JP2013504329A - ハンチントン発現の修飾 - Google Patents
ハンチントン発現の修飾 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2013504329A JP2013504329A JP2012528949A JP2012528949A JP2013504329A JP 2013504329 A JP2013504329 A JP 2013504329A JP 2012528949 A JP2012528949 A JP 2012528949A JP 2012528949 A JP2012528949 A JP 2012528949A JP 2013504329 A JP2013504329 A JP 2013504329A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- compound
- isis
- huntington
- seq
- disease
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/7125—Nucleic acids or oligonucleotides having modified internucleoside linkage, i.e. other than 3'-5' phosphodiesters
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
- A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
- A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/20—Hypnotics; Sedatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/22—Anxiolytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/24—Antidepressants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
- C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/11—Antisense
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/11—Antisense
- C12N2310/113—Antisense targeting other non-coding nucleic acids, e.g. antagomirs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/315—Phosphorothioates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/321—2'-O-R Modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/33—Chemical structure of the base
- C12N2310/334—Modified C
- C12N2310/3341—5-Methylcytosine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
- C12N2310/341—Gapmers, i.e. of the type ===---===
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
- C12N2310/345—Spatial arrangement of the modifications having at least two different backbone modifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
- C12N2310/346—Spatial arrangement of the modifications having a combination of backbone and sugar modifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/352—Nature of the modification linked to the nucleic acid via a carbon atom
- C12N2310/3525—MOE, methoxyethoxy
Abstract
【選択図】 なし
Description
本件出願は、電子フォーマットの配列表とともに出願される。配列表は、2010年9月8日に作成された456 Kbのサイズの「BIOL0113WOSEQ.txt」という名前のファイルとして提供される。配列表の電子フォーマット中の情報は、その全体を参照により本明細書中に援用される.
発明の分野
動物におけるハンチントンmRNAおよびタンパク質発現を現象させるための方法、化合物、および組成物が本明細書中で提供される。そのような方法、化合物、および組成物は、たとえば、ハンチントン病を治療し、予防し、または改善するために有用である。
視床腹部において(Byers, R.K. et al., Neurology 1973, 23:561-569)、観察される。
具体的な定義が提示されない場合、本明細書中で記載される、関連して使用される用語体系、そしてその手法および技術、分析化学、合成有機化学、そして医薬および製薬化学は、当該技術分野において周知のものであり、そして一般的に使用されるものである。標準的な技術は、化学合成、および化学解析のために使用することができる。許容される場合、すべての特許、出願、公開された出願およびその他の刊行物、GENBANKアクセッションNumbersおよびNational Center for Biotechnology Information(NCBI)などのデータベースを介して得ることができる関連する配列情報や本明細書中の開示全体を参照したその他のデータは、本明細書中で検討された文献の部分、ならびにその全体を参照することにより援用される。
“2'-O-メトキシエチル”(同様に2'-MOEおよび2'-O(CH2)2-OCH3)は、フロシル環の2'位のO-メトキシ-エチル修飾のことをいう。2'-O-メトキシエチル修飾糖は、修飾糖である。
“5-メチルシトシン”は、5'位に結合されたメチル基により修飾されたシトシンを意味する。5-メチルシトシンは、修飾核酸塩基である。
“軽減”は、関連する疾患、症状、または状態少なくとも1つの指標、兆候、または症状を少なくすることをいう。指標の重大性は、主観的測定または客観的測定により決定することができ、当業者には公知である。
“アンチセンス阻害”は、アンチセンス化合物の非存在下での標的核酸レベルまたは標的タンパク質レベルと比較して、標的核酸と相補的なアンチセンス化合物の存在下での標的核酸レベルまたは標的タンパク質レベルが減少することを意味する。
“2環式核酸”または“BNA”は、ヌクレオシドまたはヌクレオチドを意味し、ここでヌクレオシドまたはヌクレオチドのフラノース部分に、フラノース環上の2つの炭素原子を接続し、それにより2環式環系を形成するブリッジが含まれる。
“化学的に異なる領域”は、ある場合には同一のアンチセンス化合物の別の領域とは化学的に異なる、アンチセンス化合物の領域のことをいう。たとえば、2'-O-メトキシエチルヌクレオチドを有する領域は、2'-O-メトキシエチル修飾を有さないヌクレオチドを有する領域とは化学的に異なる。
“同時投与”は、2つまたはそれ以上の医薬剤を個体に対して投与することを意味する。2つまたはそれ以上の医薬剤は、単一の医薬組成物中の物であっても、または別個の医薬組成物中のものであってもよい。2つまたはそれ以上の医薬剤のそれぞれを、同一のまたは異なる投与経路を介して投与することができる。同時投与は、同時並行的な投与または連続的な投与を意味する。
“隣接する核酸塩基”は、互いにすぐとなりあう核酸塩基を意味する。
“すぐに隣接する”は、すぐに隣接する要素間に、介在性の要素が存在しないことを意味する。
“ヌクレオシド間結合”は、ヌクレオシド間の化学的結合のことをいう。
“連結したヌクレオシド”は、互いに結合された隣接するヌクレオシドのことを意味する。
“修飾ヌクレオシド間結合”は、天然に生じるヌクレオシド間結合(すなわち、ホスホジエステルヌクレオシド間結合)からの置換またはいずれかの変化をいう。
“修飾糖”は、天然糖からの置換または変化のことをいう。
“天然に生じるヌクレオシド間結合”は、3'から5'へのホスホジエステル結合を意味する。
“核酸”は、モノマーヌクレオチドから構成される分子をいう。核酸には、リボ核酸(RNA)、デオキシリボ核酸(DNA)、一本鎖核酸、二本鎖核酸、低分子干渉リボ核酸(siRNA)、およびmicroRNA(miRNA)が含まれる。核酸はまた、単一分子内に、これらの要素の組み合わせを含んでもよい。
“核酸塩基配列”は、いずれかの糖、結合、または核酸塩基修飾とは無関係な隣接した核酸塩基の順番を意味する。
“ヌクレオチド”は、ヌクレオシドの糖部分に共有結合したホスホネート基を有するヌクレオシドを意味する。
“非経口投与”は、注射または注入を介した投与を意味する。非経口投与には、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、腹腔内投与、または頭蓋内投与、たとえば、くも膜下腔投与または脳室内投与が含まれる。投与は、連続的、または慢性的、または短時間、または断続的であってもよい。
“医薬組成物”は、個体に対して投与するために適切な物質の混合物を意味する。たとえば、医薬組成物は、1またはそれ以上の活性医薬剤および滅菌水溶液を含んでもよい。
“特異的にハイブリダイズ可能”は、アンチセンスオリゴヌクレオチドと標的核酸との間で十分な程度の相補性を有して所望の作用を誘導するが、一方特異的な結合が望まれる条件下、すなわち、in vivoでのアッセイおよび治療処置の場合の生理学的条件下、非-標的核酸に対して最小の作用しか示さないかまたは作用を示さない、アンチセンス化合物のことをいう。
“標的セグメント”は、アンチセンス化合物が標的とする標的核酸のヌクレオチド配列のことを意味する。“5'標的部位”は、標的セグメントの最も5'側のヌクレオチドのことをいう。“3'標的部位”は、標的セグメントの最も3'側のヌクレオチドのことをいう。
“治療する”は、医薬組成物を投与して、疾患、障害、または症状の変化または改善をもたらすことをいう。
特定の態様は、ハンチントン発現を阻害するための方法、化合物、および組成物を提供する。
特定の態様において、修飾されたオリゴヌクレオチドは、20個の連結したヌクレオシドからなる。
特定の態様において、化合物の修飾されたオリゴヌクレオチドは、以下のもの;
(i)連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップ部分;
(ii)連結したヌクレオシドからなる5'ウィング部分;
(iii)連結したヌクレオシドからなる3'ウィング部分;
を含み、ここでギャップ部分が5'ウィング部分と3'ウィング部分との間に位置し、そしてそれぞれのウィング部分のそれぞれのヌクレオシドが修飾糖を含む。
(i)10個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップ部分;
(ii)5個の連結したヌクレオシドからなる5'ウィング部分;
(iii)5個の連結したヌクレオシドからなる3'ウィング部分;
を含み、ここでギャップ部分が5'ウィング部分と3'ウィング部分の間にそれらとすぐに隣接するように位置し、そしてそれぞれのウィング部分のそれぞれのヌクレオシドが2'-O-メトキシエチル糖を含み;そしてそれぞれのヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合である。
(i)8個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップ部分;
(ii)6個の連結したヌクレオシドからなる5'ウィング部分;
(iii)6個の連結したヌクレオシドからなる3'ウィング部分;
を含み、ここでギャップ部分が5'ウィング部分と3'ウィング部分との間にそれらとすぐに隣接するように位置し、それぞれのウィング部分のそれぞれのヌクレオシドが2'-O-メトキシエチル糖を含み;そしてそれぞれのヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合である。
(i)8個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップ部分;
(ii)5個の連結したヌクレオシドからなる5'ウィング部分;
(iii)5個の連結したヌクレオシドからなる3'ウィング部分;
を含み、ここでギャップ部分が5'ウィング部分と3'ウィング部分との間にそれらとすぐに隣接するように位置し、それぞれのウィング部分のそれぞれのヌクレオシドが2'-O-メトキシエチル糖を含み;そしてそれぞれのヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合を含む。
特定の態様は、本明細書中で記載された化合物を動物に対して投与することを含む方法を提供する。特定の態様において、この方法は、動物に対して、SEQ ID NOs: 6、9、10、11、12、13、14、15、18、19、20、21、23、24、25、26、27、28、29、30、32、33、35、36、10、11、12、13、18、22および32に記載された核酸塩基配列の中から選択された核酸塩基配列の少なくとも8個の隣接した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する12〜30個の連結したヌクレオシド修飾されたオリゴヌクレオチドを投与することを含む。
特定の態様において、投与することにより、本明細書中において記載されるハンチントン病の進行を予防し、治療し、軽減しまたは遅らせる。
特定の態様において、化合物および第2の薬剤は、付随して投与される。
特定の態様において、投与することは、非経口投与である。特定の態様において、非経口投与は、頭蓋内投与である。特定の態様において、頭蓋内投与は、くも膜下投与または脳室内投与である。
特定の態様は、ハンチントン病を治療し、軽減し、または予防するための医薬の製造における、本明細書中において記載された化合物の使用を提供する。
(i)本明細書中で記載された化合物;およびその代わりに
(ii)本明細書中において記載される追加の薬剤または治療法;
を含むキットを提供する。
オリゴマー化合物には、オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシド、オリゴヌクレオチド類似体、オリゴヌクレオチド模倣体、アンチセンス化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド、およびsiRNAが含まれるが、これらには限定されない。オリゴマー化合物は、標的核酸に対して“アンチセンス”であってもよく、このことは標的核酸に対して水素結合を介してハイブリダイゼーションを受けることができることを意味する。
特定の態様において、ハンチントン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、阻害活性の亢進、標的核酸に対する結合親和性の増加、またはin vivoヌクレアーゼによる分解に対する耐性などの、アンチセンス化合物特性を付与するようなパターンまたはモチーフで配置された化学的に修飾されたサブユニットを有する。
特定の態様において、ハンチントン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、6-8-6ギャップマーモチーフを有する。
特定の態様において、ハンチントン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、ギャップに広がったモチーフを有する。
ハンチントンをコードするヌクレオチド配列には、以下のものが含まれるが、これらには限定されない:GENBANKアクセッションNo. NM_002111.6、GENBANK(登録商標)には2006年5月31日に初めて寄託され、本明細書中ではSEQ ID NO: 1として援用される;ヌクレオチド462000〜634000が短縮されたGENBANKアクセッションNo. NT_006081.17、GENBANK(登録商標)には2004年8月19日に初めて寄託され、そして本明細書中ではSEQ ID NO: 2として援用される;GENBANKアクセッションNo. NM_010414.1、GENBANK(登録商標)には2004年3月23日に初めて寄託され、そして本明細書中ではSEQ ID NO: 3として援用される;ヌクレオチド698000〜866000で短縮されたGENBANKアクセッションNo. NW_001109716.1の相補鎖、GENBANK(登録商標)には2006年7月14日に初めて寄託され、そして本明細書中ではSEQ ID NO: 4として援用される、そしてGENBANKアクセッションNo. NM_024357.2、GENBANK(登録商標)には2008年6月5日に初めて寄託され、そして本明細書中ではSEQ ID NO: 5として援用される。
いくつかの態様において、ハイブリダイゼーションは、本明細書中で開示されるアンチセンス化合物と、ハンチントン核酸とのあいだで生じる。ハイブリダイゼーションの最も一般的なメカニズムは、核酸分子の相補的核酸塩基とのあいだの水素結合(例えば、ワトソン-クリック水素結合、フーグスティーン水素結合または逆フーグスティーン水素結合)が関与する。
アンチセンス化合物および標的核酸は、アンチセンス化合物の十分な数の核酸塩基が標的核酸の対応する核酸塩基と水素結合し、それにより所望の作用(例えば、例えばハンチントン核酸などの標的核酸のアンチセンス阻害)を生じることができる場合に、互いに相補的である。
本明細書中中で提供されるアンチセンス化合物はまた、特定のヌクレオチド配列、SEQ ID NO、に対する規定の%同一性を有するものであってもよく、または特定のIsis番号により示される化合物、またはその部分であってもよい。本明細書中で使用される場合、アンチセンス化合物は、同一の核酸塩基対合能力を有する場合、本明細書中で開示される配列と同一である。たとえば、開示されたDNA配列のチミジンの代わりにウラシルを含有するRNAは、ウラシルおよびチミジンはともにアデニンと対合するため、DNA配列と同一であると考えられる。本明細書中に記載されたアンチセンス化合物の短縮型または延長型、並びに本明細書中で提供されたアンチセンス化合物と比較して同一ではない塩基を有する化合物もまた、企図される。同一ではない塩基は、互いに隣接していてもよく、あるいはアンチセンス化合物全体にわたり分散されていてもよい。アンチセンス化合物の%同一性は、比較されるべき配列と比較して、同一の塩基対合を有する塩基数に従って算出される。
ヌクレオシドは、塩基-糖の組み合わせである。ヌクレオシドの核酸塩基(塩基としても知られる)部分は、通常は、ヘテロ環式塩基部分である。ヌクレオチドは、さらにヌクレオシドの糖部分に対して共有結合しているリン酸基が含まれるヌクレオシドである。ペントフラノシル糖が含まれるヌクレオシドについて、リン酸基は、糖の2'、3'または5'ヒドロキシ部分に結合していてもよい。オリゴヌクレオチドは、隣接するヌクレオシドが互いに共有結合して、直鎖重合化オリゴヌクレオチドを形成することを通じて形成される。オリゴヌクレオチド構造中で、リン酸基は、オリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合を形成するものとして一般的に言及される。
天然に存在するRNAおよびDNAのヌクレオシド間結合は、3'→5'ホスホジエステル結合である。1またはそれ以上の修飾された、すなわち、天然に存在しない、ヌクレオシド間結合を有するアンチセンス化合物は、たとえば、細胞取り込みの亢進、標的核酸に対する親和性の亢進、そしてヌクレアーゼ存在下での安定性の増加、などの好ましい特性のため、天然に存在するヌクレオシド間結合を有するアンチセンス化合物以上にしばしば選択される。
アンチセンス化合物は、場合により、糖基が修飾される、1またはそれ以上のヌクレオシドを含有することができる。そのような糖修飾ヌクレオシドは、ヌクレアーゼ安定性の亢進、結合親和性の増加、またはいくつかのその他の有益な生物学的特性を、アンチセンス化合物に対してもたらすことができる。特定の態様において、ヌクレオシドは、科学的に修飾されたリボフラノース環成分を含む。化学的に修飾されたリボフラノース環の実施例には、限定されるわけではないが、置換基の付加(5'および2'置換基、2環式核酸(BNA)を形成するための非-ジェミナルの環原子の架橋、S、N(R)、またはC(R1)(R)2(R=H、C1〜C12アルキルまたは保護基)によるリボシル環酸素原子の置換およびこれらの組み合わせが含まれる。化学的に修飾された糖の例には、2'-F-5'-メチル置換ヌクレオシド(PCT国際出願WO 2008/101157(2008年8月21日公開)を参照、その他の開示された5',2'-bis置換ヌクレオシドに関して)あるいは2'-位での更なる置換を含むリボシル環酸素原子のSでの置換(公開されたU.S.特許出願US2005-0130923(2005年6月16日公開)を参照)またはあるいはBNAの5'-置換(PCT国際出願WO 2007/134181(2007年11月22日公開)を参照、LNAがたとえば5'-メチル基または5'-ビニル基により置換されたもの)、が含まれる。
修飾糖成分を有するヌクレオチドにおいて、核酸塩基成分(天然、修飾、またはそれらの組み合わせ)を、適切な核酸標的とのハイブリダイゼーションのために維持する。
核酸塩基(または塩基)修飾または置換は、天然に存在する非修飾核酸塩基または合成非修飾核酸塩基からは構造的に識別されるが、しかしながら機能的には互いに互換的である。天然の核酸塩基および修飾核酸塩基は両方共、水素結合に関与することができる。そのような核酸塩基修飾は、ヌクレアーゼ安定性、結合親和性、またはいくつかのその他の有利な生物学的特性を、アンチセンス化合物に対して付与することができる。修飾核酸塩基には、合成の核酸塩基および天然の核酸塩基、たとえば、5-メチルシトシン(5-me-C)が含まれる。5-メチルシトシン置換を含む特定の核酸塩基置換は、標的核酸に対するアンチセンス化合物の結合親和性を増加させるために、特に有用である。たとえば、5-メチルシトシン 置換は、核酸二重鎖の安定性を0.6〜1.2℃増加させることが示された(Sanghvi, Y.S., Crooke, S.T. and Lebleu, B., eds., Antisense Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276-278)。
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、医薬組成物または製剤を製造するため、医薬的に許容可能な活性物質または不活性物質と混合することができる。医薬組成物の製剤化のための組成物および方法は、投与経路、疾患の程度、または投与される投与量を含む(しかしこれらには限定されない)、多数の基準に依存する。
アンチセンス化合物は、結果として得られるアンチセンスオリゴヌクレオチドの活性、細胞分布、または細胞取り込みを亢進する、1またはそれ以上の成分または複合体と共有結合していてもよい。典型的な複合体基には、コレステロール成分および脂質成分が含まれる。さらなる複合体基には、炭水化物、リン脂質、ビオチン、フェナジン、葉酸、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオロセイン、ローダミン、クマリン、および色素が含まれる。
レベル、活性またはハンチントンの発現核酸に対するアンチセンス化合物の作用は、多様な細胞型においてin vitroで試験することができる。そのような懐石に使用される細胞型は、商業的供給者(たとえば、American Type Culture Collection, Manassus, VA;Zen-Bio. Inc., Research Triangle Park, NC;Clonetics Corporation, Walkersville, MD)から利用可能であり、そして細胞は供給者の指示書に従って、商業的に利用可能な試薬(たとえば、Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA)を使用して、培養される。例示的な細胞型には、、HepG2細胞、Hep3B細胞、初代肝細胞、A549細胞、GM04281線維芽細胞およびLLC-MK2細胞が含まれるが、これらには限定されない。
その他のアンチセンス化合物を用いた処置のために適切に修飾することができる、細胞をアンチセンスオリゴヌクレオチドにより処置するための方法が、本明細書中に記載される。
培養細胞中にアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入するために一般的に使用されている試薬の一つには、カチオン性脂質トランスフェクション試薬LIPOFECTIN(登録商標)(Invitrogen, Carlsbad, CA)が含まれる。アンチセンスオリゴヌクレオチドをOPTI-MEM(登録商標) 1(Invitrogen, Carlsbad, CA)中でLIPOFECTIN(登録商標)と混合し、アンチセンスオリゴヌクレオチドの所望の最終濃度および100 nMのアンチセンスオリゴヌクレオチドあたり典型的には2〜12μg/mLの範囲であるLIPOFECTIN(登録商標)濃度を達成する。
細胞を、日常的な方法によりアンチセンスオリゴヌクレオチドにより処置する。細胞を、典型的にはアンチセンスオリゴヌクレオチド処置の16〜24時間後に回収し、その時点で標的核酸のRNAまたはタンパク質レベルを当該技術分野において知られておりそして本明細書中で記載された方法により測定される。一般的には、処置を複数回繰り返して行う場合、データを、繰り返し処置の平均として示す。
RNA解析を、全細胞RNAまたはポリ(A)+mRNAに対して行うことができる。RNA単離の方法は、当該技術分野において周知である。RNAは、たとえば、製造者の推奨するプロトコルに従って、TRIZOL(登録商標)試薬(Invitrogen, Carlsbad, CA)を使用して当該技術分野において周知な方法を使用して調製される。
ハンチントン核酸のレベルまたは発現の阻害を、当該技術分野において知られている様々な様式でアッセイすることができる。たとえば、標的核酸レベルを、例えば、ノザンブロット解析、競合的ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)、または定量的リアルタイムPCRにより定量することができる。RNA解析を、全細胞RNAまたはポリ(A)+mRNAで行うことができる。RNA単離の方法は、当該技術分野において周知である。ノザンブロット解析は、当該地術分野において一般的なものでもある。定量的リアルタイムPCRを、PE-Applied Biosystems(Foster City, CA)から入手でるき商業的に利用可能なABI PRISM(登録商標)7600、7700、また7900 配列検出システムを使用して、そして製造者の指示書に従って使用して、容易に行うことができる。
標的RNAレベルの定量を、ABI PRISM(登録商標)7600、7700、または7900配列検出システム(PE-Applied Biosystems, Foster City, CA)を製造者の指示書に従って使用して、定量的リアルタイムPCRにより行うことができる。定量的リアルタイムPCRの方法は、当該技術分野において周知である。
ハンチントン核酸のアンチセンス阻害を、ハンチントンタンパク質レベルを測定することにより評価することができる。ハンチントンのタンパク質レベルを、例えば免疫沈降法、ウェスタンブロット解析(イムノブロッティング)、酵素結合イムノソーベントアッセイ(ELISA)、定量的タンパク質アッセイ、タンパク質活性アッセイ(たとえば、カスパーゼ活性アッセイ)、免疫組織化学、免疫細胞化学または蛍光-活性化細胞ソーティング(FACS)などの、当該技術分野において周知な様々な方法で評価し、または定量化することができる。標的に対する抗体を、MSRS抗体カタログ(Aerie Corporation, Birmingham, MI)などの様々な供給源から同定しそして入手することができ、または当該技術分野において周知な、従来のモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体の作成方法を介して調製することができる。ヒトおよびラットハンチントンの検出のために有用な抗体は、商業的に利用可能である。
アンチセンス化合物、たとえば、アンチセンスオリゴヌクレオチド、を、動物において試験して、ハンチントンの発現を阻害し、そして表現型変化を生成するそれらの能力を評価する。試験を、正常な動物においてあるいは実験的疾患モデルにおいて行うことができる。動物に対する投与のため、アンチセンスオリゴヌクレオチドを、リン酸-緩衝化塩類溶液などの医薬的に許容可能な希釈剤中で製剤化する。投与には、非経口投与経路が含まれる。アンチセンスオリゴヌクレオチドによる処置期間の後、RNAを組織から単離し、そしてハンチントン核酸発現の変化を測定する。ハンチントンタンパク質レベルの変化も測定する。
約1700個の新たに設計された様々な長さ、モチーフおよびバックボーン組成物のアンチセンス化合物を、いくつかの細胞型においてin vitroでのヒトハンチントンmRNAに対するそれらの作用について試験した。新規な化合物を、in vitroにおいて最も強力なアンチセンス化合物の一つと以前に特定されたISIS 387916を含む約250個の以前に設計した化合物と比較した(例えば、U.S.特許出願公開Nos. 2008/0039418および2007/0299027)。約1700個の新たに設計されたアンチセンス化合物のうち、約60個の化合物を、ISIS 387916と比較したin vitro強度に基づいて、さらなる研究のために選択した。選択された化合物を、以前に設計されたISIS 388241およびISIS 387916と比較して、全身性耐容性(実施例3を参照)およびBACHDマウスの脳における活性および耐容性(実施例4を参照)について試験した。これらの研究から、SEQ ID NO: 6、9、10、11、12、13、14、15、18、19、20、21、23、24、25、26、27、28、29、30、32、33、35、36、10、11、12、13、18、22または32で記載された配列の核酸塩基配列を有する化合物を、高い耐容性および高いin vivo強度を有するものとして選択された。それらの相補的な配列の理由で、化合物は、SEQ ID NO: 1の領域4384-4403、4605-4624、4607-4626、4608-4627、4609-4628、4610-4629、4617-4636、4622-4639、4813-4832、4814-4833、4823-4842、4860-4877、4868-4887、4925-4944、4928-4947、4931-4950、4931-4948、4955-4974、4960-4977、5801-5820、5809-5828、5809-5826、101088-101105、115066-115085、4607-4626、4608-4627、4609-4628、4610-4629、4813-4832、4862-4881、5809-5828または4928-4947に対して相補的である。特定の態様において、本明細書中でさらに記載されるように列挙された領域を標的とする化合物は、本明細書中でさらに記載されるようにSEQ ID NOsで記載された配列のいくつかの核酸塩基部分を有する修飾されたオリゴヌクレオチドを含む。特定の態様において、列挙されたSEQ ID NOsに記載される列挙された領域を標的とする化合物または列挙されたSEQ ID NOsに記載される配列の核酸塩基部分を有する化合物は、本明細書中でさらに記載されるように、様々な長さのものであってもよく、そして本明細書中で記載されるように、様々なモチーフの一つを有していてもよい。特定の態様において、列挙されたSEQ ID NOsに記載される領域を標的とする化合物または列挙されたSEQ ID NOsに記載される配列の核酸塩基部分を有する化合物は、ISIS NOs: ISIS 419628、ISIS 419637、ISIS 419640、ISIS 419641、ISIS 451541、ISIS 419642、ISIS 436665、ISIS 436671、ISIS 436684、ISIS 436689、ISIS 436754、ISIS 437168、ISIS 437175、ISIS 437441、ISIS 437442、ISIS 437507、ISIS 437527、ISIS 443139、ISIS 444578、ISIS 444584、ISIS 444591、ISIS 444607、ISIS 444608、ISIS 444615、ISIS 444618、ISIS 444627、ISIS 444652、ISIS 444658、ISIS 444659、ISIS 444660、ISIS 444661、またはISIS 444663により示される様な、特定の長さおよびモチーフを有する。
特定の態様において、本明細書中で記載された1またはそれ以上の医薬組成物を投与することを含む、個体を治療する方法が、本明細書中で提供される。特定の態様において、個体は、ハンチントン病を有する。
特定の態様において、症状は、不安である。特定の態様において、症状は、抑鬱症である。特定の態様において、症状は、感情鈍麻である。特定の態様において、症状は、自己中心性である。特定の態様において、症状は、攻撃性である。特定の態様において、症状は、強迫行動である。特定の態様において、症状は、易刺激性である。特定の態様において、症状は、自殺念慮である。
特定の態様において、本明細書中にて記載される化合物および組成物は、非経口的に投与される。
特定の態様において、1またはそれ以上の医薬組成物を、1またはそれ以上のその他の医薬剤と同時投与する。特定の態様において、そのような1またはそれ以上のその他の医薬剤は1またはそれ以上の医薬組成物本明細書中で記載されたように、同一の疾患、障害、または症状を治療するために設計される。特定の態様において、そのような1またはそれ以上のその他の医薬剤は、1またはそれ以上の医薬組成物本明細書中で記載されたように、異なる疾患、障害、または症状を治療するように設計される。特定の態様において、そのような1またはそれ以上のその他の医薬剤は、本明細書中で記載されたように、1またはそれ以上の医薬組成物の望ましくない副作用を治療するために設計される。特定の態様において、1またはそれ以上の医薬組成物を、別の医薬剤とともに同時投与し、別の医薬剤の望ましくない作用を治療する。特定の態様において、1またはそれ以上の医薬組成物を、別の医薬剤と同時投与し、組み合わせ効果を生じる。特定の態様において、1またはそれ以上の医薬組成物を別の医薬剤と同時投与し、相乗的作用を生じる。
本明細書中で記載される特定の化合物、組成物および方法は、特定の態様にしたがって具体的に記載されたが、一方で以下の事例は本明細書中で記載された化合物の説明のためにのみ機能し、それを限定することを意図しない。本件出願において記載される参考文献のそれぞれは、その全体を参照により本明細書中に援用される。
ヒトハンチントン遺伝子配列を標的とする、様々な長さ、モチーフ、そしてバックボーン組成の約1700種の新たに設計したアンチセンス化合物を、いくつかの細胞型におけるin vitroでのヒトハンチントンmRNAに対するそれらの作用について試験した。これらのギャップマーは、ホスホロチオエート結合のみであるヌクレオシド間結合(表1に記載)またはホスホロチオエートとホスホジエステル結合であるヌクレオシド間結合(表5に記載)によりさらに設計した。多数の新たに設計されたオリゴおよび2つのベンチマークオリゴヌクレオチド(以前に設計され開示されたもの)は、表1および表5に提示される。
表1に示される化合物の特定のものは、5-10-5 MOE、6-8-6 MOE、または5-8-5 MOEのモチーフを有する。5-10-5ギャップマーは、20個の連結したヌクレオシドを有し、ここで中央部ギャップ部分は10個の2'-デオキシヌクレオシドを有し、そしてそれぞれ5個のヌクレオシドを有するウィングが両側(5'方向および3'方向)に配置される。6-8-6ギャップマーは、20個の連結したヌクレオシドを有し、ここで中央部ギャップ部分は、8個の2'-デオキシヌクレオシドを有し、そしてそれぞれ6個のヌクレオシドを有するウィングが両側(5'方向および3'方向)に配置される。5-8-5ギャップマーは、18個の連結したヌクレオシドを有し、ここで中央部ギャップ部分は、8個の2'-デオキシヌクレオシドを有し、そしてそれぞれ5個のヌクレオシドを有するウィングが両側(5'方向および3'方向)に配置される。表1に列挙されるすべてのギャップマーについて、5'ウィング部分のそれぞれのヌクレオシドおよび3'ウィング部分のそれぞれのヌクレオシドは、2'-MOE修飾を有する。各ギャップマー全体を通じたヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート(P=S)ヌクレオシド間結合である。それぞれのギャップマー全体を通じたすべてのシトシンは、5-メチルシトシンである。表1におけるそれぞれのギャップマーは、SEQ ID NO: 1(GENBANKアクセッションNo. NM_002111.6)またはSEQ ID NO: 2(ヌクレオチド462000〜634000が短縮された、GENBANKアクセッションNo. NT_006081.17)を標的とする。‘開始部位'は、ヒト遺伝子配列中のギャップマーが標的とする最も5'側のヌクレオチドを示す。‘停止部位'は、ヒト遺伝子配列中のギャップマーが標的とする最も3'側のヌクレオチドを示す。
表5におけるキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、5-10-5 MOEギャップマーとして設計された。5-10-5ギャップマーは、20個の連結したヌクレオシドを有し、ここで中央部ギャップ部分は、10個の2'-デオキシヌクレオチドを有し、そしてそれぞれ5個のヌクレオシドを有するウィングが両側(5'方向および3'方向)に配置される。5'ウィング部分のそれぞれのヌクレオシドおよび3'ウィング部分のそれぞれのヌクレオシドは、2'-MOE修飾を有する。中央部ギャップ部分内部のヌクレオシド間結合、ギャップ部分を5'ウィング部分または3'ウィング部分に結合する結合、そしてそれぞれのウィング部分の最も5'側のヌクレオシドおよび最も3'側のヌクレオシドについての結合が、すべて、ホスホロチオエート(P=S)結合である;5'ウィング部分および3'ウィング部分の両方のヌクレオシドの残りを結合するヌクレオシド間結合が、ホスホジエステル結合である;すなわち、ギャップマーは、混合バックボーンを有する。それぞれのギャップマーの全体を通じてすべてのシトシンは、5-メチルシトシンである。表5におけるそれぞれのギャップマーは、ヒトmRNA配列(GENBANKアクセッションNo. NM_002111.6、本明細書中でSEQ ID NO: 1と示される)を標的とする。‘開始部位’は、ヒトmRNA中のギャップマーが標的とする最も5'側のヌクレオチドを示すが。‘停止部位’は、ヒトmRNA中のギャップマーが標的とする最も3'側のヌクレオチドを示す。
様々な長さ、モチーフ、そしてバックボーン組成の約1700種の新たに設計したアンチセンス化合物を、いくつかの細胞型におけるin vitroでのヒトハンチントンmRNAに対するそれらの作用について試験した。これらの化合物は、in vivoにおいてかなり強力な化合物であることが以前に決定された化合物ISIS 387916を含む、約250種の以前に設計した化合物を比較された。この実施例において示されるように、ISIS 419640、ISIS 419641、ISIS 419642、ISIS 436665、ISIS 436671、ISIS 436689、ISIS 437507、ISIS 443139、ISIS 444591、ISIS 444661、ISIS 437527、ISIS 444584、およびISIS 444652、および以前に設計されたISIS 388241が、ベンチマーク化合物ISIS 387916と比較して、in vitroで同様またはよりより強力であることが見出された。
ウェル当たり25,000個の細胞の密度での培養されたGM04281線維芽細胞を、エレクトロポレーションを、500 nM、1000 nM、2000 nM、4000 nM、または8000 nMのアンチセンスオリゴヌクレオチドとともに使用して、トランスフェクトした。約16時間の処置期間の後、RNAを細胞から単離し、そしてハンチントンmRNAレベルを定量的リアルタイムPCRにより測定した。ヒトプライマープローブセットRTS2617(フォワード配列CTCCGTCCGGTAGACATGCT、本明細書中でSEQ ID NO: 37と示される;リバース配列GGAAATCAGAACCCTCAAAATGG、本明細書中でSEQ ID NO: 38と示される;プローブ配列TGAGCACTGTTCAACTGTGGATATCGGGAX、本明細書中でSEQ ID NO: 39と示される)を使用して、mRNAレベルを測定した。ハンチントンmRNAレベルを、RIBOGREEN(登録商標)により測定されるように、全RNA含量に従って調整した。結果を、非処置対照細胞と比較したハンチントンmRNAの%阻害として、表9において示し、そしてハンチントンmRNAレベルのアンチセンスオリゴヌクレオチド-媒介性用量依存性の減少を示す。
実施例1において記載されたアンチセンスオリゴヌクレオチドのいくつかを、in vitroで、ヒトハンチントンmRNAに対するそれらの作用について試験した。ウェル当たり4,000個の細胞の密度での培養されたA549細胞を、リポフェクチントランスフェクション試薬を7.4074 nM、22.222 nM、66.667 nM、または200 nMのアンチセンスオリゴヌクレオチドとともに使用して、トランスフェクトした。約16時間の処置期間の後、RNAを細胞から単離し、そしてハンチントンmRNAレベルを定量的リアルタイムPCRにより測定した。ヒトプライマープローブセットRTS2617を使用して、mRNAレベルを測定した。ハンチントンmRNAレベルを、RIBOGREEN(登録商標)により測定されるように、全RNA含量に従って調整した。結果を、非処置対照細胞と比較したハンチントンmRNAの%阻害として、表16において示し、そしてハンチントンmRNAレベルアンチセンスオリゴヌクレオチド-媒介性用量依存性の減少を示す。それぞれのアンチセンスオリゴヌクレオチドのIC50は、表16においてnMで示される。
実施例1において記載されそしてヒトハンチントン核酸を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドのいくつかを、in vitroでアカゲザルハンチントンmRNAに対するそれらの作用について試験した。ウェル当たり25,000細胞の密度での培養されたLLC-MK2細胞を、エレクトロポレーションを625 nM、1250 nM、2500 nM、5000 nM、10,000 nM、または20,000 nMのアンチセンスオリゴヌクレオチドとともに使用して、トランスフェクトした。約16時間の処置期間の後、RNAを細胞から単離し、そしてハンチントンmRNAレベルを定量的リアルタイムPCRにより測定した。ヒトプライマープローブセットRTS2686(フォワード配列GTCTGAGCCTCTCTCGGTCAA、本明細書中SEQ ID NO: 40と示されれる;リバース配列AAGGGATGCTGGGCTCTGT、本明細書中SEQ ID NO: 41と示される;プローブ配列AGCAAAGCTTGGTGTCTTGGCACTGTTAGTX、本明細書中SEQ ID NO: 42と示される)を使用して、mRNAレベルを測定した。ハンチントンmRNAレベルを、RIBOGREEN(登録商標)により測定されるように、全RNA含量に従って調整した。結果を、表18において示し、非処置対照細胞と比較したハンチントンmRNAの%阻害として、ハンチントンmRNAレベルのアンチセンスオリゴヌクレオチド-媒介性用量依存性の減少を示す。それぞれのアンチセンスオリゴヌクレオチドのIC50は、表18においてμMで示される。
実施例1において記載されそしてヒトハンチントン核酸を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドのいくつかを、in vitroでのヒトハンチントンmRNAに対するそれらの作用について試験した。ウェル当たり10,000細胞の密度での培養されたBACHDマウス肝細胞を、サイトフェクチントランスフェクション試薬を7.4074 nM、22.222 nM、66.667 nM、または200 nMのアンチセンスオリゴヌクレオチドとともに使用して、トランスフェクトした。約16時間の処置期間の後、RNAを細胞から単離し、そしてハンチントンmRNAレベルを定量的リアルタイムPCRにより測定した。ヒトプライマープローブセットRTS2617を使用して、mRNAレベルを測定した。ハンチントンmRNAレベルを、RIBOGREEN(登録商標)により測定されるように、全RNA含量に従って調整した。結果を、非処置対照細胞と比較したハンチントンmRNAの%阻害として、表24において示し、ハンチントンmRNAレベルのアンチセンスオリゴヌクレオチド-媒介性用量依存性の減少を示す。示されるデータは、2回の実験の平均である。それぞれのアンチセンスオリゴヌクレオチドのIC50は、表24においてnMで示される。
約1700種の新たに設計したアンチセンス化合物の中から、全身性耐容性スクリーニングにおいて試験するためのISIS 387916と比較したin vitro強度に基づいて、66種の化合物を選択した。
処置
各4匹の19群のBACHDマウスに、12.5 mg/kgのISIS 387916、ISIS 388241、ISIS 419629、ISIS 419637、ISIS 436684、ISIS 444578、ISIS 444584、ISIS 444591、ISIS 444607、ISIS 444608、ISIS 444615、ISIS 444618、ISIS 444627、ISIS 444652、ISIS 444658、ISIS 444659、ISIS 444660、ISIS 444661、またはISIS 444663を、1週間に2回、2週間にわたり、腹腔内に注射した。4匹のマウスの対照群に、PBSを、1週間に2回、2週間にわたり、腹腔内に注射した。最終投与の2日後に、マウスをイソフルレンを用いて麻酔し、そして血漿回収のために放血し、その後頸椎脱臼を行い、器官を回収した。
RNAを、ハンチントンmRNAレベルのリアルタイムPCR解析用に肝臓組織から抽出した。ヒト変異型ハンチントンmRNAレベルを、ヒトプライマープローブセットRTS2617を使用して測定した。マウス正常ハンチントンレベルを、マウスプライマープローブセットRTS2633を使用して測定した。結果を、表28および表29に示し、そしてPBS対照と比較して、ヒトハンチントン発現レベルおよびマウスハンチントン発現レベルの%阻害としてそれぞれ算出した。すべてのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトハンチントンmRNAレベルの顕著な阻害を引き起こす。ISIS 388241は、マウスハンチントンmRNA(SEQ ID NO: 3)と比較して3つ以上のミスマッチを有し、そして従って対照と比較して、マウスmRNAレベルの顕著な阻害を示さなかった。
ISISオリゴヌクレオチドの上述したマウスの肝臓機能に対する効果を評価するため、トランスアミナーゼの血漿濃度を、自動化臨床化学解析装置(Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY)を使用して測定した。アラニントランスアミナーゼ(ALT)およびアスパラギン酸トランスアミナーゼ(AST)の測定値を、IU/Lで示し、そして結果を表31に示す。
処置
各4匹の14群のBACHDマウスに、12.5 mg/kgまたは50 mg/kgのISIS 419581、ISIS 419602、ISIS 419628、ISIS 419629、ISIS 419640、ISIS 419641、またはISIS 419642を、1週間に2回、2週間にわたり、腹腔内に注射した。4匹のBACHDマウスのグループには、12.5 mg/kgのISIS 387916を1週間に2回、2週間にわたり、腹腔内に注射した。4匹のマウスの対照群には、PBSを、1週間に2回、2週間にわたり、腹腔内に注射した。最終投与ののち2日後に、マウスを、イソフルレンを用いて麻酔し、そして血漿回収のために放血し、その後頸椎脱臼を行い、器官を回収した。
RNAを、ハンチントンmRNAレベルのリアルタイムPCR解析用に肝臓組織から抽出した。ヒト変異型ハンチントンmRNAレベルを、ヒトプライマープローブセットRTS2617を使用して測定した。マウス正常ハンチントンレベルを、マウスプライマープローブセットRTS2633を使用して測定した。結果を、表32および表33に示し、そしてPBS対照と比較して、ヒトハンチントン発現レベルおよびマウスハンチントン発現レベルの%阻害としてそれぞれ算出した。
ISISオリゴヌクレオチドの上述したマウスの肝臓機能に対する効果を評価するため、トランスアミナーゼの血漿濃度を、自動化臨床化学解析装置(Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY)を使用して測定した。ALTおよびASTの測定値を、IU/Lで示し、そして結果を表35に示す。
処置
各4匹の18群のBACHDマウスに、12.5 mg/kgまたは50 mg/kgのISIS 388250、ISIS 388251、ISIS 388263、ISIS 388264、ISIS 419641、ISIS 436645、ISIS 436649、ISIS 436668、またはISIS 436689を、1週間に2回、2週間にわたり、腹腔内に注射した。4匹のBACHDマウスのグループには、12.5 mg/kgのISIS 388241を、1週間に2回、2週間にわたり、腹腔内に注射した。4匹のマウスの対照群には、PBSを、1週間に2回、2週間にわたり、腹腔内に注射した。最終投与ののち2日後に、マウスを、イソフルレンを用いて麻酔し、そして血漿回収のために放血し、その後頸椎脱臼を行い、器官を回収した。
RNAを、ハンチントンmRNAレベルのリアルタイムPCR解析用に肝臓組織から抽出した。ヒト変異型ハンチントンmRNAレベルを、ヒトプライマープローブセットRTS2617を用いて測定した。マウス正常ハンチントンレベルを、マウスプライマープローブセットRTS2633を用いて測定した。結果を、表36および表37に示し、そしてPBS対照と比較して、ヒトハンチントン発現レベルおよびマウスハンチントン発現レベルの%阻害としてそれぞれ算出した。すべてのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトハンチントンmRNAレベルの顕著な阻害を引き起こす。ISIS 388241、ISIS 388250、ISIS 388251、ISIS 388263、ISIS 388264、およびISIS 436645は、マウスハンチントンmRNA(SEQ ID NO: 3)と比較して3つ以上のミスマッチを有し、そして従って対照と比較して、マウスmRNAレベルの顕著な阻害を示さなかった。ISIS 436649およびISIS 436689は、マウスハンチントンmRNA(SEQ ID NO: 3)と比較して3つ以上のミスマッチを有し、そして従って対照と比較して、マウスmRNAレベルの顕著な阻害を示さなかった。
肝臓重量、脾臓重量および腎臓重量を、研究の最後に測定し、そして体重で正規化した生理食塩水対照の%として、表38において示す。ISIS 388263およびISIS 436645で処理したマウスは、PBS対照と比較して、50 mg/kg投与に際して、肝臓重量の増加を生じた。
ISISオリゴヌクレオチドの上述したマウスの肝臓機能に対する効果を評価するため、トランスアミナーゼの血漿濃度を、自動化臨床化学解析装置(Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY)を使用して測定した。アラニントランスアミナーゼ(ALT)およびアスパラギン酸トランスアミナーゼ(AST)の測定値を、IU/Lで示し。そして結果を表39に示す。
処置
各4匹の18群のBACHDマウスに、腹腔内に12.5 mg/kまたは50 mg/kgのISIS 388241、ISIS 437123、ISIS 437132、ISIS 437140、ISIS 437442、ISIS 437446、ISIS 437477、ISIS 437478、またはISIS 437490 1週間に2回、2週間にわたり、腹腔内に注射した。4匹のBACHDマウスのグループには、12.5 mg/kgのISIS 387916を1週間に2回、2週間にわたり、腹腔内に注射した。4匹のマウスの対照群には、PBSを、1週間に2回、2週間にわたり、腹腔内に注射した。最終投与ののち2日後に、マウスを、イソフルレンを用いて麻酔し、そして血漿回収のために放血し、その後頸椎脱臼を行い、器官を回収した。
RNAを、ハンチントンmRNAレベルのリアルタイムPCR解析用に肝臓組織から抽出した。ヒト変異型ハンチントンmRNAレベルを、ヒトプライマープローブセットRTS2617を使用して測定した。マウス正常ハンチントンレベルを、マウスプライマープローブセットRTS2633を使用して測定した。結果を、表40および表41に示し、そしてPBS対照と比較して、ヒトハンチントン発現レベルおよびマウスハンチントン発現レベルの%阻害としてそれぞれ算出した。ISIS 388241およびISIS 437490は、マウスハンチントンmRNA(SEQ ID NO: 3)と比較して3つよりも多いミスマッチを有し、そしてしたがって、対照と比較して、マウスmRNAレベルの顕著な阻害を示さなかった。ISIS 437132は、マウスハンチントンmRNA(SEQ ID NO: 3)と比較して3つのミスマッチを有し、そしてしたがって、対照と比較して、マウスmRNAレベルの顕著な阻害を示さなかった。ISIS 437123およびISIS 437140は、マウスハンチントンmRNA(SEQ ID NO: 3)と比較して2つのミスマッチを有し、そして対照と比較して、マウスmRNAレベルの顕著な阻害を示さなかった。
ISISオリゴヌクレオチドの上述したマウスの肝臓機能に対する影響を評価するため、トランスアミナーゼの血漿濃度を、自動化臨床化学解析装置(Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY)を使用して測定した。アラニントランスアミナーゼ(ALT)およびアスパラギン酸トランスアミナーゼ(AST)の測定値は、IU/Lで表し、そして結果を表43に示す。
処置
各4匹の11群のBACHDマウスに、12.5 mg/kgのISIS 388241、ISIS 419640、ISIS 419641、ISIS 419642、ISIS 436665、ISIS 436671、ISIS 436689、ISIS 437507、ISIS 443139、ISIS 444591、またはISIS 444661を、1週間に2回、2週間にわたり、腹腔内に注射した。4匹のマウスの対照群に、リン酸緩衝塩類溶液(PBS)を、1週間に2回、2週間にわたり、腹腔内を注射した。最終投与ののち2日後に、マウスを、イソフルレンを用いて麻酔し、そして血漿回収のために放血し、その後頸椎脱臼を行い、器官を回収した。
RNAを、ハンチントンmRNAレベルのリアルタイムPCR解析用に肝臓組織から抽出した。ヒト変異型ハンチントンmRNAレベルを、ヒトプライマープローブセットRTS2617を使用して測定した。マウス正常ハンチントンレベルを、マウスプライマープローブセットRTS2633を使用して測定した。結果を、表44および表45に示し、そしてPBS対照と比較して、ヒトハンチントン発現レベルおよびマウスハンチントン発現レベルの%阻害としてそれぞれ算出した。すべてのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトハンチントンmRNAレベルの顕著な阻害を示さなかった。ISIS 388241、ISIS 437507、およびISIS 443139は、マウスハンチントンmRNA(SEQ ID NO: 3)と比較して3つよりも多いミスマッチを有し、そしてしたがって対照と比較して、マウスmRNAレベルの顕著な阻害を示さなかった。ISIS 436689は、マウスハンチントンmRNA(SEQ ID NO: 3)と比較して3つのミスマッチを有し、そして対照と比較して、マウスmRNAレベルの顕著な阻害を示さなかった。
マウスの体重を、研究の開示時点および1週間に2回、測定した。マウスの体重を表46に示し、そして研究の開始時に測定された体重に対する%変化として表す。結果は、これらのオリゴヌクレオチドによる処置は、研究を通じてマウスの体重において有害な変化を生じなかったことを示す。
ISISオリゴヌクレオチドの上述したマウスの肝臓機能に対する影響を評価するため、トランスアミナーゼの血漿濃度を、自動化臨床化学解析装置(Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY)を使用して測定した。ALTおよびASTの測定値は IU/Lで表した。ビリルビンおよびアルブミンの血漿レベルもまた、同一の臨床的化学物質解析装置を使用して測定し、そしてg/dLで表した。結果を、表48に示す。
ISISオリゴヌクレオチドの上述したマウスの腎臓機能に対する影響を評価するため、血中尿素窒素(BUN)およびクレアチニンのの血漿濃度を、自動化臨床化学解析装置(Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY)を使用して測定した。結果を、表49においてmg/dLで示す。
ISISオリゴヌクレオチドの上述したマウスにおけるその他の代謝機能に対する影響を評価するため、グルコース、コレステロールおよびトリグリセリドの血漿濃度を、自動化臨床化学解析装置(Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY)を使用して測定した。結果を、表50において示し、mg/dLで表し、そしてこれらのオリゴヌクレオチドによる処置が、対照群と処置群とのあいだで、これらの代謝マーカーのレベルの有害な変化を何も生じなかった。
BACHDマウスを、規定のマウス脳領域、大脳基底核線条体、に対して、ヒトハンチントンmRNA発現およびマウスハンチントンmRNA発現に対する脳組織におけるオリゴヌクレオチド活性をスクリーニングすることを目的として、ボーラス投与を介してISISオリゴヌクレオチドにより処理した。
各4匹のBACHDマウスのグループに、大脳基底核線条体中に3μg、10μgまたは25μg濃度を1回ボーラス注射として送達されるISIS 388241、ISIS 419628、ISIS 419637、ISIS 419640、ISIS 419641、ISIS 419642、ISIS 436665、ISIS 436671、ISIS 436684、ISIS 436689、ISIS 436754、ISIS 437168、ISIS 437175、ISIS 437441、ISIS 437442、ISIS 437507、ISIS 437527、ISIS 443139、ISIS 444578、ISIS 444584、ISIS 444591、ISIS 444607、ISIS 444608、ISIS 444615、ISIS 444618、ISIS 444627、ISIS 444652、ISIS 444658、ISIS 444659、ISIS 444660、ISIS 444661またはISIS 444663を投与した。
RNAを、ハンチントンmRNAレベルのリアルタイムPCR解析のために、大脳基底核線条体組織から抽出した。ヒト変異型ハンチントンmRNAレベルを、ヒトプライマープローブセットRTS2617を使用して測定した。マウス正常ハンチントンmRNAレベルを、マウスプライマープローブセットRTS2633を使用して測定した。ヒトハンチントンmRNAレベルに関する結果を、表51中にて提示し、そして、PBS対照群と比較して%阻害を表示する。すべてのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトハンチントンmRNAレベルの用量依存的な阻害を生じる。マウスハンチントンmRNAレベルについての結果を、表52に示し、そしてPBS対照群と比較した%阻害として表す。
約30種の化合物を、高耐容性および高強度を有するものとして選択した。ついで、化合物を、ついで、ラットにおいてCNSボーラス注射により試験し、さらに神経毒性について評価した。
4匹のSprague-Dawleyラットのグループに、大脳基底核線条体中に50μg濃度を1回ボーラス注射として送達されるISIS 387916、ISIS 388241、ISIS 419627、ISIS 419628、ISIS 419629、ISIS 419630、ISIS 419636、ISIS 419637、ISIS 419640、ISIS 419641、ISIS 419642、ISIS 436665、ISIS 436668、ISIS 4196671、ISIS 436684、ISIS 436689、ISIS 436754、ISIS 443168、ISIS 437175、ISIS 437441、ISIS 437442、ISIS 437507、ISIS 437527、ISIS 443139、ISIS 444578、ISIS 444584、ISIS 444591、ISIS 444607、ISIS 444608、ISIS 444615、ISIS 444618、ISIS 444627、ISIS 444652、ISIS 444658、ISIS 444659、ISIS 444660、ISIS 444661、またはISIS 444663を、投与した。
RNAを、AIF1 mRNAレベルのリアルタイムPCR解析のために、大脳基底核線条体組織から抽出した。ラットAIF1レベルを、ラットプライマープローブセットrAif1_LTS00219(フォワード配列AGGAGAAAAACAAAGAACACCAGAA、本明細書中SEQ ID NO: 46と示される;リバース配列CAATTAGGGCAACTCAGAAATAGCT、本明細書中SEQ ID NO: 47と示される;プローブ配列CCAACTGGTCCCCCAGCCAAGAX、本明細書中SEQ ID NO: 48と示される)を使用して測定した。結果を、PBS対照のAIF1発現と比較して、AIF1発現の%として算出し、それを表53に示した。ISIS 419629、ISIS 444584、およびISIS 444618は、全身性投与研究(実施例3)における毒性指標を示したものであるが、本研究においても同様に毒性指標を有した(生理食塩水対照と比較して300%高い)。その後の研究により、ISIS 444584は、神経耐容性であり、そしてわずかな毒性指標を示すことが示された(実施例16および実施例17)。
RNAを、ハンチントンmRNAレベルのリアルタイムPCR解析のために、大脳基底核線条体組織から抽出した。ラットハンチントンmRNAレベルを、ラットプライマープローブセットrHtt_LTS00343(フォワード配列CAGAGCTGGTGAACCGTATCC、本明細書中SEQ ID NO: 49と示される;リバース配列GGCTTAAGCAGGGAGCCAAAA、本明細書中SEQ ID NO: 50と示される;プローブ配列ACTTCATGATGAGCTCGGAGTTCAACX、本明細書中SEQ ID NO: 51と示される)を使用して、測定した。結果を、PBS対照のハンチントン発現と比較して、ハンチントン発現の減少%として算出し、それを表54に示した。ISIS 388241、ISIS 436684、ISIS 436754、ISIS 437175、ISIS 437507、およびISIS 443139はそれぞれ、ラット遺伝子配列(SEQ ID NO: 5)と比較して6塩基対またはそれ以上のミスマッチを有し、そしてしたがって対照と比較して、ラットmRNAレベルの顕著な阻害を示さない。ISIS 419640、ISIS 419641、ISIS 419642、ISIS 436665、ISIS 436668、ISIS 437442、ISIS 444615、およびISIS 444627はそれぞれ、ラット遺伝子配列(SEQ ID NO: 5)と比較して1つのミスマッチを有し、そして対照と比較して、ラットmRNAレベルの顕著な阻害を示さない。ISIS 437168およびISIS 437441は、ラット遺伝子配列(SEQ ID NO: 5)と比較して2つのミスマッチを有し、そして対照と比較して、ラットmRNAレベルの顕著な阻害を示さない。ISIS 436689およびISIS 444584は、ラット遺伝子配列(SEQ ID NO: 5)と比較して3つのミスマッチを有し、そして対照と比較して、ラットmRNAレベルの顕著な阻害を示さない。
選択された化合物を、以前に設計した化合物ISIS 388241と、BACHDマウスにおいてICV投与により比較した。
BACHDマウスを、マウスにおけるICV投与の耐容性を評価することを目的として、規定のマウス脳領域、右側脳室、に対する脳室内(ICV)投与を介して、ISISオリゴヌクレオチドにより処置した。
5匹のBACHDマウスのグループのそれぞれに、Alzet 2002ポンプを用いて12μL/日の速度で2週間にわたり150μg/日をICVに送達される、ISIS 388241、ISIS 437507、ISIS 443139、ISIS 419640、ISIS 419641、ISIS 419642、ISIS 444591、ISIS 436665、ISIS 436671、ISIS 444661、またはISIS 436689を投与した。4匹のBACHDマウスの対照群を、PBSにより同様に処置した。マウスに対して、以下のようにしてポンプを外科的に移植した:ポンプの移植のため、マウスを個別に3%イソフルレンを用いて麻酔した。2週間後、マウスを再び麻酔し、そしてポンプを外科的に取り除いた。ついで、動物をさらに2週間かけて回復させ、その後安楽死させた。
RNAを、ハンチントンmRNAレベルのリアルタイムPCR解析のため、前頭皮質の右半球およびカニューレ部位小脳後葉部分から抽出した。ヒト変異型ハンチントンmRNAレベルを、ヒトプライマープローブセットRTS2617を使用して測定した。マウス正常ハンチントンmRNAレベルを、マウスプライマープローブセットRTS2633を使用して測定した。結果を、対照と比較してヒトハンチントンmRNA発現およびマウスハンチントンmRNA発現の%阻害として算出し、表56および表57においてそれぞれ示す。すべてのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトハンチントンmRNAレベルの顕著な阻害を生じる。ISIS 388241、ISIS 437507、およびISIS 443139はそれぞれ、マウスハンチントンmRNA(SEQ ID NO: 3)と比較して8塩基対またはそれ以上のミスマッチを有し、そしてしたがって、対照と比較して、マウスmRNAレベルの顕著な阻害を示さない。ISIS 444591は、マウスハンチントンmRNA(SEQ ID NO: 3)と比較して1つのミスマッチを有し、そして対照と比較して、マウスmRNAレベルの顕著な阻害を示さない。ISIS 436689は、マウスハンチントンmRNA(SEQ ID NO: 3)と比較して3つのミスマッチを有し、そして、対照と比較して、マウスmRNAレベルの顕著な阻害を示さない。
マウスの体重を、研究の開始時およびその後は1週間に1回、測定した。マウスの体重を表58に示し、そして研究の開始時に測定した体重と比較した%変化として表す。体重は、アンチセンスオリゴヌクレオチドのICV投与に対するマウスの耐容性の測定値と考えられた。‘n.d.'は、その時点で利用可能なデータが存在しなかったことを意味する。
野生型C57/BL6マウスを、これらのマウスにおけるマウスハンチントンに対するオリゴヌクレオチドの強度を評価することを目的として、ISISオリゴヌクレオチドを用いて、脳室内(ICV)投与を介して、規定のマウス脳領域、右側脳室、に対して処置した。
各10匹のC57/BL6マウスのグループに対して、50μg/日をAlzet 2002ポンプを用いて0.5μL/日の速度で7日間または14日間ICVに送達される、ISIS 408737(5' TCCTAGTGTTACATTACCGC 3'(SEQ ID NO: 52)、開始部位SEQ ID NO: 3の5263)を投与した。6匹のC57/BL6マウスの対照群を、PBSにより同様に処置した。マウスに対して、以下のようにしてポンプを外科的に移植した:簡単に述べると、Alzet浸透圧ポンプ(Model 2002)を、製造者の指示書に従って組み立てた。ポンプをアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する溶液で充填し、そして移植の24時間前に、37℃にて一晩、インキュベートした。動物を3%イソフルレンにより麻酔し、そして定位固定フレーム中に配置した。外科手術部位を消毒した後、頭蓋骨上で正中切開を行い、背部に皮下ポケットを作り、そこに事前に充填した浸透圧ポンプを移植した。小型のキリ穴を、右側脳室上に頭蓋骨を通して開けた。プラスチックカテーテルを介して浸透圧ポンプに対して接続したカニューレを、脳室内に配置し、そしてLoctite接着剤を使用して適した位置に接着した。切開を縫合により閉じた。アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはPBSを7または14日間注入し、ポンプを取り出した後に、その後動物を、Institutional Animal Care and Use Committeeにより承認された人道的なプロトコルに従って安楽死させた。脳および脊髄の組織を回収し、液体窒素中で瞬間的に凍結した。凍結する前に、脳組織をマウス脳マトリクスを使用して5つの部分(S1、S2、S3、S4、およびS5)に横方向に切断した。部分1〜5は、約互いに2 mmずつ離れており、S1が最も前部であり、そしてS5が最も後部であった。
全RNAを、ハンチントンmRNAレベルのリアルタイムPCR解析のため、RNeasy Mini prep kit(Qiagen)を使用して、RNeasy Protect Mini Kit(Qiagen, Mississauga, ON, Canada)によりマウス脳および脊髄から抽出した。Q-PCR反応を、ABI Prism 7700配列検出器(Applied Biosystems)上で行いそして解析した。マウスハンチントンmRNAレベルを、マウスプライマープローブセットABI # Mm01213820_m1(Applied Biosystems)を使用して測定し、そしてペプチジルプロリルイソメラーゼA mRNAレベルに対して正規化した。タンパク質溶解物を、以前に記載されたように(Li S.H. and Li X.J.、Methods in Molecular Biology(2008)、217:1940-6029)、マウス脳スラブから調製した。溶解物を3〜8%のtris-酢酸ゲル上で泳動し、そしてiBlotドライブロッティングシステム(Invitrogen)を使用して転写した。ブロットを、抗-βチューブリン(Chemicon)およびマウスハンチントンタンパク質に対して特異的に反応するモノクローナルMAB2166抗体(Millipore)を用いてプローブ化した。イムノブロットを、Odyssey V3.0 softwareを使用して定量化した。
カニクイザルを、ハンチントンmRNA発現に対する脳組織におけるオリゴヌクレオチドの活性をスクリーニングすることを目的として、ISISオリゴヌクレオチドを用いて、脳室内(ICV)投与を介して、規定の脳領域、側脳室、に対して処置した。
各3頭のカニクイザルの2グループに対して、0.05 ml/時間の速度で4週間、個別の歩行可能なポンプ(Pegasus Vario)によりICV送達される、0.635 mg/ml(1.5 mg/日)または1.67 mg/ml(4 mg/日)のISIS 436689のいずれかを投与した。2頭のカニクイザルの対照群に対して、PBSにより同様に投与した。グループには、ISIS 436689を両側性に投与した。1頭の動物に対して、右脳室にISIS 436689を4 mg/日用量で片側性に投与した。
RNAを、ハンチントンmRNAレベルのリアルタイムPCR解析のため、前部尾状核、後部尾状核、側頭皮質、頭頂皮質、視床下部、中脳、海馬、および脊髄、並びに肝臓および腎臓から抽出した。ハンチントンmRNAレベルを、ヒトプライマープローブセットRTS2617を使用して測定し、そしてサルシクロフィリンAレベルに対して正規化した。結果を、PBS対照と比較して、ハンチントンmRNA発現の%阻害として算出し、そして表61に示す。ISIS 436689は、CNSにおいてヒトハンチントンmRNAレベルの顕著な阻害を生じる。
C57/BL6マウスに、大脳基底核線条体組織におけるハンチントンmRNA発現に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドの半減期および作用期間を測定することを目的として、大脳基底核線条体に対して1回ボーラスとして、ISIS 387898を投与した。
40匹のC57/BL6マウスを、実施例5において記載される方法と同様の方法において、50μgの1回ボーラスとして送達した、ISIS 387898(5' CTCGACTAAAGCAGGATTTC 3'(SEQ ID NO: 53);開始部位はSEQ ID NO: 1の4042および開始位置はSEQ ID NO: 3の4001)により処置した。8匹の対照C57/BL6マウスを、同様の手法でPBSにより処置した。各4匹のマウスのグループを、様々な時点で安楽死させ、そして大脳基底核線条体組織を実施例5に記載される方法と同様の方法で取り出した。
RNAを、ハンチントンmRNAレベルのリアルタイムPCR解析のため、抽出した。大脳基底核線条体組織から、マウス正常ハンチントンmRNAレベルを、マウスプライマープローブセットRTS2633を使用して測定した。結果を、表62に示し、そしてday 7でのPBS対照グループと比較して、%阻害としてあらわした。ISIS 387898の阻害作用は、少なくとも91日延長されることが観察された。
脳組織を細かく切断し、秤量し、ホモジナイズし、そしてフェノール/クロロホルム液-液抽出法を使用して抽出した。この次に、キャピラリーゲル電気泳動動電学的注射の前に、フェニル-結合カラム上の上清の固相抽出を行う。P/ACE MDQキャピラリー電気泳動装置(Beckman Coulter, Fullerton, CA)をゲル-充填キャピラリー電気泳動解析のために使用した。オリゴヌクレオチドピークを、260 nmのUV吸収により検出した。
BACHDマウスに対して、脳組織におけるハンチントンmRNA発現に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドに対する半減期および作用期間を測定することを目的として、ICVにより脳の側脳室に対してISIS 387898を投与した。
28匹のBACHDマウスを、実施例9において記載されるのと同様の手法において、75μg/日でICV投与により2週間にわたり送達した、ISIS 387898により処置した。28匹の対照BACHDマウスを、実施例9において記載されるのと同様の手法において、PBSにより処置した。処置グループおよび対照グループの両方から得たそれぞれ4匹のマウスのグループを、隔週の時点で安楽死させ、そして前頭皮質組織を、実施例9に記載される方法と同様の方法において抽出した。
RNAを、ハンチントンmRNAレベルのリアルタイムPCR解析のため、カニューレ部位に対して前部および後部両方の右半球から抽出した。ヒト変異型ハンチントンmRNAレベルを、ヒトプライマープローブセットRTS2617を使用して測定した。マウス正常ハンチントンmRNAレベルを、マウスプライマープローブセットRTS2633を使用して測定した。ヒト変異型ハンチントンmRNA発現レベルを、表65に示し、そしてPBS対照グループにおいて測定された%阻害の平均と比較した%阻害として表す。マウス正常ハンチントンmRNA発現レベルを表66に示し、そしてPBS対照グループにおいて測定された%阻害の平均と比較した、%阻害として表す。ISIS 387898の阻害作用は、91日間にわたり延長されたことが観察された。
脳組織を、実施例9に記載される方法と同様の方法で処理した。脳の前頭皮質におけるISIS 387898の濃度(μg/g)を、ヒトハンチントンの阻害に対してPBS対照の%としてプロットし(表67および図3)、そしてEC50を、26.4μg/gと算出した。脳組織における時間-依存性のISIS 387898濃度もまた、プロットし(表68および図4)、そしてオリゴヌクレオチドのを21日と算出した。
BACHDマウスに、組織におけるハンチントンmRNA発現に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドの半減期および作用期間を測定することを目的として、脳の側脳室に対してICVにより、ISIS 388241またはISIS 443139を投与した。
20匹のBACHDマウスを、実施例9に記載される方法と同様の方法において、50μg/日で2週間にわたり、ICV投与により送達した、ISIS 38241により処置した。20匹のBACHDマウスを、実施例9に記載される方法と同様の方法において、50μg/日で2週間にわたり、ICV投与により送達した、ISIS 443139により処置した。20匹の対照BACHDマウスを、実施例9に記載される方法と同様の方法において、PBSにより処置した。処置グループおよび対照グループの両方に由来する各4匹のマウスのグループを、1週間おきの間隔で安楽死させ、そして組織を、実施例9に記載される方法と同様の方法で抽出した。
RNAを、ハンチントンmRNAレベルのリアルタイムPCR解析のため、前頭部および後頭部の両方からカニューレ部位まで、右半球から抽出した。ヒト変異型ハンチントンmRNAレベルを、ヒトプライマープローブセットRTS2617を使用して測定した。結果を表69に示し、そしてPBS対照群において測定された平均と比較して、%阻害として表す。ISIS 388241およびISIS 443139両方の阻害活性は、少なくとも16週間にわたり延長されたことが観察された。
脳組織を、実施例9に記載された方法と同様の方法で処理した。後頭部脳組織におけるISIS 388241の時間-依存的濃度をプロットし(表70および図5)、そしてオリゴヌクレオチドの半減期を20日と算出した。後頭部脳組織におけるISIS 443139の時間-依存的濃度をプロットし(表71および図6)、そしてオリゴヌクレオチドの半減期を20日と算出した。
BACHDマウスを、ハンチントンmRNA発現に対するオリゴヌクレオチドのその運動筋肉能力に対する作用をローターロッドアッセイを介して評価することを目的として、脳室内(ICV)投与を介してISISオリゴヌクレオチドにより処置した。
加速性ローターロッドアッセイを、Ugo Basileローターロッド上で行った。動物を2 RPMのスピートのローターロッド上に配置し、ローターロッドを5分間かけて40 RPMまで加速した。落下するまでの期間を記録した。落下するまでの期間を、動物がローターロッドから落下するか、または動物その走るのをやめ、ローターロッドにぶら下がり、そしてその上で回転するかのいずれかで定義される。6ヶ月齢のBACHDマウスおよびそれらの非-トランスジェニック同腹子を、処置の前に1週間、ローターロッド上で走るように訓練した。これは、試行の間に20分間の休憩時間を含む、各5分間の3回連続の試行から構成された。15匹のBACHDマウスのグループを、12μL/日の速度で2週間にわたりAlzet 2002ポンプでICV送達した、50μg/日のISIS 388241で処置した。マウスに対して、実施例6の方法と同様の方法でポンプを外科的に移植した。14匹のBACHDマウスの対照群を、同様にPBSにより処置した。9匹の非-トランスジェニック同腹子の対照群を、同様にPBSにより処置した。
処置期間の最後に、ポンプを取り出し、そして2週間後に、最初の処置後ローターロッドアッセイを行った。ローターロッド行動を、マウスが11ヶ月齢になるまで毎月解析した。各月に、1日あたり3回の試行を2日間行うため、動物をローターロッド上に配置した。結果を、図7ならびに、落下するまでの期間(秒)として表した表72に示す。6ヶ月齢でのベースライン値を処置の前にとり、そして所定の時点は、アッセイを行ったマウスの週齢である。データは、ISIS 388241によるBACHDマウスの処置は、非処置BACHDマウスにおいて観察された場合、落下するまでの期間が増加したことを示す。
BACHDマウスを、ハンチントンmRNA発現に対するオリゴヌクレオチドのその運動筋肉能力に対する作用をローターロッドアッセイを介して評価することを目的として、脳室内(ICV)投与を介してISISオリゴヌクレオチドにより処置した。
加速性ローターロッドアッセイを、Ugo Basileローターロッド上で行った。動物を2 RPMのスピードのローターロッド上に配置し、ローターロッドを5分間かけて40 RPMまで加速した。落下するまでの期間を記録した。落下するまでの期間を、動物がローターロッドから落下するか、またはその走るのをやめ、ローターロッドにぶら下がり、そしてその上で回転するかのいずれかで定義される。2ヶ月齢のBACHDマウスおよびそれらの非-トランスジェニック同腹子を、処置の前に1週間、ローターロッド上で走るように訓練した。これは、試行の間に20分間の休憩時間を含む、各5分間の3回連続の試行から構成された。各17〜21匹のBACHDマウスのグループを、0.5μL/時間の速度で2週間にわたりAlzet 2002ポンプでICV送達された、50μg/日のISIS 388241、75μg/日のISIS 408737、または75μg/日のISIS 387898で処置した。マウスに対して、実施例6で記載された方法と同様の方法で、ポンプを外科的に移植した。20匹のBACHDマウスの対照群を、同様の方法でPBSにより処置した。非-トランスジェニック対照マウスのグループはまた、ISISオリゴヌクレオチドまたはPBSにより、同一様式で投与される。
処置期間の最後に、ポンプを取り出し、そして2週間後に、-処置ローターロッドアッセイを行った。ローターロッド行動を、マウスが10ヶ月齢になるまで毎月解析した。各月に、1日当たり3〜5回の試行走を3日間行うため、動物をローターロッド上に配置した。結果を、落下前の期間を秒として表した表73に示す。2ヶ月齢でのベースライン値を処置の前にとり、そして所定の時点はアッセイを行ったマウスの週齢である。ISIS 387898(表においてヒト-マウスASOと表示される)は、マウスハンチントンmRNAおよびヒトハンチントンmRNAの両方ともについて、交差反応性であり、そしてしたがって、マウスにおいてヒト変異型ハンチントンmRNAおよび野生型マウスハンチントンmRNAの両方共を阻害しうる。ISIS 388241(表においてヒトASOと表示される)は、ヒトハンチントンmRNAを特異的に標的とし、そしてマウスハンチントンmRNAとは8塩基対ミスマッチを有する。したがって、ISIS 388241は、ヒト変異型ハンチントンmRNAのみを特異的に阻害するが、マウスにおける野生型マウスハンチントンmRNAを特異的には阻害しなかった。ISIS 408737(表においてマウスASOと表示される)は、マウスハンチントンmRNAを特異的に標的とし、そしてヒトハンチントンmRNAと7塩基対のミスマッチを有する。したがって、ISIS 408737は、野生型マウスハンチントンmRNAのみを特異的に阻害するが、マウスにおけるヒト変異型ハンチントンmRNAは特異的には阻害しなかった。‘Tg’はBACHDマウスを示し、‘非-Tg’は非-トランスジェニック対照マウスを示す。
R6/2マウスを、ハンチントンmRNA発現に対するオリゴヌクレオチドの脳重量および脳容量に対する作用を評価することを目的として、脳室内(ICV)投与を介してISISオリゴヌクレオチドにより処置した。
R6/2マウスを、ケージ当たり5匹までのグループで飼育した(混合遺伝子型、単一性別)。すべてのマウスを、滅菌されたウッドチップの寝床で底部を覆った靴箱型のケージ中で飼育し、動物に乾燥した寝床を提供するために、必要に応じて頻繁に交換した。この基本的な環境は、すべてのマウス用に、遊び用トンネル、寸断された小巣(nestlet)、およびプラスチックの骨を追加した;すなわち、マウストンネル(琥珀色、公認、透明、BioServ Product# K3323)、Petite Green Gumabone(BioServ Product # K3214)および小巣(Hockley et al., Ann Neurol. 2002、51: 235-242)、を含有する環境的に向上されたケージである。食餌および水は、そのケージ中でマウスに対して自由に利用可能とした。
動物をイソフルレンで麻酔し、そしてその後経心臓氷-冷ソレンセソンのリン酸緩衝液(SPB)の対照となり、そしてSPB中の4%により固定化した。
。脳を取り出し、そして前脳に対してすぐ吻側(嗅球を除去する)および小脳(脊髄)に対してすぐ尾側を冠状切断して、トリミングした。残りの脳を、mgで秤量した。結果は、図8中および表74に提示され、そしてISIS 388817によるR6/2マウス処理においてPBS対照と比較して、脳重量を増加させる。
YAC128マウスを、オープンフィールドアッセイおよび高架式十字迷路アッセイにおいてそれらの性能により測定するように、ハンチントンmRNA発現に対するオリゴヌクレオチドのこれらのマウスにおける不安に対する作用を評価することを目的として、脳室内(ICV)投与を介してISISオリゴヌクレオチドにより処置した。
7匹の5ヶ月齢YAC128マウスのグループを、0.5μl/hrの速度で14日にわたり、Alzet 1004ポンプでICV送達された50μg/日のISIS 388241で処置した。4匹のYAC128マウスの対照群を、同様にPBSにより処置した。8匹の非-トランスジェニックFVB/NJ同腹子の対照群を研究に含ませたが、何の処置も与えなかった。マウスに対して以下のようにしてポンプを外科的に移植した:簡単に述べると、Alzet浸透圧ポンプ(Model 2002)を、製造者の指示書に従って組み立てた。ポンプをアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する溶液で充填し、そして移植の24時間前に、37℃にて一晩、インキュベートした。動物を3%イソフルレンにより麻酔し、そして定位固定フレーム中に配置した。外科手術部位を消毒した後、頭蓋骨上で正中切開を行い、背部に皮下ポケットを作り、そこに事前に充填した浸透圧ポンプを移植した。小型のキリ穴を、右側脳室上に頭蓋骨を通して開けた。プラスチックカテーテルを介して浸透圧ポンプに対して接続したカニューレを、脳室内に配置し、そしてLoctite接着剤を使用して適した位置に接着した。切開を縫合により閉じた。アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはPBSを7または14日間注入し、その後、ポンプを取り出した。動物をさらに2週間かけて回復させ、その後行動解析を行い、そしてマウスを最終的にはInstitutional Animal Care and Use Committeeにより承認された人道的なプロトコルに従って安楽死させた。脳および脊髄の組織を回収し、液体窒素中で瞬間的に凍結した。凍結する前に、脳組織をマウス脳マトリクスを使用して5つの部分(S1、S2、S3、S4、およびS5)に横方向に切断した。部分1〜5は、約互いに2 mmずつ離れており、S1が最も前部であり、そしてS5が最も後部であった。
マウスを、光ビーム中断を使用して30分間のテストセッションの間水平的移動および垂直的移動を測定する、オープンフィールドアリーナ(Med Associates)中に配置した。データを活性モニターソフトウェアを使用して解析し、アリーナ中での全回廊移動、そして不安の測定値としてのアリーナの中央部での移動を測定した。YAC128対照マウスは、それらの非-トランスジェニックの、不安-傾向のより少ないFVB/NJ同腹子と比較して、アリーナ中央部で過ごす時間がより少ないものと予想された。結果を、図9および表75に示し、そしてYAC128マウスのアンチセンスオリゴヌクレオチドでの処置により、オープンフィールドアッセイのパラメータに従って、これらのマウスにおいて不安が低下したことが示される。
装置は、2つの開放されたアーム部および2つの閉じられたアーム部からなり、65×6.25 cmを測定し、そして底部から50 cm上を評価した。マウスを装置の中央部に配置し、そしてそれらの位置を5分間のテストセッションにわたり記録した。YAC128対照マウスは、それらの非-トランスジェニックの、不安-傾向のより少ないFVB/NJ同腹子と比較して、装置の開放されたアーム部にて過ごす時間がより短いことが予想された。結果を、図10および表76に示し、そしてそしてYAC128マウスのアンチセンスオリゴヌクレオチドでの処置により、高架式十字迷路アッセイのパラメータに従って、これらのマウスにおいて不安が低下したことが示される。
全RNAを、ハンチントンmRNAレベルのリアルタイムPCR解析のため、RNeasy Mini prep kit(Qiagen)を使用して、RNeasy Protect Mini Kit(Qiagen, Mississauga, ON, Canada)によりマウス脳および脊髄から抽出した。Q-PCR反応を、ABI Prism 7700配列検出器(Applied Biosystems)上で行いそして解析した。ヒトハンチントンmRNAレベルを、ヒトプライマープローブセットRTS2686を使用して測定し、そしてペプチジルプロリルイソメラーゼA mRNAレベルに対して正規化した。
C57/BL6マウスを、これらのマウスにおけるオリゴヌクレオチドの耐容性を評価することを目的として、右側脳室に対して脳室内(ICV)投与することを介してISISオリゴヌクレオチドにより処置した。
各5匹のC57/BL6マウスのグループに対して、0.5μL/日の速度で2週間にわたり、Alzet 2002ポンプでICV送達された150μg/日のISIS 387916、ISIS 437527、ISIS 444578、ISIS 444584、ISIS 444607、ISIS 444608、ISIS 444627、ISIS 444652、ISIS 444659、ISIS 444660、またはISIS 444661を投与した。6匹のC57/BL6マウスの対照群を、PBSにより同様に処置した。ポンプを移植しおよびオリゴヌクレオチド投与するための手順は、実施例6に記載される通りである。
全RNAを、脳のハンチントンmRNAレベルのリアルタイムPCR解析のため、RNeasy Mini prep kit(Qiagen)を使用して、前頭皮質および後頭皮質から抽出した。RT-PCR反応を、ABI Prism 7700配列検出器(Applied Biosystems)上で行った。マウスハンチントンmRNAレベルを、マウスプライマープローブセットRTS2633を使用して測定し、そしてシクロフィリンmRNAレベルに対して正規化した。結果をPBS対照と比較した%減少として表78に示した。ISIS 387916、ISIS 437527、ISIS 444627、およびISIS 444652はすべて、マウスハンチントンmRNA(SEQ ID NO: 3)とのあいだで1つのミスマッチを有し、そしてしたがって、対照と比較して、マウスmRNAレベルの顕著な阻害を示さなかった。
体重を、研究期間のあいだにわたり定期的な間隔で測定し、そして表80に示す。これらの体重は、耐容性の指標として使用された。ISIS 437527、ISIS 444584、およびISIS 444652により処置されたマウスは、研究期間のあいだにわたり一貫した体重を有し、そして本研究において含まれるISISオリゴヌクレオチドのすべての中で最も耐容性であるとみなされた。‘n/a’は、そのマウスグループについてはデータがないことを示す。
Sprague-Dawleyラットを、CNS毒性の測定としてミクログリアマーカーAIF1の誘導についてスクリーニングすることを目的として、大脳基底核線条体へのボーラス投与を介してISISオリゴヌクレオチドにより処置した。
4匹のSprague-Dawleyラットのグループに対して、1回ボーラスとして送達された25μg、50μg、75μg、または100μgの濃度のISIS 388241、ISIS 443139、ISIS 436671、ISIS 437527、ISIS 444584、ISIS 444591、またはISIS 444652を投与した。
RNAを、AIF1 mRNAレベルのリアルタイムPCR解析のために、大脳基底核線条体組織から抽出した。ラットAIF1レベルを、ラットプライマープローブセットrAif1_LTS00219を使用して測定した。結果を、PBS対照のAIF1発現と比較して、AIF1発現%として算出し、そして表81に示す。結果は、ISIS 388241、ISIS 443139、ISIS 436671、ISIS 444591、ISIS 437527、ISIS 444584、およびISIS 444652は、ラット脳において十分に耐容であったことを示す。
RNAを、ハンチントンmRNAレベルのリアルタイムPCR解析のため、大脳基底核線条体組織から抽出した。ラットハンチントンmRNAレベルを、ラットプライマープローブセットrHtt_LTS00343を使用して測定した。結果を、PBS対照のハンチントン発現と比較したハンチントン発現の減少%として算出し、そして表82に示す。ISIS 388241およびISIS 443139は、ラット遺伝子配列(SEQ ID NO: 5)とそれぞれ6塩基対またはそれ以上のミスマッチを有し、そしてしたがって、対照と比較して、ラットmRNAレベルの顕著な阻害を示さない。ISIS 444584は、ラット遺伝子配列(SEQ ID NO: 5)と3つのミスマッチを有し、そしてしたがって、対照と比較して、ラットmRNAレベルの顕著な阻害を示さない。
ISIS 437527、ISIS 444584、およびISIS 444652を、様々な濃度で、カニクイザル初代肝細胞において試験した。ベンチマークオリゴヌクレオチド、ISIS 387916およびISIS 388241もまた、比較のために含ませた。細胞を、ウェル当たり35,000細胞の密度でまき、そして39.0625 nM、78.125 nM、156.25 nM、312.5 nM、625 nM、1,250 nM、2,500 nM、5,000 nM、10,000 nM、および20,000 nMの濃度のそれぞれのアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いて、エレクトロポレーションを使用してトランスフェクトした。約16時間後、RNAを細胞から単離し、そしてハンチントンmRNA転写物レベルを、プライマープローブセットRTS2686を使用した定量的リアルタイムPCRにより測定した。ハンチントンmRNA転写物レベルを、RIBOGREEN(登録商標)により測定されるように、全RNA含量に対して正規化した。結果を、非処置対照細胞と比較して、ハンチントンの%阻害として、表83において示す。対照オリゴヌクレオチド、ISIS 141923を、このアッセイに含ませ、そして予想されたように、ハンチントンmRNAの阻害を示さなかった。
BACHDマウスに対して、大脳基底核線条体におけるハンチントンmRNA発現に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドの作用期間、またはその半減期を測定することを目的として、大脳基底核線条体に対する1回ボーラスとして、ISISオリゴヌクレオチドを投与した。
各25匹のBACDマウスのグループを、実施例4に記載された手順と同様の手順で、40μgの1回ボーラスとして送達される、ISIS 388241、ISIS 436689、ISIS 436671、またはISIS 444591で処置した。25匹のBACHDマウスの対照群を、同様の手順でPBSにより処置した。様々な時点において、各グループ由来の5匹のマウスを安楽死させ、そして大脳基底核線条体組織を取り出した。精密に湾曲したピンセット一対を、海馬の直前の脳中にまっすぐ下に配置し、皮質に横断方向の切り込みを作り、そしてその下の組織を鈍性切開した。精密に湾曲させたピンセットもう一対の先端を、海馬と嗅球とのあいだの中程の正中洞に沿ってまっすぐ下に配置し、縦方向の切り込みを作り、脳梁を鈍性切開により切断した。その後、最初の一対のピンセットを使用して、生じた皮質の一隅を反転させて、大脳基底核線条体および内包を暴露し、ついで内包を切断して大脳基底核線条体から取り去った。2つめの一対のピンセットを湾曲した末端が大脳基底核線条体のいずれかの側面に接触するように配置し、それを押し下げて組織を単離した。最初の一対のピンセットを使用して、大脳基底核線条体の後部末端をつまみ、脳から大脳基底核線条体を取り出した。
RNAを、組織ハンチントンmRNAレベルのリアルタイムPCR解析のため、大脳基底核線条体前部および後部から抽出した。ヒト変異型ハンチントンmRNAレベルを、RTS2617を使用して測定した。マウス正常ハンチントンmRNAレベルを、マウスプライマープローブセットRTS2633を使用して測定した。結果を表84および表85に示し、そしてweek 1、week 10、およびweek 20にて、PBS対照群の平均と比較した%阻害として表す。脳の前頭部におけるISISオリゴヌクレオチドの半減期を阻害データから算出し、そして表86に示す。
体重を通常の間隔で測定し、そして研究の開始時のマウスの体重の%として表87に示す。これらの体重を、耐容性の指標として使用した。ISISオリゴヌクレオチドで処置したマウスのいずれにおいても、体重の不都合な変化は存在しなかった。
Sprague Dawleyラットに対して、単回投与、繰り返し投与、または持続的注入のいずれかとして、くも膜下腔(IT)投与によりISIS 437527を投与した。
ラットをイソフルレンを使用して安楽死させ、そして28-ゲージのポリウレタンカテーテルを各ラットのIT腰部スペース中に配置した。カテーテルの基部末端を、投与軸受台に接着させ、それを皮膚を介してボーラス注射を与えたグループの動物に対して進展させた。持続的注入を受けるグループの動物のためのカテーテルを、ALZETポンプ(Model 2ML1)に対して接続し、それを各動物の背部側の皮下ポケットに配置した。手術後に、動物は、セフチオフルナトリウム(5 mg/kg)および酒石酸ブトルファノール(0.05 mg/kg)の単回筋肉内投与を受けた。持続的注入を受けるラットは、オリゴヌクレオチド投与をすぐに受け始めた。ボーラス注射を受ける動物には、少なくとも5日の手術回復期間を与え、その後カテーテルの開存性を評価した。
RNAを、ハンチントンmRNAレベルのリアルタイムPCR解析のため、前頭皮質、側頭皮質、および頸髄から抽出した。ラットハンチントンmRNAレベルを、シクロフィリンレベルに対して正規化して、プライマープローブセットrHtt_LTS00343を使用して測定した。結果を表88に示し、そしてPBS対照群の平均と比較した%阻害として表す。
RNAを、AIF1 mRNAレベルのリアルタイムPCR解析のため、前頭皮質、側頭皮質、および頸髄から抽出した。ラットAIF1レベルを、ラットプライマープローブセットrAif1_LTS00219を使用して測定した。結果を、PBS対照のAIF1発現と比較してAIF1発現の%として算出し、そして表89に示す。結果は、繰り返しITボーラス投与により、頸髄組織にて炎症を引き起こすことを示す。持続的IT投与および単回ITボーラス投与は、ラットにおいて良好な耐容性を示した。
カニクイザルに対して、様々なCNS組織におけるハンチントンmRNA発現に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドの半減期およひ作用期間を測定することを目的として、ISIS 436689をくも膜下腔(IT)に投与した。
研究を、Northern Biomedical Research, MIにて行った。処置の開始前に、サルを4週間のあいだ隔離して飼育し、その間に血清化学および血液学の標準的なパネル、卵および寄生虫に関する糞便サンプルの調査、および結核試験を行なって、異常なサルまたは病気のサルをスクリーニング抽出した。サルに対して、皮下チタンアクセスポート(P.A.S. PORT(登録商標)Elite Plastic/Titanium portal with Ultra lock connector)に接続したポリウレタンカテーテルを使用して、くも膜下腔腰部カテーテルにより移植した。外部ポンプを使用した持続的注入のため、動物を麻酔して、投与装置をポートに接続した。動物を、0.04 mg/kgの投与量の硫酸アトロピンで、皮下注射により事前処置した。およそ15分後、8 mg/kgのケタミンHClの筋肉内投与を行い、鎮静を誘導した。動物を、麻酔の手術面に対してマスクし、挿管し、そして約1 L/分の酸素および2%のハロセンまたはイソフルレンで維持した。動物に5 mg/kgのセフチオフルナトリウム抗生物質の単回筋肉内投与を与えた。改変ニードルサポートの配置のため、ポートのそばに切開を行った。改変ニードルを、ポートに配置し、そして縫合して固定した。手術からの回復の際、ジャケットを動物に装着した。
RNA解析
RNAを、ハンチントンmRNAレベルのリアルタイムPCR解析のため、プライマープローブセットRTS2617を用いて、腰髄、胸髄、頸髄、前頭皮質、後頭皮質、小脳皮質、尾状組織、海馬、中脳、および脳橋から抽出した。脊髄の様々な部分で測定された結果を、表90に示し、そして8週にPBS対照群において測定された結果と比較した%阻害として示す。脳の様々な部分で測定された結果を、表91に示し、そして8週にPBS対照群において測定された結果と比較した%阻害として示す。
組織(20 mg)を細かく切断し、秤量し、そしてホモジナイズして、フェノール/クロロホルムを使用して液体/液体抽出を行った。上清を取り出し、凍結乾燥し、そしてヒトEDTA血漿(1 mL)中で戻し、その後ハイブリダイゼーションELISA法を使用して解析した。
Claims (76)
- SEQ ID NO: 6、9、10、11、12、13、14、15、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、32、33、35、または36に記載された配列の少なくとも8個の隣接した核酸塩基を含む、12個〜30個の連結した連結したヌクレオシドからなる修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物。
- SEQ ID NOsは、SEQ ID NO: 12、22、28、30、32、または33からなる群のいずれかである、請求項1に記載の化合物
- 修飾されたオリゴヌクレオチドが、15〜25個の連結したヌクレオシドからなる、請求項1に記載の化合物。
- 修飾されたオリゴヌクレオチドが、18〜21個の連結したヌクレオシドからなる、請求項1に記載の化合物。
- 連結したヌクレオシドが、SEQ ID NO: 1のヌクレオチド4384-4403、4605-4624、4607-4626、4608-4627、4609-4628、4610-4629、4617-4636、4622-4639、4813-4832、4814-4833、4823-4842、4860-4877、4868-4887、4925-4944、4928-4947、4931-4950、4931-4948、4955-4974、4960-4977、5801-5820、5809-5828、5809-5826、101088-101105、115066-115085、4607-4626、4608-4627、4609-4628、4610-4629、4813-4832、4862-4881、5809-5828および4928-4947から選択される領域中で相補的な少なくとも8個の連続した核酸塩基を含む、12〜30個の連結したヌクレオシドからなる、修飾されたオリゴヌクレオチドをふくむ化合物。
- 核酸塩基配列が、SEQ ID NO: 6、9、10、11、12、13、14、15、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、32、33、35、または36において記載される配列の、少なくとも15個の隣接した核酸塩基を含む、請求項3に記載の化合物。
- 配列番号が、SEQ ID NO: 12、22、28、30、32、または33からなる群のいずれかである、請求項6に記載の化合物。
- 核酸塩基配列が、SEQ ID NO: 6、9、10、11、12、13、14、15、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、32、33、35、または36において記載される配列の少なくとも18個の隣接した核酸塩基を含む、請求項4に記載の化合物。
- 配列番号が、SEQ ID NO: 12、22、28、30、32、または33からなる群のいずれかである、請求項8に記載の化合物。
- 修飾されたオリゴヌクレオチドが、一本鎖オリゴヌクレオチドである、請求項1に記載の化合物。
- 修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、SEQ ID NO 1に対して少なくとも90%相補的である、請求項1に記載の化合物。
- 修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、SEQ ID NO 1に対して少なくとも95%相補的である、請求項1に記載の化合物。
- 修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、SEQ ID NO 1に対して100%相補的である、請求項1に記載の化合物。
- 少なくとも1つのヌクレオシド間結合が、修飾ヌクレオシド間結合である、請求項1に記載の化合物。
- 各ヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項14に記載の化合物。
- 修飾されたオリゴヌクレオチドの少なくとも1つのヌクレオシドが、修飾糖を含む、請求項1に記載の化合物。
- 少なくとも1つの修飾糖が、2環糖である、請求項16に記載の化合物。
- 少なくとも1つの2環糖のそれぞれが、4'-CH2-N(R)-O-2'ブリッジを含み、ここでRは、独立して、H、C1〜C12アルキル、または保護基である、請求項17に記載の化合物。
- 少なくとも1つの2環糖のぞれぞれが、4'-CH(CH3)-O-2'ブリッジを含む、請求項17に記載の化合物。
- 少なくとも1つの修飾糖が、2'-O-メトキシエチル基を含む、請求項16に記載の化合物。
- 少なくとも1つのテトラヒドロピラン修飾ヌクレオシドを含み、ここで、テトラヒドロピラン環は、フラノース環を置換する、請求項1に記載の化合物。
- 少なくとも1つのヌクレオシドが、修飾核酸塩基を含む、請求項1に記載の化合物。
- 修飾核酸塩基が、5-メチルシトシンである、請求項23に記載の化合物。
- 修飾されたオリゴヌクレオチドが:
連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップ部分;
連結したヌクレオシドからなる5'ウィング部分;そして
連結したヌクレオシドからなる3'ウィング部分;
を含み、ここでギャップ部分は、5'ウィング部分と3'ウィング部分との間に位置し、そしてそれぞれのウィング部分のそれぞれのヌクレオシドは修飾糖を含む、請求項1に記載の化合物。 - 修飾されたオリゴヌクレオチドが:
10個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップ部分;
5個の連結したヌクレオシドからなる5'ウィング部分;そして
5個の連結したヌクレオシドからなる3'ウィング部分;
を含み、ここでギャップ部分は、5'ウィング部分と3'ウィング部分との間に位置し、それぞれのウィング部分のそれぞれのヌクレオシドが2'-O-メトキシエチル糖を含み;そしてそれぞれのヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合である、請求項25に記載の化合物。 - 修飾されたオリゴヌクレオチドが:
8個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップ部分;
5個の連結したヌクレオシドからなる5'ウィング部分;そして
5個の連結したヌクレオシドからなる3'ウィング部分;
を含み、ここでギャップ部分は、5'ウィング部分と3'ウィング部分との間に位置し、それぞれのウィング部分のそれぞれのヌクレオシドが2'-O-メトキシエチル糖を含み;そしてそれぞれのヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合である、請求項25に記載の化合物。 - 修飾されたオリゴヌクレオチドが:
8個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップ部分;
6個の連結したヌクレオシドからなる5'ウィング部分;そして
6個の連結したヌクレオシドからなる3'ウィング部分;
を含み、ここでギャップ部分は、5'ウィング部分と3'ウィング部分との間に位置し、それぞれのウィング部分のそれぞれのヌクレオシドは、2'-O-メトキシエチル糖を含み;そしてそれぞれのヌクレオシド間結合はホスホロチオエート結合である、請求項25に記載の化合物。 - 修飾されたオリゴヌクレオチドが、20個の連結したヌクレオシドからなる、請求項1に記載の化合物。
- 請求項1〜29のいずれかの化合物またはその塩、および少なくとも1つの薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含む、組成物。
- 動物に対して、請求項1〜29のいずれかの化合物または組成物を投与することを含む方法。
- 動物がヒトである、請求項31に記載の方法。
- 化合物を投与することにより、ハンチントン病の進行を予防し、処置し、軽減しまたは遅らせる、請求項31に記載の方法。
- 化合物または組成物と、第2の薬剤とを共投与することを含む、請求項31に記載の方法。
- 化合物または組成物と、第2の薬剤とを、付随して投与する、請求項34に記載の方法。
- 投与が、CNSに対するものである、請求項31に記載の方法。
- 動物におけるハンチントンmRNAまたはタンパク質の発現を減少させるための方法であって、その動物に対して請求項1〜29のいずれかの化合物または組成物を投与して、動物におけるハンチントンmRNAまたはタンパク質の発現することを含む、前記方法。
- 動物がヒトである、請求項37に記載の方法。
- ハンチントンmRNAまたはタンパク質発現を減少させることは、ハンチントン病の進行を予防し、治療し、軽減しまたは遅らせる、請求項37に記載の方法。
- 化合物または組成物と、第2の薬剤とを共投与することを含む、請求項37に記載の方法。
- 化合物または組成物と第2の薬剤とが、付随して投与される. 請求項40に記載の方法。
- 投与がCNSに対するものである、請求項37に記載の方法。
- ハンチントン病を有するヒトを治療する方法であって、その疾患を有するヒトを同定し、そしてそのヒトに対して請求項1〜29のいずれかに記載される治療的有効量の化合物または組成物を投与し、それによりハンチントン病についてそのヒトを治療することを含む、前記方法。
- 治療が、ヒトにおける情動不安、協調不足、意図せず開始される運動、意図せず完了されない運動、歩行不安定、舞踏病、硬直、身もだえするような運動、異常姿位、不安定性、異常な顔貌、そしゃく困難、嚥下困難、発話困難、発作、睡眠障害、計画性低下、柔軟性低下、抽象的思考低下、ルール習得低下、適切な動作の開始の低下、不適切な動作の阻害の低下、短期記憶の低下、長期記憶の低下、パラノイア、見当識障害、精神錯乱、幻覚、認知症、不安、抑鬱症、感情鈍麻、自己中心性、攻撃性、強迫行動、易刺激性、自殺念慮、脳容量の低下、筋萎縮、心不全、グルコース耐性の低下、体重減少、骨粗鬆症、および精巣萎縮の少なくとも1つを減少させる、請求項43に記載の方法。
- 化合物または組成物と第2の薬剤とを共投与することを含む、請求項43に記載の方法。
- 化合物または組成物と、第2の薬剤とを、付随して投与する、請求項45に記載の方法。
- 投与がCNSに対するものである、請求項43に記載の方法。
- ヒトに対して、請求項1〜29のいずれかに記載の治療的有効量の化合物を投与する工程、それによりハンチントン病を弱めさせまたは予防する工程、を含む、ハンチントン病を弱めまたは予防する方法。
- 化合物または組成物と第2の薬剤とを共投与することを含む、請求項48に記載の方法。
- 化合物または組成物と第2の薬剤とを付随して投与する、請求項49に記載の方法。
- 投与がCNSに対するものである、請求項48に記載の方法。
- ハンチントン病の症状を軽減することを必要とするヒトに対して、12〜30個の連結したヌクレオシドからなるSEQ ID NO:1に対して特異的にハイブリダイズする修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を投与して、それによりヒトにおけるハンチントン病の症状を軽減することを含む、ハンチントン病の症状を軽減するための方法。
- ハンチントン病に関連する症状の進行速度を減少させることが必要なヒトに対して、12〜30個の連結したヌクレオシドからなるSEQ ID NO:1に対して特異的にハイブリダイズする修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を投与して、それによりヒトにおけるハンチントン病の症状の進行速度を減少させる、ハンチントン病に関連する症状の進行速度を減少させるための方法。
- ハンチントン病に関連する症状により示される分解を反転させることを必要とするヒトに対して、12〜30個の連結したヌクレオシドからなるSEQ ID NO:1に対して特異的にハイブリダイズする修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物を投与して、それによりヒトにおいてハンチントン病の症状により示される分解を反転させる、ハンチントン病に関連する症状により示される分解を反転させるための方法。
- 修飾されたオリゴヌクレオチドが、一本鎖オリゴヌクレオチドである、請求項52、53、または54に記載の方法。
- 修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、SEQ ID NO 1に対して少なくとも90%相補的である、請求項52、53、または54に記載の方法。
- 修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、SEQ ID NO 1に対して少なくとも95%相補的である、請求項52、53、または54に記載の方法。
- 修飾されたオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、SEQ ID NO 1に対して100%相補的である、請求項52、53、または54に記載の方法。
- 修飾されたオリゴヌクレオチドが、20個の連結したヌクレオシドからなる、請求項52、53、または54に記載の方法。
- 症状が、少なくとも1つの身体的症状、少なくとも1つの認知症状、少なくとも1つの精神医学的症状、そして少なくとも1つの末梢症状のうちの少なくとも1つである、請求項52、53、または54に記載の方法。
- 少なくとも1つの身体的症状が、情動不安、協調不足、意図せず開始される運動、意図せず完了されない運動、歩行不安定、舞踏病、硬直、身もだえするような運動、異常姿位、不安定性、異常な顔貌、そしゃく困難、嚥下困難、発話困難、発作、および睡眠障害からなる群から選択される、請求項60に記載の方法。
- 少なくとも1つの認知症状が、計画性低下、柔軟性低下、抽象的思考低下、ルール習得低下、適切な動作の開始の低下、不適切な動作の阻害の低下、短期記憶の低下、長期記憶の低下、パラノイア、見当識障害、精神錯乱、幻覚および認知症からなる群から選択される、請求項60に記載の方法。
- 少なくとも1つの精神医学的症状が、不安、抑鬱症、感情鈍麻、自己中心性、攻撃性、強迫行動、易刺激性および自殺念慮からなる群から選択される、請求項60に記載の方法。
- 少なくとも1つの末梢症状、脳容量の低下、筋萎縮、心不全、グルコース耐性の低下、体重減少、骨粗鬆症、および精巣萎縮からなる群から選択される、請求項60に記載の方法。
- 化合物が、SEQ ID NO: 6、9、10、11、12、13、14、15、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、32、33、35、または36に記載された配列の少なくとも12個の隣接した核酸塩基を含む、12〜30個の連結したヌクレオシドからなる修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、請求項52〜64のいずれか1項に記載の方法。
- 化合物が、SEQ ID NO: 12、22、28、30、32、または33に記載される配列の少なくとも12個の隣接した核酸塩基を含む12〜30個の連結したヌクレオシドからなる修飾されたオリゴヌクレオチドを含む、請求項1〜29のいずれかに記載される化合物。
- 動物に対して、治療的有効量の請求項1〜29のいずれかに記載される化合物を投与し、それによりハンチントンの発現を阻害することにより、ハンチントンと関連する疾患または症状を有する動物を治療する際に使用するための、請求項1〜29のいずれかに記載される化合物
- 疾患または症状が、神経学的障害である、請求項67に記載の化合物。
- 疾患または症状がハンチントン病である、請求項68に記載の化合物。
- 動物がヒトである、請求項67に記載の化合物。
- 動物に対して治療的有効量の化合物を投与し、それによりハンチントンの発現を阻害することにより、ハンチントンと関連する疾患または症状を有する動物において使用するための、SEQ ID NO: 6、9、10、11、12、13、14、15、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、32、33、35、または36において記載される配列の少なくとも8個の隣接した核酸塩基を含む、12〜30個の連結したヌクレオシドからなる修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物。
- 動物に対して治療的有効量の化合物を投与して、ハンチントン病の進行を予防し、治療し、軽減し、または遅らせることにより、ハンチントンに関連した疾患または症状を有する動物において使用するための、SEQ ID NO: 6、9、10、11、12、13、14、15、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、32、33、35、または36において記載される配列の少なくとも8個の隣接した核酸塩基を含む12〜30個の連結したヌクレオシドからなる修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物。
- 動物に対して治療的有効量の化合物を投与して、それによりハンチントンの発現を阻害することにより、ハンチントンに関連した疾患または症状を有する動物において使用するための、SEQ ID NO: 12、22、28、30、32、または33において記載される配列の少なくとも8個の隣接した核酸塩基を含む12〜30個の連結したヌクレオシドからなる修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物。
- 動物に対して治療的有効量の化合物を投与して、ハンチントン病の進行を予防し、治療し、軽減し、または遅らせることにより、ハンチントンに関連した疾患または症状を有する動物において使用するための、SEQ ID NO: 12、22、28、30、32、または33において記載された配列の少なくとも8個の隣接した核酸塩基を含む12〜30個の連結したヌクレオシドからなる修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物
- 動物に対して治療的有効量の化合物を投与して、それによりハンチントンの発現を阻害することにより、ハンチントンに関連した疾患または症状を有する動物において使用するための、SEQ ID NO: 1のヌクレオチド4384-4403、4605-4624、4607-4626、4608-4627、4609-4628、4610-4629、4617-4636、4622-4639、4813-4832、4814-4833、4823-4842、4860-4877、4868-4887、4925-4944、4928-4947、4931-4950、4931-4948、4955-4974、4960-4977、5801-5820、5809-5828、5809-5826、101088-101105、115066-115085、4607-4626、4608-4627、4609-4628、4610-4629、4813-4832、4862-4881、5809-5828および4928-4947〜選択される領域内部において相補的な少なくとも8個の隣接した核酸塩基部分を含む、12〜30個の連結したヌクレオシドからなる修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物。
- 動物に対して治療的有効量の化合物を投与して、ハンチントン病の進行を予防し、治療し、軽減し、または遅らせることにより、ハンチントンに関連した疾患または症状を有する動物において使用するための、SEQ ID NO: 1のヌクレオチド4384-4403、4605-4624、4607-4626、4608-4627、4609-4628、4610-4629、4617-4636、4622-4639、4813-4832、4814-4833、4823-4842、4860-4877、4868-4887、4925-4944、4928-4947、4931-4950、4931-4948、4955-4974、4960-4977、5801-5820、5809-5828、5809-5826、101088-101105、115066-115085、4607-4626、4608-4627、4609-4628、4610-4629、4813-4832、4862-4881、5809-5828および4928-4947〜選択される領域内部において相補的な少なくとも8個の隣接した核酸塩基部分を含む、12〜30個の連結したヌクレオシドからなる修飾されたオリゴヌクレオチドを含む化合物。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US24185309P | 2009-09-11 | 2009-09-11 | |
US61/241,853 | 2009-09-11 | ||
PCT/US2010/048532 WO2011032045A1 (en) | 2009-09-11 | 2010-09-10 | Modulation of huntingtin expression |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015178281A Division JP6153578B2 (ja) | 2009-09-11 | 2015-09-10 | ハンチンチン発現の修飾 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2013504329A true JP2013504329A (ja) | 2013-02-07 |
JP2013504329A5 JP2013504329A5 (ja) | 2015-05-14 |
JP5809146B2 JP5809146B2 (ja) | 2015-11-10 |
Family
ID=43732828
Family Applications (5)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012528949A Active JP5809146B2 (ja) | 2009-09-11 | 2010-09-10 | ハンチンチン発現の修飾 |
JP2015178281A Active JP6153578B2 (ja) | 2009-09-11 | 2015-09-10 | ハンチンチン発現の修飾 |
JP2017106418A Pending JP2017184754A (ja) | 2009-09-11 | 2017-05-30 | ハンチンチン発現の修飾 |
JP2018180351A Active JP6704439B2 (ja) | 2009-09-11 | 2018-09-26 | ハンチンチン発現の修飾 |
JP2020083833A Pending JP2020115894A (ja) | 2009-09-11 | 2020-05-12 | ハンチンチン発現の修飾 |
Family Applications After (4)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015178281A Active JP6153578B2 (ja) | 2009-09-11 | 2015-09-10 | ハンチンチン発現の修飾 |
JP2017106418A Pending JP2017184754A (ja) | 2009-09-11 | 2017-05-30 | ハンチンチン発現の修飾 |
JP2018180351A Active JP6704439B2 (ja) | 2009-09-11 | 2018-09-26 | ハンチンチン発現の修飾 |
JP2020083833A Pending JP2020115894A (ja) | 2009-09-11 | 2020-05-12 | ハンチンチン発現の修飾 |
Country Status (19)
Country | Link |
---|---|
US (8) | US8906873B2 (ja) |
EP (3) | EP3178933B1 (ja) |
JP (5) | JP5809146B2 (ja) |
KR (5) | KR102173836B1 (ja) |
CN (3) | CN102625809B (ja) |
AU (4) | AU2010292003B2 (ja) |
BR (1) | BR112012005448B1 (ja) |
CA (2) | CA2773886C (ja) |
DK (1) | DK2475675T3 (ja) |
ES (2) | ES2615534T3 (ja) |
HU (1) | HUE033113T2 (ja) |
IL (4) | IL218482A (ja) |
MX (2) | MX340397B (ja) |
NZ (3) | NZ714887A (ja) |
PL (1) | PL2475675T3 (ja) |
PT (1) | PT2475675T (ja) |
RU (2) | RU2562861C2 (ja) |
SI (1) | SI2475675T1 (ja) |
WO (1) | WO2011032045A1 (ja) |
Families Citing this family (43)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2203173B1 (en) | 2007-10-26 | 2015-12-23 | Academisch Ziekenhuis Leiden | Means and methods for counteracting muscle disorders |
EP2119783A1 (en) | 2008-05-14 | 2009-11-18 | Prosensa Technologies B.V. | Method for efficient exon (44) skipping in Duchenne Muscular Dystrophy and associated means |
US8901095B2 (en) | 2008-07-29 | 2014-12-02 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Selective inhibition of polyglutamine protein expression |
KR101881596B1 (ko) | 2008-12-02 | 2018-07-24 | 웨이브 라이프 사이언시스 재팬 인코포레이티드 | 인 원자 변형된 핵산의 합성 방법 |
SG177564A1 (en) | 2009-07-06 | 2012-02-28 | Ontorii Inc | Novel nucleic acid prodrugs and methods of use thereof |
WO2012039448A1 (ja) | 2010-09-24 | 2012-03-29 | 株式会社キラルジェン | 不斉補助基 |
US8569254B2 (en) * | 2010-12-10 | 2013-10-29 | National Yang Ming University | Methods for modulating the expression and aggregation of CAG-expanded gene product in cells and methods for identifying agents useful for doing the same |
EP2699269A1 (en) * | 2011-04-22 | 2014-02-26 | Prosensa Technologies B.V. | New compounds for treating, delaying and/or preventing a human genetic disorder such as myotonic dystrophy type 1 (dm1) |
CN103597074A (zh) * | 2011-06-16 | 2014-02-19 | Isis制药公司 | 成纤维细胞生长因子受体4表达的反义调节 |
EP2734208B1 (en) | 2011-07-19 | 2017-03-01 | Wave Life Sciences Ltd. | Methods for the synthesis of functionalized nucleic acids |
CN104203289B (zh) | 2012-01-27 | 2020-11-03 | 比奥马林技术公司 | 用于治疗杜兴型肌营养不良症和贝克型肌营养不良症的具有改善特性的rna调节性寡核苷酸 |
WO2013159108A2 (en) * | 2012-04-20 | 2013-10-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof |
WO2014010718A1 (ja) | 2012-07-13 | 2014-01-16 | 株式会社新日本科学 | キラル核酸アジュバント |
KR102213609B1 (ko) | 2012-07-13 | 2021-02-08 | 웨이브 라이프 사이언시스 리미티드 | 키랄 제어 |
EP2872485B1 (en) | 2012-07-13 | 2020-12-16 | Wave Life Sciences Ltd. | Asymmetric auxiliary group |
EP2906255B1 (en) | 2012-10-12 | 2023-02-22 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense compounds and uses thereof |
TWI657819B (zh) * | 2013-07-19 | 2019-05-01 | 美商Ionis製藥公司 | 用於調節τ蛋白表現之組合物 |
CN103601798B (zh) * | 2013-11-11 | 2015-11-18 | 杭州璞题生物科技有限公司 | 亨廷顿蛋白的酰基化修饰方法 |
JPWO2015108048A1 (ja) | 2014-01-15 | 2017-03-23 | 株式会社新日本科学 | 抗腫瘍作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗腫瘍剤 |
WO2015108047A1 (ja) | 2014-01-15 | 2015-07-23 | 株式会社新日本科学 | 免疫誘導活性を有するキラル核酸アジュバンド及び免疫誘導活性剤 |
JPWO2015108046A1 (ja) | 2014-01-15 | 2017-03-23 | 株式会社新日本科学 | 抗アレルギー作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗アレルギー剤 |
AU2015207773B2 (en) | 2014-01-16 | 2021-06-17 | Wave Life Sciences Ltd. | Chiral design |
MX2017015302A (es) | 2015-05-29 | 2018-03-28 | Univ Leland Stanford Junior | Agentes nucleosidos para la reduccion de la actividad perjudicial de los genes que contienen repeticiones de nucleotidos extendidas. |
MA43072A (fr) | 2015-07-22 | 2018-05-30 | Wave Life Sciences Ltd | Compositions d'oligonucléotides et procédés associés |
LT3386511T (lt) | 2015-12-10 | 2021-08-25 | Ptc Therapeutics, Inc. | Hantingtono ligos gydymo būdai |
US10973930B2 (en) | 2016-02-18 | 2021-04-13 | The Penn State Research Foundation | Generating GABAergic neurons in brains |
MA45270A (fr) | 2016-05-04 | 2017-11-09 | Wave Life Sciences Ltd | Compositions d'oligonucléotides et procédés associés |
US10457940B2 (en) * | 2016-09-22 | 2019-10-29 | University Of Massachusetts | AAV treatment of Huntington's disease |
CA3043768A1 (en) | 2016-11-29 | 2018-06-07 | PureTech Health LLC | Exosomes for delivery of therapeutic agents |
EP3634953B1 (en) | 2017-06-05 | 2024-01-03 | PTC Therapeutics, Inc. | Compounds for treating huntington's disease |
EP3645121A4 (en) | 2017-06-28 | 2021-03-17 | PTC Therapeutics, Inc. | HUNTINGTON'S DISEASE TREATMENT METHODS |
CN111182898B (zh) | 2017-06-28 | 2024-04-16 | Ptc医疗公司 | 用于治疗亨廷顿氏病的方法 |
US20210009590A1 (en) | 2018-03-27 | 2021-01-14 | Ptc Therapeutics, Inc. | Compounds for treating huntington's disease |
EP3814357B1 (en) | 2018-06-27 | 2024-05-01 | PTC Therapeutics, Inc. | Heterocyclic and heteroaryl compounds for treating huntington's disease |
BR112021006539A2 (pt) | 2018-10-09 | 2021-07-06 | Univ British Columbia | composições e sistemas competentes de vesículas competentes para transfecção isentas de solventes e detergentes orgânicos e métodos relacionados às mesmas |
CA3145397A1 (en) * | 2019-06-28 | 2020-12-30 | The Penn State Research Foundation | Methods and materials for treating huntington's disease |
AR120341A1 (es) * | 2019-11-01 | 2022-02-09 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | COMPOSICIONES DE AGENTES DE ARNi CONTRA LA HUNTINGTINA (HTT) Y SUS MÉTODOS DE USO |
KR20220093335A (ko) | 2019-11-01 | 2022-07-05 | 노파르티스 아게 | 헌팅턴병의 진행을 늦추는 치료를 위한 스플라이싱 조절제의 용도 |
MX2022010204A (es) * | 2020-02-21 | 2022-09-19 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Metodos para reducir la expresion de htt. |
WO2022031591A2 (en) * | 2020-08-03 | 2022-02-10 | University Of Massachusetts | Oligonucleotides for htt-1a modulation |
WO2022165122A1 (en) * | 2021-01-29 | 2022-08-04 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for modulating huntingtin |
TW202304446A (zh) | 2021-03-29 | 2023-02-01 | 瑞士商諾華公司 | 剪接調節子用於減慢杭丁頓氏舞蹈症進展的治療之用途 |
CN114150055A (zh) * | 2021-12-06 | 2022-03-08 | 昆明医科大学 | 一种以减少滑移峰的产生提高亨廷顿舞蹈症基因检测准确率的试剂盒及其制备方法 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009524431A (ja) * | 2006-01-26 | 2009-07-02 | アイシス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッド | ハンチンチン対する、組成物及びその使用 |
Family Cites Families (65)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6582908B2 (en) | 1990-12-06 | 2003-06-24 | Affymetrix, Inc. | Oligonucleotides |
US5700922A (en) | 1991-12-24 | 1997-12-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | PNA-DNA-PNA chimeric macromolecules |
CA2116280A1 (en) * | 1993-03-05 | 1994-09-06 | Marcy E. Macdonald | Huntingtin dna, protein and uses thereof |
FR2705099B1 (fr) | 1993-05-12 | 1995-08-04 | Centre Nat Rech Scient | Oligonucléotides phosphorothioates triesters et procédé de préparation. |
US5801154A (en) | 1993-10-18 | 1998-09-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein |
US5595756A (en) | 1993-12-22 | 1997-01-21 | Inex Pharmaceuticals Corporation | Liposomal compositions for enhanced retention of bioactive agents |
US20040266706A1 (en) | 2002-11-05 | 2004-12-30 | Muthiah Manoharan | Cross-linked oligomeric compounds and their use in gene modulation |
US7875733B2 (en) | 2003-09-18 | 2011-01-25 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds comprising 4′-thionucleosides for use in gene modulation |
ES2192672T3 (es) | 1996-11-18 | 2003-10-16 | Takeshi Imanishi | Nuevos analogos de nucleotidos. |
IL135000A0 (en) | 1997-09-12 | 2001-05-20 | Exiqon As | Bi- and tri-cyclic nucleoside, nucleotide and oligonucleotide analogues |
US6794499B2 (en) | 1997-09-12 | 2004-09-21 | Exiqon A/S | Oligonucleotide analogues |
AU3465599A (en) * | 1998-04-01 | 1999-10-18 | Hybridon, Inc. | Mixed-backbone oligonucleotides containing pops blocks to obtain reduced phosphorothioate content |
US20030228597A1 (en) | 1998-04-13 | 2003-12-11 | Cowsert Lex M. | Identification of genetic targets for modulation by oligonucleotides and generation of oligonucleotides for gene modulation |
AU745880B2 (en) * | 1998-05-21 | 2002-04-11 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for non-parenteral delivery of oligonucleotides |
US6277967B1 (en) * | 1998-07-14 | 2001-08-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Carbohydrate or 2′-modified oligonucleotides having alternating internucleoside linkages |
US5998148A (en) | 1999-04-08 | 1999-12-07 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense modulation of microtubule-associated protein 4 expression |
US6147200A (en) | 1999-08-19 | 2000-11-14 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 2'-O-acetamido modified monomers and oligomers |
US20020187931A1 (en) * | 2000-04-13 | 2002-12-12 | Michael Hayden | Modulating cell survival by modulating huntingtin function |
WO2002027033A1 (en) | 2000-09-29 | 2002-04-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of mekk4 expression |
US20050191638A1 (en) | 2002-02-20 | 2005-09-01 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated treatment of polyglutamine (polyQ) repeat expansion diseases using short interfering nucleic acid (siNA) |
WO2003004602A2 (en) | 2001-07-03 | 2003-01-16 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Nuclease resistant chimeric oligonucleotides |
PT1408964E (pt) * | 2001-07-26 | 2007-05-31 | Merck Patent Gmbh | Utilização de 2-5-(4-fluorofenil) -3-piridilmetilaminometil-cromano e de seus sais fisiologicamente aceitáveis. |
US20040096880A1 (en) | 2001-08-07 | 2004-05-20 | Kmiec Eric B. | Compositions and methods for the treatment of diseases exhibiting protein misassembly and aggregation |
WO2003013437A2 (en) | 2001-08-07 | 2003-02-20 | University Of Delaware | Compositions and methods for the prevention and treatment of huntington's disease |
US7176303B2 (en) | 2003-11-06 | 2007-02-13 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of STAT5 expression |
ATE508188T1 (de) | 2002-02-01 | 2011-05-15 | Life Technologies Corp | Oligonukleotid-zusammensetzungen mit verbesserter wirksamkeit |
US20050096284A1 (en) | 2002-02-20 | 2005-05-05 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated treatment of polyglutamine (polyQ) repeat expansion diseases using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20040092465A1 (en) | 2002-11-11 | 2004-05-13 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Modulation of huntingtin interacting protein 1 expression |
US20040102398A1 (en) | 2002-11-23 | 2004-05-27 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Modulation of B7H expression |
US20050042646A1 (en) | 2002-08-05 | 2005-02-24 | Davidson Beverly L. | RNA interference suppresion of neurodegenerative diseases and methods of use thereof |
US20050106731A1 (en) | 2002-08-05 | 2005-05-19 | Davidson Beverly L. | siRNA-mediated gene silencing with viral vectors |
US20080274989A1 (en) | 2002-08-05 | 2008-11-06 | University Of Iowa Research Foundation | Rna Interference Suppression of Neurodegenerative Diseases and Methods of Use Thereof |
US20050255086A1 (en) | 2002-08-05 | 2005-11-17 | Davidson Beverly L | Nucleic acid silencing of Huntington's Disease gene |
WO2004027030A2 (en) | 2002-09-18 | 2004-04-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Efficient reduction of target rna’s by single- and double-stranded oligomeric compounds |
AU2003291753B2 (en) | 2002-11-05 | 2010-07-08 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation |
JP2006507841A (ja) | 2002-11-14 | 2006-03-09 | ダーマコン, インコーポレイテッド | 機能的siRNAおよび超機能的siRNA |
US7250496B2 (en) | 2002-11-14 | 2007-07-31 | Rosetta Genomics Ltd. | Bioinformatically detectable group of novel regulatory genes and uses thereof |
US7589189B2 (en) * | 2003-05-14 | 2009-09-15 | Japan Science And Technology Agency | Inhibition of the expression of huntingtin gene |
ES2382807T3 (es) | 2003-08-28 | 2012-06-13 | Takeshi Imanishi | Nuevos ácidos nucleicos artificiales del tipo de enlace N-O con reticulación |
WO2008005562A2 (en) | 2006-07-07 | 2008-01-10 | University Of Massachusetts | Rna silencing compositions and methods for the treatment of huntington's disease |
WO2005027980A1 (en) | 2003-09-12 | 2005-03-31 | University Of Massachusetts | Rna interference for the treatment of gain-of-function disorders |
WO2005045032A2 (en) | 2003-10-20 | 2005-05-19 | Sima Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF EARLY GROWTH RESPONSE GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US20050256072A1 (en) * | 2004-02-09 | 2005-11-17 | University Of Massachusetts | Dual functional oligonucleotides for use in repressing mutant gene expression |
WO2005083436A1 (en) | 2004-02-26 | 2005-09-09 | Bayer Healthcare Ag | Diagnostics and therapeutics for diseases associated with integrin-linked kinase 1 (ilk1) |
EP1735443A2 (en) | 2004-04-14 | 2006-12-27 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED TREATMENT OF POLYGLUTAMINE (POLYQ) REPEAT EXPANSION DISEASES USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US7374927B2 (en) | 2004-05-03 | 2008-05-20 | Affymetrix, Inc. | Methods of analysis of degraded nucleic acid samples |
CA2566286A1 (en) | 2004-05-11 | 2005-12-08 | Rnai Co., Ltd. | Polynucleotide causing rna interfere and method of regulating gene expression with the use of the same |
US7323308B2 (en) | 2004-09-03 | 2008-01-29 | Affymetrix, Inc. | Methods of genetic analysis of E. coli |
BRPI0518504B1 (pt) | 2005-01-14 | 2015-10-20 | Dow Global Technologies Inc | processo para reconstituir um catalisador de oxidação ativo |
WO2006128141A2 (en) | 2005-05-27 | 2006-11-30 | Sirna Therapeutics, Inc. | Rna interference mediated inhibition of stromal cell-derived factor-1 (sdf-1) gene expression using short interfering nucleic acid (sina) |
WO2007022470A2 (en) | 2005-08-18 | 2007-02-22 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treating neurological disease |
CN101365801B (zh) | 2005-10-28 | 2013-03-27 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 抑制亨廷顿基因表达的组合物和方法 |
CN101437933B (zh) * | 2005-12-28 | 2013-11-06 | 斯克里普斯研究所 | 作为药物靶标的天然反义和非编码的rna转录物 |
KR20130042043A (ko) | 2006-01-27 | 2013-04-25 | 아이시스 파마수티컬즈 인코포레이티드 | 6-변형된 바이시클릭 핵산 유사체 |
GB0605337D0 (en) * | 2006-03-17 | 2006-04-26 | Genomica Sau | Treatment of CNS conditions |
EP2371957A1 (en) | 2006-04-12 | 2011-10-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and their uses directed to hepcidin |
DK2066684T3 (da) | 2006-05-11 | 2012-10-22 | Isis Pharmaceuticals Inc | 5´-Modificerede bicycliske nukleinsyreanaloge |
DK2049664T3 (da) | 2006-08-11 | 2012-01-02 | Prosensa Technologies Bv | Enkeltstrengede oligonukleotider, som er komplementære til repetitive elementer, til behandling af med DNA-repetitiv-ustabilitet associerede lidelser |
US20080039415A1 (en) | 2006-08-11 | 2008-02-14 | Gregory Robert Stewart | Retrograde transport of sirna and therapeutic uses to treat neurologic disorders |
US20080068922A1 (en) | 2006-09-12 | 2008-03-20 | Voss Klaus-W | Device for blending a binder component and a hardener component for producing a ready-made filler |
JP2008068470A (ja) | 2006-09-13 | 2008-03-27 | Kyocera Mita Corp | 電子機器、ジョブデータ認証受信プログラム |
WO2008101157A1 (en) | 2007-02-15 | 2008-08-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 5'-substituted-2'-f modified nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom |
JP2010533170A (ja) * | 2007-07-12 | 2010-10-21 | プロセンサ テクノロジーズ ビー.ブイ. | 化合物を種々の選択された臓器、組織又は腫瘍細胞に標的化するための分子 |
EP2188298B1 (en) * | 2007-08-15 | 2013-09-18 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Tetrahydropyran nucleic acid analogs |
WO2011097388A1 (en) | 2010-02-03 | 2011-08-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Selective inhibition of polyglutamine protein expression |
-
2010
- 2010-09-10 KR KR1020197026749A patent/KR102173836B1/ko active Application Filing
- 2010-09-10 RU RU2012114198/10A patent/RU2562861C2/ru active
- 2010-09-10 KR KR1020207031044A patent/KR102279458B1/ko active IP Right Grant
- 2010-09-10 EP EP16197941.4A patent/EP3178933B1/en active Active
- 2010-09-10 PL PL10816206T patent/PL2475675T3/pl unknown
- 2010-09-10 NZ NZ714887A patent/NZ714887A/en unknown
- 2010-09-10 KR KR1020177024113A patent/KR20170102069A/ko active Application Filing
- 2010-09-10 CN CN201080051393.9A patent/CN102625809B/zh active Active
- 2010-09-10 EP EP10816206.6A patent/EP2475675B1/en active Active
- 2010-09-10 KR KR1020187037590A patent/KR102175230B1/ko active IP Right Grant
- 2010-09-10 KR KR1020127009137A patent/KR101774526B1/ko active IP Right Grant
- 2010-09-10 MX MX2012003006A patent/MX340397B/es active IP Right Grant
- 2010-09-10 CN CN201510262406.1A patent/CN104894129B/zh active Active
- 2010-09-10 SI SI201031404A patent/SI2475675T1/sl unknown
- 2010-09-10 RU RU2015132208A patent/RU2751847C9/ru active
- 2010-09-10 JP JP2012528949A patent/JP5809146B2/ja active Active
- 2010-09-10 BR BR112012005448-1A patent/BR112012005448B1/pt active IP Right Grant
- 2010-09-10 DK DK10816206.6T patent/DK2475675T3/en active
- 2010-09-10 EP EP19199744.4A patent/EP3626823A1/en active Pending
- 2010-09-10 NZ NZ599032A patent/NZ599032A/en unknown
- 2010-09-10 CA CA2773886A patent/CA2773886C/en active Active
- 2010-09-10 ES ES10816206.6T patent/ES2615534T3/es active Active
- 2010-09-10 AU AU2010292003A patent/AU2010292003B2/en active Active
- 2010-09-10 CA CA2931725A patent/CA2931725C/en active Active
- 2010-09-10 US US13/395,188 patent/US8906873B2/en active Active
- 2010-09-10 HU HUE10816206A patent/HUE033113T2/en unknown
- 2010-09-10 NZ NZ624783A patent/NZ624783A/en unknown
- 2010-09-10 WO PCT/US2010/048532 patent/WO2011032045A1/en active Application Filing
- 2010-09-10 PT PT108162066T patent/PT2475675T/pt unknown
- 2010-09-10 ES ES16197941T patent/ES2772825T3/es active Active
- 2010-09-10 CN CN202010532625.8A patent/CN111705058A/zh active Pending
-
2012
- 2012-03-05 IL IL218482A patent/IL218482A/en active IP Right Grant
- 2012-03-09 MX MX2016004031A patent/MX353152B/es unknown
-
2014
- 2014-10-30 US US14/528,656 patent/US9273315B2/en active Active
-
2015
- 2015-09-10 JP JP2015178281A patent/JP6153578B2/ja active Active
-
2016
- 2016-01-25 US US15/005,712 patent/US9683236B2/en active Active
- 2016-03-04 AU AU2016201431A patent/AU2016201431A1/en not_active Abandoned
-
2017
- 2017-02-15 IL IL250611A patent/IL250611B/en active IP Right Grant
- 2017-05-16 US US15/596,249 patent/US10202603B2/en active Active
- 2017-05-30 JP JP2017106418A patent/JP2017184754A/ja active Pending
- 2017-12-14 AU AU2017276286A patent/AU2017276286B2/en active Active
-
2018
- 2018-09-26 JP JP2018180351A patent/JP6704439B2/ja active Active
-
2019
- 2019-02-08 US US16/270,983 patent/US10619158B2/en active Active
- 2019-07-24 IL IL268246A patent/IL268246B/en active IP Right Grant
- 2019-12-30 AU AU2019284142A patent/AU2019284142B2/en active Active
-
2020
- 2020-02-26 US US16/801,431 patent/US10837016B2/en active Active
- 2020-03-03 IL IL273017A patent/IL273017B/en unknown
- 2020-05-12 JP JP2020083833A patent/JP2020115894A/ja active Pending
- 2020-10-12 US US17/068,185 patent/US11421231B2/en active Active
-
2022
- 2022-07-18 US US17/813,249 patent/US20230023015A1/en active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009524431A (ja) * | 2006-01-26 | 2009-07-02 | アイシス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッド | ハンチンチン対する、組成物及びその使用 |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6704439B2 (ja) | ハンチンチン発現の修飾 | |
JP2013504329A5 (ja) | ||
US8669102B2 (en) | Modulation of prion expression |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20121022 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20121022 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130910 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20130910 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20141217 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20150317 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150323 |
|
A524 | Written submission of copy of amendment under article 19 pct |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A524 Effective date: 20150323 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20150812 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20150910 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5809146 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |