JP2014507117A - 新規モジュレーターと使用の方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、そのそれぞれがその全体において参照により本明細書に組み込まれる、米国仮特許出願シリアル番号:61/421,157(2010年12月8日出願)及び特許協力条約(PCT)番号:PCT/US2011/050451(2011年9月2日出願)に対する優先権を主張する。
本出願は、EFS−WebよりASCII形式で提出されて、その全体において参照により本明細書に組み込まれる「配列表」を含有する。2011年11月22日に作成された前記ASCIIコピーは、11200PCT.txtと指定されて、サイズは80,102バイトである。
本出願は、新規組成物と、過剰増殖性障害とその拡張、再発(recurrence)、再燃(relapse)、又は転移を予防、治療、又は改善することにおけるそれらの使用の方法に概して関する。広い側面において、本発明は、新生物障害の治療又は予防のためのエフリンAリガンド(EFNA)モジュレーター(抗EFNA抗体及び融合構築体が含まれる)の使用に関する。特に、本発明の好ましい態様は、腫瘍始原細胞頻度の低下を含んでなる、悪性腫瘍の免疫療法的治療への、そのようなEFNAモジュレーターの使用を提供する。
a.前記被検者より組織試料を入手する工程;
b.該組織試料を少なくとも1つのEFNAモジュレーターと接触させる工程;及び
c.該試料と会合したEFNAモジュレーターを検出又は定量する工程を含んでなる。
本発明は、多くの異なる形態で具現化され得るが、本明細書に開示するのは、本発明の諸原理を具体化する、本発明の例示の具体的態様である。本発明が例証される具体的態様に限定されないことが強調されるべきである。さらに、本明細書に使用するどのセクション見出しも、編成上の目的のみのためであって、記載される主題を限定するものと解釈してはならない。
I型膜貫通タンパク質であるエフリン受容体チロシンキナーゼ(EPH)は、動物ゲノム内で最大の受容体チロシンキナーゼのファミリーを含み、やはり細胞表面に会合しているエフリンリガンド(EFN)と相互作用する。EPHサブファミリー中の受容体は、典型的には、単一のキナーゼドメイン、並びにCysリッチドメイン及び2つのフィブロネクチンIII型リピートを含有する細胞外領域を有する。慣例によれば、エフリン受容体は、その細胞外ドメイン配列とエフリンAリガンド及びエフリンBリガンドへ結合するそれらの親和性の類似性に基づいて、2つの群へ分けられる。これまでの研究は、EPH媒介性シグナル伝達事象が、特に神経系において、胚発生の多重の側面を制御して、細胞の付着、形状、及び移動性を調節する細胞間連絡の重要なメディエーターであることを示した。さらに、エフリン受容体ファミリーの多くのメンバーは、エフリンリガンドとは対照的に、癌の発症及び進行の重要なマーカー及び/又は制御因子として同定されてきた。今日まで、9種のエフリンA受容体と6種のエフリンB受容体が知られている。
先行技術の教示とは対照的に、本発明は、腫瘍始原細胞、そして特に腫瘍永続化細胞に標的指向して、それによって新生物障害の治療、管理、又は予防を促進するのに特に有用であるEFNAモジュレーターを提供する。より具体的には、先に示したように、驚くべきことに、特定の腫瘍細胞亜集団は、EFNAを発現して、癌幹細胞の自己再生と細胞の生存に重要なモルフォゲンシグナル伝達の局在化調整を変化させる可能性があることが見出された。このように、好ましい態様では、EFNAのモジュレーターを本教示に従って使用して、腫瘍始原細胞頻度を低下させて、それによって過剰増殖性疾患の治療又は管理を促進することができる。
いずれにしても、本発明は、いくつかのEFNA関連悪性腫瘍のいずれもの診断、治療及び/又は予防のためのEFNAモジュレーター(EFNAアンタゴニストが含まれる)の使用へ向けられる。開示モジュレーターは、単独で使用しても、化学療法剤又は免疫療法剤又は生物学的応答調節物質のような多種多様な抗癌化合物と一緒に使用してもよい。他の選択された態様では、2以上の別々のEFNAモジュレーターを組み合わせて使用して増強された抗新生物効果をもたらす場合もあれば、それを使用して多重特異性の構築体を作製する場合もある。
a.概説
先に述べたように、本発明の特に好ましい態様は、EFNAモジュレーターを抗体の形態で含む。抗体という用語は最も広義に使用されて、具体的には、合成抗体、モノクローナル抗体、オリゴクローナル又はポリクローナル抗体、マルチクローナル抗体、組換え産生抗体、細胞内抗体、多重特異性抗体、二重特異性抗体、一価抗体、多価抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、CDR移植抗体(CDR-grafted antibody)、霊長類化抗体、Fab断片、F(ab’)断片、単鎖FvFcs(scFvFc)、単鎖Fvs(scFv)、抗イディオタイプ(抗Id)抗体、及び(所望される生理活性、即ち、EFNAとの会合又は結合を示す限りにおいて)他のあらゆる免疫学的に活性な抗体断片を網羅する。より広義において、本発明の抗体には、免疫グロブリン分子と免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な断片(即ち、抗原結合部位を含有する分子)が含まれて、ここでこれらの断片は、限定されないが、Fc領域又はその断片が含まれる、別の免疫グロブリンドメインへ融合してもしなくてもよい。さらに、本明細書においてより詳しく概説されるように、抗体及び抗体(複数)という用語には、具体的には、下記に記載のようなFc変異体が含まれ、完全長の抗体と、Fc領域又はその断片を含んでなり、少なくとも1つのアミノ酸残基修飾を含んでもよく、そして免疫グロブリンの免疫学的に活性な断片へ融合してもよい、変異体Fc融合体が含まれる。
よく知られているように、本明細書の教示に従った抗体を提供するには、ウサギ、マウス、ラット、等が含まれる様々な宿主動物に接種して、これを使用してよい。免疫学的応答を高めるために使用し得る、当該技術分野で知られたアジュバントには、接種される種に依存して、限定されないが、フロイント(完全及び不完全)アジュバント、水酸化アルミニウムのような鉱物ゲル剤、リゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油乳剤、スカシ貝ヘモシアニン、ジニトロフェノールのような界面活性物質、並びにBCG(カルメット・ゲラン桿菌)及びコリネバクテリウム・パルブム(corynebacterium parvum)のような、潜在的に有用なヒトアジュバントが含まれる。このようなアジュバントは、抗原を局所の貯蔵部位(deposit)へ隔離することによってその速やかな拡散を防ぐ場合もあれば、マクロファージにとって走化性である因子や免疫系の他の成分を分泌するように宿主を刺激する物質を含有する場合もある。好ましくは、ポリペプチドを投与するならば、免疫化のスケジュールは、該ポリペプチドの2回以上の投与が数週にわたって行われることを伴う。
本発明のある側面と併せてポリクローナル抗体を使用してよいが、好ましい態様は、EFNA反応性モノクローナル抗体の使用を含む。本明細書に使用するように、「モノクローナル抗体」又は「mAb」という用語は、実質的に同種の抗体の集団より得られる抗体を意味し、即ち、この集団を含んでなる個々の抗体は、微量に存在し得る可能な突然変異(例、天然に存在する突然変異)以外は、同一である。このように、「モノクローナル」という修飾語は、別々の抗体の混合物ではないという抗体の特徴を示して、どの種類の抗体と併せて使用してもよい。ある態様において、そのようなモノクローナル抗体には、EFNAと結合又は会合するポリペプチド配列を含んでなる抗体が含まれて、ここでEFNA結合ポリペプチド配列は、複数のポリペプチド配列からの単一の標的結合ポリペプチド配列の選択が含まれる方法によって入手される。
別の態様において、本発明の抗体は、少なくとも2つの異なる種又は種類の抗体からの共有結合したタンパク質セグメントに由来するキメラ抗体を含んでよい。本明細書に使用するように、「キメラ抗体」という用語は、重鎖及び/又は軽鎖の一部が特別な種に由来するか又は特別な抗体クラス又はサブクラスに属する抗体中の対応配列と同一又は相同である一方で、この鎖(複数)の残りは、別の種に由来するか又は別の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体、並びにそのような抗体の断片(それらが所望される生理活性を示す限りにおいて)の中の対応配列と同一又は相同である構築体へ向けられると理解されよう(米国特許第4,816,567号;Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 6851-6855 (1984))。1つの例示態様において、本明細書の教示に従うキメラ抗体は、マウスのVH及びVLアミノ酸配列とヒトの供給源に由来する定常領域を含んでよい。他の適合可能な態様において、本発明のキメラ抗体は、下記に記載のようなCDR移植抗体又はヒト化抗体を含んでよい。
CDR移植抗体に似ているのがヒト化抗体である。一般的に言えば、ヒト化抗体は、初めは非ヒト動物において作製されたモノクローナル抗体より産生する。本明細書に使用するように、非ヒト(例、マウス)抗体のヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含有するキメラ抗体である。1つの態様において、ヒト化抗体は、レシピエント抗体のCDRからの残基が、所望される特異性、親和性、及び/又は能力を有する、マウス、ラット、ウサギ、又はヒト霊長動物のような非ヒト種(ドナー抗体)のCDRからの残基に置き換わっている、ヒト免疫グロブリン(レシピエント又はアクセプター抗体)である。
上述した抗体に加えて、当業者は、本発明の抗体が完全ヒト抗体を含み得ることを理解されよう。本出願の目的では、「ヒト抗体」という用語は、ヒトによって産生された、及び/又は本明細書に開示するようなヒト抗体を作製するための技術のいずれも使用して作製された抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を保有する抗体を含む。このヒト抗体の定義は、具体的には、非ヒト抗原結合残基を含んでなるヒト化抗体を排除する。
当該抗体モジュレーターをどのように入手したとしても、またそれが上述した形態(例、ヒト化、ヒト、等)のいずれを採るとしても、開示モジュレーターの好ましい態様は、様々な特徴を示す可能性がある。この点に関して言えば、抗EFNA抗体産生細胞(例、ハイブリドーマ又は酵母コロニー)を、例えば、活発な増殖、高い抗体産生、及び(下記により詳しく考察するような)望ましい抗体特徴が含まれる望ましい特徴について選択し、クローン化して、さらにスクリーニングしてよい。ハイブリドーマは、同系遺伝子の動物、免疫系を欠損している動物(例、ヌードマウス)において in vivo で、又は細胞培養において in vitro で拡充させることができる。そのそれぞれが別々の抗体種を産生するハイブリドーマ及び/又はコロニーを選択する、クローン化する、及び拡充させる方法は、当業者に周知である。
特に好ましい態様において、本発明のモジュレーターは、中和抗体又はその誘導体若しくは断片を含む。「中和抗体」又は「中和アンタゴニスト」という用語は、エフリンAリガンドへ結合するか又はそれと相互作用してリガンドのその結合相手(例、EPHA受容体)への結合又は会合を防ぐことによって、これら分子の相互作用より生じるはずの生体応答を妨害する抗体又はアンタゴニストを意味する。抗体又はその免疫学的に機能的な断片若しくは誘導体の結合と特異性について評価する場合、抗体又は断片がリガンドのその結合相手又は基質への結合を実質的に阻害するのは、例えば、in vitro 競合結合アッセイ(例えば、本明細書の実施例9〜12を参照のこと)で測定されるように、過剰の抗体が標的分子へ結合する結合相手の量を少なくとも約20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、97%、又は99%以上低下させるときである。例えば、EFNA4に対する抗体の場合、中和抗体又はアンタゴニストは、好ましくは、EphA4へ結合するEFNA4の能力を少なくとも約20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、97%、又は99%以上減少させる。この減少した活性は、当該技術分野で認められた技術を使用して直接測定しても、そのような低下がEPH(例、EPHA4)受容体活性に及ぼす影響によって測定してもよいと理解されよう。
選択されるエフリンAリガンド又はそれらのアイソフォームが可溶型で存在する場合があることを示す証拠はあるが、少なくともある種のEFNA(例、EFNA1及びEFNA4)は、細胞表面と会合した状態にあるようであり、それにより開示モジュレーターの内在化を可能にしている。従って、本発明の抗EFNA抗体は、エフリンAリガンドを発現する細胞によって、少なくともある程度は、内在化され得る。例えば、腫瘍始原細胞の表面上のEFNA4へ結合する抗EFNA4抗体は、腫瘍始原細胞によって内在化され得る。特に好ましい態様では、そのような抗EFNA抗体を、内在化と同時に細胞を殺傷する細胞傷害性部分のような抗癌剤と会合させるか又はそれへコンジュゲートさせてよい。
他の好ましい態様において、本発明のモジュレーターは、枯渇性抗体又はその誘導体若しくは断片を含む。「枯渇性抗体」という用語は、細胞表面の上又は近くにあるEFNAへ結合するか又はそれと会合して、該細胞の死滅又は消失を(例えば、補体依存性細胞傷害又は抗体依存性細胞傷害によって)誘発する、促進する、又は引き起こす抗体又は断片を意味する。下記により詳しく考察するいくつかの態様において、選択した枯渇性抗体は、細胞傷害剤へ会合又はコンジュゲートされる。好ましくは、枯渇性抗体は、ある一定の細胞集団において、少なくとも20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、97%、又は99%の腫瘍永続化細胞を枯渇する、消失させる、又は殺傷する。いくつかの態様において、この細胞集団は、濃縮、分画、精製、又は単離された腫瘍永続化細胞を含んでよい。他の態様において、この細胞集団は、腫瘍永続化細胞を含む腫瘍試料全体又は異種の腫瘍抽出物を含んでよい。当業者は、下記の実施例(例、実施例16)に記載のような標準の生化学技術を本明細書の教示に従って使用して、腫瘍形成細胞又は腫瘍永続化細胞の枯渇をモニターして定量し得ることを理解されよう。
開示される抗EFNA抗体は、選択された標的(複数)によって提示される別々のエピトープ又は決定基と会合するか又はそれへ結合するとさらに理解されよう。本明細書に使用するように、エピトープという用語は、特別の抗体によって認識されて特異的に結合されることが可能な標的抗原のその部分を意味する。抗原がEFNAのようなポリペプチドである場合、エピトープは、連続したアミノ酸からも、タンパク質の三次元フォールディングによって並列される不連続アミノ酸からも形成され得る。連続したアミノ酸より形成されるエピトープがタンパク質の変性時に典型的には保持されるのに対し、三次元フォールディングによって形成されるエピトープは、タンパク質の変性時に典型的には失われる。エピトープには、典型的には、少なくとも3個、そしてより通常は、少なくとも5又は8個〜10個のアミノ酸が独自の空間コンホメーションに含まれる。より具体的には、当業者は、エピトープという用語には、免疫グロブリン又はT細胞受容体へ特異結合するか又は他の方法で分子と相互作用することが可能などのタンパク質決定基も含まれると理解されよう。エピトープの決定基は、一般的には、アミノ酸又は炭水化物又は糖側鎖のような分子の化学的に活性な表面配置からなり、一般的には、特異的な三次元構造上の特性、並びに特異的な荷電特性を有する。追加的に言えば、エピトープは、線状でも高次構造状でもよい。線状エピトープでは、該タンパク質と相互作用分子(抗体のような)の間の相互作用点のすべてが該タンパク質の一次アミノ酸配列に沿って線状に生じる。高次構造状エピトープでは、相互反応の点が、直線的には互いに分離しているタンパク質上のアミノ酸残基の全体で生じる。
e.結合親和性
この点に関して言えば、本発明には、選択されるEFNAに対して(又は、汎抗体の場合は、1種より多いエフリンAリガンドに対して)高い結合親和性を有する抗体の使用がさらに含まれる。本発明の抗体がその標的抗原へ特異的に結合すると言われるのは、解離定数:Kd(koff/kon)が≦10−8Mであるときである。この抗体は、Kdが≦5x10−9Mであるときには高い親和性で、そしてKdが≦5x10−10Mであるときはきわめて高い親和性で抗原へ特異的に結合する。本発明の1つの態様において、該抗体は、10−9M以下のKdと約1x10−4/秒のオフ速度を有する。本発明の1つの態様において、オフ速度は、<1x10−5/秒である。本発明の他の態様において、該抗体は、EFNAへ約10−8Mと10−10Mの間のKdで結合して、なお別の態様において、それは、2x10−10M以下のKdで結合する。本発明のなお他の選択される態様は、10−2M未満、5x10−2M未満、10−3M未満、5x10−3M未満、10−4M未満、5x10−4M未満、10−5M未満、5x10−5M未満、10−6M未満、5x10−6M未満、10−7M未満、5x10−7M未満、10−8M未満、5x10−8M未満、10−9M未満、5x10−9M未満、10−10M未満、5x10−10M未満、10−11M未満、5x10−11M未満、10−12M未満、5x10−12M未満、10−13M未満、5x10−13M未満、10−14M未満、5x10−14M未満、10−15M、又は5x10−15M未満の解離定数又はKd(koff/kon)を有する抗体を含む。
上述した結合特性に加えて、抗EFNA抗体とその断片は、すべてのポリペプチドのように、一般的にはポリペプチドが実効電荷を担わないときのpHとして定義される、等電点(pI)を有する。当該技術分野では、溶液のpHがタンパク質の等電点(pI)に等しい場合、典型的には該タンパク質の溶解度が最低になることが知られている。故に、抗体中のイオン化可能な残基の数と位置を改変してpIを調整することによって溶解度を最適化することが可能である。例えば、ポリペプチドのpIは、適正なアミノ酸置換を施すことによって(例えば、アラニンのような非電荷残基にリジンのような荷電アミノ酸を代用することによって)操作することができる。どの特別な理論にも束縛されることを望まずに言えば、抗体のpIの変化をもたらす前記抗体のアミノ酸置換は、該抗体の溶解度及び/又は安定性を改善する場合がある。当業者は、ある特別な抗体が所望のpIを達成するのにどのアミノ酸置換が最も適正であるかを理解されよう。
抗体のFabドメインのTmは、抗体の熱安定性の良好な指標であり得、さらに貯蔵寿命の目安となり得ることがさらに理解されよう。Tmは、所与のドメイン又は配列の50%アンフォールディングの温度に他ならない。Tmが低いほどより多くの凝集/より少ない安定性を示すのに対し、Tmが高いほど、より少ない凝集/より大きな安定性を示す。従って、より高いTmを有する抗体又はその断片若しくは誘導体が好ましい。さらに、当該技術分野で認められた技術を使用して、抗EFNA抗体又はそのドメインの組成を改変して、分子安定性を高めるか又は最適化することが可能である。例えば、米国特許第7,960,142号を参照のこと。このように、1つの態様において、選択した抗体のFabドメインは、少なくとも50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、75℃、80℃、85℃、90℃、95℃、100℃、105℃、110℃、115℃、又は120℃より高いTm値を有する。別の態様において、抗体のFabドメインは、少なくとも約50℃、約55℃、約60℃、約65℃、約70℃、約75℃、約80℃、約85℃、約90℃、約95℃、約100℃、約105℃、約110℃、約115℃又は約120℃より高いTm値を有する。当該技術分野で公知の標準法を使用して、例えば、示差走査熱量測定(例えば、いずれも参照により本明細書に組み込まれる、Vermeer et al., 2000, Biophys. J. 78: 394-404; Vermeer et al., 2000, Biophys. J. 79: 2150-2154 を参照のこと)によって、タンパク質ドメイン(例、Fabドメイン)の熱融解温度(Tm)を測定することができる。
本発明の薬剤が、インタクト融合構築体、抗体、断片、又は誘導体のいずれを含むとしても、選択したモジュレーターは、EFNAと反応する、結合する、組み合わさる、複合する、接続する、付着する、一緒になる、相互作用する、又は他の方法で会合して、それによって所望の抗新生物効果をもたらす。当業者は、抗EFNA抗体を含んでなるモジュレーターが該抗体上で発現される1以上の結合部位を介してEFNAと相互作用するか又は会合することを理解されよう。より具体的には、本明細書に使用するように、「結合部位」という用語は、対象の標的分子(例、酵素、抗原、リガンド、受容体、基質、又は阻害剤)へ選択的に結合することの原因となるポリペプチドの領域を含む。結合ドメインは、少なくとも1つの結合部位を含む(例えば、インタクトIgG抗体は、2つの結合ドメインと2つの結合部位を有するものである)。例示の結合ドメインには、抗体の可変ドメイン、リガンドの受容体結合ドメイン、受容体のリガンド結合ドメイン、又は酵素ドメインが含まれる。本発明の目的では、EFNAの典型的な活性領域は、(例えば、Fc−EFNA融合構築体の一部として)基質(例、Eph受容体)の結合部位を含み得る。
本発明を実施するのに、どの形態のモジュレーター(例、キメラ、ヒト化、等)を選択しても、その免疫反応性断片は、本明細書の教示に従って使用し得ると理解されよう。最も広義において、「抗体断片」という用語は、インタクト抗体(例、天然に存在する免疫グロブリン)の少なくとも一部を含む。より具体的には、「断片」という用語は、インタクト又は完全な抗体又は抗体鎖より少ないアミノ酸残基を含んでなる抗体又は抗体鎖(又は、Fc融合の場合はEFNA分子)の一部又は部分を意味する。「抗原結合断片」という用語は、抗原と結合するか又はインタクト抗体と(即ち、それらが導かれたインタクト抗体と)抗原結合(即ち、特異結合)について競合する、免疫グロブリン又は抗体のポリペプチド断片を意味する。本明細書に使用するように、「抗体分子の断片」という用語には、抗体の抗原結合断片、例えば、抗体軽鎖(VL)、抗体重鎖(VH)、単鎖抗体(scFv)、F(ab’)2断片、Fab断片、Fd断片、Fv断片、単ドメイン抗体断片、二重特異性抗体、線状抗体、単鎖抗体分子、及び抗体断片より生成される多重特異性抗体が含まれる。同様に、EFNAの活性断片は、EFNA基質又は受容体と相互作用してインタクトEFNAのそれと似た様式でそれらを修飾する(やや低い効率であるかもしれないが)その能力を保持するEFNA分子の一部を含む。
別の態様では、本発明のモジュレーターが一価でも多価(例、二価、三価、等)でもよいことがさらに理解されよう。本明細書に使用するように、「結合価」という用語は、抗体と会合する潜在的な標的(即ち、EFNA)結合部位の数を意味する。それぞれの標的結合部位は、1つの標的分子、又は標的分子上の特定の位置又は座へ特異的に結合する。本発明の抗体が1より多い標的結合部位を含む(多価)とき、それぞれの標的結合部位は、同じ分子か又は異なる分子へ特異的に結合し得る(例えば、異なるリガンド又は異なる抗原へ、又は同じ抗原上の異なるエピトープ又は位置へ結合し得る)。本発明の目的では、主題の抗体は、好ましくは、ヒトEFNAに特異的な少なくとも1つの結合部位を有する。1つの態様において、本発明の抗体は、その分子のそれぞれの結合部位が単一のEFNAの位置又はエピトープへ特異的に結合するという点で一価であろう。他の態様において、該抗体は、それらが1より多い結合部位と、単一より多い位置又はエピトープと特異的に会合する異なる結合部位を含むという点で多価であろう。そのような場合は、選択したEFNAポリペプチド又はスプライス変異体に多重エピトープが存在し得るか、又はEFNA上に単一エピトープが存在し得る一方で、別の分子又は表面上に第二の異なるエピトープが存在し得る。例えば、米国特許第2009/0130105号を参照のこと。
a.Fc領域及びFc受容体
上記に示した、開示モジュレーター(例、Fc−EFNA又は抗EFNA抗体)の可変又は結合領域に対する様々な修飾、置換、付加、又は削除に加えて、当業者は、本発明の選択態様が定常領域(即ち、Fc領域)の置換又は修飾も含み得ることを理解されよう。より具体的には、本発明のEFNAモジュレーターは、限定されないが、改変した薬物動態、増加した血清半減期、増加した結合親和性、低下した免疫原性、増加した産生、改変したFcリガンド結合、増強又は低下したADCC又はCDC活性、改変したグリコシル化及び/又はジスルフィド結合、及び変化した結合特異性が含まれる、好ましい特徴のある化合物をもたらす1以上の追加のアミノ酸残基置換、突然変異及び/又は修飾をとりわけ含有してよいと考慮される。この点に関して言えば、これらのFc変異体を有利にも使用して、開示モジュレーターの有効な抗新生物特性を高めることができると理解されよう。
本明細書に使用するように、補体依存性細胞傷害及びCDCは、補体の存在下での標的細胞の溶解に関連する。この補体活性化経路は、補体系の第一成分(C1q)が、例えば、コグネイト抗原と複合した分子、抗体へ結合することによって始動される。補体活性化を評価するには、例えば、Gazzano-Santoro et al., 1996, J. Immunol. Methods, 202: 163 に記載のようなCDCアッセイを実施することができる。
なお他の態様では、本発明の抗体のグリコシル化の様式又は組成が修飾される。より具体的には、本発明の好ましい態様は、1以上の工学処理された糖型、即ち、Fc領域を含んでなる分子へ共有結合的に付加される、改変したグリコシル化様式又は改変した炭水化物組成を含んでよい。工学処理された糖型は、限定されないが、エフェクター機能を増強又は低下させること、抗体の標的抗原への親和性を高めること、又は抗体の産生を高めることが含まれる、多様な目的に有用であり得る。低下したエフェクター機能が所望される事例では、その分子が非グリコシル化型で発現されるように工学処理し得ることが理解されよう。そのような炭水化物修飾は、例えば、抗体配列内のグリコシル化の1以上の部位を改変することによって達成することができる。即ち、1以上の可変領域フレームワークグリコシル化部位の消失をもたらすことによってその部位でのグリコシル化を消失させる、1以上のアミノ酸置換を行うことができる(例えば、米国特許第5,714,350号及び6,350,861号を参照のこと)。逆に、1以上の追加のグリコシル化部位において工学処理することによって、Fc含有分子へエフェクター機能の増強又は結合の改善を付与することができる。
a.概論
慣用の手順を使用して(例えば、抗体重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子へ特異的に結合することが可能であるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって)、所望のEFNAモジュレーターをコードするDNAを容易に単離して配列決定することができる。単離されてサブクローン化されたハイブリドーマ細胞(又はファージ若しくは酵母由来のコロニー)は、そのモジュレーターが抗体であれば、そのようなDNAの好ましい供給源として役立つ場合がある。所望されるならば、この核酸を本明細書に記載のようにさらに操作して、融合タンパク質、又はキメラ、ヒト化、又は完全ヒト抗体が含まれる薬剤を創出することができる。より具体的には、単離DNA(修飾されている場合がある)を使用して、米国特許第7,709,611号に記載のような製造抗体のために、定常及び可変領域の配列をクローン化することができる。
示したように、本発明は、他の核酸へ特別なハイブリダイゼーション条件の下でハイブリダイズする核酸をさらに提供する。当該技術分野では、核酸をハイブリダイズさせる方法が周知である。例えば、「分子生物学の最新プロトコール(Current Protocols in Molecular Biology)」ジョン・ウィリー・アンド・サンズ、ニューヨーク(1989)、6.3.1-6.3.6 を参照のこと。本出願の目的では、中等度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件が、5x塩化ナトリウム/クエン酸ナトリウム(SSC)、0.5% SDS、1.0mM EDTA(pH8.0)を含有するプレ洗浄溶液、約50%ホルムアミド、6xSSCのハイブリダイゼーション緩衝液と55℃のハイブリダイゼーション温度(又は、約50%ホルムアミドを含有するもののような他の同様のハイブリダイゼーション溶液を42℃のハイブリダイゼーション温度で)と、0.5xSSC、0.1% SDS中で60℃の洗浄条件を使用する。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件では、6xSSC中45℃でハイブリダイズさせることに、0.1xSSC、0.2% SDS中68℃での1回以上の洗浄を続ける。さらに、当業者は、ハイブリダイゼーション及び/又は洗浄条件を操作して、互いに少なくとも65、70、75、80、85、90、95、98、又は99%同一であるヌクレオチド配列を含んでなる核酸が典型的には互いにハイブリダイズしたままであるように、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーを増加又は減少させることができる。より一般的には、本開示の目的では、「核酸配列に関して実質的に同一である」という用語は、参照の核酸配列に対して少なくとも約85%、又は90%、又は95%、又は97%の配列同一性を示すヌクレオチドの配列として解釈され得る。
RNA及び/又はタンパク質又はペプチドを発現する核酸のような核酸と発現制御配列は、前記核酸の発現又は転写が前記発現制御配列の制御下又は影響下にあるような様式でそれらが互いに共有結合的に連結しているならば、互いに機能的に連結している。その核酸が機能的なタンパク質へ翻訳されるならば、発現制御配列機能はコーディング配列へ機能的に連結していて、前記発現制御配列の誘導は、コーディング配列のフレームシフトを引き起こすことも、前記コーディング配列が所望のタンパク質又はペプチドへ翻訳されることが可能でないことも無く、前記核酸の転写をもたらす。
当該技術分野で認められた分子生物学技術と現行のタンパク質発現の方法論を使用して、所望のモジュレーターの実質的な量を産生することができる。より具体的には、上記に記載のように入手されて工学処理される抗体のようなモジュレーターをコードする核酸分子を、様々な種類の宿主細胞を含んでなる、周知の市販されているタンパク質産生系へ導入して、所望の医薬品の前臨床量、臨床量、又は市販量を提供することができる。好ましい態様において、モジュレーターをコードする核酸分子は、選択した宿主細胞中への効率的な組込みと所望されるEFNAモジュレーターの後続の高い発現レベルをもたらすベクター又は発現ベクターの中へ工学処理されると理解されよう。
多くが市販されている、多様な宿主発現ベクター系は、本明細書の教示に適合可能であって、本発明のモジュレーターを発現するために使用し得る。そのような宿主発現系は、対象のコーディング配列が発現されて後に精製される媒体を意味するが、適正なヌクレオチドコーディング配列で形質転換されるか又はトランスフェクトされる場合は、本発明の分子を in situ で発現する細胞も意味する。そのような系には、限定されないが、モジュレーターコーディング配列を含有する、組換えバクテリオファージDNA、プラスミドDNA、又はコスミドDNA発現ベクターで形質転換された細菌(例、大腸菌、枯草菌、ストレプトマイセス)のような微生物;モジュレーターコーディング配列を含有する組換え酵母発現ベクターでトランスフェクトされた酵母(例、サッカロミセス属、ピキア属);モジュレーターコーディング配列を含有する組換えウイルス発現ベクター(例、バキュロウイルス)で感染された昆虫細胞系;モジュレーターコーディング配列を含有する組換えウイルス発現ベクター(例、カリフラワーモザイクウイルス、CaMV;タバコモザイクウイルス、TMV)で感染されたか又はそれを含有する組換えプラスミド発現ベクター(例、Tiプラスミド)でトランスフェクトされた植物細胞系(例、タバコ属、アラビドプシス属、アオウキクサ、トウモロコシ、コムギ、ジャガイモ、等);又は哺乳動物細胞のゲノム由来のプロモーター(例、メタロチオネインプロモーター)又は哺乳動物ウイルス由来のプロモーター(例、アデノウイルス後期プロモーター;ワクシニアウイルス7.5Kプロモーター)を含有する組換え発現構築体を収容する哺乳動物細胞系(例、COS、CHO、BHK、293、3T3細胞)が含まれる。
上述した宿主細胞株以外に、本発明のモジュレーターは、当該技術分野で公知の技術を使用して、化学的に合成し得ることが理解されよう(例えば、Creighton (1983)「タンパク質:構造及び分子の諸原理(Proteins: Structures and Molecular Principles)」W. H. フリーマン社、ニューヨーク、及び Hunkapiller, M., et al.(1984)Nature 310: 105-111 を参照のこと)。例えば、本発明のポリペプチド断片に対応するペプチドをペプチド合成機の使用によって合成することができる。さらに、所望されるならば、ポリペプチド配列中への代用物又は付加物として非典型型アミノ酸又は化学アミノ酸類似体を導入することができる。非典型型アミノ酸には、限定されないが、通常のアミノ酸のD−異性体、2,4−ジアミノ酪酸、a−アミノイソ酪酸、4−アミノ酪酸、Abu、2−アミノ酪酸、g−Abu、e−Ahx、6−アミノヘキサン酸、Aib、2−アミノイソ酪酸、3−アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、ザルコシン、シトルリン、ホモシトルリン、システイン酸、t−ブチルグリシン、t−ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、b−アラニン、フルオロ−アミノ酸、b−メチルアミノ酸、Ca−メチルアミノ酸、Na−メチルアミノ酸のようなデザイナーアミノ酸、並びにアミノ酸類似体全般が含まれる。さらに、アミノ酸は、D(右旋性)でもL(左旋性)でもよい。
本発明のEFNAモジュレーターはまた、対象の免疫グロブリンの重鎖及び軽鎖配列(又は、その断片若しくは誘導体若しくは変異体)についてトランスジェニックである哺乳動物又は植物の産生と、所望の化合物の回収可能形態での産生により、トランスジェニックに産生することができる。哺乳動物中でのトランスジェニック産生に関連して、抗EFNA抗体は、例えば、ヤギ、ウシ、又は他の哺乳動物において産生されて、その乳より回収することができる。例えば、米国特許第5,827,690号、5,756,687号、5,750,172号、及び5,741,957号を参照のこと。いくつかの態様では、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含む非ヒトトランスジェニック動物を上記に記載のようにEFNA又はその免疫原性部分で免疫化する。抗体を植物中で作製する方法については、例えば、米国特許第6,046,037号及び5,959,177号に記載されている。
本明細書に開示する組換え発現技術又は他の技術のいずれによっても本発明のモジュレーターを産生したならば、それは、免疫グロブリンの精製について当該技術分野で公知の如何なる方法によって精製してもよく、又はより一般的には、タンパク質の精製についての如何なる他の標準技術によって精製してもよい。この点に関して言えば、モジュレーターは、単離することができる。本明細書に使用するように、単離EFNAモジュレーターとは、同定されて、その本来の環境の成分より分離及び/又は回収されたものである。その本来の環境の混在成分は、該ポリペプチドの診断又は療法上の使用に干渉し得る物質であって、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性若しくは非タンパク質性の溶質が含まれる場合がある。単離モジュレーターには、該ポリペプチドの本来環境の少なくとも1つの成分も存在していないという理由から、組換え細胞内の in situ モジュレーターが含まれる。
本明細書の教示に従って本発明のモジュレーターを精製したならば、それらは、医薬活性部分又は診断部分、又は生体適合性の修飾剤と連結、融合、コンジュゲートさせる(例えば、共有結合的又は非共有結合的に)、又は他の方法で会合させることができる。本明細書に使用するように、「コンジュゲート(conjugate)」という用語は概括的に使用されて、会合の方法に拘らず、開示モジュレーターと会合したあらゆる分子を意味するものとする。この点に関して言えば、そのようなコンジュゲートは、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、ポリマー、核酸分子、低分子、模倣薬剤、合成薬、無機分子、有機分子、及び放射性同位体を含んでよいと理解されよう。さらに、上記に示したように、選択したコンジュゲートは、モジュレーターへ共有結合的又は非共有結合的に連結してよく、少なくとも一部は、このコンジュゲーションを有効にするために使用される方法に依存して、様々なモル比を示し得る。
好ましい態様において、本発明のモジュレーターは、モジュレーター特徴を所望のように調整、改変、改善、又は加減するために使用し得る、生体適合性の修飾剤とコンジュゲートさせるか又は他の方法で会合させることができる。例えば、市販のポリエチレングリコール(PEG)又は同様の生体適合性ポリマーといった、相対的に分子量が高いポリマー分子を付着させることによって、in vivo 半減期が増加した抗体又は融合構築体を産生することができる。当業者は、該抗体へ特異的な特性を付与する(例えば、半減期を設計することができる)ように選択することが可能である、多くの異なる分子量及び分子配置でPEGを入手し得ることを理解されよう。PEGは、多機能性リンカーを伴うか又は伴わずに、前記抗体又は抗体断片のN若しくはC末端へのPEGの部位特異的なコンジュゲーションによるか、又はリジン残基上に存在するε−アミノ基を介して、モジュレーター又は抗体断片若しくは誘導体へ付着させることができる。生理活性の損失をほとんどもたらさない、線状又は分岐鎖ポリマーの誘導体化を使用してよい。コンジュゲーションの度合いは、SDS−PAGE及び質量分析法によって密接にモニターして、PEG分子の抗体分子への最適なコンジュゲーションを確実にすることができる。未反応のPEGは、例えば、サイズ排除又はイオン交換クロマトグラフィーによって抗体−PEGコンジュゲートより分離することができる。同様の方法で、開示モジュレーターをアルブミンへコンジュゲートさせて、抗体又は抗体断片を in vivo でより安定にするか又はより長い in vivo 半減期を持たせることができる。この技術は、当該技術分野で周知であり、例えば、国際特許公開公報番号:WO93/15199、WO93/15200、及びWO01/77137;及び欧州特許第0413,622号を参照のこと。当業者には、他の生体適合性コンジュゲートが明らかであって、本明細書の教示に従って容易に確定することができる。
他の好ましい態様では、本発明のモジュレーター又はその断片若しくは誘導体を、診断又は検出可能な薬剤、生体分子であり得るマーカー又はレポーター(例、ペプチド又はヌクレオチド)、低分子、フルオロフォア、又は放射性同位体へコンジュゲートする。標識化モジュレーターは、過剰増殖性障害の発症又は進行をモニターするのに、又は開示モジュレーターが含まれる特別な療法の効力を決定するための臨床検査手技(即ち、診断・治療)の一部として有用であり得る。そのようなマーカー又はレポーターは、選択したモジュレーターを精製すること、TICを分離又は単離すること、又は前臨床手順又は毒性試験においても有用であり得る。
先に述べたように、当該モジュレーター又はその断片若しくは誘導体はまた、抗癌剤、細胞毒素又は細胞傷害剤(例、細胞増殖抑制剤又は細胞致死剤)、治療薬剤、又は放射活性金属イオン(例、α又はβ−放出体)のような治療薬部分へコンジュゲート、連結、又は融合させるか又は他の方法でそれと会合させてよい。本明細書に使用するように、細胞毒素又は細胞傷害剤には、細胞に有害であって、細胞の増殖又は生存を阻害し得るあらゆる薬剤又は治療薬部分が含まれる。例には、パクリタキセル、サイトカラシンB、グラミシジンD、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシン、DM−1a及びDM−4(Immunogen 社)のようなメイタンシノイド類、ジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンD、1−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、エピルビシン、及びシクロホスファミドとこれらの類似体又は相同体が含まれる。追加の細胞毒素は、モノメチルアウリスタチンE(MMAE)及びモノメチルアウリスタチンF(MMAF)(Seattle Genetics 社)が含まれるアウリスタチン類、α−アマンチン、β−アマンチン、γ−アマンチン又はε−アマンチン(Heidelberg Pharma AG)のようなアマンチン類、デュオカマイシン誘導体(Syntarga, B. V.)のようなDNA副溝結合剤、及び修飾されたピロロベンゾジアピン二量体(PBD、Spirogen 社)を含む。さらに、1つの態様において、本発明のEFNAモジュレーターは、抗CD3結合分子と会合して細胞傷害性T細胞を動員して、それらを腫瘍始原細胞へ標的指向させることができる(BiTE技術;例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Fuhrmann, S. et. al. AACR年次会合抄録番号:5625(2010)を参照のこと)。
a.診断
示したように、本発明は、過剰増殖性障害を検出する、診断する、又はモニターするための in vitro 又は in vivo の方法と、TPCが含まれる腫瘍形成細胞を同定するために患者由来の細胞についてスクリーニングする方法を提供する。そのような方法には、患者又は患者より入手した試料を本明細書に記載のような選択したEFNAモジュレーターと接触させて、試料中の結合型又は遊離エフリンAリガンドへの該モジュレーターの会合の存在又は非存在、又はそのレベルを検出することを含んでなる、癌の治療又はその進行のモニタリングのために癌を有する個体を同定することが含まれる。該モジュレーターが抗体又はその免疫学的に活性な断片を含む場合、試料中の特別なEFNAとの会合は、該試料が腫瘍永続化細胞(例、癌幹細胞)を含有し得る可能性があることを示し、癌を有する個体が本明細書に記載のようなEFNAモジュレーターで効果的に治療され得ることを示唆する。この方法は、対照への結合のレベルを比較する工程をさらに含んでよい。逆に、選択したモジュレーターがFc−EFNAである場合、試料との接触時に、選択したエフリンAリガンドの結合特性を(in vivo 又は in vitro で直接的又は間接的に)利用してモニターして、所望の情報を得ることができる。当該技術分野では、本明細書の教示と適合可能な他の診断又はセラグノーシスの方法が周知であり、専用のレポーティング系のような市販の材料を使用して、実践することができる。
当該EFNAモジュレーターとそれを含んでなる細胞、培養物、集団、並びに組成物(それらの子孫が含まれる)はまた、エフリンAリガンド(例えば、そのポリペプチド又は遺伝成分)と相互作用することによって腫瘍始原細胞又はその子孫の機能又は活性に影響を及ぼす化合物又は薬剤(例、薬物)をスクリーニングするか又は同定するために使用することができる。故に、本発明は、EFNA又はその基質と会合することによって腫瘍始原細胞又はその子孫の機能又は活性に影響を及ぼし得る化合物又は薬剤の評価又は同定のためのシステム及び方法をさらに提供する。そのような化合物及び薬剤は、例えば、過剰増殖性障害の治療についてスクリーニングされる薬物候補であり得る。1つの態様において、システム又は方法には、EFNAを明示する腫瘍始原細胞と化合物又は薬剤(例、薬物)が含まれ、ここで該細胞と化合物又は薬剤(例、薬物)は、互いに接触している。
a.製剤と投与経路
モジュレーターの形態、並びに任意選択のコンジュゲート、企図される送達形式、治療又はモニターされる疾患、及び他の数多くの変数に依存して、本発明の組成物は、当該技術分野で認められた技術を使用して、所望されるように製剤化してよい。即ち、本発明の様々な態様では、EFNAモジュレーターを含んでなる組成物を多種多様な医薬的に許容される担体とともに製剤化する(例えば、Gennaro「レミントン:調剤の科学と実践:事実と比較(Remington: The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons)」Drugfacts Plus, 第20版 (2003); Ansel et al.「医薬剤形と薬物送達系(Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems)」第7版、Lippencott Williams and Wilkins(監修)(2004); Kibbe et al.「医薬賦形剤の手引き(Handbook of Pharmaceutical Excipients)」第3版、Pharmaceutcal Press (2000) を参照のこと)。媒体、アジュバント、及び希釈剤が含まれる、様々な医薬的に許容される担体が数多くの市販供給源より容易に利用可能である。さらに、pH調整剤及び緩衝剤、張度調整剤、安定化剤、湿潤剤、等のような、医薬的に許容される補助物質の取り合わせも利用可能である。ある非限定的な例示の担体には、生理食塩水、緩衝化生理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、及びこれらの組合せが含まれる。
同様に、特別な投与レジメン(即ち、用量、時機、及び反復)は、特別な個体とその個体の治療歴に依存するものである。投与量の決定には、薬物動態(例、半減期、クリアランス速度、等)のような経験的な考慮事項が寄与する。投与の頻度は、療法の経過にわたって決定して調整してよくて、腫瘍始原細胞が含まれる過剰増殖性細胞又は新生物細胞の数を低下させること、そのような新生物細胞の低下を維持すること、新生物細胞の増殖を低下させること、又は転移の発現を遅らせることに基づく。あるいは、主題の治療組成物の持続した連続放出製剤が適正であり得る。上記に述べたように、当該技術分野では、持続放出を達成するための様々な製剤及びデバイスが公知である。
本発明によって考慮される組合せ療法は、望まれない新生物細胞増殖(例、内皮細胞)を減少させるか又は阻害すること、癌の発生を減少させること、癌の再発を減少させるか又は予防すること、又は癌の広がり又は転移を減少させるか又は予防することに特に有用であり得る。そのような場合、本発明の化合物は、腫瘍塊(例、NTG細胞)を支援して永続化させるTPCを除去することによって増感剤又は化学増感剤として機能し得て、現行の標準治療の腫瘍減量剤又は抗癌剤のより有効な使用を可能にし得る。即ち、EFNAモジュレーターと1以上の抗癌剤を含んでなる組合せ療法を使用して、定着した癌を減衰させる(例えば、存在する癌細胞の数を減少させる、及び/又は腫瘍負荷を減少させる)、又は癌の少なくとも1つの徴候又は副作用を改善することができる。このように、組合せ療法は、EFNAモジュレーターと1以上の抗癌剤(限定されないが、細胞傷害剤、細胞増殖抑制薬剤、化学療法剤、標的化抗癌剤、生物学的応答調節物質、免疫療法剤、癌ワクチン、抗血管新生剤、サイトカイン、ホルモン療法、放射線療法、及び抗転移剤が含まれる)の投与に関連する。
本明細書に使用するように、「抗癌剤」という用語は、癌のような細胞増殖性障害を治療するために使用し得るあらゆる薬剤を意味し、細胞傷害剤、細胞増殖抑制薬剤、抗血管新生剤、腫瘍減量剤、化学療法剤、放射線療法と放射線療法剤、標的化抗癌剤、生物学的応答調節物質、抗体、及び免疫療法剤が含まれる。上記に考察したような選択態様では、抗癌剤がコンジュゲートを含む場合があって、投与に先立ってモジュレーターと会合させてよいと理解されよう。
本発明はまた、放射線療法(即ち、γ線照射、X線、UV照射、マイクロ波、電子放出、等といった、DNA損傷を腫瘍細胞内で局所的に誘発するあらゆる機序)とEFNAモジュレーターの組合せを提供する。腫瘍細胞へ指向された放射性同位体の送達を使用する組合せ療法も考慮されて、標的指向された抗癌剤又は他の標的化手段と共に使用してよい。典型的には、放射線療法は、約1〜約2週の時間帯にわたりパルスで投与される。放射線療法は、頭頚部癌を有する被検者へ約6〜7週の間投与することができる。放射線療法は、単一用量として投与してもよく、多数回の連続用量として投与してもよい。
単独、又は抗癌剤又は放射線療法との組合せのいずれで投与しても、本発明のEFNAモジュレーターは、一般的には、良性又は悪性の腫瘍(例、腎癌、肝臓癌、腎臓癌、膀胱癌、乳癌、胃癌、卵巣癌、結直腸癌、前立腺癌、膵臓癌、肺癌、甲状腺癌、肝細胞癌;肉腫;膠芽腫;及び様々な頭頚部腫瘍);白血病とリンパ系悪性腫瘍;神経細胞、神経膠細胞、星状細胞、視床下部、及び他の腺、マクロファージ、上皮、間質、及び割腔の障害のような他の障害;並びに、炎症性障害、血管新生障害、免疫障害、及び病原体によって引き起こされる障害が含まれ得る、患者又は被検者の新生物状態を全般的に治療するのに特に有用である。本発明の治療組成物及び方法での治療に特に好ましい標的は、固形腫瘍を含んでなる新生物状態である。他の好ましい態様において、本発明のモジュレーターは、血液悪性腫瘍の診断、予防、又は治療に使用してよい。本明細書に使用するように、この用語は、明白に、あらゆる哺乳動物種を含むとみなされるが、好ましくは、治療される被検者又は患者はヒトであろう。
EFNAモジュレーターの1以上の用量を含んでなる1以上の容器を含んでなる、医薬パック及びキットも提供される。ある態様では、単位投与量が提供され、ここで該単位投与量は、例えば、抗EFNA抗体を1以上の追加薬剤の有り無しで含んでなる所定量の組成物を含有する。他の態様では、そのような単位投与量が単回使用の注射用充填済みシリンジにおいて供給される。なお他の態様において、単位投与量に含有される組成物は、生理食塩水、ショ糖、等;リン酸塩、等のような緩衝液を含んでよい;及び/又は、安定して有効なpH範囲内で製剤化してよい。あるいは、ある態様において、当該組成物は、適正な液体、例えば、無菌水の添加時に復元され得る凍結乾燥散剤として提供してよい。ある好ましい態様において、当該組成物は、タンパク質凝集を阻害する1以上の物質(限定されないが、ショ糖及びアルギニンが含まれる)を含む。その容器(複数)上にあるか又はそれに付随したどのラベルも、開示組成物が第一選択の疾患状態を診断又は治療するために使用されることを示す。
本発明の他の好ましい態様はまた、蛍光活性化細胞選別(FACS)、磁気活性化細胞選別(MACS)、又はレーザー媒介分画法のような方法を介して腫瘍始原細胞の集団又は亜集団を同定、単離、分画、又は濃縮するのに有用な道具としての開示モジュレーターの特性を利用する。当業者は、癌幹細胞が含まれるTICの特性決定及び操作に適合可能ないくつかの技術において当該モジュレーターが使用し得ることを理解されよう(例えば、そのそれぞれがその全体において参照により本明細書に組み込まれる、米国仮特許出願シリアル番号:12/686,359、12/669,136、及び12/757,649を参照のこと)。
本明細書において他に定義されなければ、本発明に関連して使用される科学及び技術用語は、当業者によって通常理解される意味を有するものとする。さらに、文脈によって他に求められなければ、単数形の用語には複数が含まれて、複数形の用語には単数が含まれる。より具体的には、本明細書と付帯の特許請求項において使用されるように、単数形の冠詞(「a」「an」及び「the」)には、文脈が明らかに他のことを示さなければ、複数の指示語が含まれる。このように、例えば、「タンパク質(a protein)」への言及には、複数のタンパク質が含まれ;「細胞(a cell)」への言及には、細胞の混合物が含まれる、といった具合である。加えて、本明細書と付帯の特許請求項において提供される範囲には、両方の終点とその終点間のすべての点が含まれる。故に、2.0〜3.0の範囲には、2.0、3.0と2.0と3.0の間のすべての点が含まれる。
腫瘍始原細胞集団の濃縮
癌患者の中に存在するような固形腫瘍の細胞異種性について特性決定し、特別な表現型マーカーを使用して腫瘍永続化細胞(TPC;即ち、癌幹細胞:CSC)の同一性を解明して、臨床意義のある療法標的を同定するために、当該技術分野で認められた技術を使用して大きな非従来型の異種移植片(NTX)腫瘍バンクを開発して維持した。多数の別個の腫瘍細胞株を含んでなるNTX腫瘍バンクを、免疫不全マウスにおいて、当初は多様な固形悪性腫瘍に罹患している数多くの癌患者より得られた異種の腫瘍細胞を多数回にわたって継代することを通じて、増殖させた。明確に定義された系統を有する多数の個別の初期継代NTX腫瘍細胞株が継続して利用可能であることで、この細胞株より精製された細胞の再現可能で反復性の特性決定を可能にするようなTPCの同定及び単離が大いに促進される。より具体的には、単離又は精製されたTPCは、その細胞の起源となった患者腫瘍試料を反復するマウスにおいて、表現型でも形態学的にも異種の腫瘍を産生するそれらの能力に従って、レトロスペクティブに極めて正確に特徴付けられる。このように、単離細胞の小集団を使用して完全に異種の腫瘍をマウスにおいて産生する能力は、その単離細胞がTPCを含むという事実を強く示唆する。そのような研究において、最小限に継代されたNTX細胞系の使用は、in vivo 実験を大いに単純化して、容易に証明可能な結果を提供する。さらに、初期継代NTX腫瘍はまた、イリノテカン(即ち、Camptosar(登録商標))のような治療薬剤に反応して、腫瘍増殖、現行療法への抵抗性、及び腫瘍再発を推進する根源的な機序への臨床的に関連性のある見識を提供する。
濃縮された腫瘍始原細胞集団からのRNA試料の単離と分析
実施例1に記載のように産生して継代したいくつかの確立された結直腸NTX細胞株(SCRX−CR4、CR11、CR33、PA3、PA6、及びPA14)を使用して、免疫不全マウスにおいて腫瘍を始動させた。SCRX−CR4、PA3、又はPA6腫瘍を担うマウスでは、平均腫瘍負荷が約300mm3に達したならば、このマウスを無作為化して、15mg/kgのイリノテカン、25mg/kgのゲムシタビン、又は媒体対照(PBS)で週2回、安楽死に先立つ少なくとも20日の期間の間、処理した。全6種のNTX系より生じる腫瘍(化学療法の処理を受けているマウス由来のものも含まれる)を取り出して、切除したばかりの結直腸NTX腫瘍より、TPC、TProg、及びNTG細胞をそれぞれ単離して、同様に、実施例1で説明した技術を概ね使用して、膵臓NTX腫瘍よりTG細胞とNTG細胞を単離した。より具体的には、FACSによって細胞集団を単離して、すぐにペレット状にして、Qiagen RLTplus RNA溶解緩衝液(Qiagen 社)に溶解させた。次いで、この溶解物を使用するまで−80℃で保存した。融解させてすぐに、Qiagen RNeasy 単離キット(Qiagen 社)をベンダーの説明書に従って使用して、全RNAを抽出して、ベンダーのプロトコールと推奨される機器設定を再び使用して、Nanodrop(Thermo Scientific)と Bioanalyzer 2100(Agilent Technologies)で定量した。生じる全RNA調製物は、遺伝子の配列決定及び解析に適していた。
濃縮された腫瘍始原細胞集団中のエフリンAリガンドのリアルタイムPCR分析
結直腸癌ではTProg及びNTG細胞に対してTPC集団において、そして膵臓癌ではNTG細胞に対してTGにおいて、全トランスクリプトーム配列決定によって観測された、エフリンAリガンドの差示的な発現を検証するために、TaqMan(登録商標)定量的リアルタイムPCRを使用して、上記に示したような様々なNTX系より単離したそれぞれの細胞集団中の遺伝子発現レベルを測定した。そのようなリアルタイムPCR分析は、特別な対象の遺伝子に特異的なプライマー及びプローブのセットを使用する別々の標的の遺伝子発現レベルのより直接的で迅速な測定を可能にする。TaqMan(登録商標)リアルタイム定量的PCRを Applied Biosystems 7900HT Machine(Life Technologies)で実施して、これを使用して多数の患者由来NTX系細胞集団と対応する対照におけるEFNA4遺伝子発現を測定した。さらに、この分析は、TaqMan System と共に供給される説明書において特定されるように、そして市販のEFNA4プライマー/プローブセット(Life Technologies)を使用して行った。
未分画結直腸腫瘍標本におけるエフリンAリガンドの発現
エフリンAリガンド遺伝子発現が結直腸腫瘍由来のTPC集団において同じ腫瘍由来のTProg及びNTG細胞と比較するときに上昇していることがわかったという事実に照らして、上昇したエフリンAリガンド(即ち、EFNA4)発現が未分画結直腸腫瘍試料においても正常隣接組織(NAT)に対して検出可能であるかどうかを判定する実験を行った。同様に、エフリンAリガンドの腫瘍中の発現が正常組織試料中のレベルといかに比較されるかを判定するための測定も行った。当該技術分野で公知の技術を使用して、110の結直腸患者腫瘍標本、正常隣接組織、及び48の正常組織を含有する Custom TumorScan qPCR(Origene Technologies)384ウェルアレイを設計して製作した。実施例3において詳述した手順と、同一のEFNA4特異プライマー/プローブセットを使用して、カスタムプレートのウェルにおいて TaqMan リアルタイム定量的PCRを実施した。
例示の腫瘍試料におけるエフリンAリガンドの差示的な発現
追加の結直腸癌患者の腫瘍試料と17の他の異なる固形腫瘍型のうち1つを診断された患者からの腫瘍標本におけるエフリンAリガンド遺伝子発現についてさらに評価するために、実施例4に記載のようにカスタム製作されたTissueScanTMqPCR(Origene Technologies)384ウェルアレイを使用して、Taqman qRT−PCRを実施した。この測定の結果は、図面6に提示されて、EFNA4の遺伝子発現がいくつかの腫瘍試料において有意に上昇又は抑制されていることを示す。
EFNA免疫原を使用する、抗EFNA抗体の産生
本明細書の教示に従って、EFNA4−ECD−Fc、hEFNA4−ECD−His、hEFNA1−ECD−His、EFNA4を過剰発現するBALB/c 3T3細胞の全細胞、又は本明細書で説明したように調製した血漿調製物での接種により、マウスの抗体の形態でのEFNAモジュレーターを産生した(ECD−細胞外ドメイン)。免疫原は、いずれも市販の出発材料(例、組換えヒトエフリンA4 Fcキメラ、CF R&D systems # 369-EA-200)及び/又は当業者に周知の技術を使用して調製した。
選択した抗原陽性ウェルについて、限界希釈プレーティングを使用して、サブクローニングを実施した。プレートについて、単一コロニー増殖の存在を外観的に検査してから、単一コロニーウェル由来の上清を上記に記載の抗原特異的ELISAと下記に記載のようなFACS確認によってスクリーニングした。生じるクローン集団を増やして凍結培地(90% FBS,10% DMSO)中で凍結保存して、液体窒素に保存した。EFNA4で免疫化したマウスからのこの融合より、上記に記載のELISAプロトコールを使用して、EFNA4に反応性の159のマウスモノクローナル抗体を得た。
エフリンAリガンドモジュレーターの配列決定及びヒト化
7(a)配列決定:
上述したことに基づいて、固定化したヒトEFNA4又はEFNA1へ見かけ上高い親和性で結合する、いくつかの例示の別個のモノクローナル抗体を選択した。図面7A中の表形式に示すように、実施例6からのmAbをコードするDNAの配列分析により、その多くが独自のVDJ再配列を有して新規の相補性決定領域を示すことが確認された。図面7Aに示す相補性決定領域(配列番号8〜59及び70〜95)は、Chothia et al. 上掲に従って定義されていることに留意されたい。
実施例6からのマウスの抗体のうち4つを、相補性決定領域(CDR)移植法を使用してヒト化した。機能性ヒト生殖細胞系遺伝子に関する配列及び構造の類似性に基づいて、重鎖及び軽鎖のヒトフレームワークを選択した。この点に関して言えば、Chothia et al.(上掲)に記載のように、マウスカノニカルCDR構造を同じカノニカル構造のあるヒト候補物と比較することによって、構造類似性を評価した。
EFNAモジュレーターの特性
8(a) 全般的なモジュレーター特性
様々な方法を使用して、上記に説明したように産生した、選択したエフリンA4モジュレーターの結合特性を分析した。具体的には、いくつかのEFNA4抗体について、親和性、動態、ビニング(binning)、並びにカニクイザル及びマウスの相同体(内製)との交差反応性に関する特性をForteBIO(登録商標)によって決定した。ウェスタン反応性も測定して、還元条件下で結合する2つの抗体(SC4.22及びSC4.91)についてエピトープを決定した。加えて、この抗体について、中和する(即ち、受容体リガンド相互作用をブロックする)、内在化する能力を試験して、これらの実施例(例えば、実施例12及び16を参照のこと)に示す手順を使用する in vitro 細胞傷害性アッセイによって、それらの相対的な殺傷のEC50を比較評価(benchmark)した。この特性決定の結果を図面8Aにおいて表形式で示す。
本実施例において上記に説明した技術を使用して、ヒト化構築体のshSC4.15、hSC4.22、及びhSC4.47について分析して、それらの結合特性を決定した。さらに、ヒト化抗体の結合性を親マウスの抗体と直接比較して、両方の抗体について、ヒト化の方法によって生じた速度定数の微妙な変化を同定した。
エフリンAリガンドモジュレーターは、細胞表面結合を証明する
上記に説明したようにhEFNA4−Fcに対して産生した抗体を産生するハイブリドーマからの上清について、フローサイトメトリーアッセイで測定するように、細胞表面結合をスクリーニングした。この抗体の結合特性を証明するために、2種の細胞株、JurkatE6細胞とZ138細胞(このいずれも、高レベルの表面エフリンA4を発現することが知られている)を利用した。より具体的には、細胞標識色素のCFSE(簡易同定用)で染色した600万個のJurkat E6細胞と400万個の非標識化Z138細胞を20μg/mlのFcブロッキング試薬(Trueblock,Biolegend 社)とともにインキュベートして混合して、100万個の細胞/mLの最終濃度とした。この細胞混合物の50μLを各ウェル中50μLの抗体含有上清へ加えて、4℃で60分間インキュベートした。この細胞を、2% FBS、2mM EDTA、及び0.05%アジ化ナトリウムを含有するPBS(洗浄緩衝液)で1回洗浄してから、DyLight649へコンジュゲートしたヤギ抗マウスIgGポリクローナル抗体(Jackson Immuno Research)のFc領域特異的F(ab)2断片で、暗所において4℃で60分間染色した。細胞を洗浄緩衝液で2回洗浄して、2μg/ml DAPIで対比染色した。陰性対照試料は、マウスIgG1アイソタイプ抗体(10μg/ml,Biolegend 社)と、マウスIgGを分泌しないことが知られているハイブリドーマ(H13.2)由来の上清であった。EFNA4特異的であることがELISAによってすでに同定された、10μg/mlの精製抗体(E76.2としても知られるSC4.76.2)(図面9の左側)を使用して、陽性対照試料を調製した。標準条件下に、そしてHTS付属装置を使用して、試料をFACS Canto II(BD Biosciences)で採取した。114個のクローンのうち84個のクローンが、両方の細胞株を陰性対照試料より高く有意に染色することによるフローサイトメトリーによって実証されるような有意な細胞表面結合を示すと判定された。この点に関して、図面9は、50の例示ハイブリドーマ上清の相対的な結合能力を示す。
選択したEFNA4モジュレーターは、エフリンA4リガンド結合を中和する
ENFA4発現細胞へ結合することが知られた抗体を産生するハイブリドーマ由来の上清(実施例9)について、HEK293Td細胞の表面にあるその受容体(EphA)へ結合する可溶性hEFNA4−Fcの結合をブロックするその能力を試験した。初めに、図面10Aに見られるように、HEK293Td細胞は、陰性対照抗体と比較するときに、EFNA4−Fcへ用量依存的な様式で結合することが示される。この結合の中和を証明するために、60μlの抗EFNA4ハイブリドーマ上清を、洗浄緩衝液に希釈した200ng/ml hEFNA4−Fcとともに4℃で2時間インキュベートした。次いで、この混合物を50,000個のHEK293Td細胞へ加えて、4℃で1時間インキュベートした。細胞を洗浄緩衝液に1回洗浄してから、DyLight649へコンジュゲートしたヤギ抗マウスIgGポリクローナル抗体(Jackson Immuno Research)で、暗所において4℃で45分間染色した。次いで、細胞を洗浄緩衝液で2回洗浄して、2μg/mlのDAPIで対比染色した。陰性対照試料は、非染色細胞、非IgG産生ハイブリドーマ(H13.2)由来上清で染色した細胞、及びヒトIgGFcγ1断片で染色した細胞であった。陽性対照試料は、ハイブリドーマ上清の非存在下でのhEFNA4−Fc染色細胞と、非IgG産生ハイブリドーマ上清の存在下でのhEFNA4−Fc染色試料であった(図面10Bの左側)。先に考察したように、FACS Canto IIで試料を測定した。図面10Bによって裏付けられるように、フローサイトメトリーを使用して測定するとき、試験した83個のうち62個のクローンがhEFNA4−Fcのその細胞表面受容体への結合を中和するいくらかの能力を証明した。
EFNAモジュレーターは、細胞表面EFNA結合を濃度依存的な様式でブロックする
EFNA活性を中和する、本発明のエフリンAリガンドモジュレーターの能力をさらに測定するために、選択したハイブリドーマ由来の抗EFNA4抗体を精製して、PBS緩衝液中の無菌試薬として使用した。初めに、ヒト及びマウスのEFNA4−Fc(組換えマウスエフリンA4Fcキメラ、CF R&D Systems)単独の全用量応答曲線を同時に設定して、EFNA4−FcのHEK293Td細胞への用量制限的な結合を証明した(図面11A)。この対照を確定したならば、3種の例示ハイブリドーマ(即ち、SC4.15.3、SC4.47.3、及びSC4.76.2)より入手した抗EFNA4抗体の系列希釈液を、洗浄緩衝液中のこの限界濃度(0.1μg/ml及び1.0μg/ml)のhEFNA4−Fc及びmEFNA4−Fcのそれぞれと4℃で1時間インキュベートした。次いで、得られた試薬混合物を50,000個のHEK293Td細胞へ移して、4℃で1時間インキュベートした。細胞を洗浄緩衝液に1回洗浄してから、DyLight649へコンジュゲートしたヤギ抗マウスIgGポリクローナル抗体(Jackson Immuno Research)のFc領域特異的F(ab)2断片で、暗所において4℃で45分間染色した。細胞を洗浄緩衝液で2回洗浄して、2μg/ml DAPIで対比染色した。陰性対照試料は、非染色と、ヒトIgGFcγ1断片で染色した細胞であった。上記ですでに述べたように、試料をFACS Canto IIで採取した。図面11Bは、ヒト及びマウスのEFNA4−Fcの細胞への結合を相対的に高い濃度で一部阻害する、mAb SC4.15.3の活性を示す。図面11Cは、細胞へ結合するhEFNA4−Fcの能力をほぼ完全にブロックするが、mEFNA4−Fcの能力はブロックしない、mAb SC4.47.3の活性を例証する。同様に、図面11Dは、細胞へ結合するhEFNA4−Fcの能力を実質的に阻害する一方で、その細胞へ結合するmEFNA4−Fcの能力に劇的に影響を及ぼさない、エフリンAリガンドモジュレーターのmAb SC4.76.2の能力を証明する。これらの結果は、エフリンAリガンドの細胞表面受容体への結合を阻害することにより、付随した腫瘍形成活性を阻害する、本発明の選択したモジュレーターの能力を強く示唆する。
EFNAモジュレーターは、EFNAのEphA受容体への結合を濃度依存的な様式でブロックする
上記に考察したように、EphA2は、EFNA4について知られた結合相手である。この既知の関係を利用するために、標準的な技術を使用してEphA2の細胞外ドメインをヒトIgGのFc部分へ融合させ、HEK293Td細胞において一過的に発現させて、培養物の上清より、タンパク質A親和性クロマトグラフィーを使用して精製した。図面12Aに見られるように、EphA2−Fcホモ二量体は、Jurkat細胞(EFNAを発現することが知られている)へ用量依存的な形式で結合するが、ヒトIgGのFc部分単独では、結合を全く示さない。このEphA2−FcのJurkat細胞への結合は、本発明のエフリンAモジュレーターを使用して、そして特に、エフリンA4に対するモノクローナル抗体の使用を介して阻害することができる。このために、ウェルあたり50,000個のJurkat細胞を、洗浄緩衝液中10μg/mlの4種の選択した抗ENFA4抗体(即ち、SC4.22、SC4.31.3、SC4.47.3、及びSC4.73、いずれも上記に記載のように調製した)とともに4℃で1時間インキュベートした。マウスIgGと無抗体(データ示さず)を陰性対照として役立てる。洗浄後、洗浄緩衝液中のこの細胞へEphA2−Fcの系列希釈液を4℃で1時間加えて、図面12Bにグラフ表示される結果を得た。図面12Bの検討により、モジュレーターのSC4.31.3とSC4.47.3がEphA2−FcのEFNA4への結合を実質的に阻害するのに対し、モジュレーターのSC4.22とSC4.73は、相対的により少ない阻害を示すことが示される。この受容体との相互作用を阻害する開示モジュレーターの能力をさらに例証するために、最初にJurkat細胞を抗体の系列希釈液とともにインキュベートして、10μg/ml EphA2−Fcとのインキュベーションを続けた。次いで、この細胞を洗浄緩衝液で2回洗浄し、2μg/ml DAPIで対比染色して、HTS付属装置を使用する標準条件下にFACS Canto II(BD Biosciences)で分析して、図面12Cに表示するデータを得た。図面12Bと同様に、図面12Cは、モジュレーターのmAb SC4.47.3が相対的に強力な阻害剤であって、Jurkat細胞上で発現されるEFNA4へのEphA2−Fcの結合を効率的にブロックすることを証明する。比較すると、他のモジュレーターは、やや小さい活性を示して、SC4.31.3は、中等度の阻害をより高い濃度でもたらす。
ヒトエフリンAに対するモジュレーターは、マウス相同分子種と交差反応する
ヒト及びマウスのエフリンA4リガンドの細胞外ドメインがタンパク質レベルで80%の配列同一性を共有するという事実に照らして、ヒトEFNA4に対する開示モジュレーターについて、それらがマウス相同体と会合するかどうかを見るために試験した。より具体的には、抗体サンドイッチELISAを使用して、EFNA4特異的モノクローナル抗体のそのマウス相同体との交差反応性のレベルを定量した。高タンパク質結合性96ウェルアッセイプレートをIgG分子のFc部分に特異的なロバ抗ヒトIgGポリクローナル抗体の0.5μg/mlで被覆した。このプレートのタンパク質コーティングは、50mM炭酸ナトリウム緩衝液(pH9.6)を16時間のインキュベーションの間に4℃で使用して、ウェルあたり100μlの容量で行った。ヒトIgG分子のFcγ1部分へ融合したヒト及びマウスのEFNA4分子(EFNA4−Fc)を2%(w/v)ウシ血清アルブミン含有PBS緩衝液(PBSA)で系列希釈した。この被覆プレートを0.05% Tween20含有PBS緩衝液(PBST)中で洗浄後、PBSAで希釈されたマウス及びヒトEFNA4−Fcの100μl/ウェルを3時間の間周囲温度でウェルへ加えた。次いで、このプレートをPBSTで再び洗浄して、このプレートへ10%使用済ハイブリドーマ上清含有PBSA又は1μg/mlの精製モノクローナル抗体(陽性対照として)の100μl/ウェルを周囲温度で1時間の間に加えた。このプレートをPBSTで洗浄後、マウスIgGのFc部分に特異的で、西洋ワサビペルオキシダーゼへコンジュゲートしたヤギ抗マウスIgGポリクローナル抗体(Jackson Immuno Research)の5000倍希釈液を含有する100μl/ウェルのPBSAをこのプレートへ周囲温度で30分間加えた。このプレートをPBSTで十分に洗浄した後で、このウェルへウェルあたり100μlのTMB基質(Thermo Fisher)を15分間加えた。100μl/ウェルの2M硫酸を添加することによって、この酵素反応を止めた。この比色分析法の吸光度は、Victor プレートリーダー(パーキンエルマー)を使用して、450nmで測定した。データは、2つの反復値を使用して、吸光度読取り値の平均+標準偏差として提示する。図面13Aは、hEFNA4を認識するがmEFNA4は認識しない、例示のモノクローナル抗体SC4.31.3を示す。逆に、図面13Bは、ヒトとマウスの両方のEFNA4を認識する、例示のモノクローナル抗体SC4.91.4の結合を示す。
例示の腫瘍試料、腫瘍細胞亜集団、及び造血系細胞におけるエフリンAリガンドの発現
先の実施例において、上昇した遺伝子発現レベルを報告してEFNA4に対する抗体を作製した後で、選択した細胞集団における対応するEFNA4タンパク質の発現についての証拠を探求した。この点に関して言えば、11の腫瘍型からの432の組織溶解物、又はそのそれぞれの正常隣接組織の4つの希釈液を含んでなる逆相癌タンパク質溶解物アレイ(ProteoScan Arrays;OriGene Technologies)を、外因性プロモーターによって推進されるTP53過剰発現の有り無しのHEK293細胞からなる対照と共に提供した。EFNA4タンパク質を認識する本発明のマウスモノクローナルEFNA4抗体(例えば、SC4.47.3としても知られるクローンE47.3)を使用して、ウェスタンブロットによって、このアレイ上の溶解物中のEFNA4タンパク質発現を検出した。比色検出試薬とプロトコールは、ProteoScan Arrays の製造業者によって提供されて、製作したアレイ上のスポットは、BZScan2 Java(登録商標) Software(INSERM-TAGC)を使用する平底型スキャナーを使用してデジタル画像へ変換して、スポット強度を定量した。
エフリンAリガンドモジュレーターは、K562細胞によって内在化される
先の実施例において確定されたエフリンAリガンドの発現プロフィールを前提として、本発明のモジュレーターが細胞表面抗原への結合時に内在化されるかどうかを見るためのアッセイを実施した。この点に関して言えば、実施例においてEFNA4−Fcに対して産生した抗体を産生するハイブリドーマ由来の上清について、(EFNA4を細胞表面上で低いレベルで発現する)K562細胞に内在化されるその能力をスクリーニングした。106個/ml(単一細胞懸濁液)の出発濃度でのK562細胞を Human TruStain(BioLegend 社)で、室温で10分間ブロックしてから、ウェルあたり5x104個の細胞へ希釈した。次いで、同一2検体の試料を、最終容量50μlの抗EFNA抗体含有上清で、氷上にて30分間染色した。次いで、細胞をFACS染色培地(FSM;2%胎仔ウシ血清/ハンクス緩衝化生理食塩水溶液/25mM HEPES[pH7.4])で洗浄して、非結合抗体を除去した。これに、ロバ抗マウスAlexa647(Life Technologies)での氷上で30分間の第二染色を続けた。試料を再び洗浄して未結合抗体を除去してから、内在化培地(2%胎仔ウシ血清/イスコブ(Iscove's)改良ダルベッコ培地)に再懸濁させた。内在化を可能にするために、試料を5% CO2において37℃で(又は、対照では4℃で)1時間インキュベートした。試料を氷へ移して過剰の氷冷FSMを加えることによって、内在化を停止させた。内在化せずに細胞表面に残ったあらゆる抗体を除去するために、試料を低pHのリン酸緩衝化生理食塩水(PBS[pH2.0])で、氷上で10分間処理した。この「酸ストリップ」手順に続いて、試料をFSMで十分洗浄し、2μg/mlのDAPIを含有する150μlのFSMに再懸濁させて、フローサイトメトリー(HTS付属装置を使用する標準条件下にFACS Canto II(BD Biosciences)を再び使用する)によって分析した。バックグラウンドを超えて検出されたどのシグナルも、抗体内在化[酸ストリップ法の間に蛍光コンジュゲートを細胞表面からの除去から護るプロセス]より生じるものである。すべてのインキュベーションは、他に述べない限り、FSMにおいて実施した。
標的化部分としてのEFNA4モジュレーター
抗体へ安定的に連結した細胞傷害薬の標的化は、固形腫瘍のある患者へ大きな治療利益を与える可能性がある、強化された抗体アプローチを代表する。上記に記載のEFNA4特異抗体が細胞傷害剤の生細胞への送達に媒介することができるかどうかを判定するために、リボソーム不活性化タンパク質、サポリン(Advanced Targeting Systems)へコンジュゲートしたストレプトアビジンをビオチニル化EFNA4抗体へ結合させる in vitro 細胞殺傷アッセイを実施して、これらのサポリン複合体が内在化して細胞を殺傷する能力を、細胞生存度を測定することによって72時間後に測定した。
EFNAモジュレーターは、分泌されたエフリンAリガンドを検出する
上記でやや詳しく考察したように、EFNA4は、細胞膜と会合したGPI連結分子として、又は分泌された末端切断(truncated)リガンド若しくはアイソフォームとして存在することができる。これらの分泌された化合物の、体液又は細胞培養基のような生体材料中の検出は、診断目的に、又は患者管理における補助手段として有用であり得る(バイオマーカーとしての有用性)。例えば、その分泌されたEFNA4は、B細胞慢性リンパ球性白血病(B−CLL)患者において濃度が上昇して見られる場合があることが示唆されてきた(Alonso-C LM et al., 2009, Leukemia Research 33: 395-406)。本発明のそのような好ましい側面を証明するために、精製EFNA4の非重複エピトープを認識する開示モジュレーターを使用して、選択した腫瘍形成性の試料に分泌されたEFNAリガンドを概して検出して定量した。本発明のこの後者の特徴に関して、EFNAモジュレーターを使用して、ヒト血清(データ示さず)とB−CLL患者より入手したヒト血漿、及びヒト腫瘍異種移植体(例、上記の実施例1に記載のような)を担うマウスの血清からの分泌エフリンAリガンドを検出して定量した。いずれの場合も、このモジュレーターは、すぐ下記に記載のようなリガンドレベルを有効に測定することができた。
EFNA4モジュレーターは、関連するEFNAリガンドを発現する細胞に標的指向することができる
EFNA4モジュレーターのリガンド特異性について関連するEFNAリガンドに対して試験して、交差反応性の度合いを評価した。1例として、SC4.2.1とSC9.65について、EFNA4(図面17A)、EFNA3(図面17B)、及びEFNA1(図面17C)を過剰発現しているHEK293T細胞を使用する in vitro 殺傷アッセイで試験した。モジュレーターのSC9.65は、マウスをEFNA1免疫原で免疫化することによって産生した(実施例6による)ことに留意されたい。この殺傷アッセイは、実施例16に記載の通りに行った。図面17は、SC4.2.1がEFNA4発現細胞に加えてEFNA3発現細胞も殺傷することができることと、SC9.65がEFNA1発現細胞とEFNA4発現細胞を殺傷することができることを証明する。これらのデータは、特定のEFNAファミリーメンバーに対して産生した選択モジュレーターが他のファミリーメンバーへ十分によく結合し、内在化を引き起こして、細胞傷害性ペイロードをリガンド発現細胞へ送達することができることを例証する。この発見は、EFNAファミリーメンバー間の相同性の低い度合い(ヒトEFNA1、2、3、及び4の間でほぼ34〜45%のアミノ酸配列同一性)からすればやや予測外であって、本明細書に記載のように、診断又は治療の目的のために汎EFNAモジュレーターを産生することが可能であることを例示する。
EFNAリガンドは、多数のEphA受容体と選択的に相互作用する
上記に考察したように、エフリンAリガンドは、数多くのEphA受容体へ結合することが知られている。どのEphA受容体がEFNA4と相互作用するポテンシャルを有するかを探究するために、実施例9の記載に類似したフローサイトメトリー結合アッセイを開発した。より具体的には、ヒトIgG1 Fc融合構築体として発現される可溶性EphA受容体を、ウェルあたり50,000個のHEK293T細胞(図面19A)、又はレトロウイルス形質導入の手段によってEFNA4を過剰発現しているHEK293T細胞(HEK293T.hEFNA4細胞と称する)(図面19B)へ染色緩衝液において4℃で1時間加えた。洗浄後、Dylight649へコンジュゲートした抗ヒトIgGポリクローナル二次抗体(Jackson Immuno Research)を1時間加えた。2回洗浄後、2μg/ml DAPIを含有する染色緩衝液に試料を再懸濁させて、HTS付属装置を使用する標準条件下にFACS Canto II(BD Biosciences)で分析した。図面19A及び19Bは、EphA1を除いて、EphA2、EphA3、EphA4、EphA6、EphA7、及びEphA10がエフリンA4リガンドへ結合することを証明する。このことはまた、本発明のモジュレーターに固有の作用の利点と潜在的に多面的な要素を指摘する。
EFNA4は、EphB2受容体へ結合するが、EphB3及びEphB4受容体へ結合しない
実施例20に示された知見を拡げて、種々のEphB受容体へ結合するエフリンA4リガンドの能力を探究した。EFNA4は、当初、上記の実施例2〜4で証明したように、CSC関連標的として同定された。正常なマウス結腸陰窩の組織階層構造において、EphB2及びEphB3受容体は、結腸陰窩底部に存在する細胞によって高度に発現されて陰窩の上に位置する細胞によっては発現されないので、EphB発現とEphB受容体を介した前向き又は逆向きのシグナル伝達が組織構築と個々の細胞運命の決定に重要であることを示唆している(Batlle et al.; 2002 PMID: 12408869)。より最近になって、結直腸癌細胞によるEphB2発現は、腫瘍の始動及び長期増殖の能力に関連付けられて、EphB2が結腸の癌幹細胞の表現型マーカーとして役立ち得ることが示唆された(Merlos-Suarez et al., 2011 PMID: 21419747)。従って、差示的に発現されるEphB受容体のいずれかへ結合するエフリンA4リガンドの能力は、結直腸癌幹細胞にとって生物学的に重要である可能性がある。
Claims (101)
- 単離されたEFNAモジュレーター。
- EFNAモジュレーターがEFNAアンタゴニストを含む、請求項1に記載の単離されたEFNAモジュレーター。
- EFNAモジュレーターが抗体又はその免疫反応性断片を含む、請求項1に記載の単離されたEFNAモジュレーター。
- 抗体又はその免疫反応性断片がモノクローナル抗体を含む、請求項3に記載の単離されたEFNAモジュレーター。
- モノクローナル抗体が、キメラ抗体、CDR移植抗体、ヒト化抗体、及びヒト抗体からなる群より選択される、請求項4に記載の単離されたEFNAモジュレーター。
- 前記モノクローナル抗体が中和抗体を含む、請求項4に記載の単離されたEFNAモジュレーター。
- 前記モノクローナル抗体が内在化抗体を含む、請求項4に記載の単離されたEFNAモジュレーター。
- 前記モノクローナル抗体が枯渇性抗体を含む、請求項4に記載の単離されたEFNAモジュレーター。
- 前記モノクローナル抗体がEFNA4と会合する抗体を含む、請求項4に記載の単離されたEFNAモジュレーター。
- 前記モノクローナル抗体が3つの相補性決定領域を有する軽鎖可変領域と3つの相補性決定領域を有する重鎖可変領域とを含み、ここで重鎖及び軽鎖の相補性決定領域は、図面7Aに示す相補性決定領域を含む、請求項9に記載の単離されたEFNAモジュレーター。
- 前記モノクローナル抗体が軽鎖可変領域と重鎖可変領域とを含み、ここで前記軽鎖可変領域は、配列番号99、配列番号103、配列番号107、配列番号111、配列番号115、配列番号119、配列番号123、配列番号127、配列番号131、配列番号135、配列番号139、配列番号143、配列番号147、配列番号151、配列番号155、配列番号159、及び配列番号163に示されるアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも60%の同一性を有するアミノ酸配列を含み、そしてここで前記重鎖可変領域は、配列番号97、配列番号101、配列番号105、配列番号109、配列番号113、配列番号117、配列番号121、配列番号125、配列番号129、配列番号133、配列番号137、配列番号141、配列番号145、配列番号149、配列番号153、配列番号157、及び配列番号161に示されるアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも60%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項9に記載の単離されたEFNAモジュレーター。
- 細胞傷害剤をさらに含んでなる、請求項9、10又は11に記載の単離されたEFNAモジュレーター。
- 請求項11に記載のアミノ酸重鎖可変領域又はアミノ酸軽鎖可変領域をコードする核酸。
- 請求項13に記載の核酸を含んでなるベクター。
- 請求項14に記載のベクターを含んでなる宿主細胞。
- 配列番号2に示されるアミノ酸配列又はその断片を含んでなる、請求項1に記載の単離されたEFNAモジュレーター。
- EFNAモジュレーターが免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部をさらに含む、請求項16に記載の単離されたEFNAモジュレーター。
- モジュレーターが、腫瘍始原細胞の頻度を低下させることの必要な被検者への投与時に腫瘍始原細胞の頻度を低下させる、請求項1に記載の単離されたEFNAモジュレーター。
- 頻度の低下が、腫瘍始原細胞について濃縮することが知られている腫瘍細胞表面マーカーのフローサイトメトリー分析を使用して決定される、請求項18に記載の単離されたEFNAモジュレーター。
- 頻度の低下が、腫瘍始原細胞について濃縮することが知られている腫瘍細胞表面マーカーの免疫組織化学検出を使用して決定される、請求項18に記載の単離されたEFNAモジュレーター。
- 前記腫瘍始原細胞が腫瘍永続化細胞を含む、請求項18に記載の単離されたEFNAモジュレーター。
- 細胞傷害剤をさらに含んでなる、請求項1に記載の単離されたEFNAモジュレーター。
- 前記EFNAモジュレーターが汎EFNAモジュレーターを含む、請求項1に記載の単離されたEFNAモジュレーター。
- 請求項1に記載の単離されたEFNAモジュレーターを含んでなる、医薬組成物。
- 単離されたEFNA4モジュレーター。
- 前記EFNA4モジュレーターが汎EFNA4モジュレーターを含む、請求項25に記載の単離されたEFNA4モジュレーター。
- 請求項25に記載の単離されたEFNA4モジュレーターを含んでなる、医薬組成物。
- 治療有効量のEFNAモジュレーターを、EFNA関連障害の治療が必要な被検者へ投与することを含んでなる、EFNA関連障害を治療する方法。
- 前記EFNAモジュレーターがEFNAアンタゴニストを含む、請求項28に記載の方法。
- 前記EFNAモジュレーターが抗体又はその免疫反応性断片を含む、請求項28に記載の方法。
- 抗体又はその免疫反応性断片がモノクローナル抗体を含む、請求項30に記載の方法。
- モノクローナル抗体が、キメラ抗体、CDR移植抗体、ヒト化抗体、及びヒト抗体からなる群より選択される、請求項31に記載の方法。
- 前記モノクローナル抗体が3つの相補性決定領域を有する軽鎖可変領域と3つの相補性決定領域を有する重鎖可変領域とを含み、ここで重鎖及び軽鎖の相補性決定領域は、図面7Aに示す相補性決定領域を含む、請求項32に記載の方法。
- 前記モノクローナル抗体がEFNA4と会合する、請求項31に記載の方法。
- 前記モノクローナル抗体が中和抗体を含む、請求項31に記載の方法。
- 前記モノクローナル抗体が内在化抗体を含む、請求項31に記載の方法。
- 前記内在化抗体が細胞傷害剤を含む、請求項36に記載の方法。
- 前記EFNA関連障害が過剰増殖性障害を含む、請求項28に記載の方法。
- 前記過剰増殖性障害が新生物障害を含む、請求項38に記載の方法。
- 前記新生物障害が固形腫瘍を含む、請求項39に記載の方法。
- 新生物障害が、副腎癌、膀胱癌、子宮頚部癌、子宮内膜癌、腎臓癌、肝臓癌、肺癌、卵巣癌、結直腸癌、膵臓癌、前立腺癌、又は乳癌を含む、請求項40に記載の方法。
- 前記新生物障害が血液系腫瘍を含む、請求項39に記載の方法。
- 前記血液系腫瘍が白血病又はリンパ腫を含む、請求項42に記載の方法。
- 前記新生物障害に罹患している被検者が、腫瘍始原細胞を含んでなる腫瘍を明示する、請求項39に記載の方法。
- 腫瘍始原細胞の頻度を前記被検者において低下させる工程をさらに含んでなる、請求項44に記載の方法。
- 頻度の低下が、腫瘍始原細胞について濃縮することが知られている腫瘍細胞表面マーカーのフローサイトメトリー分析、又は腫瘍始原細胞について濃縮することが知られている腫瘍細胞表面マーカーの免疫組織化学検出を使用して決定される、請求項45に記載の方法。
- 頻度の低下が、in vitro 又は in vivo の限界希釈分析を使用して決定される、請求項45に記載の方法。
- 頻度の低下が、生きたヒト腫瘍細胞の免疫不全マウス中への移植を含んでなる in vivo 限界希釈分析を使用して決定される、請求項47に記載の方法。
- in vivo 限界希釈分析を使用して決定される頻度の低下が、ポアソン分布統計を使用する腫瘍始原細胞頻度の定量を含む、請求項48に記載の方法。
- 頻度の低下が、生きたヒト腫瘍細胞の in vitro コロニー支持条件中への限界希釈沈着を含んでなる in vitro 限界希釈分析を使用して決定される、請求項47に記載の方法。
- in vivo 限界希釈分析を使用して決定される頻度の低下が、ポアソン分布統計を使用する腫瘍始原細胞頻度の定量を含む、請求項50に記載の方法。
- 抗癌剤を投与する工程をさらに含んでなる、請求項28に記載の方法。
- 前記EFNAモジュレーターが配列番号2に示されるアミノ酸配列又はその断片を含む、請求項28に記載の方法。
- 前記EFNAモジュレーターが汎EFNAモジュレーターを含む、請求項28に記載の方法。
- 腫瘍始原細胞の頻度を低下させることの必要な被検者において腫瘍始原細胞の頻度を低下させる方法であって、前記被検者へEFNAモジュレーターを投与する工程を含んでなる、前記方法。
- 腫瘍始原細胞が腫瘍永続化細胞を含む、請求項55に記載の方法。
- 前記腫瘍永続化細胞がCD44+細胞又はCD133+細胞である、請求項56に記載の方法。
- 前記EFNAモジュレーターが抗体を含む、請求項55に記載の方法。
- 前記抗体がモノクローナル抗体を含む、請求項58に記載の方法。
- 前記EFNAモジュレーターが抗EFNA4抗体を含む、請求項59に記載の方法。
- 被検者が、副腎癌、膀胱癌、子宮頚部癌、子宮内膜癌、腎臓癌、肝臓癌、肺癌、卵巣癌、結直腸癌、膵臓癌、前立腺癌、及び乳癌からなる群より選択される新生物障害に罹患している、請求項55に記載の方法。
- 被検者が血液系腫瘍に罹患している、請求項55に記載の方法。
- 腫瘍始原細胞の頻度が少なくとも10%低下する、請求項55に記載の方法。
- 頻度の低下が、腫瘍始原細胞について濃縮することが知られている腫瘍細胞表面マーカーのフローサイトメトリー分析、又は腫瘍始原細胞について濃縮することが知られている腫瘍細胞表面マーカーの免疫組織化学検出を使用して決定される、請求項55に記載の方法。
- 頻度の低下が、in vitro 又は in vivo の限界希釈分析を使用して決定される、請求項55に記載の方法。
- 血液系腫瘍に罹患している被検者を治療する方法であって、前記被検者へEFNAモジュレーターを投与する工程を含んでなる、前記方法。
- 前記EFNAモジュレーターがEFNA4モジュレーターである、請求項66に記載の方法。
- EFNAモジュレーターを被検者へ投与する工程を含んでなる、被検者における腫瘍を抗癌剤での治療のために増感させる方法。
- 前記EFNAモジュレーターが抗体を含む、請求項68に記載の方法。
- 前記腫瘍が固形腫瘍である、請求項68に記載の方法。
- 前記抗癌剤が化学療法剤を含む、請求項68に記載の方法。
- 前記抗癌剤が免疫療法剤を含む、請求項68に記載の方法。
- 過剰増殖性障害を診断することの必要な被検者において過剰増殖性障害を診断する方法であって:
a)前記被検者より組織試料を入手する工程;
b)該組織試料を少なくとも1つのEFNAモジュレーターと接触させる工程;及び
c)該試料と会合したEFNAモジュレーターを検出又は定量する工程を含んでなる、前記方法。 - EFNAモジュレーターがモノクローナル抗体を含む、請求項73に記載の方法。
- 抗体がレポーターと作動可能に会合している、請求項74に記載の方法。
- EFNAモジュレーターを含んでなる容器(receptacle)とEFNA関連障害を治療又は診断するのに前記EFNAモジュレーターを使用するための指示物(instructional materials)とを含んでなる、EFNA関連障害を診断するか又は治療するのに有用な製造品。
- 前記EFNAモジュレーターがモノクローナル抗体である、請求項76に記載の製造品。
- 容器が読取り可能プレートを含む、請求項76に記載の製造品。
- 少なくとも1つの内在化EFNAモジュレーターの治療有効量を投与する工程を含んでなる、新生物障害に罹患している被検者を治療する方法。
- 前記EFNAモジュレーターが抗体を含む、請求項79に記載の方法。
- 前記抗体がモノクローナル抗体を含む、請求項80に記載の方法。
- モノクローナル抗体が細胞傷害剤をさらに含む、請求項81に記載の方法。
- モノクローナル抗体がEFNA4と会合する、請求項81に記載の方法。
- 少なくとも1つの中和EFNAモジュレーターの治療有効量を投与する工程を含んでなる、新生物障害に罹患している被検者を治療する方法。
- 前記EFNAモジュレーターが抗体を含む、請求項84に記載の方法。
- 前記抗体がモノクローナル抗体を含む、請求項85に記載の方法。
- 前記モノクローナル抗体が抗EFNA4抗体を含む、請求項86に記載の方法。
- 前記EFNA4抗体が汎EFNA抗体を含む、請求項87に記載の方法。
- 新生物障害が、副腎癌、膀胱癌、子宮頚部癌、子宮内膜癌、腎臓癌、肝臓癌、肺癌、卵巣癌、結直腸癌、膵臓癌、前立腺癌、及び乳癌からなる群より選択される、請求項84に記載の方法。
- 腫瘍始原細胞をEFNAモジュレーターと接触させる工程を含んでなる、腫瘍始原細胞の集団を同定する、単離する、分画する、又は濃縮する方法。
- 前記EFNAモジュレーターが抗体を含む、請求項90に記載の方法。
- hSC4.5、hSC4.15、hSC4.22、及びhSC4.47からなる群より選択される抗体上に見出されるヒト化可変領域に実質的に類似したヒト化抗体可変領域と医薬的に許容される担体とを含んでなる、組成物。
- 軽鎖可変領域と重鎖可変領域とを含んでなる抗EFNA4抗体であって、ここで前記軽鎖可変領域は、配列番号151、配列番号155、配列番号159、及び配列番号163に示されるアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも60%の同一性を有するアミノ酸配列を含み、そしてここで前記重鎖可変領域は、配列番号149、配列番号153、配列番号157、及び配列番号161に示されるアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも60%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記抗EFNA4抗体。
- 医薬有効量のEFNAモジュレーターを投与する工程を含んでなる、転移を阻害するか又は予防することの必要な被検者において転移を阻害又は予防する方法。
- 被検者がEFNAモジュレーターの投与の前又は後に腫瘍減量術を受ける、請求項94に記載の方法。
- 前記腫瘍減量術が少なくとも1つの抗癌剤の投与を含む、請求項94に記載の方法。
- 医薬有効量のEFNAモジュレーターを投与する工程を含んでなる、維持療法の必要な被検者に維持療法を実施する方法。
- 前記被検者がEFNAモジュレーターの投与に先立って新生物障害について治療された、請求項97に記載の方法。
- EFNAモジュレーターを投与する工程を含んでなる、過剰増殖性障害に罹患している被検者において腫瘍細胞を枯渇する方法。
- 前記腫瘍細胞が腫瘍始原細胞を含む、請求項99に記載の方法。
- EFNAモジュレーターを投与する工程を含んでなる、EFNA関連障害を in vivo で診断する、検出する、又はモニターすることの必要な被検者において、EFNA関連障害を in vivo で診断する、検出する、又はモニターする方法。
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CA3142040A1 (en) * | 2019-05-27 | 2020-12-03 | The University Of British Columbia | Conformation-specific epitopes in tau, antibodies thereto and methods related thereof |
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Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003532365A (ja) * | 1997-08-29 | 2003-11-05 | イミュネックス・コーポレーション | Lerk−6と称されるサイトカイン |
JP2007522096A (ja) * | 2003-06-06 | 2007-08-09 | メディミューン,インコーポレーテッド | 癌の診断、治療、及び予防のためのEphA4及びEphA4変調因子の使用 |
WO2009052830A1 (en) * | 2007-10-22 | 2009-04-30 | Genmab A/S | Novel antibody therapies |
JP2009539413A (ja) * | 2006-06-12 | 2009-11-19 | トゥルビオン・ファーマシューティカルズ・インコーポレーテッド | エフェクター機能を有する単鎖多価結合タンパク質 |
JP2010501596A (ja) * | 2006-08-31 | 2010-01-21 | エー・シー・エヌ・135 493 391・プロプライエタリー・リミテッド・アズ・トラスティー・フォー・コンカ・ユニット・トラスト | 抗体含有組成物を用いた非感染性の病状の処置および/または予防 |
US20100113415A1 (en) * | 2008-05-29 | 2010-05-06 | Rajapakse Hemaka A | Epha4 rtk inhibitors for treatment of neurological and neurodegenerative disorders and cancer |
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FR2413974A1 (fr) | 1978-01-06 | 1979-08-03 | David Bernard | Sechoir pour feuilles imprimees par serigraphie |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US4703004A (en) | 1984-01-24 | 1987-10-27 | Immunex Corporation | Synthesis of protein with an identification peptide |
GB2183662B (en) | 1985-04-01 | 1989-01-25 | Celltech Ltd | Transformed myeloma cell-line and a process for the expression of a gene coding for a eukaryotic polypeptide employing same |
US4676980A (en) | 1985-09-23 | 1987-06-30 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Target specific cross-linked heteroantibodies |
GB8601597D0 (en) | 1986-01-23 | 1986-02-26 | Wilson R H | Nucleotide sequences |
US6548640B1 (en) | 1986-03-27 | 2003-04-15 | Btg International Limited | Altered antibodies |
JP3101690B2 (ja) | 1987-03-18 | 2000-10-23 | エス・ビィ・2・インコーポレイテッド | 変性抗体の、または変性抗体に関する改良 |
GB8717430D0 (en) | 1987-07-23 | 1987-08-26 | Celltech Ltd | Recombinant dna product |
US5336603A (en) | 1987-10-02 | 1994-08-09 | Genentech, Inc. | CD4 adheson variants |
GB8809129D0 (en) | 1988-04-18 | 1988-05-18 | Celltech Ltd | Recombinant dna methods vectors and host cells |
US5223409A (en) | 1988-09-02 | 1993-06-29 | Protein Engineering Corp. | Directed evolution of novel binding proteins |
GB8823869D0 (en) | 1988-10-12 | 1988-11-16 | Medical Res Council | Production of antibodies |
US5750373A (en) | 1990-12-03 | 1998-05-12 | Genentech, Inc. | Enrichment method for variant proteins having altered binding properties, M13 phagemids, and growth hormone variants |
KR900005995A (ko) | 1988-10-31 | 1990-05-07 | 우메모또 요시마사 | 변형 인터류킨-2 및 그의 제조방법 |
ES2096590T3 (es) | 1989-06-29 | 1997-03-16 | Medarex Inc | Reactivos biespecificos para la terapia del sida. |
US5112946A (en) | 1989-07-06 | 1992-05-12 | Repligen Corporation | Modified pf4 compositions and methods of use |
FR2650598B1 (fr) | 1989-08-03 | 1994-06-03 | Rhone Poulenc Sante | Derives de l'albumine a fonction therapeutique |
WO1991006570A1 (en) | 1989-10-25 | 1991-05-16 | The University Of Melbourne | HYBRID Fc RECEPTOR MOLECULES |
US5959177A (en) | 1989-10-27 | 1999-09-28 | The Scripps Research Institute | Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies |
US6075181A (en) | 1990-01-12 | 2000-06-13 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
US6150584A (en) | 1990-01-12 | 2000-11-21 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
US5314995A (en) | 1990-01-22 | 1994-05-24 | Oncogen | Therapeutic interleukin-2-antibody based fusion proteins |
US5427908A (en) | 1990-05-01 | 1995-06-27 | Affymax Technologies N.V. | Recombinant library screening methods |
US5349053A (en) | 1990-06-01 | 1994-09-20 | Protein Design Labs, Inc. | Chimeric ligand/immunoglobulin molecules and their uses |
GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
ES2139598T3 (es) | 1990-07-10 | 2000-02-16 | Medical Res Council | Procedimientos para la produccion de miembros de parejas de union especifica. |
US5545806A (en) | 1990-08-29 | 1996-08-13 | Genpharm International, Inc. | Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
US5661016A (en) | 1990-08-29 | 1997-08-26 | Genpharm International Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes |
US5633425A (en) | 1990-08-29 | 1997-05-27 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
DK0546073T3 (da) | 1990-08-29 | 1998-02-02 | Genpharm Int | Frembringelse og anvendelse af transgene, ikke-humane dyr, der er i stand til at danne heterologe antistoffer |
US5625126A (en) | 1990-08-29 | 1997-04-29 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
CA2074825C (en) | 1990-12-14 | 2005-04-12 | Daniel J. Capon | Chimeric chains for receptor-associated signal transduction pathways |
JP4146512B2 (ja) | 1991-03-01 | 2008-09-10 | ダイアックス コープ. | 小型タンパク質 |
DK1471142T3 (da) | 1991-04-10 | 2009-03-09 | Scripps Research Inst | Heterodimere receptor-biblioteker under anvendelse af fagemider |
EP0586505A1 (en) | 1991-05-14 | 1994-03-16 | Repligen Corporation | Heteroconjugate antibodies for treatment of hiv infection |
DE4122599C2 (de) | 1991-07-08 | 1993-11-11 | Deutsches Krebsforsch | Phagemid zum Screenen von Antikörpern |
US5622929A (en) | 1992-01-23 | 1997-04-22 | Bristol-Myers Squibb Company | Thioether conjugates |
US5667988A (en) | 1992-01-27 | 1997-09-16 | The Scripps Research Institute | Methods for producing antibody libraries using universal or randomized immunoglobulin light chains |
FR2686899B1 (fr) | 1992-01-31 | 1995-09-01 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant. |
FR2686901A1 (fr) | 1992-01-31 | 1993-08-06 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Nouveaux polypeptides antithrombotiques, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant. |
US5447851B1 (en) | 1992-04-02 | 1999-07-06 | Univ Texas System Board Of | Dna encoding a chimeric polypeptide comprising the extracellular domain of tnf receptor fused to igg vectors and host cells |
ZA932522B (en) | 1992-04-10 | 1993-12-20 | Res Dev Foundation | Immunotoxins directed against c-erbB-2(HER/neu) related surface antigens |
WO1994004690A1 (en) | 1992-08-17 | 1994-03-03 | Genentech, Inc. | Bispecific immunoadhesins |
JPH08501085A (ja) | 1992-08-26 | 1996-02-06 | プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ | 抗腫瘍剤としてのサイトカインip−10の利用 |
ES2091684T3 (es) | 1992-11-13 | 1996-11-01 | Idec Pharma Corp | Aplicacion terapeutica de anticuerpos quimericos y radiomarcados contra el antigeno de diferenciacion restringida de los linfocitos b humanos para el tratamiento del linfoma de las celulas b. |
US7744877B2 (en) | 1992-11-13 | 2010-06-29 | Biogen Idec Inc. | Expression and use of anti-CD20 Antibodies |
US5516658A (en) | 1993-08-20 | 1996-05-14 | Immunex Corporation | DNA encoding cytokines that bind the cell surface receptor hek |
AU3382595A (en) | 1994-07-29 | 1996-03-04 | Smithkline Beecham Corporation | Novel compounds |
US5731168A (en) | 1995-03-01 | 1998-03-24 | Genentech, Inc. | Method for making heteromultimeric polypeptides |
DK1143006T3 (da) | 1995-08-18 | 2008-07-14 | Morphosys Ip Gmbh | Vektorer/DNA-sekvenser fra humane kombinatoriske antistofbiblioteker |
AU5711196A (en) | 1996-03-14 | 1997-10-01 | Human Genome Sciences, Inc. | Apoptosis inducing molecule i |
DE69731289D1 (de) | 1996-03-18 | 2004-11-25 | Univ Texas | Immunglobulinähnliche domäne mit erhöhten halbwertszeiten |
CA2248868A1 (en) | 1996-03-22 | 1997-09-25 | Human Genome Sciences, Inc. | Apoptosis inducing molecule ii |
CA2259157A1 (en) | 1996-07-05 | 1998-01-15 | Mount Sinai Hospital Corporation | Oligomerized receptors which affect pathways regulated by transmembrane ligands for elk-related receptor tyrosine kinases |
US5994076A (en) | 1997-05-21 | 1999-11-30 | Clontech Laboratories, Inc. | Methods of assaying differential expression |
WO1998052976A1 (en) | 1997-05-21 | 1998-11-26 | Biovation Limited | Method for the production of non-immunogenic proteins |
CA2309541C (en) | 1997-11-03 | 2011-01-11 | Human Genome Sciences, Inc. | Vegi, an inhibitor of angiogenesis and tumor growth |
EP1034298B1 (en) | 1997-12-05 | 2011-11-02 | The Scripps Research Institute | Humanization of murine antibody |
US6864227B1 (en) | 1998-04-13 | 2005-03-08 | California Institute Of Technology | Artery-and vein-specific proteins and uses therefor |
EP2261229A3 (en) | 1998-04-20 | 2011-03-23 | GlycArt Biotechnology AG | Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity |
AUPP674898A0 (en) | 1998-10-27 | 1998-11-19 | Walter And Eliza Hall Institute Of Medical Research, The | A method of treatment |
JP2002534959A (ja) | 1998-12-08 | 2002-10-22 | バイオベーション リミテッド | 免疫原性タンパク質の改変方法 |
CA2359067C (en) | 1999-01-15 | 2017-03-14 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants with altered effector function |
US6737056B1 (en) | 1999-01-15 | 2004-05-18 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants with altered effector function |
EP2264166B1 (en) | 1999-04-09 | 2016-03-23 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Method for controlling the activity of immunologically functional molecule |
AU6902200A (en) | 1999-08-11 | 2001-03-05 | Eos Biotechnology, Inc. | Novel methods of diagnosis of angiogenesis, compositions and methods of screening for angiogenesis modulators |
US6927203B1 (en) | 1999-08-17 | 2005-08-09 | Purdue Research Foundation | Treatment of metastatic disease |
US20050100542A1 (en) * | 1999-10-08 | 2005-05-12 | Young David S. | Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of CD44 |
US6992170B2 (en) * | 1999-10-15 | 2006-01-31 | Curagen Corporation | Polypeptides and polynucleotides homologous to thymosin, ephrin a receptors, and fibromodulin |
CA2388245C (en) | 1999-10-19 | 2012-01-10 | Tatsuya Ogawa | The use of serum-free adapted rat cells for producing heterologous polypeptides |
AU1574401A (en) | 1999-10-20 | 2001-04-30 | Zymogenetics Inc. | Granulocyte peptide homolog zgpa1 |
JP2003530839A (ja) | 2000-04-12 | 2003-10-21 | プリンシピア ファーマスーティカル コーポレイション | アルブミン融合タンパク質 |
JPWO2002030954A1 (ja) | 2000-10-06 | 2004-02-19 | 協和醗酵工業株式会社 | 抗体を精製する方法 |
US6946292B2 (en) | 2000-10-06 | 2005-09-20 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity |
DK2314686T4 (da) | 2000-10-06 | 2023-08-21 | Kyowa Kirin Co Ltd | Celler, der danner antistofsammensætninger |
US7138496B2 (en) | 2002-02-08 | 2006-11-21 | Genetastix Corporation | Human monoclonal antibodies against human CXCR4 |
US7083784B2 (en) | 2000-12-12 | 2006-08-01 | Medimmune, Inc. | Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof |
WO2003064589A2 (en) | 2001-01-23 | 2003-08-07 | Curagen Corporation | Therapeutic polypeptides, nucleic acids encoding same, and methods of use |
US20040043928A1 (en) | 2001-08-02 | 2004-03-04 | Ramesh Kekuda | Therapeutic polypeptides, nucleic acids encoding same, and methods of use |
CA2452578A1 (en) | 2001-07-03 | 2003-01-16 | The Hospital For Sick Children | Ephrin and eph receptor mediated immune modulation |
ATE430580T1 (de) | 2001-10-25 | 2009-05-15 | Genentech Inc | Glycoprotein-zusammensetzungen |
CA2466333A1 (en) | 2001-11-09 | 2003-05-15 | Neuronova Ab | Method of proliferation in neurogenic regions |
CA2467633C (en) | 2001-12-03 | 2012-03-27 | Abgenix, Inc. | Antibody categorization based on binding characteristics |
EP1487492A4 (en) | 2002-03-04 | 2008-10-01 | Medimmune Inc | PREVENTION OR TREATMENT OF CANCER USING INTEGRIN ALPHAVBETA3 ANTAGONISTS COMBINED WITH OTHER AGENTS |
ATE530577T1 (de) | 2002-05-10 | 2011-11-15 | Purdue Research Foundation | Epha2 agonistische monoklonale antikörper und deren anwendungsverfahren |
EP1852441B1 (en) | 2002-09-24 | 2012-03-28 | The Burnham Institute | Agents that modulate EPH receptor activity |
CA2499580A1 (en) * | 2002-09-24 | 2004-04-08 | The Burnham Institute | Novel agents that modulate eph receptor activity |
DK2345671T3 (en) | 2002-09-27 | 2016-02-15 | Xencor Inc | Optimized Fc variants and methods for their formation |
WO2004029218A2 (en) | 2002-09-27 | 2004-04-08 | Incyte Corporation | Receptors and membrane-associated proteins |
US7217797B2 (en) | 2002-10-15 | 2007-05-15 | Pdl Biopharma, Inc. | Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis |
US20040253606A1 (en) | 2002-11-26 | 2004-12-16 | Protein Design Labs, Inc. | Methods of detecting soft tissue sarcoma, compositions and methods of screening for soft tissue sarcoma modulators |
WO2004072266A2 (en) | 2003-02-13 | 2004-08-26 | Kalobios Inc. | Antibody affinity engineering by serial epitope-guided complementarity replacement |
ATE516047T1 (de) | 2003-05-09 | 2011-07-15 | Diadexus Inc | Ovr110-antikörperzusammensetzungen und anwendungsverfahren |
US20050153923A1 (en) | 2003-12-04 | 2005-07-14 | Kinch Michael S. | Targeted drug delivery using EphA2 or EphA4 binding moieties |
CA2574881C (en) | 2004-08-04 | 2013-01-08 | Amgen Inc. | Antibodies to dkk-1 |
US20060040325A1 (en) | 2004-08-16 | 2006-02-23 | Medimmune, Inc. | Integrin antagonists with enhanced antibody dependent cell-mediated cytoxicity activity |
CA2584804A1 (en) | 2004-10-21 | 2006-05-04 | The Penn State Research Foundation | Eph receptor tumor biomarkers |
US8222253B2 (en) | 2004-10-23 | 2012-07-17 | Case Western Reserve University | Peptide and small molecule agonists of EphA and their uses |
EP1809326A4 (en) | 2004-10-27 | 2009-11-04 | Medimmune Inc | MODULATION OF ANTIBODY SPECIFICITY BY MEASURING ADAPTATION OF ITS AFFINITY TO AN APPARENT ANTIGEN |
EP1928912A4 (en) | 2005-09-07 | 2010-02-24 | Medimmune Inc | EPH ANTI-RECEPTOR ANTIBODIES CONJUGATED TO TOXINS |
US7807459B2 (en) | 2005-09-27 | 2010-10-05 | Reneuron, Inc. | EphA4-positive human adult pancreatic endocrine progenitor cells |
US20070123448A1 (en) | 2005-11-23 | 2007-05-31 | The Hospital For Sick Children | Novel chemical entities affecting neuroblastoma tumor-initiating cells |
CA2643790A1 (en) | 2006-02-28 | 2007-09-13 | Oncotherapy Science, Inc. | Methods for damaging cells using effector functions of anti-epha4 antibodies |
JP5167155B2 (ja) | 2006-03-09 | 2013-03-21 | ザ ボード オブ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ テキサス システム | ペプチド結合に基づく多数の細胞株のプロファイリングに関連した組成物および方法 |
US20080003210A1 (en) | 2006-03-13 | 2008-01-03 | Medimmune, Inc. | Non-human primate receptor tyrosine kinases |
NZ591252A (en) | 2006-03-17 | 2012-06-29 | Biogen Idec Inc | Methods of designing antibody or antigen binding fragments thereof with substituted non-covarying amino acids |
EP2032694A4 (en) | 2006-06-06 | 2010-09-15 | Univ Tennessee Res Foundation | COMPOSITIONS ENRICHED IN NEOPLASTIC STEM CELLS AND METHODS INVOLVING THEM |
ES2673822T3 (es) * | 2006-07-18 | 2018-06-25 | Sanofi | Anticuerpo antagonista contra EphA2 para el tratamiento de cáncer |
AU2007293047B2 (en) | 2006-09-07 | 2014-01-09 | Scott & White Healthcare | Methods and compositions based on diphtheria toxin-interleukin-3 conjugates |
EP2102241A2 (en) | 2006-12-15 | 2009-09-23 | Ablynx N.V. | Amino acid sequences that modulate the interaction between cells of the immune system |
AU2008207945A1 (en) | 2007-01-22 | 2008-07-31 | Macrogenics West, Inc. | Human cancer stem cells |
CA2679986C (en) * | 2007-03-08 | 2018-03-06 | Martin Lackmann | Epha3 antibodies for the treatment of solid tumors |
US9289492B2 (en) | 2007-07-17 | 2016-03-22 | The General Hospital Corporation | Collecting ovarian cancer stem cells from ovarian cancer cells |
EP2022848A1 (en) | 2007-08-10 | 2009-02-11 | Hubrecht Institut | A method for identifying, expanding, and removing adult stem cells and cancer stem cells |
US20090130105A1 (en) | 2007-08-28 | 2009-05-21 | Biogen Idec Ma Inc. | Compositions that bind multiple epitopes of igf-1r |
WO2009039192A2 (en) * | 2007-09-17 | 2009-03-26 | The Regents Of The University Of Californina | Internalizing human monoclonal antibodies targeting prostate cancer cells in situ |
WO2009043051A2 (en) | 2007-09-27 | 2009-04-02 | Biogen Idec Ma Inc. | Cd23 binding molecules and methods of use thereof |
WO2010037134A2 (en) | 2008-09-29 | 2010-04-01 | Stemlifeline, Inc. | Multi-stage stem cell carcinogenesis |
WO2010066835A2 (en) | 2008-12-10 | 2010-06-17 | Ablynx Nv | Eph receptor and ephrin ligand interaction |
KR20110108390A (ko) | 2009-01-12 | 2011-10-05 | 신텔렉트 인코포레이티드 | 레이저로 매개된 박막 절개 및 세포 군체의 이동 |
US20110020221A1 (en) | 2009-04-09 | 2011-01-27 | The Johns Hopkins University | Cancer stem cell expression patterns and compounds to target cancer stem cells |
WO2010141974A1 (en) | 2009-06-10 | 2010-12-16 | The University Of Melbourne | Therapeutic applications |
EP2689787A1 (en) | 2010-09-03 | 2014-01-29 | Stem Centrx, Inc. | Identification and enrichment of cell subpopulations |
US20130061340A1 (en) | 2011-09-02 | 2013-03-07 | Stem Centrx, Inc. | Identification and Enrichment of Cell Subpopulations |
WO2013119964A2 (en) | 2012-02-08 | 2013-08-15 | Stem Centrx, Inc. | Identification and enrichment of cell subpopulations |
US20130061342A1 (en) | 2011-09-02 | 2013-03-07 | Stem Centrx, Inc. | Identification and Enrichment of Cell Subpopulations |
US9778264B2 (en) | 2010-09-03 | 2017-10-03 | Abbvie Stemcentrx Llc | Identification and enrichment of cell subpopulations |
EP2446895A1 (en) | 2010-10-01 | 2012-05-02 | Stemgen S.P.A. | EPH receptor expression in tumor stem cells |
RU2592672C9 (ru) | 2010-12-08 | 2016-11-27 | СтемСентРкс, Инк. | Новые модуляторы и способы их применения |
RU2016111131A (ru) | 2013-08-28 | 2017-10-03 | ЭББВИ СТЕМСЕНТРКС ЭлЭлСи | Способы конъюгации сайт-специфических антител и композиции |
EP3209334A2 (en) | 2014-10-20 | 2017-08-30 | Igenica Biotherapeutics, Inc. | Novel antibody-drug conjugates and related compounds, compositions, and methods of use |
US11392902B2 (en) | 2017-06-06 | 2022-07-19 | United Parcel Service Of America, Inc. | Systems, methods, apparatuses and computer program products for providing notification of items for pickup and delivery |
-
2011
- 2011-12-07 RU RU2013128444/10A patent/RU2592672C9/ru not_active IP Right Cessation
- 2011-12-07 PE PE2017000463A patent/PE20171143A1/es unknown
- 2011-12-07 SG SG2013044417A patent/SG191081A1/en unknown
- 2011-12-07 CN CN201610633887.7A patent/CN106279415A/zh active Pending
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Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003532365A (ja) * | 1997-08-29 | 2003-11-05 | イミュネックス・コーポレーション | Lerk−6と称されるサイトカイン |
JP2007522096A (ja) * | 2003-06-06 | 2007-08-09 | メディミューン,インコーポレーテッド | 癌の診断、治療、及び予防のためのEphA4及びEphA4変調因子の使用 |
JP2009539413A (ja) * | 2006-06-12 | 2009-11-19 | トゥルビオン・ファーマシューティカルズ・インコーポレーテッド | エフェクター機能を有する単鎖多価結合タンパク質 |
JP2010501596A (ja) * | 2006-08-31 | 2010-01-21 | エー・シー・エヌ・135 493 391・プロプライエタリー・リミテッド・アズ・トラスティー・フォー・コンカ・ユニット・トラスト | 抗体含有組成物を用いた非感染性の病状の処置および/または予防 |
WO2009052830A1 (en) * | 2007-10-22 | 2009-04-30 | Genmab A/S | Novel antibody therapies |
US20100113415A1 (en) * | 2008-05-29 | 2010-05-06 | Rajapakse Hemaka A | Epha4 rtk inhibitors for treatment of neurological and neurodegenerative disorders and cancer |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
ABDOU A G ET AL: "EPHRIN A4 EXPRESSION IN OSTEOSARCOMA,IMPACT ON PROGNOSIS AND PATIENT OUTCOME", INDIAN JOURNAL OF CANCER, vol. 47, no. 1, JPN5014002258, March 2010 (2010-03-01), pages 46 - 52, XP009158013, ISSN: 0003648222, DOI: 10.4103/0019-509X.58859 * |
ALONSO-C LUIS M ET AL, LEUKEMIA RESEARCH, vol. 33, no. 3, JPN5014002259, 1 March 2009 (2009-03-01), US, pages 395 - 406, ISSN: 0003648220 * |
YANG JUN-JIE ET AL: "PREPARATION AND ANALYSIS OF MONOCLONAL ANTIBODY AGAINST EPHA4 PEPTIDE", JOURNAL OF CENTRAL SOUTH UNIVERSITY. MEDICAL SCIENCES, vol. 30, no. 5, JPN5014002257, October 2005 (2005-10-01), pages 529 - 532, ISSN: 0003648221 * |
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