JP2013528401A5

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Publication number: JP2013528401A5
Application number: JP2013515582A
Authority: JP
Filing date: 2011-06-20
Publication date: 2016-12-01
Anticipated expiration: 2031-06-20

Description

無血清無グルコース（ＳＦＧＦ）培地は、次のものを含む：
９８．４％ＤＭＥＭ（無グルコース）Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ −１１９６６−０２５
１０ｍＭのガラクトース−ＳｉｇｍａＧ５３８８
１ｍＭのピルビン酸ナトリウム−ＳｉｇｍａＰ４５６２
５ｍＭのクレアチン−Ｓｉｇｍａ２７８９０
２ｍＭのクレアチン−ＳｉｇｍａＣ０２８３
５ｍＭのタウリン− ＳｉｇｍａＴ８６９１
２．５μＭのインスリン−Ｓｉｇｍａ１９２７８
０．２％のウシ血清アルブミン−ＳｉｇｍａＡ９５７６
１ｍＭのＬ−グルタミン− Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ２１０５１
１％ＤＰＢＳ− Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ１４１９０
０．１ｍＭのＬ−グルタミン−Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ２１０５１
７ μＬのβ−メルカプトエタノール−ＳｉｇｍａＭ７５２２。

Claims

細胞集団における心筋細胞の純度を、少なくとも１週間、９０％以上に維持するための組成物であって、
（１）血清含有培地であって、前記血清が１０ｋＤ以下の分子量を有する低分子量分子を実質的に含有しない血清含有培地、および、
（２）ヒトの誘発された多能性幹（ｉＰＳ）細胞から調製された心筋細胞
を含み、ここで、前記培地が、ガラクトース、フルクトース、マンノース、スクロース、マルトース、ラクトース、トレハロース、ツラノース、ピルベート、ピルビン酸、グルタミン、グルタミン酸、アスパルテート、アスパラギン酸、ラクテート、乳酸、および、これらの組み合わせからなる群から選択される非グルコースエネルギー源を含む、組成物。
前記培地が、１０％〜７５％の範囲の透析された血清を含む、請求項１記載の組成物。
前記培地が、少なくとも２５％の透析された血清を含む、請求項１または２記載の組成物。
前記培地が、５５％の透析された血清を含む、請求項１〜３のいずれか一項記載の組成物。
前記培地が１〜２０ｍＭのガラクトースを含むかおよび／または前記培地が０．１〜１０ｍＭのピルベート又はピルビン酸を含む、請求項１〜４のいずれか一項記載の組成物。
少なくとも９５％の心筋細胞の細胞集団を含む、請求項１〜５のいずれか一項記載の組成物。
前記心筋細胞が、心筋細胞特異的プロモーターの制御下で少なくとも１つの選択可能又はスクリーン可能トランスジーンを発現する、請求項６記載の組成物。
前記集団が線維芽細胞又は末分化多分化能性幹細胞を実質的に有さない、請求項６または７記載の組成物。
前記心筋細胞が凍結保存された心筋細胞である、請求項６〜８のいずれか一項記載の組成物。
細胞集団における心筋細胞の純度を、少なくとも１週間、９０％以上に維持するためのエクスビボの方法であって、
血清含有培地であって、前記血清が１０ｋＤ以下の分子量を有する低分子量分子を実質的に含有しない血清含有培地において精製された心筋細胞の集団を培養すること
を含み、ここで、前記心筋細胞は、ヒトの誘発された多能性幹（ｉＰＳ）細胞から調製され、前記精製された心筋細胞の集団は、非心筋細胞を実質的に有さず、前記培地が、ガラクトース、フルクトース、マンノース、スクロース、マルトース、ラクトース、トレハロース、ツラノース、ピルベート、ピルビン酸、グルタミン、グルタミン酸、アスパルテート、アスパラギン酸、ラクテート、乳酸、および、これらの組み合わせからなる群から選択される非グルコースエネルギー源を含む、方法。
前記培地が以下の特徴：
（１）前記培地が化学的に定義される、
（２）前記培地が、高エネルギーリン酸結合を形成できる化合物、アシル基担体分子、又は心筋細胞カルシウムチャネルモジュレーターをさらに含む、
（３）前記培地が、クレアチン、カルニチン又はタウリンを含む、
（４）前記培地がインスリンをさらに含む、
（５）前記培地が血清を含み、ここで前記血清又は培地は低分子量分子を除去するために処理されている、
（６）前記培地が透析された血清を含む、
（７）前記培地がグルコースを実質的に含まない、
（８）前記培地がピルベート又はピルビン酸を含む、または
（９）前記培地がガラクトースを含む、
のうちの任意の１つまたはそれより多くを有する、請求項１０記載の方法。
前記培地が、０．１〜１０ｍＭのピルベート又はピルビン酸を含む、請求項１１記載の方法。
前記培地が、１〜２０ｍＭのガラクトースを含む、請求項１１または１２記載の方法。
前記精製された心筋細胞が、少なくとも１つの選択可能又はスクリーン可能トランスジーンを発現する、請求項１０〜１３のいずれか一項記載の方法。
前記トランスジーンが、心筋細胞特異的プロモーターの制御下で選択可能又はスクリーン可能マーカーを含む、請求項１４記載の方法。
前記心筋細胞特異的プロモーターが、ＭＹＨ６（αミオシンＨ鎖）遺伝子のプロモーターである、請求項１４または１５記載の方法。
前記精製された心筋細胞の集団が前記トランスジーンの発現に基づいて精製される、請求項１４〜１６のいずれか一項記載の方法。
前記集団中の精製された心筋細胞の純度が、前記トランスジーンの発現に基づく、請求項１７記載の方法。
前記心筋細胞の集団が、前記培養の前に保存されている、請求項１７または１８記載の方法。
前記集団が、以下：
（１）１０％までの非心筋細胞を含む集団、
（２）５％までの非心筋細胞を含む集団、および
（３）非心筋細胞を実質的に有さない集団、
からなる群より選択される、請求項１０〜１９のいずれか一項記載の方法。
前記集団が非心筋細胞を実質的に有さず、ここで、前記非心筋細胞が、線維芽細胞又は未分化多分化能性幹細胞を含む、請求項２０記載の方法。
前記培地が、以下の特徴：
（１）前記培地が、非心筋細胞の増殖を阻害する、または
（２）前記培地が培養下で少なくとも６週間、前記集団中の心筋細胞の純度を維持する、
のうちの任意の１つまたはそれより多くを示す、請求項１０〜２１のいずれか一項記載の方法。
前記培地が培養下で少なくとも７か月間、前記集団中の心筋細胞の純度を維持する、請求項２２記載の方法。
前記心筋細胞が、細胞生存性又は機能を調節する化合物と接触する、請求項１０〜２３のいずれか一項記載の方法。
前記化合物が、細胞イオンチャネル活動を調節する、請求項２４記載の方法。
前記化合物が、拍動周波数及び／又はフィールドポテンシャル持続時間を調節する、請求項２４または２５記載の方法。
前記心筋細胞が、拍動周波数を調節する化合物と接触する、請求項２４〜２６のいずれか一項記載の方法。
前記化合物がテトロドトキシン又はイソプロテレノールである、および／または前記心筋細胞が、フィールドポテンシャル持続時間を調節する化合物と接触し、ここで、前記化合物がＥ４０３１又はテルフェナジンである、請求項２４〜２７のいずれか一項記載の方法。