CN110583630A - 一种驴的精液稀释液及其制备方法 - Google Patents

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郑艳玲
王文超
温华梅
刘凤华
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Shandong Vocational Animal Science and Veterinary College
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    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
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Abstract

本发明公开了一种驴用精液稀释液及其制备方法，包括葡萄糖、乳糖、棉籽糖、五水柠檬酸钠、柠檬酸钾、HEPES、EDTA、卵黄、青链霉素、无菌蒸馏水、脱脂驴奶，还添加了BSA和A溶液，所述A溶液由牛磺酸、L‑赖氨酸盐酸盐、肌醇、维生素B6、维生素B12、柠檬酸、柠檬酸钠、柠檬黄、纯净水组成。所述驴精液稀释液给驴精子提供了最优良的生存环境，保护了驴精子细胞膜的完整性，给精子充分的养分，在保持较高精子活力的前提下，能够抑制精子的代谢，延长精子寿命，便于精子的保存和运输。

Description

一种驴的精液稀释液及其制备方法
发明领域
本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种驴的精液稀释液及其制备方法。
背景技术
我国驴数量大、品种多，可耕地和乘骑，由于社会的发展，驴的役用功能逐渐退出历史舞台。驴肉的蛋白质含量比猪牛肉都高，是典型的高蛋白低脂肪食物，驴皮更是珍贵的食材和药材。但是驴的繁殖力比其他家畜低，导致全国驴的数量急剧下降，许多品种都处于保种状态。近几年驴的选育工作也相对滞后，驴品种质量严重退化。因此必须要充分认识驴种质资源保护的重要性、必要性和紧迫性。
目前良种驴如乌头驴利用率低，优良的种公驴数量少，饲养成本高，自然繁殖率低是制约驴产业发展的重要瓶颈。近年来由于人们对身体保健以及阿胶类保健产品的重视，使得驴产业技术包括人工授精技术研究增多。驴人工授精技术的研究可以极大的提高优良种公驴的繁殖力，对驴产业的发展可产生极大的促进作用。
目前驴人工授精的精液主要有鲜精、保鲜精和冻精。无论哪种形式的精液都需要精液稀释液。目前人工受精采用的精液稀释液主要有脱脂牛奶、INRA96改进版、自配版和发明版，但精液保存时间较短、精子存活率较低、精子活力低，导致初配成功率低。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种驴的精液稀释液及其制备方法，解决了驴精液保存时间较短、驴精子存活率较低、驴精子活力低，导致驴初配成功率低的问题。
一种驴的精液稀释液，包括葡萄糖25g、乳糖1.5g、棉籽糖1.5g、五水柠檬酸钠0.3g、柠檬酸钾0.41g、HEPES 4.76g、EDTA 0.4g、卵黄20mL、青链霉素10000U、无菌蒸馏水470mL、脱脂驴奶500mL、BSA2.5g、A溶液10mL。
所述A溶液由牛磺酸2g、L-赖氨酸盐酸盐2g、肌醇2g、维生素B6 0.31g、维生素B120.23g、柠檬酸0.3g、柠檬酸钠0.2g、柠檬黄0.1、纯净水10mL组成。
所述葡萄糖、乳糖、棉籽糖主要为精子提供直接能量物质。
所述卵黄是为增强驴精子运动力和持久力提供能量补充。
所述HEPES，中文名字是羟乙基哌秦乙硫磺酸，HEPES与五水柠檬酸钠、柠檬酸钾、EDTA结合使用能够较长时间控制稀释液恒定的pH范围，起到缓冲的作用，确保驴精子不会pH的剧烈变化而死亡。其中EDTA的添加使得稀释液的缓冲能力更强，更进一步，还会鳌合溶液中有害的金属离子。
所述BSA，又名牛血清白蛋白，能够稳定精液稀释液的渗透压，保护细胞膜，另外，BSA和脱脂驴奶还能提供蛋白能量物质以及营造良好的驴子宫内环境；
所述A溶液主要增强精子运动能力和持久力，进一步，与BSA搭配使用具有保护驴精子的良好作用，能够保持驴精子的活力，添加了BSA与A溶液的精液稀释液主要用于驴人工授精操作中鲜精受精、常温授精、保鲜授精等技术操作。
所述青链霉素保护驴精子免受精液采集和稀释过程中夹带的微生物和杂质，微生物的代谢会对精液稀释液的品质产生影响。
所述A溶液中牛磺酸：L-赖氨酸盐酸盐：肌醇的质量比为1:1，这样可以最大限度的保护驴精子的活力。
所述驴精液稀释液的配制方法，包括以下步骤：
(1)将葡萄糖、乳糖、棉籽糖、五水柠檬酸钠、柠檬酸钾、HEPES、EDTA溶于470ml无菌蒸馏水中，待完全溶解后定容至470ml，然后121℃20min高压灭菌；
(2)将驴奶加热10-15min，冷却到45℃，待乳脂略凝固，10层灭菌纱布过滤，去除剩余的乳脂，得到脱脂驴奶；
(3)待步骤(1)所配制的溶液降到22℃时，按照比例配制A溶液，将A溶液、BSA、卵黄和青链霉素溶于步骤(1)所配制的溶液中；
(4)将配方量的步骤(2)中的脱脂驴奶与步骤(3)得到的溶液混合，得到驴精液稀释液；
(5)将步骤(4)得到的精液稀释液分装至50ml离心管，封口冷藏备用。
所述上述配制步骤均在无菌条件下进行。
步骤(4)中所述脱脂驴奶与步骤(3)得到的溶液混合前，需降至22℃，这是为了使得驴精子所需要的营养物质质量达到最好，最终使得驴精子的活力达到最大。
所述驴精液稀释液的使用方法为：采精前提前将精液稀释液放入38℃水浴锅，采出精液后根据观察到的精子质量、当天的授精任务和冻精制作任务等情况按照精液：精液：精液稀释液的体积比为1：(1-5)的比例来进行稀释，优选地，精液：精液稀释液的体积比为1：3的比例来进行稀释，这样能够使得精液量达到最多，精子的存活时间较长，这样可以增加受配头数，充分提高了精液的配种利用。
本发明所述驴稀释液有以下几个优点：(1)能明显提高精液的受胎率；(2)明显延长精液(22℃)的存放时间；(3)能明显延长保鲜精(4℃)的存放时间；(4)相对于市售精液稀释液如IRNA系列稀释液成本低很多。综上，所述驴精液稀释液给驴精子提供了最优良的生存环境，保护了驴精子细胞膜的完整性，给精子充分的养分，在保持较高精子活力的前提下，能够抑制精子的代谢，延长精子寿命，便于精子的保存和运输。
具体实施方式
实施例采用的对比稀释液之一为市售的商品稀释液INRA96.
实施例采用的对比稀释液之一为自配液，其配方为：
实施例1
同一头种公驴进行采精，精液质量分析相近的情况下分别随机采用3种精液稀释液(发明液、INRA96、自配液)对精液进行稀释，精液与稀释液比例为1：3，每种稀释液稀释的精液分别对不少于20头发情母驴进行人工授精，统计初配成功率。
表1：采用不同精液稀释液精液人工授精初配成功率。
发明液组 INRA96组 自配液组
初配成功率(％) 85.71 80.95 76.19
实验结果表明：本发明液可提高精液人工授精的初配成功率。
实施例2
同一头种公驴进行采精，精液质量分析相近的情况下分别随机采用3种精液稀释液(发明液、INRA96、自配液)对精液进行稀释，精液与稀释液比例为1：3，放置在22℃下观察精液保存时间(精液始终有35％以上的活率)及活率。
表2：22℃精液保存时间活率
实验结果说明：22℃下观察精液保存时间最长的是发明液，其次是自配液，最短的是INRA96；发明液在22℃前三个小时有较高活率，三个小时后活率开始均匀下降。
实施例3
同一头种公驴进行采精，精液质量分析相近的情况下分别随机采用3种精液稀释液(发明液、INRA96、自配液)对精液进行稀释，精液与稀释液比例为1：3，做保鲜精(4℃环境)保存时间(精液始终有35％以上的活率)及活率。
表4：4℃精液保存时间和保存活率
实验结果说明：保鲜精(4℃环境)保存时间最长的是发明液，其次是INRA96，最短的是自配液；发明液用于做保鲜精时每天活率均明显高于INRA96组和自配液组。

Claims (5)

1.一种驴的精液稀释液，其特征在于：包括葡萄糖25g、乳糖1.5g、棉籽糖1.5g、五水柠檬酸钠0.3g、柠檬酸钾0.41g、HEPES 4.76g、EDTA 0.4g、卵黄20mL、青链霉素10000U、无菌蒸馏水470mL、脱脂驴奶500mL，添加BSA 2.5g、A溶液10mL。
2.根据权利要求1所述的驴的精液稀释液，其特征在于：所述A溶液由牛磺酸2g、L-赖氨酸盐酸盐2g、肌醇2g、维生素B6 0.31g、维生素B12 0.23g、柠檬酸0.3g、柠檬酸钠0.2g、柠檬黄0.1、纯净水10mL组成。
3.根据权利要求2所述的驴的精液稀释液，其特征在于：使用时，精液：精液稀释液的体积比为1：(1-5)的比例来进行稀释。
4.一种驴精液稀释液的配制方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)将配方中的葡萄糖、乳糖、棉籽糖、五水柠檬酸钠、柠檬酸钾、HEPES、EDTA溶于470ml无菌蒸馏水中，待完全溶解后定容至470ml，然后121℃20min高压灭菌；
(2)将驴奶加热10-15min，冷却到45℃，待乳脂略凝固，10层灭菌纱布过滤，去除剩余的乳脂，得到脱脂驴奶；
(3)待步骤(1)所配制的溶液降到22℃时，按照比例配制A溶液，将A溶液、BSA、卵黄和青链霉素溶于步骤(1)所配制的溶液中；
(4)将配方量的步骤(2)中的脱脂驴奶与步骤(3)得到的溶液混合，得到驴精液稀释液；
(5)将步骤(4)得到的精液稀释液分装至50ml离心管，封口冷藏备用；
所述上述配制步骤均在无菌条件下进行；
所述驴的精液稀释液，包括葡萄糖25g、乳糖1.5g、棉籽糖1.5g、五水柠檬酸钠0.3g、柠檬酸钾0.41g、HEPES 4.76g、EDTA 0.4g、卵黄20mL、青链霉素10000U、无菌蒸馏水470mL、脱脂驴奶500mL，添加BSA 2.5g、A溶液10mL；
所述A溶液由牛磺酸2g、L-赖氨酸盐酸盐2g、肌醇2g、维生素B6 0.31g、维生素B120.23g、柠檬酸0.3g、柠檬酸钠0.2g、柠檬黄0.1、纯净水10mL组成。
5.根据权利要求4所述的驴精液稀释液的配制方法，其特征在于：步骤(4)中所述脱脂驴奶与步骤(3)得到的溶液混合前，需降至22℃。
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