JP6542408B1 - リン脂質濃縮物生産方法 - Google Patents

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Abstract

【課題】鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物を脱ガム工程に供し、ガム質を回収してリン脂質濃縮物を得るにあたり、遠心分離を用いずとも効率よくリン脂質濃縮物を生産可能であり、スケールアップに適した手法を提供すること。
【解決手段】鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物と40〜60質量%エタノール水溶液との質量比1:0.8〜1.2の混合液を、40〜60℃で静置する工程を含む、リン脂質濃縮物を生産する方法。
【選択図】なし

Description

本発明は、リン脂質濃縮物の生産方法等に関する。
リン脂質は、生体構成成分として重要であり、中でも例えばプラズマローゲン等は記憶能力を増強する等の様々な効果を有する機能性素材として注目されている。このため、リン脂質を効率よく調製する方法が望まれている。
これまで、例えば鳥ムネ肉からエタノール抽出により、リン脂質等の成分を抽出する方法が開発されてきている。
特開2006−232967号公報 特開2010−63406号公報 特開2010−65167号公報 特開2016−210696号公報
鳥ムネ肉からエタノールにより有用成分を抽出したのち、特に重要と考えられている成分の一種であるリン脂質を濃縮することを試みた。通常、油を精製する場合において、動植物からの抽出物を脱ガム工程に供し、ガム質を除去する。しかし、リン脂質は主にガム質に含まれる成分であることから、効率的にリン脂質を濃縮するため鳥ムネ肉のエタノール抽出物を濃縮して脱ガム工程に供し、遠心分離により沈殿したガム質を回収することを検討した。
当該手法により、リン脂質の濃縮が可能となったが、当該手法では遠心分離を必須工程とするため、製造スケールを拡大することが困難であり、従って遠心分離を用いずに効率よくリン脂質濃縮物を生産する手法の開発が必要となった。
本発明は、鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物を脱ガム工程に供し、ガム質を回収してリン脂質濃縮物を得るにあたり、遠心分離を用いずとも効率よくリン脂質濃縮物を生産可能であり、スケールアップに適した手法を提供することを課題とする。
本発明者らは、鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物と特定の含水エタノールとの混合液を、特定の条件で静置することにより、上記課題を解決できる可能性を見出し、さらに改良を重ねて本発明を完成させるに至った。
本発明は例えば以下の項に記載の主題を包含する。
項1.
(B)鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物と40〜60質量%エタノール水溶液との質量比1:0.8〜1.2の混合液を、40〜60℃で静置する工程
を含む、リン脂質濃縮物を生産する方法。
項2.
静置時間が1時間以上である、項1に記載の方法。
項3.
鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物の水分含有量が1質量%以下である、項1又は2に記載の方法。
項4.
(A)鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物と40〜60質量%エタノール水溶液とを、質量比1:0.8〜1.2で混合する工程
を工程(B)の前にさらに含む、
項1〜3のいずれかに記載の方法。
項5.
(C)静置後に上層、中層、及び下層の3層に分離した混合液から、下層を回収する工程
を工程(B)後にさらに含む、項1〜4のいずれかに記載の方法。
項6.
下層の回収が、上層及び中層の除去によって行われ、当該上層及び中層の除去は
(i)3層に分離した混合液から上層を除去し、下層がゲル状になるまで10℃以下の温度で静置した後に中層を除去することで行われるか、あるいは
(ii)3層に分離した混合液を下層がゲル状になるまで10℃以下の温度で静置した後に上層及び中層を除去することで行われる、
項5に記載の方法。
項7.
鳥ムネ肉が鶏ムネ肉である、項1〜6のいずれかに記載の方法。
項8.
(b)鳥ムネ肉のエタノール抽出物、エタノール、及び水を含む混合液であって、エタノール含有量が20〜43.5質量%の混合液を、40〜60℃で静置する工程
を含む、リン脂質濃縮物を生産する方法。
項9.
前記混合液の水分含有量が16〜36.5質量%である、項8に記載の方法。
項10.
以下の(α1)〜(α5)の要件のうち、少なくとも1要件を満たす、項8又は9に記載の方法。
(α1):静置時間が1時間以上である
(α2):鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物の水分含有量が1質量%以下である
(α3):(c)静置後に上層、中層、及び下層の3層に分離した混合液から、下層を回収する工程
を工程(b)後にさらに含む
(α4):要件(α3)を満たし、且つ、下層の回収が、上層及び中層の除去によって行われ、当該上層及び中層の除去は
(i)3層に分離した混合液から上層を除去し、下層がゲル状になるまで10℃以下の温度で静置した後に中層を除去することで行われるか、あるいは
(ii)3層に分離した混合液を下層がゲル状になるまで10℃以下の温度で静置した後に上層及び中層を除去することで行われる
(α5):鳥ムネ肉が鶏ムネ肉である
項11.
(B)鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物と40〜60質量%エタノール水溶液との質量比1:0.8〜1.2の混合液を、40〜60℃で静置する工程
を含む、鳥ムネ肉に含まれるリン脂質を濃縮する方法。
項12.
以下の(α1)〜(α5)の要件のうち、少なくとも1要件を満たす、項11に記載の方法。
(α1):静置時間が1時間以上である
(α2):鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物の水分含有量が1質量%以下である
(α3):(c)静置後に上層、中層、及び下層の3層に分離した混合液から、下層を回収する工程
を工程(b)後にさらに含む
(α4):要件(α3)を満たし、且つ、下層の回収が、上層及び中層の除去によって行われ、当該上層及び中層の除去は
(i)3層に分離した混合液から上層を除去し、下層がゲル状になるまで10℃以下の温度で静置した後に中層を除去することで行われるか、あるいは
(ii)3層に分離した混合液を下層がゲル状になるまで10℃以下の温度で静置した後に上層及び中層を除去することで行われる
(α5):鳥ムネ肉が鶏ムネ肉である
なお、上記の、(α1)〜(α5)の要件のうち、少なくとも1要件を満たす、とは、これら5つの要件の組み合わせ全ての中から選択される少なくとも1種類の組み合わせを意味する。すなわち、5!通りの組み合わせの何れかを意味する。
本発明に包含される、リン脂質濃縮物を生産する方法は、鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物を脱ガム工程に供し、ガム質を回収してリン脂質濃縮物を得るにあたり、遠心分離を用いずとも効率よくリン脂質濃縮物を生産可能であり、スケールアップに適した方法であるといえる。
鶏ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物とエタノール水溶液との混合及び静置を行い混合液の分離を行った結果を示す。 図1の各分離層をTLC分析した結果を示す。 鶏砂肝のエタノール抽出液濃縮物とエタノール水溶液との混合及び静置を行い混合液の分離を行った結果を示す。 図3の各分離層をTLC分析した結果を示す。
以下、本発明の各実施形態について、さらに詳細に説明する。
本発明に包含される、鳥ムネ肉からリン脂質濃縮物を生産する方法(以下「本発明のリン脂質濃縮物生産方法」ということがある)は、(B)鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物と40〜60質量%エタノール水溶液との質量比1:0.8〜1.2の混合液を、40〜60℃で静置する工程を含む。
なお、本明細書において、特に断らない限り、質量%はw/w%を示す。
鳥ムネ肉としては、食用鳥(例えば鶏、家鴨、鶉、鴨、雉、七面鳥等)のムネ肉が好ましく、特に鶏ムネ肉が好ましい。鳥ムネ肉は適当な大きさに裁断されていてもよい。また、乾燥(特に凍結乾燥)されたものであってもよい。
鳥ムネ肉のエタノール抽出の方法としては、特に限定されず、公知の方法又は公知の方法から容易に相当できる方法を用いることができる。例えば、鳥ムネ肉に対して質量比1〜5倍程度のエタノールを加え、撹拌又は静置することで行うことができる。撹拌又は静置は、加温して行ってもよい。加温は、例えば30〜50℃、又は35〜45℃程度で行うことができる。また、撹拌又は静置の時間は特に制限されないが、例えば0.5〜24時間、又は1〜12時間程度を挙げることができる。得られた抽出液は、必要に応じて濾過などにより固液分離してもよい。また、抽出残渣に対して、同様の操作を行い、再度抽出液を得て、先に得られた抽出液に合算してもよい。
なお、気温が低い(特に冬期)場合、当該抽出工程中に析出が生じるおそれがある。このような温度は析出が生じる温度であれば制限はされないが、具体的には例えば10℃以下、9℃以下、8℃以下、7℃以下、6℃以下、5℃以下、4℃以下、3℃以下、2℃以下、1℃以下、又は0℃以下が挙げられる。当該析出にはリン脂質が含まれるため、析出したままでエタノール抽出操作を続けると、析出に含まれるリン脂質がエタノール抽出液に含まれず、このため最終的に得られるリン脂質濃縮物に含まれるリン脂質量がばらつくおそれがある。よって、析出が生じた場合には、まず加温して析出を溶解させるか、あるいは析出が生じない温度下で当該工程を行うことが好ましい。加温して析出を溶解させる場合、加温の温度は析出が溶解し、且つ品質に影響を与えない範囲であれば特に制限されないが、例えば20〜30℃程度が例示される。また、析出が生じない温度下でエタノール抽出工程を行う場合、例えば20〜30℃程度の温度下で当該工程を行うことができる。
得られたエタノール抽出液を濃縮する方法としては、特に限定されず、公知の方法又は公知の方法から容易に相当できる方法を用いることができる。例えば、減圧濃縮、又は加熱濃縮等が挙げられる。
濃縮は、得られるエタノール抽出液濃縮物の水分含有量が1質量%以下になるまで行うことが好ましく、0.9質量%以下、0.8質量%以下、0.7質量%以下、0.6質量%以下、又は0.5質量%以下になるまで行うことがより好ましく、0.4質量%以下、0.3質量%以下、又は0.2質量%以下になるまで行うことがさらに好ましい。なお、当該水分含有量は、カールフィッシャー法により求めた値である。
また、得られるエタノール抽出液濃縮物のエタノール含有量は、15質量%以下であることが好ましく、14質量%以下、13質量%以下、12質量%以下、11質量%以下、10質量%以下、9質量%以下、又は8質量%以下であることがより好ましい。なお、当該エタノール含有量は、乾熱乾燥法(105℃、3時間)で求めた乾燥減量から上記水分含有量を減じた値である。例えば、当該乾熱乾燥減量が90質量%であり、上記水分含有量が1質量%であった場合、エタノール含有量は100−90−1=9(質量%)となる。
鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物と40〜60質量%エタノール水溶液とを、質量比1:0.8〜1.2で混合する。当該質量比の下限は、例えば1:0.85、0.9、0.95、又は1であってもよい。また、当該質量比の上限は、例えば1:1.15、1.1、1.05、又は1であってもよい。また、用いるエタノール水溶液の濃度の下限は、例えば41、42、43、44、45、46、47、48、49、又は50質量%であってもよい。また、用いるエタノール水溶液の濃度の上限は、例えば59、58、57、56、55、54、53、52、51、又は50質量%であってもよい。
このようにして得られた混合液を、40〜60℃で静置する。これにより、混合液は3層(上層、中層、下層)に分離され、下層にはリン脂質が濃縮される。
静置時の温度の下限は、例えば41、42、43、44、45、46、47、48、49、又は50℃であってもよい。また、静置時の温度の上限は、例えば59、58、57、56、55、54、53、52、51、又は50℃であってもよい。また、静置時の温度は、当該温度範囲であれば変化してもよいが、できるだけ一定であることが好ましく、変化する場合であっても変化幅は少ない(例えば変化幅1〜5℃、又は1〜3℃程度)方が好ましく、また変化する早さもできるだけゆっくりであることが好ましい。
静置する時間としては、混合液が層分離される範囲であれば特に制限されないが、例えば1時間以上が好ましい。2時間以上、3時間以上、4時間以上、5時間以上、又は6時間以上であってもよい。静置時間の上限は特に制限されないが、例えば24時間以下、18時間以下、12時間以下、又は10時間以下が例示される。
上述の通り、3層に分離された混合液の下層にリン脂質が濃縮されている。よって、本発明のリン脂質濃縮物生産方法は、静置後に3層に分離した混合液から、下層を回収する工程をさらに含むことができる。
下層の回収は、例えば、(i)3層に分離した混合液から上層を除去し、下層がゲル状になるまで10℃以下の温度で静置した後に中層を除去する、あるいは、(ii)3層に分離した混合液を下層がゲル状になるまで10℃以下の温度で静置した後に上層及び中層を除去することで行うことができる。
(i)(ii)のいずれにおいても、これらの工程における静置温度は10℃以下であり、例えば9℃以下、8℃以下、7℃以下、6℃以下、5℃以下、4℃以下であってもよい。また、当該静置時間としては、下層がゲル状になる範囲であれば特に制限されないが、例えば12時間以上が例示される。
また、鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物と40〜60質量%エタノール水溶液との質量比1:0.8〜1.2の混合液は、上記のエタノール抽出液濃縮物のエタノール含有量の好ましい範囲も考慮すると、例えば、鳥ムネ肉のエタノール抽出物、エタノール、及び水を含む混合液であって、エタノール含有量が20〜43.5質量%の混合液、ということができる。当該混合液のエタノール含有量の下限は、21、22、23、24、25、26、27、28、29、又は30質量%であってもよい。また、当該混合液のエタノール含有量の上限は、43、42、41、40、39、38、37、36、35、34、又は33質量%であってもよい。また、当該混合液の水含有量は、上記のエタノール抽出液濃縮物の水分含有量の好ましい範囲も考慮すると、例えば16〜36.5質量%ということができる。当該混合液の水含有量の下限は、17、18、19、20、21、22、23、又は24質量%であってもよい。また、当該混合液の水含有量の上限は、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、又は26質量%であってもよい。
また、本発明は、(B)鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物と40〜60質量%エタノール水溶液との質量比1:0.8〜1.2の混合液を、40〜60℃で静置する工程を含む、鳥ムネ肉に含まれるリン脂質を濃縮する方法も、包含する。当該方法は、上記のリン脂質濃縮物を生産する方法と同じ工程を経ることができ、よって上記のリン脂質濃縮物を生産する方法についての説明が当該リン脂質を濃縮する方法にもそのまま当てはまる。
なお、本明細書において「含む」とは、「本質的にからなる」と、「からなる」をも包含する(The term "comprising" includes "consisting essentially of” and "consisting of.")。
以下、本発明をより具体的に説明するが、本発明は下記の例に限定されるものではない。
なお、鶏ムネ肉としては、凍結乾燥された鶏ムネ肉(FD鶏ムネ肉)を使用した。また、特に断らない限り、%は質量(w/w)%を示す。
エタノール抽出
FD鶏ムネ肉42kgを抽出釜に投入した。FD鶏ムネ肉の4倍量(w/v)の99%エタノール(168L)を抽出釜に投入して窒素置換後、攪拌しながら加温し40℃達温後、90分間保持した。30メッシュで濾過後、抽出液をドラム缶に回収した。1回目の抽出残渣を抽出釜に投入後、FD鶏ムネ肉の2.5倍量(w/v)の99%エタノール(105L)を釜に投入して窒素置換後、攪拌しながら加温し40℃達温後、90分間保持した。30メッシュで濾過後、抽出液をドラム缶に回収した。当該抽出液を10Sろ紙で吸引ろ過した。得られた液をエタノール抽出液として用いた。
エタノール抽出液の減圧濃縮
エタノール抽出液を、内温40℃以下で減圧し、50Lバットに全量入る程度の量(約8kg)になるまで減圧濃縮した。当該一次濃縮液を50Lバットに入れて外温50〜60℃で減圧した。得られた濃縮液を30メッシュでろ過後、重量を測定したところ、5.12kgであった。当該濃縮液をエタノール抽出液濃縮物とし、使用するまで4℃で保管した。
なお、エタノール抽出液濃縮物の乾燥減量を乾熱乾燥法(105℃、3時間)で、水分量をカールフィッシャー法で、それぞれ測定した。また、差引法でエタノール濃度を算出した。結果は次のとおりであった。乾燥減量:8.05%、水分:0.15%、エタノール:7.9%。
エタノール抽出液濃縮物とエタノール水溶液との混合検討
<検討1>
エタノール抽出液濃縮物15gに対し、50、60、70、又は80%エタノール水溶液を等量添加(w/w)し、室温で撹拌した。室温で3時間静置後、分離状況を確認した。
<検討2>
エタノール抽出液濃縮物10gに対し、25、50、又は75%エタノール水溶液を等量添加して(w/w)し、50℃になるまで加温撹拌した。50℃で3時間静置後、分離状況を確認した。
<TLC分析>
各検討で分離された層に含まれる成分を、薄層クロマトグラフィー(TLC)で確認した。より詳細には、薄層板(シリカゲル)で作られた薄層を使い、検討1及び検討2で分離させた各層を移動相(クロロホルム/メタノール/水=65/25/4)で展開させて中性脂質とリン脂質を分離した。検出溶液には10%硫酸を用いた。
検討1においては、50%エタノール水溶液を等量混合した場合、乳化状態になり分離は確認できなかった。60、70、又は80%エタノール水溶液を等量混合した場合には2層の分離はみられたが、それぞれの層の脂質分布をTLCで確認したところ、いずれの層にも中性脂質とリン脂質が存在し分離が不十分であった。このことから、室温条件下では分離が不十分であることが明らかとなった。
検討2においては、25%エタノール水溶液を等量混合した場合、乳化状態になり分離は確認できなかったが、50又は75%エタノール水溶液を等量混合した場合には3層に分離した(図1)。TLC分析によれば、75%エタノールを等量混合した場合には、リン脂質が最も多かった下層画分で中性脂質やコレステロールも多く存在していた。一方、50%エタノール水溶液を等量混合した場合、上層には主として中性脂質、下層に主としてリン脂質が存在していることがわかった(図2)。なお、図2では、(A)は上層、(B)は中層、(C)は下層を示す。
このことから、50%エタノール水溶液を当量混合して50℃で静置することにより、鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物について、遠心分離を用いずとも、効率よくリン脂質濃縮物を得られることが分かった。
また、3層分離した状態で4℃で保存したところ、上層と下層のみが固まった。当該特徴を利用することで、より効率的に下層のみを回収することができた。具体的には、まず3相分離した状態において上層のみを吸引除去し、4℃で一晩静置した後、中層(液状)と下層(ゲル状)とを固液分離して下層のみを容易に採取することができた。
なお、同様の検討(エタノール抽出、エタノール抽出液濃縮、及びエタノール抽出液濃縮物とエタノール水溶液との混合及び静置)を、鶏ムネ肉ではなく、鶏砂肝又は鶏皮を用いて行ったところ、中性脂質とリン脂質との分離が不十分であった。図3に鶏砂肝のエタノール抽出液濃縮物とエタノール水溶液との混合及び静置を行い混合液の分離を行った結果を、図4に図3の各分離層をTLC分析した結果を、それぞれ示す。なお、図4では、エタノール濃度(含有量)50%における(A)は上層、(B)は中層、(C)は下層を示し、エタノール濃度(含有量)75%における(A)は上層、(B)は下層を示す(エタノール濃度75%では、2層にしか分離しなかった)。
これらの結果から、当該手法は、特に鳥ムネ肉に対して用いるのに適していることがわかった。

Claims (11)

  1. (B)水分含有量が0.5質量%以下であり且つエタノール含有量が10質量%以下である鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物と40〜60質量%エタノール水溶液との質量比1:0.8〜1.2の混合液を、40〜60℃で静置し3層に分離する工程
    を含む、リン脂質濃縮物を生産する方法。
  2. 静置時間が1時間以上である、請求項1に記載の方法。
  3. (A)水分含有量が0.5質量%以下であり且つエタノール含有量が10質量%以下である鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物と40〜60質量%エタノール水溶液とを、質量比1:0.8〜1.2で混合する工程
    を工程(B)の前にさらに含む、
    請求項1又は2に記載の方法。
  4. (C)静置後に上層、中層、及び下層の3層に分離した混合液から、下層を回収する工程を工程(B)後にさらに含む、請求項1〜3のいずれかに記載の方法。
  5. 下層の回収が、上層及び中層の除去によって行われ、当該上層及び中層の除去は
    (i)3層に分離した混合液から上層を除去し、下層がゲル状になるまで10℃以下の温度で静置した後に中層を除去することで行われるか、あるいは
    (ii)3層に分離した混合液を下層がゲル状になるまで10℃以下の温度で静置した後に上層及び中層を除去することで行われる、
    請求項4に記載の方法。
  6. 鳥ムネ肉が鶏ムネ肉である、請求項1〜5のいずれかに記載の方法。
  7. (b)鳥ムネ肉のエタノール抽出物、エタノール、及び水を含む混合液であって、エタノール含有量が20〜43.5質量%の混合液を、40〜60℃で静置し3層に分離する工程
    を含む、リン脂質濃縮物を生産する方法。
  8. 前記混合液の水分含有量が16〜36.5質量%である、請求項7に記載の方法。
  9. 以下の(α1)〜(α4)の要件のうち、少なくとも1要件を満たす、請求項7又は8に記載の方法。
    (α1):静置時間が1時間以上である
    (α2):鳥ムネ肉が鶏ムネ肉である
    (α3):(c)静置後に上層、中層、及び下層の3層に分離した混合液から、下層を回収する工程
    を工程(b)後にさらに含む
    (α4):要件(α3)を満たし、且つ、下層の回収が、上層及び中層の除去によって行われ、当該上層及び中層の除去は
    (i)3層に分離した混合液から上層を除去し、下層がゲル状になるまで10℃以下の温度で静置した後に中層を除去することで行われるか、あるいは
    (ii)3層に分離した混合液を下層がゲル状になるまで10℃以下の温度で静置した後に上層及び中層を除去することで行われ
  10. (B)水分含有量が0.5質量%以下であり且つエタノール含有量が10質量%以下である鳥ムネ肉のエタノール抽出液濃縮物と40〜60質量%エタノール水溶液との質量比1:0.8〜1.2の混合液を、40〜60℃で静置し3層に分離する工程
    を含む、鳥ムネ肉に含まれるリン脂質を濃縮する方法。
  11. 以下の(α1)〜(α4)の要件のうち、少なくとも1要件を満たす、請求項10に記載の方法。
    (α1):静置時間が1時間以上である
    (α2):鳥ムネ肉が鶏ムネ肉である
    (α3):(c)静置後に上層、中層、及び下層の3層に分離した混合液から、下層を回収する工程
    を工程(b)後にさらに含む
    (α4):要件(α3)を満たし、且つ、下層の回収が、上層及び中層の除去によって行われ、当該上層及び中層の除去は
    (i)3層に分離した混合液から上層を除去し、下層がゲル状になるまで10℃以下の温度で静置した後に中層を除去することで行われるか、あるいは
    (ii)3層に分離した混合液を下層がゲル状になるまで10℃以下の温度で静置した後に上層及び中層を除去することで行われ
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