JP2011524858A5

JP2011524858A5 -

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Publication number: JP2011524858A5
Application number: JP2011509761A
Authority: JP
Filing date: 2009-05-15
Publication date: 2012-05-10

Claims

ヒトの白血球、リンパ球、又は内皮細胞における、Ｐセレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）により媒介される接着、並びに、ケモカインにより媒介される遊走を抑制する方法であって：
ＳＥＱＩＤ番号：１のアミノ酸４２〜６２の少なくとも一部を含んだヒトＰＳＧＬ−１の硫酸化Ｎ末端部分に高い親和性で結合する、ＰＳＧＬ−１に特異的なモノクローナル抗体又はその結合断片を得るステップ；並びに
前記ＰＳＧＬ−１に特異的なモノクローナル抗体又はその結合断片を、ＰＳＧＬ−１を有するヒトの白血球、リンパ球、又は内皮細胞の少なくとも１つに曝露するステップであり、前記抗体又はその結合断片が、前記ヒトの白血球、リンパ球、又は内皮細胞の少なくとも１つ上の前記ヒトＰＳＧＬ−１の硫酸化Ｎ末端部分に結合し、前記ヒトの白血球、リンパ球、又は内皮細胞上の前記ヒトＰＳＧＬ−１に対するＰセレクチン及びＬセレクチンの少なくとも１つの結合を阻止し、前記ヒトの白血球、リンパ球、又は内皮細胞上の前記ヒトＰＳＧＬ−１に対する、ケモカインＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２７及びＣＣＬ２８の少なくとも１つの結合を阻止し、それによって、前記ヒトの白血球、リンパ球、又は内皮細胞の接着も走化性遊走も抑制するステップ；
を含む方法。
前記ＰＳＧＬ−１に特異的なモノクローナル抗体又はその結合断片が、アミノ酸配列ＳＥＱＩＤ番号：６、ＳＥＱＩＤ番号：７、及びＳＥＱＩＤ番号：８を有した可変の重鎖ＣＤＲ、並びに、アミノ酸配列ＳＥＱＩＤ番号：９、ＳＥＱＩＤ番号：１０、及びＳＥＱＩＤ番号：１１を有した可変の軽鎖ＣＤＲを含み、さらに、ＩｇＧ_２定常鎖を含む定常鎖を含み、Ｃ１Ｑと相互作用することによって古典経路を介して補体を活性化しない、請求項１に記載の方法。
前記ＰＳＧＬ−１に特異的なモノクローナル抗体又はその結合断片が、１００ｎＭ以下のＫ_ｄ、５０ｎＭ以下のＫ_ｄ、２５ｎＭ以下のＫ_ｄ、１０ｎＭ以下のＫ_ｄ、及び、５ｎＭ以下のＫ_ｄの少なくとも１つでＰＳＧＬ−１に結合する、請求項１又は２に記載の方法。
前記ＰＳＧＬ−１に特異的なモノクローナル抗体又はその結合断片は、補体の活性化又はＦｃ受容体の結合によって定義されるような、エフェクター機能を発現しない、請求項１乃至３のいずれか一項に記載の方法。
ＰＳＧＬ−１を含む炎症過程から生じる炎症状態の治療に使用される、二重機能の抗ＰＳＧＬ−１抗体又はその結合断片を含む組成物であって：
前記二重機能の抗ＰＳＧＬ−１抗体又はその結合断片が、ＳＥＱＩＤ番号：１のアミノ酸４２〜６２のうち少なくとも一部を含むヒトＰＳＧＬ−１の硫酸化Ｎ末端部分に高い親和性で結合し、ヒトＰＳＧＬ−１に対するＰセレクチン及びＬセレクチンの少なくとも１つの結合を競合的に阻止する、及び、ヒトＰＳＧＬ−１に対するケモカインＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２７及びＣＣＬ２８の少なくとも１つの結合を競合的に阻止し、前記炎症状態が、炎症性腸疾患、移植片拒絶、移植片対宿主病、喘息、慢性閉塞性肺疾患、乾癬、皮膚炎、腎炎、エリテマトーデス、強皮症、鼻炎、アナフィラキシー、糖尿病、多発性硬化症、粥状動脈硬化、血栓症、アレルギー反応、関節炎、及び、甲状腺炎のうちの少なくとも１つである、組成物。
前記二重機能の抗ＰＳＧＬ−１抗体又はその結合断片が、ヒトモノクローナル抗体若しくはその断片、又は、ヒト化モノクローナル抗体若しくはその断片である、請求項５に記載の組成物。
前記二重機能の抗ＰＳＧＬ−１抗体又はその結合断片が、１００ｎＭ以下のＫ_ｄ、５０ｎＭ以下のＫ_ｄ、２５ｎＭ以下のＫ_ｄ、１０ｎＭ以下のＫ_ｄ、及び、５ｎＭ以下のＫ_ｄの少なくとも１つでＰＳＧＬ−１に結合する、請求項５又は６に記載の組成物。
前記二重機能の抗ＰＳＧＬ−１抗体又はその抗原結合性フラグメントが、Ｃ１Ｑと相互作用することによって古典経路を介して補体を活性化しない、請求項５乃至７のうちいずれか一項に記載の組成物。
前記二重機能の抗ＰＳＧＬ−１抗体又はその抗原結合性フラグメントが、Ｆｃ受容体に結合しない、請求項５乃至８のいずれか一項に記載の組成物。
前記二重機能の抗ＰＳＧＬ−１抗体又は抗原結合性フラグメントが、補体の活性化又はＦｃ受容体の結合によって定められるエフェクター機能を発現しない、請求項５乃至９のいずれか一項に記載の組成物。
薬剤的に受け入れられるキャリア又は媒体に配置されるヒト抗体若しくはヒト化抗体、又は、その結合断片を含む組成物であって、前記抗体又はその結合断片は、非常に親和性で特異的な抗ＰＳＧＬ−１抗体であり、アミノ酸配列ＳＥＱＩＤ番号：６、ＳＥＱＩＤ番号：７、及びＳＥＱＩＤ番号：８を有した可変の重鎖ＣＤＲ、並びに、アミノ酸配列ＳＥＱＩＤ番号：９、ＳＥＱＩＤ番号：１０、及びＳＥＱＩＤ番号：１１を有した可変の軽鎖ＣＤＲを含み、さらに、ＩｇＧ_２定常鎖を含む定常鎖を含み、Ｃ１Ｑと相互作用することによって古典経路を介して補体を活性化しない、組成物。
Ｐセレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）に特異的に結合し、そこに対するＰセレクチン及び／又はＬセレクチンの結合を阻止し、さらに、そこに対する少なくとも１つのケモカインの結合を阻止する抑制化合物を求めてスクリーニングする方法であって：
（ａ）ＳＥＱＩＤ番号：１のアミノ酸４２〜６２のうち少なくとも硫酸化部分を含む結合エピトープを有したポリペプチド、融合タンパク質、又は、タンパク質断片を得るステップ；
（ｂ）前記ポリペプチド、融合タンパク質、又は、タンパク質断片を試験化合物と組み合わせて、前記試験化合物に曝露された前記ポリペプチド、融合タンパク質、又は、タンパク質断片を含む処置エピトープを形成するステップ；
（ｃ）前記処置エピトープをＰセレクチン及びＬセレクチンの少なくとも１つに接触させ、同時又は別々に、ケモカインＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２７及びＣＣＬ２８の少なくとも１つに接触させるステップ；並びに、
（ｄ）前記処置エピトープに対する、前記Ｐセレクチン及びＬセレクチンの少なくとも１つの結合、並びに、前記少なくとも１つのケモカインの結合を評価し、それによって、そこに対する前記Ｐセレクチン及び／又はＬセレクチンの結合、並びに、前記ケモカインＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２７及びＣＣＬ２８の少なくとも１つの結合を抑制する前記試験化合物の能力を特徴づけるステップ；
を含む方法。
前記試験化合物が、ヒトモノクローナル抗体若しくはその断片、又は、ヒト化抗体若しくはその断片である、請求項１２に記載の方法。
前記結合エピトープが、白血球、リンパ球、又は内皮細胞の表面上で発現されるポリペプチドの一部を含む、請求項１２又は１３に記載の方法。
前記Ｐセレクチン及びＬセレクチンの少なくとも１つの結合、並びに、前記ケモカインＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２７及びＣＣＬ２８の少なくとも１つの結合が、前記結合エピトープ以外の部位にてＰＳＧＬ−１に結合する対照ＰＳＧＬ−１結合抗体の存在下でのその結合よりも少なくとも７５％少ない場合に、前記試験化合物は、前記処置エピトープに対して実質的に阻止された結合を有するとして決定される、請求項１２乃至１４のいずれか一項に記載の方法。
前記処置エピトープに対する前記Ｐセレクチン及びＬセレクチンの少なくとも１つの結合、並びに、前記少なくとも１つのケモカインの結合が実質的に阻止されたとして決定される場合に、さらなる評価に対して前記試験化合物を選択するステップ（ｅ）をさらに含む、請求項１２乃至１５のいずれか一項に記載の方法。
白血球、リンパ球、又は内皮細胞が前記試験化合物に曝露された後、前記白血球又はリンパ球における、セレクチンにより媒介される接着及びケモカインによる媒介される走化性を測定するさらなるステップを含む、請求項１２乃至１６のいずれか一項に記載の方法。
ＰＳＧＬ−１に特異的なモノクローナル抗体又はその結合断片であって、ＳＥＱＩＤ番号：１のアミノ酸４２〜６２の少なくとも一部を含んだヒトＰＳＧＬ−１の硫酸化Ｎ末端部分に高い親和性で結合し、補体の活性化又はＦｃ受容体の結合によって定められるエフェクター機能を発現せず、ＰＳＧＬ−１を有するヒトの白血球、リンパ球、又は内皮細胞に曝露された場合に、前記ヒトの白血球、リンパ球、又は内皮細胞上の前記ヒトＰＳＧＬ−１の硫酸化Ｎ末端部分に結合し、前記ヒトの白血球、リンパ球、又は内皮細胞上の前記ヒトＰＳＧＬ−１に対するＰセレクチン及びＬセレクチンの少なくとも１つの結合を阻止し、前記ヒトの白血球、リンパ球、又は内皮細胞上の前記ヒトＰＳＧＬ−１に対する、ケモカインＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２７、及びＣＣＬ２８のうちの少なくとも１つのケモカインの結合を阻止し、それによって、前記ヒトの白血球、リンパ球、又は内皮細胞の接着も走化性遊走も抑制することができる、ＰＳＧＬ−１に特異的なモノクローナル抗体又はその結合断片。
アミノ酸配列ＳＥＱＩＤ番号：６、ＳＥＱＩＤ番号：７、及びＳＥＱＩＤ番号：８を有した可変の重鎖ＣＤＲ、並びに、アミノ酸配列ＳＥＱＩＤ番号：９、ＳＥＱＩＤ番号：１０、及びＳＥＱＩＤ番号：１１を有した可変の軽鎖ＣＤＲを含み、さらに、ＩｇＧ_２定常鎖を含む定常鎖を含む、請求項１８に記載のＰＳＧＬ−１に特異的なモノクローナル抗体又はその結合断片。
１００ｎＭ以下のＫ_ｄ、５０ｎＭ以下のＫ_ｄ、２５ｎＭ以下のＫ_ｄ、１０ｎＭ以下のＫ_ｄ、及び、５ｎＭ以下のＫ_ｄの少なくとも１つでＰＳＧＬ−１に結合することができる、請求項１８又は１９に記載のＰＳＧＬ−１に特異的なモノクローナル抗体又はその結合断片。
ヒトモノクローナル抗体若しくはその断片、又は、ヒト化モノクローナル抗体若しくはその断片を含む、請求項１８乃至２０のいずれか一項に記載のＰＳＧＬ−１に特異的なモノクローナル抗体又はその結合断片。