JP2016108466A

JP2016108466A - エーテルリン脂質およびその製造方法

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Publication number: JP2016108466A
Application number: JP2014247792A
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Inventors: 志郎馬渡; Shiro Mawatari; 武彦藤野; Takehiko Fujino
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Filing date: 2014-12-08
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Abstract

【課題】アルツハイマー病、パーキンソン病、うつ病、統合失調症などの脳神経病、糖尿病などのメタボリックシンドローム、種々の感染症や免疫異常の治療、および改善の効果において、従来品よりも優れたエーテルリン脂質を、容易にかつ大量に製造することを可能とする。【解決手段】エーテルリン脂質を、アサリ、シジミなどの二枚貝の組織から抽出処理によって得る。このエーテルリン脂質は、前記効果において、従来の鳥組織由来のエーテルリン脂質を遥かに凌ぐものである。【選択図】なし

Description

この発明は、エーテルリン脂質と、その製造方法に関するものである。
より詳しくは、アルツハイマー病、パーキンソン病、うつ病、統合失調症などの脳神経病、糖尿病などのメタボリックシンドローム、種々の感染症や免疫異常の治療および改善に有効なエーテルリン脂質と、このエーテルリン脂質を容易に、かつ大量に製造する方法に関するものである。

脂質とは、分子中に長鎖脂肪酸又は類似の炭化水素鎖を有し、生体内に存在するか、生物に由来する物質を指す。
この脂質は、単純脂質と複合脂質に分類することができる。
単純脂質は、Ｃ、ＨおよびＯより構成され、一般にアセトンに可溶で、単純脂質のトリアシルグリセロールは、動物体では、脂肪組織にエネルギーの貯蔵体として存在する。

一方、複合脂質は、リン酸のＰや塩基のＮなどを含む脂質群である。
したがって、複合脂質は、疎水性部分（脂肪酸部分）と親水性部分（リン酸や塩基の部分）からなり、両親媒性を示す。
一般的には、前記単純脂質がアセトンに可溶であるのに対し、複合脂質はアセトンに不溶である。
このような複合脂質は、生体膜の構成成分となっている。

前記複合脂質は、
１）グリセロリン脂質；ホスファチジルコリン（別名レシチン）、ホスファチジルエタノールアミンなどが属する。
２）スフィンゴリン脂質；スフィンゴミエリン、セラミドシリアチンなどが属する。
３）スフィンゴ糖脂質；セレブロシド、スルファチド、ガングリオシドなどが属する。
および
４）グロセロ糖脂質；微生物や高等植物に存在するジアシルグリセロールに種々の糖が結合したものなどがある。
に大別することができる。
なお、前記２）スフィンゴリン脂質および３）のスフィンゴ糖脂質を総称して、スフィンゴ脂質と呼ばれる。

前記グリセロリン脂質は、グリセロールを骨格にもつリン脂質の総称で、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリンなどがある。
このグリセロリン脂質は、非極性部分とエステル結合（アシル結合）しているものが多いが、グリセロールの１位（ｓｎ−１）にビニルエーテル結合（アルケニル結合）あるいはエーテル結合（アルキル結合）したものがある。
ビニルエーテル結合したものは、プラズマローゲンとも呼ばれている。
ビニルエーテル結合およびエーテル結合を持つグリセロリン脂質を合わせて、エーテルリン脂質と呼ばれている。

リン脂質は生体膜の構成成分として重要であるが、なかでもエーテルリン脂質であるプラズマローゲンは、哺乳動物の生体膜のリン脂質の約１８％を占めている。
特に、脳神経、心筋、骨格筋白血球、精子に多い。
プラズマローゲンは、ドコサヘキサエン酸やアラキドン酸などの多価不飽和脂肪酸と多く結合している。
したがって、これらの多価不飽和脂肪酸から産生するプロスタグランヂンやロイコトリエンなどの細胞間シグナルの、２次メッセンジャーの貯留所となっているだけでなく、細胞融合、イオン移送など重要な働きをしている。
さらに、プラズマローゲンのビニルエーテル結合（アルケニル結合）が、特に酸化ストレスに敏感であるため細胞の抗酸化の役目もしている。
哺乳動物においても少量ではあるがアルキル結合を有するエーテルリン脂質が存在する。特にラットの脳の海馬にはアルキル結合を持つホスファチジルコリン、フォスファチジルエタノラミンを確認した。
さらに、摂取されたエーテル結合（アルキル結合）を持つリン脂質は、哺乳動物ではプラズマローゲンに転化されることが知られている。

最近、プラズマローゲン型グリセロリン脂質は、例えば、国際公開第２０１１／０８３８２７号（特許文献１）に示されるように、脳神経細胞新生効果を有することが報告されている。
さらに、国際公開第２０１２／０３９４７２号（特許文献２）や、Ｉｆｕｋｕら，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｇｔｉｏｎ，９：１９７（２０１２）（非特許文献１）に示されるように、プラズマローゲン型グリセロリン脂質は、中枢神経系炎症を引き起こす原因の一つと考えられているグリア細胞の増加を抑制し、中枢神経系炎症を改善する効果を有し、特にアルツハイマー病などの神経変性疾患の予防および治療に効果的であることが指摘されている。

さらに、このようなプラズマローゲン型グリセロリン脂質は、例えば、特許文献１〜７に示されるように、ニワトリ表皮、鶏ムネ肉などの鳥組織から容易にかつ大量に得られることが報告されている。

国際公開第２０１１／０８３８２７号（請求の範囲）国際公開第２０１２／０３９４７２号（請求の範囲）国際公開第２００８／０５１３２９号公報（請求の範囲）国際公開第２００８／１４６９４２号公報（請求の範囲）国際公開第２００９／１５４３０９号公報（請求の範囲）特許第５０６２８７３号公報（特許請求の範囲）特許第５１８５５３９号公報（特許請求の範囲）

Ifuku ら，Journal of Neuroinflammagtion， 9: 197 (2012)

前記特許文献１〜７に記載されている製造方法は、ニワトリ表皮、鶏ムネ肉などの鳥組織から、プラズマローゲン型グリセロリン脂質を容易かつ大量に製造するものである。
特に、特許文献４に記載されている製造方法は、鶏ムネ肉から、従来の鶏皮よりも、プラズマローゲン型グリセロリン脂質を、容易かつ大量に製造するものである。

このように、アルツハイマー病、パーキンソン病、うつ病、統合失調症などの脳神経病、糖尿病などのメタボリックシンドロームや、種々の感染症や免疫異常の治療および改善の効果において、従来品よりも優れたプラズマローゲン型グリセロリン脂質ないしエーテルリン脂質を、容易にかつ大量に製造できる方法が求められている。

この発明はかかる現状に鑑み、前記効果に極めて優れたプラズマローゲン型グリセロリン脂質ないしエーテルリン脂質を、容易かつ大量に製造する方法を提供することを目的として検討を行なった。

その結果、二枚貝組織から、好ましくは特定の工程を施すことによって得られるエーテルリン脂質が、前記効果において、従来の鳥組織由来のプラズマローゲン型グリセロリン脂質を遥かに凌ぐものであることを見出して、この発明を完成させたものである。

すなわち、この発明の請求項１に記載の発明は、
二枚貝組織から抽出処理によって得られること
を特徴とするエーテルリン脂質である。

この発明の請求項２に記載の発明は、
請求項１に記載のエーテルリン脂質において、
前記エーテルリン脂質は、
下記式（１）及び／又は（２）で示されるものを含むこと
を特徴とするものである。

但し、前記式において、
Ｒ^１は炭素数１４〜１８の脂肪族炭化水素基である。
Ｒ^２は、主としてエイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸又はアラキドン酸であり、好ましくはこれらの３種の脂肪酸が全脂肪酸の５０％以上を占める。
Ｘは、主としてエタノールアミン又はコリンであり、好ましくはこれらが合計して全リン脂質の９０％以上を占める。

この発明の請求項３に記載の発明は、
イ．二枚貝組織の総脂質を水溶性ケトン系溶媒で処理して脱中性脂肪二枚貝リン脂質を得る工程
ロ．前記工程イ．で得られた脱中性脂肪二枚貝リン脂質から疎水性有機溶媒で抽出処理してグリセロリン脂質を得る工程
ならびに
ハ．前記工程ロ．で得られたグリセロリン脂質にホスホリパーゼＡ１を作用させて、混在するジアシルグリセロリン脂質を分解した後、溶液分配（例えば、脂質をヘキサンに抽出して、アセトンや水による分配法）などにより、精製されたエーテルリン脂質を得る工程
を含むこと
を特徴とする二枚貝組織由来エーテルリン脂質の製造方法である。

この発明の請求項４に記載の発明は、
請求項３に記載の二枚貝組織由来エーテルリン脂質の製造方法において、
前記疎水性有機溶媒は、
エーテル又は石油エーテルであること
を特徴とするものである。

この発明の請求項５に記載の発明は、
請求項３又は４に記載の二枚貝組織由来エーテルリン脂質の製造方法において、
前記水溶性ケトン系溶媒は、
アセトンであること
を特徴とするものである。

この発明の請求項６に記載の発明は、
ニ．二枚貝組織から、その総脂質を非極性有機溶媒・分岐アルコール混合液で抽出する工程
ならびに
ホ．前記工程ニ．で得られた総脂質にホスホリパーゼＡ１を作用させて、混在するジアシルリン脂質を分解した後、溶媒分配などにより、精製されたエーテルリン脂質を得る工程
を含むこと
を特徴とする二枚貝組織由来エーテルリン脂質の製造方法である。

この発明の請求項７に記載の発明は、
請求項３〜６のいずれかに記載の二枚貝組織由来エーテルリン脂質の製造方法で得られたこと
を特徴とする二枚貝組織由来エーテルリン脂質である。

さらに、この発明の請求項８に記載の発明は、
請求項１、２又は７のいずれかに記載の二枚貝組織由来エーテルリン脂質を含むこと
を特徴とする飲食品である。

さらにまた、この発明の請求項９に記載の発明は、
請求項１、２又は７にいずれかに記載の二枚貝組織由来エーテルリン脂質を含むこと
を特徴とする医薬用組成物である。

この発明の二枚貝組織から得られるエーテルリン脂質は、アルツハイマー病、パーキンソン病、うつ病、統合失調症などの脳神経病、糖尿病などのメタボリックシンドローム、種々の感染症や免疫異常の治療および改善に極めて優れ作用効果を有するものである。

かかる作用効果を有するエーテルリン脂質は、二枚貝から簡単な操作で、大量に製造することができる。

図１は、ＨＰＬＣチャートであって、図１（ａ）は、二枚貝（アサリ）由来の総リン脂質のＨＰＬＣチャートを、図１（ｂ）は、精製された二枚貝（アサリ）由来のエーテルリン脂質のＨＰＬＣチャートを示す。図２は、ＨＰＬＣチャートであって、図２（ａ）は、二枚貝（シジミ）由来の総リン脂質のＨＰＬＣチャートを、図２（ｂ）は、精製された二枚貝（シジミ）由来のエーテルリン脂質のＨＰＬＣチャートを示す。図３は、ＨＰＬＣチャートであって、図３（ａ）は、鶏胸肉由来のエーテルリン脂質の、全脂肪酸中の多価不飽和脂肪酸の含有率を示すＨＰＬＣチャートを、図３（ｂ）は、アサリ由来のエーテルリン脂質の全脂肪酸中の多価不飽和脂肪酸の含有率を示すＨＰＬＣチャートを、図３（ｃ）は、シジミ由来のエーテルリン脂質の全脂肪酸中の多価不飽和脂肪酸の含有率を示すＨＰＬＣチャートを示す。

以下、この発明にかかるエーテルリン脂質およびその製造方法の実施の形態について、説明する。
なお、この発明について、好ましい代表的な例を中心に説明するが、この発明はこのような代表例に限定されるものではない。

この発明のエーテルリン脂質は、二枚貝組織から抽出処理によって得られるものである。

ここで、エーテルリン脂質とは、グリセロール骨格の１位（ｓｎ−１）に、ビニルエーテル結合（アルケニル結合）あるいはエーテル結合（アルキル結合）をもつグリセロリン脂質をいう。
以下に、エーテルリン脂質の一般式を示す。式（１）で示される化合物がアルケニルリン脂質（プラズマローゲン）であり、式（２）で示される化合物がアルキルリン脂質である。

前記式中、Ｒ^１は脂肪族炭化水素基を示す。
Ｒ^１は通常、炭素数１４〜１８の脂肪族炭化水素基である。
Ｒ^２は脂肪族炭化水素基で、例えば、アラキドン酸（ＡＲＡ）、ドコサヘサエン酸（ＤＨＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）などの多価不飽和脂肪酸が結合している場合が多い。
さらに、式中、Ｘは極性基を示す。
Ｘは、好ましくはエタノールアミン、コリン、セリン、イノシトールなどである。

特に、前記式中Ｘが、エタノールアミンであるエタノールアミンプラズマローゲンと、コリンであるコリンプラズマローゲンは、哺乳動物に存在するエーテルリン脂質として主要である。
摂取されたエーテル結合（アルキル結合）をもつグリセロリン脂質は、そのまま吸収されて各組織で利用されるか、体内でアルケニル結合型リン脂質（プラズマローゲン）に転化する。

この発明において使用する二枚貝としては、例えば、アサリ、シジミ、ハマグリ、ホタテ、カキなどである。
二枚貝の組織としては、例えば、内臓、性腺、筋肉などが挙げられる。

この発明において、二枚貝組織からエーテルリン脂質を抽出する方法としては、エーテルリン脂質が抽出（および必要に応じて精製）できる限り、特に制限されない。

好ましくは、
イ．二枚貝組織の総脂質を水溶性ケトン系溶媒で処理して、中性脂質を除いて脱中性脂肪二枚貝リン脂質を得る工程、
ロ．前記工程イ．で得られた脱中性脂肪二枚貝リン脂質から、総グリセロリン脂質を疎水性有機溶媒でさらに抽出し、必要により濃縮する工程、
ならびに
ハ．前記工程ロ．で得られた総グリセロリン脂質に、ホスホリパーゼＡ１を作用させ、混在するジアシルグリセロリン脂質を加水分解したのち、溶液分配（溶媒分配法）によって、分解産物（例えば、リゾ型リン脂質や遊離脂肪酸）を除去する工程
を含む方法で、エーテルリン脂質の抽出および精製を行うことができる。

なお、前記方法において、前記工程ハ．は、エーテルリン脂質の精製工程である。
このような精製工程は必ずしも含まれてなくてもよいが、精製濃縮されたエーテルリン脂質を得ることが、より優れた効果を有するものとなるため、より好ましい。

前記工程イ．においては、二枚貝組織の総脂質から中性脂質を除去する。
前記二枚貝組織を用いる際には、予めミンチ化や、粉砕をしておくことが好ましい。
前記水溶性ケトン系溶剤としては、例えば、アセトンおよび／またはメチルエチルケトンが挙げられ、好ましくはアセトンが選択される。
なお、総脂質を得ることには特に困難はなく、イソプロパノール、ヘキサンなどの溶剤を用いて常法に従って抽出処理を行うことによって総脂質を得ることができる。

前記工程ロ．は、前記工程イ．で得られた脱中性脂肪二枚貝リン脂質から疎水性有機溶媒で、総グリセロリン脂質を抽出する工程である。
前記有機溶媒として、エーテルまたは石油エーテルが選択される。

前記工程ハ．は、前記工程ロ．で得られた総グリセロリン脂質から混在するジアシル型グリセロリン脂質を加水分解することで、ジアシル型リン脂質を除く工程である。

前記加水分解には、ホスホリパーゼＡ１（ＰＬＡ１）が使用される。
このＰＬＡ１は、ジアシル型リン脂質のｓｎ−１のアシル結合を、特異的に加水分解する。
したがって、エーテルリン脂質のｓｎ−１はエーテル結合であるので、ＰＬＡ１は作用しない。

ＰＬＡ１処理によって、ジアシルグリセロリン脂質は、遊離脂肪酸とリゾリン脂質に分解される。
遊離脂肪酸とリゾリン脂質は、比較的水溶性であることなどを利用して除去することができる。

前記ＰＬＡ１については、前記効果が得られるものであれば、その由来などは特に制限されない。
前記ＰＬＡ１として、例えば、アスペルギルス・オリゼ由来のＰＬＡ１が挙げられる。
かかるＰＬＡ１は、例えば、三菱化学フーズ株式会社などから購入可能である。

前記ＰＬＡ１の使用量については、前記総グリセロリン脂質の量に応じて適宜選択され得る。
好ましくは、総グリセロリン脂質１ｇに対して、０．１５〜０．４５ｇ、より好ましくは０．２〜０．３ｇである。

前記ＰＬＡ１による酵素反応を、バッファー中で行うことができるが、このようなバッファーは、使用するＰＬＡ１に応じて適宜選択され得る。
例えば、０．１Ｍクエン酸−ＨＣｌバッファー（ｐＨ４．５）を用いることができる。
この場合、総グリセロリン脂質に前記バッファーを加えて溶解させてから、これにＰＬＡ１を加えればよい。
前記バッファーの使用量については、酵素反応が進行し得るものであればよく、特に制限はないが、好ましくは総グリセロリン脂質１ｇ当たり１〜３０ｍＬ、より好ましくは５〜１５ｍＬである。

反応条件については、適宜選択できる。
好ましくは温度３０〜７０℃、より好ましくは温度４５〜５５℃、さらに好ましくは温度５０℃で撹拌しながら、好ましくは１〜５時間、より好ましくは１〜２時間反応させる。
その際のｐＨは、好ましくはｐＨ３．５〜５．５、より好ましくはｐＨ４〜５である。

なお、酵素反応を、冷却により止めてもよい。
さらに、酵素の失活処理を行ってもよい。
例えば、前記失活処理は、加水分解反応後、温度を７０℃程度まで上昇させることによって行うことができる。

このようにして、ジアシル型グリセロリン脂質が分解された処理液（加水分解処理液）を得ることができる。
この加水分解処理液に、例えば、２〜３倍量のヘキサンを加え、その後、液層を回収することで、酵素バッファーおよび酵素タンパク質を除去することができる。

さらに、エーテルリン脂質は、ヘキサンに溶解するが、アセトンなどの水溶性ケトン系溶剤には難溶性であることから、これらの溶媒および水を適宜組み合わせて分配を行い、さらに水又は水溶液により溶液分配すること（溶媒分配法）で、リゾリン脂質を除去してエーテルリン脂質を精製することができる。
すなわち、アセトンなどの水溶性ケトン系溶媒によりリン脂質以外の中性脂質を除去でき、水系溶液分配によりエーテルリン脂質とリゾリン脂質を分離できる。

この発明において、
ニ．二枚貝組織から、その総脂質を非極性有機溶媒・分岐アルコール混合液で抽出する工程
ならびに
ホ．前記工程ニ．で得られた総脂質にホスホリパーゼＡ１を作用させて、混在するジアシルリン脂質を分解した後、溶媒分配などにより、精製されたエーテルリン脂質をうる工程
を含む方法でも、エーテルリン脂質の抽出および精製を行うことができる。
この発明では、簡便であることから、このような方法を採用することが、より好ましい。
前記非極性有機溶媒としては、飽和脂肪族炭化水素類が挙げられ、好ましくは直鎖状の飽和炭化水素、より好ましくはヘキサンが選択される。
前記分岐アルコールには、二級アルコールおよび三級アルコールが含まれ、好ましくは二級アルコール、より好ましくはイソプロパノールが選択される。
この場合において、この方法の前記工程ホ．で、ジアシルリン脂質が分解された処理液が得られる。例えば、この加水分解処理液に、５〜１０倍溶のヘキサン・イソプロパノール混合液（３：２）を加えて分液ロートに移し、その約３分の２の水を加えて、２層に分け、上層（ヘキサン層）を回収することで、脂質分解産物（遊離脂肪酸、リゾリン脂質）、酵素タンパク質、酵素バッファーを除去できる。
なお、この方法については、前述のエーテルリン脂質の抽出および精製方法を参考にして容易に実施することができる。

この発明の二枚貝組織由来エーテルリン脂質は、主にエタノールアミンリン脂質とコリンリン脂質を含むものである。
このような脂質の構成は、二枚貝組織由来エーテルリン脂質を、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で解析・確認することができる。

この発明における二枚貝組織由来エーテルリン脂質は、そのｓｎ−２において、多くのドコサペンタエン酸（ＤＨＡ）や、アラキドン酸（ＡＲＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）と結合している。
すなわち、ドコサヘキサエノイル基、アラキドノイル基およびエイコサペンタエノイル基からなる群から選択される１種以上を残基として多く含む。

このような構成によって、この発明の二枚貝組織由来エーテルリン脂質は、アルツハイマー病、パーキンソン病、うつ病、統合失調症などの脳神経病、糖尿病などのメタボリックシンドローム、種々の感染症や免疫異常の治療および改善にきわめて有効である。

この発明の二枚貝組織由来エーテルリン脂質は、飲食品の素材として、医薬の原料として、利用することができるものである。
このエーテルリン脂質は、アルツハイマー病、パーキンソン病、うつ病、統合失調症などの脳神経病、糖尿病などのメタボリックシンドローム、種々の感染症や免疫異常の治療および改善に有効であるので、生体内に摂取されることによって、これらの効果が発揮され得る。

さらに、この発明の二枚貝組織由来エーテルリン脂質は、前述の如く公知の、又は将来開発される様々な飲食品の形態を適宜採用することができる。
この場合において、機能性食品又は特定保健用食品の形態についても、同様に採用することができる。

様々な飲食品の製品の形態として、例えば、菓子（冷菓、ゼリー、ケーキ、キャンディー、チューインガムなど）、パン、牛乳やヨーグルトなどの乳製品などの各種製品を挙げることができる。
飲食品として使用できる調味剤や甘味剤を使用し、溶液としてドリンクの形態で使用することもできる。

前記機能性食品又は特定保健用食品（栄養剤を含む）は、前記同様、この発明の二枚貝組織由来エーテルリン脂質を含有するものであるが、一般に飲料品や、食料品の形態のみならず、錠剤（糖衣錠、フィルムコーティング錠を含む）、散剤、顆粒剤、カプセル剤（ソフトカプセルを含む）、シロップ剤、液剤（ジュースなど）などの製剤の形態で経口摂取できるように構成される。

例えば、このような食品は、前記エーテルリン脂質を果汁、牛乳やヨーグルトなどの乳製品、乳糖やデキストリンなどの賦形剤などの、一般的な健康食品用の素材に添加することによって製造され得るが、これらに限定されるものではない。
機能性食品の一態様であるサプリメントの形態を選択する場合であっても、公知の方法に従って製造すればよい。

例えば、有効成分である前記エーテルリン脂質に、賦形剤（乳糖、白糖、デンプンなど）、崩壊剤（デンプン、炭酸カルシウムなど）、結合剤（デンプン、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロースなど）又は滑沢剤（タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール６０００など）などを添加して圧縮成形する。
ついで、必要によって、味のマスキング、腸溶性あるいは持続性の目的のため、公知の方法でコーティングすることができる。

このような食品もまた、前記エーテルリン脂質を含有するので、経口摂取した時に、アルツハイマー病、パーキンソン病、うつ病、統合失調症などの脳神経病、糖尿病などのメタボリックシンドローム、種々の感染症や免疫異常の治療および改善の作用を発揮する。

なお、前記エーテルリン脂質は、使用される製品に混合して使用することが簡便であるが、前記作用を奏するに有効な量のエーテルリン脂質を含有すべきことは当然のことである。
例えば、前記エーテルリン脂質を、飲食品に、好ましくは０．０１〜８０質量％程度、より好ましくは０．０５〜２０質量％程度含有することができる。

飲食品に関し、有効成分である前記エーテルリン脂質の摂取量については、被検者の年齢、体重、体質、体調、形態、摂取期間などに応じて適宜選択すればよい。

前記飲食品は、予防用として、健常者は勿論、各種の疾患を有する者で、重症患者から軽症の患者まで、特にメタボリックシンドロームや、アルツハイマー病などの疾患者に限定することなく、使用することができる。

この発明の二枚貝組織由来エーテルリン脂質は、必要に応じて薬剤的に許容できる担体と配合し、希釈剤に溶解もしくは懸濁した薬剤として、経口的に患者に投与できる。

この発明において、医薬用組成物は、適当な添加剤、例えば、
乳糖、ショ糖、マンニット、トウモロコシデンプン、合成もしくは天然ガム、結晶セルロースなどの賦形剤、
デンプン、セルロース誘導体、アラビアゴム、ゼラチン、ポリビニルピロリドンなどの結合剤、
カルボシキメチルセルロースカルシウム、カルボシキメチルセルロースナトリウム、デンプン、コーンスターチ、アルギン酸ナトリウムなどの崩壊剤、
タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウムなどの滑沢剤、
炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸ナトリウムなどの充填剤又は希釈剤
などと、適宜混合し、錠剤、散剤（粉末）、丸剤及び顆粒剤などとすることができる。
なお、硬質又は軟質のゼラチンカプセルなどを用い、カプセル剤とすることもできる。

さらに、この発明において、医薬用組成物は、精製水などの一般的に用いられる不活性希釈剤に溶解させ、必要に応じて、この溶液に浸潤剤、乳化剤、分散助剤、界面活性剤、甘味料、フレーバー、芳香物質などを適宜添加することによって、シロップ剤、エリキシル剤などの液状製剤とすることもできる。
なお、これらの製剤化は、従来公知の方法で可能である。

この発明において、得られた医薬用組成物を、医薬としてヒトに投与する場合における投与量は、有効成分である特定化合物の投与量により定められる。
その投与量は、剤型や患者の年齢などに依存するが、一日当たり１ｍｇ〜１，０００ｍｇの範囲内であって、体重５０ｋｇの成人に対する投与量では、一日当たり１０ｍｇ〜５００ｍｇが好ましい。

なお、ヒト以外の動物に対しても、飼料、医薬品および医薬用組成物などの形態で適用することができる。

以下に、実施例を挙げて、この発明のエーテルリン脂質およびその製造方法を詳細に説明するが、この発明は、これら実施例により制限されることはない。

＜実施例１＞
（二枚貝由来エーテル型グリセロリン脂質の製造）
（１）二枚貝総脂質の抽出
二枚貝アサリ１００ｇにイソプロパノール２００ｍＬ、ヘキサン３００ｍＬを加えて、ブレンダーを用いて粉砕し、室温で１時間静置した。
その後、吸引ろ過し、ろ液を分液ロートに移した。
分液ロートに水３６０ｍＬを加えて混和した。
上層のヘキサン層を回収、乾固して二枚貝総脂質を得た。

（２）総脂質から総リン脂質の抽出
得られた総脂質にアセトン２００ｍＬを加えて撹拌し、氷冷後、１０００ｇ、１０分間、４℃で遠心した。沈殿を回収して脱中性脂肪二枚貝総リン脂質を得た。

（３）アサリ由来総リン脂質のＨＰＬＣ解析
得られた総リン脂質について、下記条件でＨＰＬＣを行った。
その結果を、図１（ａ）に示す。

＜ＨＰＬＣの条件＞
使用機器：ＨＰＬＣＡｇｉｌｅｎｔ１１００ｓｙｓｔｅｍ（ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｔｏｋｙｏ）
カラム：Ｌｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒｅ１００Ｄｉｏｌ（２５０×３ｍｍ，５μｍ）（ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）
流量：０．８ｍｌ／分
検出：ＥＬＳＤ（蒸発光検出器）（ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）
移動相：
（Ａ）ヘキサン／イソプロパノール／酢酸（８２：１７：１，ｖ／ｖ，０．０８％ＴＥＡ^＊）
（Ｂ）イソプロパノール／水／酢酸（８５：１４：１，０．０８％ＴＥＡ^＊）
＊ＴＥＡ：トリエチルアミン
なお、時間帯と移動相（Ａ）と（Ｂ）の液組成を、表１に示す。

（４）総グリセロリン脂質の分離
得られた総リン脂質（アセトン沈殿）をエーテル５０ｍＬに溶解し、混和した後、１０００ｇ、４℃、１０分間遠心し、上清（エーテル層）を乾固して、総グリセロリン脂質を得た。

（５）総グリセロリン脂質の酵素処理と抽出によるエーテルリン脂質の精製
得られた総グリセロリン脂質を、ホスホリパーゼＡ１（三菱化学フーズ（株）製）溶液（２０ｍｇ／ｍＬクエン酸緩衝液（ｐＨ４．５））２０ｍＬ中に分散させ、超音波などで、充分混和し、温度５０℃、２時間反応させた。
その後、冷却し、反応を止めた。
ヘキサン／イソプロパノール（３：２）４００ｍＬを加えて、分液ロートに移し、混和後、水２４０ｍＬを加えて、静置し、水層を除いた。
残存しているリゾ型リン脂質を除くために、残ったヘキサン層に２００ｍＬの水を加えて混和し、ヘキサン層を回収し乾固した。
残留している中性脂質を除くため、これに、アセトン１００ｍＬを加えて混和し、冷却後、遠心して沈殿を回収し、精製された二枚貝由来エーテル型グリセロリン脂質を得た。

（６）精製された二枚貝由来エーテルリン脂質（エーテル型グリセロリン脂質）のＨＰＬＣ解析
得られた二枚貝（アサリ）由来エーテル型グリセロリン脂質について、前記ＨＰＬＣ条件でＨＰＬＣ解析を行った。
その結果を、図１（ｂ）に示す。

＜実施例２＞
（二枚貝由来エーテルリン脂質の製造）
（１）脱中性脂肪二枚貝粉砕組織の分離と総グリセロリン脂質の抽出
二枚貝としてアサリに代えてシジミを用いること以外、実施例１と同様の方法により、総グリセロリン脂質を得た。

（２）シジミ由来総リン脂質のＨＰＬＣ解析のＨＰＬＣ解析
得られた総リン脂質について、実施例１と同様の条件でＨＰＬＣ解析を行った。
その結果を、図２（ａ）に示す。

（３）総グリセロリン脂質の酵素処理と抽出によるエーテルリン脂質の精製
実施例１と同様の方法によって、総グリセロリン脂質からシジミ由来エーテル型グリセロリン脂質を調製し、このエーテル型グリセロリン脂質を精製した。

（４）精製された二枚貝由来エーテルリン脂質のＨＰＬＣ解析
得られた二枚貝由来エーテルリン脂質について、実施例１と同様の条件でＨＰＬＣ解析を行った。
その結果を、図２（ｂ）に示す。

＜実施例３＞
（二枚貝由来エーテルリン脂質の製造）
（１）二枚貝総脂質の抽出
二枚貝アサリ１００ｇにヘキサン・イソプロパノール混合液（３：２）５００ｍＬを加えて、ブレンダーを用いて粉砕し、攪拌しながら室温に１時間置いた。
その後、吸引ろ過し、残渣を２００ｍＬのヘキサン・イソプロパノール混合液（３：２）で洗い、合わせた、ろ液を分液ロートに移した。
分液ロートに水４００ｍＬを加えて混和後、静置した。
２層に分離した下層を捨てて、上層のヘキサン層を回収した。
得られたヘキサン層を乾固して、二枚貝総脂質を得た。

（２）総脂質の酵素処理と抽出によるエーテルリン脂質の精製
得られた総脂質を、ホスホリパーゼＡ１（三菱化学フーズ（株）製）溶液（２０ｍｇ／ｍＬクエン酸緩衝液（ｐＨ４．５））２０ｍＬ中に分散させ、超音波などで、充分混和し、温度５０℃、２時間反応させた。
その後、冷却し、反応を止めた。
ヘキサン／イソプロパノール（３：２）３６０ｍＬを加えて、分液ロートに移し、混和後、水２２０ｍＬを加えて、静置し、水層を除いた。
ヘキサン層を回収し乾固した。
その後、残留しているコレステロールなどの中性脂質を除くため、これに、アセトン２０ｍＬを加えて混和し、氷冷後、温度４℃、１０分間で遠心して沈殿を回収し、精製された二枚貝由来エーテルリン脂質を得た。

＜実施例４＞
（各種二枚貝組織由来の総グリセロリン脂質の製造・解析）
各種二枚貝から、実施例１と同様の方法により、総グリセロリン脂質を得た。
得られた総グリセロリン脂質について、前記実施例１と同様の条件でＨＰＬＣ解析を行った。
その結果を、表２に示す。

総グリセロリン脂質の約３０％がエタノールアミンリン脂質（ＰＥ）で、このＰＥの約９０％がプラズマローゲン（アルケニルＰＥ）であることが分かった。
さらに、総グリセロリン脂質の約５０％がコリンリン脂質（ＰＣ）で、そのＰＣの約３５％がアルキルＰＣである。
二枚貝組織において、その総グリセロリン脂質の約３０〜５５％が、エーテルリン脂質で構成されている。

＜実施例５＞
（エーテルリン脂質の全脂肪酸中の多価不飽和脂肪酸の分析）
二枚貝由来エーテルリン脂質および鶏組織由来のエーテルリン脂質に含まれている全脂肪酸中の多価不飽和脂肪酸（ＥＰＡ、ＤＨＡおよびＡＲＡ）の割合について、下記方法に従い、ＨＰＬＣを用いて、分析をした。
その結果を、表４および５、ならびに図３に示す。

（各種二枚貝由来のエーテルリン脂質の加水分解）
各種二枚貝由来のエーテルリン脂質を分取し、乾固したものを０．５規定水酸化カリウムのメタノール溶液で加水分解し、遊離脂肪酸を得た。

（各種エーテルリン脂質からの遊離脂肪酸のラベル）
上記エーテルリン脂質から加水分解で産生した、遊離脂肪酸を０．０５％９−アントレルヂアゾメタン（ＡＤＡＭ）でラベルした。

（脂肪酸の分析）
前記ラベルした脂肪酸を、下記条件のＨＰＬＣで分析した。

［ＨＰＬＣの条件］
使用機器：アジレントＨＰＬＣ１１００シリーズ（アジレント社）
カラム：Ultrasphere 100 RP-18e （メルク社）
流量：０．８ｍｌ／分
検出：蛍光検出器
移動相：
（Ａ）アセトニトリル
（Ｂ）エタノール
（Ｃ）ヘキサン
なお、時間帯と移動相（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）の液組成を、表３に示す。

表４および５ならびに図３から、二枚貝由来のエーテルリン脂質は、そのｓｎ−２において、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）およびアラキドン酸（ＡＲＡ）を多量に結合していることが分かる。
一方、二枚貝由来エーテルリン脂質と同時に同じ方法で分析した鶏胸肉由来のエーテルリン脂質では、ＰＥ，ＰＣともにアルケニルリン脂質であり、アルキルＰＣは存在していない。
したがって、脂肪酸の構成を比較すると、二枚貝由来エーテルリン脂質には、ＥＰＡおよびＤＨＡが多く含まれることが示された。
アルツハイマー病、パーキンソン病、うつ病、統合失調症などの脳神経病、糖尿病などのメタボリックシンドローム、種々の感染症や免疫異常において、ＥＰＡおよびＤＨＡが減少し、また、ＥＰＡはプロスタグランジン、ＤＨＡはノイロプロテクチンを貯蔵する役目をするものである。
二枚貝由来のエーテルリン脂質には、このようなＥＰＡおよびＤＨＡが多数含まれているが、鶏胸肉由来のエーテルリン脂質には、ＥＰＡは全く含まれておらず、含まれているＤＨＡも少量である。
よって、この発明の二枚貝由来のエーテルリン脂質は、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）およびアラキドン酸（ＡＲＡ）を多く含むため、従来のエーテルリン脂質よりも優れた効果を奏することが期待される。

この発明によれば、アルツハイマー病、パーキンソン病、うつ病、統合失調症などの脳神経病、糖尿病などのメタボリックシンドローム、種々の感染症や免疫異常の治療および改善に有効なエーテルリン脂質を、容易かつ大量に製造することが可能となるので、医薬業界において幅広く利用されるものである。

Claims

二枚貝組織から抽出処理によって得られること
を特徴とするエーテルリン脂質。
前記エーテルリン脂質は、
下記式（１）及び／又は（２）で示されるものを含むこと
を特徴とする請求項１に記載のエーテルリン脂質：

但し、前記式において、
Ｒ^１は炭素数１４〜１８の脂肪族炭化水素基であって、
Ｒ^２は、主としてエイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸又はアラキドン酸で、
Ｘは、主としてエタノールアミン又はコリンである。
下記工程を含むことを特徴とする二枚貝組織由来エーテルリン脂質の製造方法：
イ．二枚貝組織の総脂質を水溶性ケトン系溶媒で処理して脱中性脂肪二枚貝リン脂質を得る工程
ロ．前記工程イ．で得られた脱中性脂肪二枚貝リン脂質から疎水性有機溶媒で抽出処理してグリセロリン脂質を得る工程
ならびに
ハ．前記工程ロ．で得られたグリセロリン脂質にホスホリパーゼＡ１を作用させて、混在するジアシルグリセロリン脂質を分解した後、溶液分配などにより、精製されたエーテルリン脂質を得る工程。
前記疎水性有機溶媒は、
エーテル又は石油エーテルであること
を特徴とする請求項３に記載の二枚貝組織由来エーテルリン脂質の製造方法。
前記水溶性ケトン系溶媒は、
アセトンであること
を特徴とする請求項３又は４に記載の二枚貝組織由来エーテルリン脂質の製造方法。
下記工程を含むことを特徴とする二枚貝組織由来エーテルリン脂質の製造方法：
ニ．二枚貝組織から、その総脂質を非極性有機溶媒・分岐アルコール混合液で抽出する工程
ならびに
ホ．前記工程ニ．で得られた総脂質にホスホリパーゼＡ１を作用させて、混在するジアシルリン脂質を分解した後、溶媒分配などにより、精製されたエーテルリン脂質を得る工程。
請求項３〜６のいずれかに記載の二枚貝組織由来エーテルリン脂質の製造方法で得られたこと
を特徴とする二枚貝組織由来エーテルリン脂質。
請求項１、２又は７のいずれかに記載の二枚貝組織由来エーテルリン脂質を含むこと
を特徴とする飲食品。
請求項１、２又は７にいずれかに記載の二枚貝組織由来エーテルリン脂質を含むこと
を特徴とする医薬用組成物。