JP2011513294A - 人参抽出物による先天免疫応答および適応免疫応答の活性化 - Google Patents

Abstract

本発明は、有効量の人参画分、別の薬物または１つまたは複数の薬学的に許容可能なキャリアと組み合わせた該画分を含む薬学的組成物、または該画分を含む食品を被験体に投与することによる、被験体における状態を予防、処置、または改善するために先天免疫応答および適応免疫応答を活性化するための人参画分および方法に関する。本画分を、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓから作製することができるか、ＣＶＴ−Ｅ００２、ＰＱ_２、ＰＱ_２２３、ならびにＣＶＴ−Ｅ００２、ＰＱ_２、およびＰＱ_２２３由来の精製画分から選択することができる。

Description

本発明は、有効量の人参画分、該画分を含む薬学的組成物または食品を被験体に投与することによる、被験体における状態を予防、処置、または改善するために先天免疫応答および適応免疫応答を活性化するための人参画分および方法に関する。かかる状態には、アレルギー、喘息、ウイルスおよび微生物の感染、ならびに癌が含まれる。人参画分を、ワクチンアジュバントとして使用することができる。

アメリカ人参（Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ）の根由来の登録商標を有する水溶性抽出物（ＣＶＴ−Ｅ００２）は、ＣＯＬＤ−ＦＸ（商標）として市販されている。この抽出物は、他のアジア産またはアメリカ産の人参製品と多糖およびジンセノサイド含有量が異なり、主にポリ−フラノシル−ピラノシル−サッカリドからなる。この製品のバッチ毎の品質はＣｈｅｍＢｉｏＰｒｉｎｔ（商標）テクノロジーによって証明される。このテクノロジーにより、その化学的均一性および薬理学的均一性が保証される。この登録商標を有する天然抽出物は、免疫調節効果を有することが知られている（Ｗａｎｇら、２００１、２００４）。ＣＶＴ−Ｅ００２は、マウス脾臓細胞の増殖を増強し、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの腹腔マクロファージからのインターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−６、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−α、および一酸化窒素（ＮＯ）の産生を増加させる。ＣＶＴ−Ｅ００２のマウスへの投与によって血清免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）抗体レベルが増加し（Ｗａｎｇら、２００１）、ウイルス誘導性白血病マウスへのＣＶＴ−Ｅ００２の連日投与によって白血病細胞数が減少する一方で骨髄および脾臓中でのマクロファージおよびＮＫ細胞の比率が増加した（Ｍｉｌｌｅｒ、２００６）。生きているインフルエンザウイルスと培養したヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）についての最近の研究では、ＣＶＴ−Ｅ００２はＩＬ−２およびインターフェロンγ（ＩＦＮγ）の産生の増強に有効であった（Ｊｉｎｇら、提出中）。ＩＬ−２およびＩＦＮγは主なＴ細胞およびＮＫ細胞のサイトカインであり、ウイルス特異的適応免疫応答に関連する。臨床研究では、健康な成人への低用量のＣＯＬＤ−ＦＸ（商標）の連日の補足により、血漿中のＮＫ細胞の比率が増加した（Ｐｒｅｄｙら、２００６）。

微生物病原体に対する防御の最前線であるマクロファージおよびＮＫ細胞は共に先天免疫の重要な成分である。これらの細胞は、抗菌薬（サイトカイン、インターフェロン、およびケモカインなど）の放出およびその貪食活性または細胞溶解活性によって感染因子の増殖および拡散を即座に制限するように作用する。

前臨床研究によってウイルス関連上気道感染の予防のためのＣＶＴ−Ｅ００２の潜在的使用が示唆されたので、１９８人の施設入居高齢者を対象とした臨床試験を行った。この研究により、インフルエンザ流行期における４ヶ月間のＣＶＴ−Ｅ００２の連日投与がインフルエンザおよび呼吸器合胞体ウイルスに起因する急性呼吸器疾患の相対リスクを最大８９％減少させることが証明された（ＭｃＥｌｈａｎｅｙら、２００４）。別の研究でも、ＣＶＴ−Ｅ００２によって３２３人の健康な中年成人における呼吸器感染の再発が有意に減少することが示された（Ｐｒｅｄｙら、２００５）。ＣＶＴ−Ｅ００２処置はまた、健康な成人における上気道感染に関連する症状の重症度および持続期間を減少させた。６５歳以上の４３の地域に在住する成人の無作為化二重盲検プラセボ対照試験では、ＣＶＴ−Ｅ００２の連日摂取により、呼吸器症状の相対リスクおよび相対持続期間がそれぞれ４８％および５５％減少した。ＣＶＴ−Ｅ００２の連日投与は、健康な高齢者における急性呼吸器疾患の予防のための安全且つ天然の治療手段であることが示された。

哺乳動物免疫系は、感染から防御するための複数の、層を成した相互作用防御系を進化させてきており、この相互作用防御系は先天免疫および適応免疫に大別されている。先天免疫は微生物病原体に対する防御の最前線であり、食細胞および抗原提示細胞（樹状細胞およびマクロファージなど）の活性化ならびに種々のサイトカイン、ケモカイン、および抗微生物因子（インターフェロンおよびデフェンシンなど）の放出による炎症反応の開始によって感染因子の初期の増殖および拡散をほぼ即座に制限するように作用する。先天免疫は進化的に古く、比較的非特異的であるとしてその研究が免疫学者によって長年にわたってほとんど無視されていた。ヒトは、大部分が先天性免疫系によって感染から防御されている。感染性生物が先天性免疫防御を通過する場合、侵入病原体によって固有に発現される高特異性決定基に指向する適応免疫応答の生成を先天性防御が促進およびガイドする。これらの応答はＢ細胞およびＴ細胞における特異的抗原−受容体遺伝子の再配列に依存し、それにより、高親和性抗原特異的抗体（体液性免疫）が産生され、Ｔ細胞または細胞性免疫が得られる。抗体は、細胞外病原体およびその毒素の除去、破壊、または中和を容易にする。Ｔ細胞性免疫応答は、細胞内病原体の排除または調節を補助する。先天性免疫応答と対照的に、適応免疫応答は、特異的免疫記憶の特徴を有する。

以前の研究では、どのようにして宿主先天性免疫系が感染を検出し、どのようにして自己と病原体または感染性の非自己とを識別するのかを判断することが試みられてきた。Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）の発見および特徴付けによって先天性免疫認識が深く洞察され、感染に対する宿主防御における先天性免疫系の重要な役割が確立された（Ａｋｉｒａら、２００６；Ｈａｒｇｒｅａｖｅｓ ａｎｄ Ｍｅｄｚｈｉｔｏｖ、２００５；Ｋａｗａｉ ａｎｄ Ａｋｉｒａ、２００６；Ｐｈｉｌｐｏｔｔ ａｎｄ Ｇｉｒａｒｄｉｎ、２００４；Ｓｅｔｈら、２００６）。ＴＬＲは先天免疫および適応免疫における重要な分子である。先天性免疫系は、感染を検出して種々の抗菌防御機構を誘発するための生殖系列にコードされるパターン認識受容体（ＰＲＲ）の複数のファミリーを使用する（Ｊａｎｅｗａｙ ａｎｄ Ｍｅｄｚｈｉｔｏｖ、１９９８）。これらのＰＲＲは、植物およびショウジョウバエから哺乳動物までの種の間で進化的に高度に保存されている。先天性免疫認識のストラテジーは、多種の微生物に存在し、且つ宿主細胞中に存在しない高度に保存された必須の構造の検出に基づく（Ｊａｎｅｗａｙ、１９９２；Ｊａｎｅｗａｙ ａｎｄ Ｍｅｄｚｈｉｔｏｖ、１９９９）。先天性免疫認識の標的が保存された分子パターンであるので、標的は病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）と呼ばれる。ＰＡＭＰは、先天性免疫感知の理想的な標的となるべく重要な特徴を有する。ＰＡＭＰは、微生物のみによって産生され、宿主細胞によって産生されない。これは、自己と感染性非自己との識別の根拠である。ＰＡＭＰは、所与のクラスの微生物間で保存されており、それにより、侵入病原体の大きなクラスの存在を検出するためのＰＲＲ数が制限される。例えば、ＬＰＳパターンにより、単一のＰＲＲから任意のグラム陰性菌の存在を検出することが可能である。ＰＡＭＰは微生物生存に不可欠であり、ＰＡＭＰの任意の変異または喪失は生物にとって致命的であるか、その適応適合性を大いに減少させる。先天性免疫認識に関するこれらの新規の洞察は、免疫防御、病理発生、ならびに感染症の処置および予防に対する理解を根本的に変えている。

ＴＬＲは、ＰＡＭＰを検出してシグナル伝達受容体として機能する進化的に保存された膜貫通受容体であるＰＲＲの１つのファミリーを表す。ＴＬＲはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａで発見され、ショウジョウバエの腹側／背側方向の発達で役割を果たす（Ｓｔｅｉｎら、１９９１）。この遺伝子が変異した場合、成長したハエは、狂気のまたは「酔っぱらった」を意味するドイツ語のスラングである「ｔｏｌｌ」であることが見出された。さらに、Ｔｏｌｌ変異を有するハエは、真菌感染に感受性が高いことが見出された（Ｌｅｍａｉｔｒｅら、１９９６）。現在までに、哺乳動物で１１種のＴＬＲが同定されており、これらはそれぞれ、異なる一連の微生物刺激を感知し、病原体に対する特異的応答を駆動する異なるシグナル伝達経路および転写因子を活性化する（Ｋａｗａｉ ａｎｄ Ａｋｉｒａ、２００５）。ＴＬＲは、種々の数のロイシンリッチ反復（ＬＲＲ）モチーフを含む細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、およびインターロイキン−１受容体（ＩＬ−１Ｒ）のドメインに相同な細胞質シグナル伝達ドメイン（Ｔｏｌｌ／ＩＬ−１Ｒ相同（ＴＩＲ）ドメインと呼ばれる）によって特徴づけられるＩ型内在性膜糖タンパク質である（Ｏ’Ｎｅｉｌｌ、２００６）。ＬＲＲドメインは、それぞれが２４〜２９アミノ酸長である１９〜２５個の縦列ＬＲＲモチーフから構成される。

ＴＬＲ４（最初に発見された哺乳動物ＴＬＲ）は、長きにわたって探求されてきたグラム陰性菌のリポ多糖（ＬＰＳ）の受容体であることが証明された（Ｍｅｄｚｈｉｔｏｖら、１９９７；Ｐｏｌｔｏｒａｋら、１９９８）。ＴＬＲ２は、グラム陽性菌およびマイコプラズマのリポタンパク質およびリポペプチドに加えて、ペプチドグリカンを認識する（Ｔａｋｅｄａら、２００３；Ｔａｋｅｕｃｈｉら、１９９９）。ＴＬＲ２はＴＬＲ１またはＴＬＲ６とヘテロ二量体を形成して、ジアシルリポペプチドとトリアシルリポペプチドとをそれぞれ識別することができる（Ｔａｋｅｄａら、２００３）。さらに、ＴＬＲ２は、非ＴＬＲ受容体であるデクチン−１と共に酵母の細胞壁で見出されるザイモサンに対する応答を媒介する（Ｇａｎｔｎｅｒら、２００３）。ＴＬＲ５は、細菌鞭毛のタンパク質成分であるフラジェリンを認識する（Ｈａｙａｓｈｉら、２００１）。ＴＬＲ１１（ＴＬＲ５と密接に関連する）は、マウスの尿生殖路中に豊富に発現することが見出され、尿路病原性細菌からの防御に関連していた（Ｚｈａｎｇら、２００４）。ＴＬＲ１１は、最近、寄生原生動物Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ由来のプロフィリン様タンパク質を認識することが示された（Ｙａｒｏｖｉｎｓｋｙら、２００５）。ＴＬＲ３、７、８、および９は、核酸を認識し、細胞表面上に発現されないが、エンドソーム区画中に排他的に発現される（Ｌａｔｚら、２００４；Ｍａｔｓｕｍｏｔｏら、２００３）。ＴＬＲ３は、ウイルス感染中に生成される二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）の認識に関与する（Ａｌｅｘｏｐｏｕｌｏｕら、２００１）のに対して、密接に関連するＴＬＲ７および８はグアノシンまたはウリジンが豊富なウイルス一本鎖（ｓｓ）ＲＮＡ（Ｄｉｅｂｏｌｄら、２００４；Ｈｅｉｌら、２００４）ならびに合成イミダゾキノリン様分子であるイミキモドおよびレシキモド（Ｒ−８４８）（Ｈｅｍｍｉら、２００２；Ｊｕｒｋら、２００２）を認識する。ＴＬＲ９は細菌およびウイルスの非メチル化ＣｐＧ ＤＮＡモチーフの認識を媒介し（Ｈｅｍｍｉら、２０００）、非ＤＮＡ病原性成分（マラリア原虫由来のヘモゾインなど）を認識することも最近示された（Ｃｏｂａｎら、２００５）。ＴＬＲ１０は病原体媒介性炎症経路、病原体認識、および先天免疫の活性化で役割を果たすが、ＴＬＲ１０リガンドは現在知られていない。

ＴＬＲを、配列類似性に基づいて６つの主なサブファミリーに分類することもでき（Ｒｏａｃｈら、２００５）、これらはそれぞれ関連するＰＡＭＰを認識する。ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、およびＴＬＲ６からなるサブファミリーはリポペプチドを認識し、ＴＬＲ３はｄｓＲＮＡ、ＴＬＲ４ ＬＰＳ、ＴＬＲ５フラジェリンを認識し、大いに関連するＴＬＲ７およびＴＬＲ８を含むＴＬＲ９サブファミリーは核酸を認識する。重要なことには、ＴＬＲの細胞内局在は、配列類似性よりもむしろそのリガンドの性質に相関する（Ｈａｒｇｒｅａｖｅｓ ａｎｄ Ｍｅｄｚｈｉｔｏｖ、２００５）。ＴＬＲ１、２、４、５、６、および１０は表面原形質膜表面上に存在し、ここでこれらは病原体媒介性炎症経路に関与し、そして／または細菌およびウイルス成分を認識する一方で、抗ウイルスＴＬＲであるＴＬＲ３、７、８、および９は細胞内エンドソーム中に発現される。抗ウイルスＴＬＲによって認識される核酸は脊椎動物でも認められるので、エンドソーム中のその位置は自己核酸に対するその反応性を制限する（Ｂａｒｔｏｎら、２００６）。ＴＬＲ１１は細胞表面上に存在し、尿路病原性細菌および寄生原生動物の受容体である。

ＴＬＲによるシグナル伝達は複雑であり、他で概説されている（Ａｋｉｒａ ａｎｄ Ｔａｋｅｄａ、２００４；Ｏ’Ｎｅｉｌｌ、２００６）。簡潔に述べれば、ＴＬＲ３を除く全てのＴＬＲは、アダプター分子である骨髄分化因子８８（ＭｙＤ８８）（ＴＩＲドメインおよびデスドメインを含む細胞質タンパク質）を介してシグナル伝達する。最終的に、ＮＦ−κＢおよびＭＡＰＫはＴＲＡＦ６の下流で活性化され、炎症誘発性のサイトカインおよびケモカイン（ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−１β、およびＩＬ−１２など）を産生する。ＭｙＤ８８に加えて、ＴＬＲ３およびＴＬＲ４は、ＴＲＩＦ（Ｉ型インターフェロンおよびＩ型インターフェロン依存遺伝子の産生に必要とされる別のＴＩＲ含有アダプター）を介してシグナル伝達する。

ＴＬＲは、種々の免疫細胞および非免疫細胞上に発現する。マウスマクロファージはＴＬＲ１−９を発現し、炎症誘発反応の開始でのその重要性を反映する。ウイルス感染中に大量のＩ型インターフェロンを産生する形質細胞様ＤＣ（ｐＤＣ）はＴＬＲ７および９を発現する。マウスにおける全ての従来のＤＣはＴＬＲ１、２、４、６、８、および９を発現する一方で、ＴＬＲ３はＣＤ８＋およびＣＤ４−ＣＤ８−ＤＣサブセットに限定される（Ｉｗａｓａｋｉ ａｎｄ Ｍｅｄｚｈｉｔｏｖ、２００４）。ヒトでは、ＴＬＲ９発現はｐＤＣおよびＢ細胞に限定される（Ｂａｕｅｒら、２００１；Ｋｒｕｇら、２００１）。

ほとんどの感染に対する防御の最前線としての機能を果たす粘膜上皮細胞（ＥＣ）上のＴＬＲ発現を理解することに大きな関心がある。本発明者らの最近の研究（Ｙａｏ Ｘ−Ｄら、２００７）では、本発明者らは、マウスおよびヒトの生殖管におけるＥＣ上のＴＬＲの発現および調節を理解することに集中した。レーザー・キャプチャー・マイクロダイセクション（ＬＣＭ）を使用して、雌マウスの発情周期が膣上皮中のＴＬＲの発現に大いに影響を及ぼすことを示した。ＴＬＲ１１を除く本質的に全てのＴＬＲのｍＲＮＡ発現は、発情間期、特に長時間作用するプロゲスチンであるデポ−プロベラでの処置後に有意に増加した（Ｙａｏ Ｘ−Ｄら、原稿提出中）。これらの所見は、性感染症に対する先天性免疫防御についての本発明者らの理解に寄与し、女性生殖器の健康の質を向上させる。

ＴＬＲリガンド（ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＴＬＲ９のリガンドであるＯＤＮ）、ｄｓＲＮＡ、およびフラジェリンが含まれる）の粘膜送達は、ＨＳＶ−２の膣内（ＩＶＡＧ）攻撃からマウスを防御することができる先天的抗ウイルス効果を誘導することができる（Ａｓｈｋａｒ ａｎｄ Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ、２００２）。研究では、ＨＳＶ−２由来の精製エンベロープ糖タンパク質（ｇＢ）およびアジュバントとしてのＣｐＧ ＯＤＮの鼻腔内投与により、膣管内に強いｇＢ特異的ＩｇＡおよびＩｇＧ（発情周期の間持続する）ならびに全身および生殖器ｇＢ特異的ＣＴＬが誘導され、致死性ＩＶＡＧ ＨＳＶ−２感染から防御されることが示された（Ｇａｌｌｉｃｈａｎら、２００１）。その後、不活化ｇｐ１２０枯渇ＨＩＶ−１およびＣｐＧ ＯＤＮでの鼻腔内免疫化によって生殖管中の抗ＨＩＶ ＩｇＡおよびＨＩＶ特異的Ｔ細胞性免疫応答（ＩＦＮγおよびβ−ケモカインの産生が含まれる）が誘導されることが示された（Ｄｕｍａｉｓら、２００２）。さらに、ＨＩＶ−１およびＣｐＧで鼻腔内免疫化したマウスは生殖管中でＣＤ８＋Ｔ細胞が誘導され、異なるクレード由来のＨＩＶ−１ ｇａｇを発現する組換えワクシニアウイルスでのＩＶＡＧ攻撃からのクロスクレード防御が得られる（Ｊｉａｎｇら、２００５）。より最近では、生殖管が低免疫誘導部位であると見なされているにもかかわらず、特に非複製抗原での免疫化後、組換えサブユニットＨＳＶ−２ｇＢおよびＣｐＧでの雌マウスの膣内（ＩＶＡＧ）免疫化によって血清および膣洗浄液中のｇＢ特異的ＩｇＧ抗体およびＩｇＡ抗体が抗原のみで免疫化したマウスよりも高いレベルで誘導され、ｇＢおよびＣｐＧで免疫化したマウスがＨＳＶ−２の膣感染からより良好に防御された（Ｋｗａｎｔ ａｎｄ Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ、２００４）。したがって、適切な粘膜アジュバントが使用された場合、非複製サブユニットタンパク質抗原でのＩＶＡＧ免疫化後に防御的免疫応答を誘導することが可能である。

最近の研究では、ＰＡＭＰ（ＣｐＧ ＤＮＡ、ｄｓＲＮＡ、およびＬＰＳが含まれる）が単純ヘルペスウイルス２型（ＨＳＶ−２）および水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）をｉｎ ｖｉｔｒｏで阻害することができることが示されている（Ａｓｈｋａｒら、２００３ ＆ ２００４）。任意のウイルス抗原の非存在下での膣粘膜に経粘膜送達されるＣｐＧ ＯＤＮの単回投与により、致死用量のＨＳＶ−２での生殖器感染が防御された。この防御がＢ細胞およびＴ細胞を欠くノックアウトマウスで起こったので、この防御は先天性免疫系によって媒介された。ＣｐＧ ＯＤＮの局所ＩＶＡＧ送達により、膣上皮が急速に増殖して肥厚し、ＴＬＲ−９依存性抗ウイルス状態（ウイルスの侵入を遮断しなかったが膣上皮細胞中のウイルス複製を阻害した）を誘導した（Ａｓｈｋａｒら、２００３）。ｄｓＲＮＡ（ＴＬＲ３のリガンド）の粘膜送達により、ＣｐＧ ＯＤＮを使用して認められる局所または全身の炎症なしに生殖器ＨＳＶ−２感染が防御された（Ａｓｈｋａｒら、２００４）。したがって、ＴＬＲ３リガンドの局所送達は、生殖器ウイルス感染の安全な防御手段であり得る。

ＴＬＲは、これらが活性化される細胞型に応じてさまざまな応答を誘導する（Ａｓｈｋａｒ ａｎｄ Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ、２００２；Ｉｗａｓａｋｉ ａｎｄ Ｍｅｄｚｈｉｔｏｖ、２００４）。例えば、ＴＬＲ９を介して作用するＣｐＧ ＤＮＡでのＤＣの処置によってＤＣが成熟するまで（ＭＨＣクラスＩＩおよび共刺激分子の上方制御が含まれる）活性化され、炎症誘発性のサイトカイン、ケモカインが産生され、抗原提示が増強される。同様に、ＣｐＧでのＢ細胞の処置により、その活性化および増殖、抗体ならびにＩＬ−６およびＩＬ−１０の分泌が誘導され、Ｂ細胞がアポトーシスに耐性を示すようになる。ＣｐＧ ＤＮＡを介した免疫細胞の活性化により、Ｔｈ１支配応答が誘導される。

ＰＲＲが病原体に対する宿主防御を媒介する機構は、懸命な研究の焦点である。その先天性免疫応答を増強する能力により、細胞内の細菌、寄生虫、およびウイルスの感染を防御または処置するための独立型の薬剤としてリガンド、ＰＲＲの合成アゴニストまたはアンタゴニストを使用するための新規のストラテジー（すなわち「先天免疫学」）が必要である。さらに、その各リガンドまたはアゴニストを使用したＰＲＲを介した先天性免疫系の活性化は、特定の病原体に対する免疫応答を増強するストラテジーを示し、それにより、ＰＲＲを介して可能性のあるワクチンアジュバントをシグナル伝達する薬剤が作製される。

先天免疫応答および適応免疫応答を特異的に活性化して有害な副作用または不快感を生じることなくアレルギー、喘息、ウイルスおよび微生物の感染、ならびに癌などの関連する状態を処置する天然の草本画分または組成物が必要である。免疫応答型は周知である。Ｔｈ１応答は、細胞内病原体および細胞内の欠陥（癌など）に応答したキラーＴ細胞および一定の抗体の生成によって特徴づけられる。Ｔｈ２応答は、細胞外病原体と戦う。アレルギー反応は環境物質（すなわち、アレルゲン）に応答して起こり、これは特異的Ｔｈ２応答の結果である。Ｔｈ２応答は他の特定の抗体型の生成によって特徴づけられ、このアレルギー反応の典型である。このアレルギー反応では、アレルゲンが粘膜表面上で病原体と間違われて免疫応答を誘発し、それにより、流涙、気道炎症、および肺内の気道筋細胞の収縮などの症状が生じる。ＴＬＲ活性化によって抗原提示細胞が誘導されてＴｈ１型免疫応答に有利に働くサイトカインを産生し、それにより、アレルゲンへの曝露に起因する有害なＴＨ２応答の発生が予防または低減される。

アレルギーは、ＩｇＥによって肥満細胞および好塩基球と呼ばれる白血球が過剰に活性化され、それにより、極端な炎症反応が起こることによって特に特徴づけられる。アレルギーを起こしやすいヒトが最初にアレルゲンに曝露される場合、大量の対応する特異的ＩｇＥ抗体が作製される。ＩｇＥ分子は、肥満細胞（組織内）または好塩基球（循環中）の表面に付着する。肥満細胞は、肺、皮膚、舌、ならびに鼻および腸管の内層に見出される。肥満細胞または好塩基球上のＩｇＥ抗体がその特異的アレルゲンに遭遇する場合、ＩｇＥ抗体は肥満細胞または好塩基球に信号を送ってヒスタミン、ヘパリン、および血小板を活性化する物質などの化学物質を放出させ、二次細胞（好酸球および好中球など）を引き寄せる。活性化された肥満細胞または好塩基球は、新規のメディエーター（プロスタグランジンおよびロイコトリエンが含まれる）も合成する。これらの化学的メディエーターにより、アレルギーに関連する症状（喘鳴、くしゃみ、涙眼、および掻痒が含まれる）を生じる。一般的なアレルギー反応には、湿疹、蕁麻疹、枯草熱、喘息、食物アレルギー、および刺咬昆虫（スズメバチおよびミツバチなど）の毒液に対する反応が含まれる。

喘息の悪化は、患者の肺機能の深刻な悪化であり、しばしば入院する必要があり、さらには死に至る。喘息は、肺の主な気道（気管支）が炎症を起こす場合に起こる。気管支壁の筋肉が強固になり、肺内の細胞が余剰の粘液を産生して気道がさらに狭くなり、軽度の喘鳴が重度の呼吸困難を引き起こす。喘息は、しばしば、呼吸器ウイルス感染（感冒など）によって誘発されるが、他の刺激物質（タバコの煙、チリダニ、動物の鱗屑、花粉、大気汚染、脱臭剤、および香水など）が喘息の症状をより頻繁にし、重篤にし、制御不能にし得る。他の喘息誘発物には、運動、冷気、および情動性ストレスが含まれる。大部分の喘息の悪化は、一般的な気道ウイルス感染によって誘発される。小児では、アトピー性であることおよびウイルス感染は共に喘鳴による不調での入院の主な危険因子である。喘息発作および特にウイルスによる喘息の悪化の臨床的重要性は明らかであるが、喘息患者が感冒ウイルス感染後に不調になる理由は依然としてあまり理解されていない。

通常、ウイルス感染により、好中球が主にＣＤ８＋Ｔ細胞の大単核細胞成分を有する気道に流入する。しかし、ウイルス感染が宿主の既存状態に応じてさまざまな炎症反応（気道好酸球増加症が含まれる）を引き起こし得ることが明らかとなった。アトピー個体では、実験的ライノウイルス感染により、抗原攻撃後の気道への好酸球の動員が増加し、それにより、非アレルギー個体と比較して気道反応性が増加する。ライノウイルスの鼻腔内感染後、喘息性個体の下気道の生検試料では好酸球が増加し、回復期にさえも増加が持続する。喘息患者では、悪化中の気道好酸球の存在が十分に確立されている。喘息悪化中の気道における好酸球の発見は、これらの悪化がしばしばウイルス感染によって誘発されることを考えれば、いくらか逆説的になる。気道中の好酸球およびその脱顆粒産物との関連が喘息患者におけるウイルス感染中に説明されている一方で、好酸球がウイルスに応答して活性であるかどうか、およびこの活性化がどのようにして起こり得るのかについては知られていない。

喘息悪化について、現在、エフェクター細胞（すなわち、好酸球、肥満細胞、好塩基球、好中球）が活性化され得ると理解されている。図１は、気道平滑筋の神経制御の機能障害によって気道過敏症を引き起こす気道中のウイルス誘導性好酸球メディエーターの放出モデルを示す。ウイルスまたはウイルス抗原は、記憶Ｔ細胞に提示される。活性化したＴ細胞（ＣＤ４）は、サイトカイン（ＧＭ−ＣＳＦなど）のような未知の可溶性脱顆粒因子を放出する。これらのＴ細胞はまた、細胞表面リガンド（例えば、ＩＣＡＭ−１）を発現することができる。好酸球は、可溶性メディエーター、細胞表面リガンド、またはその組み合わせに応答し、種々の好酸球メディエーター（すなわち、好酸球主要塩基性タンパク質、好酸球ペルオキシダーゼ、ＲＡＮＴＥＳ）を放出する。

喘息患者では、気道中のウイルス誘導性好酸球メディエーターの放出は、喘息悪化と相関する。好酸球のウイルス誘導性の喘息悪化の発生への関与について、好酸球はウイルスに別の細胞を介して間接的に反応するか直接反応しなければならない。この過程は、ウイルス誘導性好酸球メディエーターの放出を示すであろう。

西洋人医師は、その予防特性および治療特性についての科学的研究がないために、漢方薬を処方したがらなかった。しかし、漢方薬は、合成薬が通常遭遇する長期の開発期間および高コストを必要としない。さらに、漢方薬は容易に入手可能であり、処方薬またはワクチンと比較して副作用が最少のより快適で経済的な代替法を被験体に提供する。

１つの実施形態では、本発明は、有効量の少なくとも１つの人参画分を被験体に投与する工程を含む、処置を必要とする被験体における先天免疫のシグナル伝達の活性化による処置に感受性を示す状態を処置する方法に関する。１つの実施形態では、状態は、アレルギー、喘息、ウイルス感染、微生物感染、または癌から選択される。１つの実施形態では、ウイルス感染は、呼吸器または粘膜伝染性ウイルス（インフルエンザ、コロナウイルス、ヘルペス、呼吸器合胞体ウイルス、ラブドウイルス科、またはヒト免疫不全ウイルスが含まれるが、これらに限定されない）に由来する。

１つの実施形態では、画分を、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓ、Ｐａｎａｘ ｔｒｉｆｏｌｉａ、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ、Ｐａｎａｘ ｓｃｈｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｐｓｅｕｄｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｖｉｅｔｎａｍｅｎｓｉｓ、Ｐａｎａｘ ｅｌｅｇａｔｉｏｒ、Ｐａｎａｘ ｗａｎｇｉａｎｕｓ、Ｐａｎａｘ ｂｉｐｉｎｒａｔｉｆｉｄｕｓ、水参（ｇｒｅｅｎ ｇｉｎｓｅｎｇ）または生参（ｆｒｅｓｈ ｇｉｎｓｅｎｇ）、白参（ｗｈｉｔｅ ｇｉｎｓｅｎｇ）、または紅参（ｒｅｄ ｇｉｎｓｅｎｇ）から選択される人参から作製する。１つの実施形態では、画分はＰａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓの画分である。１つの実施形態では、画分は、ＣＶＴ−Ｅ００２、ＰＱ_２、ＰＱ_２２３、またはＣＶＴ−Ｅ００２、ＰＱ_２、およびＰＱ_２２３由来の精製画分から選択される。１つの実施形態では、画分はＣＶＴ−Ｅ００２である。１つの実施形態では、ＣＶＴ−Ｅ００２はＴｏｌｌ様受容体由来のシグナル伝達を調整する。１つの実施形態では、Ｔｏｌｌ様受容体はＴｏｌｌ様受容体２である。１つの実施形態では、Ｔｏｌｌ様受容体はＴｏｌｌ様受容体２およびＴｏｌｌ様受容体６のヘテロ二量体である。１つの実施形態では、Ｔｏｌｌ様受容体はＴｏｌｌ様受容体２およびＴｏｌｌ様受容体１のヘテロ二量体である。１つの実施形態では、Ｔｏｌｌ様受容体はＴｏｌｌ様受容体４である。１つの実施形態では、ＣＶＴ−Ｅ００２は、リンパ球および抗原提示細胞の上方制御、サイトカイン分泌、抗ウイルス因子の分泌、またはその組み合わせを誘導する。

１つの実施形態では、本発明は、状態を予防、処置、または改善するために先天免疫応答および適応免疫応答を活性化するための人参画分に関する。１つの実施形態では、画分を、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓ、Ｐａｎａｘ ｔｒｉｆｏｌｉａ、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ、Ｐａｎａｘ ｓｃｈｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｐｓｅｕｄｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｖｉｅｔｎａｍｅｎｓｉｓ、Ｐａｎａｘ ｅｌｅｇａｔｉｏｒ、Ｐａｎａｘ ｗａｎｇｉａｎｕｓ、Ｐａｎａｘ ｂｉｐｉｎｒａｔｉｆｉｄｕｓ、水参または生参、白参、または紅参から選択される人参から作製する。１つの実施形態では、画分はＰａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓの画分である。１つの実施形態では、画分は、ＣＶＴ−Ｅ００２、ＰＱ_２、ＰＱ_２２３、またはＣＶＴ−Ｅ００２、ＰＱ_２、およびＰＱ_２２３由来の精製画分から選択される。１つの実施形態では、画分はＣＶＴ−Ｅ００２である。

１つの実施形態では、本発明は、状態を予防、処置、または改善するために先天免疫応答および適応免疫応答を活性化するための別の薬物または１つまたは複数の薬学的に許容可能なキャリアと組み合わせた人参画分を含む薬学的組成物（食品が含まれる）に関する。１つの実施形態では、画分を、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓ、Ｐａｎａｘ ｔｒｉｆｏｌｉａ、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ、Ｐａｎａｘ ｓｃｈｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｐｓｅｕｄｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｖｉｅｔｎａｍｅｎｓｉｓ、Ｐａｎａｘ ｅｌｅｇａｔｉｏｒ、Ｐａｎａｘ ｗａｎｇｉａｎｕｓ、Ｐａｎａｘ ｂｉｐｉｎｒａｔｉｆｉｄｕｓ、水参または生参、白参、または紅参から選択される人参から作製する。１つの実施形態では、画分はＰａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓの画分である。１つの実施形態では、画分は、ＣＶＴ−Ｅ００２、ＰＱ_２、ＰＱ_２２３、またはＣＶＴ−Ｅ００２、ＰＱ_２、およびＰＱ_２２３由来の精製画分から選択される。１つの実施形態では、画分はＣＶＴ−Ｅ００２である。

１つの実施形態では、本発明は、状態を予防、処置、または改善するために先天免疫応答および適応免疫応答を活性化するための人参画分を含む食品に関する。１つの実施形態では、画分を、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓ、Ｐａｎａｘ ｔｒｉｆｏｌｉａ、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ、Ｐａｎａｘ ｓｃｈｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｐｓｅｕｄｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｖｉｅｔｎａｍｅｎｓｉｓ、Ｐａｎａｘ ｅｌｅｇａｔｉｏｒ、Ｐａｎａｘ ｗａｎｇｉａｎｕｓ、Ｐａｎａｘ ｂｉｐｉｎｒａｔｉｆｉｄｕｓ、水参または生参、白参、または紅参から選択される人参から作製する。１つの実施形態では、画分はＰａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓの画分である。１つの実施形態では、画分は、ＣＶＴ−Ｅ００２、ＰＱ_２、ＰＱ_２２３、またはＣＶＴ−Ｅ００２、ＰＱ_２、およびＰＱ_２２３由来の精製画分から選択される。１つの実施形態では、画分はＣＶＴ−Ｅ００２である。

別の実施形態では、本発明は、状態を予防、処置、または改善するために先天免疫応答および適応免疫応答を活性化するための薬学的組成物または食品の調製のための人参画分の使用に関する。１つの実施形態では、状態は、アレルギー、喘息、ウイルス感染、微生物感染、または癌から選択される。１つの実施形態では、ウイルス感染は、呼吸器または粘膜伝染性ウイルス（インフルエンザ、コロナウイルス、ヘルペス、呼吸器合胞体ウイルス、ラブドウイルス科、およびヒト免疫不全ウイルスが含まれる）に由来する。１つの実施形態では、画分を、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓ、Ｐａｎａｘ ｔｒｉｆｏｌｉａ、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ、Ｐａｎａｘ ｓｃｈｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｐｓｅｕｄｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｖｉｅｔｎａｍｅｎｓｉｓ、Ｐａｎａｘ ｅｌｅｇａｔｉｏｒ、Ｐａｎａｘ ｗａｎｇｉａｎｕｓ、Ｐａｎａｘ ｂｉｐｉｎｒａｔｉｆｉｄｕｓ、水参または生参、白参、または紅参から選択される人参から作製する。１つの実施形態では、画分はＰａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓの画分である。１つの実施形態では、画分は、ＣＶＴ−Ｅ００２、ＰＱ_２、ＰＱ_２２３、またはＣＶＴ−Ｅ００２、ＰＱ_２、およびＰＱ_２２３由来の精製画分から選択される。１つの実施形態では、画分はＣＶＴ−Ｅ００２である。

別の実施形態では、本発明は、人参画分または別の薬物または１つまたは複数の薬学的に許容可能なキャリアと組み合わせた画分を含む薬学的組成物（食品が含まれる）を被験体に投与することによってかかる活性化を必要とする被験体の状態を予防、処置、または改善するために先天免疫応答および適応免疫応答を活性化する方法に関する。

さらに別の実施形態では、本発明は、人参画分を必要とする被験体に投与することによってＴｏｌｌ様受容体由来のシグナル伝達を調整する工程を含む、先天免疫のシグナル伝達の活性化に関連する状態を予防、処置、または改善する方法に関する。

図１は、気道中のウイルス誘導性好酸球メディエーター放出の基礎となるモデルを示す。 図２は、パラインフルエンザウイルスと自家のリンパ球、樹状細胞、およびマクロファージの種々の組み合わせとの共培養後のヒト好酸球からの好酸球ペルオキシダーゼ放出を示す（ｐ＜０．００１）。各バーは、異なるドナーを使用した少なくとも１２の実験の平均±ＳＥＭである。 図３は、パラインフルエンザウイルスおよび抗原提示細胞（すなわち、マクロファージおよび樹状細胞）との培養（３４℃、５％ＣＯ_２）の６日後にリンパ球が増殖する（Ｈ^３−チミジン組み込みによって測定）ことを示す。各バーは、活性なウイルスについて異なるドナーを使用した少なくとも５の実験の平均±ＳＥＭである。ＲＳＶを使用して、類似の結果を得た（データ示さず）。 図４は、樹状細胞との共培養物中のリンパ球を特徴づけるためのフローサイトメトリーの結果を示す。 図５は、ＥＬＩＳＡ／Ｓｅａｒｃｈｌｉｇｈｔ（ｎ＝１）によって測定したサイトカイン／ケモカインを列挙する表を示す。矢印は、それぞれの適切なコントロールと比較した値を示す。 図６は、リンパ球、ＣＶＴ−Ｅ００２、および樹状細胞との培養（３４℃、５％ＣＯ_２）の６日後にリンパ球が増殖する（光学顕微鏡法によって視覚化し、Ｈ^３−チミン組み込みによって測定する）ことを示す。 図７Ａ〜Ｄは、抗原提示およびＤＣ成熟のフローサイトメトリー分析の結果を示す。図７Ａは、細胞の亜集団を示す。図７Ｂは、異なる条件下でのＤＱ−ＯＶＡの取り込みおよび分解についての細胞のスクリーニング結果を示す。値は、各カテゴリー内のＤＱ−ＯＶＡ陽性である細胞の比率を示す。図７Ｃは、サイズおよび粒度によるＤＣ成熟の評価を示す（値は各カテゴリー中に存在する全細胞に対する比率を示す）。図７Ｄは、ＣＶＴ−Ｅ００２処置の不使用（左）および使用（右）によるＤＣの亜集団を示すフローサイトメトリー画像である。 図７Ａ〜Ｄは、抗原提示およびＤＣ成熟のフローサイトメトリー分析の結果を示す。図７Ａは、細胞の亜集団を示す。図７Ｂは、異なる条件下でのＤＱ−ＯＶＡの取り込みおよび分解についての細胞のスクリーニング結果を示す。値は、各カテゴリー内のＤＱ−ＯＶＡ陽性である細胞の比率を示す。図７Ｃは、サイズおよび粒度によるＤＣ成熟の評価を示す（値は各カテゴリー中に存在する全細胞に対する比率を示す）。図７Ｄは、ＣＶＴ−Ｅ００２処置の不使用（左）および使用（右）によるＤＣの亜集団を示すフローサイトメトリー画像である。 図８Ａおよび８Ｂは、ＣＶＴ−Ｅ００２処置がｉｎ ｖｉｔｒｏでＲＡＷ２６４．７細胞中のＩＬ−６（図８Ａ）およびＩＦＮ−β（図８Ｂ）の産生を刺激することを示す。 図８Ａおよび８Ｂは、ＣＶＴ−Ｅ００２処置がｉｎ ｖｉｔｒｏでＲＡＷ２６４．７細胞中のＩＬ−６（図８Ａ）およびＩＦＮ−β（図８Ｂ）の産生を刺激することを示す。 図９は、ＣＶＴ−Ｅ００２処置がｉｎ ｖｉｔｒｏでの一酸化窒素（ＮＯ）産生を刺激することを示す。 図１０は、ＣＶＴ−Ｅ００２とのインキュベーション後の初代ヒト単球／マクロファージによるＩＬ−６産生を示す。 図１１Ａおよび１１Ｂは、ＣＶＴ−Ｅ００２がｉｎ ｖｉｔｒｏでのＶＳＶ複製を有意に阻害することを示す。 図１２は、Ｃ５７／Ｂ６およびＭｙＤ８８−／−腹腔マクロファージのＣＶＴ−Ｅ００２またはＨＴ−１００１処置中のＩＬ−６産生を示す。 図１３Ａおよび１３Ｂは、Ｃ５７／Ｂ６およびＭｙＤ８８−／−腹腔マクロファージのＣＶＴ−Ｅ００２またはＨＴ−１００１処置中のＩＬ−６（図１３Ａ）またはＩＦＮ−β（図１３Ｂ）の産生を示す。 図１３Ａおよび１３Ｂは、Ｃ５７／Ｂ６およびＭｙＤ８８−／−腹腔マクロファージのＣＶＴ−Ｅ００２またはＨＴ−１００１処置中のＩＬ−６（図１３Ａ）またはＩＦＮ−β（図１３Ｂ）の産生を示す。 図１４は、２４時間にわたるＣＶＴ−Ｅ００２処置がｈＴＬＲ２、ｈＴＬＲ１／２、ｈＴＬＲ２／６、およびｈＴＬＲ４でトランスフェクトした２９３細胞（Ｐａｍ３ＣＳＫ／ＬＰＳコントロール）におけるＩＬ−８産生を刺激することを示す。ｈＴＬＲ４は、ＭＤＲおよびＣＤ１４とのｈＴＬＲ４の同時発現を示す。 図１５は、４８時間にわたるＣＶＴ−Ｅ００２処置がｈＴＬＲ２、ｈＴＬＲ１／２、ｈＴＬＲ２／６、およびｈＴＬＲ４でトランスフェクトした２９３細胞（Ｐａｍ３ＣＳＫ／ＬＰＳコントロール）におけるＩＬ−８産生を刺激することを示す。ｈＴＬＲ４は、ＭＤＲおよびＣＤ１４とのｈＴＬＲ４の同時発現を示す。 図１６Ａおよび１６Ｂは、ＣＶＴ−Ｅ００２処置が気道過敏症（ＡＨＲ）の発症を阻害し（図１６Ａ）、好酸球性気道炎症量を減少させる（図１６Ｂ）ことを示す。 図１７ＡおよびＢは、ＣＶＴ−Ｅ００２の粘膜界面への送達により、同一の粘膜表面に送達されたウイルス（ＨＳＶ−２）から防御されることを証明する。図１７Ａは、ＨＳＶ−２ ＩＶＡＧ攻撃後にＣＶＴ−Ｅ００２、ＨＴ１００１、またはＰＢＳ ＩＶＡＧを投与したＣ５７ＢＬ／６マウスの膣病理スコアを示す。図１７Ｂは、ＨＳＶ−２ ＩＶＡＧ攻撃後にＣＶＴ−Ｅ００２、ＨＴ１００１、またはＰＢＳ ＩＶＡＧを投与したＣ５７ＢＬ／６マウスの生存率を示す。

本発明のさらなる態様および利点は、以下の説明を考慮して明らかであろう。しかし、詳細な説明および特定の実施例は、本発明の好ましい実施形態を示す一方で、この詳細な説明から本発明の精神および範囲内での種々の変更形態および修正形態が当業者に明らかとなるので、例示のみを目的として記載していると理解すべきである。

本発明を説明する場合、本明細書中で定義していない全ての用語はその分野で一般的に認識されている意味を有する。以下の説明が本発明の特定の実施形態または特定の使用を説明する限り、例示のみを目的とすることを意図し、特許請求の範囲に記載の発明を制限しない。以下の説明は、添付の特許請求の範囲中に定義するように、本発明の精神および範囲に含まれる全ての代替形態、修正形態、および等価物を対象とすることを意図する。

本明細書中および特許請求の範囲中で使用する場合、下記の用語および句は以下の意味を有する。

「生体適合性」は、意図する有用性を得るために有意な望ましくない宿主応答を生じないことを意味する。最も好ましくは、生体適合性材料は、意図する有用性を得るために無毒である。したがって、ヒトでの有用性を得るために、生体適合性は、ヒトまたはヒト組織に対して非毒性であることが最も好ましい。

「キャリア」は、生体適合性であり、且つ薬学的に許容可能な適切なビヒクル（例えば、投与に適切な１つまたは複数の固体、半固体、または液体の希釈剤、賦形剤、アジュバント、香料、またはカプセル化物質が含まれる）を意味する。

「被験体」は、ヒトまたは他の脊椎動物を意味する。被験体は小児または成人であり得る。

「機能性食品」は、通常食の一部として消費される従来の食品に外観が類似している食品または従来の食品であり得、生理学的利点を有し、そして／または基本的栄養機能を超えて疾患リスクを減少させる（すなわち、有効成分を含む）ことが証明されている。

「栄養補助食品（ｎｕｔｒａｃｅｕｔｉｃａｌ）」は、通常は食品に関連しない一般に薬物形態で販売されている食品から単離または精製した製品である。栄養補助食品は、生理学的利点を有するか、疾患を防御しなければならない。

「ワクチンアジュバント」は、ワクチンに添加した場合に免疫応答の増加または増強を促進することができる任意の物質または化合物を意味する。

「ワクチン」は、通常の免疫応答を刺激するように設計された抗原の任意の化合物または調製物を意味する。ワクチンは、予防用または治療用であり得る。

「有効量」および／または「治療量」は、処置される病状を予防、処置、および／または改善するのに十分な投薬量を意味する。これは、患者、疾患、およびなされる処置に応じて変化するであろう。例えば、ウイルス感染の場合、「有効量」は、感染症の処置の可能性を実質的に改善するのに必要な量、特に、感染症を首尾よく予防するか、発症した場合に感染症を首尾よく消失させる可能性を改善する量である。

「画分」は、適切な溶媒（例えば、水、エタノール、その混合物、油、または植物抽出の技術水準で周知の任意の他の適切な溶媒など）での植物または植物の一部の抽出から得た濃縮調製物をいうことを意図する。画分または抽出物を、薬理学的に許容可能である場合にそのまま使用することができるか、得られた溶液の溶媒を除去し、残渣をそのまま使用するか、さらなる作業後、例えば、適切な溶媒への再溶解または再懸濁後に使用する。用語「植物」は、植物全体および有効成分を含む植物の一部（例えば、葉、幹、果実、または根）を意味すると理解される。

「人参」は、任意の品種および型の人参（以下に列挙した人参が含まれるが、これらに限定されない）をいうことを意図する。

人参画分を得ることができるウコギ科に属するＰａｎａｘ属の植物には他の属が多数存在し、本発明に関連して使用することができると当業者に理解されるであろう。用語「人参」には、山参または加工人参も含まれる。山参は、人工的に栽培されているのではなく、天然に成長し、成長が認められるあらゆる場所から収穫された人参である。加工人参には、例えば、生参または水参、白参、および紅参が含まれる。生参または水参は、土壌から収穫された生の人参である。白参は生参の乾燥によって得られ、紅参は、生参の蒸気処理およびその後の蒸気処理した人参の乾燥によって得られる。

「人参画分」または「人参画分（複数）」は、１つまたは複数のｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏ薬理学的評価によって検証したところ、被験体の状態を予防、処置、または改善するために先天免疫応答および適応免疫応答を活性化する活性を示す、表１に列記した、または上記した任意の品種および型の人参から作製した画分およびこれらの人参画分から得た亜画分をいうことを意図する。

「ＣＶＴ−Ｅ００２」は、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓから得られ、免疫調節性を有する人参画分の一例をいうことを意図する（以前に、米国特許第６，４３２，４５４号；同第７，０６７，１６０号；同第７，１８６，４２３号；および同第７，４１３，７５６号（参照によって本明細書中に組み込まれる）に記載）。ＣＶＴ−Ｅ００２は、本明細書中に記載の先天免疫応答および適応免疫応答を活性化するさらなる活性を示す。

「ＰＱ_２」は、以前に米国特許第６，４３２，４５４号；同第７，０６７，１６０号；同第７，１８６，４２３号；および同第７，４１３，７５６号（参照によって本明細書中に組み込まれる）に記載のように、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓから得られ、免疫調節性を有する人参画分の一例をいうことを意図する。

「ＰＱ_２２３」は、以前に米国特許第６，４３２，４５４号；同第７，０６７，１６０号；同第７，１８６，４２３号；および同第７，４１３，７５６号（参照によって本明細書中に組み込まれる）に記載のように、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓから得られ、免疫調節性を有する人参画分の一例をいうことを意図する。

人参以外の植物または植物の一部由来の画分または本発明に関連して同様に十分に使用され得る合成画分は、その化学的性質および活性が本明細書中で使用された人参画分と十分に類似する限り、本発明の範囲内であると当業者に認識されるであろう。

本発明は、状態を予防、処置、または改善するために先天免疫応答および適応免疫応答を活性化するための人参画分またはこの画分を含む薬学的組成物もしくは食品に関する。さらに、本発明は、被験体における種々の状態を予防、処置、または改善するためのパターン認識受容体（ＰＰＲ）（Ｔｏｌｌ様受容体など）を介した先天免疫および適応免疫系の活性化のための人参画分またはこの画分を含む薬学的組成物もしくは食品に関する。かかる状態には、ウイルスおよび微生物の感染、アレルギー、喘息、および癌が含まれるが、これらに限定されない。本発明者の知る限り、これは、天然の植物由来画分がＰＲＲを介して哺乳動物先天性免疫系を特異的に活性化することを初めて示している。１つの実施形態では、人参画分はＰａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓの画分である。１つの実施形態では、人参画分は、ＣＶＴ−Ｅ００２、ＰＱ_２、ＰＱ_２２３、ならびにＣＶＴ−Ｅ００２、ＰＱ_２、およびＰＱ_２２３由来の精製画分からなる群より選択される。１つの実施形態では、人参画分はＣＶＴ−Ｅ００２である。

人参画分を、典型的には、最初に人参の植物体または植物部位を乾燥させて粉末化し、次いで、適切な溶媒、典型的には、水、エタノール、エタノール／水混合物、メタノール、ブタノール、イソブタノール、アセトン、ヘキサン、石油エーテル、または他の有機溶媒を使用して抽出過程を行うことによって調製する。次いで、画分または抽出物をさらに蒸発させて濃縮し、噴霧乾燥、真空オーブン乾燥、または凍結乾燥によって乾燥抽出物を得ることができる。Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓの根部分の水溶性抽出物由来のＣＶＴ−Ｅ００２、ＰＱ_２、ＰＱ_２２３、ならびにＣＶＴ−Ｅ００２、ＰＱ_２、およびＰＱ_２２３由来の精製画分からなる群より選択される例示的人参画分の作製過程は、以前に米国特許第６，４３２，４５４号；同第７，０６７，１６０号；同第７，１８６，４２３号；および同第７，４１３，７５６号（その開示は参照によって本明細書中に組み込まれる）に記載されている。

人参画分を一旦調製した後、評価して、１つまたは複数のｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏ薬理学的評価の実施によって先天免疫応答および適応免疫応答を活性化する活性を評価および確認する。本発明では、かかる評価には、例示的人参画分（ＣＶＴ−Ｅ００２）のウイルス複製（実施例１および２を参照のこと）および樹状細胞機能（実施例３を参照のこと）に及ぼす影響のｉｎ ｖｉｔｒｏ研究が含まれるが、これらに限定されない。本発明について、人参画分、大量製造の場合の人参画分のバッチ由来の代表的サンプル、または人参画分の亜画分のいずれかにおける上記活性の表示に注目する場合、任意の薬理学的評価が適切である。製品バッチ毎の品質ＣｈｅｍＢｉｏＰｒｉｎｔ（商標）テクノロジーによって証明することができる。米国特許第６，１５６，２９１号（参照によって本明細書中に組み込まれる）に記載のように、このテクノロジーにより、その化学的均一性および薬理学的均一性が保証される。

さらに、本発明は、被験体における状態を予防、処置、または改善するための先天免疫応答および適応免疫応答の活性化に適切な薬学的組成物または食品の調製における人参画分のみまたは別の薬物との組み合わせの使用に関する。１つの実施形態では、人参画分はＰａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓの画分である。１つの実施形態では、人参画分は、ＣＶＴ−Ｅ００２、ＰＱ_２、ＰＱ_２２３、ならびにＣＶＴ−Ｅ００２、ＰＱ_２、およびＰＱ_２２３由来の精製画分からなる群より選択される。１つの実施形態では、人参画分はＣＶＴ−Ｅ００２である。

さらに、本発明は、薬学的に許容可能なキャリアと組み合わせた人参画分を含む薬学的組成物に関する。当業者は、これに関して有用であろう任意の薬学的に許容可能なキャリアに精通している。したがって、本発明による薬学的組成物の作製手順を詳細に考察しないであろう。適切には、薬学的組成物は、錠剤、カプセル、液体、ロゼンジ、ローション、エアゾール、注射または坐剤に適切な溶液の形態であり得る。

経口組成物には、不活性希釈剤または食用キャリアが含まれ得る。経口治療薬投与のために、人参画分を賦形剤と共に組み込み、錠剤、トローチ、またはカプセル（例えば、ゼラチンカプセル）の形態で使用することができる。経口組成物を、含嗽剤として使用するための液体キャリアを使用して調製することもできる。薬学的に適合する結合剤または他のキャリア物質を、組成物の一部として含めることができる。かかる結合剤およびキャリアは、結合剤（微結晶性セルロース、トラガカントゴム、またはゼラチンなど）；賦形剤（デンプンまたはラクトースなど）、崩壊剤（アルギン酸またはトウモロコシデンプンなど）；潤滑剤（ステアリン酸マグネシウムなど）；流動促進剤（コロイド状二酸化ケイ素など）；甘味剤（スクロースまたはサッカリンなど）；または矯味矯臭剤であり得る。

吸入による投与のために、化合物を、適切な噴射剤（例えば、二酸化炭素などの気体）を含む加圧容器またはディスペンサーまたは噴霧器からエアゾールスプレーの形態で送達させる。

経粘膜または経皮手段によって全身投与することもできる。経粘膜または経皮投与のために、浸透すべきバリアに適切な浸透剤を処方物中で使用する。かかる浸透剤は、当該分野で一般に知られている。経粘膜投与を、鼻内噴霧、または直腸投与のための坐剤もしくは停留浣腸の使用によって行うことができる。坐剤には、従来の坐剤の基剤（カカオバターおよび他のグリセリドなど）が含まれ得る。経皮投与のために、活性化合物を、当該分野で一般に知られている軟膏、蝋膏、ゲル、またはクリームに処方する。

人参画分を、活性薬剤を身体からの急速な排出から防御するキャリアを使用して調製することもできる（徐放処方物（挿入物、コーティング、およびマイクロカプセル化送達系が含まれる）など）。

人参画分を、単独でまたは別の薬物と組み合わせて使用することができる。癌患者は免疫系が大いに抑制されることが知られているので、本発明の人参画分は、化学療法薬との同時投与または放射線療法の補足として特に適切である。人参画分を、免疫調節薬またはワクチンアジュバントとして使用することもできる。

多様な固体、半固体、または液体の食品を、有効成分として人参画分が含まれるように調製することができる。かかる食品の非限定的な例としては、シリアル、パスタ、菓子製品（例えば、クッキー、ケーキ、キャラメル、ガム、飴玉）、栄養素、スナックまたは食事代替バー（ｍｅａｌ ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ ｂａｒ）、ヨーグルト、ゼラチン、ジャム、プディング、スープ、果物または野菜のベース、飲料（例えば、ジュース、ソフトドリンク、スポーツエネルギー飲料、瓶詰の水、ミルク、ダイズ製品）、および小児および乳児の食品（例えば、調製粉乳（ｉｎｆａｎｔ ｆｏｒｍｕｌａ）、人工栄養乳（ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｍｉｌｋ ｐｏｗｄｅｒ）、離乳食）が挙げられる。さらに、人参画分を、機能性食品、栄養補助食品、または健康補助食品中の有効成分として使用することができる。

人参画分の処方物により、経時的に活性がいくらか喪失し得るので、安定な形態で調製するか、例えば、人参画分の経時変化を回避し、有効性を最大にするための多成分キット形態で投与毎に新たに調製する。使用時まで個別の処方物の相を維持するのに適切なキットまたは容器は周知である。例えば、粉末形態の人参画分を含むキットを、滅菌キャリア（生理食塩水、アルコール、または水など）および場合によっては使用時の混合のための特定の量の他の成分と個別にパッケージングすることができる。人参画分を、使用時に液体処方物を生成するための「ティーバッグ」型浸出器（パウチまたはサシェ）で提供することができる。ティーバッグ型浸出器は、一定の投与型（例えば、注射または注入による）で有害であり得る粉末の小さな粒子のためのフィルターとしてパウチが役立ち得るという点で有利である。粒子を、例えば、濾過によって除去することもできる。

本発明による人参画分の投薬量は、処置すべき特定の状態、ならびに患者の年齢、性別、および一般的な健康状態に依存する。しかし、適切な投薬量は、１回〜１０回の毎日の用量で、１ｍｇ／ｋｇ体重／日〜５０００ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲で見出され得る。好ましい投薬量は、長期間または予防的使用のためには１日４００ｍｇである。短期間の使用については、有意により高い用量を最初に投与する。例えば、１８００ｍｇを初日に３回の用量に分けて投与することができ、１２００ｍｇを２日目に３回の用量に分けて投与することができ、９００ｍｇを３日目に３回の用量に分けて投与することができる。その後、症状が軽減するまで、２００〜４００ｍｇを毎日投与することができる。人参画分を、経口、注射もしくは注入、局所、鼻腔内、眼内、膣、または直腸に投与することができる。

本発明の人参画分は、被験体における種々の状態を予防、処置、または改善するための先天免疫応答および適応免疫応答の活性化に有効である。さらに、人参画分を天然の食用産物から調製するので、副作用の可能性が減少する。ウイルス感染、アレルギー、および喘息を予防、処置、または改善するために人参画分が先天免疫応答および適応免疫応答を刺激する能力を、以下で考察し、そして／または例示的人参画分（ＣＶＴ−Ｅ００２）を使用した実施例で証明する。

ＣＶＴ−Ｅ００２は、炎症因子および抗ウイルス因子を産生するように先天性免疫系の活性を調整する。ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＣＶＴ−Ｅ００２でのマウス単球性細胞の処理およびその後の単純ヘルペスウイルス２型または水疱性口内炎ウイルスへの曝露によってＩＬ−６、インターフェロン−β、および一酸化窒素の産生レベルが用量依存様式で有意に上昇したのに対して、非処理およびコントロール処理の培養物は陰性であった（実施例１、図８Ａ、８Ｂ、および９）。同様に、初代ヒト単球／マクロファージのＣＶＴ−Ｅ００２との４０時間のインキュベーションにより、ＩＬ−６が有意に用量依存的に産生された（図１０）。

緑色蛍光タンパク質（ＶＳＶ−ＧＦＰ）で標識した水疱性口内炎ウイルスを使用して、ＣＶＴ−Ｅ００２は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのウイルス複製を有意に阻害した（図１１Ａおよび１１Ｂ）。ＣＶＴ−Ｅ００２は、種々の性感染性のウイルス感染（ＨＩＶ−１が含まれる）から防御することができる。本明細書中に記載の結果は、先天性粘膜免疫系を迅速に活性化し、性感染媒介物の感染から粘膜表面を防御する局所抗ウイルス状態を誘導するためのＣＶＴ−Ｅ００２の局所適用を支持する。このアプローチは、より「天然の殺菌薬」および進化的に古い先天性粘膜免疫応答を防御のために使用するので、安全であり、耐性病原体の選択の影響をあまり受けない。

全ＴＬＲ（ＴＬＲ３を除く）によるシグナル伝達は、骨髄分化一次応答遺伝子８８（ＭｙＤ８８）（転写因子ＮＦ−κＢを活性化するアダプタータンパク質）を介して起こる。ＣＶＴ−Ｅ００２処置後のサイトカイン応答がＭｙＤ８８シグナル伝達に依存するかどうかを決定するために、腹腔マクロファージ培養物をＣ５７Ｂｌ／６野生型またはＭｙＤ８８ノックアウト（ＭｙＤ８８−／−）マウスから確立し、ＣＶＴ−Ｅ００２を使用するか使用しないで処置した（実施例４）。ＣＶＴ−Ｅ００２処置後のＩＬ−６およびＩＦＮ−β両方の産生はＭｙＤ８８依存性であった。これは、ＣＶＴ−Ｅ００２がＴＬＲシグナル伝達の刺激に基づいて免疫細胞中の炎症誘発性および抗ウイルス性のサイトカインの産生を活性化することを示した。

どのＴＬＲがＣＶＴ−Ｅ００２によって活性化されるかを決定するために、特異的ヒトＴＬＲ遺伝子を安定に発現するように構築されたＨＥＫ２９３細胞を使用した（実施例５、図１４および１５）。ＣＶＴ−Ｅ００２がｈＴＬＲ４のみを発現する細胞からのＩＬ−８産生を刺激しなかったにもかかわらず、結果は、ＣＶＴ−Ｅ００２が２つの異なる時点で用量依存様式でｈＴＬＲ４およびＭＤ２−ＣＤ１４を発現する細胞からのＩＬ−８産生を刺激したことを示す。興味深いことに、ＣＶＴ−Ｅ００２は用量依存様式でヒトＴＬＲ２を発現する細胞をも刺激した。ＴＬＲ２がＴＬＲ１およびＴＬＲ６とヘテロ二量体を形成することもできるので、ｈＴＬＲ２のみまたはｈＴＬＲ２／１およびｈＴＬＲ２／６を発現する細胞の刺激を比較した。ＣＶＴ−Ｅ００２とのインキュベーションにより、これらの各細胞株で用量依存的にＩＬ−８が産生されたにもかかわらず、ｈＴＬＲ２のみを発現する細胞は有意により高いレベルのＩＬ−８を一貫して産生した。同細胞数の４つすべての株を比較する実験では、ＣＶＴの先天性免疫活性化の大部分はＴＬＲ２経由であった。各ＴＬＲを発現する細胞を使用して、ＣＶＴ−Ｅ００２がリポ多糖（ＬＰＳ）の先天性ＰＲＲであるＴＬＲ４を介した最小のシグナルを示すことが見出された（図１４）。全体として、この結果により、人参画分（例えば、ＣＶＴ−Ｅ００２）がＴＬＲを介して先天性免疫系を活性化することができることが示唆される。この結果はその抗感染防御効果を説明することができ、人参画分がワクチン成分に対する先天免疫および適応免疫の刺激を補助し、それにより、ワクチンをより有効にするための潜在的なワクチンアジュバントとして有用であり得ることを示す。

ウイルス複製を阻害するために先天性および／または適応免疫応答を活性化するＣＶＴ−Ｅ００２の能力を考慮して、本発明者らは、ＣＶＴ−Ｅ００２が先天免疫シグナル伝達の活性化に関連する他の状態（アレルギーおよび喘息が含まれるが、これらに限定されない）の予防、処置、または改善にも有用であることを見出した。

アレルゲン／抗原ｉｎ ｖｉｔｒｏモデルに基づいて、気道ウイルスを単離ヒト白血球とインキュベートする細胞同時培養系を、パラインフルエンザウイルスＩ型（ＰＩＶ）および呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）を使用して作製した。これらのウイルスは、その生涯にわたってヒトに頻繁に感染し、且つ喘息悪化に関連するｓｓＲＮＡ気道ウイルスであるので選択した。

図２に示すように、好酸球の存在下でのウイルスは、好酸球ペルオキシダーゼ（ＥＰＯ）の放出を直接誘導しない。むしろ、好酸球をリンパ球、樹状細胞、およびマクロファージ（すなわち、後者の２つは抗原提示細胞である）の特定の組み合わせとインキュベートした場合のみウイルスはＥＰＯの放出を誘導する。抗原提示細胞のみでは、ウイルスおよび好酸球を使用してＥＰＯ放出を誘導しない。ウイルスの非存在下では、いかなる組み合わせでもＥＰＯ放出は起こらない。したがって、抗原提示細胞と培養したウイルスは、リンパ球を活性化して好酸球からのＥＰＯ放出を誘導するように思われる。ウイルスのＵＶ不活化ではこの効果は予防されない。

好酸球機能におけるその重要性、その抗ウイルス性、および測定における経験により、ＥＰＯ放出をメディエーター放出の基準として選択した。ＰＩＶまたはＲＳＶを好酸球のみとインキュベートする場合にはＥＰＯ放出が認められず、直接的な好酸球の脱顆粒は可能でないことが示唆される。類似の陰性の結果が、ライノウイルスを使用して他の者によって認められた。白血球ドナーは、末梢血好酸球増加症を示すアトピー性背景を有する成人である。ＰＩＶおよびＲＳＶは一般的な感染症であるので、これらのドナーは、記憶Ｔ細胞の形態でこのウイルスに対して免疫性を有するであろう。本モデルでは、ＰＩＶおよびＲＳＶに応答してリンパ球増殖が起こるが、やはり抗原提示細胞と共培養した場合にのみ起こる。図３に示すように、リンパ球増殖はパラインフルエンザウイルスおよび抗原提示細胞（すなわち、マクロファージおよび樹状細胞）との培養６日後で起こり、マクロファージと比較して樹状細胞での増殖がより多かった。リンパ球のみを使用したフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ、５μｇ／ｍｌ）は、ポジティブコントロールとしての役割を果たした。サイトカイン（ＩＦＮ−γおよびＧＭＣＳＦ）の産生がこの共培養で認められたが、その供給源またはＥＰＯ放出の誘導との関連性は決定されなかった。

ウイルス刺激の結果と類似して、ＣＶＴ−Ｅ００２はリンパ球増殖を直接誘導することができないが、ＣＶＴ−Ｅ００２を樹状細胞と培養した場合に強い増殖応答が認められる（実施例２および３）。リンパ球増殖はリンパ球、ＣＶＴ−Ｅ００２、および樹状細胞との培養６日後に生じる。ＣＶＴ−Ｅ００２をウイルスを含むウェルに添加する場合に増殖がわずかに増加し得る。細胞を特徴づけるためにフローサイトメトリーを使用して、ＣＶＴ−Ｅ００２で刺激した樹状細胞におけるＨＬＡ−ＤＲ発現の増加が認められた。増殖リンパ球はＣＤ４陽性であり、活性化マーカーＣＤ２５の発現の増加が証明された。ＬＰＳ刺激を、ポジティブコントロールとして使用した。ＣＶＴ−Ｅ００２またはウイルスを使用しなかった場合、樹状細胞のリンパ球との共培養から増殖やＣＤ２５の上方制御は認められなかった。ＣＶＴ−Ｅ００２刺激により、ＣＤ４＋リンパ球由来のＣＤ２５発現の増加が誘導され、これは、ウイルス感染のみの場合と類似していた。この組み合わせによって発現がさらに増強された。

アトピー性／アレルギー性喘息はＴｈ２疾患である。ＣＶＴ−Ｅ００２は、Ｔｈ１応答を産生することができ（実施例２、図５）、このＴｈ１バイアスはＴｈ２応答を阻害するので、アトピー性／アレルギー疾患の治療薬として使用される可能性がある。マウスを腹腔内にてＯＶＡおよびミョウバンで感作し、次いで、ＯＶＡで攻撃して気道中にアレルギー疾患を開始させた広く使用されるアトピー性／アレルギー性喘息モデルでは、ＣＶＴ−Ｅ００２はＡＨＲの発症を予防し、好酸球性気道炎症を減少させることができた（実施例７、図１６ａおよび１６ｂ）。コントロール非感作動物ではアトピー性／アレルギー疾患が存在しなかったのに対して、感作し、経管栄養によって生理食塩水を与え、次いで、ＯＶＡで攻撃したマウスは気道中に強いアトピー性／アレルギー疾患（好酸球性気道炎症およびＡＨＲからなる）を発症した。ＯＶＡに感作し、経管栄養によってＣＶＴ−Ｅ００２を与え、次いで、ＯＶＡで攻撃した試験マウスでは、吸入したメタコリンに対する好酸球性気道炎症およびＡＨＲの両方が阻害された。

ＣＶＴ−Ｅ００２は、呼吸器ウイルス感染または他の刺激物質もしくは誘発物質のいずれかに起因する喘息の処置で有用であり得る。ほとんどの成体が同一の一般的ウイルス感染に毎年曝露される一方で、喘息患者の亜群は、肺機能の減少を伴って反応するであろう。ＣＶＴ−Ｅ００２の性質は、かかる患者に有益であり得る。本明細書中および実施例に記載のように、ＣＶＴ−Ｅ００２は、ウイルス複製の阻害および／またはＴｈ１免疫応答に有利に働くことによって喘息患者におけるウイルス感染に対する応答の調整で有用であり得る。炎症の程度およびその後の気道閉塞を低減するので、ウイルス複製の阻害は有益である。アトピー反応に関与するＴｈ２応答に反作用するので、Ｔｈ１免疫応答の促進は有益である。

呼吸器ウイルス感染に起因する喘息の処置に加えて、ＣＶＴ−Ｅ００２はまた、他の刺激物質および誘発物質に起因する喘息の処置に有効であり得る。刺激物質および誘発物質には、室内アレルゲン（イエダニ（ｄｏｍｅｓｔｉｃ ｍｉｔｅ）、毛皮を有する動物、ゴキブリ、および真菌など）；屋外アレルゲン（花粉およびカビなど）；室内大気汚染物質（タバコの煙など）；屋外大気汚染物質（オゾン、窒素酸化物、酸性エアゾール、および微粒子など）；職業被曝；食品および食品添加物；薬物（アスピリン、非ステロイド性抗炎症薬、およびβ遮断薬など）；鼻炎；副鼻腔炎；ポリポーシス；胃食道逆流；ホルモンの変動；乾燥した冷気；および運動が含まれるが、これらに限定されない。

ＣＶＴ−Ｅ００２がリンパ球および／または樹状細胞からのサイトカイン（インターフェロン）の放出を増強し、リンパ球および抗原提示細胞の相互作用に関与するので、ＣＶＴ−Ｅ００２の免疫調節性も、患者に有利であり得る。

上記説明および以下の実施例では、ＣＶＴ−Ｅ００２の好ましい実施形態の記述は例示のみを目的とし、活性において記載した有用性は所望の活性を有する全ての人参画分に適切であると理解すべきである。

本発明は、ここで、以下の実施例によってさらに明らかとなるであろう。

実施例１−ｉｎ ｖｉｔｒｏでのウイルス複製に及ぼすＣＶＴ−Ｅ００２の影響
種々の用量のＣＶＴ−Ｅ００２がｉｎ ｖｉｔｒｏでマウス単球性細胞のウイルス複製を阻害する能力を調査した。種々の用量（０、１０、１００、および５００μｇ／ｍｌ）のＣＶＴ−Ｅ００２およびＨＴ−１００１（ジンセノサイドＲｂ１およびＲｇ１を含み、米国特許第６，０８３，９３２号に記載の例示的人参画分）をコントロールとして（２５０〜２０００μｇ）ＰＢＳ緩衝液に溶解し、完全組織培養培地で最終濃度に希釈し、３７℃でｉｎ ｖｉｔｒｏにてＲＡＷ−２６４マウスマクロファージ細胞に添加した。２４または４８時間の細胞処理後、処理または非処理の細胞培養物を単純ヘルペスウイルス２型（ＨＳＶ−２）または水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）に曝露した。プラークアッセイを使用して、ウイルス複製を評価した。ＣＶＴ−Ｅ００２およびコントロール培養物の上清を処理後の種々の時点で回収し、ＥＬＩＳＡを使用してＩ型ＩＦＮ、ＴＮＦα、ＩＬ−６、および一酸化窒素（ＮＯ）について評価した。用量依存様式でのＣＶＴ−Ｅ００２処理後のＲＡＷ細胞によって、ＩＬ−６（図８Ａ）、ＩＦＮβ（図８Ｂ）、およびＮＯ（図９）のレベルが有意に上昇した。非処理培養物およびコントロール処理培養物は陰性であった。サイトカイン産生およびウイルス力価に関するデータを相関について試験した。

ＣＶＴ−Ｅ００２を、ＴＮＦαおよびＩＦＮαの刺激についても試験した。ＴＮＦαを、ＣＶＴ−Ｅ００２およびＨＴ−１００１処理群の両方で上昇させた。おそらくＥＬＩＳＡが不十分であったのでＩＦＮαの結果は信頼できなかった（データ示さず）。重要なことには、初代ヒト単球／マクロファージ培養物のＣＶＴ−Ｅ００２とのインキュベーションにより、ＩＬ−６が用量依存的に有意に産生された（図１０）。緑色蛍光タンパク質（ＶＳＶ−ＧＦＰ）を発現するように遺伝子操作されたＶＳＶも使用して、ＣＶＴ−Ｅ００２がｉｎ ｖｉｔｒｏでのウイルス複製を有意に阻害したことを示す（図１１Ａおよび１１Ｂ）。

実施例２−抗ウイルス活性がＣＶＴ−Ｅ００２によって誘導される機構
樹状細胞（ＤＣ）をリンパ球と共培養し、フローサイトメトリーを使用してリンパ球を特徴づけた。ＬＰＳ刺激を、ポジティブコントロールとして使用した。ＲＳＶおよびＰＩＶは、樹状細胞（ＤＣ）の存在下でＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞の増殖を誘導することが見出された（図４、それぞれｎ＝３）。リンパ球と培養した非感染ＤＣと比較して、ＲＳＶはインターフェロンαおよびγ、ＴＮＦα、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−１、２、４、１０、１２、１３、および１５の産生を誘導する（図５、ｎ＝１）。各非感染コントロール（１とする）と比較してデータを示す。Ｔ細胞のみを使用したＣＶＴ−Ｅ００２により、ＩＦＮγおよびＩＬ１２の放出が誘導された。ＤＣのみを使用したＣＶＴ−Ｅ００２により、ＴＮＦ、ＩＦＮγ、ＩＬ−１、１０、１２、および１５の放出が誘導された。ウイルスを有する細胞培養物へのＣＶＴ−Ｅ００２の添加により、サイトカイン／ケモカイン放出が大いに増加した。さらに、非感染細胞と比較して、ＣＶＴ−Ｅ００２はウイルスを含まないＤＣの存在下でリンパ球増殖を誘導することができた（図６）。

実施例３−樹状細胞機能に及ぼすＣＶＴ−Ｅ００２の影響
樹状細胞（ＤＣ）は、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４での７日間の処理によって血中単球から誘導した。ＤＣを、５ｍｇ／ｍｌの自己消光ＤＱ−オボアルブミン（ＤＱ−ＯＶＡ）およびＣＶＴ−Ｅ００２の存在下または非存在下でインキュベートした。ＤＱ−ＯＶＡは、オボアルブミンに付着した蛍光色素である。インタクトな分子としてはＤＱ−ＯＶＡの蛍光を消光するが、ＤＣによる抗原提示によって分解された場合、蛍光色素を放出して発光する。

図７Ａは、細胞の亜集団を示す。「ＤＣ様」細胞はサイズおよび粒度が成熟樹状細胞と一致している一方で、「ＤＣではない」は未成熟ＤＣならびに分化不反応性（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ−ｒｅｆｒａｃｔａｎｔ）単球およびＴ細胞である。ＬＰＳ処理細胞を、ＤＣ成熟のポジティブコントロールとして使用した。サイズおよび粒度を決定するためのフローサイトメトリーを使用すると、これらは単球の亜集団のようであり、これらは成熟ＤＣ（ＤＣ様）と比較して未成熟表現型（ＤＣではない）を示すと考えられる。この所見は、ＣＤ１１ｃおよびＨＬＡ−ＤＲでの以前の染色経験に基づく（データ示さず）。

蛍光によって表示されるようにＤＣにＤＱ−ＯＶＡを組み込んだ（図７Ｂ）。興味深いことに、ＣＶＴ−Ｅ００２は、用量依存様式で全ＤＱ−ＯＶＡシグナルを増強した（全細胞ＯＶＡ＋）。ＤＣ様集団が１００％ＯＶＡ陽性である一方で、未成熟集団はＣＶＴ−Ｅ００２後により良好にオボアルブミンを取り込むようである（ＤＣではない ＯＶＡ＋、図７Ｂ）。

ＣＶＴ−Ｅ００２処理は、単球数をＤＣではない集団から成熟ＤＣ様集団にシフトする（成熟ＤＣプール）（図７Ｃおよび７Ｄ）。ＣＤ１１ｃおよびＭＨＣ ＩＩ染色を使用したこれらの集団の予備表現型決定（ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇ）により、本発明者らの未成熟に対する成熟の所見を確認する。これらのデータにより、ＣＶＴ−Ｅ００２がＤＣサイトカインデータに加えてＤＣの機能および成熟度を改善することが示唆される。

実施例４−ＣＶＴ−Ｅ００２が核因子κＢ（ＮＦ−κＢ）を活性化し、ＭｙＤ８８を介してシグナル伝達する能力
ＣＶＴ−Ｅ００２がＴＬＲとの相互作用を介して先天性免疫応答を活性化するかどうかを決定するために、ＣＶＴ−Ｅ００２がＮＦ−κＢを活性化してＭｙＤ８８を介してシグナル伝達する能力を試験した。腹腔マクロファージを、正常マウス（Ｃ５７Ｂｌ／６野生型）およびＭｙＤ８８を欠くマウス（すなわち、「ＭｙＤ８８−／−」と示したＭｙＤ８８ノックアウトマウス）から単離した。培養プレートに付着させるためのｉｎ ｖｉｔｒｏでの２４時間のインキュベーション後、マクロファージを洗浄し、種々の用量のＣＶＴ−Ｅ００２またはＨＴ−１００１で処理し、さらに２４時間インキュベートした。ＨＴ−１００１をコントロールとして使用した。上清を回収し、ＥＬＩＳＡを使用してＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＦＮβ、およびＮＯの産生について評価した。ＣｐＧ ＤＮＡ（ＭｙＤ８８依存性）およびｄｓＲＮＡ（ＴＬＲ３のＭｙＤ８８非依存性リガンド）を、ポジティブコントロールおよびネガティブコントロールとしてそれぞれ含めた。さらに、レポーター遺伝子（ＬａｃＺ）を駆動するＮＦ−κＢプロモーターを使用してプラスミドを構築した。このプラスミドでトランスフェクトした細胞を、種々の用量のＣＶＴ−Ｅ００２で処理し、レポーター遺伝子産物の産生について評価した。

結果は、ＣＶＴ−Ｅ００２が、有意な産生レベルの炎症誘発性サイトカインＩＬ−６および抗ウイルス因子Ｉ型ＩＦＮβを、野生型のみに由来する腹腔マクロファージ中で誘導したが、ＭｙＤ８８−／−マウスでは誘導されなかったことを証明している（図１２、１３Ａおよび１３Ｂ）。非処理培養物またはＨＴ−１００１処理培養物は陰性であった。これらの結果は、ＩＬ−６およびＩＦＮβのＣＶＴ−Ｅ００２誘導性刺激がＭｙＤ８８依存性であることを示し、ＣＶＴ−Ｅ００２が炎症誘発性および抗ウイルスサイトカインの産生を脊椎動物の免疫細胞中でＴＬＲを介して活性化することを示す。

実施例５−ＣＶＴ−Ｅ００２によって使用されたＴＬＲの同定
ＣＶＴ−Ｅ００２の受容体であり得るＴＬＲを同定するために、個々のＴＬＲ受容体のみを発現するように細胞を構築した。これらの細胞を、至適用量のＣＶＴ−Ｅ００２およびコントロールＴＬＲリガンド／アゴニストを使用してｉｎ ｖｉｔｒｏで処理し、これらの細胞の上清を使用してＩＬ−１、ＩＬ−６、ＴＮＦα、およびＮＯの産生を測定した。個々のＴＬＲを発現する細胞が機能的であることを確実にするために、各ＴＬＲの既知のリガンド／アゴニストを使用したポジティブコントロールを含めた。結果は、ＣＶＴ−Ｅ００２がＴＬＲ４のみを介してシグナル伝達しないことを示す。２４時間のＣＶＴ−Ｅ００２処理により、ｈＴＬＲ２、ｈＴＬＲ１／２、ｈＴＬＲ２／６、およびｈＴＬＲ４でトランスフェクトした２９３細胞中のＩＬ−８産生が刺激された（Ｐａｍ３ＣＳＫ／ＬＰＳコントロール）（図１４）。４８時間のＣＶＴ−Ｅ００２処理により、ｈＴＬＲ２、ｈＴＬＲ１／２、ｈＴＬＲ２／６、およびｈＴＬＲ４でトランスフェクトした２９３細胞中のＩＬ−８産生が刺激された（Ｐａｍ３ＣＳＫ／ＬＰＳコントロール）（図１５）。ｈＴＬＲ４は、ｈＴＬＲ４のＭＤＲおよびＣＤ１４との同時発現を示す。両方の期間において、全受容体についてＩＬ−８産生の有意な増加が認められた。

実施例６−ＣＶＴ−Ｅ００２の粘膜送達による影響
ＣＶＴ−Ｅ００２またはコントロールを、その食事において経口的に、鼻腔内に、または膣内にマウスに送達した。その後にマウスの鼻腔内または膣内を種々の用量のＨＳＶ−２またはインターフェロン感受性水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）で攻撃した。ウイルス感染からの防御を、ウイルス攻撃後の種々の時点（感染１〜３日後および６日後）での体重測定、全体的な病状のモニタリング、およびプラークアッセイを使用した肺、生殖器洗浄液、および組織中の攻撃ウイルス力価の測定によって評価した（図１７Ａおよび１７Ｂ）。

実施例７−ＣＶＴ−Ｅ００２が気道過敏症（ＡＨＲ）の発症を阻害し、好酸球性気道炎症量を減少させる能力
ＯＶＡおよびＣＶＴ−Ｅ００２＋ＯＶＡマウスをＯＶＡおよびミョウバンの腹腔内注射を使用して２回感作する一方で、コントロール動物には免疫化を行わなかった。最後の免疫化から７日後に、コントロール動物およびＣＶＴ−Ｅ００２＋ＯＶＡマウスに２００ｍｇ／ｋｇのＣＶＴ−Ｅ００２化合物を経管栄養によって７日間連続して投与した。最終経管栄養の２４時間後、全マウスの鼻腔内を５０μｇのＯＶＡで２回攻撃し、第２の攻撃の２４時間後にＡＨＲおよび気道炎症について評価した。長時間の休止（ｅｎｈａｎｃｅｄ ｐａｕｓｅ）（Ｐｅｎｈ）を、全身プレチスモグラフィによって測定して、メタコリン攻撃に応答したＡＨＲを決定した（ｎ＝３）。^＊ＯＶＡまたはコントロール群と比較してＰ＜０．０５（図１６Ａ）。気道炎症を、ＢＡＬ液中の好酸球数によって決定した（ｎ＝３）。^＊ＯＶＡまたはコントロール群と比較してＰ＜０．０５（図１６Ｂ）。

当業者に明らかなように、特許請求の範囲に記載の本発明の範囲を逸脱することなく、上記の特定の開示の種々の修正形態、適応形態、および変形形態を得ることができる。

Claims (32)

1. 有効量の少なくとも１つの人参画分を被験体に投与する工程を含む、処置を必要とする被験体における先天免疫のシグナル伝達の活性化による予防、処置、または改善に感受性を示す状態を予防、処置、または改善する方法。
2. 前記状態が、アレルギー、喘息、ウイルス感染、微生物感染、および癌からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
3. 前記ウイルス感染が、インフルエンザ、コロナウイルス、ヘルペス、呼吸器合胞体ウイルス、ラブドウイルス科、およびヒト免疫不全ウイルスを含む、呼吸器または粘膜伝染性ウイルスに由来する、請求項２に記載の方法。
4. 前記画分が、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓ、Ｐａｎａｘ ｔｒｉｆｏｌｉａ、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ、Ｐａｎａｘ ｓｃｈｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｐｓｅｕｄｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｖｉｅｔｎａｍｅｎｓｉｓ、Ｐａｎａｘ ｅｌｅｇａｔｉｏｒ、Ｐａｎａｘ ｗａｎｇｉａｎｕｓ、Ｐａｎａｘ ｂｉｐｉｎｒａｔｉｆｉｄｕｓ、水参または生参、白参、および紅参からなる群より選択される人参から作製される、請求項２に記載の方法。
5. 前記画分が、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓの画分である、請求項４に記載の方法。
6. 前記画分が、ＣＶＴ−Ｅ００２、ＰＱ_２、ＰＱ_２２３、ならびにＣＶＴ−Ｅ００２、ＰＱ_２、およびＰＱ_２２３由来の精製画分からなる群より選択される、請求項５に記載の方法。
7. 前記画分が、ＣＶＴ−Ｅ００２である、請求項６に記載の方法。
8. ＣＶＴ−Ｅ００２が、Ｔｏｌｌ様受容体由来のシグナル伝達を調整する、請求項７に記載の方法。
9. 前記Ｔｏｌｌ様受容体が、Ｔｏｌｌ様受容体２である、請求項８に記載の方法。
10. 前記Ｔｏｌｌ様受容体が、Ｔｏｌｌ様受容体２およびＴｏｌｌ様受容体６のヘテロ二量体である、請求項８に記載の方法。
11. 前記Ｔｏｌｌ様受容体が、Ｔｏｌｌ様受容体２およびＴｏｌｌ様受容体１のヘテロ二量体である、請求項８に記載の方法。
12. 前記Ｔｏｌｌ様受容体が、Ｔｏｌｌ様受容体４である、請求項８に記載の方法。
13. ＣＶＴ−Ｅ００２が、リンパ球および抗原提示細胞の上方制御、サイトカイン分泌、抗ウイルス因子の分泌、またはその組み合わせを誘導する、請求項７に記載の方法。
14. 状態を予防、処置、または改善するために先天免疫応答および適応免疫応答を活性化するための人参画分。
15. 前記画分が、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓ、Ｐａｎａｘ ｔｒｉｆｏｌｉａ、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ、Ｐａｎａｘ ｓｃｈｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｐｓｅｕｄｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｖｉｅｔｎａｍｅｎｓｉｓ、Ｐａｎａｘ ｅｌｅｇａｔｉｏｒ、Ｐａｎａｘ ｗａｎｇｉａｎｕｓ、Ｐａｎａｘ ｂｉｐｉｎｒａｔｉｆｉｄｕｓ、水参または生参、白参、および紅参からなる群より選択される人参から作製される、請求項１４に記載の画分。
16. 前記画分が、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓの画分である、請求項１５に記載の画分。
17. 前記画分が、ＣＶＴ−Ｅ００２、ＰＱ_２、ＰＱ_２２３、ならびにＣＶＴ−Ｅ００２、ＰＱ_２、およびＰＱ_２２３由来の精製画分からなる群より選択される、請求項１６に記載の画分。
18. 前記画分が、ＣＶＴ−Ｅ００２である、請求項１７に記載の画分。
19. 請求項１４に記載の画分を、食品が含まれる、状態を予防、処置、または改善するために先天免疫応答および適応免疫応答を活性化するための別の薬物または１つまたは複数の薬学的に許容可能なキャリアと組み合わせて含む薬学的組成物。
20. 前記画分が、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓ、Ｐａｎａｘ ｔｒｉｆｏｌｉａ、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ、Ｐａｎａｘ ｓｃｈｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｐｓｅｕｄｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｖｉｅｔｎａｍｅｎｓｉｓ、Ｐａｎａｘ ｅｌｅｇａｔｉｏｒ、Ｐａｎａｘ ｗａｎｇｉａｎｕｓ、Ｐａｎａｘ ｂｉｐｉｎｒａｔｉｆｉｄｕｓ、水参または生参、白参、および紅参からなる群より選択される人参から作製される、請求項１９に記載の組成物。
21. 前記画分が、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓの画分である、請求項２０に記載の組成物。
22. 前記画分が、ＣＶＴ−Ｅ００２、ＰＱ_２、ＰＱ_２２３、ならびにＣＶＴ−Ｅ００２、ＰＱ_２、およびＰＱ_２２３由来の精製画分からなる群より選択される、請求項２１に記載の組成物。
23. 前記画分が、ＣＶＴ−Ｅ００２である、請求項２２に記載の組成物。
24. 状態を予防、処置、または改善するために先天免疫応答および適応免疫応答を活性化するための薬学的組成物または食品の調製のための請求項１４に記載の人参画分の使用。
25. 前記状態が、アレルギー、喘息、ウイルス感染、微生物感染、および癌からなる群より選択される、請求項２４に記載の使用。
26. 前記ウイルス感染が、インフルエンザ、コロナウイルス、ヘルペス、呼吸器合胞体ウイルス、ラブドウイルス科、およびヒト免疫不全ウイルスを含む、呼吸器または粘膜伝染性ウイルスに由来する、請求項２５に記載の使用。
27. 前記画分が、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓ、Ｐａｎａｘ ｔｒｉｆｏｌｉａ、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ、Ｐａｎａｘ ｓｃｈｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｐｓｅｕｄｏｇｉｎｓｅｎｇ、Ｐａｎａｘ ｖｉｅｔｎａｍｅｎｓｉｓ、Ｐａｎａｘ ｅｌｅｇａｔｉｏｒ、Ｐａｎａｘ ｗａｎｇｉａｎｕｓ、Ｐａｎａｘ ｂｉｐｉｎｒａｔｉｆｉｄｕｓ、水参または生参、白参、および紅参からなる群より選択される人参から作製される、請求項２５に記載の使用。
28. 前記画分が、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓの画分である、請求項２７に記載の使用。
29. 前記画分が、ＣＶＴ−Ｅ００２、ＰＱ_２、ＰＱ_２２３、ならびにＣＶＴ−Ｅ００２、ＰＱ_２、およびＰＱ_２２３由来の精製画分からなる群より選択される、請求項２８に記載の使用。
30. 前記画分が、ＣＶＴ−Ｅ００２である、請求項２９に記載の使用。
31. 請求項１４に記載の人参画分を被験体に投与する工程を含む、活性化を必要とする被験体における状態を予防、処置、または改善するために先天免疫応答および適応免疫応答を活性化するための方法。
32. Ｔｏｌｌ様受容体由来のシグナル伝達の調整を含む先天免疫のシグナル伝達の活性化に関連する状態を予防、処置、または改善するための方法であって、かかる予防、処置、または改善を必要とする被験体への請求項１４に記載の人参画分の投与による、方法。