CN112970740A - 一种用于保存胎盘亚全能干细胞的凝胶溶液及其应用 - Google Patents

一种用于保存胎盘亚全能干细胞的凝胶溶液及其应用 Download PDF

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    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
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Abstract

本发明公开了一种用于保存胎盘亚全能干细胞的凝胶溶液及其应用，所述凝胶溶液包括如下重量份组分：褐藻酸钠20～40份、人血白蛋白50～80份、丙三醇80～120份、肝素10～20份、羟乙基淀粉40～60份、甘氨酸钠5～10份、葡萄糖酸钠10～20份、氯化钾10～20份、氯化镁10～15份、L‑谷氨酸氨1～3份和去离子水900～1000份；本发明凝胶溶液通过各重量份组分的选择，使得制备得到的凝胶溶液能够长久保存胎盘亚全能干细胞，并能够保障胎亚全能干细胞具有较高的存活率；此外，该凝胶溶液具有较高的稳定性。

Description

一种用于保存胎盘亚全能干细胞的凝胶溶液及其应用
技术领域
本发明涉及干细胞技术领域，具体涉及一种用于保存胎盘亚全能干细胞的凝胶溶液及其应用。
背景技术
胎盘(placenta)是胎儿与母体之间物质交换的重要器官，是人类妊娠期间由胚胎胚膜和母体子宫内膜联合长成的母子间组织结合器官。胎儿在子宫中发育，依靠胎盘从母体取得营养，而双方保持相当的独立性。胎盘还合成多种激素、酶和细胞因子等，以维持正常妊娠。
胎盘中年可以分离出大量胎盘亚全能干细胞，其发育阶段与胚胎干细胞接近，具备全能干细胞的生物学特征，可以定向分化成上皮干细胞、神经干细胞、心肌细胞、骨细胞等等。
目前，胎盘亚全能干细胞的保存一般是采用冷冻液进行保存，常用的冷冻液为DMSO，DMSO对细胞存在一定的毒性，常温下可以是胞内蛋白变性，从而使冻存的胎盘亚全能干细胞收到损伤，影响存活率。
因此，现有的胎盘亚全能干细胞保存过程中存在细胞复苏率较低的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于保存胎盘亚全能干细胞的凝胶溶液及其应用，该凝胶溶液能够长期保存胎盘亚全能干细胞，并保障胎盘亚全能干细胞具有较高的存活率。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
本发明第一方面提供一种用于保存胎盘亚全能干细胞的凝胶溶液，所述凝胶溶液包括如下重量份组分：
褐藻酸钠20～40份、人血白蛋白50～80份、丙三醇80～120份、肝素10～20 份、羟乙基淀粉40～60份、甘氨酸钠5～10份、葡萄糖酸钠10～20份、氯化钾 10～20份、氯化镁10～15份、L-谷氨酸氨1～3份和去离子水900～1000份。
优选地，所述凝胶溶液包括如下重量份组分：
褐藻酸钠25～35份、人血白蛋白60～70份、丙三醇90～110份、肝素12～16 份、羟乙基淀粉50～60份、甘氨酸钠6～8份、葡萄糖酸钠12～16份、氯化钾 12～18份、氯化镁12～14份、L-谷氨酸氨2～3份和去离子水950～1000份。
优选地，所述凝胶溶液包括如下重量份组分：
褐藻酸钠30份、人血白蛋白60份、丙三醇100份、肝素15份、羟乙基淀粉60份、甘氨酸钠7份、葡萄糖酸钠15份、氯化钾15份、氯化镁13份、 L-谷氨酸氨2份和去离子水983份。
优选地，所述凝胶溶液通过在搅拌条件下将各组分置于去离子水中搅拌混匀制得。
本发明第二方面提供一种所述凝胶溶液在胎盘亚全能干细胞保存中的应用。
本发明第三方面提供一种胎盘亚全能干细胞的保存方法，所述保存方法包括如下步骤：
(a)将权利要求1～4任一所述的凝胶溶液进行预冷；
(b)将预冷后的凝胶溶液置于胎盘亚全能干细胞中，搅匀，得到细胞液；
(c)将细胞液置于液氮中进行保存即可。
优选地，所述细胞液中胎盘亚全能干细胞的浓度为2～6×106个/ml。
优选地，所述预冷温度为0～4℃。
本发明第四方面提供一种含有胎盘亚全能干细胞的凝胶制剂，所述凝胶制剂包括所述凝胶溶液和胎盘亚全能干细胞。
优选地，所述凝胶制剂中胎盘亚全能干细胞的浓度为2～6×106个/ml。。
与现有技术相比，本发明的有益效果至少包括：
本发明凝胶溶液通过各重量份组分的选择，使得制备得到的凝胶溶液能够长久保存胎盘亚全能干细胞，并能够保障胎亚全能干细胞具有较高的存活率；此外，该凝胶溶液具有较高的稳定性。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明技术方案的实施例进行详细的描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，因此只作为示例，而不能以此来限制本发明的保护范围。
需要注意的是，除非另有说明，本申请使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域技术人员所理解的通常意义。
实施例1
本实施例公开了一种用于保存胎盘亚全能干细胞的凝胶溶液，该凝胶溶液包括如下重量份组分：
褐藻酸钠40份、人血白蛋白80份、丙三醇80份、肝素20份、羟乙基淀粉40份、甘氨酸钠10份、葡萄糖酸钠10份、氯化钾20份、氯化镁15份、 L-谷氨酸氨1份和去离子水1000份。
上述凝胶溶液通过将各组分置于去离子水中搅拌混匀制得。
实施例2
本实施例公开了一种用于保存胎盘亚全能干细胞的凝胶溶液，该凝胶溶液包括如下重量份组分：
褐藻酸钠20份、人血白蛋白50份、丙三醇120份、肝素10份、羟乙基淀粉60份、甘氨酸钠5份、葡萄糖酸钠20份、氯化钾10份、氯化镁10份、 L-谷氨酸氨3份和去离子水900份。
上述凝胶溶液通过将各组分置于去离子水中搅拌混匀制得。
实施例3
本实施例公开了一种用于保存胎盘亚全能干细胞的凝胶溶液，该凝胶溶液包括如下重量份组分：
褐藻酸钠25份、人血白蛋白60份、丙三醇110份、肝素12份、羟乙基淀粉60份、甘氨酸钠8份、葡萄糖酸钠16份、氯化钾12份、氯化镁12份、 L-谷氨酸氨3份和去离子水1000份。
上述凝胶溶液通过将各组分置于去离子水中搅拌混匀制得。
实施例4
本实施例公开了一种用于保存胎盘亚全能干细胞的凝胶溶液，该凝胶溶液包括如下重量份组分：
褐藻酸钠35份、人血白蛋白70份、丙三醇90份、肝素16份、羟乙基淀粉50份、甘氨酸钠6份、葡萄糖酸钠12份、氯化钾18份、氯化镁14份、L- 谷氨酸氨2份和去离子水950份。
上述凝胶溶液通过将各组分置于去离子水中搅拌混匀制得。
实施例5
本实施例公开了一种用于保存胎盘亚全能干细胞的凝胶溶液，该凝胶溶液包括如下重量份组分：
褐藻酸钠30份、人血白蛋白60份、丙三醇100份、肝素15份、羟乙基淀粉60份、甘氨酸钠7份、葡萄糖酸钠15份、氯化钾15份、氯化镁13份、 L-谷氨酸氨2份和去离子水983份。
上述凝胶溶液通过将各组分置于去离子水中搅拌混匀制得。
实施例6
本实施例公开了一种含有胎盘亚全能干细胞的凝胶制剂，该凝胶制剂包括实施例5中凝胶溶液和胎盘亚全能干细胞，其中，凝胶制剂中胎盘亚全能干细胞的浓度为5×106个/ml。
实施例7
本实施例公开了一种胎盘亚全能干细胞的保存方法，该保存方法包括如下步骤：
(a)将实施例5中的凝胶溶液进行预冷至4℃；
(b)将预冷后的凝胶溶液置于胎盘亚全能干细胞中，搅匀，得到细胞液，其中，细胞液中胎盘亚全能干细胞的浓度为5×106个/ml；
(c)将细胞液置于液氮中进行保存即可。
实施例8
本实施例公开了一种胎盘亚全能干细胞的保存方法，该保存方法包括如下步骤：
(a)将实施例4中的凝胶溶液进行预冷至4℃；
(b)将预冷后的凝胶溶液置于胎盘亚全能干细胞中，搅匀，得到细胞液，其中，细胞液中胎盘亚全能干细胞的浓度为6×106个/ml；
(c)将细胞液置于液氮中进行保存即可。
实施例9
本实施例公开了一种胎盘亚全能干细胞的保存方法，该保存方法包括如下步骤：
(a)将实施例3中的凝胶溶液进行预冷至4℃；
(b)将预冷后的凝胶溶液置于胎盘亚全能干细胞中，搅匀，得到细胞液，其中，细胞液中胎盘亚全能干细胞的浓度为2×106个/ml；
(c)将细胞液置于液氮中进行保存即可。
对照例1
本对照例公开了一种胎盘亚全能干细胞的保存方法，该保存方法与实施例 7的保存方法基本相同，区别仅在于步骤(a)中采用的凝胶溶液通过将以下各组分(除去离子水之外)置于去离子水中搅拌混匀制得：
褐藻酸钠30份、人血白蛋白60份、丙三醇100份、肝素15份、羟乙基淀粉60份、甘氨酸钠9份、葡萄糖酸钠15份、氯化钾15份、氯化镁13份和去离子水983份。
对照例2
本对照例公开了一种胎盘亚全能干细胞的保存方法，该保存方法与实施例 7的保存方法基本相同，区别仅在于步骤(a)中采用的凝胶溶液通过将以下各组分(除去离子水之外)置于去离子水中搅拌混匀制得：
褐藻酸钠30份、人血白蛋白60份、丙三醇100份、肝素30份、羟乙基淀粉60份、甘氨酸钠7份、氯化钾15份、氯化镁13份、L-谷氨酸氨2份和去离子水983份。
对照例3
本对照例公开了一种胎盘亚全能干细胞的保存方法，该保存方法与实施例 7的保存方法基本相同，区别仅在于步骤(a)中采用的凝胶溶液通过将以下各组分(除去离子水之外)置于去离子水中搅拌混匀制得：
褐藻酸钠30份、人血白蛋白60份、丙三醇100份、肝素15份、羟乙基淀粉60份、甘氨酸钠7份、葡萄糖酸钠15份、氯化钾28份、L-谷氨酸氨2 份和去离子水983份。
实验例
分别按照实施例7～9以及对照例1～3中的胎盘亚全能干细胞的保存方法进行保存，然后，在保存的第4个月、8个月、12个月、18个月取出，在25℃下平衡30min，再置于35℃的水浴锅中进行水浴4min；然后采用台酚蓝染色法进行细胞计数，并计算存活率，计算结果如表1所示：
表1
Figure RE-GDA0003054059580000061
Figure RE-GDA0003054059580000071
由表1可知：
通过表1数据比较可知，本申请实施例中制备得到的凝胶溶液能够更好的保存胎盘亚全能干细胞，而且保存时间长，保存后的胎盘亚全能干细胞存活率更高。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围，其均应涵盖在本发明的权利要求和说明书的范围当中。

Claims (10)

1.一种用于保存胎盘亚全能干细胞的凝胶溶液，其特征在于，包括如下重量份组分：
褐藻酸钠20～40份、人血白蛋白50～80份、丙三醇80～120份、肝素10～20份、羟乙基淀粉40～60份、甘氨酸钠5～10份、葡萄糖酸钠10～20份、氯化钾10～20份、氯化镁10～15份、L-谷氨酸氨1～3份和去离子水900～1000份。
2.根据权利要求1所述的凝胶溶液，其特征在于，包括如下重量份组分：
褐藻酸钠25～35份、人血白蛋白60～70份、丙三醇90～110份、肝素12～16份、羟乙基淀粉50～60份、甘氨酸钠6～8份、葡萄糖酸钠12～16份、氯化钾12～18份、氯化镁12～14份、L-谷氨酸氨2～3份和去离子水950～1000份。
3.根据权利要求1或2所述的凝胶溶液，其特征在于，包括如下重量份组分：
褐藻酸钠30份、人血白蛋白60份、丙三醇100份、肝素15份、羟乙基淀粉60份、甘氨酸钠7份、葡萄糖酸钠15份、氯化钾15份、氯化镁13份、L-谷氨酸氨2份和去离子水983份。
4.根据权利要求1或2所述的凝胶溶液，其特征在于，所述凝胶溶液通过在搅拌条件下将各组分置于去离子水中搅拌混匀制得。
5.权利要求1～4任一所述的凝胶溶液在胎盘亚全能干细胞保存中的应用。
6.一种胎盘亚全能干细胞的保存方法，其特征在于，包括如下步骤：
(a)将权利要求1～4任一所述的凝胶溶液进行预冷；
(b)将预冷后的凝胶溶液置于胎盘亚全能干细胞中，搅匀，得到细胞液；
(c)将细胞液置于液氮中进行保存即可。
7.根据权利要求6所述的保存方法，其特征在于，所述细胞液中胎盘亚全能干细胞的浓度为2～6×106个/ml。
8.根据权利要求6所述的保存方法，其特征在于，所述预冷温度为0～4℃。
9.一种含有胎盘亚全能干细胞的凝胶制剂，其特征在于，包括权利要求1～4任一所述的凝胶溶液和胎盘亚全能干细胞。
10.根据权利要求9所述的凝胶制剂，其特征在于，所述凝胶制剂中胎盘亚全能干细胞的浓度为2～6×106个/ml。
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