JP2012532585A5

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Info

Publication number: JP2012532585A5
Application number: JP2011554336A
Authority: JP
Filing date: 2010-07-09
Publication date: 2013-08-15
Anticipated expiration: 2030-07-09

Claims

多能性幹細胞からPDGFRα陽性の中胚葉系細胞を製造する方法であって、前記多能性幹細胞を、無血清下、かつActivinA、BMPおよびIGF-1の存在下で培養することを特徴とする、方法。
PDGFRα陽性の中胚葉系細胞が原条中胚葉系細胞である、請求項１記載の方法。
BMPが、BMP2、BMP4およびBMP7から選択される少なくとも１つを含有する、請求項１または２記載の方法。
PDGFRα陽性の中胚葉系細胞から骨格筋前駆細胞を製造する方法であって、前記中胚葉系細胞を、無血清下、かつWntシグナル誘導剤の存在下で培養することを特徴とする、方法。
骨格筋前駆細胞がMyf5陽性かつMyoD陽性である、請求項４記載の方法。
Wntシグナル誘導剤が、LiCl、Wnt1、Wnt3aおよびWnt7aから選択される少なくとも１つを含有する、請求項４または５記載の方法。
さらにShhおよび／またはIGF-1の存在下で中胚葉系細胞を培養することを特徴とする、請求項４〜６のいずれか１項に記載の方法。
PDGFRα陽性の中胚葉系細胞が、請求項１〜３のいずれかに記載の方法により得られるものである、請求項４〜７のいずれか１項に記載の方法。
多能性幹細胞から骨格筋前駆細胞を製造する方法であって、無血清下で以下の1)および2)の工程を経ることを特徴とする、方法：
1) ActivinAの存在下で多能性幹細胞を培養する工程、
2）前記1)の工程で得られた細胞をWntシグナル誘導剤の存在下で培養する工程。
骨格筋前駆細胞がMyf5陽性かつMyoD陽性である、請求項９記載の方法。
Wntシグナル誘導剤が、LiCl、Wnt1、Wnt3aおよびWnt7aから選択される少なくとも１つを含有する、請求項９または１０記載の方法。
前記工程1）において、さらにBMPおよび／またはIGF-1の存在下で多能性幹細胞を培養することを特徴とする、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の方法。
BMPが、BMP2、BMP4およびBMP7から選択される少なくとも１つを含有する、請求項１２記載の方法。
前記工程2）において、さらにShhおよび／またはIGF-1の存在下で、前記工程1)で得られた細胞を培養することを特徴とする、請求項９〜１３のいずれか１項に記載の方法。
以下の1)および2)の工程を経ることを特徴とする、請求項９記載の方法：
1) ActivinA、BMP4およびIGF-1の存在下で多能性幹細胞を培養する工程、
2）前記1)の工程で得られた細胞をLiCl、ShhおよびIGF-1の存在下で培養する工程。
前記工程1）および2）の後に、さらに工程3）：
3）前記2）の工程で得られた細胞からPDGFRα陽性細胞を選択する工程、
を経ることを特徴とする、請求項９〜１５のいずれか１項に記載の方法。
多能性幹細胞がiPS細胞またはES細胞である、請求項９〜１６のいずれか１項に記載の方法。
ActivinA、BMP4およびIGF-1を含有することを特徴とする、多能性幹細胞からPDGFRα陽性の中胚葉系細胞への分化誘導用試薬キット。
LiCl、ShhおよびIGF-1を含有することを特徴とする、PDGFRα陽性の中胚葉系細胞から骨格筋前駆細胞への分化誘導用試薬キット。
多能性幹細胞がiPS細胞またはES細胞である、請求項１８または１９記載のキット。
請求項４〜１７のいずれか１項に記載の方法により製造された骨格筋前駆細胞含有細胞集団であって、初期化遺伝子がゲノム中に組み込まれた、細胞集団。
初期化遺伝子が、Oct3/4、Sox2、Klf4およびc-Mycの4種の遺伝子、またはOct3/4、Sox2およびKlf4の3種の遺伝子である、請求項２１記載の細胞集団。