CN111602651A - 一种胎盘细胞冷冻装置及其冷冻方法 - Google Patents

一种胎盘细胞冷冻装置及其冷冻方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种胎盘细胞冷冻装置及其冷冻方法，尤其是一种胎盘细胞的冷冻方法，包括如下步骤：S1配置预处理液：选用丙谷二肽、苏亮环二肽、葡甘露聚糖、氯化钠水溶液；质量比例为3‑4:6‑7:1‑2：50；所述氯化钠水溶液，质量浓度为0.9%；S2预处理：将洗涤过后的胎盘细胞采用预处理液淋洗，预处理液淋洗淋洗的流速为1.5ml/min，淋洗时间为10分钟，预处理液的温度为4度，得到预处理后的胎盘细胞；S4加入保存液：在4度条件下，向预处理后的胎盘细胞中加入配置的保存液，加入的保存液量占总体保存液量的一半。本发明避免了传统的“慢冻”技术因为降温速率的不稳定而造成的细胞复苏成活率低、溶血率高的技术问题，同时，减少了不必要的冷冻损伤和冷冻毒性。

Description

一种胎盘细胞冷冻装置及其冷冻方法
技术领域
本发明涉及细胞冷冻技术领域，尤其涉及一种胎盘细胞冷冻装置及其冷冻方法。
背景技术
干细胞(stem cell)是一类具有自我复制能力的多潜能细胞。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。根据干细胞所处的发育阶段分为胚胎干细胞和成体干细胞，根据干细胞的发育潜能分为三类:全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞，干细胞是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称为“万用细胞。
现有的胎盘干细胞在保存时，一般采用传统的梯度降温（慢冻）的方法，通常需要一天的时间，繁琐耗时，不仅加剧了有毒冻存保护剂与细胞的接触时间，增加了细胞损伤的机会，还需要多种冷冻设备。另外一旦没有达到“慢冻”的降温速率要求，冻存效率就会显著下降，造成细胞复苏成活率的降低。
发明内容
基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种胎盘细胞冷冻装置及其冷冻方法。
本发明提出的一种胎盘细胞冷冻装置及其冷冻方法，包括如下步骤：
S1配置预处理液：
选用丙谷二肽、苏亮环二肽、葡甘露聚糖、氯化钠水溶液；质量比例为3-4:6-7:1- 2：50；所述氯化钠水溶液，质量浓度为0.9%；
S2预处理：
将洗涤过后的胎盘细胞采用预处理液淋洗，预处理液淋洗淋洗的流速为1.5ml/min，淋洗时间为10分钟，预处理液的温度为4度，得到预处理后的胎盘细胞；
S3配置保存液：一份平衡液一、一份平衡液二和一份玻璃化液，所述平衡液一包括基础液、2-3％乙二醇、1-1.5％二甲基亚砜、1.5-2.0％丙二醇，上述百分数均为体积百分比；所述平衡液二包括基础液、7-8％乙二醇、3.5-4.0％二甲基亚砜、3.5-4.0％丙二醇、5-30μM(μmol/L)染料木黄酮，上述百分数均为体积百分比；所述玻璃化液包括基础液、14-16％乙二醇、7-8％二甲基亚砜、7-8％丙二醇、0.4-0.6M(mol/L)蔗糖、5-25μΜ(μmol/L)染料木黄酮，上述百分数均为体积百分比；
S4加入保存液：
在4度条件下，向预处理后的胎盘细胞中加入配置的保存液，加入的保存液量占总体保存液量的一半，静置1-2分钟；
S5继续加入剩余的保存液，先采用200-300r/min的速度低速震荡，再静置6-8分钟，装入冻存管中，之后放入冷冻柜中保存。
优选的，所述基础液为含有质量分数21-22％SPS的基础试剂，基础试剂为Earle's平衡盐溶液。
优选的，所述步骤S5中将冻存管放入冷冻柜中，控制冷冻柜的降温速率，直至降到一定温度，然后进行二次降温，调整冷冻柜的降温速率，直至降到一定温度，将二次降温后的胎盘细胞转移至-196℃的液氮中保存。
一种胎盘细胞冷冻装置，包括冷冻柜和液氮速冻机。
本发明中，所述一种胎盘细胞冷冻装置及其冷冻方法，避免了传统的“慢冻”技术因为降温速率的不稳定而造成的细胞复苏成活率低、溶血率高的技术问题，同时，减少了不必要的冷冻损伤和冷冻毒性。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
实施例一
一种胎盘细胞冷冻装置及其冷冻方法，包括如下步骤：
S1配置预处理液：
选用丙谷二肽、苏亮环二肽、葡甘露聚糖、氯化钠水溶液；质量比例为3-4:6-7:1- 2：50；所述氯化钠水溶液，质量浓度为0.9%；
S2预处理：
将洗涤过后的胎盘细胞采用预处理液淋洗，预处理液淋洗淋洗的流速为1.5ml/min，淋洗时间为10分钟，预处理液的温度为4度，得到预处理后的胎盘细胞；
S3配置保存液：一份平衡液一、一份平衡液二和一份玻璃化液，所述平衡液一包括基础液、2％乙二醇、1％二甲基亚砜、1.5％丙二醇，上述百分数均为体积百分比；所述平衡液二包括基础液、7％乙二醇、3.5％二甲基亚砜、3.5％丙二醇、5μM(μmol/L)染料木黄酮，上述百分数均为体积百分比；所述玻璃化液包括基础液、14％乙二醇、7％二甲基亚砜、7％丙二醇、0.4M(mol/L)蔗糖、5μΜ(μmol/L)染料木黄酮，上述百分数均为体积百分比；
S4加入保存液：
在4度条件下，向预处理后的胎盘细胞中加入配置的保存液，加入的保存液量占总体保存液量的一半，静置1-2分钟；
S5继续加入剩余的保存液，先采用200r/min的速度低速震荡，再静置6-8分钟，装入冻存管中，之后放入冷冻柜中保存。
本发明中，所述基础液为含有质量分数21-22％SPS的基础试剂，基础试剂为Earle's平衡盐溶液。
本发明中，所述步骤S5中将冻存管放入冷冻柜中，控制冷冻柜的降温速率，直至降到一定温度，然后进行二次降温，调整冷冻柜的降温速率，直至降到一定温度，将二次降温后的胎盘细胞转移至-196℃的液氮中保存。
一种胎盘细胞冷冻装置，包括冷冻柜和液氮速冻机。
实施例二
一种胎盘细胞冷冻装置及其冷冻方法，包括如下步骤：
S1配置预处理液：
选用丙谷二肽、苏亮环二肽、葡甘露聚糖、氯化钠水溶液；质量比例为3-4:6-7:1- 2：50；所述氯化钠水溶液，质量浓度为0.9%；
S2预处理：
将洗涤过后的胎盘细胞采用预处理液淋洗，预处理液淋洗淋洗的流速为1.5ml/min，淋洗时间为10分钟，预处理液的温度为4度，得到预处理后的胎盘细胞；
S3配置保存液：一份平衡液一、一份平衡液二和一份玻璃化液，所述平衡液一包括基础液、3％乙二醇、1.5％二甲基亚砜、2.0％丙二醇，上述百分数均为体积百分比；所述平衡液二包括基础液、8％乙二醇、4.0％二甲基亚砜、4.0％丙二醇、30μM(μmol/L)染料木黄酮，上述百分数均为体积百分比；所述玻璃化液包括基础液、16％乙二醇、8％二甲基亚砜、8％丙二醇、0.6M(mol/L)蔗糖、25μΜ(μmol/L)染料木黄酮，上述百分数均为体积百分比；
S4加入保存液：
在4度条件下，向预处理后的胎盘细胞中加入配置的保存液，加入的保存液量占总体保存液量的一半，静置1-2分钟；
S5继续加入剩余的保存液，先采用200-300r/min的速度低速震荡，再静置6-8分钟，装入冻存管中，之后放入冷冻柜中保存。
本发明中，所述基础液为含有质量分数21-22％SPS的基础试剂，基础试剂为Earle's平衡盐溶液。
本发明中，所述步骤S5中将冻存管放入冷冻柜中，控制冷冻柜的降温速率，直至降到一定温度，然后进行二次降温，调整冷冻柜的降温速率，直至降到一定温度，将二次降温后的胎盘细胞转移至-196℃的液氮中保存。
一种胎盘细胞冷冻装置，包括冷冻柜和液氮速冻机。
本发明：配置预处理液：选用丙谷二肽、苏亮环二肽、葡甘露聚糖、氯化钠水溶液；质量比例为3-4:6-7:1- 2：50；所述氯化钠水溶液，质量浓度为0.9%；预处理：将洗涤过后的胎盘细胞采用预处理液淋洗，预处理液淋洗淋洗的流速为1.5ml/min，淋洗时间为10分钟，预处理液的温度为4度，得到预处理后的胎盘细胞；配置保存液：一份平衡液一、一份平衡液二和一份玻璃化液，所述平衡液一包括基础液、2-3％乙二醇、1-1.5％二甲基亚砜、1.5-2.0％丙二醇，上述百分数均为体积百分比；所述平衡液二包括基础液、7-8％乙二醇、3.5-4.0％二甲基亚砜、3.5-4.0％丙二醇、5-30μM(μmol/L)染料木黄酮，上述百分数均为体积百分比；所述玻璃化液包括基础液、14-16％乙二醇、7-8％二甲基亚砜、7-8％丙二醇、0.4-0.6M(mol/L)蔗糖、5-25μΜ(μmol/L)染料木黄酮，上述百分数均为体积百分比；加入保存液：在4度条件下，向预处理后的胎盘细胞中加入配置的保存液，加入的保存液量占总体保存液量的一半，静置1-2分钟；继续加入剩余的保存液，先采用200-300r/min的速度低速震荡，再静置6-8分钟，装入冻存管中，之后放入冷冻柜中保存。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种胎盘细胞的冷冻方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1配置预处理液：
选用丙谷二肽、苏亮环二肽、葡甘露聚糖、氯化钠水溶液；质量比例为3-4:6-7:1- 2：50；所述氯化钠水溶液，质量浓度为0.9%；
S2预处理：
将洗涤过后的胎盘细胞采用预处理液淋洗，预处理液淋洗淋洗的流速为1.5ml/min，淋洗时间为10分钟，预处理液的温度为4度，得到预处理后的胎盘细胞；
S3配置保存液：一份平衡液一、一份平衡液二和一份玻璃化液，所述平衡液一包括基础液、2-3％乙二醇、1-1.5％二甲基亚砜、1.5-2.0％丙二醇，上述百分数均为体积百分比；所述平衡液二包括基础液、7-8％乙二醇、3.5-4.0％二甲基亚砜、3.5-4.0％丙二醇、5-30μM(μmol/L)染料木黄酮，上述百分数均为体积百分比；所述玻璃化液包括基础液、14-16％乙二醇、7-8％二甲基亚砜、7-8％丙二醇、0.4-0.6M(mol/L)蔗糖、5-25μΜ(μmol/L)染料木黄酮，上述百分数均为体积百分比；
S4加入保存液：
在4度条件下，向预处理后的胎盘细胞中加入配置的保存液，加入的保存液量占总体保存液量的一半，静置1-2分钟；
S5继续加入剩余的保存液，先采用200-300r/min的速度低速震荡，再静置6-8分钟，装入冻存管中，之后放入冷冻柜中保存。
2.根据权利要求1所述的一种胎盘细胞的冷冻方法，其特征在于，所述基础液为含有质量分数21-22％SPS的基础试剂，基础试剂为Earle's平衡盐溶液。
3.根据权利要求1所述的一种胎盘细胞的冷冻方法，其特征在于，所述步骤S5中将冻存管放入冷冻柜中，控制冷冻柜的降温速率，直至降到一定温度，然后进行二次降温，调整冷冻柜的降温速率，直至降到一定温度，将二次降温后的胎盘细胞转移至-196℃的液氮中保存。
4.一种胎盘细胞冷冻装置，其特征在于，包括冷冻柜和液氮速冻机。
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