CN104082276B - 羊含锌精液稀释保存液及其配制方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种羊含锌精液稀释保存液及其配制方法，它由如下原料配制而成：二水合柠檬酸三钠1.8～2.9g、果糖1.5～2.5g、L-赖氨酸锌0.5～1.0g、催产素15～25IU、新鲜卵黄离心上清液5～15ml、鲜牛乳离心液100.0ml。本发明采用的牛乳离心液中含有精子运动所需的各种营养物质和微量元素，所含的多种糖类和添加的果糖，可以共同更好地为精子提供能量，来弥补能量消耗，延长精子存活时间。并添加L-赖氨酸锌，同时补充了精液中L-赖氨酸和锌的含量，改善稀释后的精浆生化成分，有助于精浆的正常代谢，减缓精子死亡，增加精子运动能力，提高精子活力；同时适量的锌可以保护顶体酶免于被水解。

Description

羊含锌精液稀释保存液及其配制方法
技术领域
本发明属于动物繁殖技术领域，具体说涉及一种用于提高羊新鲜精液长途运输后的精液品质及其受精率的精液稀释保存液及其配制方法。
背景技术
人工授精采用的精液主要有两种，即新鲜精液和冷冻精液，前者常简称为鲜精，后者简称为冻精。为提高种公羊的利用率，便于精液的保存及运输，一些种羊场及家畜改良工作站常制作冻精，用于羊的配种工作。但生产冻精的设备昂贵，保存运输过程需要及时补充液氮，精液解冻技术要求较高，羊冻精的受精率较低等，针对羊冻精的这些缺点，很难普及应用到各养殖场和养殖户；因而使用冻精大大限制了羊人工授精相关技术的推广应用。
目前，市场上拥有大量的羊冻精稀释液及稀释保存液，鲜精稀释液及稀释保存液较少，其主要组份多为葡萄糖、柠檬酸钠、抗菌素，此类精液稀释液配方，存在稀释后精子活力迅速降低，质膜完整率低，顶体完整率低，精子存活时间短等缺点；尤其是精子活率，质膜完整率，顶体完整率在48小时以后都有较大幅度的降低，见表2，也就是说羊的鲜精液保存2～3天后受精率会有大幅度下降，添加抗菌素会导致滥用抗生素，而产生细菌耐药性。
生产一线常常采用生理盐水进行羊的鲜精稀释，这种方法仅可以满足现场采精，现场稀释，即时输精的生产需求。然而，在优质种羊数量有限，精液需求区域面积较广的情况下，就需要把优质鲜精进行长途运输，这就需要延长精液保存时间，有时需要运输达到12h以上，特殊情况下甚至需要保存三四天时间。因此，良好的羊鲜精稀释保存液成为提高人工输精受精率的关键因素。
发明内容
本发明的目的在于提供一种羊含锌精液稀释保存液及其配制方法，用以解决鲜精运输过程中延长精子存活时间，保持精子活力，提高精子顶体完整率，质膜完整率，提高受精率。
本发明的技术方案如下：
羊含锌精液稀释保存液，它由如下原料配制而成：
二水合柠檬酸三钠(C6H5Na3O7·2H2O)1.8～2.9g、果糖(C6H12O6)1.5～2.5g、L-赖氨酸锌(Zn(Lys)2·2H2O)0.5～1.0g、催产素(C43H66N12O12S2)15～25IU、新鲜卵黄离心上清液5～15ml、鲜牛乳离心液100.0ml。
上述配方的进一步方案为：二水合柠檬酸三钠(C6H5Na3O7·2H2O)2.2g、果糖(C6H12O6)1.8g、L-赖氨酸锌(Zn(Lys)2·2H2O)1.0g、催产素(C43H66N12O12S2)20IU、新鲜卵黄离心上清液10ml、鲜牛乳离心液100.0ml。
上述羊含锌精液稀释保存液配制方法由如下步骤组成：
1.1、取鲜牛乳，先经4～8层灭菌纱布过滤，然后于110℃高压灭菌10min，静置至室温，用灭菌镊子将奶皮除净，于4℃3000g离心10min，弃上层漂浮物及下层沉淀，吸取中间层即获得鲜牛乳离心液A；
1.2、准确称取二水合柠檬酸三钠1.8～2.9g，果糖1.5～2.5g，L-赖氨酸锌0.5～1.0g，加入到100.0ml的鲜牛乳离心液A中，于50～60℃水浴加热，并进行顺时针搅拌溶解5～10min，获得溶液B；
1.3、无菌吸取新鲜卵黄液，用灭菌生理盐水进行1:1稀释后，加入到灭菌的离心管中，于4℃5000g离心10min，吸取上清液5～15ml，于20～30℃静置10min，获得卵黄离心上清液C；
1.4、在37℃恒温水浴条件下，将卵黄离心上清液C缓缓加入到溶液B中，混匀获得溶液D；稀释精液后，于4℃恒温进行保存运输；
1.5、在输精前，于上述稀释保存液中加入催产素15～25IU。
本发明的优点在于：
1、本发明采用的牛乳离心液中含有精子运动所需的各种营养物质和微量元素，牛乳离心液中的多种糖类和添加的果糖，可以共同更好地为精子提供能量，来弥补能量消耗，延长精子存活时间。
2、本发明首次在羊精液稀释保存液中添加L-赖氨酸锌，同时补充了精液中L-赖氨酸和锌的含量，改善稀释后的精浆生化成分，有助于精浆的正常代谢，减缓精子死亡，增加精子运动能力，提高精子活力；同时适量的锌可以保护顶体酶免于被水解。
3、催产素除了促进母畜排卵，还有促进母畜生殖道蠕动，有利于精子运行，使精子提前到达受精部位，从而提高受胎率的作用。
4、该羊精液稀释保存液中的卵黄和牛乳采用离心后进行添加，含有抗冷休克因子，具有抗冷冻功能，同时，离心除掉了其他无用或有害的颗粒物质，避免了精子胆固醇的流失。
5、该羊精液稀释保存液均是无菌配制，且不添加任何抗生素，可以在避免滥用抗生素的基础上减少疫病感染和传播。
6、该羊精液稀释保存液成本低廉，制作方法简单，容易配制，稀释保存效果好。
附图说明
图1是本发明配制的工艺流程图。
具体实施方式
由图1可以看到本发明的制作的工艺流程，在下面结合方法的实施例对图1作进一步说明。
实施例1：二水合柠檬酸三钠(C6H5Na3O7·2H2O)2.2g、果糖(C6H12O6)1.8g、L-赖氨酸锌(Zn(Lys)2·2H2O)1.0g、催产素(C43H66N12O12S2)20IU、新鲜卵黄离心上清液10ml、鲜牛乳离心液100.0ml。
上述精液稀释保存液配制方法为：
由图1可以看到，取鲜牛乳，先经8层灭菌纱布过滤，然后于110℃高压灭菌10min，静置至室温，用灭菌镊子将奶皮除净，于4℃3000g离心10min，弃上层漂浮物及下层沉淀，吸取中间层即获得鲜牛乳离心液A。准确称取二水合柠檬酸三钠2.2g，果糖1.8g，L-赖氨酸锌0.8g，加入到100.0ml的鲜牛乳离心液A中，于50～60℃水浴加热，并进行顺时针搅拌溶解5～10min，获得溶液B。无菌吸取新鲜卵黄液，用灭菌生理盐水进行1:1稀释后，加入到灭菌的离心管中，于4℃5000g离心10min，吸取上清液10ml，于20～30℃静置10min，获得卵黄离心上清液C。在37℃恒温水浴条件下，将卵黄离心上清液C缓缓加入到溶液B中，混匀获得溶液D。在输精前，于上述稀释保存液中加入催产素20IU。
实施例2：二水合柠檬酸三钠(C6H5Na3O7·2H2O)2.0g，果糖(C6H12O6)1.5g，L-赖氨酸锌(Zn(Lys)2·2H2O)0.8g，催产素(C43H66N12O12S2)15IU，新鲜卵黄离心上清液12ml，鲜牛乳离心液100.0ml。
实施3：二水合柠檬酸三钠(C6H5Na3O7·2H2O)2.8g，果糖(C6H12O6)2.5g，L-赖氨酸锌(Zn(Lys)2·2H2O)0.5g，催产素(C43H66N12O12S2)25IU，新鲜卵黄离心上清液15ml，鲜牛乳离心液100.0ml。
上述三实施例所用药品的生产厂家如下：
表1药品生产厂家
用实施例1中的羊精液稀释保存液，对健康杜泊种公羊新鲜精液进行3倍稀释后，于4℃保存72h后，用常规方法检测其精液品质，结果精子活率为0.72，顶体完整率为0.88，质膜完整率为0.69见表2。
本发明的精液稀释保存液与现有稀释液进行常规对比试验，结果如下：
表2本发明与现有羊精子稀释保存液效果对比表
本发明的羊精液稀释保存液，突破了诸多关键性技术，首次联合采用牛乳离心液、卵黄离心液、果糖和重要氨基酸螯合锌因子作为配方中的主要成分。可以更好地为精子提供能量、营养、渗透压和温和的生存环境，强化了抗冷刺激作用，从而稳定了精子结构和维持其功能。有助于减缓精子死亡，延长精子存活时间，增加精子运动能力，提高精子活力。本发明不添加任何抗生素，可以在避免滥用抗生素的基础上减少疫病感染和传播。同时，本发明的配制方法为无菌配制，成本低廉，制作方法简单，使用方便，可以大批量生产并推广应用。并适时添加催产素可以促进母羊排卵，使精子提前到达受精部位。本发明可以大大促进人工授精相关技术的推广，提高劳动生产率和经济效益，具有广泛的社会效益和开发价值。

Claims (3)

1.一种羊含锌精液稀释保存液，其特征在于：它由如下原料配制而成：
二水合柠檬酸三钠1.8～2.9g、果糖1.5～2.5g、L-赖氨酸锌0.5～1.0g、催产素15～25IU、新鲜卵黄离心上清液5～15ml、鲜牛乳离心液100.0ml。
2.根据权利要求1所述的羊含锌精液稀释保存液，其特征在于：它由如下原料配制而成：
二水合柠檬酸三钠2.2g、果糖1.8g、L-赖氨酸锌1.0g、催产素20IU、新鲜卵黄离心上清液10ml、鲜牛乳离心液100.0ml。
3.权利要求1所述的羊含锌精液稀释保存液的配制方法，其特征在于：由如下步骤组成：
1.1、取鲜牛乳，先经4～8层灭菌纱布过滤，然后于110℃高压灭菌10min，静置至室温，用灭菌镊子将奶皮除净，于4℃3000g离心10min，弃上层漂浮物及下层沉淀，吸取中间层即获得鲜牛乳离心液A；
1.2、准确称取二水合柠檬酸三钠1.8～2.9g，果糖1.5～2.5g，L-赖氨酸锌0.5～1.0g，加入到100.0ml的鲜牛乳离心液A中，于50～60℃水浴加热，并进行顺时针搅拌溶解5～10min，获得溶液B；
1.3、无菌吸取新鲜卵黄液，用灭菌生理盐水进行1:1稀释后，加入到灭菌的离心管中，于4℃5000g离心10min，吸取上清液5～15ml，于20～30℃静置10min，获得卵黄离心上清液C；
1.4、在37℃恒温水浴条件下，将卵黄离心上清液C缓缓加入到溶液B中，混匀获得溶液D；稀释精液后，于4℃恒温进行保存运输；
1.5、在输精前，于上述稀释保存液中加入催产素15～25IU。
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