JP6207545B2 - 学習記憶能力増強剤 - Google Patents
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Description
[項1]
プラズマローゲンを含む、学習記憶能力増強剤。
[項2]
前記プラズマローゲンが、生体組織から抽出されたプラズマローゲンである、請求項1に記載の学習記憶能力増強剤。
[項3]
前記生体組織が、鳥組織である、請求項2に記載の学習記憶能力増強剤。
[項4]
前記プラズマローゲンが、エタノールアミンプラズマローゲン及びコリンプラズマローゲンを含む、請求項1〜3のいずれかに記載の学習記憶能力増強剤。
[項5]
前記プラズマローゲンの90質量%以上が、エタノールアミンプラズマローゲン及びコリンプラズマローゲンである、請求項4に記載の学習記憶能力増強剤。
[項6]
前記プラズマローゲンに含有される(エタノールアミンプラズマローゲン:コリンプラズマローゲン)の質量比が、(1:5)〜(5:1)である、請求項4又は5に記載の学習記憶能力増強剤。
[項7]
経口剤である、請求項1〜6のいずれかに記載の学習記憶能力増強剤。
[項8]
健常な哺乳動物に対して投与されるように用いられることを特徴とする、請求項1〜7のいずれかに記載の学習記憶能力増強剤。
(1)生体組織をエタノール又は含水エタノールで抽出処理する工程、
(2)工程(1)で得られた抽出物をアセトンで遠心処理後、沈殿を回収し、さらにヘキサン/アセトン混合溶媒で遠心処理後、液層を回収する工程、及び
(3)工程(2)で回収した液をホスホリパーゼA1(PLA1)により処理する工程(さらに、必要に応じて、アセトン及びヘキサンを用いた分配により、遊離脂肪酸及びリゾリン脂質を除去する工程)。
鳥組織である鶏ムネ肉を常法に従って採取し、約8mmのミンチへチョッピングし、微生物制御のために加熱工程を経た後、これをチルド冷凍保存した。その後、常法により凍結乾燥を行い、グラインダー処理により粉砕し、乾燥鶏ムネ肉粉末を得た。なお、乾燥鶏ムネ肉粉末は、抽出に使用するまでは脱酸素剤と共に密封保存した。
工程(1)
上述の方法により得られた乾燥鶏ムネ肉粉末1kgにエタノール4Lを加えて12時間、40℃で攪拌・静置した後、抽出液を固形物と分離した。固形物には再度エタノール2.5Lを加えて上記と同様の操作を行い、得られた抽出液を合わせて濾紙で濾過した後、減圧乾燥して濃縮された抽出乾固物を得た。
工程(1)で得られた抽出乾固物に水8mLを加えて攪拌及び遠心し、上層を除去することにより沈殿を回収した。当該沈殿に、アセトン200mLを加えて攪拌及び4℃で遠心し、沈殿を回収した。当該沈殿にさらにヘキサン/アセトン(7:3)混合溶媒100mLを加えて攪拌及び遠心し、液層(プラズマローゲン含有画分)を回収した。液層は速やかにロータリーエバポレーターで濃縮乾固して、濃縮乾固体物20gを得た。なお、遠心は、3000rpm×10分で行い、アセトン単一及びヘキサン/アセトン混合溶媒を用いた操作は4℃で、その他の操作は15℃で行った。
工程(2)で得られたプラズマローゲン含有画分20gを、ホスホリパーゼA1(三菱化学フーズ株式会社製)溶液400mL(10mg/mL 0.1クエン酸−HClバッファー)中に分散させ、窒素ガス充填下50℃で2時間攪拌した。その後、冷却し、2倍容量のヘキサンを加えて2回攪拌、分配し、ヘキサン層を回収して濃縮乾固した。さらに、当該乾固物にアセトン60mLを加えて撹拌及び遠心し、沈殿を回収する操作を2回繰り返した。さらに、当該沈殿にヘキサン/アセトン(7:3)混合溶媒60mLを加えて攪拌及び遠心し、液層(高純度プラズマローゲン含有画分)を回収した。当該液層に、ヘキサン198mLとアセトン222mL(即ち、合計でヘキサン/アセトン(1:1)となる)を加えて分液漏斗に移し、水72mLを加えて攪拌及び分配した。下層(アセトン層)を除去し、上層(ヘキサン層)にアセトン/水(5:3)192mLを加えて、攪拌及び分配した。上層(ヘキサン層)を回収し、速やかに減圧乾燥して鶏ムネ肉由来高純度プラズマローゲン含有物を得た。
上述の方法により得られた鶏ムネ肉由来高純度プラズマローゲン含有物をHPLCにより解析し、クロマトグラムを得た。HPLCの解析条件を以下に示す。
・機器:Shimadzu LC−10AD
・カラム:LiChrospher Diol 100(250−4、Merk社製)(プレカラムなし)
・溶媒;A液:ヘキサン/2−プロパノール/酢酸(87:17:1、v/v)、B液:2−プロパノール/水/酢酸(85:14:1、v/v)+0.2% トリエチルアミン
・グラジエント条件:
・検出:ELSD蒸発光散乱検出器(島津製作所社製)
<飼料の調製>
実際に使用するマウスの飼料として、AIN−93M(米国国立栄養研究所により1993年に発表されたマウス・ラットの栄養研究用標準飼料)を購入した(以下、「通常飼料」と記載する。)。また、特別注文により、生体組織抽出プラズマローゲンを0.1質量%含有するAIN−93M(以下、「0.1%Pls含有飼料」と記載する。)も購入した(いずれもオリエンタル酵母株式会社製)。
8週齢の健康なC57BJ6雄マウス14匹を日本エスエルシー株式会社から購入し、プラズマローゲン投与群(n=7)及びコントロール群(n=7)に群分けした。プラズマローゲン投与群には0.1%Pls含有飼料を、コントロール群には通常飼料を、それぞれ6週間自由摂取させて飼育した。なお、飼育中、水は自由摂取とした。
試験例1の試験後のプラズマローゲン投与群及びコントロール群のマウス各1匹を心腔内から生理食塩水で灌流した後、開頭して海馬を取り出し、常法に従って脂質を抽出し、液体クロマトグラフ質量分析計(LC−MS)により、海馬に含まれるプラズマローゲン量を測定した。LC−MSによる測定結果を図3に示す。
Claims (5)
- プラズマローゲンを含む、学習記憶能力増強剤であって、
前記プラズマローゲンが、エタノールアミンプラズマローゲン及びコリンプラズマローゲンを含み、
前記プラズマローゲンの90質量%以上が、エタノールアミンプラズマローゲン及びコリンプラズマローゲンであり、
健常な哺乳動物に対して投与されるように用いられ、健常な学習記憶能力を増強するための学習記憶能力増強剤。 - 前記プラズマローゲンが、生体組織から抽出されたプラズマローゲンである、請求項1に記載の学習記憶能力増強剤。
- 前記生体組織が、鳥組織である、請求項2に記載の学習記憶能力増強剤。
- 前記プラズマローゲンに含有される(エタノールアミンプラズマローゲン:コリンプラズマローゲン)の質量比が、(1:5)〜(5:1)である、請求項1〜3のいずれかに記載の学習記憶能力増強剤。
- 経口剤である、請求項1〜4のいずれかに記載の学習記憶能力増強剤。
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