JP2019501672A - 細胞安定化のための細胞培地調合物 - Google Patents
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Abstract
Description
本願は、2016年1月12日に出願された米国特許出願第62/277,870号明細書の出願日の利益を主張し、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。
輸送のための心筋細胞(cardiac muscle cells)(心筋細胞(cardiomyocytes))の長期安定化は、現在の細胞保存条件下でのそれら細胞の生存率の低さにより問題となっている。従来、長期輸送のための心筋細胞の調製は、液体懸濁液の形態での細胞の凍結保存を含み、これは:i)細胞生存率の低下を引き起こし;ii)細胞懸濁液を生成するためのいくつかの操作ステップを必要とし、かつiii)細胞が極低温(−80〜−200℃)下で貯蔵及び輸送されることを必要とする。
本開示はとりわけ、細胞、例えば心筋細胞が細胞生存率を維持し、かつ最大約120時間(5日間)の期間にわたって細胞機能を保存することを可能にする水性培地調合物を提供する。本明細書に記載の条件で維持される細胞は、標準的な宅配の取り扱いの下での輸送に成功し、非極低温、例えば約33°F〜約75°F、例えば約35°F〜約70°F又は約4℃〜約30℃の温度の下で、完全な細胞機能及び生存率を保持することが示された。
以下の詳細な説明は、本主題が実施され得る態様及び実施形態を提供する。これら実施形態は、当業者が本主題を実施することができるように十分に詳細に記載されている。本開示における「1つの(an)」、「1つの(one)」、又は「様々な」実施形態への参照は必ずしも同じ実施形態に対するものではなく、そのような参照は複数の実施形態を企図する。以下の詳細な説明の実施形態は、例証であり、限定的な意味で解釈されるべきではない。
iPSc由来の心筋細胞を384ウェルマイクロプレートに充填し、約2mMのGlutamax、約215μg/mLのアスコルビン酸、約500μg/mLのヒト血清アルブミン、及び約10μg/mLのヒトインスリンを有する保存培地(冬眠培地)の培地中に入れた。プレートを酸素及び二酸化炭素両方のガス交換が可能な蓋で密閉した。次いで、プレートを保護発泡体で裏打ちされた輸送用封筒に包装し、続いてFedEx輸送用ボックスに包装した。次いで、プレート及び冬眠中の細胞を、カリフォルニア州サンディエゴからテキサス州ヒューストンに3日間のサービスを利用して輸送した。到着時に、輸送コンテナの損傷を検査し、すぐに翌日配送でサンディエゴに返送した。輸送試験の合計期間は4日間であった。到着時に、プレートを取り出し、蓋をはがし、そしてマイクロプレートウェル内の培地を標準増殖培地と交換した。心筋細胞は培地交換後1時間以内に拍動を開始し、これによりシステムを検証した。
一実施形態では、細胞保存培地が提供され、以下:細胞冬眠培地及びL−グルタミン又はそのアナログ、並びに、アスコルビン酸、アルブミン、若しくはインスリンの1つ又は複数、を含む。一実施形態では、細胞保存培地は、Hibernate(登録商標)E(カルシウム、マグネシウム、リン酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、及びピルビン酸ナトリウムを含むが、無血清、グルタミン酸フリー、グルタミンフリー、抗生物質フリー、かつHEPESフリーである)、を含む。一実施形態では、アナログはL−アラニル−L−グルタミンジペプチドを含む。一実施形態では、L−グルタミン又はアナログジペプチドの濃度は、約0.5mM〜約4mMである。一実施形態では、アスコルビン酸は約100μg/mL〜約300μg/mLである。一実施形態では、アルブミンは約200μg/mL〜約700μg/mLである。一実施形態では、インスリンは約1μg/mL〜約20μg/mLである。一実施形態では、細胞保存培地は、Hibernate(登録商標)E、2mMのGlutamax、213μMのアスコルビン酸、500μMの組み換えヒト血清アルブミン、及び10μMの組み換えヒトインスリンを含む。
Claims (32)
- 細胞保存培地であって、以下:細胞冬眠培地(cell hibernation medium)及びL−グルタミン又はそのアナログ、並びに、アスコルビン酸、アルブミン、若しくはインスリンの1つ又は複数、を含む、細胞保存培地。
- 前記細胞冬眠培地が、Hibernate(登録商標)Eを含む、請求項1に記載の培地。
- 前記アナログが、L−アラニル−L−グルタミンジペプチドを含む、請求項1又は2に記載の培地。
- 前記L−グルタミン又はアナログジペプチドの濃度が、約0.5mM〜約4mM又は約1mM〜約2mMである、請求項1から3のいずれか一項に記載の培地。
- 前記アスコルビン酸が、約100μg/mL〜約300μg/mL又は約150〜約200mMである、請求項1から4のいずれか一項に記載の培地。
- 前記アルブミンが、約200μg/mL〜約700μg/mL又は約300〜約400mMである、請求項1から5のいずれか一項に記載の培地。
- 前記インスリンが、約1μg/mL〜約20μg/mL又は約4〜約6mMである、請求項1から6のいずれか一項に記載の培地。
- 細胞をさらに含む、請求項1から7のいずれか一項に記載の培地。
- 前記細胞が心筋細胞である、請求項8に記載の培地。
- 前記細胞がiPSc由来の心筋細胞である、請求項9に記載の培地。
- 細胞回復培地(cell recovery medium)であって、以下:請求項1から7のいずれか一項に記載の細胞保存培地、及びM199、DMEM、グルコース又は他の糖に基づくエネルギー源、グルタミン又はそのアナログ、並びに、アスコルビン酸、アルブミン、若しくはインスリンの1つ又は複数、を含み、ここで、前記細胞回復培地が約45%〜約55%の細胞保存培地を有し、前記細胞回復培地が約10%〜約15%のM199及び約35%〜約40%のDMEMを有する、細胞回復培地。
- 約2g/L〜約8g/L又は約4g/L〜約5g/Lのグルコース又は他の糖を含む、請求項11に記載の培地。
- 前記細胞回復培地中のL−グルタミン又はアナログが、約0.5mM〜約4mM又は約1mM〜約2mMである、請求項11又は12に記載の培地。
- 前記細胞回復培地中のアスコルビン酸が、約100μg/mL〜約300μg/mL又は約150μg/mL〜約200μg/mLである、請求項11、12又は13のいずれか一項に記載の培地。
- 前記細胞回復培地中のアルブミンが、約200μg/mL〜約700μg/mL又は300μg/mL〜400μg/mLである、請求項11から14のいずれか一項に記載の培地。
- 前記細胞回復培地中のインスリンが、約1μg/mL〜約20μg/mL又は4μg/mL〜6μg/mLである、請求項11から15のいずれか一項に記載の培地。
- 細胞をさらに含む、請求項11から16のいずれか一項に記載の培地。
- 前記細胞が心筋細胞である、請求項17に記載の培地。
- 前記細胞がiPSc由来の心筋細胞である、請求項18に記載の培地。
- 細胞培養培地であって、以下:M199、DMEM、L−グルタミン又はそのアナログ、グルコース又は他の糖に基づくエネルギー源、並びに、アスコルビン酸、アルブミン若しくはインスリンの1つ又は複数、を含み、ここで、前記培地が、約20%〜約30%のM199、約70%〜約80%のDMEM、及び約2g/L〜約8g/Lのグルコース又は他の糖を含む、細胞培養培地。
- 約4g/L〜約5g/Lのグルコース又は他の糖を含む、請求項20に記載の培地。
- 前記細胞培養培地中のアスコルビン酸が、約100μg/mL〜約300μg/mLである、請求項20又は21に記載の培地。
- 前記細胞培養培地中のアルブミンが、約200μg/mL〜約700μg/mLである、請求項20、21又は22のいずれか一項に記載の培地。
- 前記細胞培養培地中のインスリンが、約1μg/mL〜約20μg/mLである、請求項20から23のいずれか一項に記載の培地。
- 前記細胞培養培地中のL−グルタミン又はアナログが、約0.5mM〜約4mMである、請求項20から24のいずれか一項に記載の培地。
- 細胞をさらに含む、請求項20から25のいずれか一項に記載の培地。
- 前記細胞が心筋細胞である、請求項26に記載の培地。
- 前記細胞がiPSc由来の心筋細胞である、請求項27に記載の培地。
- 貯蔵及び出荷のために細胞を調製する方法であって、以下:
細胞を提供し;そして
前記細胞を、請求項1から7のいずれか一項に記載の細胞保存培地に導入すること、
を含む、方法。 - 細胞を培養する方法であって、以下:
細胞を、請求項11から16のいずれか一項に記載の細胞回復培地で洗浄し;そして
洗浄した細胞を、請求項20から25のいずれか一項に記載の培地で培養すること、
を含む、方法。 - 前記細胞が心筋細胞である、請求項30に記載の方法。
- 前記細胞がiPSc由来の心筋細胞である、請求項31に記載の方法。
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