JP2014138593A - E型肝炎ウイルスのポリペプチド断片、それを含むワクチン組成物及び診断キット、並びにその使用 - Google Patents
E型肝炎ウイルスのポリペプチド断片、それを含むワクチン組成物及び診断キット、並びにその使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2014138593A JP2014138593A JP2014024629A JP2014024629A JP2014138593A JP 2014138593 A JP2014138593 A JP 2014138593A JP 2014024629 A JP2014024629 A JP 2014024629A JP 2014024629 A JP2014024629 A JP 2014024629A JP 2014138593 A JP2014138593 A JP 2014138593A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- polypeptide
- antibody
- virus
- hepatitis
- multimer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 413
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 397
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 383
- 239000012634 fragment Substances 0.000 title claims abstract description 68
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 57
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 56
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 title claims abstract description 38
- 241000724675 Hepatitis E virus Species 0.000 title claims description 162
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 55
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 40
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims abstract description 22
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims abstract description 15
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 claims abstract description 11
- 108700006289 Hepatitis E virus ORF3 Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 108700006290 Hepatitis E virus ORF2 Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 89
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 55
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 55
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 54
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 50
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 42
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 40
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 29
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 26
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 26
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 22
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 19
- 208000029564 hepatitis E virus infection Diseases 0.000 claims description 19
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 17
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 13
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 13
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 12
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 claims description 11
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 11
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 claims description 10
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 claims description 10
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 9
- 239000012491 analyte Substances 0.000 claims description 8
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 7
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 claims description 7
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 6
- 230000009830 antibody antigen interaction Effects 0.000 claims description 5
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 5
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 claims description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 4
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 25
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 abstract description 14
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 abstract description 10
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 abstract description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 52
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 47
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 41
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 41
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 41
- 101710159752 Poly(3-hydroxyalkanoate) polymerase subunit PhaE Proteins 0.000 description 35
- 101710130262 Probable Vpr-like protein Proteins 0.000 description 35
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 30
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 29
- 101000768957 Acholeplasma phage L2 Uncharacterized 37.2 kDa protein Proteins 0.000 description 26
- 101000823746 Acidianus ambivalens Uncharacterized 17.7 kDa protein in bps2 3'region Proteins 0.000 description 26
- 101000916369 Acidianus ambivalens Uncharacterized protein in sor 5'region Proteins 0.000 description 26
- 101000769342 Acinetobacter guillouiae Uncharacterized protein in rpoN-murA intergenic region Proteins 0.000 description 26
- 101000823696 Actinobacillus pleuropneumoniae Uncharacterized glycosyltransferase in aroQ 3'region Proteins 0.000 description 26
- 101000786513 Agrobacterium tumefaciens (strain 15955) Uncharacterized protein outside the virF region Proteins 0.000 description 26
- 101000618005 Alkalihalobacillus pseudofirmus (strain ATCC BAA-2126 / JCM 17055 / OF4) Uncharacterized protein BpOF4_00885 Proteins 0.000 description 26
- 102100020724 Ankyrin repeat, SAM and basic leucine zipper domain-containing protein 1 Human genes 0.000 description 26
- 101000967489 Azorhizobium caulinodans (strain ATCC 43989 / DSM 5975 / JCM 20966 / LMG 6465 / NBRC 14845 / NCIMB 13405 / ORS 571) Uncharacterized protein AZC_3924 Proteins 0.000 description 26
- 101000823761 Bacillus licheniformis Uncharacterized 9.4 kDa protein in flaL 3'region Proteins 0.000 description 26
- 101000819719 Bacillus methanolicus Uncharacterized N-acetyltransferase in lysA 3'region Proteins 0.000 description 26
- 101000789586 Bacillus subtilis (strain 168) UPF0702 transmembrane protein YkjA Proteins 0.000 description 26
- 101000792624 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YbxH Proteins 0.000 description 26
- 101000790792 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YckC Proteins 0.000 description 26
- 101000819705 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YlxR Proteins 0.000 description 26
- 101000948218 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YtxJ Proteins 0.000 description 26
- 101000718627 Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki Putative RNA polymerase sigma-G factor Proteins 0.000 description 26
- 101000641200 Bombyx mori densovirus Putative non-structural protein Proteins 0.000 description 26
- 101000947633 Claviceps purpurea Uncharacterized 13.8 kDa protein Proteins 0.000 description 26
- 101000948901 Enterobacteria phage T4 Uncharacterized 16.0 kDa protein in segB-ipI intergenic region Proteins 0.000 description 26
- 101000805958 Equine herpesvirus 4 (strain 1942) Virion protein US10 homolog Proteins 0.000 description 26
- 101000790442 Escherichia coli Insertion element IS2 uncharacterized 11.1 kDa protein Proteins 0.000 description 26
- 101000788354 Escherichia phage P2 Uncharacterized 8.2 kDa protein in gpA 5'region Proteins 0.000 description 26
- 101000770304 Frankia alni UPF0460 protein in nifX-nifW intergenic region Proteins 0.000 description 26
- 101000797344 Geobacillus stearothermophilus Putative tRNA (cytidine(34)-2'-O)-methyltransferase Proteins 0.000 description 26
- 101000748410 Geobacillus stearothermophilus Uncharacterized protein in fumA 3'region Proteins 0.000 description 26
- 101000772675 Haemophilus influenzae (strain ATCC 51907 / DSM 11121 / KW20 / Rd) UPF0438 protein HI_0847 Proteins 0.000 description 26
- 101000631019 Haemophilus influenzae (strain ATCC 51907 / DSM 11121 / KW20 / Rd) Uncharacterized protein HI_0350 Proteins 0.000 description 26
- 101000768938 Haemophilus phage HP1 (strain HP1c1) Uncharacterized 8.9 kDa protein in int-C1 intergenic region Proteins 0.000 description 26
- 101000785414 Homo sapiens Ankyrin repeat, SAM and basic leucine zipper domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 26
- 101000782488 Junonia coenia densovirus (isolate pBRJ/1990) Putative non-structural protein NS2 Proteins 0.000 description 26
- 101000811523 Klebsiella pneumoniae Uncharacterized 55.8 kDa protein in cps region Proteins 0.000 description 26
- 101000818409 Lactococcus lactis subsp. lactis Uncharacterized HTH-type transcriptional regulator in lacX 3'region Proteins 0.000 description 26
- 101000878851 Leptolyngbya boryana Putative Fe(2+) transport protein A Proteins 0.000 description 26
- 101000758828 Methanosarcina barkeri (strain Fusaro / DSM 804) Uncharacterized protein Mbar_A1602 Proteins 0.000 description 26
- 101001122401 Middle East respiratory syndrome-related coronavirus (isolate United Kingdom/H123990006/2012) Non-structural protein ORF3 Proteins 0.000 description 26
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 26
- 101001055788 Mycolicibacterium smegmatis (strain ATCC 700084 / mc(2)155) Pentapeptide repeat protein MfpA Proteins 0.000 description 26
- 101000740670 Orgyia pseudotsugata multicapsid polyhedrosis virus Protein C42 Proteins 0.000 description 26
- 101000769182 Photorhabdus luminescens Uncharacterized protein in pnp 3'region Proteins 0.000 description 26
- 101000961392 Pseudescherichia vulneris Uncharacterized 29.9 kDa protein in crtE 3'region Proteins 0.000 description 26
- 101000731030 Pseudomonas oleovorans Poly(3-hydroxyalkanoate) polymerase 2 Proteins 0.000 description 26
- 101001065485 Pseudomonas putida Probable fatty acid methyltransferase Proteins 0.000 description 26
- 101000711023 Rhizobium leguminosarum bv. trifolii Uncharacterized protein in tfuA 3'region Proteins 0.000 description 26
- 101000948156 Rhodococcus erythropolis Uncharacterized 47.3 kDa protein in thcA 5'region Proteins 0.000 description 26
- 101000917565 Rhodococcus fascians Uncharacterized 33.6 kDa protein in fasciation locus Proteins 0.000 description 26
- 101000790284 Saimiriine herpesvirus 2 (strain 488) Uncharacterized 9.5 kDa protein in DHFR 3'region Proteins 0.000 description 26
- 101000936719 Streptococcus gordonii Accessory Sec system protein Asp3 Proteins 0.000 description 26
- 101000788499 Streptomyces coelicolor Uncharacterized oxidoreductase in mprA 5'region Proteins 0.000 description 26
- 101001102841 Streptomyces griseus Purine nucleoside phosphorylase ORF3 Proteins 0.000 description 26
- 101000708557 Streptomyces lincolnensis Uncharacterized 17.2 kDa protein in melC2-rnhH intergenic region Proteins 0.000 description 26
- 101000649826 Thermotoga neapolitana Putative anti-sigma factor antagonist TM1081 homolog Proteins 0.000 description 26
- 101000827562 Vibrio alginolyticus Uncharacterized protein in proC 3'region Proteins 0.000 description 26
- 101000778915 Vibrio parahaemolyticus serotype O3:K6 (strain RIMD 2210633) Uncharacterized membrane protein VP2115 Proteins 0.000 description 26
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 26
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 25
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 25
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 22
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 22
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 22
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 22
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 20
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 20
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 19
- 239000000047 product Substances 0.000 description 18
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 17
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 17
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 16
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 14
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 13
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 12
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 12
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 12
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 12
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 12
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 12
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 11
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 11
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 11
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 11
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 11
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 10
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 10
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 10
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 10
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 10
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 10
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 9
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 9
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 8
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 7
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 7
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 7
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 7
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 7
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 7
- 238000010079 rubber tapping Methods 0.000 description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 7
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 6
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 6
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 6
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 6
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 6
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 6
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 5
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 5
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 5
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 5
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 5
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 5
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 5
- JLMZKEQFMVORMA-SRVKXCTJSA-N Pro-Pro-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 JLMZKEQFMVORMA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 4
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 4
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 4
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 4
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 4
- 201000010284 hepatitis E Diseases 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 4
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- 101150039660 HA gene Proteins 0.000 description 3
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 206010058874 Viraemia Diseases 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 108091006116 chimeric peptides Proteins 0.000 description 3
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 3
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 3
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 3
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 3
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000012317 liver biopsy Methods 0.000 description 3
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 3
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 3
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 3
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 description 3
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- 239000005723 virus inoculator Substances 0.000 description 3
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IZHVBANLECCAGF-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3-(octadecanoyloxy)propyl octadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC IZHVBANLECCAGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate Chemical compound C1=C(Br)C(Cl)=C2C(OP(O)(=O)O)=CNC2=C1 QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 2
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 102100024452 DNA-directed RNA polymerase III subunit RPC1 Human genes 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- YWAQATDNEKZFFK-BYPYZUCNSA-N Gly-Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YWAQATDNEKZFFK-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 208000037262 Hepatitis delta Diseases 0.000 description 2
- 241000724709 Hepatitis delta virus Species 0.000 description 2
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 2
- 241001272567 Hominoidea Species 0.000 description 2
- 101000689002 Homo sapiens DNA-directed RNA polymerase III subunit RPC1 Proteins 0.000 description 2
- 101000833492 Homo sapiens Jouberin Proteins 0.000 description 2
- 101000651236 Homo sapiens NCK-interacting protein with SH3 domain Proteins 0.000 description 2
- 102100024407 Jouberin Human genes 0.000 description 2
- 101150009852 ORF2 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000282520 Papio Species 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- ZTHYODDOHIVTJV-UHFFFAOYSA-N Propyl gallate Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 ZTHYODDOHIVTJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000933967 Pseudomonas phage KPP25 Major capsid protein Proteins 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 2
- RAHZWNYVWXNFOC-UHFFFAOYSA-N Sulphur dioxide Chemical compound O=S=O RAHZWNYVWXNFOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical group O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- -1 alum Chemical compound 0.000 description 2
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 2
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 108091036078 conserved sequence Proteins 0.000 description 2
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- SYUXAJSOZXEFPP-UHFFFAOYSA-N glutin Natural products COc1c(O)cc2OC(=CC(=O)c2c1O)c3ccccc3OC4OC(CO)C(O)C(O)C4O SYUXAJSOZXEFPP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000001788 mono and diglycerides of fatty acids Substances 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 229920000724 poly(L-arginine) polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 108010011110 polyarginine Proteins 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 2
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- NTHWMYGWWRZVTN-UHFFFAOYSA-N sodium silicate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Si]([O-])=O NTHWMYGWWRZVTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 2
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 2
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 2,4-Hexadienoic acid, potassium salt (1:1), (2E,4E)- Chemical compound [K+].CC=CC=CC([O-])=O CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CNADFJWZRHOPKX-UHFFFAOYSA-N 3-chlorylbut-1-yn-1-ol Chemical compound O=Cl(=O)C(C)C#CO CNADFJWZRHOPKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 101710186708 Agglutinin Proteins 0.000 description 1
- 229910018072 Al 2 O 3 Inorganic materials 0.000 description 1
- YCRAFFCYWOUEOF-DLOVCJGASA-N Ala-Phe-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CC=CC=C1 YCRAFFCYWOUEOF-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- 102100027211 Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- CZIXHXIJJZLYRJ-SRVKXCTJSA-N Asn-Cys-Tyr Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 CZIXHXIJJZLYRJ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- PLNJUJGNLDSFOP-UWJYBYFXSA-N Asp-Tyr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O PLNJUJGNLDSFOP-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- QPDUWAUSSWGJSB-NGZCFLSTSA-N Asp-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N QPDUWAUSSWGJSB-NGZCFLSTSA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100091490 Caenorhabditis elegans hrp-1 gene Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 101710167800 Capsid assembly scaffolding protein Proteins 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 206010011831 Cytomegalovirus infection Diseases 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N HA peptide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N 0.000 description 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 1
- 206010019786 Hepatitis non-A non-B Diseases 0.000 description 1
- 206010019799 Hepatitis viral Diseases 0.000 description 1
- JGFWUKYIQAEYAH-DCAQKATOSA-N His-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O JGFWUKYIQAEYAH-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 101001011382 Homo sapiens Interferon regulatory factor 3 Proteins 0.000 description 1
- 101710146024 Horcolin Proteins 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 1
- 102100029843 Interferon regulatory factor 3 Human genes 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- PWKSKIMOESPYIA-BYPYZUCNSA-N L-N-acetyl-Cysteine Chemical compound CC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O PWKSKIMOESPYIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 101710189395 Lectin Proteins 0.000 description 1
- 101710179758 Mannose-specific lectin Proteins 0.000 description 1
- 101710150763 Mannose-specific lectin 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710150745 Mannose-specific lectin 2 Proteins 0.000 description 1
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 229920002274 Nalgene Polymers 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 101710113540 ORF2 protein Proteins 0.000 description 1
- 101150073872 ORF3 gene Proteins 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 229920002535 Polyethylene Glycol 1500 Polymers 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 241000156302 Porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus Species 0.000 description 1
- 102000002067 Protein Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010001267 Protein Subunits Proteins 0.000 description 1
- 101100408135 Pseudomonas aeruginosa (strain ATCC 15692 / DSM 22644 / CIP 104116 / JCM 14847 / LMG 12228 / 1C / PRS 101 / PAO1) phnA gene Proteins 0.000 description 1
- 101710090523 Putative movement protein Proteins 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 101100438134 Rattus norvegicus Cabs1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 101000817083 Salmonella phage P22 Uncharacterized 22.8 kDa protein in gp15-gp3 intergenic region Proteins 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- SBMNPABNWKXNBJ-BQBZGAKWSA-N Ser-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO SBMNPABNWKXNBJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 108010067674 Viral Nonstructural Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 229960004308 acetylcysteine Drugs 0.000 description 1
- 231100000354 acute hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 1
- 239000000910 agglutinin Substances 0.000 description 1
- 230000004931 aggregating effect Effects 0.000 description 1
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CEGOLXSVJUTHNZ-UHFFFAOYSA-K aluminium tristearate Chemical compound [Al+3].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O CEGOLXSVJUTHNZ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940063655 aluminum stearate Drugs 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009833 antibody interaction Effects 0.000 description 1
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 230000009831 antigen interaction Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 229940031567 attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012928 buffer substance Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 150000001722 carbon compounds Chemical class 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 description 1
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 239000003398 denaturant Substances 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 210000004407 endothelial cell of postcapillary venule of lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000005530 etching Methods 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 229940074045 glyceryl distearate Drugs 0.000 description 1
- 229940075507 glyceryl monostearate Drugs 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000002288 golgi apparatus Anatomy 0.000 description 1
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000010710 hepatitis C virus infection Diseases 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 238000000589 high-performance liquid chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 239000000820 nonprescription drug Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000011022 operating instruction Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 235000010241 potassium sorbate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004302 potassium sorbate Substances 0.000 description 1
- 229940069338 potassium sorbate Drugs 0.000 description 1
- 238000012257 pre-denaturation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 description 1
- 108010079317 prolyl-tyrosine Proteins 0.000 description 1
- 239000000473 propyl gallate Substances 0.000 description 1
- 229940075579 propyl gallate Drugs 0.000 description 1
- 235000010388 propyl gallate Nutrition 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 229910052705 radium Inorganic materials 0.000 description 1
- HCWPIIXVSYCSAN-UHFFFAOYSA-N radium atom Chemical compound [Ra] HCWPIIXVSYCSAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 229940044609 sulfur dioxide Drugs 0.000 description 1
- 235000010269 sulphur dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- VUYXVWGKCKTUMF-UHFFFAOYSA-N tetratriacontaethylene glycol monomethyl ether Chemical compound COCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO VUYXVWGKCKTUMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 229910000391 tricalcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 101150044170 trpE gene Proteins 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 201000001862 viral hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
- C07K14/08—RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/29—Hepatitis virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6075—Viral proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/28011—Hepeviridae
- C12N2770/28111—Hepevirus, e.g. hepatitis E virus
- C12N2770/28122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/28011—Hepeviridae
- C12N2770/28111—Hepevirus, e.g. hepatitis E virus
- C12N2770/28134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/28011—Hepeviridae
- C12N2770/28111—Hepevirus, e.g. hepatitis E virus
- C12N2770/28171—Demonstrated in vivo effect
Abstract
【解決手段】E型肝炎ウイルスORF−2のアミノ酸配列を含むn量体(nは2〜180の整数)のポリペプチド、またはその断片。また、前記断片をインフルエンザウイルスの赤血球凝集素の保存断片と融合させたキメラポリペプチド、および前記断片とE型肝炎ウイルスORF3のエピトープポリペプチドもしくはその免疫原性活性断片との共有結合、および前記のポリペプチドをコードするDNA分子を含む発現ベクター、発現ベクターを含む発現宿主。
【選択図】なし
Description
本発明は、N重合体ポリペプチド(Nは1〜180の整数である)の形の、配列番号1で示す、E型肝炎ウイルスのORF2のアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその断片;本発明のポリペプチドとインフルエンザウイルス由来赤血球凝集素抗原の保存断片とからなるキメラタンパク質;E型肝炎ウイルスORF3由来のエピトープを含むポリペプチド又はその免疫原性断片に結合した本発明のポリペプチド;上記のポリペプチドをコードするDNA分子を含む組換え発現ベクター、及び本発明のポリペプチドを発現させることのできる、前記組換え発現ベクターで形質転換した宿主細胞に関する。
E型肝炎ウイルス(HEV)は、経腸的に伝染した非A非B型肝炎の病原体として1983年に最初に確認された(Balayan等、1983年、Intervirology第20巻:23ページ、)。E型肝炎は、主に、アジア、アフリカ、中央アメリカの開発途上国に特有である。先進国でのE型肝炎の症例は、ほとんど外国からの移民又は旅行者に見られた。散発性の症例も大規模な流行も報告されている。1950年代から1990年代の期間に、飲料水の汚染のために、E型肝炎の数件の大発生が連続して起こった(Visvanathan、1957年、Indian J.Med.Res.Suppl.第45巻:1〜30ページ;Wong等、1980年、Lancet.第2巻:882〜885ページ;Myint等、1985年、Am J Trop Med Hyg.第34:1183〜1189ページ;Belabbes等、1985年、J Med Virol.第16巻:257〜263ページ;Hau等、1999年、Am J Trop Med Hyg.第60巻:277〜280ページ)。大部分のE型肝炎感染は、自己制限的であり、慢性に発展することはほとんどないが、妊婦については予後が重く、死亡率が17%を上回る。(Tsega等、1992年、Clin.Infec Dis.第14巻:961〜965ページ;Dilawari等、1994年、Indian J Gastroenterol.第13巻:44〜48ページ;Hussaini等、1997年、J Viral Hepat.第4巻:51〜54ページ)。
本発明の一態様では、n重合体ポリペプチド(nは1〜180の整数である)の形の、E型肝炎ウイルスのオープンリーディングフレーム(ORF)2(配列番号1で示す)のアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその断片であって、前記の配列番号1で示すE型肝炎ウイルスORF2又はその断片のアミノ酸を含むポリペプチドが、
1)アミノ末端がアミノ酸残基113と469の間から出発し、カルボキシル末端がアミノ酸残基596と660の間で終結しているポリペプチド、
2)アミノ末端がアミノ酸残基370と469の間から出発し、カルボニル末端がアミノ酸残基601と628の間で終結しているポリペプチド、
3)アミノ末端がアミノ酸残基390と459の間から出発し、カルボキシル末端がアミノ酸残基601と610の間で終結しているポリペプチド、
4)配列番号1のアミノ酸残基414〜660のアミノ酸配列を有するポリペプチド、すなわちポリペプチド247、
5)配列番号1のアミノ酸残基429〜660のアミノ酸配列を有するポリペプチド、すなわちポリペプチド232、
6)配列番号1のアミノ酸残基439〜660のアミノ酸配列を有するポリペプチド、すなわちポリペプチド222、
7)配列番号1のアミノ酸残基459〜660のアミノ酸配列を有するポリペプチド、すなわちポリペプチド201、
8)配列番号1のアミノ酸残基394〜628のアミノ酸配列を有するポリペプチド、すなわちポリペプチド235N、
9)配列番号1のアミノ酸残基394〜618のアミノ酸配列を有するポリペプチド、すなわちポリペプチド225N、
10)配列番号1のアミノ酸残基394〜602のアミノ酸配列を有するポリペプチド、すなわちポリペプチド209N、
11)配列番号1のアミノ酸残基394〜601のアミノ酸配列を有するポリペプチド、すなわちポリペプチド208N、
12)配列番号1のアミノ酸残基394〜606のアミノ酸配列を有するポリペプチド、すなわちポリペプチドNE2I、
13)配列番号1のアミノ酸残基390〜603のアミノ酸配列を有するポリペプチド、すなわちポリペプチド217D、
14)配列番号1のアミノ酸残基374〜618のアミノ酸配列を有するポリペプチド、すなわちポリペプチド205、
15)配列番号1のアミノ酸残基414〜602のアミノ酸配列を有するポリペプチド、すなわちポリペプチド189、
16)配列番号1のアミノ酸残基414〜601のアミノ酸配列を有するポリペプチド、すなわちポリペプチド188、
17)配列番号1のアミノ酸残基459〜628のアミノ酸配列を有するポリペプチド、及び
18)N末端にMetが付加され、C末端の3’末端上のアミノ酸残基603のProにおいて、5’〜3’方向にアミノ酸配列−Pro−Pro−Argが付加されてC末端が修飾されている、配列番号1のアミノ酸残基X〜603のアミノ酸配列を有するポリペプチドであって、
a)Xがアミノ酸残基394である場合の、配列番号2で示す前記ポリペプチド、すなわちNE2、
b)Xがアミノ酸残基414である場合の、配列番号3で示す前記ポリペプチド、すなわち193C、
c)Xがアミノ酸残基429である場合の、配列番号4で示す前記ポリペプチド、すなわち178C、
d)Xがアミノ酸残基439である場合の、配列番号7で示す前記ポリペプチド、すなわち168C、
e)Xがアミノ酸残基449である場合の、配列番号8で示す前記ポリペプチド、すなわち158C、
f)Xがアミノ酸残基459である場合の、配列番号9で示す前記ポリペプチド、すなわち148C、
g)Xがアミノ酸残基469である場合の、配列番号10で示す前記ポリペプチド、すなわち138Cが含まれるもの
からなる群から選択されているポリペプチドを提供する
本発明の別の態様では、上の1)から18)で表される前述のポリペプチドのいずれか1つとの相同性が少なくとも80%であり、抗原性や免疫原性など、生物学的特性がほぼ同一であるポリペプチドをさらに提供する。
別段の指示がない限り、本明細書で使用する用語又は術語は、当技術分野で通常使用されているものと同じである。細胞培養、分子遺伝学、核酸化学、及び免疫学的手順における通常の製造が、当技術分野で定型化した技術として実施される。本発明では、別段の指示がない限り、本明細書で使用するこれらの用語は、以下のような意味である。
一態様では、本発明は、驚くべきことに、抗体との十分な反応性及び/又は免疫原性を有する一連のHEVポリペプチド断片であり、配列番号1で示すHEV ORF2のアミノ酸配列中に含まる断片を提供する。個々の断片の名称は、実施例6の表1に出ている。
本発明のポリペプチドは、化学的合成方法や組換えDNA技術など、当技術分野で知られている方法によって調製できる。好ましくは、本発明のポリペプチドの調製方法は、組換えDNAを発現させることによって行うことができる。組換えタンパク質を調製する方法は、当技術分野でよく知られており、本明細書で詳細に述べる必要はないが、実施例中の方法を参照することもできる。組換えタンパク質の産生に使用できる細胞に関して言及すべきものとしては、細菌細胞(P.O.Olins及びS.C.Lee、1993年、Curr.Opi.Biotechnology第4巻:520〜525ページ)、酵母細胞(R.G.buckholz、1993年、Curr.Opi.Biotechnology第4巻:538〜542ページ)、動物細胞、特に哺乳動物細胞培養物(C.P.Edwards及びA.Aruffo、1993年、Curr.Opi.Biotechnology第4巻:558〜563ページ)、及び昆虫細胞がある。昆虫細胞での方法については、たとえば、バキュロウイルス(V.A.Luckow、1993年、Curr.Opi.Biotechnology第4巻:564〜572ページ)を参照されたい。これに関して、本発明はさらに、上述のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む組換え発現ベクターも提供する。本発明はさらに、そこに含まれるヌクレオチド配列によってコードされる前記ポリペプチドを発現させることのできる、上述の組換え発現ベクターで形質転換した宿主細胞も提供する。
本発明の別の態様では、上述のポリペプチドのいずれか1種とインフルエンザウイルス由来赤血球凝集素抗原の保存断片とからなるキメラタンパク質も提供する。赤血球凝集素抗原(以下ではHAと示す)は、2種のインフルエンザウイルス表面抗原の1つであり、対象血清中のインフルエンザウイルスに対する抗体を特異的に検出する際に使用される最もよく導入される抗原である。動物にHAをワクチン接種して産生させた抗体によって、レシート(receipt)がインフルエンザウイルスに再感染するのを有効に予防できることは知られている。したがって、HAに対する抗体が集団の大部分に与えられていると考えるのが妥当である。これまでの報告(McEwen J.等、Vaccine、1992年;第10巻(6):405〜11ページ)によると、エピトープ91〜108aaは、A型インフルエンザウイルスのH3株すべてのHA遺伝子中にある保存アミノ配列である。本発明の好ましい一実施形態ではまず、遺伝子工学によって、Gly−Gly−Serなど、免疫原性の高い本発明のHEV ORF2遺伝子のポリペプチド断片に、HA遺伝子(91〜108aa)を柔軟に連結して、原核生物発現系、特に大腸菌中でのキメラ発現を確立させる。次いで、予めインフルエンザウイルスを感染させることによって産生させたHA抗体で追加免疫を行って、力価の高い防御的な抗HEV抗体を得る。この方法では、本発明のポリペプチドのORF2断片だけを含むワクチンに優るHEVワクチンが得られる。
別の態様では、本発明はさらに、少なくとも1種の本発明のポリペプチドもしくはその何らかの併用物と、任意選択の薬剤として許容される賦形剤及び/もしくはアジュバントとを含む、哺乳動物のE型肝炎ウイルス感染を予防及び/又は治療するためのワクチン組成物も提供する。
別の態様では、本発明は、対象に予防及び/又は治療に有効な量の本発明のポリペプチド、又は少なくとも1種の本発明のポリペプチド及びインフルエンザウイルス赤血球凝集素の保存断片からなるキメラタンパク質を投与することを含む、哺乳動物のE型肝炎ウイルス感染を予防及び/又は治療する方法を提供する。特に、前記方法は、対象に本発明のワクチン組成物を投与するステップを含む。本発明が選択する保存断片は、91〜108個のアミノ酸残基からのアミノ酸断片であることが好ましい。
本発明のポリペプチドは、生物検体においてHEVに対する抗体IgG、IgM、又は全抗体の存在を検出するために使用でき、既存の検出キット又は検出法より感度及び特異性が高いことが特徴である。したがって、本発明は、抗体/抗原相互作用に適する条件下、検出すべき検体と検出に有効な量の本発明のポリペプチドを接触させるステップを含む、生物検体におけるHEV感染の存在を判定する方法を提供する。
別段の指示がない限り、本発明の分子生物学の実験方法およびイムノアッセイはすべて、「分子クローニング:実験室必携(Molecular Cloning:a Laboratory Manual)」第2版、Joseph Sambrook、David W.Russell著、Cold Spring Harbor Laboratory Press、および「分子生物学におけるショートプロトコル(Short Protocols in Molecular Biology)」、第3版、John Wiley & Sons,Inc.、1995年の基本的な記載事項に従う。制限エンドヌクレアーゼの使用は、提供者が提示するプロトコルに従う。
鋳型としてのHEV ORF2画分の調製
問題の遺伝子を調製するにあたり、中国新疆省のHEV感染患者からクローン化した、鋳型としての全長HEV遺伝子(Aye,T.T.、Uchida等、Nucleic Acids Research第20巻(13)3512ページ(1992年);遺伝子銀行受入れ番号D11092)、ならびに上方のプライマーとしてのORF2 FP:5’−atgcgccctcggcca−3’および下方のプライマーとしてのORF2 RP:5’−aaataaactataactcccga−3’の2種のプライマーを用いるポリメラーゼ連鎖反応法(PCR)を利用する。PCR反応は、PCRサーマルサイクラー(BIOMETRAt3)において、94℃で5分間;次いで94℃で50秒間、57℃で50秒間、および72℃で2.5分間を25サイクル;最後に72℃で10分間という条件下で実施する。本発明のポリペプチドを調製する鋳型としてのHEV ORF2からのDNA断片約2kbが得られる。先述のPCR産物を市販のベクターpMD18−T(TAKARA社)にさらに連結し、次いでORF2遺伝子が挿入された陽性クローンが識別されるようにBamHI/HindIIIで消化する。M13(+)/(−)をプライマーとして使用して、得られたものの配列を決定し、それによって本発明のポリペプチドを調製する鋳型として使用する2本のHEV ORF2DNA断片、すなわち一方が保存配列(鋳型1、配列番号5)、他方が変異配列(鋳型2、配列番号6)を識別する。
ポリメラーゼ連鎖反応法(PCR)において、上記で得た配列の配列番号5を鋳型として使用し、ならびにBamHI部位、NdeI部位(CAT ATG)、および大腸菌系の翻訳開始コドンとしてのATGを導入した前方向プライマー201FP:5’−ggatcccatatggttattcaggattatgac−3’(表1を参照のこと)と、終止コドンおよびEcoRI部位を導入した逆方向プライマーとしての201RP:5’−ctcgagaaataaactataactcccga−3’(表1を参照のこと)とを使用するものを利用して遺伝子を合成する。PCRは、サーモサイクラーにおいて、94℃で5分間熱変性させ、次いで94℃で50秒間、57℃で40秒間、および72℃で40秒間のサイクルを30回、さらに最後に72℃で10分間増幅させて実施する。得られた〜600bpのPCR産物が本発明のポリペプチド201をコードするヌクレオチド配列であることを確認する。
カルボキシル末端がPro−Pro−Argである本発明のポリペプチドは、上述のORF2−201の発現ベクターでの方法に従って得た発現ベクターで大腸菌ERR2566を形質転換することによって発現される。具体的には、上述のHEV ORF2変異配列の配列番号6を鋳型とし、本発明の個々のポリペプチド向けに特別に設計された個々の前方向/逆方向プライマー(表1を参照のこと)を使用して、ポリペプチド201の発現ベクターを作製するのと同様の条件下でのPCRによって対応する発現ベクターを得る。この方法では、免疫原性および免疫反応性の良好な一連の本発明のポリペプチドが得られ、得られるポリペプチドは、そのN末端にMetが付加され、カルボキシル末端のアミノ酸603のProである3’末端において、5’から3’の方向にアミノ酸配列−Pro−Pro−Argが付加されている。
形質転換用の(塩化カルシウム法で発生させた)大腸菌ERR2566コンピテント細胞40uLにプラスミドpTO−T7−ORF2−201(0.15mg/mL)1uLを加えた。次いで、混合物をカナマイシンLBプレートにスクロールし、個々のクローンが得られるまでプレートを37℃で10〜12時間インキュベートした。個々のクローンを選び取り、さらに管中LB培地4mLに接種し、培養物のOD550nm値が約1.5になるまで、37℃で10時間、220rpmで振とうした。次いで、1mLの培地を後の使用に備えて4℃で保管し、残りの3mlの培地(最終濃度は0.3mM)に0.5MのIPTG2uLを加えた。IPTG含有培地を220rpmで振とうしながら37℃で4時間インキュベートを続けて、問題のポリペプチドの発現を誘導した。誘導を行った培地1.5mLを30秒間12000gでの遠心分離にかけた。沈殿した細胞を100uLのタンパク質添加液(50mMのトリスClpH6.8、100mMのDTT、2%のSDS、0.1%のブロモフェノールブルー、10%のグリセロール)に再懸濁させ、さらに10分間煮沸し、次いで10分間12000gでの遠心分離にかけた。10ulの上清を12%SDS−PAGEにかけて、ポリペプチド201の発現を解析した。高い収率で発現したクローンをさらなる発酵に使用した。
実施例2で得た組換えポリペプチド201を含有する大腸菌の培地を15分間4000rpmでの遠心分離にかけ、培養物の沈殿各500mLを15mLの溶解緩衝液(dH2O中50mMのトリスCl、10mMのEDTA、および300mMのNaCl、pH7.2)に再懸濁させた。超音波処理器において細胞を超音波処理した(Uilbra−CellVCX500、SONICS & MATERIALS company、パワー70%、40秒間オン、60秒間オフ、合計20分間の超音波処理)。超音波処理した混合物を4℃で10分間12000rpmでの遠心分離にかけ、ペレットを2%のトリトンX100を含む緩衝液I溶液(200mMのトリスCl、pH8.5;5mMのEDTA;100mMのNaCl)に再懸濁させ、最終体積は、元の溶解液と同じである。混合物を37℃で30分間、200rpmで振とうし、次いで4℃で10分間10000rpmでの遠心分離にかけた。ペレットを等しい体積の緩衝液Iに再懸濁させ、混合物を超音波処理した(40秒間オン、60秒間オフ、パワー70%、合計で3分間の超音波処理)。その後、混合物を4℃で10分間遠心分離した(10000rpm)。ペレットを2%のトリトンX100を含む緩衝液Iに再懸濁させて、最終体積を前と同じにした。混合物を37℃で30分間振とう(200rpm)した後、4℃で10分間遠心分離した(10000rpm)。ペレットを37℃で30分間振とう(200rpm)して、等しい体積の緩衝液Iに再懸濁させた。次いで、混合物を4℃で10分間、10000rpmで遠心分離した。ペレットを2Mの尿素を含む緩衝液Iに再懸濁させて、最終体積を元の混合物と同じにした。37℃で30分間、200rpmで振とうした後、混合物を4℃で10分間、10000rpmで遠心分離した。この上清に201−2Mと印をつけた。ペレットは、4Mの尿素を含む緩衝液Iに再懸濁させて、最終体積を前と同じにした。37℃で1時間振とう(200rpm)した後、混合物を一晩4℃で保管し、次いでこれを4℃で10分間、12000rpmで遠心分離した。この上清に201−4Mと印をつけた。上記の試料の純度はすべて、12%SDS−PAGEによって解析した。図3に結果を示す。
実施例3に従って調製した試料201−4M100mlを2袋の透析バッグ(36DM、保持MW:8000〜10000、米国United Carbon Compound)に装入し、1×PBS(Na2HPO4.12H2O 73.344g、KH2PO4 4g、NaCl 163、632g、KCl 4.024gを含有する20×PBS(1L)、pH7.45)900mlを含む1L容ビーカー中で攪拌しながら、25℃で終夜(10時間)透析を行うと、透析バッグ中に白色の沈殿が認められた。透析液を補給し、透析を続け、次いで透析液を3時間毎に4回補給した。原則として、透析が済んだときの試料中の尿素含有量は、4×10−6Mである。透析した試料を25℃で10分間、12000rpmで遠心分離し、上清を0.22μmの濾過膜で濾過してさらに精製し;4Mの尿素/緩衝液Iに懸濁させたペレットを新しい透析で使用して、その間に沈殿を出現させることもできるが、得られるタンパク質試料の濃度が最初に得たものより低くなる。
実施例4の方法に従って調製した再生201の試料を以下のようなHPLC、すなわち、
機器:Beckman System Gold Nouveau 125NMP/166NMP HPLC、
カラム:TSK GEL SW3000 21.5mm×60cm、
溶離:1×PBS pH7.45、
流速:4ml/分、
検出:280nmのUV、
試料:4MのNE2(8mg/ml)2ml、
収集:ウィンドウ式自動頂角収集(automatic apex collection of window mode)、
収集時間:1チューブ/20秒、
収集遅延:6秒によって精製した。
実施例1〜5の方法に従って、本発明の組換えポリペプチドを作製し、発現させた。さらに、各々の組換えペプチドを洗浄し、実施例3〜4の方法に従って透析にかけた。表2に、各組換えペプチドのE型肝炎ウイルスにおける対応するアミノ酸配置、発現された組換え産物の再生特性、SDS−PAGEでの単量体および二量体の比率、ならびに多量体の生成を示す。
封入体からの再生
実施例1〜3で記載したとおりに調製した組換えポリペプチドの封入体を4Mの尿素で変性させ、次いで実施例4で記載したとおりに、100を超える量のPBSでの透析にかけた。透析したものを10分間12,000rpmで遠心分離した。上清は、若干またはすべての組換えポリペプチドを含んでおり、それによって前記組換えポリペプチドに再生能力があることを実証する。
従来のSDS−PAGEを利用する上清の解析において、それぞれ単量体、二量体、および多量体に対応するバンドを識別した。従来のウェスタンブロット法によって前記バンドの特異性をさらに確かめ、それによって組換えポリペプチド201が再生後に重合体を形成することを実証した(図4を参照のこと)。
実施例6に従って、ポリペプチド201をHPLCによって精製した後、10分間20,000rpmで遠心分離し、次いで0.1umのアルミナ製ミリポア膜で濾過した。濾液を動的光走査計(DYNA−POR99−D−50、米国PROTEIN SOLUTION Com.Ltd.)による824.0nmでの測定にかけた。算出には制御アルゴリズムを使用し、数多くの標準試料によってその実用性を確かめた。分子の半径は、%ピーク強度に対応する動的半径から算出した。溶媒は、試料緩衝液PBSとした。図5に示す測定結果は、変性剤を含まない溶液中のポリペプチド201の平均半径が3.08nmであったことを示唆し、(三量体に相当する)MW62.7KDが算出された。本発明の技術者には、前記の本発明のポリペプチドが実際に180個以上の単量体の重合体を形成したことが知られている。
ハイブリドーマ細胞系の確立
第一次の免疫化では、各々のBalb/C雌性マウス(生後6〜8週間)に5ugの組換え抗原NE2で乳化したフロイント不完全アジュバント(総体積50uL)で免疫化を施した。15日後、マウスにフロイント不完全アジュバント中に乳化された同じ量のNE2を筋肉内投与して2回目の免疫化を施した。30日後、アジュバントなしの抗原5ugを(尾の静脈を通して)静脈内投与してマウスに追加免疫を施した。追加免疫の後72〜96時間でマウスを屠殺した。次いで血液を採取し、脾臓を切除して、(RPMI1640培地に懸濁させて)脾細胞懸濁液を調製した。脾細胞を細胞計数器でカウントした。次いで、6:1の比で脾細胞をSP2/0マウス黒色腫細胞と混合し、遠心分離した。細胞をPEG(PEG1500)で融合し、次いで等しい量の支持細胞と混合し、96穴プレート(200uL/ウェル)に移した。5%のCO2雰囲気において、96穴プレートを恒温器(ESPEC BNA−31)において37℃でインキュベートした。3日後、培地の半分を新鮮なHT培地(RPMI1640培地(GIBCO Int.)を加えて100mLとし、約45〜50℃で溶解させ、濾過して滅菌した1.361mgのヒポキサンチンおよび0.388mgのチミジン)に入れ替えた。7日後、96穴プレートにNE2を塗布し、以下に述べるようにハイブリドーマ細胞培養物についてのELISAアッセイを実施した。ELISAアッセイで陽性であった細胞を限界希釈法によってクローン化した。
実施例5で述べたHPLCによって100uLのNE2を37℃で精製し、次いで0.05モル/LのCB(ddH2Oを加えて1Lとした20.02gのNa2CO3および2.52gのNaHCO3、pH9.5)に溶解させて、最終濃度を0.3ug/mLとした。96穴ポリビニルマイクロタイタープレートを、37℃で2時間、次いで4℃で一晩かけて、得られた溶液で処理した。マイクロタイタープレートをPBST(ddH2Oを加えて1Lとした8.0gのNaCl、0.2gのKH2PO4、2.9gのNa2HPO4 12H2O、0.2gのKCl、および0.5mLのTween−20、pH7.4)で洗浄して、吸収されていない抗原を除去した。次いで、ウェル毎に200uLのブロッキング用緩衝液(1×PBS中2%のグルチン、0.2%のカゼイン、および2%のスクロース)を加え、2時間インキュベートした。次いで溶液を流し、ウェルを乾燥させ、真空中に4℃で保管した。
生後10週間のBalb/Cマウス各々に0.5mLのフロイント不完全アジュバントを腹腔内接種した。2〜7日後、ハイブリドーマ細胞を収集し、遠心分離した。次いで上清を捨て、細胞群に血清を含まない培地を加えて、最終濃度を2×105〜2×106細胞/mLとした。得られた細胞懸濁液0.5mLを使用して、各マウスに接種した。マウスの腹部が膨張してから7〜10日目に腹水を採取し、次いで15分間3,000rpmで遠心分離した。管中間部の透明の液体をピペットで取り出し、0.45umのミリポア膜で濾過して滅菌した。濾液を−20℃で保管した。
1.5mL容エッペンドルフ管に30分間紫外線を照射し、次いでCB(ddH2Oを加えて1Lとした20.02gのNa2CO3および2.52gのNaHCO3、pH9.5)中に1:1000で希釈したmAb500uLを加えた。37℃で終夜インキュベートした後、緩衝液を流し、1.5mLのブロッキング用緩衝液(2%アルブミン添加1×PBS、pH7.4)を加えて、37℃で2時間ブロッキングした。次いでブロッキング用緩衝液を流し、滅菌した通常食塩水中10%のHEV陽性排泄物500uLを加えた。37℃で2時間反応させた後、エッペンドルフ管をPESTで6回洗浄し、次いで各エッペンドルフ管に250uLのddH2Oを加えた。次いで実施例14に従ってRT−PCRアッセイを実施した。その結果、8C11、8H3、および13D8の単クローン抗体はHEVを結合できたが、1F6、2C9、3F5、15B2、および16D7はHEVを結合できなかった。
組換えポリペプチドと、陽性アカゲザル由来血清、ヒト由来血清、およびマウス由来単クローン抗体とのELISA
実施例1〜6で述べた方法に従って、表2で示した本発明のポリペプチドを作製し、精製した。得られた濃度1mg/mlの精製組換えタンパク質の試料をPBS緩衝液(20Mm、pH7.4)で1:500に希釈し、96穴マイクロタイタープレートに100μl/ウェルを塗布し、次の条件下、すなわち37℃で2時間インキュベートし、次いで4℃で終夜約12時間インキュベートする条件下に置いた。自動洗浄器(TECAN、M12/4R Columbus plus)においてPBS−Tween20洗浄溶液(非イオン性H2Oを加えて最終濃度1Lとしてある8.0gのNaCl、0.2gのKH2PO4、2.9gのNa2HPO4・12H2O、0.2gのKCl、および0.5mlのTween20、pH7.4)で洗浄し、乾燥させた後、ブロッキング用緩衝液(PBS中2%のグルチン、0.2%のカゼイン、および2%のスクロース)を200μl/ウェル加え、37℃で30分間インキュベートした。次いで適宜希釈した抗血清または単クローン抗体を37℃で30分間かけて加えた。自動洗浄器において20秒間隔で5回、PBS−Tween20洗浄溶液で洗浄し、乾燥させた後、適宜希釈したHRP標識二次抗体(ヤギ抗ヒト、マウスIgG抗体)を37℃で30分間かけて加えた。自動洗浄器において20秒間隔で5回、PBS−Tween20洗浄溶液で洗浄し、乾燥させた後、色素産生性薬品AおよびB(A:非イオン水で体積を700mlに調整してある13.42gのNa2HPO4・12H2O、4.2gのクエン酸・H2O、および0.3gのH2O2;B:非イオン水で体積を700mlに調整してある0.2gのTMB、20mlのジメチルホルムアミド)をそれぞれ1滴加えて、37℃で10分間かけて発色させた。停止溶液(2MのH2SO4)を1滴加えた。マイクロプレートリーダー(TECAN、Sunrise Remote/Touch Screen)で(620nmの波長を基準として)OD450nmを測定した。陰性対象の3回の平均値を陽性閾値と定めてあり、結果のOD値が閾値より高い場合が陽性である。
実施例1〜5の方法に従って得、HPLCゲル濾過によって精製した、表2に載せたポリペプチド各10μl(1mg/ml)を、ニトロセルロース膜にそれぞれをゆっくりとスポットし、風乾した。5%の脱脂乳によって室温で1.5時間ブロッキングした後、実施例8で述べたように得た様々なマウス由来単クローン抗体(5%の脱脂乳で1:100に希釈した、単クローン性Bリンパ球によって分泌された細胞上清)を加えて、室温で1時間反応させた。次いで、TNT(10mMのトリスCl、pH8.0、150MmのNaCl、0.05%のTween20)を使用して膜を5分間隔で3回洗浄した。HRP標識ヤギ抗マウスIgG(JINGMEI Biological社製、5%の脱脂乳で1:1000に希釈したもの)を加え、室温で1時間反応させた。5分間隔で3回、TNTで洗浄した後、NBT/BCIP(C40H30N10O6Cl2/C8H6BrClNO4P.C7H9N)を加えて発色させた。ドットをゲル画像処理システムでスキャンし、黒色度の値に転用し、++++、+++、++、+、+−の5陽性段階および−の陰性段階に分類した。古典的なウェスタンブロットに比べ、この方法は、SDSでの変性にかけないために変性剤の存在なしで、免疫反応性をより如実に反映できる。
表4に載せた精製組換えポリペプチドをそれぞれ、マイクロタイタープレートに塗布し、実施例8で述べた3種のマウス由来単クローン抗体8C11、8H3、13D8、回復相のHEV患者の血清、および急性相のHEV感染アカゲザル由来血清に対するその反応性をELISAによって調べ、使用した3種の単クローン抗体に対するその反応性をドットブロットアッセイによって調べた。その結果は、ポリペプチドNE2、193C、178C、NE2I、235N、225N、209N、247、232、222、および201が各々の血清/単クローン抗体に対してより反応性であることを示した。これは、これらのポリペプチドが自然のHEVエピトープをより多く有しており、HEVの診断キットおよび/またはワクチンに使用できることを示唆している。
実施例1〜5で述べたようにして得た本発明のポリペプチド208N、209N、および225Nと、実施例8で得たマウス由来単クローン抗体1F6、2C9、3F5のウェスタンブロットを実施した。前記ポリペプチドをSDS−PAGEによって分離し、次いで従来の方法に従ってニトロセルロース膜に移し、5%の脱脂乳を加えて1.5時間ブロッキングし、様々なマウス由来単クローン抗体(5%の脱脂乳で1:100に希釈した、単クローン性Bリンパ球によって分泌された細胞上清)を加えて、室温で1時間反応させ、5分間隔で3回洗浄した後、(5%の脱脂乳で1:1000に希釈した)HRP標識抗マウスIgGを室温で1時間かけて加え、5分間隔で3回、TNTで洗浄し、NBT/BCIPを加えて発色させた。図6にウェスタンブロットの結果を示す。その結果は、特にレーン8の、クーマシーブリリアントブルーR250での染色では観察できない重合体バンドが、ウェスタンブロットアッセイの酵素に関連した増幅効果によって観察できることを示している。さらに、本発明の組換えポリペプチド208Nが12%SDS−PAGE中には重合体にならないこと、ならびに209Nおよび225Nに対する単クローン抗体1F6の活性が、単クローン抗体2C9および3F5より強いことも確かである。
フロイントアジュバントと併せたポリペプチド201含有ワクチンの調製
上述のようにして得、HPLCによって精製した本発明のポリペプチド201(純度>95%およびタンパク質濃度1.02mg/ml)をPBSで希釈し、等価な体積の(BCGを含有する)フロイント完全アジュバントを加えて、ポリペプチド201が所望の最終濃度に達するようにした(たとえば、各マウスを100μl、5μgで免疫化することが望まれれば、ポリペプチド201の濃度を0.05mg/mlに調製することになる)。この溶液を混合し、30分間動かさずにした後分離する液体相が現われなくなるまで30分間かけて乳化した。
Lanzhou Biological Product Institute of Chinaからの所望の量の原物アルミニウムアジュバント(Al3+13.68%、Na+3.36%、pH5.55)を沈殿が生じるまで1NのNaOHで調整した。完全に混合した後、1×PBSを加えて体積を2倍にした。次いで、1分間10,000で遠心分離し、上清を捨てた。沈殿を1×PBSで再懸濁させて、再度体積を2倍にし、1分間10,000で遠心分離し、上清を捨てた。pHが7〜7.4に達するまで、このプロセスを数回繰り返した。最後に、沈殿を等しい体積の1×PBSで再懸濁させ、溶液を滅菌し、4℃で保管し、9倍の保存溶液として使用した。
上述のようにして得たポリペプチド201を4Mの尿素に溶かし、上清をPBS(pH7.45)での透析にかけて再生させ、純度を約95%とした。フロイントアジュバントをワクチンアジュバントとして使用して、0、7、28日の免疫化スケジュールに従い、各群の3匹のKunming白色マウス各々に5、25、50μg/マウス(対照群には5μg/マウス)を筋肉内注射した。図8に結果を示す。その結果は、アジュバントなしのORF2−201ワクチンで免疫化したマウスにおいて抗体が顕著に産生されたことを示し、その使用した投与量は、フロイントアジュバントを加えてある従来の抗原の投与量と同等であった。本発明の重合体ポリペプチドの免疫原性が従来の抗原よりも高いことをさらに示している。
ALTが正常であり、HEV陰性のアカゲザル6匹を選択し、2つの群に分け、一方の群をHF1、HF2、およびHF3と称し、他方の群をHF4、HF5、およびHF6と称した。実施例1〜5および12で記載したとおりに調製した、投与量20μgのアルミニウムアジュバント含有ポリペプチドNE2Iワクチンおよびポリペプチド201ワクチンを三角筋内注射することによって、対象アカゲザルの2つの群にそれぞれワクチン接種を施した。このワクチン接種をそれぞれ0、10、および30日目に行った。最後のワクチン接種から3週間目に、この動物からの抗NE2IIgG抗体の力価を間接ELISAによって試験すると、結果は次のとおり、すなわちHF1(1:16000)、HF2(1:4000)、HF3(1:8000)、HF4(1:2000)、HF5(1:3000)、およびHF6(1:5000)であった。
E型肝炎ウイルス(HEV)の調製および定量化
中国新疆省出身のHEV患者からの糞便を無菌生理食塩水中10%懸濁液に調製した。この懸濁液を4℃で20分間、12000gで遠心分離し、上清を0.2μmの無菌フィルター(NALGENE(登録商標)カタログ番号190−2520)での濾過によって滅菌した。PCRでの検出が可能な量のHEVを感染投与量として使用した。
PCRで検出できる量のHEVを1感染投与量として用いた。実施例13で記載した、本発明の組換えポリペプチドを含むワクチンをアカゲザルHF1〜6に最後に接種してから3週間目に、1,000感染投与量のHEVを上記のサルに接種した。HEV接種後、どのサルのALTも上昇しなかった。4週間目にV16およびV17の動物で抗NE2I−IgGが検出され、5週間目にV18の動物で抗NE2−IgGが検出された。V10〜15の動物では1〜37日目までHEV排泄物が検出されず;V16の動物では5日目にHEVの排泄が始まり30日目に終わり;V17およびV18の動物ではこれも5日目にHEVの排泄が始まったが、37日目になっても止まらなかった。これらの結果は、ワクチンとしての本発明のポリペプチドが米国特許第5885768号のHEV ORF2のポリペプチドtrpE−C2よりも高い免疫原性を有し、強い防御をもたらすことを示唆している。
その5’末端に制限エンドヌクレアーゼ部位BamHIおよびNdeIを導入する前方向プライマーの372FP(5’−ggatcccatatgaataacatgtcttttgct−3’)と、その5’末端に制限エンドヌクレアーゼ部位BamHIを導入する逆方向プライマーの372BRP(5’−ggatcctcggcgcggcc−3’)を使用して、次の反応条件下、すなわち94℃で5分間;94℃で50秒間、56℃で50秒間、および72℃で30秒間を30サイクル;および70℃で10分間の反応条件下において、中国新疆省のHEV患者から単離したE型肝炎ウイルス(HEV)の全長ゲノム(Aye,T.T.、Uchida等のNucleic Acids Research第20巻(13)3512ページ(1992年);遺伝子銀行受入れ番号GI221701)を鋳型とするPCR反応を行った。HEV ORF3内エピトープをコードする、大きさ約370bpの特定のDNA断片を得た。上記の得られたPCR産物を市販のpMD18−Tプラスミド(TAKARA社)に連結した。BamHIでの消化によって、HEV ORF3内のエピトープ遺伝子が挿入された陽性サブクローンを識別した。DNAの配列決定によって、クローン中に変異がないことが示され、それによって配列番号11で示す、HEV ORF3内エピトープ遺伝子のアミノ酸配列が得られた。
対のプライマーHAFP/E2RDを使用する、実施例1で調製したHEV−ORF2変異配列(配列番号6)を鋳型とするPCRで増幅することによって、キメラペプチドのヌクレオチド配列を得た。PCR反応は、94℃で5分間の予備加熱;94℃で50秒間の変性、56℃で50秒間のアニーリング、72℃で70秒間の伸長を30サイクル;および最後に72℃で10分間の伸長という条件下で実施する。得られたPCR産物は、インフルエンザウイルス由来HAおよび本発明のポリペプチドNE2Dを含むキメラポリペプチドをコードする、約800bpのDNA断片である。前方向プライマーHAFPは、BamHIおよびNdeI制限部位を含む。逆方向プライマーE2RDは、EcoRI制限部位および翻訳終止コドンTAAを含む。NdeIに対する配列はCAT ATGであり、ATGは翻訳開始コドンである。さらに、2種のペプチドHAおよびNE2Dの立体配座を厳密に維持するために、HAペプチドとNE2Dペプチドの間にそれぞれ、CAG CTG TTCによってコードされる柔軟なリンカーGly−Gly−を導入した。したがって、キメラポリペプチドHA−NE2Dは、HEVワクチンに適切に使用できる。一対のプライマーの配列は、以下のとおりである。
HAFP:5’−AGA TCT CAT ATG TCT AAA
BglII NdeI 91 Ser Lys
GCT TTC TCT AAC TGC TAC CCT TAC
Ala Phe Ser Asn Cys Tyr Pro Tyr
GAC GTT CCG GAC TAC GCT TCT
Asp Val Pro Asp Tyr Ala Ser
TTA GGT GGA TCC
Leu108 Gly Gly Ser
CAG CTG TTC TAC TCT CGT CC−3’
E2RD:5’−gaattcttagggggctaaaacagc−3’
前述のPCR産物を市販のプラスミドpMD18−T(TAKARA社)中にクローン化した。次いで、BamHI/EcoRIでの消化によってpMD18−T−HA−ORF2−NE2Dプラスミドから問題の配列を得、BamHI/EcoRIでの消化および連結によって発現ベクターに組み込んだ。pTO−T7−HA−ORF2−NE2D発現プラスミドで形質転換した大腸菌ERR2566宿主細胞から、HA−ORF2−NE2Dキメラペプチドを単離した。このアミノ酸配列を配列番号12と称した。
HEVに対するIgGを本発明のポリペプチドNE2Iで検出するキットは、組換えポリペプチドNE2Iを塗布し、ブロッキング用緩衝液(20mMかつpH7.2のPB、0.5%のカゼイン、2%のゼラチン)でブロッキングしたマイクロタイタープレート;検体希釈剤(20mMかつpH7.2のPB、1%のカゼイン);作用コンジュゲート(酵素希釈剤(20mMかつpH7.2のPB、0.5%のカゼイン、10%のNBS)で希釈したHRPで標識したヤギ抗ヒトIgG(DAKO));20×PBST、色素原A、色素原B、および停止溶液(Beijing wantai)など、生物活性のない材料を含む。
超純粋(UPW)にそれぞれ1mgのHRP(BiozymeR/Z>3)およびNaIO4を溶解させ;攪拌しながらNaIO4溶液を滴下し;この混合溶液を室温で30分間暗所に静置し;混合しながら1%のエチレングリコール溶液100ulを段階的に加え;それを4℃で30分間暗所に静置する。組換えタンパク質を3時間炭酸緩衝液(10mM、pH9.6)での透析にかけ;適度に透析した組換えタンパク質を酸素添加したHRPに加え、炭酸緩衝液(10mM、pH9.5)中、穏やかに攪拌しながら室温(または4℃)で6時間透析し;上述の混合物に新しく調製した0.1MのNaBH4溶液20ulを加え;暗所に4℃で2時間静置し、30分間ずつ1回穏やかにボルテックス(vortex)し;これをPBS(10mM、pH7.2)中、4℃で終夜透析にかける。
実施例18で記載した方法に従って、ポリペプチド225NをHRPで標識した。
実施例18で記載した方法に従って、ポリペプチド225Nを西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)で標識した。
Claims (22)
- E型肝炎ウイルスORF2の配列番号1に記載されたアミノ酸配列の断片からなるポリペプチドであって、該断片は:
1)配列番号1におけるアミノ末端がアミノ酸残基414と459の間から出発して、カルボキシル末端がアミノ酸残基660で終結するポリペプチド;
2)配列番号1のアミノ酸残基414〜660のアミノ酸配列を有するポリペプチド、すなわちポリペプチド247;
3)配列番号1のアミノ酸残基429〜660のアミノ酸配列を有するポリペプチド、すなわちポリペプチド232;
4)配列番号1のアミノ酸残基439〜660のアミノ酸配列を有するポリペプチド、すなわちポリペプチド222;
5)配列番号1のアミノ酸残基459〜660のアミノ酸配列を有するポリペプチド、すなわちポリペプチド201;
6)上の1)から5)の前述のポリペプチドのいずれか1つとの相同性が少なくとも80%であり、抗原性又は免疫原性が実質的に同一であるポリペプチド;
からなる群から選ばれるものである、上記ポリペプチド。 - 精製した単量体ポリペプチドの多量体であって、該多量体は2〜180の精製した単量体ポリペプチドが自己凝集によって形成し、各々の該精製した単量体ポリペプチドは請求項1に記載のポリペプチドである、上記多量体。
- 少なくとも1種の請求項1に記載のポリペプチドもしくは請求項2に記載の多量体もしくはその任意の組合せもしくは少なくとも1種の請求項2に記載の多量体もしくはその任意の組み合わせ、及び場合により薬剤として許容される賦形剤及び/もしくはアジュバントを含む、哺乳動物のE型肝炎ウイルス感染を予防及び/又は治療するためのワクチン組成物。
- 請求項1に記載のポリペプチド及びインフルエンザウイルス由来の赤血球凝集素抗原の保存断片を含むキメラタンパク質。
- 精製した単量体ポリペプチドの多量体であって、該多量体は2〜180の精製した単量体ポリペプチドが自己凝集によって形成し、各々の該精製した単量体ポリペプチドは請求項4に記載のキメラタンパク質である、上記多量体。
- 請求項4に記載のキメラタンパク質又は請求項5に記載の多量体、及び任意選択で薬剤として許容される賦形剤及び/もしくはアジュバントを含む、哺乳動物のE型肝炎ウイルス感染を予防及び/又は治療するためのワクチン組成物。
- 請求項1に記載のポリペプチド及びE型肝炎ウイルスORF3からの免疫原性エピトープ又はその免疫原性断片を含む、キメラタンパク質。
- 精製した単量体ポリペプチドの多量体であって、該多量体は2〜180の精製した単量体ポリペプチドが自己凝集によって形成し、各々の該精製した単量体ポリペプチドは請求項1に記載のポリペプチド及びE型肝炎ウイルスORF3からの免疫原性エピトープ又はその免疫原性断片を含むキメラタンパク質である、上記多量体。
- 請求項7に記載のキメラタンパク質又は請求項8に記載の多量体、及び場合によって、薬剤として許容される賦形剤及び/もしくはアジュバントを含む、哺乳動物のE型肝炎ウイルス感染を予防及び/又は治療するためのワクチン組成物。
- 請求項1に記載のポリペプチド、請求項4に記載のキメラタンパク質又は請求項7に記載のキメラタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、組み換え発現ベクター。
- それぞれ請求項1に記載のポリペプチド、請求項4に記載のキメラタンパク質又は請求項7に記載のキメラタンパク質を発現することができる、請求項10に記載の組み換え発現ベクターで形質転換した、宿主細胞。
- 診断に有効な量の少なくとも1種の請求項1に記載のポリペプチド若しくはその任意の組合せ、又は少なくとも1種の請求項2に記載の多量体若しくはその任意の組み合わせを含む、生物検体のE型肝炎ウイルス感染を診断する診断キット。
- E型肝炎ウイルスORF3からの免疫原性エピトープを含むポリペプチド又はその免疫原性断片をさらに含み、E型肝炎ウイルスORF3由来の免疫原性エピトープを含む該ポリペプチド又はその免疫原性断片が、場合により請求項1に記載の選択されたポリペプチドに共有結合している、請求項12に記載の診断キット。
- 少なくとも1種の請求項1に記載のポリペプチド又は請求項2に記載の多量体を含み、所望であれば、前記ポリペプチドが適切な支持体の表面に予め塗布されており;さらに、検出対象の生物検体のIgGに指向性のある検出可能に標識された抗体抗IgG、及び前記の検出可能な標識に合致する検出剤を含み;所望であれば、適切な緩衝系をさらに含む、生物検体中のE型肝炎ウイルスに対する抗体IgGを判定するための、請求項12又は請求項13に記載の診断キット。
- 検出対象の生物検体のIgMに指向性のある捕捉抗体としての、検出可能に標識した抗体抗IgMを含み、所望であれば、前記捕捉抗体が、適切な支持体の表面に予め塗布されており;さらに、検出可能に標識された少なくとも1種の請求項1又は請求項2に記載の多量体に記載のポリペプチド、及び前記の検出可能な標識に合致する検出剤を含み;所望であれば、適切な緩衝系をさらに含む、生物検体中のE型肝炎ウイルスに対する抗体IgMを判定するための請求項12又は請求項13に記載の診断キット。
- 少なくとも1種の請求項1に記載のポリペプチド又は請求項2に記載の多量体を含み、望むなら、前記ポリペプチドが、適切な支持体の表面に予め塗布されており;さらに、検出可能に標識された少なくとも1種の請求項1に記載のポリペプチド又は請求項2に記載の多量体、及び前記の検出可能な標識に合致する検出剤を含み;支持体表面に予め塗布するための前記ポリペプチド又は多量体、及び検出可能な標識ポリペプチド又は多量体が同じでも異なるものでもよい、生物検体中のE型肝炎ウイルスに対する全抗体を判定するための請求項12又は請求項13に記載の診断キット。
- 生物検体中のE型肝炎ウイルスに対する全抗体を検出する方法であって、支持体表面上に少なくとも1種の請求項1に記載のポリペプチド又は請求項2に記載の多量体を固定化するステップ;抗原と抗体の相互作用に適する条件下、これに検出対象の検体を接触させるステップ;適切な緩衝液で洗浄するステップ;及び検出可能な標識を有するE型肝炎ウイルス抗原及び対応する検出剤を使用して、支持体表面上の抗原/抗体複合体を検出するステップを含む方法。
- 生物検体においてE型肝炎ウイルスに対する抗体IgGを検出する方法であって、支持体表面上に少なくとも1種の請求項1に記載のポリペプチド又は請求項2に記載の多量体を固定化するステップ;抗原と抗体の相互作用に適する条件下、これに検出対象の検体を接触させるステップ;適切な緩衝液で洗浄するステップ;及びE型肝炎ウイルスに対する検出可能に標識した抗体抗IgG及び対応する検出剤を使用して、支持体表面上の抗原/抗体複合体を検出するステップを含む方法。
- 生物検体においてE型肝炎ウイルスに対する抗体IgMを検出する方法であって、支持体表面上に抗体抗IgMを固定化するステップ;抗原と抗体の相互作用に適する条件下、これに検出対象の検体を接触させるステップ;適切な緩衝液で洗浄するステップ;及び検出可能に標識した少なくとも1種の請求項1に記載のポリペプチド又は請求項2に記載の多量体及び対応する検出剤を使用して、支持体表面上の抗IgM/IgM複合体を検出するステップを含む方法。
- 生物検体においてE型肝炎ウイルスに対する抗体IgMを検出する方法であって、支持体表面上に抗体抗IgMを固定化するステップ;抗原と抗体の相互作用に適する条件下、これに検出対象の検体を接触させるステップ;適切な緩衝液で洗浄するステップ;次いで抗原と抗体の相互作用に適する条件下、少なくとも1種の請求項1に記載のポリペプチド又は請求項2に記載の多量体を接触させるステップ;適切な緩衝液で洗浄するステップ;及び、次いで検出可能に標識した抗HEV多クローンもしくは単クローン抗体及び対応する検出剤を使用して、支持体表面上の抗原/抗体複合体を検出するステップを含む方法。
- 請求項4に記載のキメラタンパク質又は請求項5に記載の多量体を含む、生物検体におけるE型肝炎ウイルス感染の診断のため、又は生物検体におけるE型肝炎ウイルスに対する抗体IgG、抗体IgM、全抗体の判定のための診断キット。
- 請求項7に記載のキメラタンパク質又は請求項8に記載の多量体を含む、生物検体におけるE型肝炎ウイルス感染の診断のため、又は生物検体におけるE型肝炎ウイルスに対する抗体IgG、抗体IgM、全抗体の判定のための診断キット。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN00130634A CN1345775A (zh) | 2000-09-30 | 2000-09-30 | 用于预防、诊断及治疗戊型肝炎病毒的多肽,及它们作为诊断试剂和疫苗 |
CN00130634.0 | 2000-09-30 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011088810A Division JP5829830B2 (ja) | 2000-09-30 | 2011-04-13 | E型肝炎ウイルスのポリペプチド断片、それを含むワクチン組成物及び診断キット、並びにその使用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2014138593A true JP2014138593A (ja) | 2014-07-31 |
Family
ID=4594225
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2002542994A Expired - Lifetime JP5681337B2 (ja) | 2000-09-30 | 2001-09-30 | E型肝炎ウイルスのポリペプチド断片、それを含むワクチン組成物及び診断キット、並びにその使用 |
JP2011088810A Expired - Lifetime JP5829830B2 (ja) | 2000-09-30 | 2011-04-13 | E型肝炎ウイルスのポリペプチド断片、それを含むワクチン組成物及び診断キット、並びにその使用 |
JP2014024629A Pending JP2014138593A (ja) | 2000-09-30 | 2014-02-12 | E型肝炎ウイルスのポリペプチド断片、それを含むワクチン組成物及び診断キット、並びにその使用 |
Family Applications Before (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2002542994A Expired - Lifetime JP5681337B2 (ja) | 2000-09-30 | 2001-09-30 | E型肝炎ウイルスのポリペプチド断片、それを含むワクチン組成物及び診断キット、並びにその使用 |
JP2011088810A Expired - Lifetime JP5829830B2 (ja) | 2000-09-30 | 2011-04-13 | E型肝炎ウイルスのポリペプチド断片、それを含むワクチン組成物及び診断キット、並びにその使用 |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US7615228B2 (ja) |
EP (2) | EP1331271B1 (ja) |
JP (3) | JP5681337B2 (ja) |
KR (2) | KR101121754B1 (ja) |
CN (2) | CN101367869B (ja) |
AU (1) | AU2002220460A1 (ja) |
BR (2) | BR0114510A (ja) |
MX (1) | MXPA03002751A (ja) |
WO (1) | WO2002040681A1 (ja) |
Families Citing this family (21)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101367869B (zh) * | 2000-09-30 | 2012-12-05 | 北京万泰生物药业股份有限公司 | 用于预防、诊断及治疗戊型肝炎病毒的多肽,及它们作为诊断试剂和疫苗 |
JP2005524386A (ja) * | 2001-11-08 | 2005-08-18 | ▲養▼生堂有限公司 | 抗e型肝炎ウイルスモノクローナル抗体、又は結合性を有するそのフラグメント、及びそれらの使用 |
CN1850855B (zh) * | 2006-05-26 | 2012-08-29 | 厦门大学 | 用于免疫或制备单克隆抗体的方法和组合物 |
JP5869885B2 (ja) * | 2009-02-27 | 2016-02-24 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | E型肝炎ウイルス様粒子を用いた多抗原送達系 |
US8906863B2 (en) | 2009-02-27 | 2014-12-09 | The Regents Of The University Of California | Proteolysis-resistant capsid of chimeric hepatitis E virus as an oral delivery vector |
US8906862B2 (en) | 2009-02-27 | 2014-12-09 | The Regents Of The University Of California | Multiple antigen delivery system using hepatitis E virus-like particle |
EP2612206A1 (en) * | 2010-08-31 | 2013-07-10 | ABB Technology AG | Method for debugging of process or manufacturing plant solutions comprising multiple sub-systems |
CN102453748A (zh) * | 2010-10-18 | 2012-05-16 | 北京雅康博生物科技有限公司 | 用于荧光定量pcr定量检测的质粒标准品 |
CN102565410B (zh) * | 2012-01-12 | 2014-08-06 | 吉林大学 | 一种梅花鹿朊蛋白免疫学检测方法 |
CN104519909A (zh) * | 2012-05-09 | 2015-04-15 | 巴拉特生物技术国际有限公司 | 疫苗组合物 |
CN104031144B (zh) * | 2013-03-05 | 2017-08-25 | 厦门大学 | 特异结合戊型肝炎病毒3、4型的抗体及其用途 |
CN104789534B (zh) * | 2015-04-10 | 2017-10-17 | 浙江中医药大学 | 一种杂交瘤、单克隆抗体及其用途 |
FR3044312B1 (fr) * | 2015-11-30 | 2017-12-08 | Biomerieux Sa | Polypeptides mutes de hev et leur utilisation pour le dosage d'anticorps anti-hev |
WO2017202973A1 (en) * | 2016-05-25 | 2017-11-30 | Intervet International B.V. | Hev vaccine |
KR101924093B1 (ko) | 2017-04-18 | 2018-11-30 | 건국대학교 산학협력단 | E형 간염 바이러스 유전자형 3 및 4 진단용 프라이머 세트 및 이를 이용한 진단 방법 |
CN110501505B (zh) * | 2018-05-18 | 2022-06-10 | 中国兽医药品监察所 | 小反刍兽疫诊断试剂盒 |
US20210324049A1 (en) * | 2018-07-10 | 2021-10-21 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Antibodies having specificity for the orf2i protein of hepatitis e virus and uses thereof for diagnostic purposes |
US20210269510A1 (en) * | 2018-07-10 | 2021-09-02 | Inserm (Institut National De La Santè Et De La Recherch Médicale | Antibodies having specificity for the orf2i protein of hepatitis e virus and uses thereof for diagnostic purposes |
CN109942702B (zh) * | 2019-03-20 | 2019-11-08 | 南京医科大学 | 一种人鼠嵌合抗HEV全分子IgG及其应用 |
JP7259622B2 (ja) | 2019-07-29 | 2023-04-18 | パナソニックホールディングス株式会社 | 冷却システム及びその運転方法 |
CN117730255A (zh) | 2021-07-06 | 2024-03-19 | 株式会社先端生命科学研究所 | E型肝炎病毒感染的检测方法、e型肝炎病毒感染检测用抗原多肽和试剂盒 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP5829830B2 (ja) * | 2000-09-30 | 2015-12-09 | ベイジン ワンタイ バイオロジカル ファーマシー エンタープライズ カンパニー, リミテッド | E型肝炎ウイルスのポリペプチド断片、それを含むワクチン組成物及び診断キット、並びにその使用 |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NZ219515A (en) | 1987-02-10 | 1989-09-27 | Wellcome Found | Fusion proteins comprising influenza virus ha and a nonnatural antigenic epitope |
US5110730A (en) * | 1987-03-31 | 1992-05-05 | The Scripps Research Institute | Human tissue factor related DNA segments |
US5885768A (en) | 1988-06-17 | 1999-03-23 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Hepatitis E virus peptide antigen and antibodies |
US6214970B1 (en) * | 1988-06-17 | 2001-04-10 | Genelabs Technologies, Inc. | Hepatitis E virus antigens and uses therefor |
US5714374A (en) * | 1990-09-12 | 1998-02-03 | Rutgers University | Chimeric rhinoviruses |
US5563032A (en) * | 1992-10-21 | 1996-10-08 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Mosaic polypeptide and methods for detecting the hepatitis E virus |
EP0736087A1 (en) | 1993-12-22 | 1996-10-09 | Abbott Laboratories | Monoclonal antibodies against hev orf-2 and methods for using same |
ATE518879T1 (de) * | 1994-10-03 | 2011-08-15 | Us Gov Health & Human Serv | Verfahren zur herstellung eines partiellen orf2 proteins des hepatitis e virus |
AUPN443995A0 (en) | 1995-07-27 | 1995-08-17 | Csl Limited | Papillomavirus polyprotein |
US6054567A (en) | 1997-04-11 | 2000-04-25 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Recombinant proteins of a pakistani strain of hepatitis E and their use in diagnostic methods and vaccines |
DE19830896A1 (de) * | 1998-07-10 | 2000-06-08 | Mivatec Gmbh | Fotoplott-Verfahren zur hochenergetischen Aufzeichnung eines computergespeicherten Rasterbildes auf einen lichtempfindlichen Aufzeichnungsträger |
US6045567A (en) * | 1999-02-23 | 2000-04-04 | Lifescan Inc. | Lancing device causing reduced pain |
CA2283538A1 (en) * | 1999-09-30 | 2001-03-30 | Mun Hon Ng | New hev antigenic peptide and methods |
-
2000
- 2000-09-30 CN CN2008100851107A patent/CN101367869B/zh not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-30 CN CN00130634A patent/CN1345775A/zh active Pending
-
2001
- 2001-09-30 BR BR0114510-0A patent/BR0114510A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-09-30 KR KR1020097013830A patent/KR101121754B1/ko active IP Right Grant
- 2001-09-30 KR KR1020037004589A patent/KR100927221B1/ko active IP Right Grant
- 2001-09-30 AU AU2002220460A patent/AU2002220460A1/en not_active Abandoned
- 2001-09-30 US US10/381,770 patent/US7615228B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-09-30 JP JP2002542994A patent/JP5681337B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2001-09-30 EP EP01994540.1A patent/EP1331271B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-09-30 EP EP10183446A patent/EP2298793A3/en not_active Withdrawn
- 2001-09-30 BR BRPI0114510 patent/BRPI0114510B8/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-09-30 MX MXPA03002751A patent/MXPA03002751A/es active IP Right Grant
- 2001-09-30 WO PCT/CN2001/001469 patent/WO2002040681A1/zh active Application Filing
-
2009
- 2009-09-11 US US12/557,741 patent/US8715695B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2009-11-09 US US12/614,896 patent/US8524868B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2011
- 2011-04-13 JP JP2011088810A patent/JP5829830B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2014
- 2014-02-12 JP JP2014024629A patent/JP2014138593A/ja active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP5829830B2 (ja) * | 2000-09-30 | 2015-12-09 | ベイジン ワンタイ バイオロジカル ファーマシー エンタープライズ カンパニー, リミテッド | E型肝炎ウイルスのポリペプチド断片、それを含むワクチン組成物及び診断キット、並びにその使用 |
Non-Patent Citations (11)
Title |
---|
JPN6010067617; J. Virol. Vol. 71, No. 10, 1997, pp. 7207-7213 * |
JPN6010067618; J. Clin. Microbiol. Vol. 37, No. 9, 1999, pp. 2863-2871 * |
JPN6010067619; Virology Vol. 198, 1994, pp. 390-393 * |
JPN6010067620; J. Med. Virol. Vol. 50, 1996, pp. 50-58 * |
JPN6011066968; Virology Vol. 265, 1999, pp. 35-45 * |
JPN6011066971; Protein Expr. Purif. Vol. 12, 1998, pp. 75-84 * |
JPN6012050550; J. Med. Virol. Vol. 60, 2000, pp. 379-386 * |
JPN6012050552; J. Med. Virol. Vol. 52, 1997, pp. 289-300 * |
JPN6012050553; J. Virol. Vol. 74, No. 17, 2000, pp. 8011-8017 * |
JPN6013050636; Vaccine Vol. 19, 200106, pp. 3726-3732 * |
JPN6013050639; J. Med. Virol. Vol. 64, 200106, pp. 125-132 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2298793A2 (en) | 2011-03-23 |
KR100927221B1 (ko) | 2009-11-16 |
JP5681337B2 (ja) | 2015-03-04 |
JP5829830B2 (ja) | 2015-12-09 |
WO2002040681A1 (fr) | 2002-05-23 |
US8524868B2 (en) | 2013-09-03 |
KR20030048052A (ko) | 2003-06-18 |
US20100150962A1 (en) | 2010-06-17 |
AU2002220460A1 (en) | 2002-05-27 |
US20100143410A1 (en) | 2010-06-10 |
BRPI0114510B1 (pt) | 2019-09-03 |
KR20090088429A (ko) | 2009-08-19 |
BR0114510A (pt) | 2004-02-17 |
EP1331271B1 (en) | 2014-03-19 |
EP1331271A4 (en) | 2005-04-06 |
EP1331271A1 (en) | 2003-07-30 |
CN101367869B (zh) | 2012-12-05 |
US20040052813A1 (en) | 2004-03-18 |
KR101121754B1 (ko) | 2012-03-23 |
EP2298793A3 (en) | 2011-06-29 |
US8715695B2 (en) | 2014-05-06 |
US7615228B2 (en) | 2009-11-10 |
CN101367869A (zh) | 2009-02-18 |
MXPA03002751A (es) | 2004-05-04 |
JP2004525613A (ja) | 2004-08-26 |
CN1345775A (zh) | 2002-04-24 |
BRPI0114510B8 (pt) | 2021-05-25 |
JP2011201881A (ja) | 2011-10-13 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5829830B2 (ja) | E型肝炎ウイルスのポリペプチド断片、それを含むワクチン組成物及び診断キット、並びにその使用 | |
JP6016699B2 (ja) | 抗e型肝炎ウイルスモノクローナル抗体、又は結合性を有するそのフラグメント、及びそれらの使用 | |
JP2006149393A (ja) | E型肝炎パキスタン株の組換えタンパク質ならびに診断法およびワクチンにおけるそれらの利用 | |
KR20130041185A (ko) | 디자이너(designer) 펩티드-기반 pcv2 백신 | |
US5736315A (en) | Methods and compositions for detecting anti-hepatitis E virus activity | |
KR100743580B1 (ko) | 새로운 hev 항원성 펩타이드 및 방법 | |
US5563032A (en) | Mosaic polypeptide and methods for detecting the hepatitis E virus | |
EP0784631B1 (en) | Method of producing a partial orf2 protein of hepatitis e virus | |
JP4390293B2 (ja) | E型肝炎のパキスタン株組換えタンパク質および診断法およびワクチンにおけるそれらの使用 | |
US20040234542A1 (en) | Recombinant orf2 proteins of the swine hepatitis e virus and their use as a vaccine and as a diagnostic reagent for medical and veterinary applications | |
EP1274725B1 (en) | Use of hev polypeptides | |
US20030220475A1 (en) | Neutralizing immunogenic hev polypepetides | |
AU684478C (en) | Methods and compositions for detecting anti-hepatitis E virus activity |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150526 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150826 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20150827 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A132 Effective date: 20160115 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20160809 |