に同一の生理化学的および生化学的な特性を有する細胞汁が得られる。

細胞汁は、３つの主要なタイプの構成成分、すなわち、（ｉ）膜結合型葉緑体、ミトコ
ンドリア、小胞体、核、リソソーム、ペルオキシソーム、空胞、ゴルジ体；および（ｉｉ
）非膜結合型リボゾーム、微小管；および（ｉｉｉ）上記の群に関係しない構成成分、例
として、細胞質を含む。細胞汁中の、オルガネラおよびそれらの断片、ならびに望まれな
い色素およびタンパク質の存在に起因して、これらに限定されないが、色、溶解性、透明
性、安定性およびｉｎ ｖｉｔｒｏにおける活性を含めた、機能特性の望ましい組合せを
有するパーソナルケア成分を生成するのに、分画が必要である。

ｐＨ調節、集束マイクロ波放射、遠心分離および減圧ろ過を含めた、種々の処理を使用
して、細胞汁を分画する。次いで、結果として生じる単離した、細胞汁の漿液画分を、防
腐剤および抗酸化剤を用いて安定化させて、最終的なイチジク漿液画分を生成する。

細胞汁のｐＨを、≧３．０に調節する（ｐＨ調節１）。一実施形態では、中性（７．０
）に近い細胞汁のｐＨを、５．０Ｎ塩酸（ＨＣｌ）を活用する滴定法を使用して調節して
、細胞汁のｐＨを、≧３．０まで減少させる（ｐＨ調節１）。

次いで、クロロフィルを、調節した細胞汁から除去する。化粧用成分中にはこの色素が
存在しないのが望ましいことに加えて、クロロフィルは、フェオフォルビドに変換される
可能性があり、フェオフォルビドは、毒性化合物であり（Bergstrom, L.C.、Vucenik, I.
、Hagen, I.K.、Chernomorsky S.A.、Poretz R.D. In-vitro photocytotoxicity of lyso
somotropic immunoliposomes containing pheophorbide a with human bladder carcinom
a cells、J. Photochem. Photobiol.、24、1、17〜23、1994）、皮膚刺激性に関与すると
みなされている（Kato T.、Yamada K.、Relationship between appearance of photosens
itization and total pheophorbide level in spirulina powder、J. Food Hyg. Soc. Ja
pan、36、632〜634、1995）。

一実施形態では、調節した細胞汁を、加熱し、次いで、冷却し、続いて、上清から沈殿
物を分離することによって、クロロフィルの除去を達成する。特定の実施形態では、調節
した細胞汁を、周波数２，４５０ＭＨｚを用いる集束マイクロ波放射により遅滞なく処理
する。この集束マイクロ波処理（ＦＭＰ）の間、細胞汁の温度は、９０℃まで一時的に増
加し、この温度に１分間保たれ、次いで、細胞汁の温度は、≦３０℃まで直ちに減少する
。次いで、連続流型遠心分離機ＣＥＰＡ ＬＥ（Ｃａｒｌ Ｐａｄｂｅｒｇ Ｚｅｎｔｒ
ｉｆｕｇｅｎｂａｕ ＧｍｂＨ、ドイツ）を１５，０００ｒｐｍおよび≧３０秒の保持時
間で使用して、処理した細胞汁を素早く分離する。処理した細胞汁の分離により、緑色に
着色したペースト状沈殿物（「沈殿物Ｉ」）、および明るい褐色に着色し、若干乳白光を
発する液体の上清（「上清Ｉ」）が得られる。この上清Ｉを使用して、さらなる分画を行
う。

上清Ｉをさらに処理して、褐色色素、および残余のタンパク質を含めた、他の望まれな
い化合物を大幅に除去する。この処理は、ｐＨ調節および分離を含む。上清ＩのｐＨを調
節して、ｐＨを約７．５まで増加させる（ｐＨ調節２）。一実施形態では、ｐＨ調節２を
、５０％水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）を活用する滴定法により達成して、細胞汁の上清
ＩのｐＨを約３．０から約７．５まで増加させる（ｐＨ調節２）。ｐＨ調節２の結果、よ
り暗色の材料が生じ、乳白光が強まり、次いで、これを分離により浄化する。一実施形態
では、連続流型遠心分離機ＣＥＰＡ ＬＥ（Ｃａｒｌ Ｐａｄｂｅｒｇ Ｚｅｎｔｒｉｆ
ｕｇｅｎｂａｕ ＧｍｂＨ、ドイツ）を１５，０００ｒｐｍおよび≧３０秒の保持時間で
使用することによって、浄化を達成する。この分離の結果、褐色に着色したペースト状沈
殿物（沈殿物ＩＩ）、および褐色に着色し、若干乳白光を発する上清（上清ＩＩ）が得ら
れる。

次いで、上清ＩＩのｐＨを調節し（ｐＨ調節３）、これをろ過する。上清ＩＩのｐＨを
調節して、ｐＨを約３．６まで減少させる（ｐＨ調節３）。一実施形態では、上清ＩＩを
、５．０Ｎ塩酸（ＨＣｌ）を活用する滴定に付して、ｐＨ値をｐＨ約３．６まで減少させ
る（ｐＨ調節３）。そのような処理から、乳白光が若干増加しているが、より明るい色の
ｐＨを滴定した上清ＩＩが生じる。ｐＨを調節した上清ＩＩを、ポアのサイズ０．２マイ
クロメートルを有するメンブランを通す滅菌ろ過を用いて処理する。結果として生じるろ
液は、明るい色の透明なイチジク漿液画分（ＦＳＦ）である。ＦＳＦは、本質的にイチジ
ク葉細胞の細胞質からなる。

漿液画分のさらなる安定化を、抗酸化剤、安定化剤、キレート化剤および防腐剤を添加
することによって達成することができる。一実施形態では、以下の添加剤、すなわち、０
．２％メタ重亜硫酸ナトリウム、０．１％ソルビン酸カリウム、０．１％安息香酸ナトリ
ウム、および０．１％メチルパラベンナトリウムを、イチジク漿液画分に添加する。この
実施形態では、添加剤の完全な可溶化が達成されるまで、混合物をインキュベートする（
≧３０分）。次いで、１．９％ペンチレングリコールを、混合物に添加した。

ＦＳＦの特性
結果として生じるＦＳＦは、ＦＳＦを化粧用成分として使用するのに望ましいものとす
る特性を実証する。これらの特性は、安定性、水溶性、望ましくない材料、例として、フ
ェオフォルビドおよびタンパク質が存在しないこと、より明るい色、より高い固体含有量
、ならびにより高いレベルの望ましい化合物、例として、フェニルアラニンが存在するこ
とを含む。

安定性の研究から、ＦＳＦからこれらの方法により生成される化粧用成分は、室温で少
なくとも６カ月間安定であることが示されている。本明細書で使用する場合、「安定な」
は、暗い、乾燥した領域中に、ＳＴＰ（標準的な温度および圧力：２５℃、１ａｔｍ）で
保存する場合、特定する期間にわたり、組成物の物理的または化学的な特性に顕著な変化
がないことを意味する。これらの特性は、色および化学組成を含む。ＦＳＦおよびそれを
含む組成物は、いくつかの実施形態では、少なくとも６カ月間、他の実施形態では、少な
くとも１２カ月間、さらなる他の実施形態では、少なくとも２４カ月間安定である。特定
の実施形態では、組成物は、６〜２４カ月間、１２〜２４カ月間、または６〜１２カ月間
安定である。

水溶性
また、本発明のＦＳＦは水溶性でもある。本明細書で使用する場合、「水溶性」は、Ｆ
ＳＦが、（ＳＴＰにおいて）水と任意の比率で混和することを意味する。ＦＳＦが水溶性
であることから、ＦＳＦは、イチジクを含む組成物を製剤化する場合に、より大きな柔軟
性をもたらす。例えば、水を基剤とする製剤には、ベタベタしない感触、望ましい塗布性
、軽い皮膚感、および皮膚表面からの除去の簡便性（例えば、濯げること）が、消費者に
よりしばしば望まれる。

しかし、水に溶解しない、従来のイチジク抽出物は、溶媒を使用して抽出されており、
相分離、沈降、結晶化、および水を基剤とする組成物全体を通して活性物質の濃度が不均
一になること等の困難を製剤にもたらす可能性がある。水に溶解しない活性物質に伴う製
剤化の問題を克服するために、より複雑な製剤、例として、乳剤（この場合、組成物中に
、油性のおよび／または油性感がある材料を通常導入する）が、通常使用される。このこ
とにより、ベタベタする、重いおよび／または粘性のある皮膚感を有する組成物、皮膚表
面からあまり容易には除去されない組成物、ならびにより費用のかかるおよび／または複
雑な製造プロセスが生じる。また、多くの場合に、これらの製剤は、活性物質の皮膚への
送達を妨げる可能性もある。

しかし、ＦＳＦが十分に水溶性であることから、ＦＳＦは、水に溶解しない従来のイチ
ジク抽出物に伴う上記で言及した問題を起こすことなく、水を基剤とする製剤中に組み込
むことができる。このことにより、より大きな製剤上の柔軟性が生じ、したがって、優れ
た、消費者が望む属性を有するイチジク組成物をもたらすことが可能になる。

さらに、ＦＳＦが十分に水溶性であることから、ＦＳＦは、十分には水溶性でない溶媒
抽出物よりも生物学的に利用可能である。このことにより、ＦＳＦに由来する活性構成成
分の皮膚への送達が、より効能を示すようになる。

さらに、従来の溶媒抽出物の潜在的な生物学的活性のうちの多くの測定が、水に対する
それらの不溶性に起因して、実行可能でない。例えば、本研究において、それらが水溶性
ではないため、溶媒抽出物のＩＣ_５０値を測定することができなかった。

安全性／アレルゲン性
また、ＦＳＦは、イチジクを含めた、植物中に一般的に見出される材料であるフェオフ
ォルビドおよびタンパク質も実質的に含有しない。これらの材料が、感受性の個体におい
て、安全性に対する懸念、例として、毒性および／またはアレルギー反応を生み出すこと
は知られている。植物中に通常見出されるレベルでは、これらの材料には通常、懸念はな
い。しかし、植物材料が、加工されること等により濃縮されると、相対的な濃度が劇的な
増加を示し、安全性に対する懸念を生み出す可能性がある。したがって、これらの材料を
含有しない組成物が極めて好ましい。

フェオフォルビドは、クロロフィルの分解産物である色素化合物である。また、これら
の色素は、製品を変色させることに加えて、生物学的毒素および皮膚光感受性物質である
ことも知られている。（Bergstrom, L.C.、Vucenik, I.、Hagen, I.K.、Chernomorsky S.
A.、Poretz R.D. In-vitro photocytotoxicity of lysosomotropic immunoliposomes con
taining pheophorbide a with human bladder carcinoma cells、J. Photochem. Photobi
ol.、24、1、17〜23、1994）；（Kato T.、Yamada K.、Relationship between appearanc
e of photosensitization and total pheophorbide level in spirulina powder、J. Foo
d Hyg. Soc. Japan、36、632〜634、1995）。

図２に示すように、（実施例３の）従来のイチジク抽出物は、（実施例１の）ＦＳＦ中
には検出されない、溶出の遅い（すなわち、より疎水性の）化合物を含有する。図３に示
すように、従来のイチジク抽出物の溶出の遅い化合物のＬＣ／ＵＶクロマトグラムおよび
それらの対応する抽出したイオンクロマトグラムから、これらの化合物がフェオフォルビ
ドであることが同定された。（実施例５を参照されたい）

タンパク質は、イチジク等の植物中のタンパク質を含めて、感受性の個体において、タ
ンパク質接触皮膚炎を引き起こす可能性がある。原因となるタンパク質性の材料との接触
の直後に、そのような個体が、そう痒、灼熱感および／または刺痛がしばしば伴う、皮膚
上の急性の蕁麻疹様または水疱性の発疹等の症状を経験する場合がある。（V. Janssens
ら、「Protein contact dermatitis: myth or reality?」、British Journal of Dermato
logy、1995; 132: 1〜6）。したがって、皮膚のケア材料は、タンパク質をできるだけ含
有しないことが極めて望ましい。

ＦＳＦを、総タンパク質含有量について、ケルダール法を使用して試験した（実施例１
、表３）。ＦＳＦ中には、タンパク質が検出されなかった。本明細書で使用する場合、「
タンパク質を実質的に含有しない」は、ケルダール法を使用した場合の、１％未満（０％
〜１％）の総タンパク質含有量を意味する。タンパク質含有量は、いくつかの実施形態で
は、ＦＳＦの０％〜１％であり、他の実施形態では、０％〜０．５％であり、他の実施形
態では、０％〜０．２５％である。

色／色の安定性
ＦＳＦは、従来のイチジク抽出物よりも明るい色を有する。ＦＳＦは、８未満のガード
ナー色度値を有し、いくつかの実施形態では、７．５未満のガードナー色度値を有する。
特定の実施形態は、５〜８のガードナー色度値を有し、他の実施形態は、６〜８のガード
ナー色度値を有し、他の実施形態は、６．５〜８のガードナー色度値を有する。図８に、
１４日間の加速劣化研究の後の、ＦＳＦの色と乾燥葉イチジク抽出物の色との差を示す。
図１０に、安定化剤／防腐剤を、レベルを変化させて有するビヒクル中の０．５５％ＦＳ
Ｆの色の差を示す。図９は、図８の加速劣化研究の解析のために構築した較正チャートで
ある。

本研究者らは、従来の抽出物中に、いくつかの興味深い構成成分を同定するに至った。
これらの構成成分は、ＦＳＦ中に存在しないかつ／またははるかにより低いレベルで存在
し、両者の間の色および色の安定性の差の原因となり得るであろう。例えば、図４は、従
来の抽出物が、より高い量の、フラボノール配糖体と思われる構成成分を含有することを
示す。フラボノール配糖体は、タンニン（タンニンは、ＦＳＦおよび従来の抽出物の両方
中に見出される）と組み合わさって、ポリマー性色素を形成することができる。したがっ
て、より高いレベルのフラボノール配糖体により、従来の抽出物中には、高いレベルの色
素化合物の形成がもたされ得るであろう。次いでさらに、フラボノイドおよびタンニンの
ポリフェノール構造は、酸化、熱および光等の因子に対して高い感受性を示し、このこと
は、従来の抽出物中の色素の存在の経時的な増加の潜在的な原因となり得る。

固体含有量
固体が、ＦＳＦまたは抽出物の生物学的活性部分を含有する。したがって、固体含有量
が高いほど、植物学的活性も高まる。ＦＳＦは、従来の水溶性イチジク抽出物と比較して
、より高い固体含有量を有する。ＦＳＦは、ＦＳＦの重量に関して、５％超の固体（乾燥
物質）含有量を有し、特定の実施形態では、５％〜２０％、または５％〜１０％の固体（
乾燥物質）含有量を有する。

ＦＳＦの生理活性
ＦＳＦは、皮膚における色素沈着の生成を制御すると認識されている少なくとも４つの
異なる作用機構を示す。これらの機構は、チロシナーゼの阻害、トリプシンの阻害、ＣＯ
Ｘ−２の阻害および抗酸化活性である。ＦＳＦは、一実施形態では、以下の色素沈着低減
活性のうちの少なくとも１つを示し、他の実施形態では、以下の色素沈着低減活性のうち
の少なくとも２つを示し、代替として、少なくとも３つを示す：チロシナーゼ阻害ＩＣ５
０（％ＤＭ）、０．００３〜０．０６；トリプシン阻害ＩＣ５０（％ＤＭ）、０．０２〜
０．５；ＣＯＸ−２阻害ＩＣ５０（％ＤＭ）、０．０２〜１；ならびに抗酸化性のスーパ
ーオキシド捕捉能力、ＤＰＰＨアッセイにより測定する場合（１／×ＤＭ）、１〜１５、
および／またはＯＲＡＣアッセイにより測定する場合（１／×ＤＭ）、０．２〜５。本明
細書で使用する場合、「ＤＭ」は乾燥物質（「固体」）であり、「ＯＲＡＣ」は酸素ラジ
カルの吸収能力であり、「ＤＰＰＨ」は、フリーラジカル捕捉能力の尺度である。

さらに、実施例６のＢ１６のメラニン抑制アッセイにより実証するように、ＦＳＦは、
従来のイチジク乾燥葉の溶媒抽出物よりも、メラニン産生の抑制においても有効である。
例えば、ＦＳＦからは、０．０１の濃度で、従来の抽出物（２３％のメラニンの阻害）よ
りも２倍超のメラニン合成の阻害の程度（４８．１％のメラニンの阻害）が生じた。

したがって、本発明は、皮膚においてメラニン形成を制御する（すなわち、メラニン抑
制の）ための方法を提供する。皮膚中のメラニンの濃度が関与する種々の形態の色素沈着
過剰（例えば、そばかす、加齢によるシミ、肝斑、シミだらけの状態、斑状の色素沈着等
）が、表皮中に存在するメラニン形成細胞および角化細胞の変化の結果生じると考えられ
ている。メラニン形成細胞は、表皮の基部に位置し、加齢に伴い、それらの正常な制御プ
ロセスを喪失し、過剰な色素を産生する。この過剰な産生により、表皮内の角化細胞中に
、メラニンの濃密な核周囲凝集塊が形成され、結果として、色素沈着過剰領域が生じる。

色素沈着過剰皮膚についての従来の療法は、メラニン形成を阻害する、皮膚を美白する
特定の作用剤の適用を含む。当技術分野で提案されている、これらの材料についての作用
機構は、メラニン合成におけるチロシナーゼの阻害および／または他のステップの阻害で
ある。チロシナーゼは、上皮のメラニン形成細胞中のメラノソーム内に存在し、チロシン
からのメラニンの形成における方向付けされたステップを触媒する。（Goldsmith, L. A.
、PHYSIOLOGY、BIOCHEMISTRV, AND MOLECULAR BIOLOGY OF THE SKIN、Oxford University
Press、873〜903頁、N.Y.、1991を参照されたい）。チロシナーゼは、チロシンのヒドロ
キシル化およびＤＯＰＡからＤＯＰＡキニーネへの酸化を触媒する。したがって、阻害剤
がチロシナーゼの活性部位に結合すると、メラニン形成の減少が生じる。一般に、Prota,
G.、Melanins and Melanogenesis、Academic Press, Inc.（San Diego、1992）を参照さ
れたい。

酸化的なプロセスが、メラニン産生の非酵素的なステップに関与する。ＤＯＰＡキノン
からメラニンへの変換が、非酵素的または自発的な化学反応を介して生じ、それらの中に
は、反応性酸素種（ＲＯＳ）または酸素ラジカルが関与するものがある。（例えば、ＵＶ
または太陽光への曝露に伴って生じ得る）反応性酸素／酸素ラジカル種の刺激による等の
メラニン形成細胞に対する酸化ストレスにより、メラニン形成細胞内におけるメラニン産
生経路が開始する。種々の抗酸化剤／ラジカル捕捉剤が、これらのプロセスを妨害するの
を支援し、したがって、皮膚を美白する利益を達成するために使用されている。

アラキドン酸から誘導される代謝産物が、皮膚中で、特に、環境からの侵襲、例として
、ＵＶ、スモッグおよび他のそのような刺激物質に応答して、強力な炎症性メディエータ
ーとして働くことは知られている。この経路において、膜のリン脂質が、ホスホリパーゼ
Ａ２によりアラキドン酸（ＡＡ）に変換される。ＡＡは、形成されると、２つの競合する
生物学的経路のうちの１つ、すなわち、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）経路または５−
リポオキシゲナーゼ経路のいずれかにより活用される。ＣＯＸ炎症経路中の最も関連があ
る酵素がＣＯＸ−２であり、ＣＯＸ−２は、アラキドン酸からＰＧＨ２への変換を触媒し
、ＰＧＨ２は、ＰＧＥ２等のプロスタグランジンに迅速に変換される一過性分子である。
プロスタグランジンは、刺激部位において炎症応答を惹起するのに関与する局所メッセン
ジャーとして作用するオートクリンまたはパラクリンである。

イチジク漿液画分の皮膚内への吸収が、ＣＯＸ−２を阻害し、アラキドン酸から誘導さ
れる代謝産物がプロスタグランジンに変換されるのを阻止する。正味の効果が、基礎およ
び誘発型の両方のプロスタグランジンのプールの低減である。プロスタグランジンのレベ
ルの低減により、炎症応答の直接的な低減および結果として生じる下流のメッセンジャー
活性全ての低減の両方が生じる。これらのメッセンジャー活性のうちの２つとして、メラ
ニン形成細胞中のメラニン合成の活性化および線維芽細胞中のコラーゲン産生の阻害が挙
げられる。

プロスタグランジンが、メラニン産生に関与する酵素であるチロシナーゼの量を増加さ
せることによって、メラニン形成細胞を刺激することは知られている。メラニン形成細胞
の刺激およびメラニンの過剰産生により、色素沈着過剰が生じ、これは、皮膚の領域の黒
ずみとして観察される。炎症により引き起こされる、したがって、プロスタグランジンの
メラニン形成細胞に対する直接的な刺激の結果生じる変色を、炎症後の色素沈着過剰と呼
ぶ。イチジク漿液画分によるＣＯＸ２の阻害が引き起こすプロスタグランジン産生の低減
により、メラニン産生の低減およびより均等な色調の皮膚が得られるであろう。

プロスタグランジンＰＧＥ_２が、ヒト皮膚線維芽細胞、ラット糸球体間質細胞および肝
臓星状細胞を含めた、多様な細胞中のＩ型および／またはＩＩＩ型のコラーゲン合成の低
減に対して顕著な作用を有することが示されている［ｒｅｆ］。Ｉ型およびＩＩＩ型が、
皮膚真皮を構成するコラーゲンの顕著な形態であることから、このことは、炎症に応答し
たＰＧＥ_２レベルの上昇が、コラーゲン合成の阻害をもたらすことを支持している。ＡＡ
およびＰＧＥ_２が、コラーゲン合成に対する阻害作用を有することが示されている。オメ
ガ−３脂肪酸であるＥＰＡおよびＤＨＡを含めた、自然から得られるＣＯＸ−２阻害剤を
添加することによって、ＰＧＥ_２により引き起こされるコラーゲン合成の阻害を相殺し、
コラーゲン合成の正味の増加をもたらすことが可能であった。したがって、イチジク漿液
画分は、ＣＯＸ２を阻害することによって、皮膚の質感を改善すると思われ、ＣＯＸ２の
阻害は、コラーゲンの阻害を引き起こすプロスタグランジンの形成を低減させる。

イチジク漿液画分が、皮膚に局所適用される場合、従来のイチジク抽出物と比較して、
哺乳動物皮膚中の色素沈着過剰域の美白を含めた、優れた皮膚の美白作用を達成すること
を予想外に見出すに至った。さらに、解析試験により、本発明のイチジク漿液画分は、メ
ラニン合成を複数の作用機構を介して妨害し、酵素的経路および非酵素的経路の両方に影
響を及ぼすことも示すに至った。ＦＳＦにより、従来のイチジク抽出物と比較して、生理
活性を増強するに至った。生理活性には、酵素阻害活性、フリーラジカル捕捉活性、抗酸
化活性、およびメラニン合成阻害活性のうちの１つまたはそれらの組合せが含まれる。酵
素阻害活性として、これらに限定されないが、チロシナーゼ、エラスターゼ、トリプシン
、およびシクロオキシゲナーゼ−２（「ＣＯＸ−２」）の阻害活性のうちの１つまたはそ
れらの組合せが挙げられる。抗酸化活性として、これに限定されないが、酸素ラジカル吸
収能力が挙げられる。

また、本研究者らは、従来のイチジク抽出物も、例として、色素沈着過剰に対する利益
をもたらすことができることを示しているが、これら従来の抽出物は、同様には効能を示
さず、これらが示す特性は、化粧用組成物中で使用するには、適切性が劣り、したがって
、あまり望ましくない。

図５に示すように、ＦＳＦは、より高いレベル（約１０×）のカテキンおよび関連の縮
合タンニンを有する。カテキン等のタンニンの縮合したもの（プロアントシアニジン）は
、フラバノールのクラスである。プロアントシアニジンは本質的には、カテキン等のフラ
ボノイドのポリマー鎖である。タンニンは、ヒト体内において生物学的抗酸化剤（フリー
ラジカル捕捉剤）として機能すると考えられており、皮膚に対する酸化による損傷、例と
して、加齢により引き起こされる損傷と闘うのに有効であると広く考えられている。さら
に、抗酸化剤は、内部および環境のストレス、例として、タバコの喫煙および汚染の作用
からの保護を支援することができ、正常な身体の代謝プロセスを支持することもできる。
（Kehrer, J.P.、Crit. Rev. Toxicol、1993、23、21）。また、図７は、ＦＳＦが、より
高いレベルの遊離のチロシン、フェニルアラニンおよびトリプトファンを含有したことも
示し、これらは、必須アミノ酸である。しかし、図６に示すように、検出された３つのカ
フェオイルキナ酸の異性体のレベルは、２つの試料の間で実質的に異なるようには見えな
かった。

Ｂ．皮膚色調作用剤
いくつかの実施形態では、組成物中に、皮膚色調作用剤を、ＦＳＦと組み合わせて含め
るのが望ましい場合がある。全体的な皮膚色調をさらに改善するために、皮膚色調作用剤
を含めることができる。本発明の組成物は、組成物の重量に関して、最高約５０％、４０
％、３０％、２０％、１０％、５％または３％の皮膚色調作用剤を、存在する場合には含
有する。本発明の組成物は、組成物の重量に関して、少なくとも約０．００１％、０．０
１％、０．１％、０．２％、０．５％または１％の皮膚色調作用剤を、存在する場合には
含有する。適切な範囲として、組成物の重量に関して、約０．１％〜約５０％、約０．２
％〜約２０％、または約１％〜約１０％の適切な範囲を含む、皮膚色調作用剤の下限と上
限との任意の組合せが挙げられる。本明細書に列挙する量は、手引きとしてのみ使用すべ
きである。これは、皮膚色調作用剤の効力がかなり変化するので、それらの最適な量は、
選択される特定の活性物質に依存するからである。

適切な皮膚色調作用剤として、これらに限定されないが、糖アミン、ビタミンＢ３化合
物、アルブチン、デオキシアルブチン、１，３−ジヒドロキシ−４−アルキルベンゼン、
例として、ヘキシルレゾルシノール、スクロースジラウランテ（dilaurante）、バクチオ
ール（４−［（１Ｅ，３Ｓ）−３−エテニル−３，７−ジメチル−１，６オクタジエニル
］フェノールまたはモンテルペン（monterpene）フェノール）、ｐｙｒｅｎｏｉｎｅ（Ｂ
ｉｏｔｅｃｈ Ｍａｒｉｎｅ、フランスから入手可能）、キビ（panicum miliaceum）種
子の抽出物、ａｒｌａｔｏｎｅ二酸、桂皮酸、フェルラ酸、ａｃｈｒｏｍａｘｙｌ、メチ
ルニコチンアミド、油溶性の甘草抽出物、葉酸、ウンデシレン酸（すなわち、ウンデセン
酸）、ウンデシレン酸亜鉛、チアミン（ビタミンＢ１）およびその塩酸塩、Ｌ−トリプト
ファン、ヒマワリ（helianthus annuus）（サンフラワー）およびブドウ（vitis vinifer
a）（葡萄）の葉の抽出物、カルノシン（すなわち、ドラゴシン（dragosine））、ゲンチ
ジン酸メチル、１，２−ヘキサンジオールおよび１，２−オクタンジオール（すなわち、
Ｓｙｍｄｉｏｌ６８として、Ｓｙｍｒｉｓｅ ＡＧ、ドイツにより販売されている組合せ
）、イノシトール、デシレノイルフェニルアラニン（decylenoylphenylalanine）（例え
ば、商品名Ｓｅｐｉｗｈｉｔｅで、Ｓｅｐｐｉｃ、フランスにより販売されている）、コ
イジック酸（koijic acid）、ヘキサミジン化合物、サリチル酸、ならびにレチノールお
よびプロピオン酸レチニルを含めた、レチノイドが挙げられる。

特定の実施形態では、追加の皮膚色調作用剤が、ビタミンＢ３化合物、糖アミン、ヘキ
サミジン化合物、サリチル酸、１，３−ジヒドロキシ−４−アルキルベンゼン、例として
、ヘキシルレゾルシノール、およびレチノイドから選択される。本明細書で使用する場合
、「ビタミンＢ３化合物」は、式：

［式中、Ｒは、−ＣＯＮＨ_２（すなわち、ナイアシンアミド）、−ＣＯＯＨ（すなわち、
ニコチン酸）、または−ＣＨ_２ＯＨ（すなわち、ニコチニルアルコール）；それらの誘導
体；および前述のうちのいずれかの塩である］を有する化合物を意味する。本明細書で使
用する場合、「糖アミン」は、異性体および当該の互変異性体、ならびにその塩（例えば
、ＨＣｌ塩）およびその誘導体を含む。糖アミンの例として、グルコサミン、Ｎ−アセチ
ルグルコサミン、マンノサミン、Ｎ−アセチルマンノサミン、ガラクトサミン、Ｎ−アセ
チルガラクトサミン、それらの異性体（例えば、立体異性体）、およびそれらの塩（例え
ば、ＨＣｌ塩）が挙げられる。本明細書で使用する場合、「ヘキサミニド（hexaminide）
化合物」は、式：

［式中、Ｒ^１およびＲ^２は、任意選択であり、または有機酸（例えば、スルホン酸等）で
ある］を有する化合物を意味する。一実施形態では、ヘキサミジン化合物は、ジイセチオ
ン酸ヘキサミジンである。

Ｃ．抗炎症剤
色素沈着過剰は、皮膚の炎症の結果生じる場合がある。色素沈着過剰、より具体的には
、炎症後の色素沈着過剰を引き起こす一過性の炎症性事象として、これらに限定されない
が、挫瘡病変、中に成長した毛、引っ掻き傷、昆虫の咬傷、表面活性物質による損傷、ア
レルゲン、および短期のＵＶ曝露が挙げられる。炎症後の色素沈着過剰を含めて、炎症誘
発型の色素沈着過剰は、本発明の組成物中に抗炎症剤を組み込むことによって管理するこ
とができる。本発明の組成物は、組成物の重量に関して、最高約２０％、１０％、５％、
３％または１％の抗炎症剤を、存在する場合には含有する。本発明の組成物は、組成物の
重量に関して、少なくとも約０．００１％、０．０１％、０．１％、０．２％、０．３％
、０．５％または１％の抗炎症剤を、存在する場合には含有する。適切な範囲として、下
限と上限との任意の組合せが挙げられる。適切な抗炎症剤として、これらに限定されない
が、非ステロイド性抗炎症剤（これらに限定されないが、イブプロフェン、ナプロキセン
、フルフェナム酸、エトフェナメート、アスピリン、メフェナム酸、メクロフェナム酸、
ピロキシカムおよびフェルビナクを含めた、ＮＳＡＩＤ）、グリチルリジン酸（グリチル
リジン、グリチルリキシン酸（glycyrrhixinic acid）、およびグリチルレチン酸（glycy
rrhetinic acid）配糖体としてもまた知られている）およびグリチルリチン酸二カリウム
等の塩、グリチルレテン酸（glycyrrhetenic acid）、甘草抽出物、ビサボロール（例え
ば、アルファビサボロール）、マンジスタ（manjistha）（アカネ属の植物、特に、茜草
根（Rubia cordifolia）から抽出される）およびグッガル（guggal）（ミルラノキ属の植
物、特に、グッグル（Commiphora mukul）から抽出される）、コーラ抽出物、カモミール
、アカツメクサ抽出物、ならびにムチサンゴ抽出物（ヤギ目の植物からの抽出物）、前述
のうちのいずれかの誘導体、さらに、それらの混合物が挙げられる。

Ｄ．日焼け止め活性物質
対象の発明の組成物は、１つまたは複数の日焼け止め活性物質（もしくは日焼け止め剤
）および／または紫外光吸収体を含むことができる。本明細書においては、「日焼け止め
活性物質」は、日焼け止め活性物質、日焼け止め剤および／または紫外光吸収体をまとめ
て含む。日焼け止め活性物質は、日焼け止め剤および物理的なサンブロックの両方を含む
。日焼け止め活性物質は、有機であってもまたは無機であってもよい。適切な日焼け止め
活性物質の例が、Personal Care Product Council's International Cosmetic Ingredien
t Dictionary and Handbook、Thirteenth Editionに、「日焼け止め剤」として開示され
ている。特に適切な日焼け止め活性物質が、ｐ−メトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル（Ｐ
ＡＲＳＯＬ（商標）ＭＣＸとして市販されている）、４，４’−ｔ−ブチルメトキシジベ
ンゾイル−メタン（ＰＡＲＳＯＬ（商標）１７８９として市販されている）、２−ヒドロ
キシ−４−メトキシベンゾフェノン、オクチルジメチル−ｐ−アミノ安息香酸、トリオレ
イン酸ジガロイル、２，２−ジヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、アミノ安息香
酸エチル−４−（ビス（ヒドロキシプロピル））、２−シアノ−３，３−ジフェニルアク
リル酸２−エチルヘキシル、サリチル酸２−エチルヘキシル、ｐ−アミノ安息香酸グルセ
リル、サリチル酸３，３，５−トリ−メチルシクロヘキシル、アントラニル酸メンチル、
ｐ−ジメチルアミノ安息香酸またはアミノ安息香酸エステル、ｐ−ジメチル−アミノ−安
息香酸２−エチルヘキシル、２−フェニルベンズイミダゾール−５−スルホン酸、２−（
ｐ−ジメチルアミノフェニル）−５−スルホンベンゾオキサゾン酸、オクトクリレン、酸
化亜鉛、ベンジリデンカンファーおよびその誘導体、二酸化チタン、ならびにそれらの混
合物である。

一実施形態では、組成物は、組成物の重量に関して、約１％〜約２０％、代替として、
約２％〜約１０％の日焼け止め活性物質を含むことができる。正確な量は、選ばれる日焼
け止め活性物質および所望の紫外線防御指数（ＳＰＦ）に応じて変化し、このことは、当
業者の知識に属する。

Ｅ．任意選択の構成成分
多様な他の成分の、本発明の利益にもたらす変化が許容できるならば、本発明の組成物
は、それらを含有することができる。本発明の組成物は、組成物の重量に関して、約０．
０００１％〜約５０％、約０．００１％〜約２０％、またはそれに代わって、約０．０１
％〜約１０％の任意選択の構成成分を、存在する場合には含有することができる。本明細
書に列挙する量は、手引きとしてのみ使用すべきである。これは、組成物中で使用する任
意選択の構成成分の効力がかなり変化するので、それらの最適な量は、選択される特定の
活性物質に依存するからである。したがって、本発明において有用ないくつかの任意選択
の構成成分の量は、本明細書に列挙する範囲外である場合がある。

任意選択の構成成分は、組成物中に組み込む場合、過度の毒性、不和合性、不安定性、
アレルギー応答等がなく、ヒト皮膚組織と接触させて使用するのに適しているべきである
。本発明の組成物は、任意選択の構成成分、例として、抗挫瘡活性物質、剥離活性物質、
抗セルライト剤、キレート化剤、フラボノイド、日焼け活性物質、非ビタミン性抗酸化剤
およびラジカル捕捉剤、体毛成長調節物質、抗シワ活性物質、抗萎縮活性物質、鉱物、植
物ステロールおよび／または植物ホルモン、Ｎ−アシルアミノ酸化合物、抗菌活性物質ま
たは抗真菌活性物質、ならびに他の有用な皮膚ケア活性物質を含むことができ、これらは
、米国出願公開第ＵＳ２００６／０２７５２３７Ａ１号および第ＵＳ２００４／０１７５
３４７Ａ１号にさらに詳細に記載されている。

Personal Care Product Council's International Cosmetic Ingredient Dictionary a
nd Handbook、Thirteenth Editionには、皮膚ケア業界で一般的に使用される、多種多様
な、非限定的な化粧用成分および医薬成分が記載されており、これらは、本発明の組成物
中で使用するのに適切な任意選択の構成成分である。これらの成分のクラスの例として、
研磨剤、吸収剤、審美的な構成成分、すなわち、芳香剤、色素、着色料／着色剤等、エッ
センシャルオイル、抗固化剤、泡止め剤、抗菌剤、結合剤、生物学的添加剤、緩衝化剤、
増量剤、キレート化剤、化学的添加剤、着色剤、化粧用収斂剤、化粧用殺生物剤、変性剤
、薬物としての収斂剤、エモリエント剤、局所用鎮痛剤、フィルム形成剤またはフィルム
材料、不透明化剤、ｐＨ調節剤、防腐剤、噴霧剤、還元剤、捕捉剤、皮膚冷却剤、皮膚保
護剤、増粘剤粘度改変物質、ビタミン、およびそれらの組合せが挙げられる。

Ｆ．皮膚科学的に許容できる担体
また、本発明の組成物は、組成物にとって皮膚科学的に許容できる担体（これは、「担
体」と呼ぶことができる）も含むことができる。「皮膚科学的に許容できる担体」という
語句は、本明細書で使用する場合、担体が、角質組織への局所適用に適しており、良好な
審美特性を有し、組成物中の活性物質に適合し、不合理な安全性または毒性の懸念をいず
れも引き起こさないことを意味する。一実施形態では、担体は、組成物の重量に関して、
約５０％〜約９９％、約６０％〜約９８％、約７０％〜約９８％、または代替として、約
８０％〜約９５％のレベルで存在する。

担体は、多種多様な形態をとることができる。非限定的な例として、単純な溶液（例え
ば、水性溶媒、有機溶媒または油に基づいた溶液）、エマルジョン、および固体の形態（
例えば、ジェル、スティック、流動性固体または非結晶性材料）が挙げられる。特定の実
施形態では、皮膚科学的に許容できる担体は、エマルジョンの形態をとる。エマルジョン
は一般に、連続的な水相（例えば、水中油型および水中油中水型）または連続的な油相（
例えば、油中水型および油中水中油型）を有すると分類することができる。本発明の油相
は、シリコーンオイル；炭化水素油、エステル、エーテル等の非シリコーンオイル油等、
およびそれらの混合物を含むことができる。

水相は典型的には、水を含む。しかし、他の実施形態では、水相は、これらに限定され
ないが、水溶性の保湿剤、調質剤、抗菌剤、保水剤、および／または他の水溶性の皮膚ケ
ア活性物質を含めた、水以外の構成成分を含むことができる。一実施形態では、組成物の
非水性構成成分は、グリセリンおよび／または他のポリオール等の保水剤を含む。しかし
、組成物は、実質的に無水（すなわち、１％未満の水）であってもまたは完全に無水であ
ってもよいことを認識すべきである。

適切な担体を選択して、所望の製品形態を得る。さらに、構成成分（例えば、ＦＳＦ、
日焼け止め活性物質、追加の構成成分）の溶解性または分散性により、担体の形態および
特徴が定まる場合もある。一実施形態では、水中油型または油中水型のエマルジョンが好
ましい。

エマルジョンは、乳化剤をさらに含むことができる。組成物は、担体を十分に乳化する
のに適した任意のパーセントの乳化剤を含むことができる。適切な重量範囲は、組成物の
、約０．１重量％〜約１０重量％または約０．２重量％〜約５重量％の乳化剤を含む。乳
化剤は、非イオン性、アニオン性またはカチオン性であり得る。適切な乳化剤が、例えば
、米国特許第３，７５５，５６０号、米国特許第４，４２１，７６９号、およびMcCutche
on's Detergents and Emulsifiers、North American Edition、317〜324頁(1986)に開示
されている。適切なエマルジョンは、所望の製品形態に応じて、広い範囲の粘度を有する
ことができる。

適切な粘度およびレオロジー的特徴を有する組成物を提供するために、当技術分野でよ
く知られているが、担体は、増粘剤をさらに含んでもよい。

Ｇ．例示的な組成物
本発明の組成物の非限定的な例を以下に示す。これらの例は例証の目的でのみ示し、当
業者であれば認識するであろうが、多くのそれらの変更形態が、本発明の精神および範囲
から逸脱することなく可能であることから、これらの例が本発明を限定すると解釈しては
ならない。例中、全ての濃度を、別段の記載がない限り、重量パーセントとして記載し、
微量の材料、例として、希釈剤、充填剤等は除外することができる。したがって、記載の
製剤は、記載する構成成分およびそのような構成成分に伴う任意の微量の材料を含む。当
業者に明らかなように、これらの微量の材料の選択は、本明細書に記載する本発明を作製
するために選択される特定の成分の物理的および化学的な特徴に応じて変化する。

全ての例を使用して、１つまたは複数の色素沈着過剰性シミの外観を処置または改善す
ることができる。さらに、本発明は、第１の組成物（例えば、例ＡまたはＢ）による、１
つまたは複数の色素沈着過剰性シミについての局部的な処置、および第２の組成物（例え
ば、例Ｃ、ＤおよびＥ）による、より広いまたは全般的な顔面皮膚の処置が関与するレジ
メンにも関し得、後者は、局部的な処置の前または後に適用して、顔面にわたり皮膚色調
を改善することができる。

本発明の組成物は一般に、局所用組成物の作製の技術分野で知られている方法等の従来
法により調製する。そのような方法は典型的には、１つまたは複数のステップにおいて、
成分を比較的一様な状態に混合することを含み、これには、加熱、冷却、真空の適用等が
伴う場合または伴わない場合がある。典型的には、脂肪性相材料とは別個に、水相材料を
最初に混合し、次いで、必要に応じて、２つの相を組み合わせて、所望の連続相を得るこ
とによって、エマルジョンを調製する。組成物は、好ましくは、活性材料の安定性（物理
的安定性、化学的安定性、光安定性）および／または送達を最適化するように調製する。
この最適化は、適切なｐＨ（例えば、７未満）、活性のある作用剤と複合体を形成する、
したがって、安定性または送達に望まれない影響を及ぼす可能性がある材料の排除（例え
ば、混入している鉄の排除）、複合体の形成を阻止するためのアプローチ（例えば、適切
な分散化剤または二重コンパートメントのパッケージング）の使用、適切な光安定性アプ
ローチの使用（例えば、日焼け止め／サンブロックの組込み、不透明パッケージングの使
用）等を含むことができる。

本発明の組成物は、好ましくは、０．０１％または約０．０１％から１０％または約１
０％までのイチジク漿液画分を含有し、より好ましくは、０．０５％または約０．０５％
から５％または約５％まで、最も好ましくは、０．１％または約０．１％から５％または
約５％まで、例えば、２％のイチジク漿液画分を含有する。

Ｈ．皮膚を美白するための方法
本発明の組成物は、哺乳動物皮膚（とりわけ、ヒト皮膚、よりとりわけ、顔面および手
の皮膚）を美白するのに有用である。組成物は、皮膚の色素沈着過剰域を美白するのにと
りわけ有用である。

（色素沈着過剰域を含めた）皮膚を美白する方法は、本発明の組成物の安全かつ有効な
量を皮膚に局所適用することを含む。一実施形態では、本発明の化粧用組成物は、０．０
１％〜１０％のイチジク漿液画分を含むことができる。適用する組成物の量、適用頻度お
よび使用期間は、所与の組成物のイチジク漿液画分および／または他の構成成分のレベル
に応じて、かつ例えば、対象内に存在する皮膚の色素沈着のレベルおよび皮膚のさらなる
色素沈着の速度に照らして所望される、美白するレベルに応じて大きく変化する。

好ましい実施形態では、組成物を、皮膚に長期継続的に適用する。「長期継続的な局所
適用」とは、対象の生存期間の間、長期間にわたり、好ましくは、少なくとも約１週間、
より好ましくは、少なくとも約１カ月間、さらにより好ましくは、少なくとも約３カ月間
、さらにより好ましくは、少なくとも約６カ月間、さらにより好ましくは、少なくとも約
１年間、組成物を実質的に連続して局所適用することを意味する。種々の最長期間（例え
ば、２、５、１０または２０年間）の使用の後に、利益を得ることができるが、対象の生
存期間を通して、長期継続的に適用し続けるのが好ましい。典型的には適用は、そのよう
な長期間にわたりおよそ、１日当たり約１または２回行われるであろうが、適用の割合は
、例えば、週約１回から最高１日当たり約３回以上まで変化し得る。

広い範囲の分量の本発明の組成物を利用して、皮膚を美白する利益をもたらすことがで
きる。１回の適用当たり通常適用する、提示する組成物の分量は、皮膚１ｃｍ２当たり約
０．１ｍｇ〜皮膚１ｃｍ２当たり約１０ｍｇである。特に有用な適用量は、皮膚１ｃｍ２
当たり約２ｍｇである。

「局所適用」という用語は、本明細書で使用する場合、本発明の組成物を皮膚表面上に
適用または塗布することを意味する。本発明の好ましい組成物は、局所適用の後に、皮膚
と接触した状態で長期間（例えば、数時間）にわたり残ることを意図する形態をとるもの
であり、例えば、典型的には、クリーム剤、ローション剤、保湿液等を使用する。

皮膚を美白する方法は、好ましくは、皮膚上に残って、何らかの審美的、予防的、処置
的なまたは他の利益をもたらすことを意図する皮膚用のローション剤、クリーム剤、化粧
品等の形態をとる組成物を局所適用することによって実行する。組成物の皮膚への適用の
後に、組成物は、好ましくは、少なくとも約１５分間、より好ましくは、少なくとも約３
０分間、さらにより好ましくは、少なくとも約Ｉ時間、最も好ましくは、少なくとも数時
間、例えば、最高約１２時間皮膚上に残る。

また、本発明の組成物は、皮膚の加齢の徴候、および皮膚の加齢に伴う、目に見えるお
よび／または触覚的な皮膚の不連続性を含めた、哺乳動物皮膚（とりわけ、ヒト皮膚、よ
りとりわけ、顔面および／または手の皮膚）の状態をより全般的に制御するのにも有用で
ある。そのような制御は、予防的および／または処置的な制御を含む。皮膚の状態の制御
は、本発明の組成物の安全かつ有効な量を皮膚に局所適用することを含む。適用する組成
物の量、適用頻度および使用期間は、所与の組成物のイチジク漿液画分および／または他
の構成成分のレベルに応じて、かつ例えば、対象内に存在する皮膚の加齢のレベルおよび
皮膚のさらなる加齢の速度に照らして所望される制御レベルに応じて大きく変化する。

Ｉ．イチジク漿液画分の生理活性
また、本発明は、メラニン形成（メラニン合成）における１つまたは複数のステップを
妨害するための化粧用組成物を色素沈着過剰領域に局所適用することによって、皮膚の色
素沈着過剰の外観を低減するための方法にも関する。化粧用組成物は、酵素阻害（トリプ
シン阻害活性および／もしくはチロシナーゼ阻害活性）、抗酸化活性（ＯＲＡＣおよびＤ
ＰＰＨ）、ならびに／またはＣＯＸ−２阻害をもたらし、それにより、メラニン形成にお
ける１つまたは複数のステップを妨害する。

生理活性を示す植物学的化粧用組成物を調製するための方法は、それにより、植物細胞
中に含有される活性の完全なスペクトルを捕捉する植物抽出物が得られるという点で、現
時点で入手可能な方法を上回って好都合である。実施例６に示すように、本発明のイチジ
ク抽出物は、従来の手段により抽出されたイチジクよりもさらに高い生理活性を示す。

本発明の一実施形態では、哺乳動物の皮膚を美白する方法は、有効量のイチジク漿液画
分を含む化粧用組成物を局所投与して、トリプシン活性を阻害するステップを含む。

本発明の別の実施形態は、哺乳動物の皮膚中のチロシナーゼ活性を阻害することによっ
て、哺乳動物の皮膚を美白する方法を含み、この方法は、有効量のイチジク漿液画分を含
む化粧用組成物を哺乳動物に局所投与するステップを含む。

正常な皮膚の色は、メラニンにより形成され、メラニンはまた、体毛および眼色も決定
する自然の色素である。皮膚中では、酵素チロシナーゼは、アミノ酸チロシンのメラニン
への変換に関与する生化学的経路にとって不可欠である。多過ぎるメラニンが産生され、
こうしたメラニンにより皮膚中に沈着物が形成されると、色素沈着過剰が生じる。色素を
作製する細胞は、メラニン形成細胞と呼ばれる。それらは、表皮の基部に位置する。メラ
ニン形成細胞は、メラノソームを産生し、メラノソームは、表皮の他の細胞上を通り、皮
膚の上層に達する。メラニンの合成は、メラノソーム中でのみ生じる。多過ぎるメラニン
が産生されると、沈着物が形成され、色素沈着過剰が皮膚中に出現する。

チロシナーゼは、モノフェノールから対応するカテコールへのｏ−ヒドロキシル化（モ
ノフェノラーゼ活性またはクレゾラーゼ活性）、およびモノフェノールから対応するｏ−
キノンへの酸化（ジフェノラーゼ活性またはカテコラーゼ活性）を触媒する、銅含有モノ
オキシゲナーゼである。チロシナーゼのこれらの機能は、メラニン形成の間のメラニン色
素の形成における重要な役割を果たす。メラニン産生は主に、皮膚の色に関与し、日光誘
発性の皮膚傷害の予防において重要な役割を果たす。しかし、皮膚中のメラニン産物の異
常な蓄積は、黒皮症、褐色斑、そばかすおよび老人性黒子を含めた、色素沈着過剰に関与
し、色素沈着過剰は、望まれない審美的な外観をもたらす可能性がある（Jeonら、(2005)
Bull. Korean Chem. Soc、Vol. 26: 1135〜1137）。

本発明は一般に、哺乳動物の皮膚組織内の皮膚の色素沈着または着色に関与する少なく
とも１つの酵素の活性の阻害に関する。イチジク漿液画分は、トリプシンの活性、ならび
にチロシナーゼおよび他のチロシナーゼ様酵素の活性を阻害することができる。さらに、
本発明は、スーパーオキシド捕捉活性を含めた、色素に関連する抗酸化活性（ＯＲＡＣお
よびＤＰＰＨ）、ならびにＣＯＸ−２阻害をもたらすことにも関する。

漿液から得られる化粧用組成物は、約５０〜１９０μｇ乾燥物質／ｍｌのＩＣＲ５０値
の範囲に及ぶスーパーオキシド捕捉効力を有する。本出願において使用する場合、「ＩＣ
Ｒ５０値」という用語は、チトクロームｃの還元を５０パーセント阻害するのに必要な、
細胞の漿液画分中に含有される乾燥物質の濃度を表す。

化合物は、１日数回の頻度で哺乳動物に投与してよく、あるいは化合物は、より少ない
頻度で、例として、１日１回、週１回、２週間に１回、月１回投与しても、もしくはさら
により少ない頻度で、例として、数カ月に１回投与してもよく、または投与は、年１回以
下であってもよい。投与の頻度は、当業者に容易に明らかになり、任意の数の因子、例と
して、これらに限定されないが、治療される疾患のタイプおよび重症度、動物のタイプお
よび年齢等に依存する。

Ｊ．任意選択の構成成分
所与の製品タイプ中で従来使用されている多様な他の成分の、本発明の利益にもたらす
変化が許容できるならば、本発明の組成物は、それらを含有することができる。組成物は
、皮膚科学的に許容できる担体を含むことができる。

任意選択の構成成分は、組成物中に組み込む場合、妥当な判断の範囲内で、過度の毒性
、不和合性、不安定性、アレルギー応答等がなく、ヒト皮膚組織と接触させて使用するの
に適しているべきである。CTFA Cosmetic Ingredient Handbook、Second Edition (1992)
には、皮膚ケア業界で一般的に使用される、多種多様な、非限定的な化粧用成分および医
薬成分が記載されており、これらは、本発明の組成物中で使用するのに適している。これ
らの成分のクラスの例として、研磨剤、吸収剤、審美的な構成成分、すなわち、芳香剤、
色素、着色料／着色剤等、エッセンシャルオイル、抗固化剤、泡止め剤、結合剤、生物学
的添加剤、緩衝化剤、増量剤、キレート化剤、化学的添加剤、着色剤、化粧用収斂剤、化
粧用殺生物剤、変性剤、薬物としての収斂剤、局所用鎮痛剤、フィルム形成剤またはフィ
ルム材料、例えば、フィルム形成特性および組成物の染色性を援助するためのポリマー（
例えば、エイコセンとビニルピロリドンとのコポリマー）、不透明化剤、ｐＨ調節剤、噴
霧剤、還元剤、捕捉剤、ならびに増粘剤が挙げられる。

いくつかの実施形態では、組成物中に、第２、第３または第４の皮膚色調作用剤を、Ｆ
ＳＦと組み合わせて含むのが望ましい場合がある。第２、第３または第４の皮膚色調作用
剤を含めて、全体的な皮膚色調をさらに改善することができる。本発明の組成物は、好ま
しくは、組成物の重量に関して、約０．１％〜約５０％、より好ましくは、約０．２％〜
約２０％、さらにより好ましくは、約１％〜約１０％の追加の皮膚色調作用剤を、存在す
る場合には含有する。本明細書に列挙する量は、手引きとしてのみ使用すべきである。こ
れは、それらの効力がかなり変化するので、追加の皮膚色調作用剤の最適な量は、選択さ
れる特定の活性物質に依存するからである。好ましい皮膚色調作用剤として、これらに限
定されないが、Ｎ−アセチルグルコサミン、ビタミンＢ３、およびウンデシレノイルフェ
ニルアラニン（undecylenoylphenylalanine）（例えば、商品名Ｓｅｐｉｗｈｉｔｅで、
Ｓｅｐｐｉｃ、フランスで販売されている）が挙げられる。いくつかの実施形態では、１
つの組成物（例えば、表番号１の組成物番号１）を、１つまたは複数の色素沈着過剰性シ
ミについての局部的な処置として使用することができ、一方、１つまたは複数の他の組成
物（例えば、表番号１の組成物番号２、番号３および番号４）を、特殊化した処置の前ま
たは後に、顔面皮膚表面により広く適用して、顔面にわたり皮膚色調を改善することがで
きる。

本発明の局所用組成物は、これらに限定されないが、ローション剤、乳液、ムース、セ
ラム、スプレー、エアロゾル、泡剤、スティック、ペンシル、ジェル剤、クリーム剤およ
び軟膏剤を含めた、多様な形態をとって提供することができる。一実施形態では、組成物
は、液剤の形態をとり、別の実施形態では、組成物は、ローション剤の形態をとる。

Ｋ．組成物の調製
本発明の組成物は一般に、局所用組成物の作製の技術分野で知られている方法等の従来
法により調製する。そのような方法は典型的には、１つまたは複数のステップにおいて、
成分を比較的一様な状態に混合することを含み、これには、加熱、冷却、真空の適用等が
伴う場合または伴わない場合がある。組成物は、好ましくは、活性材料の安定性（物理的
安定性、化学的安定性、光安定性）および／または送達を最適化するように調製する。こ
の最適化は、適切なｐＨ（例えば、７未満）、活性のある作用剤と複合体を形成する、し
たがって、安定性または送達に望まれない影響を及ぼす可能性がある材料の排除（例えば
、混入している鉄の排除）、複合体の形成を阻止するためのアプローチ（例えば、適切な
分散化剤または二重コンパートメントのパッケージング）の使用、適切な光安定性アプロ
ーチの使用（例えば、日焼け止め／サンブロックの組込み、不透明パッケージングの使用
）等を含むことができる。

Ｌ．処置方法
一実施形態では、使用者が、処置するための色素沈着過剰性シミを選択し、第１の組成
物を、色素沈着過剰性シミに、少なくとも１日１回、より好ましくは、１日２回、少なく
とも約４週間適用する。別の実施形態では、第１の組成物を、選択された色素沈着過剰性
シミに、少なくとも約８週にわたり適用する。第１の組成物は、任意の形態をとり得る。
一実施形態では、組成物は、液剤の形態をとり、これを、色素沈着過剰性シミに、スポイ
トを用いて局所適用する。第１の組成物を色素沈着過剰性シミに局所適用することができ
る他のアプリケーターを使用してもよい。例えば、液剤、ローション剤または本明細書に
記載する他の形態等の第１の組成物を放出可能に保持する、発泡体または綿からなる先端
を有するアプリケーターを使用して、組成物を色素沈着過剰性シミに適用することができ
る。別の実施形態では、組成物を、１つまたは複数の色素沈着過剰性シミに、かつ１つま
たは複数の顔面皮膚表面により全般的に、同時（すなわち、同じ処置サイクル内）に適用
する。

場合によっては、処置方法は、１回の処置サイクル中に第１の組成物による局部的な処
置を行うための、複数の色素沈着過剰性シミを選択するステップを含む。本明細書で使用
する場合、処置サイクルは、組成物の意図される皮膚表面への単回の適用を指す。例えば
、第１の組成物の１つまたは複数の色素沈着過剰性シミへの、適度に短い連続した間の（
例えば、１〜３０分の期間にわたる）単回の適用は、単回の処置サイクルを構成するであ
ろう。対照的に、第１の組成物の１つまたは複数の色素沈着過剰性シミへの１日２回の単
回の適用は、２回の処置サイクルを構成し、この場合、適用は、より長い期間相互に隔た
る（例えば、１〜１２時間の間隔がある）。

一実施形態では、処置方法は、第１の組成物を、第１の組成物の前または後に適用され
る第２の組成物と組み合わせて適用するステップを含み、第２の組成物を、１つまたは複
数の顔面皮膚表面により全般的に適用して、顔面皮膚の全体的な色調の外観を改善する。
第２の組成物を、前頭部、口周囲、顎、眼窩周囲、鼻および頬の皮膚表面のうちの１つま
たは複数に適用することができる。一実施形態では、第２の組成物を、単回の処置サイク
ル中に、少なくとも頬、前頭部および顎／口周囲の皮膚表面に同時に適用する。色素沈着
過剰性シミの局部的な処置と比較して、第２の組成物が適用されるより大きな表面積が与
えられる。

本明細書に記載するいくつかの方法は、本発明の組成物を、アプリケーターを用いて適
用することを企図するが、アプリケーターは必ずしも必要でなく、また、本発明の組成物
は、直接適用しても、または１本の指を使用して（もしくは何らかの他の様式で）適用し
てもよいことが理解されるであろう。さらに、本発明の一実施形態は、組成物を色素沈着
過剰性シミに局所適用することを企図するが、本発明の組成物は、１つまたは複数の顔面
皮膚表面により全般的に適用して、それらの顔面皮膚領域内に並ぶ色素沈着過剰性シミの
外観を低減することができることも理解されるであろう。

以下の実施例を、本発明の種々の実施形態の特定の特徴および利点を例証するために提
供するが、実施例がそれらの範囲を限定すると解釈してはならない。

ここで、本発明を、以下の実施例を参照して記載する。これらの実施例は、例証のため
のみに提供し、いかなる場合であっても、これらの実施例により、本発明が限定されると
解釈されるべきではなく、それどころか、本発明は、本明細書において提供する教示の結
果として明らかになるあらゆる変更形態を包含すると解釈すべきである。

ベンガルボダイジュ（Ficus benghalensis）の新鮮葉から得られる、生理活性を示す漿液
画分の調製。
図１は、新鮮イチジク葉から得られる、生理活性を示す漿液画分を調製するためのプロ
セスの一実施形態を示す概略図である。

十分な量のベンガルボダイジュ（Ficus benghalensis）の新鮮葉を収集して、およそ１
００ｋｇの乾燥物質を得た。新鮮葉中の乾燥物質のレベルは、３２．０１％であると測定
され、１００ｋｇの乾燥物質を得るためには、およそ３１２．４ｋｇの新鮮植物葉の収穫
を必要とした。注意を払って、新鮮葉に内在する水分含量を保存し、水分喪失に起因する
萎凋を回避した。収集した新鮮葉に対する損傷はいずれも回避するかまたは最小限に留め
るように、収集を実施した。全てのステップを可能な最も短い期間で完了して、新鮮葉の
、日光、高い温度、および他の望ましくない環境要因に対する曝露を最小限に留めた。

次いで、収集した葉を、≦１ｋｇ／ｃｍ２の水圧で、≦５分間洗浄して、さらに加工す
る前に、葉から土壌粒子および他のデブリを除去した。残余の洗浄水は、いずれの緑色ま
たは褐色の色素も含有せず、葉組織が完全であり、水圧および洗浄の持続時間が適切であ
ったこと示した。過剰な水を、洗浄した葉から除去した。次いで、洗浄した新鮮イチジク
葉を、機械により分離し、これにより、実質細胞の細胞内材料のうちのほとんどを含有す
る、繊維を含有しない、細胞汁と、細胞壁を主に含有する、繊維に富む材料とが有効に分
離された。分離プロセスの前または間に、外来の溶媒および水は添加しなかった。

洗浄した葉に、粉砕、浸軟およびプレスを行って、液体の細胞内内容物（すなわち、細
胞汁）を得、細胞内内容物と、繊維に富む材料とを分離した。５ＨＰのエンジンおよび一
連のスクリーンを有するハンマーミル（Ｍｏｄｅｌ ＶＳ３５、Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｃｏｒ
ｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｔａｍｐａ、ＦＬ）を使用して、葉を粉砕して、適切な小さなサイズ
の葉組織の粒子を、最短の時間内に、バイオマス温度を顕著に増加させることなく得た。
≦２．０センチメートルの最大サイズの浸軟した葉の粒子を、≦１０秒の処理の間に生成
するように、ハンマーミルを設定した。浸軟した新鮮葉の温度は、≦２℃だけ増加するに
過ぎなかった。

圧縮空気により支持されるコーンが装備されている水平式連続型スクリュープレス（Ｃ
ｏｍｐａｃｔ Ｐｒｅｓｓ ＣＰ−６、Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｔａ
ｍｐａ、ＦＬ）を直ちに使用して、浸軟した新鮮葉から細胞汁を得た。コーン上の圧力を
、≧１５ｇ／ｃｍ２のレベルで維持し、１２ｒｐｍのスクリュー速度を用いた。これらの
条件下では、細胞汁の温度は、≦５℃だけ増加するに過ぎなかった。

この処理により、繊維に富む材料、および細胞汁を得た。完全自動排出ユニットを有す
る連続流型遠心分離機（Ｍｏｄｅｌ １２−４１３Ｖ、ＡＭＬ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，
Ｉｎｃ．、Ｈａｔｂｏｒｏ、ＰＡ）を使用する浄化により、細胞汁から、残余の小さな繊
維粒子をさらに除去した。２リットル／分の流速では、≦２，２５０ｇにおける、細胞汁
の浄化ための保持時間は、≧１００秒であった。上記のレジメンにより、繊維を含有しな
い、細胞汁が生成された。小さな繊維粒子を含有する沈殿物を、収集し、新鮮葉のプレス
の後に生じた残りの、繊維に富む材料と合わせた。

上記のプロセスにより、９．２９％の乾燥物質含有量を有する、細胞汁１６０．９ｋｇ
、および５６.１４％の乾燥物質含有量を有する、繊維に富む材料１５１．５ｋｇの生成
が可能であった。細胞汁を、しっかり閉じる１５リットルの長方形のＨＤＰＥ製容器中に
遅滞なく置き、−３０℃で凍結した。固体状態の凍結した細胞汁を、さらに活用するため
に、この低い温度で保った。

細胞汁は、３つの主要なタイプの構成成分、すなわち、（ｉ）膜結合型の葉緑体、ミト
コンドリア、小胞体、核、リソソーム、ペルオキシソーム、空胞、ゴルジ体；および（ｉ
ｉ）非膜結合型リボゾーム、微小管；および（ｉｉｉ）上記の群に関係しない構成成分、
例として、細胞質を含む。細胞汁中の、オルガネラおよびそれらの断片、ならびに望まれ
ない色素およびタンパク質の存在に起因して、これらに限定されないが、色、溶解性、透
明性、安定性およびｉｎ ｖｉｔｒｏにおける活性を含めた、機能特性の望ましい組合せ
を有するパーソナルケア成分を生成するのに、分画が必要であった。これらの目標を達成
するために、細胞汁の流動化、ｐＨ調節、集束マイクロ波放射、遠心分離および減圧ろ過
を含めた、種々の処理を使用して、細胞汁を分画した。次いで、単離した、細胞汁の漿液
画分を、防腐剤および抗酸化剤を用いて安定化させた。

細胞汁の処理の持続時間および強度を最小限に留めて、酸化ストレス、加水分解、変性
、異性化、重合および他の望まれないプロセスを排除した。

細胞汁の、１５リットルの容器中の凍結状態から最初の液体状態への変換を、≦２分に
わたる流動化により達成した。この処理の間に、細胞汁の温度は、≦２０℃だけ増加する
に過ぎなかった。この処理の持続期間が短いことにより、変性プロセスおよび酸化による
損傷の両方を最小限に留めることが可能であった。細胞汁の、凍結および流動化の後の物
理化学的および生化学的な特性は、新鮮葉から細胞汁を分離する間に測定した対応する特
性と同一であった。それらの特性には、これらに限定されないが、乾燥物質含有量、ｐＨ
、導電率、酸化還元電位、浸透圧およびＩＲスペクトルがあった。

次いで、中性に近い細胞汁のｐＨを、５．０Ｎ塩酸（ＨＣｌ）を活用する滴定法を使用
して調節し、細胞汁のｐＨを、≧３．０まで減少させた（ｐＨ調節１）。調節した細胞汁
を、周波数２，４５０ＭＨｚを用いる集束マイクロ波放射により遅滞なく処理した。この
集束マイクロ波処理（ＦＭＰ）の間、細胞汁の温度は、９０℃まで一時的に増加し、この
温度に１分間保たれ、次いで、細胞汁の温度は、≦３０℃まで直ちに減少した。次いで、
連続流型遠心分離機ＣＥＰＡ ＬＥ（Ｃａｒｌ Ｐａｄｂｅｒｇ Ｚｅｎｔｒｉｆｕｇｅ
ｎｂａｕ ＧｍｂＨ、ドイツ）を１５，０００ｒｐｍおよび≧３０秒の保持時間で使用し
て、処理した細胞汁を素早く分離した。処理した細胞汁１５．０ｋｇの分離により、緑色
に着色したペースト状沈殿物（「沈殿物Ｉ」）１．３７ｋｇ、および６．７５％の乾燥物
質含有量を有する、明るい褐色に着色し、若干乳白光を発する液体の上清（「上清Ｉ」）
１３．６３ｋｇを得た。この上清Ｉを使用して、さらなる分画を行った。

表１に、上清Ｉ中の乾燥物質含有量およびその色、ならびにクロロフィルａおよびクロ
ロフィルｂの存在（それぞれ、６６２ｎｍおよび６４２ｎｍにおける光吸収の測定により
決定した）に対する、ｐＨを調節した細胞汁のＦＭＰ処理の間に達した最高温度（Ｔｍａ
ｘ）の作用に関するデータを示す。

表１のデータは、Ｔｍａｘ＝９０℃で得られた上清Ｉは、より高い乾燥物質含有量を有
し、クロロフィルを含有しないことを示している。Ｔｍａｘ＝６０℃の後に得られた上清
Ｉの場合、ガードナースケール値はより低いが、この調製物は、顕著により低い乾燥物質
含有量を有し、クロロフィルのより高い残存量を含有する。この色素は、化粧用成分中で
は望まれない存在であることに加えて、クロロフィルは、フェオフォルビドに変換される
可能性があり、フェオフォルビドは、毒性化合物であり（Bergstrom, L.C.、Vucenik, I.
、Hagen, I.K.、Chernomorsky S.A.、Poretz R.D. In-vitro photocytotoxicity of lyso
somotropic immunoliposomes containing pheophorbide a with human bladder carcinom
a cells、J. Photochem. Photobiol.、24、1、17〜23、1994）、皮膚刺激性に関与すると
みなされている（Kato T.、Yamada K.、Relationship between appearance of photosens
itization and total pheophorbide level in spirulina powder、J. Food Hyg. Soc. Ja
pan、36、632〜634、1995）。

上記の理由に基づいて、ｐＨを調節した細胞汁のＦＭＰ Ｔｍａｘ＝９０℃は、上清Ｉ
を得るための優先的な型として選択され、次いで、上清Ｉを使用して、これらに限定され
ないが、パーソナルケア成分の色、透明性および安定性を含めた、機能特性を改善するた
めに、さらなる分画を行った。上清Ｉは、望ましいｉｎ ｖｉｔｒｏにおける活性、例と
して、（ｉ）これらに限定されないが、チロシナーゼ、エラスターゼ、トリプシン、シク
ロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）の阻害活性を含めた、酵素阻害活性、（ｉｉ）フリ
ーラジカル捕捉活性、および（ｉｉｉ）これらに限定されないが、酸素ラジカル吸収能力
を含めた、抗酸化活性を有したことに留意すべきである。上記のｉｎ ｖｉｔｒｏにおけ
る活性全ての決定的な重要性を考慮に入れると、それらの活性に、望ましいパーソナルケ
ア成分の機能特性を改善するのに必要なさらなる処理が影響を及ぼしてはならない。組成
物の改善に関して、上清Ｉをさらに処理して、褐色色素、および残余のタンパク質を含め
た、他の望まれない化合物を大幅に除去すべきである。

この目標を達成するために、上清Ｉを、ｐＨ調節および分離を含めた、さらなる処理に
付した。最初の処理を、５０％水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）を活用する滴定法を使用し
て引き起こし、細胞汁の上清ＩのｐＨを約３．０から約７．５まで増加させた（ｐＨ調節
２）。上清ＩＩは、ｐＨ＝７．５を上回ると、所望されるエラスターゼおよびトリプシン
の阻害活性を喪失していったことに留意すべきである。ｐＨ調節２の結果、より暗色の材
料が生じ、乳白光が強まり、この材料を、連続流型遠心分離機ＣＥＰＡ ＬＥ（Ｃａｒｌ
Ｐａｄｂｅｒｇ Ｚｅｎｔｒｉｆｕｇｅｎｂａｕ ＧｍｂＨ、ドイツ）を１５，０００
ｒｐｍおよび≧３０秒の保持時間で使用して、直ちに浄化した。上記の分離により、褐色
に着色したペースト状沈殿物（以下、沈殿物ＩＩ）０．５３ｋｇ、および６．５９％の乾
燥物質含有量を有する、褐色に着色し、若干乳白光を発する上清（以下、上清ＩＩ）１３
．１０ｋｇを得た。

次いで、上清ＩＩを、５．０Ｎ塩酸（ＨＣｌ）を活用する滴定に付して、ｐＨ値をｐＨ
約３．６まで減少させた（ｐＨ調節３）。そのような処理から、乳白光が若干増加したが
、より明るい色のｐＨを滴定した上清ＩＩが生じた。この材料を、ポアのサイズ０．２マ
イクロメートルを有するメンブランを通す滅菌ろ過を用いて処理した。この結果、新鮮イ
チジク葉の、明るい色の透明な漿液画分を得た。

漿液画分の色度値（ガードナースケール値＝７．０）は、上清Ｉの色度値（ガードナー
スケール値＝８．５）よりも低かった。漿液画分のガードナースケールの色度値は、異な
るＦＭＰのＴｍａｘ条件下で得られた対応する上清Ｉの色度値よりも常に低かったことに
留意すべきである（表２）。

細胞汁から得られた漿液画分は、その流動化、ｐＨ調節（３．０〜７．０のｐＨ範囲内
）、集束マイクロ波放射（Ｔｍａｘ＝９０℃、１分間のＦＭＰ）、遠心分離および滅菌ろ
過の後、全ての望ましい酵素阻害活性、フリーラジカル捕捉活性および抗酸化活性を示し
た。

比色分析アッセイを妨げる可能性があるフェノール化合物を含有する漿液画分中の残余
のタンパク質含有量の決定に関しては、ケルダール法を使用して、漿液画分およびその限
外ろ過液中の窒素含有量を確実に検出した。異なるメンブランを使用して、漿液画分を、
≦１５、≦１０および≦５キロダルトン（ｋＤ）の分子量をそれぞれ有する３つのろ液に
分離した。試料中の窒素含有量に関するデータを、表３に示す。

データは、低分子量を分画するメンブランを通した限外ろ過の後であってさえも、窒素
含有量が顕著には変化しなかったことを示し、このことは、事実上、漿液画分中の全ての
窒素が非タンパク質性であった、すなわち、漿液画分は、タンパク質を含有しないことを
示している。

漿液画分のさらなる安定化を、抗酸化剤、安定化剤、キレート化剤および防腐剤を添加
することによって達成した。下記が、活用して、提示する実施例１に記載の漿液画分を安
定化させた添加剤の組成である：０．２％メタ重亜硫酸ナトリウム、０．１％ソルビン酸
カリウム、０．１％安息香酸ナトリウム、０．１％メチルパラベンナトリウム。完全な可
溶化が達されるまで、混合物をインキュベートした（≧３０分）。次いで、１．９％ペン
チレングリコールを、混合物に添加した。

漿液画分は、およそ６．３８％の乾燥物質を含有し、新鮮イチジク葉からのその収率は
、およそ３６％であった。最初の新鮮イチジク葉の乾燥物質１００ｋｇからの漿液画分の
乾燥物質の収穫量は、およそ７．２ｋｇであった。

漿液画分の選択された特徴およびそのｉｎ ｖｉｔｒｏにおける活性を、表４および表
５に示す。

ベンガルボダイジュ（Ficus benghalensis）の細胞汁から得られた漿液画分の、特徴およ
びｉｎ ｖｉｔｒｏにおける活性の比較
新鮮イチジク葉を、異なる場所で収集し、実施例１の記載に従って加工して、細胞汁を
得た。この細胞汁を、しっかり閉じた１５リットルの長方形のＨＤＰＥ製容器中に、−３
０℃で凍結および保存した。実施例１の記載と同じ手順を使用して、一度に、１つまたは
複数の容器を加工して、漿液画分を得た。

表６および表７に示すデータは、同じ供給源の、異なる時期に凍結した細胞汁の複数の
分画から得られた漿液画分および凍結した細胞汁の異なる供給源からの分画から得られた
漿液画分の選択された特徴およびｉｎ ｖｉｔｒｏにおける活性の変動性を示す。

ベンガルボダイジュ（Ficus benghalensis）乾燥葉の水抽出物の調製
５０ｇの空気乾燥したベンガルボダイジュ（Ficus benghalensis）葉（実施例１におい
て使用した同じバッチの葉から収集した）を、ＧＭ２００ Ｇｒｉｎｄｏｍｉｘナイフミ
ル（Ｒｅｔｓｃｈ、ドイツ）を用いて粉砕して、＜３００マイクロメートルのサイズを有
する粒子を得た。粉砕は、２，５００ｒｐｍ、２０秒間、続いて、２，５００ｒｐｍ、１
０秒間、次いで、１０，０００ｒｐｍ、１０秒間を含んだ。ＯＭＮＩ Ｐｒｏｇｒａｍｍ
ａｂｌｅ Ｄｉｇｉｔａｌ Ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ（ＯＭＮＩ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏ
ｎａｌ、Ｋｅｎｎｅｓａｗ、ＧＡ）を使用して、脱イオン水を用いて、粉砕した葉をホモ
ジナイズした。３５ｇの粉砕した葉を、４９０ｇの水と混合し、ホモジナイザーのプラッ
トフォーム上の氷浴中に置いた。ホモジナイゼーションを、２０ｍｍのホモジナイザーの
発生器を用いて、１５，０００ｒｐｍで１５分間実施した。次いで、Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ
２ Ｆｏｃｕｓｅｄ Ｍｉｃｒｏｗａｖｅ Ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ（Ｂｉｏｔａｇｅ Ａ
Ｂ、Ｕｐｐｓａｌａ、スウェーデン）中で、ホモジネートをマイクロ波処理に９０℃で１
分間付した。次いで、マイクロ波処理した材料を、３，２００ｇで３０分間遠心分離した
。次いで、上清を、真空下で、Ｗｈａｔｍａｎの２番紙の３層を通してろ過し、ろ液のｐ
Ｈを、塩酸（ＨＣｌ）を用いてｐＨ４．０に滴定した。ｐＨを滴定した材料を、３，２０
０ｇで３０分間遠心分離し、次いで、上清を、真空下で０．２マイクロメートルの滅菌フ
ィルターを通してろ過した。安定化剤、すなわち、０．２％メタ重亜硫酸ナトリウム、０
．１％ソルビン酸カリウム、０．１％クエン酸、０．１％安息香酸ナトリウムを試料に添
加した。完全な可溶化が達されるまで、混合物をインキュベートした（≧３０分）。得ら
れた乾燥葉水抽出物を、ガラス製バイアル内に置き、暗所に室温で保存した。乾燥イチジ
ク葉の水抽出物の選択された特徴およびｉｎ ｖｉｔｒｏにおける活性を、表８に示す。

試験した濃度の広い範囲内で、乾燥イチジク葉の水抽出物は、エラスターゼ、トリプシ
ンおよびシクロオキシゲナーゼ−２の阻害活性を示さなかった。選択された特徴およびｉ
ｎ ｖｉｔｒｏにおける活性について、同じバッチのベンガルボダイジュ（Ficus bengha
lensis）葉から得られた水抽出物と漿液画分とを比較し、これを、表９に示す。

異なるフィカス属種および場所から得られた漿液画分の特徴およびｉｎ ｖｉｔｒｏにお
ける活性
インドおよびフロリダ（米国）で収集したベンガルボダイジュ（Ficus benghalensis）
新鮮葉に加えて、以下のフィカス属種の新鮮葉を分画のために使用して、漿液画分を得た
：イチジク（Ficus carica）、フィカス・エラスティカ（Ficus elastica）、ガジュマル
（Ficus microcarpa）、およびフィカス・トリゴナタ（Ficus trigonata）。プエルトリ
コで生長させたフィカス・トリゴナタ（Ficus trigonata）を除いて、これらのフィカス
属種は、米国のフロリダで生長させた。

漿液画分を、実施例１に記載の手順により得た。全てのこれらの画分を、それらの収率
、選択された物理化学的特性およびｉｎ ｖｉｔｒｏにおける活性に関して比較した（表
１０、表１１および表１２）。

上記のデータは、異なるフィカス属種間で、新鮮葉中の乾燥物質含有量、細胞汁の収率
および漿液画分の収率、ならびにそれらの乾燥物質含有量、色およびｐＨが、極めて顕著
に変動したことを示している。インドおよびフロリダで生長させた２つのベンガルボダイ
ジュ（Ficus benghalensis）間の対応する差は、異なるフィカス属種間の差よりも低く表
われた。

この結論は、異なるフィカス属種から得られた漿液画分の選択された物理化学的特徴（
表１１）およびｉｎ ｖｉｔｒｏにおける活性（表１２）の比較に関する追加のデータに
より支持されている。

（ベンガルボダイジュ（Ficus benghalensis）の）従来のイチジク抽出物とイチジク漿液
画分との、ＬＣ／ＵＶ／ＭＳクロマトグラムの比較
Ｃ１８カラム上におけるＬＣ分離の後に、２４０〜５００ｎｍのＵＶ検出、ならびに陽
イオン（ｍ／ｚ １５０〜１１５０）および陰イオン（ｍ／ｚ １００〜１１００）の両
方のモードのエレクトロスプレー質量分析の両方により、イチジク抽出物およびＦＳＦの
構成成分を検出した。四重極ＭＳ上で活用した速いスキャン速度に起因して、主要な構成
成分および／または高いイオン化効率を有する構成成分のみが、質量クロマトグラム中に
観察された。イチジク漿液画分からのイチジク抽出物を、ＴＯＦ／ＭＳにより解析し、構
造の帰属は、この正確な質量およびインソースフラグメンテーションのデータに基づいて
いる。

図２に示すように、従来のイチジク抽出物は、ＦＳＦ中には検出されない、溶出のより
遅い（より疎水性の）化合物を含有する。図３に示すように、溶出の遅い化合物の１つの
群は、フェオフォルビドであるように見え、これらは、クロロフィルの分解産物である。
図４は、従来の抽出物が、より高い量の、フラボノール配糖体と思われる構成成分を含有
することを示す。図５に示すように、ＦＳＦは、より高いレベル（約１０×）のカテキン
および関連の縮合タンニンを有する。しかし、図６に示すように、３つのカフェオイルキ
ナ酸の異性体のレベルは、２つの試料の間で実質的に異なるようには見えなかった。図７
は、ＦＳＦが、より高いレベルの遊離のチロシン、フェニルアラニンおよびトリプトファ
ンを含有したことを示す。

方法：
イチジク漿液画分試料の調製：
ＦＳＦを、実施例１と同様に調製した。ＦＳＦ試料を、９０：１０の水：ＤＭＳＯを用
いて５０倍に希釈し（２０μＬの試料＋１００μＬのＤＭＳＯ＋８８０μＬの水）、ＬＣ
／ＵＶ／ＭＳにより、下記の条件に従って解析した。最終的な試料中のおよその固体含有
量は、約１．２６ｍｇ／ｍＬであった。

従来試料の調製：
１０．６４ｍｇの試料を、４ｍｌのガラス製バイアル内に秤量した。１．０６４ｍＬの
ＤＭＳＯを、バイアルに添加し、３０分間超音波処理し、混合するために時折ボルテック
スした。１００μＬのこの試料を、４ｍＬのガラス製バイアルに添加し、９００μＬの水
を用いて希釈した。最終的な試料中のおよその固体含有量約１ｍｇ／ｍＬ。
ＨＰＬＣの条件：
ＨＰＬＣ：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ Ｂｉｎａｒｙ Ｓｏｌｖｅｎｔ
Ｍａｎａｇｅｒ：Ｓ／Ｎ Ｍ０５ＵＰＢ６０１Ｍ
Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ Ｓａｍｐｌｅ Ｍａｎａｇｅｒ：Ｓ／Ｎ Ｍ
０５ＵＰＳ６３２Ｍ
Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＰＤＡ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ：Ｓ／Ｎ Ｍ０５
ＵＰＤ８７９Ｎ
ＭＳ：Ｗａｔｅｒｓ Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ Ｑｕａｔｔｒｏ Ｐｒｅｍｉｅｒ ＭＳ：Ｓ
／Ｎ ＶＡＡ−２１９
ＬＣカラム：Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８、１．７ｍｍ、
２．１×１００ｍｍ、部品番号１８６００２３５２、ロット番号０１５０３７１８６１
移動相：Ａ：０．１％ギ酸を有する水
Ｂ：０．１％ギ酸を有するアセトニトリル
分離：グラジエント（表を参照されたい）

注入体積：７．５μＬ、ニードルオーバーフィルによるパーシャルループ（partial loop
with needle overfill）
カラム温度＝２５℃
ＰＤＡ：２４０〜５００ｎｍ、２０点／秒、ろ過時間：０．２秒で一定、曝露時間＝自動
、分解能：１．２ｎｍ
ＭＳの条件：

メラニン合成
Ｂ１６−Ｆ１マウスメラノーマ細胞株を、アッセイにおいて利用する。Ｂ１６−Ｆ１細
胞を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｖｉ
ｒｇｉｎｉａ、米国から得る。アッセイにおいて使用する細胞培養の培地は、５００ｍＬ
のダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）、５０ｍＬのウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、およ
び５ｍＬのペニシリン−ストレプトマイシン液を含む。この培地中で培養し、９０％超の
培養密度まで増殖したＢ１６−Ｆ１細胞は、メラニンを合成する。いずれの理論にも拘束
される意図はないが、メラニン合成は、培地によって刺激され、かつ／または高い培養密
度まで増殖したことにより誘発されるストレスによって刺激されると仮定される。ＤＭＥ
ＭおよびＦＢＳは、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔ
ｉｏｎから得ることができ、ペニシリン−ストレプトマイシン液は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅ
ｎ，Ｉｎｃ．、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、米国から得ることができる。アッセイにおいて使
用する機器は、ＣＯ２インキュベーター、例として、Ｆｏｒｍａ Ｓｅｒｉｅｓ Ｍｏｄ
ｅｌ ３１１０、Ｔｈｅｒｍａ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｓ、米
国製；血球計数器（hemocytometer）、例として、Ｂｒｉｇｈｔ Ｌｉｎｅモデル、Ｈａ
ｕｓｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ、米国製；およびＵＶ−可
視スペクトルのプレートリーダー、例として、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ２５０、Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、米国製を含む。アッセイのステップ
は、以下を含む。

第０日−細胞の増殖：細胞培養の培地を３７℃に温め、２９ｍＬをＴ−１５０フラスコ
中に入れる。およそ１×１０６のＢ１６−Ｆ１の継代１のマウス細胞を、Ｔ−１５０フラ
スコに添加し、３７℃、５％ＣＯ２、９０％相対湿度で、約８０％の培養密度になるまで
３日間インキュベートする。

第３日−９６ウエルプレートを開始する：第３日に、Ｔ−１５０フラスコから得られた
細胞をトリプシン処理し、血球計数器（hemacytometer）を使用して、細胞濃度を決定す
る。９６ウエルプレートを、１００μＬの細胞培養の培地中の１ウエル当たり２，５００
個の細胞を用いて開始する。プレートを、３７℃、５％ＣＯ２、９０％相対湿度で、少な
くとも２０％〜４０％の培養密度になるまで２日間インキュベートする。

第５日−プレートから細胞培養の培地を除去し、新鮮な培地で置き換える（１ウエル当
たり１００μＬ）。［水またはＤＳＭＯ］溶媒中に希釈した［試験化合物］１μＬを添加
する。投与応答曲線を生成するために、複数の希釈比を試験することができ、好ましくは
、３つのウエルを、各希釈比を用いて処理する。対照は、細胞培養の培地、Ｂ１６−Ｆ１
細胞および溶媒を有するウエル（対照番号１）；細胞培養の培地および溶媒を含むウエル
（対照番号２）；および場合により、［試験化合物］のバックグラウンドの色についての
制御が必要な場合、細胞培養の培地、溶媒および［試験化合物］を含むウエル（対照番号
３）を含む。

第７日−メラニン産生の測定：細胞は、約９０％超の培養密度を有すべきである。そう
でない場合、このデータ点は使用しない。１００μＬの０．７５％水酸化ナトリウム溶液
を、各ウエルに添加する。ＵＶ−Ｖｉｓプレートリーダーを４１０ｎｍで使用して、９６
ウエルプレートを読み取って、［試験化合物］を用いて処理されているウエルと処理され
ていない対照ウエルとの間の産生されたメラニンの量を光学的に測定する。メラニンが産
生されているウエルは、褐色に見える。メラニンがほとんど産生されていないウエルは、
透明〜明るい紫色に見える。メラニン合成の阻害のパーセントを、以下の式により計算す
る。

式中、ＯＤ４１０は、ＵＶ−Ｖｉｓ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒに
より測定した場合の４１０ｎｍにおける光学密度である。

対照番号３を使用する場合、パーセントメラニン合成の阻害についての式は、

である。

一般に、上記で概要を述べたアッセイを使用すると、下記の表１３に示すように、メラ
ニン合成は、ＦＳＦ処理Ｂ１６−Ｆ１細胞中では、対照細胞と比較して阻害された。

変数、すなわち、メラニンの産生および皮膚内の移動が複雑であること、ならびに試験
化合物の皮膚に浸透する能力等を考慮すると、このアッセイにより、ヒトにおける顔面の
色素沈着過剰性シミに関するｉｎ ｖｉｖｏにおける転帰は必ずしも断定されないが、こ
のアッセイにより、ＦＳＦ等の材料はチロシナーゼ活性に潜在的に影響を及ぼすことがで
きることが示されている。

チロシナーゼの阻害
チロシナーゼは、メラニンの生合成における重要な酵素である。このアッセイにより、
キノコのチロシナーゼ酵素の、Ｌ−チロシンをＬ−ジヒドロキシフェニルアラニン（Ｌ−
ＤＯＰＡ）に変換する能力を妨げることができる作用剤を同定し得る。
試薬および供給
チロシナーゼ酵素：キノコのチロシナーゼ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｍｉｓｓｏｕ
ｒｉ、米国から入手可能、
酵素基質：Ｌ−チロンシン（L-tyronsine）、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｍｉｓｓｏ
ｕｒｉ、米国から入手可能、
緩衝液：リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉ
ａ、米国から入手可能、
陽性対照：４−ヒドロキシフェニル−β−Ｄ−グルコピラノシド（アルブチン）、Ｓｉｇ
ｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｍｉｓｓｏｕｒｉ、米国から入手可能、
ジメチルスルホキシド（ＤＳＭＯ）、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｍｉｓｓｏｕｒｉ、
米国から入手可能、
Ｆａｌｃｏｎ（登録商標）１１７２ Ｍｉｃｒｏｔｅｓｔｔｍ非組織培養処理、透明平底
９６ウエルプレート、
潜在的なチロシナーゼ阻害剤、
ウエルプレートリーダー：Ｓｐｅｃｔｒａ ＭＡＸ Ｐｌｕｓ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄ
ｅｖｉｃｅｓ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、米国から入手可能、
データ獲得および解析ソフトウエア：ＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄ
ｅｖｉｃｅｓ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、米国から入手可能。
使用溶液濃度 アッセイにおける最終濃度
チロシナーゼ酵素：２６単位／ｍＬ １３単位／ｍＬ
Ｌ−チロシン基質：１ｍＭ ０．５ｍＭ
アルブチン陽性対照：２０ｍＭ ２００ｕＭ

アッセイのプロトコール：
試薬および陽性対照の調製
１ｍＭの酵素基質使用溶液を、０．０１８１２ｇのＬ−チロシンを１００ｍＬの１×Ｐ
ＢＳに添加することによって調製する。Ｌ−チロシンが溶解するまで、超音波処理する。
必要に応じて、ボルテックスする。使用しないときは、４℃で保存する。

アルブチンの陽性対照の０．２Ｍ原液を、０．０５４４ｇのアルブチンを１ｍＬのＤＭ
ＳＯに添加することによって調製する。アルブチンが溶解するまで、１分間ボルテックス
および超音波処理する。この溶液を、１００μＬを９００μＬのＤＭＳＯに添加すること
によって１：１０に希釈して、２０ｍＭアルブチン使用溶液を得る。使用するまで、室温
で保存する。

潜在的なチロシナーゼ阻害剤は、ＤＭＳＯ中に調製すべきである。アッセイにおける試
験化合物の最終体積は２μｌであり、したがって、使用溶液は典型的には、５〜４０ｍＭ
（１００×）で構成し、これらから、アッセイにおける５０〜４００μＭの最終濃度を得
る。

冷１×ＰＢＳを用いて、チロシナーゼ酵素を１０００Ｕ／ｍＬで再構成する。この原液
を、必要になるまで、１ｍＬの一定分量で遮光して−２０ｏＣで保存する。１ｍｌの解凍
原液（１０００Ｕ／ｍＬ）を、３７．５の冷１×ＰＢＳ緩衝液に添加することによって、
２６Ｕ／ｍＬの酵素使用溶液を調製する。これは、４つの９６ウエルプレートを扱うのに
十分である。アッセイにおいて使用するまで、遮光し、氷上に保つ。

アッセイの実施
２００μＬの１×ＰＢＳ緩衝液を、各試験プレート上の三連のウエルに添加して、適切
なブランクを得る。

２μＬのＤＭＳＯを、三連のウエルに添加して、ビヒクル対照を得る。

２μＬのアルブチンを、三連のウエルに添加して、陽性対照を得る。

２μＬの潜在的なチロシナーゼ阻害剤を、三連のウエルに添加する。

ブランクを除き、９８μＬのチロシナーゼ酵素使用溶液を、各ウエルに添加する。化合
物と酵素とを、ピペットを上下に２回操作するかまたは手短にボルテックスすることによ
って混合する。

１００μＬ／ウエルのＬ−チロシン基質を添加する。

ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ２５０プレートリーダー上の反応速度測定用の設定を選び、４７
５ｎｍにおける吸光度の読取りを、１分毎に１時間記録する。

データ獲得ソフトウエアを使用して、勾配を、対照および試験化合物について計算する
。

チロシナーゼ阻害のパーセントを、以下の式により計算する：

一般に、上記で概要を述べたアッセイを使用すると、下記の表１４に示すように、ＦＳ
Ｆは、チロシナーゼ活性を阻害した。

変数、すなわち、メラニンの産生および皮膚内の移動が複雑であること、ならびに試験
化合物の皮膚に浸透する能力等を考慮すると、このアッセイにより、ヒトにおける顔面の
色素沈着過剰性シミに関するｉｎ ｖｉｖｏにおける転帰は必ずしも断定されないが、こ
のアッセイにより、ＦＳＦ等の材料はチロシナーゼ活性に潜在的に影響を及ぼすことがで
きることが示されている。

色素沈着過剰性シミの低減およびメラニンの均一性についてのｉｎ ｖｉｖｏにおける試
験
９週間のｉｎ−ｖｉｖｏにおける研究を、ラウンドロビン、ビヒクル対照、顔面分割デ
ザインを使用して、１週間の正規化期間を含め、２７０人の対象を用いて実施した。２７
０人の対象を、以下を含む包含／排除の判断基準に従ってスクリーニングした：
包含
− 色素沈着過剰性シミを、顔面の両側上、頬の周りおよび／または眼窩周囲の領域に有
する。
− 顔面の各側面上の頬領域中に、少なくとも１つの８〜１０ｍｍの直径の色素沈着過剰
性シミ、４つの４〜６ｍｍの直径のシミ、もしくは１０個の２〜３ｍｍの直径のシミ（日
光シミ、そばかすもしくは黒皮症のシミ）、または同等のシミ領域を有する。
− 顔面のサンバーン、日焼けまたは風焼けを回避するために、供給されるＵＶローショ
ン剤および帽子等の物理的なＵＶの遮断を使用することによって、日光への曝露を控える
意志がある。
排除
− アトピー、湿疹、乾癬または他の慢性皮膚疾患を有すると診断されたことがある。
− 顔面皮膚疾患の明らかな徴候（例えば、５つ超の面皰、赤色鱗屑化皮膚の領域、表層
性の薄い血管等）を有する。
− 顔面上に、変色または瘢痕化の顕著な領域を有する。
− 顔面上に、３つ超の顕著な母斑（＜３ｍｍ）を有する。

２７０人の対象を、研究のために動員した。研究のコースの間に、およそ６０人の対象
が脱落した。各対象が、２つのコード化した試験製剤を受け取って、顔面の各半分に１日
２回適用した。顔面の処置部位の画像を、ベースライン（第０週）、ならびに４および８
週間の処置の後に獲得し、皮膚の色ならびにシミのサイズおよび色に対する変化について
解析した。製品製剤は、ビヒクル対照、ビヒクル＋０．５５％ＦＳＦ、およびビヒクル＋
５％ビタミンＢ３化合物（ナイアシンアミド）を含んだ。

非接触分光学的皮内分析法（ＳｉａＳｃｏｐｙ、Ａｓｔｒｏｎ Ｃｌｉｎｉｃａ、英国
）を使用して、対象の画像を収集および解析した。この方法は、ブランドの分光計として
のデジタルカメラ（例えば、Ｆｕｊｉ Ｓ２ ｄｉｇｉｔａｌ ＳＬＲ）、および瞬間照
明源（例えば、Ｓｉｇｍａ Ｓｕｐｅｒ ｆｌａｓｈ光源）を使用して、顔面の発色団の
情報を回収した。交差偏光フィルターを、カメラおよび照明源の前に置いて、鏡面反射を
排除した。

ユーメラニン（メラニン）およびオキシヘモグロビンの濃度および分布の発色団マッピ
ングにより、これらの発色団のそれぞれのグレースケール濃度マップが生成される。Ｏｐ
ｔｉｍａｓ６．５等の画像解析ソフトウエアを使用して、各発色団マップ中の目的の帯域
を選択することができ、そこから、平均グレースケール値およびシミ領域部を計算する。
シミ領域部は、メラニンのシミが占める総面積を、対象とする帯域全体のパーセントとし
て示す。発色団マッピングの１つのタイプの記載を、ＥＰ１，８１０，６１４および「Th
e Distribution of Melanin in Skin Determined In Vivo」、British Journal of Derma
tology、2007、620〜628頁に見出すことができる。

ＦＳＦが、４週間後に最良の結果をもたらしたものであり、対照および５％ビタミンＢ
３の組成物よりも、色素沈着過剰性シミを有意に（ｐ＜＝０．１０）良好に低減させた。
８週間後では、ビタミンＢ３組成物が、最良の結果をもたらしたものであったが、また、
ＦＳＦ組成物も、色素沈着過剰性シミの低減において、対照よりも有意に良好であった。
表１６に、画像解析データを要約し、表中、ＳＡＦは、平均シミ領域部であり、ΔＳＡＦ
は、ベースライン（第０週）からのシミ領域部の平均変化である。

ＦＳＦは、ＳＡＦについては、ビヒクルよりも有意に良好であり、メラニンの均一性に
ついては、ビヒクルよりも指向的に良好であった。

解析方法
以下の解析方法を使用して、実施例中に報告する種々の物理的および化学的特性を決定
する。

乾燥物質の決定のための方法
乾燥物質のレベル（パーセント）を、液体試料の重量と、液体構成成分を蒸発させた後
の乾燥状態の残渣の重量とを比較することによって決定した。使い捨てのアルミニウム製
秤量皿、Ｏｈａｕｓ Ｅｘｐｌｏｒｅｒ Ｅ００６４０天秤、Ｏｈａｕｓ Ｃｏｒｐｏｒ
ａｔｉｏｎ（Ｐｉｎｅ Ｂｒｏｏｋ、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）製、およびＳｈｅｌ Ｌａ
ｂモデル１４００Ｅオーブン、ＶＷＲ（Ｗｅｓｔ Ｃｈｅｓｔｅｒ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａ
ｎｉａ）製を、この手順において使用した。試料を、１０５Ｃに設定したオーブン中で１
２時間乾燥した。液体試料を含有する風袋の重量から、風袋の重量を減じて、「湿潤」重
量を得た。乾燥後の同じ試料を含有する風袋の重量から、風袋の重量を減じて、「乾燥」
重量を得た。次いで、乾燥物質のレベルは、「湿潤」重量で割り、１００％を乗じた「乾
燥」重量に等しい。

色の決定のための方法
Ｌｏｖｉｂｏｎｄ Ｃｏｍｐａｒａｔｏｒ３０００（Ｔｉｎｔｏｍｅｔｅｒ Ｌｉｍｉ
ｔｅｄ ｏｆ Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ、英国）デバイスを使用して、使用説明マニュアルに
よるデバイスについての標準的な手順に従って、透明なガラス製チューブ中の試験物品の
色と、デバイスの２つの輪内にセットされている着色ガラス標準物質とを比較することに
よって、色（ガードナースケール、０〜１８）を決定した。

浸透圧の決定のための方法
溶液の凝固点降下を測定し、純粋な溶媒の凝固点と比較することによって、浸透圧を決
定した。この測定は、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍｏｄｅｌ ３２５０ Ｓｉｎｇｌｅ−Ｓａｍ
ｐｌｅ Ｏｓｍｏｍｅｔｅｒ、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．（
Ｎｏｒｗｏｏｄ、ＭＡ）製上で、使用説明マニュアルによるデバイスについての標準的な
手順に従って実施した。

屈折率の決定のための方法
外付けの温度制御循環装置をつなげたＡｒｉａｓ５００屈折計、Ｒｅｉｃｈｅｒｔ Ａ
ｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｄｅｐｅｗ、ＮＹ）製上で、使用説明マ
ニュアルによるデバイスについての標準的な手順に従って、屈折率を測定した。

ＵＶスペクトルのパラメータの測定のための方法
流体ジャケット付きのセルホルダーを有し、外付けの温度制御循環装置につながるＵｌ
ｔｒｏｓｐｅｃ４３００ｐｒｏ ＵＶ／可視分光光度計、Ｂｉｏｃｈｒｏｍ Ｌｔｄ．（
Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、英国）製により、ＵＶ吸光スペクトル中のピーク、谷および屈曲を
決定した。１ｃｍの光路長を有する石英製キュベットを、脱イオン水を用いて希釈した試
料のために使用した。ＳＷＩＦＴ ＩＩソフトウエアのパッケージソフト、Ｂｉｏｃｈｒ
ｏｍ Ｌｔｄ．製のＷａｖｅｓｃａｎアプリケーションより、機器の制御およびデータ解
析を行った。

エラスターゼ阻害活性の決定のための方法
９６ウエルマイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ３６４１）、Ｃｏｒｎｉｎｇ
Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ）製およびＳｙｎｅｒｇｙ２マイクロ
プレートリーダー、ＢｉｏＴｅｋ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．（Ｗｉｎｏｏｓｋ
ｉ、ＶＴ）製を用いて使用するように構成された反応速度を測定する比色分析アッセイに
より、エラスターゼ阻害活性を決定した。基質を切断する酵素活性を、波長４１０ｎｍに
おける吸光度の増加として測定される黄色の発生により示した。Ｎ−メトキシサクシニル
−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−ｐＮＡ基質（ＥＰＣ ＦＨ２３７）およびエラスタ
ーゼ（ＥＰＣ ＳＥ５６３）を、ＥＰＣ（Ｅｌａｓｔｉｎ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｃｏｍｐ
ａｎｙ，Ｉｎｃ．、Ｏｗｅｎｓｖｉｌｌｅ、ＭＯ）から得た。各ウエル中の反応体積は２
００マイクロリットルであり、エラスターゼの濃度は０．８７単位／ｍｌに等しく、基質
の濃度は３６３μＭに等しかった。この手順は、Ｅｌａｓｔｉｎ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｃ
ｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．のResearch Biochemicals Catalogue (2004、92頁)の84頁からの
表題「Assay with N-MeO-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-pNA (EPC No.FH237) as substrate」の方
法を改作した。

シクロオキシゲナーゼ−２阻害活性の決定のための方法
Ｃａｙｍａｎ ＣｈｅｍｉｃａｌｓのＣＯＸ阻害剤スクリーニングＥＬＩＳＡアッセイ
キット５６０１３１により、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）阻害活性を決定し
た。

抗酸化活性の決定のための方法
Ｓｙｎｅｒｇｙ２マイクロプレートリーダーＢｉｏＴｅｋ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，
Ｉｎｃ．（Ｗｉｎｏｏｓｋｉ、ＶＴ）製を用いて使用するための、ＢｉｏＴｅｋから得ら
れる、（www.biotek.com/resources/docs/ORAC_Assay_Application_Note.pdf）において
入手可能な、「Performing Oxygen Radical Absorbance Capacity (ORAC) Assays with S
ynergy HT Multi-Detection Microplate Reader」のApplication Noteに記載されている
方法の改作を使用するＯＲＡＣ試験により、抗酸化活性を決定した。このアッセイにおい
て、ＡＡＰＨ（２，２’−アゾビス２−アミノ−プロパン）が、蛍光プローブ（フルオレ
セインナトリウム）を損傷する反応性酸素種を生成する。（Ｒ）−トロロクスメチルエー
テル等の抗酸化剤が、この損傷を阻止または緩慢化し、それらの作用を、蛍光測定により
定量化することができる。４８５ｎｍに設定した励起波長および５２８ｎｍに設定した放
射波長を用いて、蛍光の読取りを得、反応体積は２００マイクロリットルであり、ＡＡＰ
Ｈ濃度は５５ｍＭであり、フルオレセインナトリウム濃度は１．３３μＭであり、（Ｒ）
−トロロクスメチルエーテル濃度範囲は８０μＭ〜２μＭの間であった。フルオレセイン
ナトリウム（Ｆｌｕｋａ４６９６０）、ＡＡＰＨ（Ｓｉｇｍａ４４０９１４）、および（
Ｒ）−トロロクスメチルエーテル（Ｆｌｕｋａ９３５０９）を、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉ
ｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から得た。ＡＵＣ（曲線下面積）の値を、比率（ウエル
についての最初の蛍光の読取りで割った、ウエルについての現在の蛍光の読取り）の和と
して計算した。脱イオン水を有するウエルのＡＵＣ値の平均を、（Ｒ）−トロロクスメチ
ルエーテルを有するウエルおよび試験物品を有するウエルのＡＵＣから減じて、抗酸化剤
による蛍光の保存に対応するＡＵＣを得た。較正曲線を、ウエルの抗酸化剤に関連するＡ
ＵＣの関数として生成して、（Ｒ）−トロロクスメチルエーテル重量に相当するＯＲＡＣ
活性を示した。次いで、試験物品についてのＯＲＡＣ活性を、１単位重量の（Ｒ）−トロ
ロクスメチルエーテルがもたらす１に等しい抗酸化作用を達成するのに必要な単位重量試
験物品として計算した。

捕捉活性の決定のための方法
ガラスコートポリプロピレン製９６ウエルマイクロタイタープレート（カタログ番号４
０００６２）、ＳＵＮ−ＳＲｉ（Ｒｏｃｋｗｏｏｄ、ＴＮ）製およびＳｙｎｅｒｇｙ２マ
イクロプレートリーダー、ＢｉｏＴｅｋ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．（Ｗｉｎｏ
ｏｓｋｉ、ＶＴ）製を用いて使用するために改作した、反応速度を測定する比色分析アッ
セイにより、フリーラジカル捕捉活性、すなわち、ＤＰＰＨ（２，２−ジフェニル−１−
ピクリルヒドラジル）フリーラジカル捕捉活性を決定した。吸光度を、波長５１５ｎｍに
おいて測定した。各マイクロプレートウエル中の反応体積は、２００マイクロリットルで
あり、ＤＰＰＨの最初の濃度は、１１４μＭに等しかった。Ｌ−アスコルビン酸を、陽性
対照として使用した。ＤＰＰＨ（Ｓｉｇｍａ Ｄ９１３２）およびＵＳＰ Ｌ−アスコル
ビン酸（Ｓｉｇｍａ Ａ−２２１８）を、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉ
ｓ、ＭＯ）から得た。反応の化学量論を、計算し、１単位重量のＤＰＰＨをクエンチする
のに必要な単位重量試験物品として表した。この方法は、LWT - Food Science and Techn
ology、Volume 28、Issue 1、1995、25〜30頁に公開されている、論文「Use of a free r
adical method to evaluate antioxidant activity」、W. Brand-Williamsら著に記載さ
れている手順から改作した。

温度プロファイリングを使用する迅速安定性試験のための手順
温度プロファイリングを使用する迅速安定性試験のための手順を、下記に示す：
１．１２個の加熱ブロックを作動させ、指定する温度で加熱し、冷蔵庫を作動させ、指定
する温度で少なくとも４時間維持してから実験を行う。加熱ブロック中に置く１２個の試
料に加えて、１つの試料を室温に置き、別の試料を冷蔵して、計１４種の異なる温度を得
る。温度は、５、室温（約２３Ｃ）、３２、３６、４０、４４、４８、５２、５６、６０
、６４、６８、７２および７５℃である。加熱ブロックには、２０ｍｌのバイアルをはめ
るために圧延されたアルミニウム製挿入部のブロックが装備されている。これらの挿入部
ブロックは、加熱ブロックの加熱されるポケットブロックの内部にはまる。各加熱ブロッ
クは、独立した温度調節器および温度センサーを有し、反応ブロックの温度を０．１Ｃで
制御すべきである。
２．１４個のバイアルを満たし、ヘッドスペースはできるだけ少なくする。バイアルのサ
イズは、全て同じサイズである限り、オートサンプラー用バイアルからシンチレーション
用バイアルまでの範囲に及んでよい。本実施例の目的では、２０ｍｌのバイアルを使用し
た。
３．ノートブック参照および温度を有するラベルを、各バイアルについて用意する。ラベ
ルをできるだけ小さくかつ狭くするのが最もよい。カラー写真を用いて、色を評価しよう
とする場合には、温度を有さない１つの別途のラベルを作製して、バイアルを提示する。
４．各ラベルを、対応するバイアルに、バイアル中の製品の眺めを遮ることなく付着させ
る。これは通常、ラベルを蓋にテープで貼って、上から下へ読む長い垂直のタブとするこ
とによって行う。バイアル上の何らかの印のある側面の反対側となる、蓋の側面上に、ラ
ベルを置き、したがって、写真を撮影する場合、バイアル中の試料が最もよく眺められる
ように、ラベルを表示することができる。
５．色を評価する場合、試料の最初の写真を、デジタルカメラを用いて撮影する。バイア
ル中の試料を明らかに見ることができるようにし（バイアル上のラベルまたは印字のいず
れもが眺めを遮ることがないように、バイアルの方向を変え）て、試料を、左から右へ最
も低い温度から最も高い温度へ１列に並べる。画像中で別途のラベルを容易に読むことが
できるようにして、別途のラベルを提示する。一貫性を得るために、バイアルおよびカメ
ラの位置について、研究室ベンチ上に印を付け、したがって、この配置を後に再現するこ
とができる。フラッシュを消すことが推奨される。
６．以下のように、これらのタイプの試料について写真を撮影する。
ａ．透明な溶液：白色バックグラウンドに対してフラッシュを使用し、卓上スタンドは使
用しない。
ｂ．不透明な試料：黒色バックグラウンドに対して、フラッシュを消し、卓上スタンドは
使用する
７．化学的解析を行う場合、各バイアルから試料採取して、最初の読取りを得る。
８．試料を、加熱ブロックおよび冷蔵庫中に置き、日および時間を記録する。
９．選ばれた時点で（初期設定では、第３、７および１４日を使用する）、試料を、加熱
ブロックおよび冷蔵庫から取り出し、少なくとも３０分間かけて室温に戻す。
１０．色を評価する場合、ステップ４で付けたバイアルおよびカメラの位置についての印
を使用して、新しい写真を撮影する。これを、各時点で繰り返す。
１１．化学的解析を行う場合、次いで、この時点で、各バイアルから試料採取する。各時
点について、繰り返す。
１２．色を評価するために、異なる製品および作物を最もよく識別する時点を選び、各製
品にラベルを付けて、写真を一緒に貼り付ける。６カ月間および１年間の室温に相当する
時間を描写する線を、安定性の表を使用して、画像上に引くことができる。所与の時点に
おいて、表上の６カ月および２年に対応する加速温度を見出し、こうすることにより、ど
のバイアルの間に線を引くべきかを決定する。（例えば、図１０を参照されたい）
１３．化学的解析のために、各時点について、濃度を温度に関してプロットする。データ
を通る平滑な線を引き、許容できない閾値に達する温度を記録する。安定性の表において
、この温度を、時間に対して参照して、室温に相当する時間を求める。Ｌａｂ色度計を用
いて、色を測定し、濃度の代わりに、色の差をプロットする場合、この技法を、色の解析
に適用することができる。
１４．安定性の表は、２５ｋｃａｌ／モルの活性化エネルギーを想定している。ほとんど
の加水分解および類似の反応は、ほぼこのエネルギーであるかまたはこれより高い。エネ
ルギーがより高い場合には、製品はより安定であり、表が予測する室温安定性は、実際の
安定性よりも低い（非常に保守的な推定）。時には、エネルギーは、これよりも低い。こ
の理由により、化学的解析を行うならば、上記に従って生成されるデータを取り、アレニ
ウスのプロットを使用して反応エネルギーを計算して、想定が正しいことを確認すること
が推奨される。
１５．付録：写真からのＬａｂ色の抽出：
ｉ．全ての写真をＣＤ上に移動する。色測定ソフトウエア、例として、Ｏｐｔｉｍａｓ、
および任意の必要な周辺機器が装備されているコンピュータを使用して、各試料の平均Ｌ
ａｂ色を測定する。
ｉｉ．左端の５Ｃ試料を用いて開始し、右上から移動し、左下までドラッグして、バイア
ルの色を平均する領域を選択する。５Ｃ試料を、標準的な基準として設定する（これは、
５Ｃ試料を用いて、最初にだけ行う）。
ｉｉｉ．各温度の試料について、Ｌ、ａ、ｂ、Ｓｔｄ ＤｅｖおよびｄＥｃｍｃの値を記
録する。各写真について、白色点を記録する（２５５、２５５、２５５であるはずである
）。

本明細書に開示する寸法および値が、記載する正確な数値に厳格に制限されると理解し
てはならない。代わりに、別段の記載がない限り、それぞれのそのような寸法が、記載す
る値およびその値の周囲の機能的同等範囲の両方を意味することを意図する。例えば、「
４０ｍｍ」と開示する寸法は、「約４０ｍｍ」を意味することを意図する。

本発明の「発明を実施するための形態」に引用した文献は全て、関連の部分が、参照に
より本明細書に組み込まれている。いずれの記載の引用も、それが本発明に関する先行技
術であることを認めていると解釈してはならない。本記載中の用語のいずれかの意味また
は定義が、参照により組み込まれている記載中の同じ用語のいずれかの意味または定義と
矛盾する限りにおいては、本記載においてその用語に割り当てられた意味または定義が優
先するものとする。

本発明の特定の実施形態を例証し、記載してきたが、種々の他の変化形態および改変形
態を、本発明の精神および範囲から逸脱することなく作製することができることは当業者
に明らかであろう。したがって、添付の特許請求の範囲が、本発明の範囲に属する、全て
のそのような変化形態および改変形態を網羅することを意図する。

Claims (34)

1. イチジク漿液画分である、新鮮イチジク葉汁から得られる組成物。
2. 前記イチジク細胞漿液画分が、
   ａ．清浄で新鮮な萎凋していないイチジク葉からイチジク細胞汁を分離して、新鮮なイチ
   ジク細胞汁を得るステップであって、前記分離の前または間に外来の液体が添加されない
   ステップと、
   ｂ．前記新鮮なイチジク細胞汁をろ過して、繊維を含有しない細胞汁を得るステップと、
   ｃ．前記繊維を含有しない細胞汁を分画して、イチジク漿液画分を得るステップであって
   、前記分画が、
   （１）前記繊維を含有しない細胞汁からクロロフィルを除去して、上清Ｉを得ること、
   （２）上清Ｉから色素およびタンパク質を除去して、イチジク漿液画分を形成すること、
   および
   （３）場合により、安定化剤を前記イチジク漿液画分に添加すること
   を含む、ステップと
   を含むプロセスにより生成される、請求項１に記載の組成物。
3. 上清Ｉからの色素およびタンパク質の前記除去が、
   ｉ．上清ＩのｐＨを約７．５に調節して、ｐＨを調節した上清Ｉを形成すること、
   ｉｉ．ｐＨを調節した上清Ｉを、沈殿物ＩＩおよび上清ＩＩに分離すること、
   ｉｉｉ．上清ＩＩのｐＨを約３．６に調節して、ｐＨを調節した上清ＩＩを形成すること
   、
   ｉｖ．ｐＨを調節した上清ＩＩを、沈殿物ＩＩＩおよびイチジク漿液画分に分離すること
   を含む、請求項２に記載の組成物。
4. 前記安定化剤が、抗酸化剤、キレート化剤、防腐剤、およびそれらの混合物からなる群
   から選択される、請求項３に記載の組成物。
5. 前記安定化剤が、メタ重亜硫酸ナトリウム、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム
   、メチルパラベンナトリウム、ペンチレングリコール、およびそれらの混合物からなる群
   から選択される、請求項４に記載の組成物。
6. 室温で少なくとも６カ月間安定である、請求項３に記載の組成物。
7. 室温で少なくとも１２カ月間安定である、請求項６に記載の組成物。
8. 室温で少なくとも２４カ月間安定である、請求項７に記載の組成物。
9. 前記イチジク葉が、ベンガルボダイジュ（F. benghalensis）、イチジク（F. carica）
   、フィカス・エラスティカ（F. elastica）、ガジュマル（F. microcarpa）、フィカス・
   トリゴナタ（F. trigonata）、およびそれらの組合せからなるフィカス属種の群から選択
   される、請求項３に記載の組成物。
10. 前記イチジク漿液画分が、フェオフォルビドを実質的に含有しない、請求項９に記載の
    組成物。
11. 前記イチジク漿液画分が、ケルダール法により測定して、タンパク質を実質的に含有し
    ない、請求項３に記載の組成物。
12. 前記イチジク漿液画分が水溶性である、請求項３に記載の組成物。
13. 前記イチジク漿液画分が、８未満のガードナー色度値を有する、請求項３に記載の組成
    物。
14. 前記ガードナー色度値が７．５未満である、請求項１３に記載の組成物。
15. 前記イチジク漿液画分が、皮膚の色素沈着過剰を低減させることが可能である生物学的
    活性を有する、請求項１に記載の組成物。
16. 前記生物学的活性が、メラニン形成（メラニン合成）における１つまたは複数のステッ
    プを妨害するのに十分である、請求項１５に記載の組成物。
17. 前記生物学的活性が、メラニン形成酵素活性を阻害するのに十分である、請求項１６に
    記載の組成物。
18. 前記酵素活性が、トリプシン活性、チロシナーゼ活性、または両方である、請求項１７
    に記載の組成物。
19. 前記生物学的活性が、エラスターゼ活性を阻害するのに十分である、請求項１６に記載
    の組成物。
20. 前記生物学的活性が、ＣＯＸ−２活性を阻害するのに十分である、請求項１６に記載の
    組成物。
21. 前記生物学的活性が、抗酸化活性、フリーラジカル捕捉活性、または両方を増加させる
    のに十分である、請求項１６に記載の組成物。
22. イチジク細胞漿液画分組成物を作製するためのプロセスであって、
    ａ．清浄で新鮮な萎凋していないイチジク葉からイチジク細胞汁を分離して、新鮮なイチ
    ジク細胞汁を得るステップであって、前記分離の前または間に外来の液体が添加されない
    ステップと；
    ｂ．前記新鮮なイチジク細胞汁をろ過して、繊維を含有しない細胞汁を得るステップと、
    ｃ．前記繊維を含有しない細胞汁を分画して、イチジク漿液画分を得るステップであって
    、前記分画が、
    （１）前記繊維を含有しない細胞汁からクロロフィルを除去して、上清Ｉを得ること、
    （２）上清Ｉから色素およびタンパク質を除去して、イチジク漿液画分を形成すること、
    および
    （３）場合により、安定化剤を前記イチジク漿液画分に添加すること
    を含む、ステップと
    を含むプロセス。
23. 上清Ｉからの色素およびタンパク質の前記除去が、
    ｉ．上清ＩのｐＨを約７．５に調節して、ｐＨを調節した上清Ｉを形成すること、
    ｉｉ．ｐＨを調節した上清Ｉを、沈殿物ＩＩおよび上清ＩＩに分離すること、
    ｉｉｉ．上清ＩＩのｐＨを約３．６に調節して、ｐＨを調節した上清ＩＩを形成すること
    、
    ｉｖ．ｐＨを調節した上清ＩＩを、沈殿物ＩＩＩおよびイチジク漿液画分に分離すること
    を含む、請求項２２に記載のプロセス。
24. 前記安定化剤が、抗酸化剤、キレート化剤、防腐剤、およびそれらの混合物からなる群
    から選択される、請求項２３に記載のプロセス。
25. 前記安定化剤が、メタ重亜硫酸ナトリウム、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム
    、メチルパラベンナトリウム、ペンチレングリコール、およびそれらの混合物からなる群
    から選択される、請求項２４に記載のプロセス。
26. 前記組成物が、室温で少なくとも６カ月間安定である、請求項２５に記載のプロセス。
27. 前記組成物が、室温で少なくとも１２カ月間安定である、請求項２６に記載のプロセス
    。
28. 前記組成物が、室温で少なくとも２４カ月間安定である、請求項２７に記載のプロセス
    。
29. 前記イチジク葉が、ベンガルボダイジュ（F. benghalensis）、イチジク（F. carica）
    、フィカス・エラスティカ（F. elastica）、ガジュマル（F. microcarpa）、フィカス・
    トリゴナタ（F. trigonata）、およびそれらの組合せからなるフィカス属種の群から選択
    される、請求項２２に記載のプロセス。
30. 前記組成物が、フェオフォルビドを実質的に含有しない、請求項２２に記載のプロセス
    。
31. 前記組成物が、ケルダール法により測定して、タンパク質を実質的に含有しない、請求
    項２２に記載のプロセス。
32. 前記組成物が水溶性である、請求項２２に記載のプロセス。
33. 前記組成物が、８未満のガードナー色度値を有する、請求項２２に記載のプロセス。
34. 前記組成物が、７．５未満のガードナー色度値を有する、請求項２２に記載のプロセス
    。