JP2022159984A - 認知症の予防および／または改善剤 - Google Patents

Abstract

【課題】 脳血管性認知症などの認知症の予防および／または改善剤を提供すること。【解決手段】 オキアミ由来の組成物を有効成分とする。オキアミ由来の組成物は、リン脂質を例えば３～４０重量％の割合で含むことが好ましく、中性脂質を例えば３～４０重量％の割合で含むことが好ましく、タンパク質ないしペプチドを例えば４０～８０重量％の割合で含むことが好ましい。【選択図】 図１

Description

本発明は、脳血管性認知症などの認知症の予防および／または改善剤に関する。

超高齢化社会に直面している我が国において、高齢の認知症患者の急増への対応が急務であることは周知の通りである。現在のところ、６５歳以上の高齢者の７人に１人は認知症患者であるとされている。認知症にはいくつかの種類があるが、その一つの脳血管性認知症は、脳梗塞や脳出血などの脳血管障害に起因し、アルツハイマー型認知症に次いで多く、また、アルツハイマー型認知症と併発することもある認知症である。こうした背景から、脳血管性認知症の予防や改善に有用な成分についての探索が古くから精力的に行われており、例えば特許文献１では、シソ科の多年草植物であるチョロギ（学名：Ｓｔａｃｈｙｓ ａｆｆｉｎｉｓ）が、脳血管性認知症の予防や改善に有用な成分として報告されている。しかしながら、脳血管性認知症の予防や改善に有用な成分の探索は、今なお意義深い状況にある。

特許第６１６２５３６号公報

そこで本発明は、脳血管性認知症などの認知症の予防および／または改善剤を提供することを目的とする。

本発明者らは上記の点に鑑みて鋭意検討を行った結果、海洋生物であるオキアミ（Ｅｕｐｈａｕｓｉａｃｅａ）由来の組成物が、脳微小血管障害性認知症の予防や改善のために有用であることを見出した。

上記の知見に基づいてなされた本発明の認知症の予防および／または改善剤は、オキアミ由来の組成物を有効成分とする。
また、本発明の認知症の予防および／または改善剤においては、前記オキアミ由来の組成物がリン脂質を３～４０重量％の割合で含むことが好ましい。
また、本発明の認知症の予防および／または改善剤においては、前記オキアミ由来の組成物が中性脂質を３～４０重量％の割合で含むことが好ましい。
また、本発明の認知症の予防および／または改善剤においては、前記オキアミ由来の組成物がタンパク質ないしペプチドを４０～８０重量％の割合で含むことが好ましい。
また、本発明の認知症の予防および／または改善剤においては、前記認知症が脳血管性認知症であることが好ましい。
また、本発明の認知症の予防および／または改善剤の製造方法は、水中に懸濁したオキアミの破砕物を、ｐＨ３～４の条件下で麹菌由来のプロテアーゼを用いて酵素処理することによって得られるオイル画分を乾燥することで、有効成分とするオキアミ由来の組成物を調製する工程を含む。
また、本発明の認知症の予防および／または改善剤の製造方法においては、前記ｐＨの調整を有機酸および／または炭酸を用いて行うことが好ましい。
また、本発明の認知症の予防および／または改善剤の製造方法においては、前記有機酸がクエン酸であることが好ましい。

本発明によれば、脳血管性認知症などの認知症の予防および／または改善剤を提供することができる。

実施例の実験例１における、Ｒｏｔａｒｏｄ Ｔｅｓｔによるオキアミ由来の組成物の脳微小血管障害性認知症に対する作用を示すグラフである。 同、Ｍｏｒｒｉｓ Ｗａｔｅｒ Ｍａｚｅ Ｔｅｓｔによるオキアミ由来の組成物の脳微小血管障害性認知症に対する作用を示すグラフである。 実施例の実験例２における、Ｒｏｔａｒｏｄ Ｔｅｓｔによるオキアミ由来の組成物の脳微小血管障害性認知症に対する作用を示すグラフである。 同、Ｍｏｒｒｉｓ Ｗａｔｅｒ Ｍａｚｅ Ｔｅｓｔによるオキアミ由来の組成物の脳微小血管障害性認知症に対する作用を示すグラフである。

本発明の認知症の予防および／または改善剤は、オキアミ由来の組成物を有効成分とする。

本発明において、オキアミは、養殖魚のエサや釣りのエサなどとして馴染み深いが、特に限定されるものではなく、三陸地方でイサダと呼ばれて食用されているツノナシオキアミ（Ｅｕｐｈａｕｓｉａ ｐａｃｉｆｉｃａ）や、ナンキョクオキアミ（Ｅｕｐｈａｕｓｉａ ｓｕｐｅｒｂａ）などであってよい。

オキアミ由来の組成物は、リン脂質を含むことが好ましい。認知症の予防効果や改善効果の観点や、組成物の調製の容易性の観点から、オキアミ由来の組成物におけるリン脂質の割合は、３～４０重量％が好ましく、４～３０重量％がより好ましく、５～２０重量％がさらに好ましく、６～１５重量％がとりわけ好ましい。

リン脂質は、グリセロリン脂質を含むことが好ましい。グリセロリン脂質は、ジアシル型リン脂質とアルキル型リン脂質（１－アルキルエーテル型リン脂質）の少なくとも一方を含むことが好ましい。ジアシル型リン脂質は、グリセリンのｓｎ－１位とｓｎ－２位に脂肪酸（飽和脂肪酸であってもよいし不飽和脂肪酸であってもよい）がエステル結合するとともにｓｎ－３位にリン酸がエステル結合した物質（ホスファチジン酸）であってもよいし、さらにリン酸に極性基としてアルコール（コリン、エタノールアミン、イノシトール、セリン、グリセリンなど）がエステル結合した物質であってもよい。アルキル型リン脂質は、ジアシル型リン脂質におけるグリセリンのｓｎ－１位に脂肪酸がエステル結合するかわりに炭化水素がエーテル結合する物質であることは、当業者に周知の通りである。認知症の予防効果や改善効果の観点や、組成物の調製の容易性の観点から、オキアミ由来の組成物におけるジアシル型リン脂質の割合は、１～２０重量％が好ましく、２～１５重量％がより好ましい。アルキル型リン脂質の割合は、０．１～１０重量％が好ましく、０．５～５重量％がより好ましい。ジアシル型リン脂質とアルキル型リン脂質の含有比率は、前者１に対して後者０．０１～１が好ましく、前者１に対して後者０．０５～０．６がより好ましい（重量比）。

なお、リン脂質は、ジアシル型リン脂質とアルキル型リン脂質に加え、アルケニルアシル型リン脂質（プラズマローゲン）、スフィンゴリン脂質、リゾリン脂質などをさらに含んでよい。

オキアミ由来の組成物は、中性脂質を含むことが好ましい。認知症の予防効果や改善効果の観点や、組成物の調製の容易性の観点から、オキアミ由来の組成物における中性脂質の割合は、３～４０重量％が好ましく、５～２０重量％がより好ましい。

中性脂質は、グリセリンに１つの脂肪酸（飽和脂肪酸であってもよいし不飽和脂肪酸であってもよい）がエステル結合したモノグリセリド、２つの脂肪酸がエステル結合したジグリセリド、３つの脂肪酸がエステル結合したトリグリセリドなどのグリセリン脂肪酸エステルを含んでよい。

オキアミ由来の組成物は、タンパク質ないしペプチドを含むことが好ましい。認知症の予防効果や改善効果の観点や、組成物の調製の容易性の観点から、オキアミ由来の組成物におけるタンパク質ないしペプチドの割合は、４０～８０重量％が好ましく、４５～７９重量％がより好ましく、５０～７８重量％がさらに好ましい。

タンパク質ないしペプチドの分子量は、２００～１０，０００であることが好ましいが、分子量が１０，０００を上回るタンパク質をさらに含んでよい。

オキアミ由来の組成物は、カロテノイドの一種であるアスタキサンチンを含むことが好ましい。認知症の予防効果や改善効果の観点や、組成物の調製の容易性の観点から、オキアミ由来の組成物におけるアスタキサンチンの割合は、１０～１，０００ｐｐｍが好ましく、３０～８００ｐｐｍがより好ましく、５０～６００ｐｐｍがさらに好ましい。

オキアミ由来の組成物は、リン脂質や中性脂質を構成する脂肪酸として、ＤＨＡとＥＰＡの少なくとも一方を含むことが好ましい。認知症の予防効果や改善効果の観点や、組成物の調製の容易性の観点から、オキアミ由来の組成物におけるＤＨＡの割合は、０．１～５重量％が好ましく、０．５～４重量％がより好ましい。ＥＰＡの割合は、０．５～１０重量％が好ましく、１～５重量％がより好ましい。ＤＨＡとＥＰＡの含有比率は、前者１に対して後者０．５～２０が好ましく、前者１に対して後者１～１０がより好ましい（重量比）。

オキアミ由来の組成物は、水分や、炭水化物や灰分などからなる残部を含むことが好ましい。認知症の予防効果や改善効果の観点や、組成物の調製の容易性の観点から、オキアミ由来の組成物における水分の割合は、０．１～１０重量％が好ましく、０．２～８重量％がより好ましい。炭化水素や灰分などからなる残部の割合は、１～２０重量％が好ましい。

本発明の認知症の予防および／または改善剤の有効成分とするオキアミ由来の組成物は、例えば特開２０１９－１７８１２７号公報に記載された、水中に懸濁したオキアミの破砕物を、ｐＨ３～４の条件下で麹菌由来のプロテアーゼを用いて酵素処理することによって得られるオイル画分を乾燥する方法によって製造することができる。

原料として用いるオキアミは、生のものを用いてもよいし、凍結したもの（例えば無加水や加水の冷凍ブロックであって－５０℃以下で保存したもの）を用いてもよい。

オキアミの破砕は、例えば、室温環境下において、－１０～－３℃に維持したオキアミを（凍結したオキアミはこの温度域まで解凍してから）、ミートチョッパーを用いて粗く行った後、マスコロイダーを用いてペースト状になるまで行うことが、優れた品質のオキアミ由来の組成物を製造することができる点において好ましい。

こうして得られたオキアミの破砕物を、水中に懸濁し、ｐＨ３～４の条件下で麹菌（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ）由来のプロテアーゼを用いて酵素処理する。オキアミの破砕物の水中への懸濁は、例えばオキアミの破砕物１重量部に０．３～０．７重量部の水を加えて撹拌することで行えばよい。麹菌由来のプロテアーゼは、麹菌由来の酸性プロテアーゼ、中性プロテアーゼ、アルカリ性プロテアーゼから選択される少なくとも１種であってよく、市販のものでは、これらの混合製剤であるコクラーゼＰ顆粒（三菱ケミカルフーズ社製）、中性プロテアーゼ製剤であるオリエンターゼＯＰ（エイチビィアイ社製）やスミチームＦＰ（新日本化学工業社製）などを用いることができる。麹菌由来のプロテアーゼは、例えばオキアミの破砕物１重量部に対して０．００１～０．０３重量部用い、その至適温度でオキアミの破砕物を酵素処理する。麹菌由来のプロテアーゼとしてコクラーゼＰ顆粒を用いる場合の至適温度は、５０～５５℃である。処理時間は、例えば３０分間～３時間であってよい。麹菌由来のプロテアーゼを用いたオキアミの破砕物の酵素処理を、ｐＨ３～４の条件下で行うのは、オキアミの破砕物を酵素処理することによって得られるオイル画分に含まれる脂質が、オキアミ自身が持つ脂質分解酵素によって分解されてしまうことを防ぐためである。なお、ｐＨの調整は、クエン酸、乳酸、酢酸、グルクロン酸、アスコルビン酸などの有機酸や、炭酸を用いて行えばよいが、中でもクエン酸を用いてｐＨの調整を行うことが、認知症の予防効果や改善効果の観点や、医薬品素材や食品素材などを製造するための安全性の確保の観点から好ましい。クエン酸は、例えばオキアミの破砕物の水懸濁液１重量部に対して０．００１～０．０３重量部用いればよい。

オキアミの破砕物を酵素処理した後、例えば処理液を７０～７５℃に加温して１０分間～３時間インキュベートすることでプロテアーゼの失活を行ってから、処理液に含まれるオイル画分を回収する。処理液からのオイル画分の回収は、例えば、室温環境下において、脱水型デカンタを用いて処理液を遠心分離することによってオイル画分を含む液分と固形分に分離した後、得られたオイル画分を含む液分を濃縮型デカンタを用いて遠心分離することによってオイル画分と水画分に分離することで行えばよい。

最後に水画分から分離したオイル画分を乾燥することで、目的物であるオキアミ由来の組成物を得る。オイル画分の乾燥は、例えばフリーズドライ法やスプレードライ法や熱風乾燥法などによって行うことができる。目的物であるオキアミ由来の組成物が固形物として得られた場合、顆粒状や粉末状に粉砕してもよい。こうして得られるオキアミ由来の組成物が先に述べた成分を有することは、後に述べる実施例に記載の方法で分析することができる。

本発明の認知症の予防および／または改善剤の有効成分とするオキアミ由来の組成物は、例えば、飲食品（その添加物を含む）に配合して飲食したり、医薬品や医薬部外品として経口服用したりすることができる。その摂取量は、適用対象者の年齢や性別、症状の程度などに基づいて適宜決定することができ、適量を摂取することにより、認知症、とりわけ脳血管性認知症を予防や改善する効果をもたらす。

飲食品は、一般的な飲食品の他、例えば、健康食品、機能性食品（特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品など）、栄養補助食品、特別用途食品（病者用食品、乳児用調製粉乳、妊産婦・授乳婦用粉乳、嚥下困難者用食品など）であってもよい。飲食品の形態としては、即席食品類（即席麺、レトルト食品、缶詰、電子レンジ食品、即席スープ・みそ汁類、フリーズドライ食品など）、飲料類（清涼飲料、野菜飲料、粉末飲料、ドリンク剤など）、スープ類、ゼリー類、小麦粉製品（パン、パスタ、麺、ケーキミックス、パン粉など）、菓子類（クッキー、ビスケット、スナック、クラッカー、和菓子など）、調味料（ソース、トマト加工調味料、風味調味料、液体調味料、調理ミックス、たれ類、ドレッシング類、つゆ類、カレーの素、シチューの素など）、油脂類（マヨネーズなど）、乳製品（乳飲料、ヨーグルト、クリームなど）、農産加工品（農産缶詰、シリアルなど）、畜産加工品（ハム、ベーコン、ソーセージ、焼き豚など）、冷凍食品、調理食品、総菜類、珍味類などが挙げられる。

医薬品や医薬部外品の形態は、固形の経口投与製剤（錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、徐放剤など）であってもよいし、液状の経口投与製剤（溶液、懸濁液、乳濁液など）であってもよく、これらは常法に従ってそれぞれの製剤に応じた添加物を用いて調製することができる。

以下、本発明を実施例によって詳細に説明するが、本発明は以下の記載に限定して解釈されるものではない。

製造参考例１：本発明の認知症の予防および／または改善剤の有効成分とするオキアミ由来の組成物の調製（その１）
三陸地方で漁獲されたイサダ（ツノナシオキアミ）の無加水冷凍ブロック（－５０℃保存のもの）１０ｔを－５℃で解凍し、市販のミートチョッパーを用いて粗く破砕した後、市販のマスコロイダーを用いてペースト状になるまで破砕した。得られたオキアミの破砕物１０ｔに５ｔの純水を加えて撹拌することで調製したオキアミの破砕物の水懸濁液１５ｔに、麹菌由来のプロテアーゼであるコクラーゼＰ顆粒（三菱ケミカルフーズ社製）５０ｋｇを加え、さらにクエン酸１５０ｋｇを加えることで液のｐＨを３～４に調整し、５０℃で酵素処理した。１時間後、処理液を７０℃に加温して３０分間インキュベートすることでプロテアーゼの失活を行った。処理液を室温まで冷却してから、市販の脱水型デカンタを用いて処理液を遠心分離することで、オイル画分を含む液分１３ｔを固形分から分離した。次に、得られたオイル画分を含む液分を市販の濃縮型デカンタを用いて遠心分離することで、オイル画分１．７ｔを水画分から分離した。得られたオイル画分（赤色ないし桃色のオイル状物）をスプレードライした後、得られた固形物を粉砕することで、目的物である茶褐色の粉末状のイサダ由来の組成物３７４ｇを得た。

こうして得られたイサダ由来の組成物は、リン脂質を約１２重量％の割合で、中性脂質を約１０重量％の割合で、タンパク質ないしペプチドを約７０重量％の割合で、水分を約２重量％の割合で、炭化水素や灰分などからなる残部を約６重量％の割合で含むものであった。リン脂質の主たる内訳は、ジアシル型リン脂質が約１０重量％でアルキル型リン脂質が約２重量％であった（両者の含有比は重量比でおよそ前者１に対して後者０．２）。タンパク質ないしペプチドは、少なくとも２００～１０，０００の分子量を有する画分を含んでいた。また、このイサダ由来の組成物は、アスタキサンチンを約２８５ｐｐｍの割合で含んでおり、リン脂質や中性脂質を構成する脂肪酸として、ＤＨＡを約１．６重量％の割合で、ＥＰＡを約３．９重量％の割合で含んでいた（両者の含有比は重量比でおよそ前者１に対して後者２．４）。

イサダ由来の組成物の組成は、脂質（リン脂質＋中性脂質）についてはＢｌｉｇｈ－Ｄｙｅｒ法にて、タンパク質ないしペプチドについては燃焼法にて、水分については赤外線水分計を用いて、炭化水素や灰分などからなる残部については直接炭化法にて明らかにした。

イサダ由来の組成物に含まれるリン脂質と中性脂質のそれぞれの割合は、Ｂｌｉｇｈ－Ｄｙｅｒ法にてイサダ由来の組成物から抽出した脂質を、１０ｍｇ／ｍＬの濃度になるようにクロロホルムに溶解し、その１μＬを分析サンプルとして薄層クロマトグラフィー水素炎イオン化検出器（ＬＳＩメディエンス社製イアトロスキャン）に供することで分析した。薄層クロマトグラフィーによるリン脂質と中性脂質の分離は、クロロホルム／メタノール／水（４２：２４：２．５）で１次展開した後、ヘキサン／ジエチルエーテル（５０：３０）で２次展開することで行った。

ジアシル型リン脂質とアルキル型リン脂質のそれぞれの割合は、Ｂｌｉｇｈ－Ｄｙｅｒ法にてイサダ由来の組成物から抽出した脂質を、０．３ｍｇ／ｍＬの濃度になるようにクロロホルム／メタノール（２：１）に溶解し、その３０μＬを分析サンプルとして高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に供することで分析した。ＨＰＬＣは、装置として日本分光社のＨＰＬＣ２０００シリーズ（Ｊａｓｃｏ ＡＳ ２０５７－Ｐｌｕｓ，Ｊａｓｃｏ Ｃｏ ２０６５－Ｐｌｕｓ，Ｊａｓｃｏ ＰＵ ２０８９－ｉＰｌｕｓ）を用い、カラムはＬｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒ １００ Ｄｉｏｌ ２５０×４ｍｍ（５μｍ）（Ａｇｉｌｅｎｔ社製）を用いた。５０℃のカラム温度で、溶出液Ａとしてｎ－ヘキサン／２－プロパノール／酢酸（８２：１７：１）＋０．０８％トリエチルアミン、溶出液Ｂとして２－プロパノール／水／酢酸（８５：１４：１）＋０．０８％トリエチルアミンを、溶出液Ａ９５％／溶出液Ｂ５％（２３分間グラジエント）、溶出液Ａ６０％／溶出液Ｂ４０％（４分間グラジエント）、溶出液Ａ１５％／溶出液Ｂ８５％（１分間ホールドの後に４分間グラジエント）、溶出液Ａ９５％／溶出液Ｂ５％（１０分間ホールド）の条件で送液し（流速：１ｍＬ／ｍｉｎ）、ジアシル型リン脂質とアルキル型リン脂質を分離した。分離したジアシル型リン脂質とアルキル型リン脂質は、Ｃｏｒｏｎａ荷電化粒子検出器（Ｔｈｅｒｍｏ社製）を用いて検出した。分析サンプルに含まれるそれぞれ定量は、１－ｈｅｘａｄｅｃｅｎｏｙｌ－２－ｏｌｅｏｙｌ－ｓｎ－ｇｌｙｃｅｒｏ－３－ｐｈｏｓｐｈｏｃｏｌｉｎｅ（フナコシ社製）を用いて検量線を作成して行った。

タンパク質ないしペプチドの分子量による分画は、イサダ由来の組成物０．３ｇに、１％ Ｔｗｅｅｎ２０／０．０５Ｍ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ ｐＨ６．８を５ｍＬ添加し、３分間ホモジナイズした後、９０００ｒｐｍ，４℃，５ｍｉｎ遠心し、上清を回収する操作を合計３回行い、得られた抽出液１５ｍＬを用いて常法に従って行った。

イサダ由来の組成物に含まれるアスタキサンチンの割合は、Ｂｌｉｇｈ－Ｄｙｅｒ法にてイサダ由来の組成物から抽出した脂質を酵素処理することで、エステル型のアスタキサンチンを遊離型のアスタキサンチンに分解し、その３０μＬを分析サンプルとしてＨＰＬＣに供することで分析した。ＨＰＬＣは、装置としてＡｇｉｌｅｎｔ社の１２２０ ｉｎｆｉｎｉｔｙ ＬＣシステムを用い、カラムはＳｈｏｄｅｘ Ａｓａｈｉｐａｋ ＮＨ２－５０ ４Ｅ，５．０×４．６×２５０ｍｍ（Ｓｈｏｄｅｘ社製）を用いた。２５℃のカラム温度で、溶出液としてｎ－ヘキサン／２－プロパノール／メタノール（７５：１５：１５）＋トコフェロール５μｇ／ｍＬを送液し（流速：１ｍＬ／ｍｉｎ）、ＵＶ（紫外可視分光）４７０ｎｍにて遊離型のアスタキサンチンを検出した。分析サンプルに含まれる遊離型のアスタキサンチンの定量は、アスタキサンチン標品（Ｄｒ．Ｅｈｒｅｎｓｔｏｒｆｅｒ社製）を用いて検量線を作成して行った。

イサダ由来の組成物に含まれるＤＨＡとＥＰＡのそれぞれの割合は、Ｂｌｉｇｈ－Ｄｙｅｒ法にてイサダ由来の組成物から抽出した脂質をメチルエステル化処理することで、リン脂質や中性脂質を構成するＥＰＡとＤＨＡをメチルエステルに変換した後、ｎ－ヘキサンで希釈し、その１μＬを分析サンプルとしてガスクロマトグラフィー（ＧＣ）に供することで分析した。ＧＣは、装置としてＡｇｉｌｅｎｔ社のＧＣシステム ７８９０Ｂを用い、カラムはＯｍｅｇａｗａｘ^ＴＭ ３２０（０．３２ｍｍＩ．Ｄ．×３０ｍｄｆ＝０．２５μｍ）（ＳＵＰＥＬＣＯ社製）を用いた。分析サンプルに含まれるメチルエステル化されたＥＰＡとＤＨＡの検出と定量は、水素炎イオン化検出法にて行った。なお、分析時のカラム温度は２００℃、注入口温度は２４０℃、検出器温度も２４０℃とした。

製造参考例２：本発明の認知症の予防および／または改善剤の有効成分とするオキアミ由来の組成物の調製（その２）
麹菌由来のプロテアーゼとしてコクラーゼＰ顆粒（三菱ケミカルフーズ社製）のかわりにオリエンターゼＯＰ（エイチビィアイ社製）を用い、クエン酸のかわりに炭酸を用いてｐＨの調整を行うこと以外は製造参考例１と同様にして、目的物である粉末状のイサダ由来の組成物を得た。

実験例１：オキアミ由来の組成物の脳微小血管障害性認知症に対する作用（その１）
（実験方法）
１０週齢の雄のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、普通食飼料（オリエンタル酵母工業社製標準飼料ＭＦ）に製造参考例１で得たイサダ由来の組成物を０．４重量％の割合で添加した飼料を４週間与えた。その後、マウスに対し、微小コイル（内径：０．１８ｍｍ）を用いて左側の総頸動脈を狭窄させ、アメロイドコンストリクター（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社製）を用いて右側の総頸動脈を緩徐に狭窄させて最終的に閉塞させる左側総頸動脈狭窄・右側総頸動脈緩徐閉塞術（Ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ Ｃｏｍｍｏｎ Ｃａｒｏｔｉｄ Ａｒｔｅｒｙ Ｓｕｒｇｅｒｙ：ＡＣＡＳ）を施行して脳微小血管障害性認知症モデルとし、さらに４週間飼育した。飼育は、昼夜逆転させた部屋で行い、水は自由摂取とした。ＡＣＡＳを施行した２週後にＲｏｔａｒｏｄ Ｔｅｓｔ行い、４週後にＭｏｒｒｉｓ Ｗａｔｅｒ Ｍａｚｅ Ｔｅｓｔを行なって、協調運動、平衡感覚、筋力、空間参照記憶（長期記憶）を評価した。実験は、岩手医科大学動物実験委員会の許可を受け、岩手医科大学動物実験指針ならびに動物の保護および管理に関する法律に従って実施した。

Ｒｏｔａｒｏｄ Ｔｅｓｔは、マウス用ロータロッド（室町機械社製ＭＫ－６１０Ａ）を用いて行った。事前準備としてマウスをロータ（直径３０ｍｍ）に載せ、装置をスタートさせてロータの回転速度を１０ｒｐｍで一定にして１２０秒間歩かせた。次にテストに移り、マウスをロータに載せ、装置をスタートさせてロータの回転速度を初速度５ｒｐｍから終速度５０ｒｐｍまで加速させながら３００秒間歩かせた。マウスがロータから落下するか落下せずに３００秒間歩き続けた時点でテストを終了した。１匹あたり３回のテストを１５分の間隔を空けて行い、テストを終了した後に平均落下潜時を求め、協調運動、平衡感覚、筋力を評価した。

Ｍｏｒｒｉｓ Ｗａｔｅｒ Ｍａｚｅ Ｔｅｓｔは、次のようにして行った。円形のプール（直径１１６ｃｍ×高さ５５ｃｍ）を準備し、深さ３０ｃｍ程度まで白色の入浴剤（アース製薬社製）を含む水で満たした。水温は２０±１℃とし、定期的に確認した。プールの内壁には、マウスが泳ぐ際の目印となるように、北の方角に赤の円形のシールを、東の方角に黄の正三角形のシールを、西の方角に緑の上向き矢印のシールを、南の方角に青の正方形のシールをそれぞれ貼った。また、装置全体を暗幕で覆い、トライアル中はマウスが実験者を見ることができないようにした。プール内を４分割し、その１つの領域の中心に透明で円形のプラットフォーム（直径８ｃｍ）を設置した。テストは６日間連続で行い、マウスに１日あたり装置馴致を３回行わせた後に訓練試行を５回行わせた。マウスの水からの逃避行動をカメラ（Ｌｏｇｉｃｏｏｌ社製Ｌｏｇｉｃｏｏｌ ＨＤ Ｗｅｂｃａｍ Ｃ６１５）で撮影した。テストを行った６日間、プラットフォームを設置する位置は一つの場所に固定し、マウスを入水させる領域（プラットフォームを設置した領域以外の領域）は１回のトライアルごとに変更した。装置馴致では、マウスにプラットフォームの位置を記憶させるために、プラットフォームを水面より１ｃｍ高くして設置し、初めにマウスをプラットフォームの上に３０秒間載せてから、プール内に放って入水させ、２０秒間自由に泳がせてプラットフォームを探索させることを、１０秒以上の間隔を空けて３回繰り返した。訓練試行では、マウスがプラットフォームの位置を記憶しているかどうかを確認するために、プラットフォームを水面より１ｃｍ低くして設置し、マウスをプール内に放って入水させ、９０秒間自由に泳がせて水面下に設置したプラットフォームを探索させることを、５分以上の間隔を空けて５回繰り返した。９０秒の間にマウスがプラットフォームに行き着けた場合にはその時間を記録した。行き着けなかった場合には９０秒が経過した時点で実験者がマウスを手でプラットフォームまで誘導し、プラットフォームの上に１５秒間載せ、１０５秒をプラットフォームに行き着けた時間とした。マウスがプラットフォームに行き着くまでの平均時間に基づいて、空間参照記憶（長期記憶）を評価した。

（実験結果）
Ｒｏｔａｒｏｄ Ｔｅｓｔの結果を図１に、Ｍｏｒｒｉｓ Ｗａｔｅｒ Ｍａｚｅ Ｔｅｓｔの結果を図２にそれぞれ示す（図中の検体１＋ＡＣＡＳ、^＊＊：Ｐ＜０．０１，^＊＊＊：Ｐ＜０．００１）。なお、図１と図２には、普通食飼料だけを４週間与えて飼育した後、ＡＣＡＳを施行し、さらに４週間飼育したマウスについての、ＡＣＡＳを施行した２週後に行ったＲｏｔａｒｏｄ Ｔｅｓｔの結果と４週後に行ったＭｏｒｒｉｓ Ｗａｔｅｒ Ｍａｚｅ Ｔｅｓｔの結果（図中のＭＦ＋ＡＣＡＳ）を示すとともに、普通食飼料だけを４週間与えて飼育した後、ＡＣＡＳを施行せず、さらに４週間飼育したマウスについての、飼育を開始してから６週後に行ったＲｏｔａｒｏｄ Ｔｅｓｔの結果と８週後に行ったＭｏｒｒｉｓ Ｗａｔｅｒ Ｍａｚｅ Ｔｅｓｔの結果（図中のＭＦ）も示す。図１と図２から明らかなように、Ｒｏｔａｒｏｄ ＴｅｓｔとＭｏｒｒｉｓ Ｗａｔｅｒ Ｍａｚｅ Ｔｅｓｔのいずれにおいても、製造参考例１で得たイサダ由来の組成物を普通食飼料に添加したことによる脳微小血管障害性認知症に対する有意な改善効果、即ち、前者においてはマウスがロータから落下するまでの時間の有意な延長が認められ、後者においてはマウスがプラットフォームに行き着くまでの時間の有意な短縮が認められた。

製造参考例３：本発明の認知症の予防および／または改善剤の有効成分とするオキアミ由来の組成物の調製（その３）
三陸地方で漁獲されたイサダ（ツノナシオキアミ）の無加水冷凍ブロック（－５０℃保存のもの）のかわりに２０％加水冷凍ブロック（－５０℃保存のもの）を用い、プロテアーゼの失活時間を３０分間のかわりに１時間とすること以外は製造参考例１と同様にして、目的物である粉末状のイサダ由来の組成物を得た。得られたイサダ由来の組成物は、リン脂質を約７重量％の割合で、中性脂質を約１０重量％の割合で、タンパク質ないしペプチドを約６０重量％の割合で、水分を約５重量％の割合で、炭化水素や灰分などからなる残部を約１８重量％の割合で含むものであった。

実験例２：オキアミ由来の組成物の脳微小血管障害性認知症に対する作用（その２）
製造参考例３で得たイサダ由来の組成物の脳微小血管障害性認知症に対する作用を、実験例１において採用した１０週齢の雄のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを用いる方法と同じ方法により、Ｒｏｔａｒｏｄ ＴｅｓｔとＭｏｒｒｉｓ Ｗａｔｅｒ Ｍａｚｅ Ｔｅｓｔに基づいて評価した。Ｒｏｔａｒｏｄ Ｔｅｓｔの結果を図３に、Ｍｏｒｒｉｓ Ｗａｔｅｒ Ｍａｚｅ Ｔｅｓｔの結果を図４にそれぞれ示す（図中の検体１’＋ＡＣＡＳ、^＊：Ｐ＜０．０５，^＊＊＊：Ｐ＜０．００１）。なお、図３と図４には、普通食飼料だけを４週間与えて飼育した後、ＡＣＡＳを施行し、さらに４週間飼育したマウスについての、ＡＣＡＳを施行した２週後に行ったＲｏｔａｒｏｄ Ｔｅｓｔの結果と４週後に行ったＭｏｒｒｉｓ Ｗａｔｅｒ Ｍａｚｅ Ｔｅｓｔの結果（図中のＭＦ＋ＡＣＡＳ）を示すとともに、普通食飼料だけを４週間与えて飼育した後、ＡＣＡＳを施行せず、さらに４週間飼育したマウスについての、飼育を開始してから６週後に行ったＲｏｔａｒｏｄ Ｔｅｓｔの結果と８週後に行ったＭｏｒｒｉｓ Ｗａｔｅｒ Ｍａｚｅ Ｔｅｓｔの結果（図中のＭＦ）も示す。また、図３と図４には、普通食飼料に製造参考例３で得たイサダ由来の組成物から分離した脂質（リン脂質＋中性脂質、重量比は約７：１０）を０．０６７重量％の割合で添加（製造参考例３で得たイサダ由来の組成物を０．４重量％の割合で添加した際の脂質の添加量に相当）した飼料を４週間与えて飼育した後、ＡＣＡＳを施行し、さらに４週間飼育したマウスについての、ＡＣＡＳを施行した２週後に行ったＲｏｔａｒｏｄ Ｔｅｓｔの結果と４週後に行ったＭｏｒｒｉｓ Ｗａｔｅｒ Ｍａｚｅ Ｔｅｓｔの結果（図中の検体２＋ＡＣＡＳ、^＊：Ｐ＜０．０５）も示す。図３と図４から明らかなように、Ｒｏｔａｒｏｄ ＴｅｓｔとＭｏｒｒｉｓ Ｗａｔｅｒ Ｍａｚｅ Ｔｅｓｔのいずれにおいても、製造参考例３で得たイサダ由来の組成物を普通食飼料に添加したことによる脳微小血管障害性認知症に対する有意な改善効果、即ち、前者においてはマウスがロータから落下するまでの時間の有意な延長が認められ、後者においてはマウスがプラットフォームに行き着くまでの時間の有意な短縮が認められた。一方、製造参考例３で得たイサダ由来の組成物から分離した脂質を普通食飼料に添加した場合、脳微小血管障害性認知症に対する改善傾向が認められたが有意なものではなかった。従って、製造参考例３で得たイサダ由来の組成物が発揮する脳微小血管障害性認知症に対する優れた改善効果には、脂質以外の組成物の構成成分の存在が重要であることが示唆された。

製剤例１：ビスケット
以下の成分組成からなるオキアミ由来の組成物を含むビスケットを自体公知の方法で製造した。
製造参考例１で得たイサダ由来の組成物 １
薄力粉 ３２
全卵 １６
バター １６
砂糖 ２４
水 １０
ベーキングパウダー １（単位：重量％）

製剤例２：錠剤
以下の成分組成からなるオキアミ由来の組成物を含む錠剤を自体公知の方法で製造した。
製造参考例１で得たイサダ由来の組成物 １
乳糖 ８０
ステアリン酸マグネシウム １９（単位：重量％）

本発明は、脳血管性認知症などの認知症の予防および／または改善剤を提供することができる点において産業上の利用可能性を有する。

Claims (8)

1. オキアミ由来の組成物を有効成分とする、認知症の予防および／または改善剤。
2. オキアミ由来の組成物がリン脂質を３～４０重量％の割合で含む、請求項１記載の認知症の予防および／または改善剤。
3. オキアミ由来の組成物が中性脂質を３～４０重量％の割合で含む、請求項１または２記載の認知症の予防および／または改善剤。
4. オキアミ由来の組成物がタンパク質ないしペプチドを４０～８０重量％の割合で含む、請求項１ないし３のいずれかに記載の認知症の予防および／または改善剤。
5. 認知症が脳血管性認知症である、請求項１ないし４のいずれかに記載の認知症の予防および／または改善剤。
6. 水中に懸濁したオキアミの破砕物を、ｐＨ３～４の条件下で麹菌由来のプロテアーゼを用いて酵素処理することによって得られるオイル画分を乾燥することで、有効成分とするオキアミ由来の組成物を調製する工程を含む、認知症の予防および／または改善剤の製造方法。
7. ｐＨの調整を有機酸および／または炭酸を用いて行う、請求項６記載の認知症の予防および／または改善剤の製造方法。
8. 有機酸がクエン酸である、請求項７記載の認知症の予防および／または改善剤の製造方法。

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