JP2013503654A - キトサン組織被覆材 - Google Patents
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Abstract
Description
以下の実施例で出発物質として用いるキトサンは、Cognis(ドイツ国)より細かいフレークの形態で入手した。アセチル化度(DA)は、1H NMR分光法により決定した。図1は、この市販のキトサンから得た1H NMRスペクトルを示す。図2は、以下にさらに説明されるように、市販の製品に適用したさらなる加水分解段階の後に脱アセチル化したキトサンから得た対応する1H NMRスペクトルを示す。いずれの場合も、キトサンは、約0.5%(w/v)のキトサン濃度のD2O中0.25%DClの混合物中で分析した。Bruker AC200スペクトロメーターを用いてスペクトルを記録した。NMR化学シフト(δ、単位はppm)は、HDOのシグナル(δ=4.8ppm)を基準とした。D−グルコサミンサブユニットのH2−H6に関連するピーク下の積分面積と、メチル基のそれをと比較することにより計算されるDAは、購入時の天然キトサンについて14.5%、および脱アセチル化天然キトサンについて1.5%と決定した。
さらなる加水分解のために、供給業者であるCognisから入手した50g(グラム)のキトサンフレークをガラス容器に入れ、500gの45%水酸化ナトリウム水溶液を添加した。ガラス容器をよく振盪して成分を混合し、100℃のオーブンの中に2時間入れた。次に、それをオーブンから取り出し、500ml(ミリリットル)の蒸留水を添加した。混合物をガラスフリットで濾過した。次に、キトサンを蒸留水で濾液のpHが6.5に達するまで洗浄し、100℃で4h(時間)乾燥させた。次に、この加水分解処理を反復し、1H NMR分光法で測定して1.5%のDAを有する、42gの脱アセチル化天然キトサンを得た。
ヒトHaCaTケラチノサイトを、0.2ng/ml(ナノグラム/ミリリットル)rEGFおよび25μg/ml(マイクログラム/ミリリットル)ウシ下垂体抽出物を添加した血清フリー培地(Gibco)中で培養した。カルシウム濃度を0.02mMに調節し、pHを7.2〜7.4に調節した。細胞を、20ml培地あたり1×106細胞の密度で播種し、10%CO2を含有する空気中で37℃にてインキュベートした。細胞を週に1回継代し、継代20〜25を分析に用いた。
7.5gの、このようにして得たDAが1.5%の天然キトサンを、24時間穏やかに振盪することによって500mlの0.5%酢酸水溶液に溶解した。溶液の一部を、最初にガラス繊維フィルタ(孔径約1μm)に通し、次に滅菌用の0.22μmフィルタに通して濾過し、その結果本質的に脱アセチル化天然キトサンから完全になる組織被覆材料の溶液を得た。以下、この材料を組織被覆材料Aと呼ぶ。
2部の各々144mlの、上で調製した脱アセチル化天然キトサンの濾過していない溶液を、24×24cm2(平方センチメートル)のサイズの2つの正方形の型に注入し、室温で乾燥させるためにダストフリーの環境においたままにした。得られるフィルムを最初の型から取り出し、10kGy(キログレイ)の電子線を用いて滅菌した。完全に脱アセチル化天然キトサン酢酸塩から本質的になる組織被覆材料の約80μm厚さの透明フィルムを得た。以下、この材料を組織被覆材料Bと呼ぶ。
第2の型から乾燥したフィルムを、メタノール/水 90/10(v/v)中1.5%アンモニアの溶液を含有する浴中に2時間入れた。次に、フィルムを浴から取り出し、室温貯蔵により乾燥させた。フィルムを10kGyの電子線を用いて滅菌した。完全に脱アセチル化天然キトサン塩基から本質的になる組織被覆材料の厚さ約80μmの透明なフィルムを得た。以下、この材料を組織被覆材料Cと呼ぶ。
上記実施例に記載される通り作製された組織被覆材料Cを秤量し、次に蒸留水の中に15分間入れた。湿ったフィルムの重量を乾燥したフィルムの重量と比較し、水分取込みを72重量%と決定した。
下の表1中に、3つの実施例の組織被覆材料による患者の処置の結果が詳述されている。材料Aは、創傷の上に直接噴霧した後、覆いをせずに静置して溶媒を空気中に容易に蒸発できるようにした。材料BおよびCは、創傷に直接接触しているフィルムのような材料の小さな切れ目(small cuts)として適用した。材料Bの場合、皮膚を予め湿らせた後、材料を適用した。全ての実験において、材料は適用後に覆いをせずに静置された。
組織被覆材料BおよびCの制御溶解を、蒸留水、0.9%塩化ナトリウム水溶液、および0.5%酢酸/酢酸塩緩衝溶液をそれぞれ用いる溶解実験で試験した。適切な量の1N塩酸または水酸化ナトリウム溶液を用いて、溶液のpHを表2に示される値に調節した。材料Bおよび材料Cを、各々5〜10mgの間の乾燥重量を有する長方形のサンプルに切断した。フィルムの乾燥重量に対して、容積当たり100倍過剰のそれぞれの溶液に浸したガーゼを各々のサンプルフィルムに適用し、完全なフィルムの溶解のための時間を記録した。
Claims (19)
- 患者の組織(1)に接触して適用されるための組織被覆材料(6)であって、
前記組織被覆材料(6)の主成分が、脱アセチル化天然キトサンである
ことを特徴とする、組織被覆材料(6)。 - 前記組織被覆材料(6)が、固体またはゲル様フィルムの形態で存在することを特徴とする、請求項1に記載の組織被覆材料(6)。
- 前記組織被覆材料(6)の少なくとも70重量%が、脱アセチル化天然キトサンであることを特徴とする、請求項1または請求項2に記載の組織被覆材料(6)。
- 患者の組織(1)に接触して適用されるための液体組織被覆材料であって、前記組織被覆材料が水性混合物であり、水以外の前記混合物の前記構成成分(類)の主成分が脱アセチル化天然キトサンであることを特徴とする、液体組織被覆材料。
- 水以外の前記混合物の前記構成成分(類)の少なくとも70重量%が、脱アセチル化天然キトサンであることを特徴とする、請求項4に記載の組織被覆材料。
- 前記天然キトサンのアセチル化度が、2%以下であることを特徴とする、請求項1〜請求項5のいずれかに記載の組織被覆材料(6)。
- 前記脱アセチル化天然キトサンが、少なくとも部分的にキトサン塩の形態で存在することを特徴とする、請求項1〜請求項6のいずれかに記載の組織被覆材料(6)。
- 前記組織被覆材料(6)が、少なくとも1つの薬学的に活性な化合物を含むことを特徴とする、請求項1〜請求項7のいずれかに記載の組織被覆材料(6)。
- 前記組織被覆材料(6)の固体相の前記水分取込み能が、100重量%未満である
ことを特徴とする、請求項1〜請求項8のいずれかに記載の組織被覆材料(6)。 - 前記組織被覆材料(6)のpHが、6.3よりも低いことを特徴とする、請求項1〜請求項9のいずれかに記載の組織被覆材料(6)。
- 前記組織被覆材料(6)が透明であることを特徴とする、請求項1〜請求項10のいずれかに記載の組織被覆材料(6)。
- 前記組織被覆材(9、11)が第1の層を含み、その層が請求項1〜請求項11のいずれかに記載の組織被覆材料(6)で形成され、もう一つの層(10)が別の材料で形成されることを特徴とする、組織被覆材(9、11)。
- 前記もう一方の層(10)が、支持体の働きをすることができることを特徴とする、請求項12に記載の組織被覆材(9、11)。
- 前記もう一方の層(10)が、少なくとも部分的な防湿層の働きをすることができることを特徴とする、請求項12または請求項13に記載の組織被覆材(9、11)。
- 患者の組織(1)を処置する方法であって、組織被覆材料(6)が前記患者の前記組織(1)に接触して適用され、前記組織被覆材料(6)の主成分が脱アセチル化天然キトサンである、方法。
- 患者の組織(1)を処置する方法であって、液体の組織被覆材料が、前記患者の前記組織(1)に接触して適用され、前記組織被覆材料が、水性混合物であり、水以外の前記混合物の前記構成成分(類)の主成分が、脱アセチル化天然キトサンである、方法。
- 患者の組織(1)を処置する方法であって、前記方法が、
組織被覆材料(6)を前記組織(1)に接触させるステップであって、前記組織被覆材料(6)が、脱アセチル化キトサンを含むステップと、
分離溶媒を前記組織被覆材料(6)に適用するステップと
を含む、方法。 - キトサンを含む組織被覆材料(6)と、前記組織被覆材料を少なくとも部分的に溶解するための分離溶媒とを含む、キット。
- 患者の組織(1)の前記局所に限定される抗細菌処置のための、抗細菌特性をもつポリマーの使用。
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