JP2015110597A - 抗ｃｄ３８ヒト抗体及びその用途 - Google Patents

Abstract

【課題】組換え抗原結合領域及びＣＤ３８に特異的なそのような抗原結合領域を含む抗体及び機能性断片、該抗体をコードする核酸配列、該配列を含むベクター、薬学組成物及び使用のための指示書並びに、ＣＤ３８の新規な単離されたエピトープ及びその使用方法の提供。【解決手段】ＣＤ３８のエピトープに特異的な抗原結合領域を含む単離された抗体又は機能性抗体断片。ヒトＰＢＭＣ細胞をエフェクター細胞として用いた場合、及びエフェクター細胞の標的細胞に対する比が約３０：１から約５０：１の間である場合、ある特定の重鎖および軽鎖配列を有するキメラＯＫＴ１０抗体よりも少なくとも２倍から５倍良好な効率で抗体−依存性細胞障害性（「ＡＤＣＣ」）により、上記抗体又はその機能性断片は、ＣＤ３８＋標的細胞（ＬＰ−１（ＤＳＭＺ：ＡＣＣ４１）及びＲＰＭＩ−８２２６（ＡＴＣＣ：ＣＣＬ−１５５））の殺傷を媒介することができる薬学的組成物。【選択図】なし

Description

この出願は、２００４年２月６日に出願された米国仮出願番号６０／５４１，９１１、
２００４年２月６日に出願された米国仮出願番号６０／５４７，５８４、２００４年３月
１８日に出願された米国仮出願番号６０／５５３，９４８及び２００４年８月６日に出願
された米国仮出願番号６０／５９９，０１４に対する優先権を主張し、それらの内容の全
体を引用により本明細書に編入する。

ＣＤ３８は、タイプＩＩの膜糖蛋白質であり、ＡＤＰリボシル−サイクラーゼ及びｃＡ
ＤＰ−ヒドロラーゼのようなその酵素活性のために、エクトエンザイムのファミリーに属
する。個体発生の間、ＣＤ３８は、ＣＤ３４＋決定済み幹細胞（committed stem cells）
及びリンパ細胞、赤血球細胞及び骨髄細胞の系列決定済み前駆細胞（lineage committed
progenitors）の上に出現する。ＣＤ３８発現は、リンパ系列においてのみＴ−及びｍＢ
−細胞の発生を通して存続すると理解される。

ＣＤ３８のアップ制御はリンパ球活性化、特に形質細胞経路を通したＢ−細胞分化のた
めのマーカーとして機能する。そのリガンドＣＤ３１を通して細胞内シグナリング又は細
胞内伝達を導くＣＤ３８の（共同）受容体の機能は、仮定されており、第２メッセンジャ
ー環状ＡＤＰｒの細胞内制御因子としてのその役割も様々なシグナリングカスケードにお
いて仮定されている。しかしながら、その生理学的重要性はまだ明らかにされておらず、
マウスアナログのノックアウト又はヒトにおけるＣＤ３８自己抗体が有害であることが明
確でないためである。

造血系におけるその発現とは別に、研究者らは、Ｂ−又はＴ−急性リンパ芽球白血病（
ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）及び多発性骨髄
腫（ＭＭ）を含む、Ｂ−，Ｔ−，及び骨髄／単球腫瘍由来の様々な細胞系におけるＣＤ３
８のアップ制御に注目している。ＭＭにおいては、例えば、強いＣＤ３８発現が全ての患
者サンプルの大多数において立証されている。

よって、悪性腫瘍細胞上のＣＤ３８の過剰発現は、免疫治療のための魅力ある治療標的
を提供する。特に魅力があるのは、造血系のもっとも初期の多能性幹細胞がＣＤ３８−陰
性であるという事実及びＡＤＣＣ又はＣＤＣによる細胞傷害性作用の範囲が各標的の発現
レベルとうまく相関するという事実である。

抗−ＣＤ３８治療の現在のアプローチは、２つの群：インビボアプローチとエクスビボ
アプローチに分けることができる。インビボアプローチにおいては、抗−ＣＤ３８抗体を
治療の必要のある被験者に投与し、ＣＤ３８−過剰発現悪性腫瘍細胞の抗体媒介性枯渇を
導く。枯渇は、抗体媒介ＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣによりエフェクター細胞によるか、又
は細胞傷害性物質、例えばサポリンの標的細胞への輸送及び続く内部移行（internalizat
ion）のための標的化モイエティとして抗ＣＤ３８−抗体を使用するかの何れかにより、
達成することができる。エクスビボアプローチにおいては、細胞集団、例えば、ＣＤ３８
過剰発現悪性腫瘍細胞を含む骨髄細胞を、治療の必要のある個体から取り出し、そして抗
−ＣＤ３８抗体と接触させる。インビボアプローチに関して記載されたとおり、細胞傷害
性物質、例えばサポリンにより破壊されるか、又は固定化された抗−ＣＤ３８抗体と細胞
集団を接触させて、即ちＣＤ３８過剰発現標的細胞を上記混合物から除去することにより
、標的細胞を除去する。その後、枯渇された細胞集団を患者に再挿入する。

ＣＤ３８に関して特異的な抗体は、様々な特性に依存して、別のグループに分割するこ
とができる。ＣＤ３８分子に対するいくつかの抗体の結合（有力にはアミノ酸２２０−３
００）は、標的細胞内での活性、例えばＣａ２＋放出、サイトカイン放出、リン酸化事象
及び各抗体特異性に基づいた成長刺激を誘導することができる（Ｋｏｎｏｐｌｅｖａ ｅ
ｔ ａｌ．，１９９８；Ａｕｓｉｅｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，２０００）が、様々な公知の
抗体とそれらの（非）作動特性との間に明確な相関は観察できなかった（Ｆｕｎａｒｏ
ｅｔ ａｌ．，１９９０）。

公表された抗−ＣＤ３８抗体の効果については、ほとんど知られてはいない。公知なこ
とは、全ての公知の抗体がＣＤ３８のＣ末端部分に位置するエピトープ（アミノ酸残基２
２０から３００）を例外なく認識することである。一次蛋白質配列内の活性部位から離れ
たＣＤ３８のＮ末端部分中のエピトープに特異的な抗体は、これまでに知られていない。
しかしながら、我々は、ヒトＦｃ部分を含むキメラ構築物として分析されたときに、臨床
試験においてＯＫＴ１０が相対的に低い親和性及び効果を有することを発見した。さらに
、ＯＫＴ１０はヒト投与に関しては不適当なマウス抗体である。ヒトの抗−ＣＤ３８ ｓ
ｃＦｖ抗体断片が最近記載された（ＷＯ０２／０６３４７）。しかしながら、その抗体は
選択的に発現されたＣＤ３８エピトープに特異的である。

相応じて、抗−ＣＤ３８抗体治療に関しての多大な潜在性の見地から、ＡＤＣＣ及び／
又はＣＤＣによるＣＤ３８過剰発現悪性腫瘍細胞の殺傷を媒介することにおいて高い親和
性及び高い効果を伴うヒト−ＣＤ３８抗体に関する強い要求がある。

本発明は、完全にヒトにおいて高い有効性を有する抗−ＣＤ３８抗体を提供することに
よるこれらの要求及びその他の要求を満たし、以下に記載される。

ＷＯ ０２／０６３４７ 米国特許第６，３００，０６４号 ＷＯ ０１／０５９５０

Ｋｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２０００）２９６：５７ Ｋｒｅｂｓ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．（２００１）２５４：６７ Ｖｉｒｎｅｋａｓ，Ｂ．，Ｇｅ，Ｌ．，Ｐｌｕｃｋｔｈｕｍ，Ａ．，Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ，Ｋ．Ｃ．，Ｗｅｌｌｎｈｏｆｅｒ，Ｇ．，ａｎｄ Ｍｏｒｏｎｅｙ Ｓ．Ｅ．，１９９４；Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２２，５６００

本発明の目的は、ＣＤ３８−過剰発現細胞の殺傷を有効に媒介することのできるヒト及
びヒト化抗体を提供することである。
本発明の目的は、ヒト投与に安全な抗体を提供することである。

本発明の目的は、一つ又はそれより多い本発明の抗体を用いることによりＣＤ３８アッ
プ制御に関連した疾患及び／又は症状を治療するための方法を提供することでもある。

一つの側面において、上記発明は、ＣＤ３８のエピトープに特異的な抗原結合領域を含
む単離された抗体又は機能性抗体断片を提供するが、但し、ヒトＰＢＭＣ細胞をエフェク
ター細胞として用いた場合、及びエフェクター細胞の標的細胞に対する比が約３０：１か
ら約５０：１の間である場合、配列番号：２３及び２４を有するキメラＯＫＴ１０抗体よ
りも少なくとも２倍から５倍良好な効率で抗体−依存性細胞障害性（「ＡＤＣＣ」）によ
り（同じか又は実質上同じ条件下で）、上記抗体又はその機能性断片は、ＣＤ３８＋標的
細胞（ＬＰ−１（ＤＳＭＺ：ＡＣＣ４１）及びＲＰＭＩ−８２２６（ＡＴＣＣ：ＣＣＬ−
１５５））の殺傷を媒介することができる。そのような抗体又はその機能性断片は、配列
番号：５、６、７、又は８に示されるＨ−ＣＤＲ３領域を含む抗原結合領域を含んでよい
；抗原結合領域は、配列番号：５、６、７、又は８に示されるＨ−ＣＤＲ２領域をさらに
含んでよい；そして抗原結合領域は、配列番号：５、６、７、又は８に示されるＨ−ＣＤ
Ｒ１領域も含んでよい。そのような本発明のＣＤ３８−特異的抗体は、配列番号：１３、
１４、１５、又は１６に示されるＬ−ＣＤＲ３領域を含む抗原結合領域を含んでよい；
抗体結合領域は、配列番号：１３、１４、１５、又は１６に示されるＬ−ＣＤＲ１領域を
さらに含んでよい；そして抗体結合領域は、配列番号：１３、１４、１５、又は１６に示
されるＬ−ＣＤＲ２領域も含んでよい。

別の側面において、発明は、ＣＤ３８のエピトープに特異的な抗原結合領域を含む単離
された抗体又はその機能性断片を提供するが、当該抗体又はその機能性断片は、前の段落
における条件と同じか又は実質上同じ条件下で、キメラＯＫＴ１０抗体（配列番号：２３
及び２４）よりも少なくとも２倍から５倍良好な効率で、ＣＤＣによりＣＤ３８をトラン
スフェクトされたＣＨＯ細胞の殺傷を媒介することができる。これらの基準を満たす抗体
は、配列番号：５、６、又は７に示されるＨ−ＣＤＲ３領域を含む抗原結合領域を含んで
よい；抗原結合領域は、配列番号：５、６、又は７に示されるＨ−ＣＤＲ２領域をさらに
含んでよい；そして抗原結合領域は、配列番号：５、６、又は７に示されるＨ−ＣＤＲ１
領域も含んでよい。そのような本発明のＣＤ３８−特異的抗体は、配列番号：１３、１４
、又は１５に示されるＬ−ＣＤＲ３領域を含む抗原結合領域を含んでよい； 抗体結合領
域は、配列番号：１３、１４、又は１５に示されるＬ−ＣＤＲ１領域をさらに含んでよい
；そして抗体結合領域は、配列番号：１３、１４、又は１５に示されるＬ−ＣＤＲ２領域
も含んでよい。

発明の抗体（及びそれらの機能性断片）は、ＣＤ３８のエピトープに特異的な抗原結合
領域を含んでよく、当該エピトープはＣＤ３８の４３から２１５のアミノ酸残基の一つ又
はそれより多くのアミノ酸残基を含み、配列番号：２２に示されるとおりである。より特
定すれば、上記抗原結合領域が結合するエピトープは、アミノ酸ストレッチ４４−６６、
８２−９４、１４２−１５４、１４８−１６４、１５８−１７０、及び１９２−２０６の
リストに由来する一つ又はそれより多いアミノ酸ストレッチ中に見いだされる一つ又はそ
れより多いアミノ酸残基を含んでよい。特定の抗体に関して、上記エピトープは直鎖状で
よく、その他に関して、それはコンフォメーショナル（即ち、不連続）であってよい。こ
れらの特性を一つ又はそれより多く有する抗体又はその機能性断片は、配列番号：５、６
、７、又は８に示されるＨ−ＣＤＲ３領域を含む抗原結合領域を含んでよい；抗原結合領
域は、配列番号：５、６、７、又は８に示されるＨ−ＣＤＲ２領域をさらに含んでよい；
そして抗原結合領域は、配列番号：５、６、７、又は８に示されるＨ−ＣＤＲ１領域も含
んでよい。そのような本発明のＣＤ３８−特異的抗体は、配列番号：１３、１４、１５、
又は１６に示されるＬ−ＣＤＲ３領域を含む抗原結合領域を含んでよい； 抗体結合領域
は、配列番号：１３、１４、１５、又は１６に示されるＬ−ＣＤＲ１領域をさらに含んで
よい；そして抗体結合領域は、配列番号：１３、１４、１５、又は１６に示されるＬ−Ｃ
ＤＲ２領域も含んでよい。

本明細書に開示された配列のペプチドバリアントも本発明により包含される。従って、
発明は、重鎖アミノ酸配列を有する抗−ＣＤ３８抗体を含み、配列番号：５、６、７、又
は８に示されるＣＤＲ領域とＣＤＲ領域中の少なくとも６０パーセントの配列同一性；及
び／又は配列番号：５、６、７、又は８に示されるＣＤＲ領域とＣＤＲ領域中の少なくと
も８０パーセントの配列同一性を伴う。さらに含まれるのは、軽鎖アミノ酸配列を有する
抗−ＣＤ３８抗体であり、配列番号：１３、１４、１５、又は１６に示されるＣＤＲ領域
とＣＤＲ領域中の少なくとも６０パーセントの配列同一性；及び／又は配列番号：１３、
１４、１５、又は１６に示されるＣＤＲ領域とＣＤＲ領域中の少なくとも８０パーセント
の配列同一性を伴う。

発明の抗体はＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ_１）であってよく、抗体断片は例えばＦａｂ又は
ｓｃＦｖであってよい。発明の抗体断片は、従って、本明細書に記載されるとおりの一つ
又はそれより多い様式にて挙動する抗原結合領域であるか、又は、を含んでよい。

発明は、単離された核酸配列にも関し、各々はＣＤ３８のエピトープに特異的なヒトの
抗体又はその機能性断片の抗原結合領域をコードし得る。そのような核酸配列は、抗体の
可変重鎖をコードし、そして配列番号：１、２、３、又は４からなる群から選択される配
列又は配列番号：１、２、３、又は４の相補鎖に対してストリンジェント条件下でハイブ
リダイズする核酸配列を含んでよい。当該核酸配列は、単離された抗体又はその機能性断
片の可変軽鎖をコードするかもしれず、そして配列番号：９、１０、１１、又は１２から
なる群から選択される配列又は配列番号：９、１０、１１、又は１２の相補鎖に対してス
トリンジェント条件下でハイブリダイズする核酸配列を含んでよい。

発明の核酸は、組換え生産に適している。即ち、発明は、発明の核酸配列を含むベクタ
ー及び宿主細胞にも関する。
発明の組成物は、治療用又は予防用の応用のために使用してよい。発明は、よって、発
明の抗体（又は機能性断片）とそのための薬学上受容可能な担体又は賦形剤を含む薬学組
成物を含む。関連する側面において、発明は、ＣＤ３８又はＣＤ３８発現細胞の不所望の
存在に関連した障害又は症状を治療するための方法を提供する。そのような方法は、本明
細書にて記載されたか又は意図されたような、発明の抗体を含む薬学組成物を有効な量に
てその必要のある被験者に投与する工程を含む。

発明は、直鎖状又はコンフォメーショナルな形態の何れかのＣＤ３８の単離されたエピ
トープ、及び抗体又はその機能性断片の単離のためのそれらの用途に関し、抗体断片のそ
の抗体は上記エピトープに特異的な抗原結合領域を含む。この点に関して、直鎖状エピト
ープはＣＤ３８のアミノ酸残基１９２−２０６を含んでよく、コンフォメーショナルエピ
トープはＣＤ３８のアミノ酸４４−６６、８２−９４、１４２−１５４、１４８−１６４
、１５８−１７０、１９２−２０６及び２０２−２２４からなる群から選択される一つ又
はそれより多いアミノ酸残基を含んでよい。ＣＤ３８のエピトープは、例えば、抗体又は
その機能性断片の単離のために使用することができ（それら抗体又は機能性断片の各々は
そのようなエピトープに特異的な抗原結合領域を含む）、ＣＤ３８の上記エピトープを抗
体ライブラリーと接触させ、そして当該抗体（類）又はその機能性断片（類）を単離する
工程を含む。

別の態様において、発明はＣＤ３８の単離されたエピトープを提供し、ＣＤ３８のアミ
ノ酸４４−６６、８２−９４、１４２−１５４、１４８−１６４、１５８−１７０、１９
２−２０６及び２０２−２２４からなる群から選択されるアミノ酸配列から本質的になる
。本明細書にて使用されるとおり、そのようなエピトープは、付加的な特徴がエピトープ
の基本的且つ新規な特性に物質的に（materially）影響しないならば、直前のアミノ酸配
列プラス付加的特徴の一つから「本質的になる（consists essentially of）」。

また別の態様において、発明は、ＣＤ３８のアミノ酸４４−６６、８２−９４、１４２
−１５４、１４８−１６４、１５８−１７０、１９２−２０６及び２０２−２２４からな
る群から選択されるアミノ酸配列からなるＣＤ３８の単離されたエピトープを提供する。

発明は、（ｉ）アミノ酸４４−６６、８２−９４、１４２−１５４、１４８−１６４、
１５８−１７０、１９２−２０６及び２０２−２２４のリストに由来する一つ又はそれよ
り多いアミノ酸ストレッチを含むＣＤ３８の単離されたエピトープ；（ｉｉ）抗体ライブ
ラリー；及び（ｉｉｉ）そのようなエピトープに特異的に結合するそのようなライブラリ
ーの一つ又はそれより多いメンバーを単離するために抗体ライブラリーを使用するための
指示書を含むキットも提供する。

図１ａは、様々な新規抗体可変重鎖領域の核酸配列を提供する。 図１ｂは、様々な新規抗体可変重鎖領域のアミノ酸配列を提供する。ＣＤＲ領域ＨＣＤＲ１，ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を太字でＮ−からＣ−末端へ示す。 図２ａは、様々な新規抗体可変軽鎖領域の核酸配列を提供する。 図２ｂは、様々な新規抗体可変軽鎖領域のアミノ酸配列を提供する。ＣＤＲ領域ＬＣＤＲ１，ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を太字でＮ−からＣ−末端へ示す。 図３は、様々な、コンセンサスに基づいたＨｕＣＡＬ抗体マスター遺伝子配列の可変重鎖領域のアミノ酸配列を提供する。ＣＤＲ領域ＨＣＤＲ１，ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を太字でＮ−からＣ−末端へ示す。 図４は、様々な、コンセンサスに基づいたＨｕＣＡＬ抗体マスター遺伝子配列の可変軽鎖領域のアミノ酸配列を提供する。ＣＤＲ領域ＬＣＤＲ１，ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を太字でＮ−からＣ−末端へ示す。 図５は、ＣＤ３８のアミノ酸配列を提供する（ＳＷＩＳＳ−ＰＬＯＴ一次アクセション番号Ｐ２８９０７）。 図６は、キメラＯＫＴ１０の重及び軽鎖のヌクレオチド配列を提供する。 図６は、キメラＯＫＴ１０の重及び軽鎖のヌクレオチド配列を提供する。 図７は、本発明の代表的な抗体のエピトープの模式的外観を提供する。 図８は、ｐＭＯＲＰＨ（登録商標）＿ｈ＿ＩｇＧ１＿１（ｂｐ６０１−２１００）（配列番号：３２）のＤＮＡ配列を提供する。当該ベクターはｐｃＤＮＡ３．１＋ベクター（インビトロジェン）に基づく。ＶＨ−スタッファー配列のアミノ酸配列を太字で示すが、ＶＨ−リーダー配列と定常領域の遺伝子の最後のリーディングフレームは非太字でプリントする。制限部位を配列の上に示す。配列決定プライマーのプライミング部位に下線を付す。 図８は、ｐＭＯＲＰＨ（登録商標）＿ｈ＿ＩｇＧ１＿１（ｂｐ６０１−２１００）（配列番号：３２）のＤＮＡ配列を提供する。当該ベクターはｐｃＤＮＡ３．１＋ベクター（インビトロジェン）に基づく。ＶＨ−スタッファー配列のアミノ酸配列を太字で示すが、ＶＨ−リーダー配列と定常領域の遺伝子の最後のリーディングフレームは非太字でプリントする。制限部位を配列の上に示す。配列決定プライマーのプライミング部位に下線を付す。 図８は、ｐＭＯＲＰＨ（登録商標）＿ｈ＿ＩｇＧ１＿１（ｂｐ６０１−２１００）（配列番号：３２）のＤＮＡ配列を提供する。当該ベクターはｐｃＤＮＡ３．１＋ベクター（インビトロジェン）に基づく。ＶＨ−スタッファー配列のアミノ酸配列を太字で示すが、ＶＨ−リーダー配列と定常領域の遺伝子の最後のリーディングフレームは非太字でプリントする。制限部位を配列の上に示す。配列決定プライマーのプライミング部位に下線を付す。 図９は、Ｉｇカッパ軽鎖発現ベクターｐＭＯＲＰＨ（登録商標）＿ｈ＿Ｉｇκ＿１（ｂｐ６０１−１４００）（配列番号：３３）のＤＮＡ配列を提供する。当該ベクターはｐｃＤＮＡ３．１＋ベクター（インビトロジェン）に基づく。Ｖκ−スタッファー配列のアミノ酸配列を太字で示すが、Ｖκ−リーダー配列と定常領域の遺伝子の最後のリーディングフレームは非太字でプリントする。制限部位を配列の上に示す。配列決定プライマーのプライミング部位に下線を付す。 図９は、Ｉｇカッパ軽鎖発現ベクターｐＭＯＲＰＨ（登録商標）＿ｈ＿Ｉｇκ＿１（ｂｐ６０１−１４００）（配列番号：３３）のＤＮＡ配列を提供する。当該ベクターはｐｃＤＮＡ３．１＋ベクター（インビトロジェン）に基づく。Ｖκ−スタッファー配列のアミノ酸配列を太字で示すが、Ｖκ−リーダー配列と定常領域の遺伝子の最後のリーディングフレームは非太字でプリントする。制限部位を配列の上に示す。配列決定プライマーのプライミング部位に下線を付す。 図１０は、ＨｕＣＡＬ Ｉｇラムダ軽鎖発現ベクターｐＭＯＲＰＨ（登録商標）＿ｈ＿Ｉｇλ＿１（ｂｐ６０１−１４００）（配列番号：３４）のＤＮＡ配列を提供する。Ｖλ−スタッファー配列のアミノ酸配列を太字で示すが、Ｖλ−リーダー配列と定常領域の遺伝子の最後のリーディングフレームは非太字でプリントする。制限部位を配列の上に示す。配列決定プライマーのプライミング部位に下線を付す。 図１０は、ＨｕＣＡＬ Ｉｇラムダ軽鎖発現ベクターｐＭＯＲＰＨ（登録商標）＿ｈ＿Ｉｇλ＿１（ｂｐ６０１−１４００）（配列番号：３４）のＤＮＡ配列を提供する。Ｖλ−スタッファー配列のアミノ酸配列を太字で示すが、Ｖλ−リーダー配列と定常領域の遺伝子の最後のリーディングフレームは非太字でプリントする。制限部位を配列の上に示す。配列決定プライマーのプライミング部位に下線を付す。 図１１は、増殖アッセイの結果を示す：６人の別々の健康なドナーからのＰＢＭＣｓ（個々の点により示されるとおり）を、３日間、ＨｕＣＡＬ（登録商標）抗体Ｍａｂ＃１（＝ＭＯＲ０３０７７），Ｍａｂ＃２（＝ＭＯＲ０３０７９）及びＭａｂ＃３（＝ＭＯＲ０３０８０）、参照抗体ｃｈＯＫＴ１０，アゴニスト（ａｇ．）対照ＩＢ４，無関係なＨｕＣＡＬ（登録商標）陰性対照ＩｇＧ１（ＮＣ）及びＩＢ４に関する適合したアイソタイプ対照のマウスＩｇＧ２ａ（Ｉｓｏ）の存在下で培養した。 図１２は、ＩＬ−６放出アッセイの結果を提供する：４−８人の健康なドナーからのＰＢＭＣｓ（個々の点により示されるとおり）を、２４時間、ＨｕＣＡＬ（登録商標）抗体Ｍａｂ＃１（＝ＭＯＲ０３０７７），Ｍａｂ＃２（＝ＭＯＲ０３０７９）及びＭａｂ＃３（＝ＭＯＲ０３０８０）、参照抗体ｃｈＯＫＴ１０，アゴニスト（ａｇ．）対照ＩＢ４，無関係なＨｕＣＡＬ（登録商標）陰性対照（ＮＣ）及び培地のみ（培地）の存在下で培養した。相対光ユニット（ＲＬＵ）におけるＩＬ−６含有量を、培養上清から、化学発光に基づくＥＬＩＳＡにより分析した。 図１３は、ＣＤ３４＋／ＣＤ３８−前駆細胞に対する細胞障害性についてのデータを提供する：自己ＣＤ３４＋／ＣＤ３８−前駆細胞を有する健康なドナーからのＰＢＭＣｓを、ＨｕＣＡＬ（登録商標）Ｍａｂ＃１（＝ＭＯＲ０３０７７），Ｍａｂ＃２（＝ＭＯＲ０３０７９）及びＭａｂ＃３（＝ＭＯＲ０３０８０）、陽性対照（ＰＣ＝ｃｈＯＫＴ１０）及び無関係なＨｕＣＡＬ（登録商標）陰性対照と、４時間、それぞれインキュベートした後に、細胞懸濁液を馴化されたメチル−セルロース培地と混合して、２週間インキュベートした。赤血球バースト形成ユニット（ＢＦＵ−Ｅ；パネルＢ）及び顆粒球／赤血球／マクロファージ／巨核球幹細胞（ＣＦＵ−ＧＥＭＭ；パネルＢ）及び顆粒球／マクロファージ幹細胞（ＣＦＵ−ＧＭ；パネルＣ）由来のコロニー形成ユニット（ＣＦＵ）を計数し、そして培地対照（「なし」は培地）に対して標準化した。パネルＡは、全ての前駆細胞に関してのＣＦＵの全数（全ＣＦＵｓ）を表す。少なくとも１０人の異なるＰＢＭＣドナーからの平均値を与える。エラーバーは平均値の標準誤差を表す。 図１４は、異なる細胞系によるＡＤＣＣについてのデータを提供する：［ａ：単一測定（ＲＰＭＩ８２２６を除く；４つの個別のアッセイからの平均）；Ｅ．Ｔ−比：３０：１］［ｂ：Ｎａｍｂａ ｅｔ ａｌ．，１９８９］［ｃ：５μｇ／ｍｌが抗体濃度に関して使用された（０．１μｇ／ｍｌのラジを除く）］［ｄ：ＣＤ３８−発現特異的殺傷［％］の刺激に関するレチノインアッセイの追加＝［（実験殺傷（exp．killing）−中度の殺傷（medium killing））／（１−中度の殺傷（medium killing））］＊１００］ ＰＣ：陽性対照（＝ｃｈＯＫＴ１０） ＭＭ：多発性骨髄腫 ＣＬＬ：慢性Ｂ細胞白血病 ＡＬＬ：急性リンパ芽球性白血病 ＡＭＬ：急性骨髄性白血病 ＤＳＭＺ：Ｄｅｕｔｓｃｈ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｆｕｒ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ ＡＴＣＣ：アメリカンタイプカルチャーコレクション ＥＣＡＣＣ：ヨーロピアンコレクションオブセルカルチャー ＭＦＩ：平均蛍光強度。 図１５は、ＭＭ−サンプルによるＡＤＣＣについてのデータを提供する：ａ：２−４の個別の分析。 図１６は、ヒト骨髄腫異種移植片（xenograft）のＭＯＲ０３０８０による処置後の平均腫瘍容量の実験結果を提供する：群１：媒質；群２：２日目ごとにｈＩｇＧ１ １ｍｇ／ｋｇ３２−６８日としてＭＯＲ０３０８０；群３：２日目ごとにｈＩｇＧ１ ５ｍｇ／ｋｇ３２−６８日としてＭＯＲ０３０８０；群４：２日目ごとにｃｈＩｇＧ２ａ ５ｍｇ／ｋｇ３２−６８日としてＭＯＲ０３０８０；群５：２日目ごとにｈＩｇＧ１ １ｍｇ／ｋｇ１４−３６日としてＭＯＲ０３０８０；群６：非処置。

本発明は、ＣＤ３８に特異的であるか又は高い親和性を有し、且つ被験者に対して治療
上の利益を伝える（deliver）ことのできる新規抗体の発見に基づく。発明の抗体は、ヒ
トの抗体であるか又はヒト化された抗体であってよく、多くのコンテクストにおいて使用
可能であって、本明細書においてより完全に記載される。

「ヒト」抗体又は機能性ヒト抗体断片は、ここでは、キメラではなく（例えば「ヒト化
」されていなく）そして非ヒト種由来ではない（全体又は一部）ものとして規定する。ヒ
ト抗体又は機能性ヒト抗体断片はヒトに由来し得るか又は合成ヒト抗体であり得る。「合
成ヒト抗体」は、本明細書においては、全体又は一部が、インシリコにて、公知のヒト抗
体配列の分析に基づいた合成配列に由来する配列を有する抗体として規定される。ヒト抗
体又はその断片のインシリコデザインは、例えば、ヒト抗体又は抗体断片配列のデータベ
ースを分析し、そしてそこから得られたデータを利用してポリペプチド配列を工夫する（
devising）ことにより達成することができる。ヒト抗体又は機能性抗体断片の別の例は、
ヒト起源の抗体配列のライブラリーから単離された核酸によりコードされるものである（
即ち、そのようなライブラリーはヒト天然源由来の抗体に基づく）。

「ヒト化された抗体」又は機能性ヒト化抗体断片は、本明細書においては、（ｉ）非ヒ
ト源に由来し（例えば異種免疫系を生むトランスジェニックマウス）、ヒト生殖細胞に基
づくか、（ｉｉ）キメラであって、但し、可変領域が非ヒト起源に由来して、定常ドメイ
ンがヒト起源に由来するか、又は（ｉｉｉ）ＣＤＲ−グラフト化されており、但し、可変
ドメインのＣＤＲｓが非ヒト起源由来であって、可変ドメインの一つ又はそれより多いフ
レームワークがヒト起源であって、定常ドメイン（もしあるなら）がヒト起源であるもの
として規定される。

本明細書において使用されるとおり、抗体は、もしそのような抗体がそのような抗原と
一つ又はそれより多い参照抗原の間を識別できるなら、結合特異性は絶対的ではないが相
対的な特性であるから、抗原（ここではＣＤ３８）「に特異的に結合する」か、「に対し
て／関して特異的である」か、又は「を特異的に認識する」。そのもっとも一般的な形態
において（そして規定されていない参照に言及する場合）、「特異的結合」は、例えば、
以下の方法の一つに従い測定されるとおり、目的の抗原と関連のない抗原の間を識別する
抗体の能力を意味する。そのような方法は、限定ではないが、ウエスタンブロット、ＥＬ
ＩＳＡ−，ＲＩＡ−ＥＣＬ−ＩＲＭＡ−試験及びペプチドスキャンを含む。例えば、標準
ＥＬＩＳＡアッセイを実施することができる。スコアリングは標準発色の現像により実施
してよい（例えば、ホースラディッシュパーオキシドと二次抗体及び過酸化水素とテトラ
メチルベンジジン）。特定のウエル中の反応が光学密度により、例えば４５０ｎｍにおい
てスコアされる。一般的なバックグラウンド（＝陰性反応）は、０．１ ＯＤであってよ
く；一般的な陽性反応は１ ＯＤであってよい。これは、陽性／陰性の差異が１０倍より
大きくなり得ることを意味する。一般的には、結合特異性の測定を単一の参照抗原ではな
く約３から５の非関連抗原、例えば、ミルク粉末、ＢＳＡ、トランスフェリン等のセット
を用いることにより実施する。

しかしながら、「特異的に結合する」は、標的抗原と、一つ又はそれより多い密接に関
連した抗原の間を識別できる抗体の能力を意味してよく、それは、例えばＣＤ３８とＣＤ
１５７の間の参照点（reference points）として使用される。さらに、「特異的結合」は
、その標的抗原の別の部分、例えば、ＣＤ３８の別のドメイン又は領域、例えばＣＤ３８
のＮ末端又はＣ末端中のエピトープ間を識別するか又はＣＤ３８の一つ又はそれより多い
キーとなるアミノ酸残基又はアミノ酸残基のストレッチの間を識別する、抗体の能力に関
連づけてよい。

また、本明細書において使用されるとおり、「イムノグロブリン」（Ｉｇ）は、ここで
は、クラスＩｇＧ，ＩｇＭ，ＩｇＥ，ＩｇＡ，又はＩｇＤ（又はそれらのあらゆるサブク
ラス）に属する蛋白質として規定され、そしてあらゆる慣用の公知の抗体及びそれらの機
能性断片を含む。抗体／イムノグロブリンの「機能性断片」は、ここでは、抗原結合領域
を保持した抗体／イムノグロブリンの断片（例えば、ＩｇＧの可変領域）として規定され
る。抗体の「抗原結合領域」は、抗体の一つ又はそれより多い高可変領域、即ち、ＣＤＲ
−１，−２及び／又は−３中に見いだされる；しかしながら、可変「フレームワーク」領
域は、例えばＣＤＲｓに関して足場を提供することにより抗原結合において重要な役割を
担うこともできる。好ましくは、「抗原結合領域」は、少なくともアミノ酸残基４から１
０３の可変軽（ＶＬ）鎖及び５から１０９の可変重（ＶＨ）鎖を含み、より好ましくはア
ミノ酸残基３から１０７のＶＬ及び４から１１１のＶＨ３を含み、そして特に好ましくは
完全なＶＬ及びＶＨ鎖（アミノ酸位置１から１０９のＶＬ及び１から１１３のＶＨ；ＷＯ
９７／０８３２０に従うナバリング）を含む。本発明における使用のためのイムノグロブ
リンの好ましいクラスは、ＩｇＧである。発明の「機能性断片」は、Ｆ（ａｂ’）_２断片
、Ｆａｂ断片及びｓｃＦｖのドメインを含む。Ｆ（ａｂ’）_２又はＦａｂは、Ｃ_Ｈ１とＣ
_Ｌドメインの間に生ずる分子間ジスルフィド相互作用を最少にするか又は完全に除去する
ために操作されてよい。

発明の抗体は、インシリコにおいてデザインされて合成により創製された核酸によりコ
ードされたアミノ酸配列に基づいた組換え抗体ライブラリーに由来してよい。抗体配列の
インシリコデザインは、例えば、ヒトの配列のデータベースを分析して、それから得られ
るデータを利用してポリペプチド配列を工夫することにより、達成することができる。イ
ンシリコ創製配列をデザインして得るための方法は、例えば、Ｋｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２０００）２９６：５７；Ｋｒｅｂｓ ｅｔ ａｌ．，
Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．（２００１）２５４：６７及びＫｎａｐｐｉｋらに発
行された米国特許第６，３００，０６４号に記載されており、それらの全体を引用により
本明細書に編入する。
発明の抗体
この書類を通して、以下の代表的な発明の抗体を参照する：「抗体番号」又は「ＬＡＣ
Ｓ」又は「ＭＯＲ」３０７７，３０７９，３０８０及び３１００。ＬＡＣ３０７７は、配
列番号：１（ＤＮＡ）／配列番号：５（蛋白質）に相当する可変重鎖領域及び配列番号：
９（ＤＮＡ）／配列番号：１３（蛋白質）に相当する可変軽鎖領域を有する抗体を表す。
ＬＡＣ３０７９は、配列番号：２（ＤＮＡ）／配列番号：６（蛋白質）に相当する可変重
鎖領域及び配列番号：１０（ＤＮＡ）／配列番号：１４（蛋白質）に相当する可変軽鎖領
域を有する抗体を表す。ＬＡＣ３０８０は、配列番号：３（ＤＮＡ）／配列番号：７（蛋
白質）に相当する可変重鎖領域及び配列番号：１１（ＤＮＡ）／配列番号：１５（蛋白質
）に相当する可変軽鎖領域を有する抗体を表す。ＬＡＣ３１００は、配列番号：４（ＤＮ
Ａ）／配列番号：８（蛋白質）に相当する可変重鎖領域及び配列番号：１２（ＤＮＡ）／
配列番号：１６（蛋白質）に相当する可変軽鎖領域を有する抗体を表す。

一つの側面において、発明は、ＣＤ３８の一つ又はそれより多い領域に対して特異的に
結合するか、又は、に関して高い親和性を有する抗原結合領域を有する抗体を提供するが
、そのアミノ酸配列は配列番号：２２に示される。親和性測定値が少なくとも１００ｎＭ
（Ｆａｂ断片の一価親和性）であるなら、抗体は抗原に関して「高い親和性」を有すると
いう。発明の抗体又は抗原結合領域は、好ましくは、ＣＤ３８に対して約１００ｎＭより
も小さい、より好ましくは約６０ｎＭよりも小さい、そしてさらにより好ましくは約３０
ｎＭよりも小さい親和性をもって結合できる。さらに好ましくは、約１０ｎＭよりも小さ
い、そしてより好ましくは約３ｎＭよりも小さい親和性をもってＣＤ３８に結合する抗体
である。例えば、発明の抗体のＣＤ３８に対する親和性は、約１０．０ｎＭ又は２．４ｎ
Ｍであってよい（Ｆａｂ断片の一価親和性）。

表１は、表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ）及びＦＡＣＳスキャッチャード分析に
より測定された、発明の代表的な抗体の親和性の要約である。

表１に関して、ＬＡＣｓ３０７７，３０７９，３０８０及び３１００を、固定化された
組換えＣＤ３８上の表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ）により、そしてＣＤ３８を発
現するヒトＲＰＭＩ８２２６細胞系を利用してフローサイトメトリー法により測定した。
Ｂｉａｃｏｒｅの研究は、直接固定化された抗原（ＣＤ３８−Ｆｃ融合蛋白質）上で実施
した。ＬＡＣｓ３０７７，３０７９，３０８０及び３１００のＦａｂフォーマットは、固
定化されたＣＤ３８−Ｆｃ融合蛋白質上で約２．４から５６ｎＭの間の一価親和性を呈し
、ＬＡＣ３０７９がもっとも高い親和性を示し、Ｆａｂｓ３１００，３０８０及び３０７
７が続いた。

ＩｇＧ１フォーマットを細胞に基づく親和性測定（ＦＡＣＳスキャッチャード）のため
に用いた。表１の右のカラムは、このフォーマット中のＬＡＣＳの結合強度を示す。ＬＡ
Ｃ３０８０はもっとも強い結合を示し、ＬＡＣＳ３０７９と３０７７よりもわずかに強い
。

発明の好ましい抗体の別の好ましい特徴は、ＣＤ３８のＮ−末端領域内のエリアに対す
るそれらの特異性である。例えば、発明のＬＡＣｓ３０７７，３０７９，３０８０，及び
３１００は、ＣＤ３８のＮ−末端領域に対して特異的に結合することができる。

発明の抗体が結合するエピトープの種類は、直鎖状（即ち、アミノ酸の一つの連続する
ストレッチ）又はコンフォメーショナル（即ち、アミノ酸の複数のストレッチ）であって
よい。特定の抗体のエピトープが直鎖状であるかコンフォメーショナルであるのかを決定
するためには、熟練した研究者はＣＤ３８の異なるドメインをカバーするオーバーラップ
するペプチド（例えば、１１のアミノ酸のオーバーラップを伴う１３マーペプチド）への
抗体の結合を分析することができる。この分析を用いて、発明者らは、ＬＡＣＳ３０７７
，３０８０及び３１００がＣＤ３８のＮ−末端の不連続なエピトープを認識することを発
見したが、ＬＡＣ３０７９のエピトープは直鎖状として記載することができる（図７を参
照）。本明細書における知見を組み合わせると、熟練した研究者は、上記エピトープに特
異的な抗原結合領域を有する抗体を生産するためにＣＤ３８の一つ又はそれより多い単離
されたエピトープを如何にして使用するのかを知ることになる（例えば、ＣＤ３８のエピ
トープの合成ペプチド又はＣＤ３８のエピトープを発現する細胞を用いて）。

発明の抗体は、ヒト、及び齧歯類種又は非ヒト霊長類であってよい少なくとも一つの他
の種と、種交差反応性である。非ヒト霊長類は、アカゲザル（rhesus）、ヒヒ及び／又は
カニクイザル（cynomolgus）であり得る。齧歯類種は、マウス、ラット及び／又はハムス
ターであり得る。少なくとも一つの齧歯類種と交差反応性である抗体は、例えば、同じ抗
体を用いて複数の種においてインビボ研究を実施するために、公知の抗−ＣＤ３８抗体を
超えた多大な柔軟性及び利益を提供することができる。

好ましくは、発明の抗体は、ＣＤ３８に結合できるばかりか、ＣＤ３８を発現する細胞
の殺傷を媒介することもできる。より特定すれば、発明の抗体は、抗体−エフェクター機
能により、ＣＤ３８−陽性（例えば、悪性腫瘍）を枯渇させることによりその治療効果を
媒介することができる。これらの機能は、抗体依存性細胞性細胞障害性（ＡＤＣＣ）及び
補体依存性細胞障害性（ＣＤＣ）を含む。

表２は、ＡＤＣＣとＣＤＣ両方における発明の代表的な抗体のＥＣ５０値の測定の要約
を提供する。

ＣＤ３８発現は、しかしながら、骨髄（例えば、単球、顆粒球）及びリンパ球系（例え
ば、活性化されたＢ及びＴ細胞；血漿細胞）内の免疫細胞中に見いだされるのみならず、
各前駆体細胞においても見いだされる。それらの細胞は悪性腫瘍細胞の抗体媒介性殺傷に
より影響されないことは重要であるから、本発明の抗体は前駆体細胞に対して障害性でな
いことが好ましい。

環状ＡＤＰ−リボースサイクラーゼ及びヒドロラーゼのようなその触媒活性に加えて、
生物学上の関連性（relevance）のシグナルを変換する能力をＣＤ３８は示す（Ｈｏｓｈ
ｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，１９９７；Ａｕｓｉｅｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，２０００）。それ
らの機能は、インビボにおいて、例えば受容体リガンド相互作用によるか、又はアゴニス
ト性の抗−ＣＤ３８抗体との交差結合により導入することができ、例えば、カルシウム移
動、リンパ球増殖及びサイトカインの放出を導く。好ましくは、本発明の抗体は、非アゴ
ニスト性抗体である。
ペプチドバリアント
発明の抗体は、本明細書において提供される特定のペプチド配列に限定されない。むし
ろ、発明は、これらのポリペプチドのバリアントをも組み入れる。本開示及び慣用的に利
用可能な技術並びに参考文献（reference）に関して、熟練した研究者は、本明細書にお
いて開示された抗体の機能性バリアントを用意し、試験し、そして利用することが可能に
なり、同時に、ＣＤ３８＋標的細胞の殺傷を媒介する能力を有するバリアントが本発明の
範囲に入ることを認める。このコンテクストにおいて使用される「ＣＤ３８＋標的細胞を
殺傷することを媒介する能力」は、発明の抗−ＣＤ３８抗体に帰する機能的特性を意味す
る。ＣＤ３８＋標的細胞を殺傷することを媒介する能力は、即ち、ＡＤＣＣ及び／又はＣ
ＤＣにより、又は発明の抗体にコンジュゲートされたトキシン（toxin）構築物により、
ＣＤ３８＋標的細胞の殺傷を媒介する能力を含む。

バリアントは、例えば、本明細書において開示されるペプチド配列に関して、少なくと
も一つの変更された相補性決定領域（ＣＤＲ）（高感受性）及び／又はフレームワーク（
ＦＲ）（可変）ドメイン／位置を有する抗体を含み得る。このコンセプトを良好に例示す
るため、抗体構造の簡単な記載が次に来る。

抗体は２つのペプチド鎖からなり、各々が１つ（軽鎖）又は３つ（重鎖）の定常ドメイ
ン及び可変領域（ＶＬ，ＶＨ）を含み、後者は各場合において４つのＦＲ領域と３つの空
間を満たすＣＤＲｓから構成される。抗原結合部位は、一つ又はそれより多いＣＤＲｓに
より形成され、ＦＲ領域はＣＤＲｓに関する構造的フレームワークを提供し、よって、抗
原結合において重要な役割を担う。ＣＤＲ又はＦＲ領域中の一つ又はそれより多いアミノ
酸残基を変更することにより、熟練した研究者は変異したか又は多様化された抗体配列を
生じさせることができ、例えば、新規又は改良された特性に関して、抗原に対してスクリ
ーンすることができる。

表３ａ（ＶＨ）及び３ｂ（ＶＬ）は発明の特定の抗体のためのＣＤＲ及びＦＲ領域を描
写し、そして所定の位置での互いのアミノ酸及び対応するコンセンサス又は「マスター遺
伝子」配列に関して比較する（米国特許第６，３００，０６４号に記載されるとおり）。

熟練した研究者は、表３ａ及び３ｂ中のデータを本発明の範囲内のペプチドバリアント
をデザインするために使用することができる。一つ又はそれより多いＣＤＲ領域内のアミ
ノ酸を変化させることによりバリアントを構築することが好ましい；バリアントは一つ又
はそれより多くの変更されたフレームワーク領域も有するかもしれない。新規な抗体の互
いの比較に関しては、変化させることのできる候補残基は、例えば、ＬＡＣｓ３０８０及
び３０７７の可変軽鎖の残基４又は３７及び例えば可変重鎖の残基１３又は４３を含むが
、これらが互いに向かい合った変化（variance）の位置だからである。変更はフレームワ
ーク領域内で起こしてもよい。例えば、ペプチドＦＲドメインは、生殖系の配列に比較し
て残基中に偏差が存在するように変更されるかもしれない。

対応するコンセンサス又は「マスター遺伝子」配列に対する新規抗体の比較に関して、
変化させることのできる候補残基は、例えば、ＶＬλ３に比べてＬＡＣ３０８０の可変軽
鎖の残基２７、５０又は９０を含み、そしてＶＨ３と比べてＬＡＣ３０８０の可変重鎖の
残基３３、５２又は９７を含む。代わるものとして、熟練した研究者は、本明細書におい
て開示されたアミノ酸配列をそのような抗体の同じクラスの公知配列に対して比較するこ
とにより同じ分析を行うことができ、例えば、Ｋｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，２０００
及びＫｎａｐｐｉｋらに対して発行された米国特許第６，３００，０６４号に記載された
手法を用いる。

さらに、ＬＡＣ中の一つ又はそれより多いアミノ酸残基、好ましくは一つ又はそれより
多いＣＤＲｓ中のアミノ酸残基を多様化させることにより、そして改善された特性を有す
るバリアントに関して抗体バリアントの結果的なコレクションをスクリーニングすること
により、最適化のための開始点として一つのＬＡＣを用いてバリアントを得てよい。特に
好ましいのは、ＶＬのＣＤＲ−３、ＶＨのＣＤＲ−３，ＶＬのＣＤＲ−１及び／又はＶＨ
のＣＤＲ−２中の一つ又はそれより多いアミノ酸残基の多様化である。多様化は、トリヌ
クレオチド（ＴＲＩＭ）技術を用いることによりＤＮＡ分子のコレクションを合成するこ
とにより行うことができる（Ｖｉｒｎｅｋａｓ，Ｂ．，Ｇｅ，Ｌ．，Ｐｌｕｃｋｔｈｕｍ
，Ａ．，Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ，Ｋ．Ｃ．，Ｗｅｌｌｎｈｏｆｅｒ，Ｇ．，ａｎｄ Ｍｏｒ
ｏｎｅｙ Ｓ．Ｅ．（１９９４）Ｔｒｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉ
ｄｉｔｅｓ：ｉｄｅａｌ ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏ
ｆ ｍｉｘｅｄ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｆｏｒ ｒａｎｄｏｍ ｍｕｔａ
ｇｅｎｅｓｉｓ．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２２，５６００）。
保存的アミノ酸バリアント
ポリペプチドバリアントは、本明細書に記載されている抗体ペプチド配列の全体分子構
造を保存するように作成してよい。個々のアミノ酸の特性を仮定すれば、いくつかの合理
的な置換が熟練した研究者には認識される。アミノ酸置換、即ち、「保存された置換」は
、例えば、含まれる残基の極性、電荷、溶解性、疎水性、親水性、及び／又は両親媒性の
性質における類似性を基にして作成してよい。

例えば、（ａ）非極性（疎水性）アミノ酸は、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バ
リン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、及びメチオニンを含む；（ｂ）極
性中性アミノ酸は、グリシン、セリン、スレオニン、システイン、チロシン、アスパラギ
ン、及びグルタミンを含む；（ｃ）陽性荷電した（塩基性）アミノ酸は、アルギニン、リ
ジン、及びヒスチジンを含む；（ｄ）陰性荷電した（酸性）アミノ酸は、アスパラギン酸
及びグルタミン酸を含む。置換は一般にグループ（ａ）−（ｄ）内でなされてよい。さら
に、グリシンとプロリンはαヘリックスを破壊するそれらの能力に基づいて互いに置換さ
れてよい。同様に、特定のアミノ酸、例えば、アラニン、システイン、ロイシン、メチオ
ニン、グルタミン酸、グルタミン、ヒスチジン及びリジンは、より一般的にαヘリックス
内に見いだされるが、バリン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトフ
ァン及びスレオニンは、より一般的にはβプリーツ（pleated）シート内に見いだされる
。グリシン、セリン、アスパラギン酸、アスパラギン、及びプロリンは一般的にターンの
中に見いだされる。いくつかの好ましい置換は、以下の群の間で行ってよい：（ｉ）Ｓと
Ｔ；（ｉｉ）ＰとＧ；（ｉｉｉ）Ａ，Ｖ，ＬとＩ。公知の遺伝コード、及び組換え並びに
合成ＤＮＡ技術を仮定すれば、熟練した研究者は、保存されたアミノ酸バリアントをコー
ドするＤＮＡｓを容易に構築することができる。一つの特定の例において、配列番号：５
、６、７及び／又は８の中のアミノ酸位置３はＱからＥに変更することができる。

本明細書にて使用される２つのポリペプチド配列間の「配列同一性」は、配列間で同一
のアミノ酸のパーセンテージを示す。「配列類似性」は、同一であるか又は保存的アミノ
酸置換を示すアミノ酸のパーセンテージを示す。発明の好ましいポリペプチド配列は、少
なくとも６０％、より好ましくは少なくとも７０％又は８０％、さらにより好ましくは少
なくとも９０％、そしてもっとも好ましくは少なくとも９５％のＣＤＲ領域中の配列同一
性を有する。好ましい抗体も、少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、そ
してもっとも好ましくは少なくとも９５％のＣＤＲ領域中の配列同一性を有する。
発明のＤＮＡ分子
本発明は、発明の抗体をコードするＤＮＡ分子にも関する。これらの配列は、限定では
ないが、図１ａ及び２ａに記載されたそれらＤＮＡ分子を含む。

発明のＤＮＡ分子は、本明細書にて開示された配列に限定されないが、それらのバリア
ントも含む。発明の範囲内のＤＮＡバリアントは、ハイブリダイゼーションにおけるそれ
らの物理的特性に関連して記載してよい。熟練した研究者は、ＤＮＡがその相補体を同定
するのに使用できることを認識するが、何故ならばＤＮＡが二重鎖であって、その均等物
又は類似体を核酸ハイブリダイゼーション技術を用いて同定することができる。ハイブリ
ダイゼーションは１００％相補性を下回っても起こり得ることも認識されるべきである。
しかしながら、条件の適切な選択により、ハイブリダイゼーション技術を用いることによ
り、特定のプラズモンに対するそれらの構造上の関連性に基づいてＤＮＡ配列間で区別す
ることができる。そのような条件に関するガイダンスに関しては、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅ
ｔ ａｌ．，１９８９（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．，Ｆｒｉｓｃｈ，Ｅ．Ｆ．ａｎｄ Ｍａ
ｎｉａｔｉｓ，Ｔ．（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＵＳＡ）及びＡｕｓｕｂｅ
ｌ ｅｔ ａｌ．，１９９５（Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．，Ｂｒｅｎｔ，Ｒ．，Ｋｉｎｇ
ｓｔｏｎ，Ｒ．Ｅ．，Ｍｏｏｒｅ，Ｄ．Ｄ．，Ｓｅｄｍａｎ，Ｊ．Ｇ．，Ｓｍｉｔｈ，Ｊ
．Ａ．，＆Ｓｔｒｕｈｌ，Ｋ．ｅｄｓ（１９９５）．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ
ｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｊｏｈｎ Ｗｉｌ
ｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ）を参照されたい。

２つのポリペプチド配列の間の構造類似性は、２つの配列が互いにハイブリダイズする
条件下の「ストリンジェンシー」の函数として表現することができる。本明細書にて使用
される用語「ストリンジェンシー」は、条件がハイブリダイゼーションを嫌う（disfavor
）範囲を意味する。ストリンジェント条件はハイブリダイゼーションを強く嫌い、そして
もっとも構造上関連したそのような条件下で互いにハイブリダイズする。反対に、非スト
リンジェント条件は、より低い程度の構造関連性を表す分子のハイブリダイゼーションを
好む。ハイブリダイゼーションストリンジェンシーは、よって、２つの核酸配列の構造的
関係に直接相関する。以下の関係はハイブリダイゼーションと関連性を相関させるのに有
用である（Ｔ_ｍは核酸二重鎖の融解温度である）：
ａ．Ｔ_ｍ＝６９．３＋０．４１（Ｇ＋Ｃ）％
ｂ．ミスマッチ塩基対の数の１％ごとの増加により二重鎖ＤＮＡのＴ_ｍは１℃低下する
。

ｃ．（Ｔ_ｍ）_μ２−（Ｔ_ｍ）_μｌ＝１８．５ｌｏｇ_１０μ２／μｌ（式中、μｌ及びμ
２は２つの溶液のイオン強度である）。
ハイブリダイゼーションストリンジェンシーは多数の係数（factors）の函数であり、
全ＤＮＡ濃度、イオン強度、温度、プローブサイズ、及び水素結合を破壊する薬剤の存在
を含む。ハイブリダイゼーションを促進させる係数は、高ＤＮＡ濃度、高いイオン強度、
低温、長いプローブサイズ及び水素結合を破壊する薬剤の不在を含む。ハイブリダイゼー
ションは、一般に、２つの相：「結合」相と「洗浄」相において実施される。

第１に、結合相においては、プローブをハイブリダイゼーションに適した条件下で標的
に結合させる。ストリンジェンシーは温度を変更することによりこの段階において通常は
制御される。高いストリンジェンシーに関しては、短い（＜２０ｎｔ）オリゴヌクレオチ
ドプローブを用いる場合以外は、温度は通常６５℃と７０℃の間である。代表的なハイブ
リダイゼーション溶液は、６ＸＳＳＣ，０．５％のＳＤＳ，５Ｘデンハルト溶液及び１０
０μｇの非特異的キャリアーＤＮＡを含む。Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，セクション
２．９、補遺２７（１９９４）を参照されたい。もちろん、多くの違い、さらに機能的な
均等物、バッファー条件が知られている。関連性の程度が低いなら、低温を選択してよい
。低ストリンジェンシー結合温度は約２５℃と４０℃の間である。中間のストリンジェン
シーは少なくとも約４０℃から約６５℃までである。高いストリンジェンシーは少なくと
も約６５℃である。

第２に、過剰なプローブを洗浄により除去する。この段階においては、よりストリンジ
ェントな条件を通常は適用する。よって、この「洗浄」段階がハイブリダイゼーションに
より関連性を決定するのに最も重要である。洗浄溶液は、一般には低塩濃度を含む。一つ
の例示的な中間ストリンジェンシー溶液は、２ＸＳＳＣと０．１％のＳＤＳを含む。高ス
トリンジェンシー洗浄溶液は、約０．２Ｘ未満のＳＳＣの均等物（イオン強度において）
を含み、好ましいストリンジェント溶液は約０．１ＸのＳＳＣを含む。様々なストリンジ
ェンシーに関連した温度は、「結合」に関して論じられるものと同じである。洗浄溶液は
、一般に、洗浄の間に何回も交換される。例えば、一般的な高ストリンジェンシー洗浄条
件は、５５℃において３０分間２回の洗浄及び６０℃において１５分間３回の洗浄を含む
。

従って、本発明は、高いストリンジェンシー結合及び洗浄の条件下で図１ａ及び２ａに
記載された分子にハイブリダイズする核酸分子を含むが、そのような核酸分子は、本明細
書にて記載された特性を有する抗体又はその機能性断片をコードする。好ましい分子（ｍ
ＲＮＡパースペクティブから）は、本明細書にて記載されたＤＮＡ分子の一つと少なくと
も７５％又は８０％（好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、
そしてもっとも好ましくは少なくとも９５％）の相同性又は配列同一性を有するものであ
る。発明のバリアントの一つの特定の例においては、配列番号：１、２、３及び／又は４
中の核酸位置７がＣからＧに置換されることにより、コドンをＣＡＡからＧＡＡに変化さ
せることができる。
機能上均等なバリアント
発明の範囲内のＤＮＡバリアントのまた別のクラスは、それらがコードする生成物に関
して記載されてよい（図１ｂ及び２ｂに掲載されるペプチドを参照）。これらの機能上均
等な遺伝子は、遺伝コードの縮重により図１ｂ及び２ｂに見いだされるのと同じペプチド
配列をコードするという事実により特徴付けされる。配列番号：１及び３１は機能上均等
なバリアントの例であり、同じポリペプチド、即ち配列番号：５をコードしながら、それ
らの核酸配列は異なる。

本明細書において提供されるＤＮＡ分子のバリアントは、いくつかの異なる様式にて構
築することができる。例えば、それらは完全に合成のＤＮＡとして構築してよい。２０か
ら約１５０ヌクレオチドの範囲のオリゴヌクレオチドを効率よく合成する方法は、広く利
用可能である。Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，セクション２．１１、補遺２１（１９９
３）を参照。Ｋｈｏｒａｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．７２：２０９−２
１７（１９７１）により最初に報告された様式にてオーバーラップするオリゴヌクレオチ
ドを合成し、そして集合させてよい；Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，前出、セクション
８．２も参照。合成ＤＮＡは、好ましくは、適切なベクターへのクローン化を促進させる
ために遺伝子の５’及び３’末端にて操作された便利な制限部位と共にデザインされる。

示されるとおり、バリアントを生成する方法は、本明細書に開示されたＤＮＡｓの一つ
により出発して、次に、部位特異的変異導入を実施することである。Ａｕｓｕｂｅｌ ｅ
ｔ ａｌ．，前出、８章、補遺３７（１９９７）を参照。一般的な方法においては、標的
ＤＮＡを一本鎖ＤＮＡバクテリオファージ媒体にクローン化する。一本鎖ＤＮＡを単離し
て所望のヌクレオチド変化を含むオリゴヌクレオチドとハイブリダイズさせる。相補鎖を
合成し、そして二本鎖ファージを宿主に導入する。結果の子孫のいくつかは所望の変異体
を含み、ＤＮＡ配列決定により確認することができる。さらに、子孫ファージが所望の変
異体になる確率を増加させる様々な方法が利用可能である。これらの方法は業界において
よく知られており、そのような変異体を生成するためのキットが市販されている。
組換えＤＮＡ構築物及び発現
本発明は、さらに、本発明のヌクレオチド配列を一つ又はそれより多く含む組換えＤＮ
Ａ構築物を提供する。本発明の組換え構築物は、発明の抗体をコードするＤＮＡ分子が挿
入されたベクター、例えばプラスミド又はウイルスベクターを伴って使用される。

コードされた遺伝子は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，１９８９，及びＡｕｓｕｂ
ｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９８９に記載された技術により生産してよい。あるいは、ＤＮＡ
配列を、例えば合成機を用いて化学合成してよい。例えば、ＯＬＩＧＯＮＵＣＬＥＯＴＩ
ＤＥ ＳＹＮＴＨＥＳＩＳ（１９８４，Ｇａｉｔ，編纂、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，オックス
フォード）に記載された技術を参照されたく、その全体を引用により本明細書に編入する
。発明の組換え構築物は、ＲＮＡ及び／又はコードされたＤＮＡ（ｓ）の蛋白質産物を発
現することができる発現ベクターと共に構成される。当該ベクターは、さらに、オープン
リーディングフレーム（ＯＲＦ）に作動可能に連結されたプロモーターを含む制御配列を
含んでよい。特定の開始シグナル及び細菌分泌シグナルも、挿入された標的遺伝子コーデ
ィング配列の効率よい翻訳に必要かもしれない。

本発明は、さらに、本発明のＤＮＡを少なくとも一つ含む宿主細胞を提供する。宿主細
胞は、発現ベクターが利用可能な如何なる細胞でも実質上はあり得る。例えば、それは高
等真核宿主細胞、例えば哺乳類細胞、下等真核宿主細胞、例えば酵母細胞であってよいが
、好ましくは、原核細胞、例えば細菌細胞である。組換え構築物の宿主細胞への導入は、
リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ，デキストラン媒介性トランスフェク
ション、エレクトロポレーション又はファージ感染により行うことができる。
細菌発現
適切な翻訳開始及び終結のシグナルと共に所望の蛋白質をコードする構造ＤＮＡ配列を
、機能性プロモーターにより作動可能なリーディングフェーズにて挿入することにより、
細菌のための有用な発現ベクターが構築される。当該ベクターは、ベクターの保守を保証
し、そして所望なら宿主内で増幅を提供するために、一つ又はそれより多い表現型選択可
能マーカー及び複製のオリジンを含むことになる。形質転換のための適切な原核宿主は、
エシェリヒアコリ、バチルスサチリス、サルモネラティフィミリウム及びシュードモナス
属、ストレプトミセス属及びスタフィロコッカス属の様々な種を含む。

細菌のベクターは、例えば、バクテリオファージ−、プラスミド−、又はファージミド
−に基づく。これらのベクターは、よく知られたクローニングベクターｐＢＲ３２２（Ａ
ＴＣＣ ２７０１７）の要素を一般的に含む市販のプラスミドに由来する、選択可能マー
カー及び細菌複製オリジンを含み得る。適切な宿主株の形質転換及び適切な細胞密度への
宿主株の成長の後は、選択されたプロモーターを適切な手段（例えば、温度シフト又は化
学誘導）により脱抑圧／誘導し、そして細胞を追加の期間培養する。細胞は一般的に遠心
分離により回収し、物理的又は化学的手段により破壊し、そして結果の粗抽出物をさらな
る精製のために維持する。

細菌システムにおいては、蛋白質が発現されるために意図された用途に依存して、多数
の発現ベクターを有利に選択してよい。例えば、そのような蛋白質を大量に生産する場合
、抗体の生成又はペプチドライブラリーのスクリーンのためには、例えば、容易に精製さ
れる高レベルの融合蛋白質生成物の発現を指示するベクターが望まれるかもしれない。
治療方法
治療方法は、発明により意図された抗体の治療上有効な量を治療の必要のある被験者に
投与することを含む。「治療上有効な」量は、単一用量にて又は複数用量養生法に従い、
単独で又は他の薬剤と共に被験者の処置エリアにおいてＣＤ３８陽性細胞を枯渇させ、有
害な症状（adverse condition）の緩和を導くのに十分な量であるが、毒物学上寛容の、
抗体の量として規定される。被験者は、ヒト又は非ヒト動物（例えば、ウサギ、ラット、
マウス、サル又は他の低い目（order）の霊長類）であってよい。

発明の抗体は公知の医薬と同時投与されてよく、いくつかの例において、抗体はそれ自
身修飾されてよい。例えば、抗体はイムノトキシン又はラジオアイソトープとコンジュゲ
ートされることにより、効能をさらに潜在的に増加させることができる。

発明の抗体は、ＣＤ３８が不所望に発現されるか又は見いだされる様々な状況において
治療用又は診断用のツールとして使用することができる。発明の抗体による処置に特に適
した障害及び症状は、多発性骨髄腫（ＭＭ）、及び他の血液疾患、例えば、慢性リンパ球
性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、及び
急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）である。発明の抗体は、慢性関節リウマチ（ＲＡ）又
は全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）のような炎症性疾患を治療するのにも使用されてよ
い。

前記の障害の何れかを治療するためには、本発明による使用のための薬学組成物を、一
つ又はそれより多い生理学上受容可能な担体又は賦形剤を用いて慣用の様式にて製剤化し
てよい。発明の抗体は、如何なる適切な手段によっても投与することができ、処置される
障害の種類により変化し得る。可能な投与経路は、非経口（例えば、筋肉内、静脈内、動
脈内、腹膜内、又は皮下）、肺内及び鼻内、及び局所性免疫抑圧性処置のために所望であ
れば、外傷内（intraleisonal）投与を含む。さらに、発明の抗体は、パルスインフュー
ジョンにより、例えば、低下させた用量の抗体と共に投与されてよい。投与される量は、
臨床上の兆候、個体の体重、他の薬剤を投与されているか等の様々な因子に依存すること
になる。当業者は、障害又は処置される症状に依存して投与経路が変更になることを認識
する。

この発明による新規なペプチドの治療上有効な量を決定することは、特定の患者の特徴
、投与の経路、及び処置される障害の性質に大きく依存する。一般的なガイダンスは、例
えば、インターナショナルコンファレンスオンハーモナイゼーションの刊行物及びＲＥＭ
ＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥ，２７章及び２８章
、ｐｐ．４８４−５２８（１８版、Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，編纂、Ｅａｓ
ｔｏｎ，Ｐａ．：Ｍａｃｋ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，１９９０）において見いだすことができる
。より特定すれば、治療上有効な量を決定することは、医薬の毒性及び有効性のような因
子に依存することになる。毒性は当業界でよく知られ、そして前記文献に見いだされる方
法を用いて決定してよい。有効性は以下の実施例に記載された方法と共に同じガイダンス
を利用して決定してよい。
診断方法
ＣＤ３８は特定の悪性腫瘍において造血細胞上に高度に発現される；即ち、発明の抗Ｃ
Ｄ３８抗体は、患者の中の悪性腫瘍の可能性のある蓄積の部位をイメージ化するか又は可
視化するために用いられる。この点に関して、抗体は、ラジオアイソトープ、親和性標識
（例えば、ビオチン、アビジン等）蛍光標識、常磁性体原子等の使用を通して検出可能に
標識され得る。そのような標識を達成するための手法は、当業界で知られている。診断イ
メージ化における抗体の臨床応用は、Ｇｒｏｓｓｍａｎ，Ｈ．Ｂ．Ｕｒｏｌ．Ｃｌｉｎ．
Ｎｏｒｔｈ Ａｍｅｒ．１３：４６５−４７４（１９８６）、Ｕｎｇｅｒ，Ｅ．Ｃ．ｅｔ
ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｒａｄｉｏｌ．２０：６９３−７００（１９８５）、及びＫｈ
ａｗ，Ｂ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２０９：２９５−２９７（１９８０）に
総説される。

そのような検出可能な標識された抗体の位置の検出は、例えば、腫瘍の発生の部位の指
標かもしれない。一つの態様において、この試験は、組織又は血液のサンプルを取り出し
、そしてそのようなサンプルを検出可能に標識された抗体の存在下でインキュベートする
ことにより実施される。好ましい態様において、この技術は、非侵入様式にて、磁気イメ
ージ化、フルオログラフィー、等の使用により実施される。そのような診断試験は、ＣＤ
３８陽性細胞が関連性指標である疾患の治療の成功を監視することにおいて使用してよい
。発明は、エクスビボセッティングにおける診断に関して本明細書において前に記載され
たとおりに、抗ＣＤ３８抗体の使用も意図する。
治療用及び診断用組成物
本発明の抗体は、薬学上有用な組成物を製造するための公知の方法に従い製造すること
ができ、その際、発明の抗体（そのあらゆる機能性断片を含む）は薬学上受容可能な担体
媒質との混合物中に混合される。適切な媒質及びそれらの製剤は、例えば、ＲＥＭＩＮＧ
ＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥ，２７章及び２８章、ｐｐ
．４８４−５２８（１８版、Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，編纂、Ｅａｓｔｏｎ
，Ｐａ．：Ｍａｃｋ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，１９９０）に記載される。有効な投与に適した薬
学上受容可能な組成物を形成させるためには、そのような組成物が適切な量の担体媒質と
共に本発明の抗体の一つ又はそれより多くを有効な量にて含むことになる。

調製物は、活性な化合物の制御された放出を提供するように製剤化されるのが適当であ
る。制御された放出は、抗ＣＤ３８抗体を複合体形成するか又は吸収するようなポリマー
の使用を通して達成してよい。制御された送達は、適切なマクロ分子（例えば、ポリエス
テル、ポリアミノ酸、ポリビニル、ピロリドン、エチレンビニル−アセテート、メチルセ
ルロース、カルボキシメチルセルロース、又はプロタミンスルフェート）及びマクロ分子
の濃度並びに放出を制御するための取り込み方法を選択することにより行ってよい。制御
された放出調製物による作用の期間を制御するための別の可能な方法は、抗ＣＤ３８抗体
をポリマー材料、例えば、ポリエステル、ポリアミノ酸、ヒドロゲル、ポリ（乳酸）又は
エチレンビニルアセテートコポリマーの粒子に取り込むことである。あるいは、これらの
薬剤をポリマー粒子に取り込む代わりに、コアセルベーション技術によるか又はインター
フェイシャルポリメリゼーション、例えば、ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンマ
イクロカプセル及びポリ（メチルケタクリレート）マイクロカプセル、各々、又はコロイ
ド薬剤送達システム、例えばリポソーム、アルブミンミクロスフェア、ミクロエマルジョ
ン、ナノ粒子、及びナノカプセル又はマクロエマルジョン中にて製造されたマイクロカプ
セル中にこれらの材料を封入することが可能である。そのような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔ
ｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９８０）に開示されて
いる。

上記化合物は、例えば、注射、例えば巨丸注射又は連続注入（infusion）により非経口
投与のために製剤化してよい。注射のための製剤化は、ユニット用量形態、例えば、アン
プル中、又は複数用量コンテナにおいて、付加された保存剤と共に提供してよい。上記組
成物は、懸濁液、溶液又はエマルジョンのような形態にて油性又は水性媒質中に取り込ま
れてよく、そして製剤化試薬、例えば、懸濁剤、安定化剤及び／又は分散剤を含んでよい
。あるいは、活性成分は、適切な媒質、例えば滅菌発熱物質不含水による使用前の構成化
（constitution）のために粉末形態であってよい。

上記組成物は、所望ならば、パック又はディスペンサー装置にて提供してよく、活性成
分を含む一つ又はそれより多いユニット用量形態を含んでよい。パックは、例えば、金属
又はプラスチックのフォイル、例えばブリスターパックを含んでよい。パック又はディス
ペンサー装置は、投与のための指示書を付随してよい。

発明は、さらに、以下の実施例を参照して理解されるが、例示のためであって、即ち発
明を限定するためではない。

細胞系
以下の細胞系は、ヨーロピアンコレクションオブセルカルチャー（ＥＣＡＣＣ）、ジャ
ーマンコレクションオブマイクロオーガニズムズ（ＤＳＭＺ）又はアメリカンタイプカル
チャーコレクション（ＡＴＣＣ）から得た：ＣＤ３８マウスＩｇＧモノクローナル抗体Ｏ
ＫＴ１０を産生するハイブリドーマ細胞系（ＥＣＡＣＣ，＃８７０２１９０３）、ジャー
カット細胞（ＤＳＭＺ，ＡＣＣ２８２）、ＬＰ−１（ＤＳＭＺ，ＡＣＣ４１），ＲＰＭＩ
８２２６（ＡＴＣＣ，ＣＣＬ−１５５），ＨＥＫ２９３（ＡＴＣＣ，ＣＲＬ−１５７３）
，ＣＨＯＫ１（ＡＴＣＣ，ＣＲＬ−６１）及びラジ（Ｒａｊｉ）（ＡＴＣＣ，ＣＣＬ−８
６）。
細胞及び培養条件
全ての細胞は３７℃及び５％ＣＯ_２にて湿潤発酵機中で標準化された条件下で培養した
。細胞系ＬＰ−１，ＲＰＭＩ８２２６，ジャーカット及びラジは、１０％ＦＣＳ（ＰＡＮ
バイオテックＧｍｂＨ，＃Ｐ３０−３３０２），５０Ｕ／ｍｌペニシリン、５０μｇ／ｍ
ｌストレプトマイシン（ギブコ、＃１５１４０−１２２）及び２ｍＭグルタミン（ギブコ
、＃２５０３０−０２４）を付加されたＲＰＭＩ１６４０（パンバイオテックＧｍｂＨ，
＃Ｐ０４−１６５００）内で培養したが、ジャーカット並びラジ細胞の場合にはさらに１
０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（パンバイオテックＧｍｂＨ，＃Ｐ０５−０１１００）及び１ｍＭピ
ルビン酸ナトリウム（パンバイオテックＧｍｂＨ，＃Ｐ０４−４３１００）を加えた。

ＣＨＯ−Ｋ１及びＨＥＫ２９３は、２ｍＭグルタミン及び１０％ＦＣＳを付加されたＤ
ＭＥＭ（ギブコ、＃１０９３８−０２５）内で生育させた。安定なＣＤ３８ ＣＨＯ−Ｋ
１トランスフェクト体を、Ｇ４１８（ＰＡＡ ＧｍｂＨ，Ｐ１１−０１２）の存在下で維
持し、ＨＥＫ２９３に関しては、１ｍＭピルビン酸ナトリウムの付加が必須であった。Ｈ
ＥＫ２９３の一過性トランスフェクションの後に、１０％のＦＣＳをウルトラ低ＩｇＧ
ＦＣＳ（インビトロジェン、＃１６２５０−０７８）で置き換えた。細胞系ＯＫＴ−１０
をＩＤＭＥＭ（ギブコ、＃３１９８０−０２２）中で培養したが、２ｍＭグルタミン及び
２０％ＦＣＳを付加した。
末梢血からの単一細胞懸濁液の調製
全血サンプルをインフォームドコンセントの後に採取した。末梢血単核球細胞（ＰＢＭ
Ｃ）をＨｉｓｔｏｐａｑｕｅ（登録商標）−１０７７（シグマ）により製造者の指示書に
従い健康なドナーから単離した。ＡＣＫ溶解バッファー（０．１５Ｍ ＮＨ_４Ｃｌ，１０
ｍＭ ＫＨＣＯ_３，０．１Ｍ ＥＤＴＡ）中での５分間の室温におけるインキュベーショ
ンによるか又は市販の誘導体中で（バイオサイエンス、＃００−４３３３）、赤血球細胞
をこれらの細胞懸濁液から枯渇させた。細胞を２回ＰＢＳにより洗浄し、そして次にフロ
ーサイトメトリー又はＡＤＣＣにより処理した（以下を参照）。
フローサイトメトリー（「ＦＡＣＳ」）
全染色を丸底９６ウエル培養プレート（Ｎａｌｇｅ Ｎｕｎｃ）中でウエルあたり２ｘ
１０^５細胞にて実施した。細胞を、Ｆａｂ及びＩｇＧ抗体と共に、示された濃度にて５０
μｌのＦＡＣＳバッファー（ＰＢＳ，３％ ＦＣＳ，０．０２％ ＮａＮ_３）中で４０分
間４℃においてインキュベートした。細胞を２回洗浄し、次に、１：２００にてＦＡＣＳ
バッファー中で希釈されたＲ−フィコエリスリン（ＰＥ）をコンジュゲートされたヤギ−
抗−ヒト又はヤギ−抗−マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）Ｆ（ａｂ’）_２（ジャクソンイムノリサ
ーチ）と３０分間４℃においてインキュベートした。細胞を再び洗浄し、０．３ｍｌのＦ
ＡＣＳバッファーに懸濁し、そして次にフローサイトメトリーによりＦＡＣＳＣａｌｉｂ
ｕｒ（ベクトンディッキンソン、サンディエゴ、ＣＡ）中で分析した。

ＦＡＣＳに基づくスキャッチャード分析ＲＰＭＩ８２２６細胞を１２の異なる希釈（１
：２^ｎ）にて染色し、１２．５μｇ／ｍｌ（ＩｇＧ）最終濃度から出発した。少なくとも
２つの独立の測定値を、各濃度及びＣｈａｍｏｗ ｅｔ ａｌ（１９９４）に従い中央値
蛍光強度から推定された（extrapolated）Ｋｄ値に関して使用した。
表面プラズモン共鳴
キネティクス定数ｋ_ｏｎ及びｋ_ｏｆｆを、共有結合により固定化されたＣＤ３８−Ｆｃ
融合蛋白質への各Ｆａｂ結合の連続希釈により、ＢＩＡｃｏｒｅ ３０００装置（バイア
コア、ウプサラ、スエーデン）を用いて測定した。共有結合による抗原の固定化に関して
は、標準ＥＤＣ−ＮＨＳアミンカップリング化学を用いた。ＣＤ３８ Ｆｃ−融合蛋白質
ＣＭ５の直接カップリングに関しては、センサーチップ（バイアコア）を約６００〜７０
０ ＲＵと、１０ｍＭ 酢酸バッファー、ｐＨ４．５中でコートした。レファレンスのフ
ローセルに関しては、各々の量のＨＳＡ（ヒト血清アルブミン）を用いた。キネティクス
の測定は、ＰＢＳ（１３６ｍＭ ＮａＣｌ，２．７ｍＭ ＫＣｌ，１０ｍＭ Ｎａ_２ＰＯ
_４，１．７６ｍＭ ＫＨ_２ＰＯ_４ ｐＨ７．４）中で、２０μｌ／分の流速にて、１．５
−５００ｎＭのＦａｂ濃度範囲にて行った。各濃度の注射時間は、１分、続く解離フェー
ズの２分間であった。戻す（regeneration）のに、５μｌの１０ｍＭ ＨＣｌを用いた。
全てのセンソグラム（sensograms）をＢＩＡ評価ソフトウエア３．１（バイアコア）を用
いて局所的に適合させた。
実施例１：ＨｕＣＡＬライブラリーからの抗体産生
ＣＤ３８に対する治療用抗体の産生のために、ＭｏｒｐｈｏＳｙｓＨｕＣＡＬ ＧＯＬ
Ｄファージディスプレイライブラリーによる選択を実施した。ＨｕＣＡＬ ＧＯＬＤ（登
録商標）はＨｕＣＡＬ（登録商標）コンセプト（Ｋｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，２００
０；Ｋｒｅｂｓ ｅｔ ａｌ．，２００１）に基くＦａｂライブラリーであり、全部で６
つのＣＤＲｓを誘導し、そしてＦａｂ断片をファージ表面に結合させるためにＣｙｓＤｉ
ｓｐｌａｙ（登録商標）技術を用いる（Ｌｏｈｎｉｎｇ，２００１）。
Ａ．ファージミッドレスキュー、ファージ増幅及び精製
ＨｕＣＡＬ ＧＧＯＬＤ（登録商標）ファージミッドライブラリーを、３４μｇ／ｍｌ
クロラムフェニコール及び１％グルコースを含む２ｘＴＹ培地（２ｘＴＹ−ＧＧ）の中で
増幅した。０．５のＯＤ６００におけるヘルパーファージ感染（ＶＣＳＭ１３）の後に（
３７℃において３０分間撹拌なし；３７℃において３０分間２５０ｒｐｍにて撹拌）、細
胞をスピンダウンし（４１２０ｇ；５分間；４℃）、２ｘＴＹ／３４μｇ／ｍｌクロラム
フェニコール／５０μｇ／ｍｌカナマイシン中に懸濁し、そして一晩２２℃において生育
させた。ファージを上清からＰＥＧ沈殿させ、ＰＢＳ／２０％グリセロール中に懸濁し、
そして−８０℃に保存した。２回のパンニング（panning）の間にファージ増幅を実施し
たが、以下のとおりであった：中期フェーズのＴＧ１細胞に溶出されたファージを感染さ
せ、そして１％のグルコース及び３４μｇ／ｍｌのクロラムフェニコールを付加されたＬ
Ｂ−寒天（ＬＢ−ＣＧ）上にプレートした。３７℃における一晩インキュベーションの後
に、上記のとおりにして、コロニーをかき集め（scraped off）、０．５のＯＤ６００に
調節し、そしてヘルパーファージを添加した。
Ｂ．ＨｕＣＡＬ ＧＯＬＤ（登録商標）によるパンニング
選択のため、ＨｕＣＡＬ ＧＯＬＤ（登録商標）抗体−ファージを、異なるＶＨマスタ
ー遺伝子に対応する３つのプールに分割した（プール１：ＶＨ１／５λκ、プール２：Ｖ
Ｈ３ λκ、プール：ＶＨ２／４／６ λκ）。これらのプールを、個別に、ＣＤ３８―
発現ＣＨＯ−Ｋ１細胞上の全細胞パンニング３ラウンドに供し、次に、無関係な抗体−フ
ァージの消耗のためにＣＤ３８−陰性ＣＨＯ−Ｋ１細胞上でｐＨ−溶出及び後吸着工程を
行った。最後に、残った抗体ファージを用いてエシェリヒアコリＴＧ１細胞に感染させた
。遠心分離の後に、細菌の沈殿物を２ｘＴＹ培地に懸濁し、寒天プレートにプレートし、
そして一晩３０℃においてインキュベートした。選択されたクローンを次にプレートから
スクラップし、ファージをレスキューして増幅した。第２及びだ３ラウンドの選択は最初
のラウンドのように実施した。

選択されたＨｕＣＡＬ ＧＯＬＤ（登録商標）ファージの挿入物をコードするＦａｂを
発現ベクターｐＭＯＲＰＨ（登録商標）ｘ９＿Ｆａｂ＿ＦＳ（Ｒａｕｃｈｅｎｂｅｒｇｅ
ｒ ｅｔ ａｌ．，２００３）にサブクローン化することにより、可溶性Ｆａｂの迅速な
発現を促進させた。選択されたクローンのＤＮＡをＸｂａＩとＥｃｏＲＩにより消化し、
それによりＦａｂコード挿入物（ｏｍｐＡ−ＶＬＣＬ及びｐｈｏＡ−Ｆｄ）を切り出し、
そしてＸｂａＩ／ＥｃｏＲＩ切断ベクターｐＭＯＲＰＨ（登録商標）ｘ９＿Ｆａｂ＿ＦＳ
にクローン化した。このベクター中で発現したＦａｂは２つのＣ−末端タグ（ＦＬＡＧＳ
^ＴＭ及びｔｒｅｐ−ｔａｇ（登録商標）ＩＩ）を消耗及び精製のために含む。
実施例２：生物学上のアッセイ
抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）及び補体−依存性細胞傷害性を、フローサイトメト
リー分析に基く公表されたプロトコルに従い（Ｎａｕｎｄｏｒｆ ｅｔ ａｌ．，２００
２）、以下のとおりに測定した：
ＡＤＣＣ：
ＡＤＣＣ測定のために、標的細胞（Ｔ）を２．０Ｅ＋細胞／ｍｌに調節し、そしてＲＰ
ＩＭ１６４０培地（Ｐａｎ ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ）中の１００ｎｇ／ｍｌのカルセ
インＡＭ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｃ−３０９９）により２分間室温におい
て標識した。残りのカルセインをＲＰＩＭ１６４０培地中の３回の洗浄工程により除去し
た。平行してＰＢＭＣを（ナチュラルキラー）エフェクター細胞（Ｅ）の源として調製し
、１．０Ｅ＋０．７に調節し、そしてアッセイ条件に依存して５０：１又はそれ未満のＥ
：Ｔ比を生じるように、標識された標的細胞と混合した。細胞を１回洗浄し、そして細胞
混合物を異なる希釈にて各抗体を含む２００μｌのＲＰＩＭ１６４０培地に懸濁した。プ
レートを４時間標準化条件下で３７℃及び５％ＣＯ_２において湿潤発酵機中でインキュベ
ートした。ＦＡＣＳ分析に先立ち、細胞をヨウ化プロピジウム（ＰＩ）で標識し、そして
フローサイトメトリー（ベクトンディッキンソン）により分析した。５０．０００から１
５０．０００の間の事象が各アッセイに関して計数された。以下の式は殺傷活性［％］を
生じさせる：

式中、ＥＤ^Ａ＝事象で死んだ細胞（カルセイン＋ＰＩ染色された細胞）、そして
ＥＬ^Ａ＝事象で生存する細胞（カルセイン染色された細胞）。
ＣＤＣ：
ＣＤＣ測定に関して、５．０Ｅ＋０４ ＣＤ３８ ＣＨＯ−Ｋ１トランスフェクト体を
、マイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ）に、１：４希釈のヒト血清（Ｓｉｇｍａ，＃Ｓ
−１７６４）と各抗体と共に加えた。全ての試薬及び細胞は、１０％ＦＣＳを付加された
ＲＰＩＭ１６４０培地（Ｐａｎ ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ）中で希釈した。反応混合物
を２時間標準化条件下で３７℃及び５％ＣＯ_２において湿潤発酵機中でインキュベートし
た。陰性対照が熱不活性化相補体又は抗体なしのＣＤ３８−トランスフェクト体のいずれ
かとして機能した。細胞をＰＩにより標識して、ＦＡＣＳ−分析に供した。

全部で５００の事象を計数し、そして異なる抗体濃度における死んだ細胞の数をＥＣ５
０値の測定値として使用した。以下の等式は殺傷活性［％］を生じさせる：

式中、ＥＤ^Ｃ＝事象で死んだ細胞（ＰＩ染色された細胞）、そして
ＥＬ^Ｃ＝事象で生存する細胞（未染色）。
全部で１２の異なる抗体−希釈（１：２^ｎ）の３通りの細胞傷害性の値をＡＤＣＣにお
いて用い、そして各抗体に関するＣＤＣにおいて２通りに用いることにより、標準分析ソ
フトウエア（ＰＲＩＳＭ（登録商標），Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）により
ＥＣ−５０値を得た。
実施例３：安定なＣＤ３８トランスフェクト体及びＣＤ３８ Ｆｃ−融合蛋白質の生成
パンニング及びスクリーニングするためのＣＤ３８蛋白質を生成するために、２つの異
なる発現システムを確立した。第１の戦略はＣＤ３８−Ｆｃ−融合蛋白質の生成を含んだ
が、ＨＥＫ２９３細胞の一過性トランスフェクションの後に上清から精製された。第２の
戦略は、全細胞パンニングにより抗体−ファージの選択の為に使用される高ＣＤ３８表面
発現のための安定なＣＨＯ−Ｋ１−細胞系の精製を含んだ。

初期工程として、ジャーカット細胞（ＤＳＭＺ ＡＣＣ２８２）をｃＤＮＡの生成のた
めに使用し、次に、ＣＤ３８の最初の７コドン及び最後の９コドンにそれぞれ相補のプラ
イマーを用いて全ＣＤ３８コード配列の増幅を行った（プライマーＭＴＥ００１ ＆ Ｍ
ＴＥ００２ｒｅｖ；表４）。ＣＤ３８挿入物の配列分析は、Ｎａｔａら（１９９７）によ
り記載されたチロシンの代わりのグルタミンを明らかにした４９位を除いて、Ｊａｃｋｓ
ｏｎら（１９９０）による公表アミノ酸配列を確認した。制限エンドヌクレアーゼ部位の
導入及び発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）へのクローン化のため
に、精製されたＰＣＲ産物が完全遺伝子（プライマーＭＴＥ００６ ＆ ＭＴＥ００７ｒ
ｅｖ，表４）又はその一部（プライマーＭＴＥ００４ ＆ ＭＴＥ００５ｒｅｖ，表４）
の再増幅のための鋳型として機能した。後者の場合、細胞外ドメインをコードする断片（
ａａ４５から３００）を増幅して、ヒトＶカッパリーダー配列とヒトＦｃ−ガンマ１配列
の間に印フレームにてクローン化した。このベクターは可溶性ＣＤ３８−Ｆｃ融合蛋白質
の生成のための発現ベクターとして機能した。リーダー配列を含まない別のｐｃＤＮＡ３
．１−誘導体をＣＤ３８完全長遺伝子の挿入のために使用した。この場合、Ｆｃ−コーデ
ィング領域の前の停止コドン及び失われたリーダー配列はＣＤ３８表面発現を生じさせた
。ＨＥＫ２９３細胞を一時的にＦｃ融合蛋白質ベクターでトランスフェクトさせることに
より、可溶性ＣＤ３８ Ｆｃ−融合蛋白質を生成させ、そして完全長誘導体の場合、ＣＨ
Ｏ−Ｋ１−細胞をトランスフェクトすることにより安定なＣＤ３８−発現細胞系を生じさ
せた。

実施例４：Ｈｕｃａｌ（登録商標）ＩｇＧ１のクローン化、発現及び精製：
完全長のＩｇＧを発現させるため、重鎖（ＶＨ）及び軽鎖（ＬＨ）の可変ドメイン断片
を、Ｆａｂ発現ベクターから、適切なｐＭＯＲＰＨ（登録商標）＿ｈＩｇベクターのサブ
クローン化した（図８及び１０を参照）。制限エンドヌクレアーゼ対ＢｌｐＩ／ＭｆｅＩ
（挿入物−調製）及びＢｌｐＩ／ＥｃｏＲＩ（ベクター−調製）をＶＨドメイン断片のｐ
ＭＯＲＰＨ（登録商標）＿ｈＩｇＧ１ベクターへのサブクローン化のために用いた。対の
酵素ＥｃｏＲＩ／ＨｐａＩ（ラムダ０−挿入物）及びＥｃｏＲＩ／ＢｓｉＷＩ（カッパ−
挿入物）をＶＬドメイン断片の各ｐＭＯＲＰＨ（登録商標）＿ｈＩκ＿１ベクター又はｐ
ＭＯＲＰＨ（登録商標）＿ｈＩｇλ＿１ベクターへのサブクローン化のために用いた。結
果のＩｇＧ構築物をＨＥＫ２９３細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１５７３）中で、一過性トラ
ンスフェクションにより、標準リン酸カルシウム−ＤＮＡ共沈殿技術を用いて発現させた
。ＩｇＧｓは、細胞培養物上清から親和性クロマトグラフィーによりプロテインＡセファ
ロースカラムにより精製した。さらに下流のプロセスは、精製されたＩｇＧのゲル濾過及
び滅菌濾過によるバッファー交換を含んだ。質的コントロールは、還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥ
によれば＞９０％の精製度、及び分析用サイズ排除クロマトグラフィーにより測定された
ところによれば＞９０％モノマーＩｇＧを明らかにした。材料のエンドトキシン含有量は
キネティクＬＡＬに基くアッセイ（Ｃａｍｂｒｅｘ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｅｎｄｏｔｏｘ
ｉｎ Ｔｅｓｔｉｎｇ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｂｅｒｇｉｕｍ）により測定した。
実施例５：キメラＯＫＴ１０（ｃｈＯＫＴ１０；配列番号：２３及び２４）の生成及び生
産
ｈＯＫＴ１０の構築のため、マウスＶＨ及びＶＬ領域を、ＰＣＲにより、マウスＯＫＴ
１０ハイブリドーマ細胞系（ＥＣＡＣＣ ＃８７０２１９０３）から調製されたｃＤＮＡ
を用いて増幅した。プライマーのセットを公表されたとおりに用いた（Ｄａｔｔａｍａｊ
ｕｍｄａｒ ｅｔ ａｌ．，１９９６；Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，１９９４）。ＰＣＲ産
物を、Ｔｏｐｏ−クローニング（インビトロジェン；ｐＣＲＩＩ−ベクター）及び配列分
析に供される単一コロニー（Ｍ１３リバースプライマー）のために使用し、２つの異なる
カッパ軽鎖配列と一つの重鎖配列を明らかにした。配列アラインメント（ＥＭＢＬ−ヌク
レオチド配列データベース）及び文献（Ｋｒｅｂｂｅｒ ｅｔ ａｌ，１９９７）に従い
、カッパ配列の一つは主要細胞融合パートナーＸ６３Ａｇ８．６５３の固有のレパートリ
ーに属し、よって、ＯＫＴ１０抗体には属さない。よって、新規のカッパ配列と単一ＶＨ
−断片のみがさらなるクローン化に使用された。重鎖（配列番号：２３）及び重鎖（配列
番号：２４）の配列を表６に提供する。ＨＥＫ２９３細胞を一時的にトランスフェクトし
、そして上清をＦＡＣＳにおいて、ＣＤ３８過剰発現ラジ細胞系（ＡＴＣＣ）に結合した
キメラＯＫＴ１０抗体に関して分析した。
実施例６：エピトープマッピング
１．材料と方法
抗体：
以下の抗−ＣＤ３８ＩｇＧｓをエピトープマッピングに送った（sent）：

ＣＤ３８−配列：
アミノ酸（ａａ）配列（４４−１３０位）は、ＳＷＩＳＳ−ＰＲＯＴ主要アクセション
番号Ｐ２８９０７にて公表された配列からのヒトＣＤ３８に基く。４９位において、ａａ
Ｑ（Ｔの代わり）をペプチドデザインのために使用した。
ＰｅｐＳｐｏｔ−分析：
抗原ペプチドをセルロース膜上で段階様式にて規程された配置にて（ペプチドアレイ）
合成し、そしてセルロース膜に共有結合させた。結合アッセイは、ペプチドアレイ上で直
接行った。通常、抗原ペプチドアレイは数時間ブロッキングバッファーインキュベートさ
れることにより、抗体の非特異的結合を減じさせる。ブロッキングバッファー中での一次
（抗原ペプチド−結合）抗体とのインキュベーションが起こり、次に、ペルオキシダーゼ
（ＰＯＤ）−標識された二次抗体とのインキュベーションが続き、一次抗体を選択的に結
合させる。抗原ペプチドアレイと二次抗体とのインキュベーションの直後の短いＴ（Ｔｗ
ｅｅｎ）−ＴＢＳバッファー洗浄に続き、第１化学発光実験を行うことにより、どの抗原
ペプチドが一次抗体と結合するのかについての最初の概要を得る。いくつかのバッファー
洗浄工程の結果として、偽陽性結合が減る（セルロース膜自体への非特異的抗体結合）。
これらの洗浄工程の後に、最終化学発光分析を実施する。各ペプチドに関して単一の測定
として単一の強度を示すイメージングシステム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｌｉｇｈｔ ｕ
ｎｉｔｓ，ＢＬＵ）を用いてデータを分析した。二次抗体（抗−ヒトＩｇＧ）の非特異的
結合を評価するため、これらの抗体をペプチドアレイと共に第１工程のように一次抗体の
不在下でインキュベートした。一次抗体が当該ペプチドに対して何の結合も示さないなら
、ＰＯＤにより直接標識することができ、システムの感度を増加させる（ＭＯＲ３０７７
に関して実施されたとおり）。この場合、遊離アミノ基を通した慣用のカップリング化学
を実施する。当該抗原を１３マーペプチド（１１ペプチドが重複）によりスキャンした。
これは、１２３ペプチドのアレイをもたらした。結合アッセイはアレイ上で直接実施した
。ペプチドが結合した抗体ＭＯＲ０３０７７，ＭＯＲ０３０７９，ＭＯＲ０３０８０，Ｍ
ＯＲ０３１００及びキメラＯＫＴ１０がペルオキシダーゼ標識二次抗体（ペルオキシダー
ゼコンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧ、ガンマ鎖特異的、親和性単離抗体；Ｓｉｇｍａ−Ａ
ｌｄｌｉｃｈ，Ａ６０２９）を用いて検出された。マッピングはイメージングシステムと
組み合わせて化学発光基質と共に実施した。さらに、ＭＯＲ０３０７７の直接ＰＯＤ−標
識を実施することにより、システムの感度を増加させた。
２．要約と結論：
５つの抗体全てがＰｅｐＳｐｏｔ分析において異なるプロフィールを示した。模式的要
約を図７に示すが、ＣＤ３８のａａ配列が認識される相違を示す。ＭＯＲ０３０７９及び
キメラＯＫＴ１０のエピトープは明らかに直鎖状であると考えることができる。ＭＯＲ０
３０７９のエピトープはＣＤ３８の１９２−２０６（ＶＳＲＲＦＡＥＡＡＣＤＶＶＨＶ）
内に仮定され、ＯＫＴ１０のエピトープはａａ２８４から２９８（ＦＬＱＣＶＫＮＰＥＤ
ＳＳＣＴＳ）の間が有力であると認識される。後者の結果は、親のマウスＯＫＴ１０に関
して公表されたデータを確証し（Ｈｏｓｈｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，１９９７）、そのエピ
トープをａａ２８０−２９８の間に仮定する。しかし、より正確なエピトープの規程及び
キーとなる（key）アミノ酸（主要抗原−抗体相互作用部位）の決定には、ペプチドＶＳ
ＲＲＦＡＥＡＡＣＤＶＶＨＶ及びＦＬＱＣＶＫＮＰＥＤＳＳＣＴＳの短縮化及び両者のア
ラニンスキャンを考えるべきである。

ＭＯＲ０３０８０とＭＯＲ０３１００のエピトープは不連続であると明らかに認識でき
るが、何故ならば蛋白質部位の異なる部位をカバーするいくつかのペプチドが認識された
からであった。それらのペプチドは、ＭＯＲ０３０８０に関してａａ８２−９４を含み、
そしてＭＯＲ０３１００に関してａａ８２−９４，１４２−１５４，１５８−１７０，１
８８−２００及び２８０−２９６を含む。しかしながら、両ペプチドの間でのいくつかの
重複が仮定され得るが、何故ならばａａ位８２−９４（ＣＱＳＶＷＤＡＦＫＧＡＦＩ；ペ
プチド＃２０）と１５８−１７０（ＴＷＣＧＥＦＮＴＳＫＩＮＹ；ペプチド＃５８）内に
位置する２つの異なる部位が両抗体により認識されるからである。

ＭＯＲ０３０７７のエピトープは後者２つの明らかに異なると考えることができ、そし
て複数セグメント化された不連続なエピトープとして記載され得る。当該エピトープはａ
ａ４４−６６，１１０−１２２，１４８−１６４，１８６−２００及び２０２−２２４を
含む。
実施例７：ＩＬ−６放出／増殖アッセイ
１．材料と方法
増殖及びＩＬ−６放出アッセイをＡｕｓｉｅｌｌｏら（２０００）に従い以下の修飾を
加えて実施した：別の健康なドナー（インフォームドコンセントを得た後）からのＰＢＭ
Ｃｓを密度勾配遠心分離によりＨｉｓｔｏｐａｑｕｅ細胞分離システムを用いて供給者（
Ｓｉｇｍａ）の指示書に従い精製し、そして標準条件下で１０％ＦＣＳ及びグルタミン（
「完全ＲＰＭＩ１６４０」）を追加されたＲＰＭＩ１６４０培地中で培養した（５％ＣＯ
２，３７℃）。両アッセイに関して、以下の抗体を用いた：ＨｕＣａｌ（登録商標）抗−
ＣＤ３８ ＩｇＧ１ｓ Ｍａｂｓ ＭＯＲ０３０７７，ＭＯＲ０３０７９及びＭＯＲ０３
０８０，アゴニスト性マウスＩｇＧ２ａモノクローナル抗体（ＩＢ４；Ｍａｌａｖａｓｉ
ｅｔ ａｌ．，１９８４）、非関連性ＨｕＣＡＬ（登録商標）ＩｇＧ１抗体；適合した
アイソタイプ対照（マウスＩｇＧ２ａ：抗−トリニトロフェノール、ハプテン特異的抗体
；カタログ番号＃５５５５７１，クローンＧ１５５−１７８；ベクトンディッキンソン）
又は培地対照。ＩＬ−６放出アッセイに関しては、０．５ｍｌ完全ＲＰＩＭ１６４０培地
中の１．０ Ｅ＋０６ ＰＢＭＣｓを２４時間１５ｍｌ培養チューブ（Ｆａｌｃｏｎ）中
で２０μｇ／ｍｌの抗体の存在下でインキュベートした。細胞培養上清を回収し、そして
ＩＬ−６放出に関してＱｕａｎｔｉｋｉｎｅキットを用いて製造者のプロトコルに従い（
Ｒ＆Ｄシステムズ）分析した。増殖アッセイに関しては、２．０Ｅ＋０５ ＰＢＭＣｓを
３日間９６−ウエル平底プレート（Ｎｕｎｃ）中で２０μｇ／ｍｌの抗体の存在下でイン
キュベートした。各アッセイを２通り実施した。４日後に、ＢｒｄＵを各ウエルに加え、
そして細胞の固定化及び供給者（Ｒｏｃｈｅ）のプロトコルに従ったＤＮＡ変性の前に細
胞をさらに２４時間３７℃においてインキュベートした。ＢｒｄＵの取り込みを抗−Ｂｒ
ｄＵペルオキシダーゼ共役抗体により化学発光に基づくセッティングにおいて測定した。
２．要約と結論：
増殖アッセイ：
環状ＡＤＰ−リボースサイクラーゼ及びヒドロラーゼとしてのその触媒活性に加えて、
ＣＤ３８は生物学上の関連性のシグナルをトランスデュースする能力を発揮する（Ｈｏｓ
ｈｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，１９９７；Ａｕｓｉｅｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，２０００）。そ
れらの機能はインビボにおいて、例えば受容体−リガンド相互作用によるか又は抗−ＣＤ
３８抗体との架橋結合により誘導することができる。それらのシグナリング事象は、例え
ばカルシウムの移動、リンパ球の増殖及びサイトカインの放出を導く。しかしながら、こ
のシグナリングは、抗原性エピトープに依存するのみではなく、ドナーによって変化する
かもしれない（Ａｕｓｉｅｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，２０００）。免疫治療の見地から、非
アゴニスト抗体がアゴニスト性抗体よりも好ましい。よって、ＨｕＣＡＬ（登録商標）抗
−ＣＤ３８抗体（Ｍａｂｓ ＭＯＲ０３０７７；ＭＯＲ０３０７９，ＭＯＲ０３０８０）
を、増殖アッセイ及びＩＬ−６−（重要なＭＭ成長因子）放出アッセイにおいて参照抗体
ｃｈＯＫＴ１０及びアゴニスト性抗−ＣＤ３８モノクローナル抗体ＩＢ４との比較におい
てさらに特性決定した。

図１１及び１２において示されるとおり、ＨｕＣＡＬ抗−ＣＤ３８抗体Ｍａｂ＃１，２
及び３並びに参照抗体ｃｈＯＫＴ１０及び相当する陰性対照は、アゴニスト性抗体ＩＢ４
に比較して全くか又はほんの僅かな増殖誘導を示さず、そしてＩＬ−６放出は示さなかっ
た。
実施例８：増殖性アッセイ
１．材料と方法：
ＰＢＭＣｓを有する自己由来ＣＤ３４＋／ＣＤ３８＋前駆体細胞を健康な個体（インフ
ォームドコンセントを得た後で）から密度勾配遠心分離によりＨｉｓｏｐａｑｕｅ細胞分
離システムを用いて供給者（Ｓｉｇｍａ）の指示書に従い単離し、そして別のＨｕＣＡＬ
（登録商標）ＩｇＧ抗−ＣＤ３８抗体（Ｍａｂｓ ＭＯＲ０３０７７；ＭＯＲ０３０７９
，ＭＯＲ０３０８０）及び陽性対照（ＰＣ）ｃｈＯＫＴ１０と１０μｇ／ｍｌにてインキ
ュベートした。中度（medium）及び非関連のＨｕＣＡＬ（登録商標）はバックグラウンド
対照として機能した。各ＡＤＣＣ−アッセイは４．０Ｅ＋０５ ＰＢＭＣｓからなったが
、１０％のＦＣＳを追加されたＲＰＩＭ１６４０培地中で４時間３７℃においてインキュ
ベートした。増殖（clonogenic）アッセイに関しては、２．５０ｍｌの「完全」メチルセ
ルロース（ＣｅｌｌＳｙｓｔｅｍｓ）をＡＤＣＣアッセイからの２．５ Ｅ＋０．５細胞
で接種し、そして少なくとも１４日間、制御された環境（３７℃；５％ ＣＯ２）におい
てコロニー発生のためにインキュベートした。コロニーを２人の別々の操作者により分析
し、そしてＢＦＵ−Ｅ ＋（赤血球バースト形成及び顆粒球／赤血球／マクロファージ／
巨核球幹細胞）とＣＦＵ−ＧＭ（顆粒球／マクロファージ幹細胞）にグループ分けした。
２．要約と結論
ＣＤ３８発現は骨髄（例えば、単球及び顆粒球）及びリンパ球系列（例えば、活性化さ
れたＢ及びＴ細胞；血漿細胞）のみならず、各前駆体細胞（ＣＤ３４＋／ＣＤ３８＋）に
おいても見いだされるから、それらの細胞が抗体媒介性の殺傷により影響されないことが
重要である。よって、ＣＤ３４＋／ＣＤ３８＋前駆細胞（ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ）に対
するそれらの作用を分析するために、増殖アッセイを適用した。

健康なドナーからのＰＢＭＣｓをＨｕＣＡＬ（登録商標）抗−ＣＤ３８抗体（Ｍａｂ＃
１，Ｍａｂ＃２及びＭａｂ＃３）又はいくつかの対照（非関連ＨｕＣＡＬ（登録商標）抗
体、中度及び参照抗体ｃｈＫＴＯ１０を陽性対照として）と共に、標準ＡＤＣＣ−プロト
コルに従いインキュベートし、次に、コロニー発生のために、条件付けされたメチルセル
ロースとのさらなるインキュベーションを行った。図１３に示されるとおり、コロニー形
成ユニットの顕著な低下は、非関連抗体及び参照抗体との比較において、全てのＨｕＣＡ
Ｌ（登録商標）抗−ＣＤ３８抗体に関して示されなかった。
実施例９：異なる細胞系及び一次多発性骨髄腫細胞によるアッセイ
１．材料と方法：
ＭＭ−患者サンプルの単離とＡＤＣＣ：骨髄吸引物を多発性骨髄腫間者から得た（イン
フォームドコンセントを得た後で）。悪性腫瘍標準プロトコルにより抗−ＣＤ３８磁気ビ
ーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙ Ｂｉｏｔｅｃ）を用いて密度勾配遠心分離（Ｓｉｇｍａ）の後で
精製した。ＡＤＣＣアッセイを前で記載されたとおりに実施した。
２．要約と結論：
別の悪性腫瘍由来のいくつかの細胞系をＡＤＣＣにおいて使用することにより、異なる
起源及びＣＤ３８発現レベルを含む広い範囲の細胞系に対するＨｕＣＡＬ（登録商標）抗
−ＣＤ３８抗体の細胞傷害性効果を示した。図１４に示されるとおり、全ての細胞がＡＤ
ＣＣにおいて一定抗体濃度にて（５μｇ／ｍｌ）及び３０：１のＥ：Ｔ比にて死んだ。Ａ
ＤＣＣによる細胞傷害性は患者からのいくつかの多発性骨髄腫サンプルに関しても示され
た。全てのＨｕＣＡＬ（登録商標）抗−ＣＤ３８抗体はＭＭ−細胞依存性殺傷を示し、そ
してＥＣ５０値は０．００６から０．２４９ｎＭの間で変動した（図１５）。
実施例１０：ＦＡＣＳ及び免疫組織化学（ＩＨＣ）による交差反応性分析
１．材料と方法
扁桃腺（tonsils）を用いたＩＨＣ：ＩＨＣ ＨｕＣＡＬ（登録商標）抗−ＣＤ３８Ｍ
ａｂｓ及び非関連陰性対照抗体を二価ｄＨＬＸ−フォーマット（Ｐｌｕｃｋｔｈｕｍ ＆
Ｐａｃｋ，１９９７）に変換した。カニクイザル、アカゲザル及びヒト（ｔｈｅ Ｉｎ
ｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏ
ｆ Ｇｒａｚ／Ａｕｓｔｒｉａの記録室から回収された）由来のリンパ節からの５μｍの
冷凍切片をＬｅｉｃａ ＣＭ３０５０クリオスタットから切り出した。切片は３０分から
１時間空気乾燥し、そして氷冷メタノール中で１０分かけて固定し、そしてＰＢＳにより
洗浄した。ｄＨＬＸ−フォーマットの検出のため、マウス抗−Ｈｉｓ抗体（Ｄｉａｎｏｖ
ａ）とＥｎｖｉｓｉｏｎ Ｋｉｔ（ＤＡＫＯ）を組み合わせて使用した。抗−ＣＤ３８マ
ウス抗体（例えば、参照マウスモノクローナルＯＫＴ１０）の検出に関しては、Ｅｎｖｉ
ｓｉｏｎキットのみを用いた。

リンパ球のＦＡＣＳ分析：ＥＤＴＡ−処理された血液サンプルを健康なヒト（インフォ
ームドコンセントを得た後で）、アカゲザル及びカニクイザルから得て、供給者（Ｓｉｇ
ｍａ）の指示書に従いＨｉｓｔｏｐａｑｕｅ細胞分離システムを用いた密度勾配遠心分離
に供した。ＦＡＣＳ分析に関しては、中期（interphase）からの細胞を一次抗体（ＨｕＣ
ＡＬ（登録商標）抗−ＣＤ３８及びマウスＩｇＧ２又はＦａｂ−フォーマットとしての陰
性対照Ｍａｂｓ、陽性対照マウス抗体ＯＫＴ１０及び適合したアイソタイプ対照）と共に
インキュベートし、次に、抗−Ｍ２Ｆｌａｇ（Ｓｉｇｍａ；Ｆａｂ−フォーマットのため
のみ）及びフィコエリスリン（ＰＥ）−標識された抗マウスコンジュゲート（Ｊａｃｋｓ
ｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）とインキュベートした。ＦＡＣＳ分析は、ゲート化されたリン
パ球の集団上で実施した。
２．要約と結論
ＨｕＣＡＬ（登録商標）抗−ＣＤ３８を種間ＣＤ３８交差反応性に関して分析した。全
ての抗−ＣＤ３８ＭａｂｓはＦＡＣＳ及びＩＨＣにおいてリンパ球上でヒトＣＤ３８を検
出することができたが、ＭＯＲ０３０８０と陽性対照ＯＫＴ１０のみはカニクイザルとア
カゲザルのＣＤ３８に対して追加の反応性を示した（表５：交差反応性分析を参照）。

実施例１１：マウス中のヒト骨髄腫異種移植片（ＲＰＭＩ８２２６細胞系を用いる）のＭ
ＯＲ０３０８０による処理
１．皮下マウスモデルの確率：
ヒト骨髄腫由来の腫瘍細胞系ＲＰＭＩ８２２６のメスＣ．Ｂ−１７−ＳＣＩＤマウス中
での皮下マウスモデルをＡｕｒｉｇｏｎ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＧｍｂＨ（Ｔｕｔ
ｚｉｎｇ，ドイツ）により以下のとおりに確立した：−１，０，及び１日目、抗−アシア
ロＧＭ１ポリクローナル抗体（ＡＳＧＭ）（ＷＡＫＯ−ケミカルズ）は、ＳＣＩＤマウス
中で異種反応性ＮＫ−細胞を消耗するが、静脈内適用することにより、Ｃ．Ｂ−１７−Ｓ
ＣＩＤマウス内のあらゆる残りの特異的免疫反応性を不活性化した。０日目、５０μｌの
ＰＢＳ中の５ｘ１０^６又は１ｘ１０^７のＲＰＭＩ８２２６腫瘍細胞を皮下にて、ＡＳＧＭ
（上で示すとおり）処理されたか又は未処理のマウスの右脇腹へ接種した（各群５匹のマ
ウスからなる）。腫瘍発生は、４つ全ての接種群において類似であり、抗アシアロＧＭ１
抗体のあるなしの処理に拘わらず、また異なる細胞数の接種によっても顕著な差異は見い
だせなかった。腫瘍は数日間でゆっくりと成長し、不活発の傾向とサイズの変動を伴った
。調査の全期間にわたり２つの腫瘍のサイズが変動し、そして一つの腫瘍が完全に注目さ
れて、３２１ｍｍ^３のピークの容積からすっかり消失した。この腫瘍モデルを用いた処理
の研究は、群あたりの腫瘍を接種された動物の数を多く含むべきである。
２．ＭＯＲ０３０８０による処理：
２．１研究対象
この研究は、Ａｕｒｉｇｏｎ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＧｍｂＨ（Ｔｕｔｚｉｎｇ
，ドイツ）により実施されることにより、媒質処理（ＰＢＳ）に比較しての腹膜内適用さ
れた抗体（ＨｕＣＡＬ（登録商標）抗−ＣＤ３８）の抗腫瘍効果を比較した。ヒト抗体ｈ
ＭＯＲ０３０８０（アイソタイプＩｇＧ１）を、異なる量及び処理スケジュールにて試験
した。さらに、キメラ抗体ｃｈＭＯＲ０３０８０（アイソタイプＩｇＧ２：キメラ抗体Ｏ
ＫＴ１０に関して実施例５において記載されたのと類似の様式にてＭＯＲ０３０８０の様
々な領域とマウス定常領域を含むキメラ抗体（マウスＶＨ／ＶＬ及びヒト定常領域））を
試験した。ＲＰＭＩ８２２６癌細胞系をモデルとして選択し、そして上記のとおりにして
メスのＳＣＩＤマウスに皮下接種した。研究の最終点は、体重（ｂ．ｗ．）、腫瘍容積及
び臨床上の兆候であった。
２．２抗体と媒質
抗体は２．１３ｍｇ／ｍｌ（ＭＯＲ０３０８０ ｈＩｇＧ１）及び１．７３ｍｇ／ｍｌ
（ＭＯＲ０３０８０ ｃｈＩｇＧ２ａ）の濃度にて、Ａｕｒｉｇｏｎに容易に使用される
ように提供され、そして適用までは−８０℃に保存した。上記抗体を解凍し、そしてＰＢ
Ｓで希釈することにより、各最終濃度にした。媒質（ＰＢＳ）はＡｕｒｉｇｏｎに容易に
使用されるように提供され、そして適用までは４℃に保存した。
２．３動物の仕様
種：マウス
株：Ｆｏｘ ｃｈａｓｅ Ｃ．Ｂ−１７−ｓｃｉｄ（Ｃ．Ｂ−Ｉｇｈ−１ｂ／ＩｃｒＴ
ａｃ）
数と性別：７５匹のメス
供給者：Ｔａｃｏｎｉｃ Ｍ＆Ｂ，Ｂｏｍｈｏｌｔｖｅｊ １０，ＤＫ−８６８０ Ｒ
ｙ
健康状態：ＳＰＦ
注文された体重：約１８ｇ
順化：９日
２．４腫瘍細胞系
腫瘍細胞（ＲＰＭＩ８２２６細胞系）を成長させ、そしてＡｕｒｉｇｏｎ Ｌｉｆｅ
Ｓｃｉｅｎｃｅ ＧｍｂＨに輸送し、新たな周期で細胞を分裂させて生育させた。Ａｕｒ
ｉｇｏｎは接種の日に注射のための細胞を用意した。細胞増殖のために使用された培養培
地は、５％ ＦＡＣＳ，２ｍＭ Ｌ−グルタミン及びＰｅｎＳｔｅｐを付加されたＲＰＭ
Ｉ１６４０であった。細胞は予測不可能な生育速度及び挙動を示さなかった。

接種のため、腫瘍細胞をＰＢＳに懸濁して、１ｘ１０^７細胞／５０μｌＰＢＳの最終濃
度に調節した。腫瘍細胞懸濁液を注射前に完全に混合した。
２．５実験手法
０日目、１ｘ１０^７のＲＰＭＩ８２２６腫瘍細胞を７５匹のＳＣＩＤマウスの右背面脇
腹（right dorsal flank）に皮下接種した。第１の群は、１４日から３６日の間２日目ご
とに、１ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．ｈＩｇＧ１−ＭＯＲ０３０８０で処理した。他の全部で６
０匹の動物から、３１日目に各群の１０匹の動物を４群にした（built）（約９２ｍｍ^３
の腫瘍容積）。群１−４を同等の平均腫瘍サイズ及び標準偏差にて作成した（built）。
予め処理された群５（全てであるがしかし３匹のマウスは１０ｍｍ^３未満の腫瘍容積を示
し、１匹は約２２ｍｍ^３，１匹は約４４ｍｍ^３そして１匹は約１１９ｍｍ^３）に比較して
相対的に小さな腫瘍容積を示す（約５０ｍｍ^３の腫瘍容積）追加の群の５匹の動物（群６
）が選択された。群１から４は、３２日目から４８日目は、２日目ごとに、ＰＢＳ（媒質
；群１）、１ｍｇ／ｋｇのｂ．ｗ．ｈＩｇＧ１−ＭＯＲ０３０８０（群２）又は５ｍｇ／
ｋｇのｂ．ｗ．ｈＩｇＧ１−ＭＯＲ０３０８０（群３）、又は５ｍｇ／ｋｇのｂ．ｗ．ｈ
ＩｇＧ２ａ−ＭＯＲ０３０８０（群４）のいずれかで処理した。群６は何の処理も受けな
かった（表６参照）。腫瘍容積、体重及び臨床兆候は、週に２回、研究の最後まで測定し
た。

２．６結果
臨床観察及び死亡率
特別な腫瘍又は物質に関連する臨床上の発見又は死亡率は観察されなかった。群３（ｈ
ＩｇＧ１ ５ｍｇ／ｋｇ）においては、４匹の動物が血液サンプリングの間に死んだ（１
匹が３日目、１匹が３４日目；２匹が５２日目）。群４（ｍｕＩｇＧ２ａ １ｍｇ／ｋｇ
）においては、１匹の動物が血液サンプリングの間に死んだ（３４日目）。研究の間に死
んだ全ての他の動物は、腫瘍サイズのために安楽死させた。
体重発育（body weight development)
薬剤に関連した体重発達の干渉は、群１（媒質）に比較して、観察されなかった。体重
は、群３（ｈＩｇＧ１ ５ｍｇ／ｋｇ）及び群４（ｍｕＩｇＧ２ａ ５ｍｇ／ｋｇ）にお
いて血液サンプリングにより顕著に影響された。そのような妨害にも拘わらず、全ての群
の平均体重増加は続いた。
腫瘍発生（図１６を参照）
群１（媒質）においては、腫瘍成長が予測された速度で遅い進行により見いだされた。
この細胞系が顕著な標準偏差を有するので、最大又は最小腫瘍に関する値はさらなる統計
分析から除外された。群１の動物の腫瘍の成長は、群６（未処理）の腫瘍成長に匹敵した
が、この群は３１日目に低平均腫瘍容積から開始した。処理は、よって、腫瘍成長速度に
対して僅かな影響を有すると考えられる。群１においては、２匹のマウスを腫瘍サイズの
ために８３日目に安楽死させなければならなかったし、さらにもう１匹も８７日目にそう
したため、腫瘍容積の平均値は８０日目以後は、もはや表示されない。群６においては、
１匹のマウスを８０日目に、そして２匹のマウスを８３日目に、腫瘍サイズのために安楽
死させなければならず、そのため、腫瘍容積の平均値は７６日目以後は、もはや平均値を
表しているとは言えない。

１ｍｇ／ｋｇのｂ．ｗ．のｈＩｇＧ１で処理された群２においては、１匹の動物がさら
なる分析から除外されたが、何故ならば、腫瘍が筋肉組織中で成長し、そしてこれがいつ
も腫瘍の生育速度を増強するからである。対照群１（媒質）に比較して、平均腫瘍サイズ
は４５日に始まり研究の最後まで顕著に異なり始めた。増強された腫瘍の生育は処理の終
了の後に（６８日）観察されなかった。

群３（５ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．ｈＩｇＧ１）の動物は、群１（媒質）との比較において
腫瘍サイズの顕著な減少を明らかにしたことから、３８日から８３日までに統計学上の有
意性を得た。平均腫瘍容積は、処理の最後の後の約２週間再度大きく成長し始めた。１０
の腫瘍のうちの１つは４５日目に消失し、そして処理の最後の後の１９日まで再度生育し
なかった。

９２ｍｍ^３の腫瘍容積にて開始した全ての処理群の最良のパフォーマンスは、群４（５
ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．ｍｕＩｇＧ２ａ）において得られたが、平均腫瘍容積は明らかな退
行（regression）を示し、そして腫瘍は観察期間の最後までに４匹の動物において消失し
た。群１（媒質）の平均腫瘍容積に対する差異は、３８日に始まり研究の最後まで顕著に
高かった。

１４日目と３６日目の間の１ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．ｈＩｇＧ１による初期の処理（群５
）は、初期の効果並びに腫瘍発生に対する長く継続する効果を明らかにした。１匹の動物
は腫瘍の筋肉組織への成長のためにさらなる分析から除外された。３１日目、５匹の動物
のみが接種の部位において残りの接種された動物に比較して、測定可能な腫瘍を有し、６
０匹のうちの２匹のみが腫瘍接種に応答しなかった。腫瘍の進行は約３１日遅延した（対
照群１の５２日と群５の８３との比較）。約５０％の動物が研究の最後において接種の部
位にて腫瘍を示さなかった。
２．７結論
特別な腫瘍又は物質に関連する臨床上の発見又は死亡率は、群１（媒質）との比較の上
で観察されなかった。

薬剤に関連した体重発達の干渉は、観察されなかった。
ＲＯＭＩ８２２６腫瘍細胞の処理後の腫瘍成長は効率の順に減少した：ｈＩｇＧ１ １
ｍｇ／ｋｇ，１４−３６日は２日目ごと（群５）＞ｍｕＩｇＧ２ａ ５ｍｇ／ｋｇ３２−
６８日は２日目ごと（群４）＞ｈＩｇＧ１ ５ｍｇ／ｋｇ ３２−６８日は２日目ごと（
群３）＞ｈＩｇＧ１ １ｍｇ／ｋｇ ３２−６８日は２日目ごと（群２）。群２から４に
おいては、平均腫瘍容積が、処理の終了後に程度の差はあれ再び増加した。

Claims (1)

1. ＣＤ３８のアミノ酸４４−６６、８２−９４、１４２−１５４、１４８−１６４、１
   ５８−１７０、１９２−２０６及び２０２−２２４からなる群から選択されるアミノ酸配
   列から本質的になる、ＣＤ３８の単離されたエピトープ。

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