JP2022067969A - プラズマローゲン含有組成物、プラズマローゲン吸収促進用組成物、及びプラズマローゲン吸収促進方法 - Google Patents

Abstract

【課題】プラズマローゲンの生体への吸収効率を改善する技術を提供する。【解決手段】プラズマローゲンとホスホリパーゼＡ２を含有することを特徴とするプラズマローゲン含有組成物である。また、ホスホリパーゼＡ２を有効成分として含有するプラズマローゲン吸収促進用組成物である。更に、プラズマローゲンとホスホリパーゼＡ２をヒト又は動物に投与することを特徴とするプラズマローゲン吸収促進方法である。【選択図】なし

Description

新規性喪失の例外適用申請有り

本発明は、生体機能性素材として有用なプラズマローゲン及びその利用に関する。

プラズマローゲンは、生体膜の構成成分であるリン脂質の一種であり、その化学構造では、グリセロール骨格ｓｎ－１位に脂肪族アルコールとのビニルエーテル結合を有し、ｓｎ－２位に脂肪酸とのエステル結合を有している。

プラズマローゲンは、哺乳動物の生体組織に全般に分布しているが、特に心臓、脳、骨格筋、赤血球等の酸素消費量の高い組織に比較的多く分布している。また、リポソーム、低密度リポタンパク質、培養細胞等を用いた試験管内の研究により、プラズマローゲンには、脂質膜への酸化障害毒性に対する抗酸化作用があることが明らかにされている（非特許文献１、２、３参照）。よって、プラズマローゲンが酸素消費量の高い組織に偏在する理由の１つには、生体膜中での抗酸化性脂質としての役割が示唆されている。

近年には、脳のシグナル伝達への関与や脳内における抗酸化物質としての機能も示唆されている。例えば、非特許文献４に、アルツハイマー病疾患では脳のプラズマローゲン量が健常者に比べて３０％近く減少しているとの報告がある。また、非特許文献５に、アルツハイマー病疾患では、血中プラズマローゲン濃度も健常者に比べて減少しており、血中の過酸化脂質増加に関わるとの報告がある。更に、特許文献１には、動物実験において、プラズマローゲンの摂取により海馬依存性の学習能力が強化されたことが報告されている。よって、サプリメントなどの食品へ応用することで、日常的な摂取による記憶力サポートも期待される。

一方、摂取したプラズマローゲンの生体への吸収性に関して、例えば、非特許文献６及び非特許文献７には、プラズマローゲンのうちコリン型プラズマローゲンに比べエタノールアミン型プラズマローゲンの吸収性は低いが、魚油との混合投与により吸収効率が改善することが報告されている。

Zommara et al.,"Inhibitory effect of ethanolamine plasmalogen on iron- and copper-dependent lipid peroxidation.", Free Radicals Biol．Med.，1995; 18: p.599－602. Hahnel et al.,"Contribution of copper binding to the inhibition of lipid oxidation by plasmalogen phospholipids.", Biochem．J.，1999; 340: p.377－383. Zoeller et al.,"A possible role for plasmalogens in protecting animal cells against photosensitized killing.", J. Biol．Chem.，1988; 263: p.11590－11596. L. Ginsberg et al.,"Disease and anatomic specificity of ethanolamine plasmanogen deficiency in Alzheimer's disease brain.", Brain Res., 1995; 698: p.223-226. Yamashita S et al., "Alterations in the Levels of Amyloid-β, Phospholipid Hydroperoxide, and Plasmalogen in the Blood of Patients with Alzheimer's Disease: Possible Interactions between Amyloid-β and These Lipids." J. Alzheimers Dis., 2016; 50: p.527-37. 山下舞亜ら「演題番号：2D-20p、題目：コリン型プラズマローゲンがエタノールアミン型に比べ,吸収効率が良い理由」第６４回日本栄養・食糧学会大会講演要旨集、第８８頁（２０１０年５月） 西向めぐみら「演題番号：2D-19p、題目：魚油によって吸収促進されたプラズマローゲンの分子種解析」第６４回日本栄養・食糧学会大会講演要旨集、第８８頁（２０１０年５月）

特開２０１６－２１０６９６号公報

しかしながら、魚油は特有の臭みがあることから風味に劣り、酸化劣化も早く、幅広い加工食品への適用は難しいと考えられた。

上記従来技術にかんがみ、本発明の目的は、プラズマローゲンの生体への吸収効率を改善する技術を提供することにある。

上記目的を達成するため、本発明者らは、種々研究した結果、ホスホリパーゼＡ２には、プラズマローゲンの生体への吸収効率を改善する作用効果があることを見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、第１に、プラズマローゲンとホスホリパーゼＡ２を含有することを特徴とするプラズマローゲン含有組成物を提供するものである。

上記プラズマローゲン含有組成物においては、更に増粘多糖類を含有することが好ましい。この場合、増粘多糖類としては、キサンタンガム及び／又はアラビアガムが好ましく用いられる。

上記プラズマローゲン含有組成物においては、該組成物は、錠剤、カプセル剤、粉末、顆粒、及び液状から選ばれた１種の形態であることが好ましい。

本発明は、第２に、ホスホリパーゼＡ２を有効成分として含有するプラズマローゲン吸収促進用組成物を提供するものである。

上記プラズマローゲン吸収促進用組成物においては、更に増粘多糖類を有効成分として含有することが好ましい。この場合、増粘多糖類としては、キサンタンガム及び／又はアラビアガムが好ましく用いられる。

また、上記プラズマローゲン吸収促進用組成物においては、該組成物は、プラズマローゲンを含有することが好ましい。

上記プラズマローゲン吸収促進用組成物においては、該組成物は、錠剤、カプセル剤、粉末、顆粒、及び液状から選ばれた１種の形態であることが好ましい。

本発明は、第３に、プラズマローゲンとホスホリパーゼＡ２をヒト又は動物に投与することを特徴とするプラズマローゲン吸収促進方法（医療行為を除く）を提供するものである。

上記方法においては、更に増粘多糖類を投与することが好ましい。この場合、増粘多糖類としては、キサンタンガム及び／又はアラビアガムが好ましく用いられる。

また、上記方法においては、プラズマローゲンとホスホリパーゼＡ２を含有するプラズマローゲン含有組成物の形態で投与することが好ましい。

上記方法において、プラズマローゲンとホスホリパーゼＡ２を含有するプラズマローゲン含有組成物の形態で投与する場合、該組成物は、錠剤、カプセル剤、粉末、顆粒、及び液状から選ばれた１種の形態であることが好ましい。

本発明により提供されるプラズマローゲン含有組成物によれば、プラズマローゲンとホスホリパーゼＡ２を含有し、又は任意に増粘多糖類を含有するので、これをヒト又は動物等に投与することにより、その生体にプラズマローゲンを効率的に吸収させることができる。

本発明により提供されるプラズマローゲン吸収促進用組成物によれば、ホスホリパーゼＡ２を有効成分として含有し、又は任意に増粘多糖類を有効成分として含有するので、これをプラズマローゲンとともにヒト又は動物等に投与することにより、その生体にプラズマローゲンを効率的に吸収させることができる。

本発明により提供されるプラズマローゲン吸収促進方法によれば、プラズマローゲンとホスホリパーゼＡ２をヒト又は動物に投与し、又は任意に増粘多糖類を投与するので、その投与したヒト又は動物の生体にプラズマローゲンを効率的に吸収させることができる。

試験例１のＣａｃｏ－２細胞を用いた吸収モデル試験においてホスホリパーゼＡ２がプラズマローゲンの吸収性にどのように影響を与えるかについて調べた結果を示す図表である。 試験例１のＣａｃｏ－２細胞を用いた吸収モデル試験において増粘多糖類がプラズマローゲンの吸収性にどのように影響を与えるかについて調べた結果を示す図表である。

本明細書において「プラズマローゲン」とは、通常当業者に理解される意義と同義であり、具体的には、下記式（１）で表される物質を含む意味である。

式（１）中、Ｒ１は炭素数１～２０のアルキル基であり、具体的には炭素数１０～２０のアルキル基であり、更により具体的にはドデシル基、テトラデシル基、ヘキサデシル基、オクタデシル基、イコサニル基等である。また、Ｒ２は脂肪酸残基であり、具体的には高度不飽和脂肪酸残基であり、更により具体的にはオクタデカジエノイル基、オクタデカトリエノイル基、イコサテトラエノイル基、イコサペンタエノイル基、ドコサテトラエノイル基、ドコサペンタエノイル基、ドコサヘキサエノイル基等である。また、Ｘはエタノールアミン、コリン、セリン、イノシトール、グリセロールから選ばれる基である。

一般に、プラズマローゲンは、牛肉、豚肉、鶏肉等の食肉、魚介類等に含まれており、これらの天然物から総脂質を抽出し、この総脂質画分からプラズマローゲンを含むリン脂質画分を分離して、必要に応じてさらに精製することにより得ることができる。プラズマローゲン含量の高い天然物としては、例えば、ウシ、ブタ等の哺乳類の心臓や脳の部位、ニワトリ等の鳥類のムネ肉の部位、頭足類、貝類、甲殻類等の水産無脊椎動物などが挙げられる。

天然物から総脂質を抽出する方法としては、例えば、Folch法（Folch etal.：J．Biol．Chem.，226，497-505，1957）、Bligh & Dyer法（Bligh et al.：Can. J. Biochem. Physiol., 37, 911-917, 1959）等が挙げられる。

また、総脂質画分からプラズマローゲンを含むリン脂質画分を分離する方法としては、例えば、アセトン沈殿法（山川民夫監修：生化学実験講座３，脂質の化学（日本生化学会編），p.19－20，1963，東京化学同人）、セプパックカラム法（James et al.：Lipds, 23, 1146-1149, 1988）等が挙げられる。

更に、プラズマローゲンを含むリン脂質画分からプラズマローゲンを精製する方法としては、例えば、リン脂質画分を弱アルカリ処理してジアシル型リン脂質を分解する方法、Crotalus atrox由来のホスホリパーゼＡを用いて精製する方法（Gottfried et al.：J. Biol. Chem., 237, 329, 1962）等が挙げられる。弱アルカリ処理としては、例えば、メタノール性０．１Ｎ ＫＯＨ中、１０℃で処理する方法が挙げられる。

また、プラズマローゲンは化学的に合成する方法によっても得ることができる。例えば、グリセリンをアルケニルグリセリルエーテルに変換し（Piantadosi et al.：J．Pharm．Sci.，50，978，1961）、次いでエステル化やリン酸化を行なう方法などが挙げられる。しかし、この方法は煩雑であること、及び使用する有機溶剤や触媒が人体に有害であることから、工業的な生産にはあまり適した方法とは言えず、安全性、生産性等の点からも、本発明に用いるプラズマローゲンとしては、天然物から抽出・分離する方法で得られたものであることが好ましい。

一方、特開２０１９－１６２０４２号公報には、魚介類や水産動物を基原とした、プラズマローゲン高含有抽出物の調製方法か開示されているので、本発明に用いるプラズマローゲンとしては、そのように魚介類や水産動物を基原として得られたものを用いてもよい。

具体的には、上記公報にかかる調製方法の原料となる魚介類又は水産動物としては、プラズマローゲンを含む原料であれば特に制限はない。例えば、ホヤ（例えば、マボヤ（学名：Halocynthia roretzi））等の原索動物門の魚介類、ホタテ、レイシガイ、ムラサキイガイ、ミドリイガイ、マガキ、ヒザラガイ、チヂミボラ、クボガイ、アワビ、ムラサキインコガイ等の軟体動物門の魚介類、ナマコ、ヒトデ、ウニ等の棘皮動物門の魚介類、イソギンチャク等の腔腸動物門の魚介類、サケ、サンマ、カツオ、マグロ、クジラ等の脊椎動物門の水産動物が挙げられる。これらのうち、ホヤ、ホタテ、レイシガイ、ムラサキイガイ、ミドリイガイ、マガキ、ナマコ、ヒトデ、ウニ、イソギンチャク、クジラ等がより好ましい。

上記公報にかかる調製方法によれば、得られる抽出物にはプラズマローゲンが高純度に含まれており、通常、固形分あたりのプラズマローゲンの含量が０．５～５５質量％の範囲を満たす組成物である。加えて、原料に由来するヒ素の混入や濃縮も最小限に抑えられ、質量比でプラズマローゲンを１としたときヒ素の含量が６０ｐｐｍ以下の範囲を満たす組成物である。プラズマローゲンの含量の下限は０．５質量％以上であることが好ましく、５質量％以上であることがより好ましい。また、プラズマローゲンの含量の上限は４０質量％以下であることが好ましく、３０質量％以下であることがより好ましい。更に、ヒ素の含量は、質量比でプラズマローゲンを１としたとき５５ｐｐｍ以下であることが好ましく、４０ｐｐｍ以下であることがより好ましい。また、そのプラズマローゲンは、側鎖にドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ：Docosahexaenoic acid）を有するものであることが好ましい。具体的には、リン脂質を構成する分子種のうち、０．１質量％以上をＤＨＡ結合プラズマローゲンが占めることが好ましく、２質量％以上をＤＨＡ結合プラズマローゲンが占めることがより好ましい。

一般に、プラズマローゲンはグリセロール骨格のｓｎ－２位に有する脂肪酸によりその機能性に差異があることが報告されており、特にドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ：Docosahexaenoic acid）を構造に有するＰＥ型プラズマローゲン（リン脂質の親水部の構造としてエタノールアミンがリン酸エステル結合したエタノールアミン型のプラズマローゲン）には、アルツハイマーの原因と考えられているアミロイドβ（Ａβ）の凝集抑制・分解促進（上記非特許文献５：Yamashita S et al., “Alterations in the Levels of Amyloid-β, Phospholipid Hydroperoxide, and Plasmalogen in the Blood of Patients with Alzheimer's Disease: Possible Interactions between Amyloid-β and These Lipids.” J. Alzheimers Dis., 2016; 50: p.527-37）や、神経芽細胞のアポトーシスを抑制する効果が確認されている（Yamashita S et al., “Extrinsic plasmalogens suppress neuronal apoptosis in mouse neuroblastoma Neuro-2A cells: importance of plasmalogen molecular species” RSC Adv., 2015; 5; p.61012-20）。また、ＤＨＡを構造に有するＰＥ型プラズマローゲンは、天然には魚介類又は水産動物に特に多く含まれていることが報告されている（Yamashita S et al., “Analysis of Plasmalogen Species in Foodstuffs.” Lipids, 2016; 51; p199-210）。

なお、プラズマローゲンの含量は、例えば、高速液体クロマトグラフ／質量分析法、高速液体クロマトグラフ／蒸発光散乱検出法等の測定方法により測定することができる。また、プラズマローゲンを構成するグリセロール骨格のｓｎ－２位に有する脂肪酸の種類や構成の同定は、例えば、高速液体クロマトグラフ／質量分析法、ガスクロマトグラフ／質量分析法等の測定方法により測定することができる。

本明細書において「ホスホリパーゼＡ２」とは、通常当業者に理解される意義と同義であり、ジアシル－ｓｎ－ホスホグリセリドの２位の脂肪酸エステル結合を加水分解する酵素（ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ２；ＰＬＡ２（酵素番号：ＥＣ３．１．１．４））を含む意味である。ホスホリパーゼＡ２には、ブタの膵臓より得られたものや微生物由来のものなどがある、ただし、経口摂取可能である必要がある。具体的には、例えば、レシターゼ（ノボザイムズジャパン社製）、微生物由来リゾマックス（ジェネンコア・インターナショナル社製）、マキサパールＡ２（ＤＳＭ社製）、ＰＬＡ２ナガセ１０Ｐ／Ｒ（ナガセケムテックス社製）、リポモッド６９９Ｌ（協和発酵バイオ社製）等が挙げられる。

本明細書において「増粘多糖類」とは、通常当業者に理解される意義と同義であり、特に制限はない。ただし、経口摂取可能である必要がある。よって、食品素材として用いられる増粘多糖類であることが好ましい。具体的には、例えば、キサンタンガム、アラビアガム、カラギーナン、フコイダン、アルギン酸Ｎａ、結晶セルロース、ペクチン、グァーガム、マンナン、カラギーナン、ジェランガム、ローカストビーンガム、キサンタンガム、タマリンド種子ガム、寒天、コンニャクイモ抽出物、ゼラチン、ヒアルロン酸ナトリウム、コンドロイチン硫酸、キチン、キトサン、でんぷん、食物繊維などが挙げられる。更には、これら素材の化学的修飾体、低分子化体等の修飾体として調製されるものを用いることもできる。増粘多糖類としては、１種類を単独で用いてもよく、あるいは２種類以上を併用して用いてもよい。本発明においては、特に、キサンタンガム及びアラビアガムからなる群から選ばれた１種又は２種以上を用いることがより好ましい。

本発明によれば、ある観点では、プラズマローゲンとホスホリパーゼＡ２を含有することを特徴とするプラズマローゲン含有組成物が提供される。この場合、当該プラズマローゲン含有組成物中に含まれるプラズマローゲンの含有量としては、特に制限はないが、例えば、その上限は１０質量％以下であることが好ましく、５質量％以下であることがより好ましく、０．５質量％以下であることが更により好ましい。また、その下限は０．０５質量％以上であることが好ましく、０．０８質量％以上であることがより好ましく、０．２５質量％以上であることが更により好ましい。当該プラズマローゲン含有組成物中に含まれるホスホリパーゼＡ２の含有量としては、特に制限はないが、例えば、その上限は０．０２質量％以下であることが好ましく、０．０１質量％以下であることがより好ましく、０．００５質量％以下であることが更により好ましい。また、その下限は０．０００１質量％以上であることが好ましく、０．０００５質量％以上であることがより好ましく、０．００２５質量％以上であることが更により好ましい。また、その場合のプラズマローゲンとホスホリパーゼＡ２の含有量の質量比としては、実際に投与する際の投与量比に揃えることが好ましく、プラズマローゲンを１として、例えば、１：０．０５～１：１０の範囲内であってよく、１：０．３～１：５の範囲内であってよく、１：０．５～１：１の範囲内であってよい。

本発明のプラズマローゲン含有組成物は、更に増粘多糖類を含有することができる。この場合、プラズマローゲン含有組成物中に含まれる増粘多糖類の含有量としては、特に制限はないが、例えば、その上限は１０質量％以下であることが好ましく、５質量％以下であることがより好ましく、０．２質量％以下であることが更により好ましい。また、その下限は０．０２質量％以上であることが好ましく、０．０５質量％以上であることがより好ましく、０．１質量％以上であることが更により好ましい。また、その場合のプラズマローゲンとホスホリパーゼＡ２と増粘多糖類の含有量の質量比としては、実際に投与する際の投与量比に揃えることが好ましく、プラズマローゲンを１として、例えば、１：０．０５：１～１：１０：３０の範囲内であってよく、１：０．３：５～１：５：２０の範囲内であってよく、１：０．５：１０～１：１：１５の範囲内であってよい。

本発明により提供されるプラズマローゲン含有組成物には、上記基本的成分の他に、賦形剤、糖類、香料、色素、乳化剤、保存料等を適宜含むことができる。

本発明により提供されるプラズマローゲン含有組成物においては、その効率的な摂取のためには、錠剤、カプセル剤、粉末、顆粒、液状等の形態であってよい。典型的な例を挙げれば、プラズマローゲン及びホスホリパーゼＡ２並びに任意にその他の素材を適当な賦形剤等とともに均一に混合して、加圧式打錠機により打錠することにより錠剤とすることができる、また、造粒してそのまま粉末状、顆粒状にして利用することもできる。また、サフラワー油などの油脂に均一に分散後、ミツロウなどを加え、スラリーの粘度を適度に調節し、ソフトカプセル充填機によりゼラチンとグリセリンを被包材の主成分とするようなソフトカプセル中に充填してもよい。

また、本発明によれば、別の観点では、ホスホリパーゼＡ２を有効成分として含有するプラズマローゲン吸収促進用組成物が提供される。この場合、当該プラズマローゲン吸収促進用組成物中に含まれるホスホリパーゼＡ２の含有量としては、特に制限はないが、例えば、その上限は０．０２質量％以下であることが好ましく、０．０１質量％以下であることがより好ましく、０．００５質量％以下であることが更により好ましい。また、その下限は０．０００１質量％以上であることが好ましく、０．０００５質量％以上であることがより好ましく、０．００２５質量％以上であることが更により好ましい。このプラズマローゲン吸収促進用組成物中にはプラズマローゲンが含有されていてもよい、その場合は、上述したプラズマローゲン含有組成物の場合と同様に、プラズマローゲンの含有量としては、特に制限はないが、例えば、その上限は１０質量％以下であることが好ましく、５質量％以下であることがより好ましく、０．５質量％以下であることが更により好ましい。また、その下限は０．０５質量％以上であることが好ましく、０．０８質量％以上であることがより好ましく、０．２５質量％以上であることが更により好ましい。プラズマローゲンを含有するプラズマローゲン吸収促進用組成物中に含まれるホスホリパーゼＡ２の含有量としては、特に制限はないが、例えば、その上限は０．０２質量％以下であることが好ましく、０．０１質量％以下であることがより好ましく、０．００５質量％以下であることが更により好ましい。また、その下限は０．０００１質量％以上であることが好ましく、０．０００５質量％以上であることがより好ましく、０．００２５質量％以上であることが更により好ましい。また、その場合のプラズマローゲンとホスホリパーゼＡ２の含有量の質量比としては、実際に投与する際の投与量比に揃えることが好ましく、プラズマローゲンを１として、例えば、１：０．０５～１：１０の範囲内であってよく、１：０．３～１：５の範囲内であってよく、１：０．５～１：１の範囲内であってよい。

プラズマローゲン吸収促進用組成物は、有効成分として、更に増粘多糖類を含有することができる。この場合、当該プラズマローゲン吸収促進用組成物中に含まれる増粘多糖類の含有量としては、特に制限はないが、例えば、その上限は１０質量％以下であることが好ましく、５質量％以下であることがより好ましく、０．２質量％以下であることが更により好ましい。また、その下限は０．０２質量％以上であることが好ましく、０．０５質量％以上であることがより好ましく、０．１質量％以上であることが更により好ましい。また、その場合のプラズマローゲンとホスホリパーゼＡ２と増粘多糖類の含有量の質量比としては、実際に投与する際の投与量比に揃えることが好ましく、プラズマローゲンを１として、例えば、１：０．０５：１～１：１０：３０の範囲内であってよく、１：０．３：５～１：５：２０の範囲内であってよく、１：０．５：１０～１：１：１５の範囲内であってよい。

本発明により提供されるプラズマローゲン吸収促進用組成物には、上述したプラズマローゲン含有組成物の場合と同様に、上記基本的成分の他に、賦形剤、糖類、香料、色素、乳化剤、保存料等を適宜含むことができる。

本発明により提供されるプラズマローゲン吸収促進用組成物においては、上述したプラズマローゲン含有組成物の場合と同様に、その効率的な摂取のためには、錠剤、カプセル剤、粉末、顆粒、液状等の形態であってよい。典型的な例を挙げれば、上記ホスホリパーゼＡ２あるいは任意にプラズマローゲン並びにその他の素材を適当な賦形剤等とともに均一に混合して、加圧式打錠機により打錠することにより錠剤とすることができる、また、造粒してそのまま粉末状、顆粒状にして利用することもできる。また、サフラワー油などの油脂に均一に分散後、ミツロウなどを加え、スラリーの粘度を適度に調節し、ソフトカプセル充填機によりゼラチンとグリセリンを被包材の主成分とするようなソフトカプセル中に充填してもよい。

本発明により提供されるプラズマローゲン含有組成物又はプラズマローゲン吸収促進用組成物の使用態様としては、プラズマローゲンをヒト又は動物に投与する際に、ホスホリパーゼＡ２を併用して、そのヒト又は動物に投与するようにすればよい。これにより、プラズマローゲンの生体への吸収効率を、ホスホリパーゼＡ２を併用しない場合より改善することができる。その場合、プラズマローゲンとホスホリパーゼＡ２とを１つの組成物の形態にしてヒト又は動物に投与するようにしてもよく、あるいは、別の組成物の形態にして、別々に、ただし、時間をおかずに投与するようにしてもよい。また、任意に、ホスホリパーゼＡ２とともに増粘多糖類を併用してもよい。その場合、プラズマローゲンとホスホリパーゼＡ２と増粘多糖類とを１つの組成物の形態にしてヒト又は動物に投与するようにしてもよく、あるいは、別の組成物の形態にして、別々に、ただし、時間をおかずに投与するようにしてもよい。

本発明により提供されるプラズマローゲン含有組成物又はプラズマローゲン吸収促進用組成物が利用可能な製品形態としては、特に制限はなく、例えば、飲食品、機能性表示食品、特定保健用食品、栄養機能食品、健康食品、サプリメント、医薬品、動物用医薬品等である。また、ペット動物や家畜動物のための動物用飼料に含有せしめて利用してもよい。

本発明により提供されるプラズマローゲン含有組成物又はプラズマローゲン吸収促進用組成物の好ましい投与量としては、被投与者又は被投与動物の年齢や健康状態、投与継続期間、投与頻度などによって、適宜決定することができる。一般的な投与量を例示すれば、例えば、プラズマローゲンにして０．１～４．０ｍｇ／１日の量、より好ましくは０．２～２．０ｍｇ／１日の量、更に好ましくは０．５～１．０ｍｇ／１日の量で投与することができる。また、ホスホリパーゼＡ２にして０．０７～２．８ｍｇ／１日の量、より好ましくは０．１４～１．４ｍｇ／１日の量、更に好ましくは０．３５～０．７ｍｇ／１日の量で投与することができる。その際、プラズマローゲンとホスホリパーゼＡ２との投与量比としては、プラズマローゲンを１としたときの質量比にして例えば、１：０．０５～１：１０の範囲内であってよく、１：０．３～１：５の範囲内であってよく、１：０．５～１：１の範囲内であってよい。

更に、増粘多糖類を含有する場合は、増粘多糖類にして１．３～５２ｍｇ／１日の量、より好ましくは２．６～２６ｍｇ／１日の量、更に好ましくは６．５～１３ｍｇ／１日の量で投与することができる。その場合のプラズマローゲンとホスホリパーゼＡ２と増粘多糖類との投与量比としては、プラズマローゲンを１としたときの質量比にして例えば、１：０．０５：１～１：１０：３０の範囲内であってよく、１：０．３：５～１：５：２０の範囲内であってよく、１：０．５：１０～１：１：１５の範囲内であってよい。

なお、本発明は、上述した実施形態に限定されるものではなく、本発明の要旨の範囲内で、各種の変形実施形態が可能であり、そのような実施形態も本発明の範囲に含まれる。また、本発明は、プラズマローゲンの生体への吸収効率を改善することができる組成物を提供するものであるが、別の観点からは、プラズマローゲンとホスホリパーゼＡ２をヒト又は動物に投与することを特徴とするプラズマローゲン吸収促進方法を提供するものであるということもできる。

以下に実施例を挙げて本発明について更に具体的に説明する。これらの実施例は本発明の範囲を限定するものではない。

［調製例１］＜ホヤ由来プラズマローゲン含有抽出物の調製＞
ホヤ可食部のフリーズドライ粉末を５０．８ｇ秤量し、ヘキサン６６ｍＬ、エタノール１２１ｍＬ、及び水１１ｍＬを仕込み、混合し、撹拌しながら常温で３０分間抽出した後、定性濾紙（型式：Ｎｏ.２）にて濾過し、抽出液と残渣を分離し、残渣には、再度、ヘキサン６６ｍＬ、エタノール１２１ｍＬ、及び水１１ｍＬを仕込み、混合し、撹拌しながら常温で３０分間抽出した後、定性濾紙（型式：Ｎｏ.２）にて濾過し、抽出液と残渣を分離した。抽出液２回分を併せて真空乾燥による溶媒除去を行い、ホヤ抽出物を得た。その収量は７．９ｇであった。

得られたホヤ抽出物を１．９７ｇ秤量し、０．１Ｍクエン酸－ＨＣｌバッファー（ｐＨ４．５）５ｍＬ、ホスホリパーゼＡ１（ＰＬＡ１製剤、三菱ケミカルフーズ製）を２４０ｍｇ添加し、５０℃にて４時間撹拌し酵素反応させた。酵素処理液にアセトン１６．７ｍＬとヘキサン１６．７ｍＬを添加し、よく撹拌した後、遠心分離（２５００ｒｐｍ、４℃、２０ｍｉｎ）し、ヘキサン層（上層）と水層（下層）に分離させた。上層を回収し、ロータリーエバポレーターで乾固し、アセトンを３０ｍＬ添加した。遠心分離し、アセトンを除去し、沈殿物を回収した。再度、アセトンを３０ｍＬ添加し、遠心分離し、アセトンを除去し、沈殿物を回収した。沈殿物を真空乾燥し、酵素処理物を得た。その収量は３４５．９ｍｇであった。

得られた酵素処理物１００．０ｍｇを秤量し、ヘキサン１０ｍＬ、アセトン１０ｍＬ、及び水３ｍＬを加え、よく撹拌した後、遠心分離（２５００ｒｐｍ、４℃、２０ｍｉｎ）し、液／液分配させた。下層を除去し、更に、アセトン５ｍＬと水３ｍＬを添加して、よく撹拌した後、遠心分離（２５００ｒｐｍ、４℃、２０ｍｉｎ）し、液／液分配させた。その上層を回収し、ロータリーエバポレーターで溶媒除去させたうえ、真空乾燥して、ホヤ由来プラズマローゲン含有抽出物を得た。その収量は６８．１ｍｇであった。

＜プラズマローゲンを含む胆汁酸混合ミセル含有培地の調製＞
プラズマローゲンの生体への吸収性を試験するため、一般に脂質分子の腸管内での存在状態と考えられる胆汁酸混合ミセルを調製した。具体的には、以下のようにしてプラズマローゲンを含む胆汁酸混合ミセル含有培地を調製した。

丸底試験管にクロロホルム／メタノール（２：１，ｖ／ｖ）を少量加え、ホヤ由来プラズマローゲン含有抽出物７．５ｍｇ／ｍＬ（クロロホルム／メタノール（２：１，ｖ／ｖ）溶液）１ｍＬ、タウロコール酸ナトリウム２００ｍＭ（メタノール溶液）１ｍＬ、モノオレイン１０ｍＭ（クロロホルム／メタノール（２：１，ｖ／ｖ）溶液）１ｍＬ、オレイン酸３．３３ｍＭ（クロロホルム/メタノール（２：１，ｖ／ｖ）溶液）１ｍＬ、リゾホスファチジルコリン１０ｍＭ（クロロホルム／メタノール（２：１，ｖ／ｖ）溶液）１ｍＬを加え、よくピペッティングした。ボルテックスミキサーを用いて十分に混合した後、窒素乾固した。残渣に無血清培地（１％ペニシリン－ストレプトマイシン、１％ＮＥＡＡ（非必須アミノ酸）を含むＤＭＥＭ）１００ｍＬを加え、ボルテックスミキサーで混合した後、超音波処理をしてプラズマローゲンを含む胆汁酸混合ミセル含有培地を調製した。

上記に調製したプラズマローゲンを含む胆汁酸混合ミセル含有培地は終濃度として７５μｇ／ｍＬホヤ由来プラズマローゲン含有抽出物、２ｍＭタウロコール酸ナトリウム、１００μＭモノオレイン、３３．３μＭオレイン酸、１００μＭリゾホスファチジルコリンが含まれる。

＜Ｃａｃｏ－２細胞を用いた吸収モデル試験＞
プラズマローゲンの生体への吸収性を試験するため、Ｃａｃｏ－２細胞を用いた吸収モデル試験を行った。具体的には、以下のようにして試験を行った。

ヒト結腸ガン由来Ｃａｃｏ－２細胞（資源番号：ＲＢＲＣ－ＲＣＢ０９８８）は独立行政法人理化学研究所バイオリソースセンターより購入したものを用いた。１０％ＦＢＳ、１％ペニシリン－ストレプトマイシン、１％ＮＥＡＡ（非必須アミノ酸）を含むＤＭＥＭを用いて３７℃、５％ＣＯ_２で培養した。８０％コンフルエントになるまで培養した後、トリプシン／ＥＤＴＡ溶液を用いて細胞をディッシュから回収し、１．０×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの密度で１０ｃｍディッシュに播種して継代を行った。２．０×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞懸濁液１ｍＬずつを１２－ｗｅｌｌプレートに播種し、３７℃、５％ＣＯ_２で３週間培養することで、小腸上皮様に分化させた。この間、２～３日ごとに培地交換を行った。分化誘導したＣａｃｏ－２細胞を無血清培地で２回洗浄した後、プラズマローゲン含有培地中で３時間培養した。培養終了後、１０ｍＭタウロコール酸ナトリウムを含んだＰＢＳ１ｍＬで１回、ＰＢＳ１ｍＬで２回洗浄し、セルスクレイパーを用いて超純水１ｍＬに細胞を回収した。細胞を氷冷しながら超音波破砕し、細胞破砕液８００μＬからＢｌｉｇｈ－Ｄｙｅｒ法に従って脂質を抽出した。脂質抽出液を窒素乾固した後、メタノール１ｍＬに溶解し、－８０℃で保存した。また、タンパク質濃度測定キット「ＤＣ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙキット」（Ｂｉｏ－Ｒａｄ製）を用いて細胞破砕液のタンパク質濃度を測定し、補正に用いた。

＜脂質の定性・定量解析＞
Ｃａｃｏ－２細胞から抽出した脂質の定性・定量解析は、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ ＱＴＲＡＰシステムを使用した多重反応モニタリング（ＭＲＭ：Multiple Reaction Monitoring）分析により行った。
（分析条件）
・LINEAR ION TRAP QUADRUPOLE LC/MS/MS MASS SPECTROMETER(AB SCIEX INSTRUMENTS)
・ポンプ：LC-20AD(Shimadzu)
・Positive Ion Mode
・Curtain Gas 20.0
・Collision Gas 10
・IonSpray Voltage 5500.0
・Temparature 350.0
・Ion Source Gas 1 50.0
・Ion Source Gas 2 50.0
・Declustering Potential 85.0
・Entrance Potential 10.0
・Collision Energy 40.0
・Collision Cell Potential 12.0
・Inject量：１μＬ
・カラム：Ascentics Express HILIC, 2.7μm, 2.1×150mm (SIGMA-ALDRICH)
・流速：０．２ｍＬ／ｍｉｎ
・移動相
（Ａ）４４ｍＭギ酸アンモニウム含有超純水（ギ酸でｐＨ３に調製）
（Ｂ）アセトニトリル（Ａと同量のギ酸を添加）
・分析時間：４０分
・グラジエント条件：下記表１のとおり
・プラズマローゲンの分子種の同定結果：下記表２のとおり

［試験例１］
Ｃａｃｏ－２細胞を用いた吸収モデル試験において、ホスホリパーゼＡ２がプラズマローゲンの吸収性にどのように影響を与えるかについて調べた。具体的には、ホスホリパーゼＡ２（商品名「ホスホリパーゼＡ２ ウシ膵臓由来」シグマ アルドリッチ社製）を５μｇ／ｍＬ、２５μｇ／ｍＬ、又は５０μｇ／ｍＬの濃度で無血清培地に添加したときと、添加しないときとで、Ｃａｃｏ－２細胞への取り込み量に差があるかどうかを調べた。試験はｎ＝３で行い、統計的な有意差検定をＴｕｒｋｙ－Ｋｒａｍｍｅｒ法により行った。

図１には、プラズマローゲンのＣａｃｏ－２細胞への取り込み量を、プラズマローゲン含有培地を添加する前を１．０としたときの変化量で示した。

図１に示されるように、１８：０ｐ／２０：４の分子種（アラキドン酸結合プラズマローゲン型リン脂質）や１８：０ｐ／２０：５の分子種（ＥＰＡ結合プラズマローゲン型リン脂質）や１８：０ｐ／２２：６の分子種（ＤＨＡ結合プラズマローゲン型リン脂質）については、２５μｇ／ｍＬないし５０μｇ／ｍＬの濃度域において、ｐ＜０．０５の有意差（図１中「＊」で示す）をもって、ホスホリパーゼＡ２を無血清培地に添加したほうが、添加しない場合に比べて、ホスホリパーゼＡ２の濃度依存的にＣａｃｏ－２細胞への取り込み量が増加した。よって、ホスホリパーゼＡ２により、プラズマローゲンの生体への吸収効率を改善できることが明らかとなった。

［試験例２］
Ｃａｃｏ－２細胞を用いた吸収モデル試験において、増粘多糖類がプラズマローゲンの吸収性にどのように影響を与えるかについて調べた。具体的には、増粘多糖類としてキサンタンガム又はアラビアガムを１ｍｇ／ｍＬの濃度で無血清培地に添加したときと、添加しないときとで、Ｃａｃｏ－２細胞への取り込み量に差があるかどうかを調べた。試験はｎ＝４で行い、統計的な有意差検定をＴｕｒｋｙ－Ｋｒａｍｍｅｒ法により行った。

図２には、プラズマローゲンのＣａｃｏ－２細胞への取り込み量を、プラズマローゲン含有培地を添加する前を１．０としたときの変化量で示した。

図２に示されるように、１８：０ｐ／２０：５の分子種（ＥＰＡ結合プラズマローゲン型リン脂質）や１８：０ｐ／２２：６の分子種（ＤＨＡ結合プラズマローゲン型リン脂質）については、ｐ＜０．０５の有意差（図１中「＊＊」で示す）をもって、増粘多糖類としてキサンタンガム又はアラビアガムを無血清培地に添加したほうが、添加しない場合に比べて、Ｃａｃｏ－２細胞への取り込み量が増加した。よって、増粘多糖類により、プラズマローゲンの生体への吸収効率を改善できることが明らかとなった。

（処方１）
表３には、調製例１で得られたプラズマローゲン含有抽出物を配合した、錠剤（打錠品）の処方を示す。

（処方２）
表４には、調製例１で得られたプラズマローゲン含有抽出物を配合した、ソフトカプセル剤の処方を示す。

（処方３）
表５には、調製例１で得られたプラズマローゲン含有抽出物を配合した、グミの処方を示す。

（処方４）
表６には、調製例１で得られたプラズマローゲン含有抽出物を配合した、ゼリーの処方を示す。

（処方５）
表７には、調製例１で得られたプラズマローゲン含有抽出物を配合した、清涼飲料水の処方を示す。

Claims (14)

1. プラズマローゲンとホスホリパーゼＡ２を含有することを特徴とするプラズマローゲン含有組成物。
2. 更に増粘多糖類を含有する、請求項１記載のプラズマローゲン含有組成物。
3. 前記増粘多糖類が、キサンタンガム及び／又はアラビアガムである、請求項２記載のプラズマローゲン含有組成物。
4. 錠剤、カプセル剤、粉末、顆粒、及び液状から選ばれた１種の形態である、請求項１～３のいずれか１項に記載のプラズマローゲン含有組成物。
5. ホスホリパーゼＡ２を有効成分として含有するプラズマローゲン吸収促進用組成物。
6. 更に増粘多糖類を有効成分として含有する、請求項５記載のプラズマローゲン吸収促進用組成物。
7. 前記増粘多糖類が、キサンタンガム及び／又はアラビアガムである、請求項６記載のプラズマローゲン吸収促進用組成物。
8. プラズマローゲンを含有する、請求項５～７のいずれか１項に記載のプラズマローゲン吸収促進用組成物。
9. 錠剤、カプセル剤、粉末、顆粒、及び液状から選ばれた１種の形態である、請求項５～８のいずれか１項に記載のプラズマローゲン吸収促進用組成物。
10. プラズマローゲンとホスホリパーゼＡ２をヒト又は動物に投与することを特徴とするプラズマローゲン吸収促進方法（医療行為を除く）。
11. 更に増粘多糖類を投与する、請求項１０記載のプラズマローゲン吸収促進方法。
12. 前記増粘多糖類が、キサンタンガム及び／又はアラビアガムである、請求項１１記載のプラズマローゲン吸収促進方法。
13. プラズマローゲンとホスホリパーゼＡ２を含有するプラズマローゲン含有組成物の形態で投与する、請求項１０～１２のいずれか１項に記載のプラズマローゲン吸収促進方法。
14. 前記プラズマローゲン含有組成物は、錠剤、カプセル剤、粉末、顆粒、及び液状から選ばれた１種の形態である、請求項１３載の方法。
    

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