JP2013530680A5 - - Google Patents
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- 以下の工程(i)および(ii)：
（i）Activin AおよびWntを含む培地中でヒト多能性幹細胞を培養する工程、および
（ii）BMPおよびWntもしくはWntの機能等価物を含む培地中で、工程(i)で得られた細胞を培養する工程
を含む、ヒト多能性幹細胞から中間中胚葉細胞の製造方法であって、前記中間中胚葉細胞がOSR1陽性細胞である、上記方法。 - 前記工程（i）での培養においてヒト多能性幹細胞を浮遊培養して細胞集合体または細胞塊を形成させ、前記工程（ii）での培養において該細胞集合体または細胞塊を接着培養する、請求項１に記載の方法。
- 前記工程(i)での培養において、ヒト多能性幹細胞の細胞集合体または細胞塊を実質的に個々の細胞に分離することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
- 前記工程(i)が、分離した細胞を、MatigelTMでコーティングした培養ディッシュまたはコラーゲンでコーティングした培養ディッシュに接着し、次いで、該細胞を培養することをさらに含む、請求項３に記載の方法。
- 前記工程（i）において、培地が、牛胎児血清(FBS)をさらに含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
- 前記工程（ii）において、培地が、ノックアウト血清代替物(KSR)をさらに含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
- 前記WntがWnt3aである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
- 前記Wntの機能等価物がGSK3β阻害剤である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
- 前記GSK3β阻害剤がCHIR99021である、請求項８に記載の方法。
- 前記BMPがBMP7である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
- 前記工程（i）での培養が2〜5日間の培養期間行われる、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
- 前記ヒト多能性幹細胞が、ヒトiPS細胞またはヒトES細胞である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
- 前記ヒト多能性幹細胞が、内在性OSR1の発現に連動して発現する外来レポーター遺伝子を染色体内に有する、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
- 前記レポーター遺伝子が、蛍光タンパク質、発光タンパク質、GUSまたはLacZをコードするDNAである、請求項１３に記載の方法。
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