JP2013528401A - 透析された血清を有する心筋細胞培地 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2010年6月18日に提出された米国出願第61/356,136号及び2010年6月21日に提出された米国出願第61/356,916号に基づく優先権を主張し、その全開示は参照によりその全体が但し書きなしに本明細書に明確に組み込まれる。
本出願は概して細胞培養の分野に関する。特に、それは心筋細胞維持及び調節に関する。
次の参照文献は、それらが本明細書に示される参照文献を補足する、典型的な手順又は他の詳細を提供できる程度に、参照により本明細書に明確に組込まれる。
本発明は、無血清又は透析された血清含有培地が、健康な心筋細胞集団を維持しながら、心筋細胞集団中の非心筋細胞の増殖を阻止するよう企画され得る発見に一部、基づかれる。実質的に純粋な心筋細胞集団内でさえ、低百分率の汚染性細胞が存在する。標準の血清含有培養条件下で、いくらかの割合の汚染性細胞が心筋細胞よりも早い速度で増殖し、そして完全細胞集団を圧倒することができる。いくつかの態様によれば、本発明の培地条件はまた、心筋細胞のいくつかの機能的特性も改善することができる。
II.定義
IV.心筋細胞調製
V.多分化能性幹細胞の源
A.胚幹細胞
B.誘発された多分化能性幹細胞
C.体細胞核トランスファーに由来する胚幹細胞
VI.心筋細胞の特徴化
VII.細胞の遺伝子変更
VIII.培養された心筋細胞の使用
実施例1−培地の配合及び調製
98.4% DMEM (無グルコース) Invitrogen −11966−025
10mMのガラクトース−Sigma G5388
1 mMのピルビン酸ナトリウム−Sigma P4562
5mMのクレアチン−Sigma 27890
2mMのクレアチン−Sigma C0283
5mMのタウリン− Sigma T8691
2.5μMのインスリン−Sigma 19278
0.2%のウシ胎児血清−Sigma A9576
1mMのL−グルタミン− Invitrogen 21051
1%DPBS− Invitrogen 14190
0.1mMの L−グルタミン−Invitrogen 21051
7 μLのβ−メルカプトエタノール−Sigma M7522。
100mlのDMEM−グルコース−ピルベート中、50mMのクレオチンの調製。
90mlのDMEM−グルコース−ピルベートに0.656gのクレアチンを添加し、そしてさらに添加し、全体を100mlにする。
25mlのDMEM −グルコース−ピルベート中、 500mMのカルニチンの調製。20mlのDMEM −グルコース−ピルベートに2.47lgのカルニチンを添加し、そしてさらに添加し、全体を25mlにする。
50mlのDMEM −グルコース−ピルベート中、 250mMのタウリンの調製。45mlのDMEM −グルコース−ピルベートに1.564gのタウリンを添加し、そしてさらに添加し、全体を50mlにする。
10 mg/ml (又は25 mM) 原液; 使用準備済み。
DPBS中、30%; 使用準備済み。
0.146gの L−グルタミン− Invitrogen21051。
10mlの無Ca/Mg PBS − Invitrogen14190。
7μlの β−メルカプトエタノール − Sigma M7522。
90% DMEM (無グルコース) Invitrogen −11966−025;
10%透析されたウシ胎児血清−Millipore SH30079;
10mMのガラクトース− Sigma G5388;
1mM のピルビン酸ナトリウム−Sigma P4562。
実施例2−心筋細胞純度を維持する培地
細胞を、凍結保存及び最終使用の前、流動細胞計測により測定して95%超のRFP陽性まで精製した。次に、細胞を融解し、培養容器中に接種し、そして実験のために有用であると判断する前に48時間、回復させた。
したがって本発明は以下の項目を提供する:
(項目1)
少なくとも90%の心筋細胞の細胞集団、及び血清含有培地を含み、上記血清又は培地は低分子量分子を除去するために処理されている、組成物。
(項目2)
上記培地が透析された血清を含む、項目1記載の組成物。
(項目3)
上記培地が、約10%〜約75%の範囲で透析された血清を含む、項目1〜2のいずれか1項記載の組成物。
(項目4)
上記培地が、少なくとも25%の透析された血清を含む、項目1〜3のいずれか1項記載の組成物。
(項目5)
上記培地が、少なくとも25%の透析された血清を含む、項目1〜4のいずれか1項記載の組成物。
(項目6)
上記培地が、約55%の透析された血清を含む、項目1〜5のいずれか1項記載の組成物。
(項目7)
上記血清又は培地が、多くとも10kDの分子量を有する低分子量分子を除去するために処理されている、項目1〜6のいずれか1項記載の組成物。
(項目8)
上記血清又は培地が、多くとも10kDの分子量を有する低分子量分子を実質的に有さない、項目1〜7のいずれか1項記載の組成物。
(項目9)
上記培地がグルコースを含まない、項目1〜8のいずれか1項記載の組成物。
(項目10)
上記培地が約1〜20mMのガラクトースを含む、項目1〜9のいずれか1項記載の組成物。
(項目11)
上記培地が約0.1〜10mMのピルベート又はピルビン酸を含む、項目1〜10のいずれか1項記載の組成物。
(項目12)
少なくとも95%の心筋細胞の細胞集団を含む、項目1〜11のいずれか1項記載の組成物。
(項目13)
上記心筋細胞が、心筋細胞−特異的プロモーターの制御下で少なくとも1つの選択可能を又はスクリーン可能トランスジーンを発現する、項目1〜12のいずれか1項記載の組成物。
(項目14)
上記集団が線維芽細胞又は末分化多分化能性幹細胞を実質的に有さない、項目1〜13のいずれか1項記載の組成物。
(項目15)
上記心筋細胞がヒト心筋細胞である、項目1〜14のいずれか1項記載の組成物。
(項目16)
上記心筋細胞が凍結保存された心筋細胞である、項目1〜15のいずれか1項記載の組成物。
(項目17)
心筋細胞集団の純度の維持方法であって、
a)項目1〜16のいずれか1項記載の第1組成物、又は少なくとも90%の心筋細胞の第2細胞集団及び血清を実質的に有さない培地を含む第2組成物を入手し;そして
b)上記第1又は第2組成物を少なくとも7日間、培養することを含む、ここで上記第1又は第2組成物が上記培養下で心筋細胞の純度を維持する、方法。
(項目18)
上記第1又は第2組成物中の心筋細胞と1つの化合物とを接触させ、そして心筋細胞の拍動周波数及び/又はフィールドポテンシャル持続時間を測定することをさらに含む、項目17記載の方法。
(項目19)
上記化合物が、心筋細胞のイオンチャネル活動、拍動周波数及び/又はフィールドポテンシャル持続時間を調節する、項目17又は18記載の方法。
(項目20)
拍動周波数を調節する上記化合物がテトロドトキシン又はイノプロテレノールである、項目17〜19のいずれか1項記載の方法。
(項目21)
フィールドポテンシャル持続時間を調節する上記化合物がE4031又はテルフェナジンである、項目17〜19のいずれか1項記載の方法。
(項目22)
上記培養の前に、上記第1又は第2組成物中の心筋細胞を凍結保存することをさらに含む、項目17〜21のいずれか1項記載の方法。
(項目23)
上記第1又は第2組成物中の心筋細胞を入手するために、in vitroで、幹細胞から分化された又は非心筋細胞から分化転換された心筋細胞を精製することをさらに含む、項目17〜22のいずれか1項記載の方法。
(項目24)
精製された心筋細胞の集団の純度の維持方法であって、
a)精製された心筋細胞の集団を入手し;そして
b)(i)血清を実質的に有さないか;又は
(ii)血清を含む培地(上記血清又は培地は低分子量分子を除去するために処理されている)において上記集団を少なくとも1週間、培養すること含み、ここで上記集団が心筋細胞の純度を維持する、方法。
(項目25)
心筋細胞の電気活性の調節方法であって、(i)血清を実質的に有さないか;又は(ii)血清含む培地(上記血清又は培地は低分子量分子を除去するために処理されている)において心筋細胞を培養することを含み、ここで上記培地が心筋細胞の拍動周波数を高め、そして/又は心筋細胞の拍動率振動(beating rate oscillation)を低める、方法。
(項目26)
心筋細胞に対する1つの化合物の効果の試験方法であって、a)心筋細胞と1つの化合物とを接触させ、ここで上記心筋細胞は、(i)血清を実質的に有さないか;又は(ii)血清を含む培地(上記血清又は培地は低分子量分子を除去するために処理されている)において培養され;そしてb)上記心筋細胞の拍動周波数及び/又はフィールドポテンシャル持続時間を測定することを含む方法。
(項目27)
上記培地が血清を実質的に有さない、項目24〜26のいずれか1項記載の方法。
(項目28)
上記培地が化学的に定義される、項目24〜27のいずれか1項記載の方法。
(項目29)
上記培地が、高エネルギーリン酸結合、アシル基担体分子、又は心筋細胞カルシウムチャネルモジュレーターを形成できる化合物さらに含む、項目24〜28のいずれか1項記載の方法。
(項目30)
上記培地が、クレアチン、カルニチン又はタウリンを含む、項目24〜29のいずれか1項記載の方法。
(項目31)
上記培地がインスリンをさらに含む、項目24〜30のいずれか1項記載の方法。
(項目32)
上記培地が血清を含み、ここで上記血清又は培地は低分子量分子を除去するために処理されている、項目24〜31のいずれか1項記載の方法。
(項目33)
上記血清又は培地が、低分子量血清成長因子を実質的に有さない、項目24〜32のいずれか1項記載の方法。
(項目34)
上記培地が透析された血清を含む、項目24〜33のいずれか1項記載の方法。
(項目35)
上記培地が血清を含み、そして上記血清又は培地が多くとも10kDの分子量を有する分子を除去するために処理されている、項目24〜34のいずれか1項記載の方法。
(項目36)
上記培地がグルコースを含む、項目24〜35のいずれか1項記載の方法。
(項目37)
上記培地が5.5mMまでのグルコースを含む、項目24〜36のいずれか1項記載の方法。
(項目38)
上記培地が少なくとも20μMのグルコースを含む、項目24〜37のいずれか1項記載の方法。
(項目39)
上記培地がグルコースを実質的に有さない、項目24〜35のいずれか1項記載の方法。
(項目40)
上記培地が非グルコースエネルギー源を含む、項目24〜39のいずれか1項記載の方法。
(項目41)
上記培地が、ガラクトース、フルクトース、マンノース、スクロース、マルトース、ラクトース、トレハロース、ツラノース、ピルベート、ピルビン酸、グルタミン、グルタミン酸、アスパルテート、アスパラギン酸、ラクテート、乳酸又はその組合せを含む、項目24〜40のいずれか1項記載の方法。
(項目42)
上記培地がピルベート又はピルビン酸を含む、項目24〜41のいずれか1項記載の方法。
(項目43)
上記培地が、約0.1〜10mMのピルベート又はピルビン酸を含む、項目24〜42のいずれか1項記載の方法。
(項目44)
上記培地がガラクトースを含む、項目24〜43のいずれか1項記載の方法。
(項目45)
上記培地が、約1〜20mMのガラクトースを含む、項目24〜44のいずれか1項記載の方法。
(項目46)
上記精製された心筋細胞が、少なくとも1つの選択可能又はスクリーン可能トランスジーンを発現する、項目24〜45のいずれか1項記載の方法。
(項目47)
上記トランスジーンが、心筋細胞−特異的プロモーターの制御下で選択可能又はスクリーン可能マーカーを含む、項目46記載の方法。
(項目48)
上記心筋細胞−特異的プロモーターが、MYH6(αミオシンH鎖)遺伝子のプロモーターである。項目47記載の方法。
(項目49)
上記精製された心筋細胞の集団が上記トランスジーンの発現に基づいて精製される、項目46〜48のいずれか1項記載の方法。
(項目50)
上記集団中の精製された心筋細胞の純度が、上記トランスジーンの発現に基づく、項目46〜49のいずれか1項記載の方法。
(項目51)
上記心筋細胞の集団が、上記培養の前に保存されている、項目24〜50のいずれか1項記載の方法。
(項目52)
上記心筋細胞がヒト心筋細胞である、項目24〜51のいずれか1項記載の方法。
(項目53)
上記心筋細胞が、in vitroで幹細胞から分化されるか、又は非心筋細胞から分化転換される、項目24〜52のいずれか1項記載の方法。
(項目54)
上記幹細胞が多分化能性幹細胞である、項目53記載の方法。
(項目55)
上記多分化能性細胞が、胚幹細胞、誘発された多分化能性幹細胞、又は体細胞核トランスファーにより誘導された多分化能性幹細胞である。項目54記載の方法。
(項目56)
上記集団が、10%までの非心筋細胞を含む、項目24〜55のいずれか1項記載の方法。
(項目57)
上記集団が、5%までの非心筋細胞を含む、項目24〜56のいずれか1項記載の方法。
(項目58)
上記集団が非心筋細胞を実質的に有さない、項目24〜57のいずれか1項記載の方法。
(項目59)
上記非心筋細胞が、線維芽細胞又は末分化細胞を含む、項目56〜58のいずれか1項記載の方法。
(項目60)
上記培地が、非心筋細胞の増殖を阻害する、項目24〜59のいずれか1項記載の方法。
(項目61)
上記培地が培養下で少なくとも又は約6週間、上記集団中の心筋細胞の純度を維持する、項目24〜60のいずれか1項記載の方法。
(項目62)
上記培地が培養下で少なくとも又は約7ヶ月間、上記集団中の心筋細胞の純度を維持する、項目24〜61のいずれか1項記載の方法。
(項目63)
上記心筋細胞が、細胞生存性又は機能を調節する化合物と接触する、項目24〜62のいずれか1項記載の方法。
(項目64)
上記化合物が、細胞イオンチャネル活動を調節する、項目63記載の方法。
(項目65)
上記化合物が、拍動周波数及び/又はフィールドポテンシャル持続時間を調節する、項目64記載の方法。
(項目66)
上記心筋細胞が、拍動周波数を調節する化合物と接触する、項目65記載の方法。
(項目67)
上記化合物がテトロドトキシン又はイソプロテレノールである、項目66記載の方法。
(項目68)
上記心筋細胞が、フィールドポテンシャル持続時間を調節する化合物と接触する、項目65記載の方法。
(項目69)
上記化合物がE4031又はテルフェナジンである、項目68記載の方法。
(項目70)
心筋細胞集団、及びガラクトース、ピルベートを含んで成り、そして血清を実質的に有さない培地を含む組成物。
(項目71)
心筋細胞集団、及びガラクトース、ピルベート及び透析された血清を含む培地を含む組成物。
(項目72)
上記培地がグルコースを含む、項目70又は71記載の組成物。
(項目73)
上記培地がグルコースを実質的に有さない、項目70又は71記載の組成物。
(項目74)
上記心筋細胞集団が10%以下の非心筋細胞を含む、項目70〜73のいずれか1項記載の組成物。
(項目75)
上記心筋細胞が非心筋細胞を実質的に有さない、項目70〜74のいずれか1項記載の組成物。
(項目76)
上記心筋細胞が精製された心筋細胞を含む、項目70〜75のいずれか1項記載の組成物。
Claims (76)
- 少なくとも90%の心筋細胞の細胞集団、及び血清含有培地を含み、前記血清又は培地は低分子量分子を除去するために処理されている、組成物。
- 前記培地が透析された血清を含む、請求項1記載の組成物。
- 前記培地が、約10%〜約75%の範囲で透析された血清を含む、請求項1〜2のいずれか1項記載の組成物。
- 前記培地が、少なくとも25%の透析された血清を含む、請求項1〜3のいずれか1項記載の組成物。
- 前記培地が、少なくとも25%の透析された血清を含む、請求項1〜4のいずれか1項記載の組成物。
- 前記培地が、約55%の透析された血清を含む、請求項1〜5のいずれか1項記載の組成物。
- 前記血清又は培地が、多くとも10kDの分子量を有する低分子量分子を除去するために処理されている、請求項1〜6のいずれか1項記載の組成物。
- 前記血清又は培地が、多くとも10kDの分子量を有する低分子量分子を実質的に有さない、請求項1〜7のいずれか1項記載の組成物。
- 前記培地がグルコースを含まない、請求項1〜8のいずれか1項記載の組成物。
- 前記培地が約1〜20mMのガラクトースを含む、請求項1〜9のいずれか1項記載の組成物。
- 前記培地が約0.1〜10mMのピルベート又はピルビン酸を含む、請求項1〜10のいずれか1項記載の組成物。
- 少なくとも95%の心筋細胞の細胞集団を含む、請求項1〜11のいずれか1項記載の組成物。
- 前記心筋細胞が、心筋細胞−特異的プロモーターの制御下で少なくとも1つの選択可能を又はスクリーン可能トランスジーンを発現する、請求項1〜12のいずれか1項記載の組成物。
- 前記集団が線維芽細胞又は末分化多分化能性幹細胞を実質的に有さない、請求項1〜13のいずれか1項記載の組成物。
- 前記心筋細胞がヒト心筋細胞である、請求項1〜14のいずれか1項記載の組成物。
- 前記心筋細胞が凍結保存された心筋細胞である、請求項1〜15のいずれか1項記載の組成物。
- 心筋細胞集団の純度の維持方法であって、
a)請求項1〜16のいずれか1項記載の第1組成物、又は少なくとも90%の心筋細胞の第2細胞集団及び血清を実質的に有さない培地を含む第2組成物を入手し;そして
b)前記第1又は第2組成物を少なくとも7日間、培養することを含む、ここで前記第1又は第2組成物が前記培養下で心筋細胞の純度を維持する、方法。 - 前記第1又は第2組成物中の心筋細胞と1つの化合物とを接触させ、そして心筋細胞の拍動周波数及び/又はフィールドポテンシャル持続時間を測定することをさらに含む、請求項17記載の方法。
- 前記化合物が、心筋細胞のイオンチャネル活動、拍動周波数及び/又はフィールドポテンシャル持続時間を調節する、請求項17又は18記載の方法。
- 拍動周波数を調節する前記化合物がテトロドトキシン又はイノプロテレノールである、請求項17〜19のいずれか1項記載の方法。
- フィールドポテンシャル持続時間を調節する前記化合物がE4031又はテルフェナジンである、請求項17〜19のいずれか1項記載の方法。
- 前記培養の前に、前記第1又は第2組成物中の心筋細胞を凍結保存することをさらに含む、請求項17〜21のいずれか1項記載の方法。
- 前記第1又は第2組成物中の心筋細胞を入手するために、in vitroで、幹細胞から分化された又は非心筋細胞から分化転換された心筋細胞を精製することをさらに含む、請求項17〜22のいずれか1項記載の方法。
- 精製された心筋細胞の集団の純度の維持方法であって、
a)精製された心筋細胞の集団を入手し;そして
b)(i)血清を実質的に有さないか;又は
(ii)血清を含む培地(前記血清又は培地は低分子量分子を除去するために処理されている)において前記集団を少なくとも1週間、培養すること含み、ここで前記集団が心筋細胞の純度を維持する、方法。 - 心筋細胞の電気活性の調節方法であって、(i)血清を実質的に有さないか;又は(ii)血清含む培地(前記血清又は培地は低分子量分子を除去するために処理されている)において心筋細胞を培養することを含み、ここで前記培地が心筋細胞の拍動周波数を高め、そして/又は心筋細胞の拍動率振動(beating rate oscillation)を低める、方法。
- 心筋細胞に対する1つの化合物の効果の試験方法であって、a)心筋細胞と1つの化合物とを接触させ、ここで前記心筋細胞は、(i)血清を実質的に有さないか;又は(ii)血清を含む培地(前記血清又は培地は低分子量分子を除去するために処理されている)において培養され;そしてb)前記心筋細胞の拍動周波数及び/又はフィールドポテンシャル持続時間を測定することを含む方法。
- 前記培地が血清を実質的に有さない、請求項24〜26のいずれか1項記載の方法。
- 前記培地が化学的に定義される、請求項24〜27のいずれか1項記載の方法。
- 前記培地が、高エネルギーリン酸結合、アシル基担体分子、又は心筋細胞カルシウムチャネルモジュレーターを形成できる化合物さらに含む、請求項24〜28のいずれか1項記載の方法。
- 前記培地が、クレアチン、カルニチン又はタウリンを含む、請求項24〜29のいずれか1項記載の方法。
- 前記培地がインスリンをさらに含む、請求項24〜30のいずれか1項記載の方法。
- 前記培地が血清を含み、ここで前記血清又は培地は低分子量分子を除去するために処理されている、請求項24〜31のいずれか1項記載の方法。
- 前記血清又は培地が、低分子量血清成長因子を実質的に有さない、請求項24〜32のいずれか1項記載の方法。
- 前記培地が透析された血清を含む、請求項24〜33のいずれか1項記載の方法。
- 前記培地が血清を含み、そして前記血清又は培地が多くとも10kDの分子量を有する分子を除去するために処理されている、請求項24〜34のいずれか1項記載の方法。
- 前記培地がグルコースを含む、請求項24〜35のいずれか1項記載の方法。
- 前記培地が5.5mMまでのグルコースを含む、請求項24〜36のいずれか1項記載の方法。
- 前記培地が少なくとも20μMのグルコースを含む、請求項24〜37のいずれか1項記載の方法。
- 前記培地がグルコースを実質的に有さない、請求項24〜35のいずれか1項記載の方法。
- 前記培地が非グルコースエネルギー源を含む、請求項24〜39のいずれか1項記載の方法。
- 前記培地が、ガラクトース、フルクトース、マンノース、スクロース、マルトース、ラクトース、トレハロース、ツラノース、ピルベート、ピルビン酸、グルタミン、グルタミン酸、アスパルテート、アスパラギン酸、ラクテート、乳酸又はその組合せを含む、請求項24〜40のいずれか1項記載の方法。
- 前記培地がピルベート又はピルビン酸を含む、請求項24〜41のいずれか1項記載の方法。
- 前記培地が、約0.1〜10mMのピルベート又はピルビン酸を含む、請求項24〜42のいずれか1項記載の方法。
- 前記培地がガラクトースを含む、請求項24〜43のいずれか1項記載の方法。
- 前記培地が、約1〜20mMのガラクトースを含む、請求項24〜44のいずれか1項記載の方法。
- 前記精製された心筋細胞が、少なくとも1つの選択可能又はスクリーン可能トランスジーンを発現する、請求項24〜45のいずれか1項記載の方法。
- 前記トランスジーンが、心筋細胞−特異的プロモーターの制御下で選択可能又はスクリーン可能マーカーを含む、請求項46記載の方法。
- 前記心筋細胞−特異的プロモーターが、MYH6(αミオシンH鎖)遺伝子のプロモーターである。請求項47記載の方法。
- 前記精製された心筋細胞の集団が前記トランスジーンの発現に基づいて精製される、請求項46〜48のいずれか1項記載の方法。
- 前記集団中の精製された心筋細胞の純度が、前記トランスジーンの発現に基づく、請求項46〜49のいずれか1項記載の方法。
- 前記心筋細胞の集団が、前記培養の前に保存されている、請求項24〜50のいずれか1項記載の方法。
- 前記心筋細胞がヒト心筋細胞である、請求項24〜51のいずれか1項記載の方法。
- 前記心筋細胞が、in vitroで幹細胞から分化されるか、又は非心筋細胞から分化転換される、請求項24〜52のいずれか1項記載の方法。
- 前記幹細胞が多分化能性幹細胞である、請求項53記載の方法。
- 前記多分化能性細胞が、胚幹細胞、誘発された多分化能性幹細胞、又は体細胞核トランスファーにより誘導された多分化能性幹細胞である。請求項54記載の方法。
- 前記集団が、10%までの非心筋細胞を含む、請求項24〜55のいずれか1項記載の方法。
- 前記集団が、5%までの非心筋細胞を含む、請求項24〜56のいずれか1項記載の方法。
- 前記集団が非心筋細胞を実質的に有さない、請求項24〜57のいずれか1項記載の方法。
- 前記非心筋細胞が、線維芽細胞又は末分化細胞を含む、請求項56〜58のいずれか1項記載の方法。
- 前記培地が、非心筋細胞の増殖を阻害する、請求項24〜59のいずれか1項記載の方法。
- 前記培地が培養下で少なくとも又は約6週間、前記集団中の心筋細胞の純度を維持する、請求項24〜60のいずれか1項記載の方法。
- 前記培地が培養下で少なくとも又は約7ヶ月間、前記集団中の心筋細胞の純度を維持する、請求項24〜61のいずれか1項記載の方法。
- 前記心筋細胞が、細胞生存性又は機能を調節する化合物と接触する、請求項24〜62のいずれか1項記載の方法。
- 前記化合物が、細胞イオンチャネル活動を調節する、請求項63記載の方法。
- 前記化合物が、拍動周波数及び/又はフィールドポテンシャル持続時間を調節する、請求項64記載の方法。
- 前記心筋細胞が、拍動周波数を調節する化合物と接触する、請求項65記載の方法。
- 前記化合物がテトロドトキシン又はイソプロテレノールである、請求項66記載の方法。
- 前記心筋細胞が、フィールドポテンシャル持続時間を調節する化合物と接触する、請求項65記載の方法。
- 前記化合物がE4031又はテルフェナジンである、請求項68記載の方法。
- 心筋細胞集団、及びガラクトース、ピルベートを含んで成り、そして血清を実質的に有さない培地を含む組成物。
- 心筋細胞集団、及びガラクトース、ピルベート及び透析された血清を含む培地を含む組成物。
- 前記培地がグルコースを含む、請求項70又は71記載の組成物。
- 前記培地がグルコースを実質的に有さない、請求項70又は71記載の組成物。
- 前記心筋細胞集団が10%以下の非心筋細胞を含む、請求項70〜73のいずれか1項記載の組成物。
- 前記心筋細胞が非心筋細胞を実質的に有さない、請求項70〜74のいずれか1項記載の組成物。
- 前記心筋細胞が精製された心筋細胞を含む、請求項70〜75のいずれか1項記載の組成物。
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