JP2013059277A - 新規納豆菌及びこれを用いて製造した納豆 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 バチルス・ズブチルス(Bacillus subtilis)AZ-5512菌株(FERM
P-22135)及びこの菌株を用いて製造した納豆である。
【選択図】 図2
Description
「食品加工シリーズ(5) 納豆」(渡辺杉夫、農文協)
「Industrialization of Indigenous Fermented
Foods」(渡辺杉夫他、MERCEL DEKKER INC)
「発酵と醸造 ▲3▼」(渡辺杉夫・他、光琳)
「つくって遊ぼう (2) 納豆の絵本」(渡辺杉夫・他、農文協)
「納豆の科学―最新情報による総合的考察」(渡辺杉夫・他、建帛社)
「大豆のすべて」(渡辺杉夫・他、サイエンスフォーラム)
「納豆の研究法」(渡辺杉夫・他編 恒星社 厚生閣 )
「食品知識ミニブックスシリーズ 納豆入門」(渡辺杉夫、日本食糧新聞社)
「納豆の製造技術と包装工程」(1985-10 食品と科学 (株)食品と化学社)
「大豆工業・その発展の過程と現状」(1991-2/3合併号社団法人大豆安定協会)
「納豆製造技術の課題・国際技術移転」(1994-10 大豆と技術 (株)フードジャーナル社)
「納豆発酵中の熱量測定」(1999-05-15 日本食品化学工業会)
「成長市場:納豆生産の工業化と国際化」(2000-09-01 農林水産技術研究ジャーナル)
「エラスターゼ高生産菌のロイシン要求性株による低臭納豆の開発」(2001-04-15
日本食品科学工学誌)
「糸引き納豆製造法の改良」(2001-04-15 日本食品科学工誌)
「環境ストレス下における納豆菌の胞子形成」(2006-03-15 日本食品科学工学誌)
「軟らかく糸引きの良い高齢者向け納豆の開発」(2006-09 日本食品科学工学誌)
「高橋菌から分離した納豆菌KFPの食品エキスによる胞子形成」(2007-09日本食品科学工学誌)
subtilis)に属する菌であると同定され、これを独立行政法人産業技術総合研究所・特許生物寄託センターに寄託した(受託番号:FERM P-22135)。
16SrDNA(16SrRNA遺伝子)塩基配列解析、形態観察及び生理・生化学性状試験(以下、「細菌第一段階試験」及び「細菌第二段階試験」と称する。)の結果から検体の帰属分類を推定する。
1.培養条件
以下の条件で培養した菌株を供試菌体とした。
・培地 nutrient agar
(Oxoid,Hampshire,England)
・培養温度 30℃
・培養期間 24時間
抽出からサイクルシークエンスまでの操作は各プロトコールに基づいた。
・DNA抽出 lnstaGene Matrix (BIO
RAD,CA,USA)
・PCR PrimeSTAR HS DNA Polymerase (タカラバイオ,滋賀)
・サイクルシークエンス BigDye Tenllinator v3.1
Cycle Sequencing Kjt (Applied Biosystems, CA,USA)
・使用プライマー) PCR増幅:9F,1510Rシークエンス:9F785F,802R,1510R
・シークエンス ABI PRISM 3130 xl Genetic
Analyzer System(Applied Biosystems, CA,USA)
・配列決定 ChromasPro l.4(Technelysium Pty
Ltd.,Tewantin,AUS)
・相同性検索及び簡易分子系統解析 ソフトウェア;アポロン2.0(テクノスルガ・ラボ,静岡) データベース;アポロンDB-BA
6.0(テクノスルガ・ラボ,静岡) 国際塩基配列データベース(GenBank/DDBJ/EMBL)
光学顕微鏡による形態観察及びBARROW らの方法に基づき、カタラーゼ反応、オキシダーゼ反応、ブドウ糖からの酸/ガス産生、ブドウ糖の酸化/醗酵(O/F)について試験を行った。
・グラム染色 フェイバーG「ニッスイ」(日水製薬、東京)
・顕微鏡 光学顕微鏡BX50F4(オリンパス、東京)
細菌第二段階試験には以下のキットを用いた。また、英国NCIMB
Ltd.(http://www.ncimb.comuk/)との技術提携事項及び分類・同定の関連文献に従い、追加試験を実施した。
・使用キット API50CHB(bioMerieux、Lyon、France)
1.16SrDNA(16SrRNA 遺伝子)塩基配列解析
subsp.inaquosorum NRRL B-23052株及びB.tequilensis NRRL B-41771株に対し、それぞれ相同率99.9%の高い相同性を示した(図1)。
subsp. subtilisの16S rDNA塩基配列間には、1塩基の相違点が確認され、明確に異なることが判明した(図2〜図4)。このように、16SrDNA
塩基配列解析の結果から、AZ-5512(SIID10004)はB.subtilisに近縁なBacillus sp.と推定された。尚、図2〜図4の「本株菌AZ-5512(SIID10004)とB.
subtilis subsp.及びsubtilisの塩基配列比較を示す図」において、配列の一致する箇所は「*」で示し、B.subtilisは、B.subtilis
subsp.subtilisの16SrDNA塩基配列を意味する。
subsp.subtilisとの間で認められた16SrDNA 塩基配列の相違は、B.subtilis種内での相違であるとも捉えられる。
subtilis)に属する菌であることが判明した。
ガスクロマトグラフ…島津製作所GC14B型
キャピラリーカラム…DB-Wax(内径0.53mm×長さ30m、膜厚1μm,アジレント社製)
キャリアガス…ヘリウム:流速、35cm/秒:注入温度、250℃;カラム初期温度:50℃、昇温割合、4℃/分:検出器、FID.
機器…日本電子JMS-DX303
イオン源温度…200℃
イオン化電圧…70V
マスレンジ…35-400amu
スキャン時間…1スキャン/秒
検出…RI検出器。
納豆10gを500ml三角フラスコに採り、Tenax-TAカラム(直径3mm×長さ15cm)を接続し、ヘリウムガスを流速10ml/分で50分間、試料の入った三角フラスコに流して試料の揮発性成分を集気した。集気終了後Tenax-TAカラムをDB-Waxカラムの上端に接続し、カラム出口をX字キャピラリーコネクターにより、メイクアップ・ガスを加えながら2方向にヒューズドシリカチュープを用いて分岐し、一方をピーク検出のためにFIDへ導き,もう一方をガスクロマトグラフ・オーブンの外へ導き、スニッフィング(Sniffing:人が臭いを嗅ぐ)法で納豆臭類似成分10種を調べた。
同一のカラムを日本電子製ガスクロマトグラブ・マススペクトロメーターJMS-DX303に接続し、同一の条件で分析することにより、臭い物質の固定を行った。尚、マススペクトル測定は35-400amuの範囲を1秒間で走査することにより行い、電子衝撃法で得られたスペクトルを日本電子製コンピューター(DAWIN)に保存してあるデーターベースと比較することによりピークの固定を行った。更に、リテンションインデックス(以下,RI)を標品と比較することにより同定を確実なものとした。
1.エタノール
2.ジアセチル
3.ピラジン
4. 2−メチルピラジン
5.アセトイン
6. 2,5-ジメチルピラジン
7. 2,3,5,−トリメチルピラジン
8.イソラクサン
9.イソ吉草酸
10.2-メチル酪酸
(1)試験方法
製造条件
(1-1)蒸煮条件 1.6k−26min−20min
(1-2)接種菌量 原液2.0×108
(1-3)醗酵条件
温度経過 43℃8h、46℃5h、43℃7h、20℃2h
湿度経過 初発80%以上
(1-4)冷蔵 5℃
(3-1)同一の原料大豆で試験を行ったが、醗酵後当日で納豆の硬度は蒸煮大豆に比較し、50%となった。
(3-2)3日間の冷蔵保存中の硬度変化はみられなかった。
(1)試験方法
種類の異なる大豆3種にAZ=5512株と市販菌とをそれぞれ接種し、軟化度の比較試験を行った。市販菌は、鈴丸(図15)、地塚(図16)、とよまさり(図17)である。
(2-1)醗酵終了後の硬度は蒸煮大豆の硬度に比較し、本株菌(AZ-5512)では80〜70%と低下するが、市販菌の場合は110〜130%に硬化し、硬度の差は60%程度となる。
(2-2)本株菌(AZ-5512)の場合は、醗酵終了後に軟化する。市販菌の場合は、冷蔵3日後には軟化傾向をみせるが、煮豆の硬度程度にはならない。
(2-3) 本株菌(AZ-5512)の場合は、原料大豆の品種を選ばず、醗酵後軟化した。
Claims (2)
- バチルス・ズブチルス(Bacillus subtilis)AZ-5512菌株(FERM
P-22135)。 - バチルス・ズブチルス(Bacillus subtilis)AZ-5512菌株(FERM
P-22135)を用いて製造したことを特徴とする納豆。
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