TWI503125B - 包含以聚肌苷酸-聚胞苷酸為主之佐劑的免疫原組合物 - Google Patents

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Description

包含以聚肌苷酸-聚胞苷酸為主之佐劑的免疫原組合物 發明領域
本發明大致涉及免疫原組合物和其使用方法。更特定地，本發明涉及一種免疫原組合物，包含聚核苷酸佐劑以及一或多種抗原物質，用以促進宿主體內的疾病特異性免疫反應。
 發明背景
免疫系統具有産生特異性和非特異性免疫力。非特異性免疫包含多種細胞及作用機制，例如巨噬細胞(macrophages)或顆粒細胞(granulocytes)的吞噬作用(phagocytosis)以吞噬外來顆粒或抗原，以及天然殺傷細胞(NK細胞)活性等。非特異性免疫力依賴是原來的免疫機制，且不會展現出特異性和記憶性的獲得性特性，該獲得性特性是特異性免疫反應的典型特點。特異性和非特異性免疫之間的關鍵性差異是以B和T細胞的特異性反應為基礎。這些細胞主要是在被特定抗原所活化後獲得他們的反應性，而且在未來暴露於該特定抗原時展現出免疫記憶性。因此接種疫苗(涉及免疫特異性和記憶性)是一種保護機體以對抗有害病原體的有效機制。
一般而言，B和T淋巴細胞在他們的細胞表面上有針對特定抗原的特定受體，産生特異性免疫力。該特異性免疫系統會對各抗原以二種方式特異免疫反應：1)體液免疫反應，涉及刺激B細胞並産生抗體或免疫球蛋白、抗原及輔助T細胞(主要為Th2)功能，以及2)細胞免疫反應，一般涉及T細胞、包括細胞毒性T淋巴細胞(CTLs)和其他涉及CTL反應的産生的細胞例如，抗原遞呈細胞以及Th1細胞。
為持續尋求更安全且更有效的疫苗，重組、純化及合成等新技術已被用以改善抗原的品質和特異性。純化、亞單位或合成抗原顯現出安全性增加但免疫原性降低，而此已成為檢定出有效佐劑的一個驅動力。因此有效佐劑日漸成為現代疫苗的一種必要成份。佐劑通常是化合物，當它和抗原共同給予時(與該抗原相結合，或在給予該抗原以前給予)會促進和/或改變對於該特定抗原的免疫反應。
常見促進免疫反應的典型佐劑包括：鋁化合物(該佐劑常被通稱為鋁佐劑“Alum”)、水包油乳劑(完全弗氏佐劑CFA是一種水包油乳劑，含有經乾燥和熱殺滅的結核桿菌)、皂甙(從皂質樹Quillaja Saponoria 皮分離而來，該佐劑活性成份被稱為Quile A)、CpG ODN(合成寡聚脫氧核苷酸，含有去甲基化的CpG二核苷酸)、從明尼蘇達Re595沙氏桿菌(Salmonella minnesota Re595)的脂多糖衍生而來的單磷酰脂A(MPL)、脂質體(通常由如磷脂等可生物降解性材料製成)以及可生物降解性聚合微球體(由如聚膦腈(polyphosphazene)和聚酐等多種聚合物製成)。這些化合物的佐劑性質已經過評估各有優缺點。
聚核苷酸複合物已在試驗用作佐劑等多種用途上。雙鏈RNAs(dsRNAs)是非常有效的生物修飾因子，可在納摩爾濃度下對細胞引起明顯作用。dsRNA的調控效應包括在分子和細胞水平上廣泛的作用。
在分子水平上，dsRNAs可誘導如干擾素(interferon)的合成、蛋白質激酶的産生、增進組織兼容性抗原以及抑制代謝作用等生物效應。在細胞水平上，dsRNA可激發如熱原性(pyrogenicity)、細胞分裂(mitogenicity)、巨噬細胞活化、活化體液免疫、活化細胞免疫以及引發抗病毒等生物效應。dsRNAs的免疫調控效應已被揭露於美國專利第4,124,702號，其提出dsRNAs在活的動物細胞中誘導干擾素産生。美國專利第3,906,092號提出含有聚核苷酸或聚核苷酸複合物的疫苗增強佐劑型疫苗抗體反應。Houston等人建立PICLC(聚肌苷酸聚胞苷酸poly－L－離胺酸羧基－甲基纖維素複合物)作一種有效的佐劑，藉此增加初級抗體反應而無需其他佐劑的輔助。
作為被研究最多的聚核苷酸複合物中的一種，聚肌苷酸－聚胞苷酸(PIC)在用於猴和人體時並不有效，這是因為PIC在進入體內後不穩定。因此許多方式用來改進PIC的不足，例如，由PIC與poly－L－賴氨酸氫溴酸鹽複合物對於胰核糖核酸酶水解的抵抗性較原PIC高約5至15倍。
Lin等人敍述，一種包含聚肌苷酸－聚胞苷酸、卡那黴素和鈣離子的抗病毒藥物可用作一種佐劑(參見Lin,et al. ,A new immunostimulatory complex(PICKCa)in experimental rabies：antiviral and adjuvant effects,Arch Virol ,131：307－19,1993；以及中國專利93105862.7號)。中國專利第93105862.7號提供由PIC、卡那黴素和鈣離子所構成的複合物(簡稱PICKCa)在人和哺乳動物作為疫苗佐劑用途。但是，Lin發現該種原先發現的PICKCa型作為佐劑時不能提供最佳的有效性/安全性狀態，且在某些情況下會引起令人無法接受的不良副作用。
本發明提供具有改善有效性和安全性狀態的新穎免疫原組合物，以及使用該等組合物的方法。本發明免疫原組合物包含聚核苷酸佐劑和抗原。
文獻
相關參考資料列示於下： JP 1093540A2；美國專利第4,124,702號美國專利第3,692,899號美國專利第3,906,092號美國專利第4,389,395號美國專利第4,349,538號美國專利第4,024,241號美國專利第3,952,097號Houston et al.,Infection and Immunity,14：318－9,1976C Wright and Adler－Moore,Biochemical and Biophysical Research Communications,131：949－45,1985 Lin,et al.,A new immunostimulatory complex(PICKCa)in experimental rabies：antiviral and adjuvant effects,Arch Virol,131：307－19,1993 Chinese Patent 93105862.7 Gupta R.K. et al.,Adjuvants－a balance between toxicity and adjuvanticity,Vaccine,11：293－306,1993 Arnon,R.(Ed.)Synthetic Vaccines 1：83－92,CRC Press,Inc.,Boca Raton,Fla.,1987 Sela,M.,Science 166：1365－1374(1969)美國專利第6,008,200號Ellouz et al.,Biochem.& Biophy.Res.Comm.,59：1317,1974美國專利第4,094,971號美國專利第4,101,536號美國專利第4,153,684號美國專利第4,235,771號美國專利第4,323,559號美國專利第4,327,085號美國專利第4,185,089號美國專利第4,082,736號美國專利第4,369,178號美國專利第4,314,998號美國專利第4,082,735號美國專利第4,186,194號美國專利第6,468,558號New Trends and Developments in Vaccines,edited by Voller et al.,University Park Press,Baltimore,Md.,USA,1978 Klein,J.,et al.,Immunology(2nd),Blackwell Science Inc.,Boston(1997)Gupa R.K. and Siber G.R.,Adjuvants for human vaccines－current status,problems and future prospects,Vaccine,13(14)：1263－1276,1995 Richard T Kenney et al.Meeting Report－2nd meeting on novel adjuvants currently in/close to human clinical testing,Vaccine 20 2155－2163,2002 Laboratory Techniques in Rabies Edited by F X Meslin,M M Kaplan,H Koprowski 4th ,1996,Edition ISBN 92 4 1544 1
 發明概要
總的來說，本發明涉及新穎的免疫原組合物，其包含聚核苷酸佐劑和免疫原性或抗原性物質，以及用以促進免疫反應的方法。
因此，本發明提供一種免疫原組合物。該組合物包含：(a)聚核苷酸佐劑，該佐劑包含：聚核糖肌苷－聚核糖胞苷酸(PIC)、至少一種抗生素以及至少一個正價離子；以及(b)至少一種抗原；其中該組合物被配製成供持續釋放給予形式。
依據本發明的免疫原組合物可包含聚核苷酸佐劑組合物，該聚核苷酸佐劑組合物中的分子在分子量上是異質的，其中該分子量為至少66,000道爾頓。
圖式簡單說明
第1圖－以含有PIKA和/或HBsAg adw的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生干擾素－γ 的小鼠脾細胞；第2圖－以含有PIKA和/或HBsAg adw的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL－2的小鼠脾細胞；第3圖－以含有PIKA和/或HBsAg adw的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測被小鼠脾細胞所産生的IL－4；第4圖－以含有PIKA和/或HBsAg adw的疫苗進行免疫後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清(稀釋400倍)的特異性IgG效價；第5圖－以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原(inactivated split influenza antigen)的疫苗進行免疫之後，利用ELISPOT法來檢測産生干擾素－γ 的小鼠脾細胞；第6圖－以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL－2的小鼠脾細胞；第7圖－以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL－4的小鼠脾細胞；第8圖－以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清(稀釋900倍)的特異性IgG效價；第9圖－以含有PIKA和/或HIV gp120抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生干擾素－γ 的小鼠脾細胞；第10圖－以含有PIKA和/或HIV gp120抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL－2的小鼠脾細胞；第11圖－以含有PIKA和/或HIV gp120抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL－4的小鼠脾細胞；第12圖－以含有PIKA和/或HIV gp120抗原的疫苗進行免疫後，利用FACS法來分析小鼠脾細胞，圖中顯示表達干擾素－γ 的CD4＋細胞百分率；第13圖－以含有PIKA和/或炭疽菌rPA抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生干擾素－γ 的小鼠脾細胞；第14圖－以含有PIKA和/或炭疽菌rPA抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL－2的小鼠脾細胞；第15圖－以含有PIKA和/或炭疽菌rPA抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL－4的小鼠脾細胞；第16圖－以含有PIKA和/或炭疽菌rPA抗原的疫苗進行免疫後，利用FACS法來分析小鼠脾細胞，圖中顯示表達干擾素－γ 的CD4＋細胞百分率；第17圖－以含有PIKA和/或炭疽菌rPA抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清(稀釋400倍)的特異性IgG效價；第18圖－以含有PIKA和/或炭疽菌rPA抗原的疫苗進行免疫16周之後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清的特異性IgG效價；第19圖－以含有PIKA和/或HSV2－gD抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生干擾素－γ 的小鼠脾細胞；第20圖－以含有PIKA和/或HSV2－gD抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL－2的小鼠脾細胞；第21圖－以含有PIKA和/或HSV2－gD抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL－4的小鼠脾細胞；第22圖－以含有PIKA和/或HSV2－gD抗原的疫苗進行免疫後，利用FACS法來分析小鼠脾細胞，圖中顯示表達干擾素－γ 的CD4＋細胞百分率；第23圖－以含有PIKA和/或HSV2－gD抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清(稀釋2,700倍)的特異性IgG效價；第24圖－以含有PIKA和/或滅活H5N1抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生干擾素－γ 的小鼠脾細胞；第25圖－以含有PIKA和/或滅活H5N1抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL－2的小鼠脾細胞；第26圖－以含有PIKA和/或滅活H5N1抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL－4的小鼠脾細胞；第27圖－以含有PIKA和/或滅活H5N1抗原的疫苗進行免疫後，利用FACS法來分析小鼠脾細胞，圖中顯示表達干擾素－γ 的CD4＋細胞百分率；第28圖－以含有PIKA和/或滅活H5N1抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清(稀釋900倍)的特異性IgG效價；第29圖－以含有PIKA和/或全部滅活SARS抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清(稀釋16,000倍)的特異性IgG效價；第30圖－以含有PIKA和/或滅活H5抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISA法檢測來自於雞血清的特異性抗體H5N1的效價；第31圖－以含有PIKA和/或滅活H9抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISA法檢測來自於雞血清的特異性抗體H9N2的效價；第32圖－暴露於野生型狂犬病毒後再接受狂犬病疫苗治療的小鼠的存活率；第33圖－以含有PIKA和/或HBsAg adw的疫苗進行免疫後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清的特異性抗體效價；第34圖－以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清的特異性抗體效價；第35圖－以含有PIKA和/或HBsAg的疫苗進行免疫之後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清的特異性IgG1效價；第36圖－以含有PIKA和/或HBsAg的疫苗進行免疫之後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清的特異性IgG2a效價；第37圖－以含有PIKA和/或HBsAg的疫苗進行免疫之後，利用ELISPOT法來檢測産生干擾素－γ 的小鼠脾細胞；第38圖－以含有PIKA和/或HBsAg的疫苗進行免疫之後，以2ug/ml的IPQ肽再刺激6天，利用ELISPOT法來檢測産生干擾素－γ 的小鼠脾細胞。
表1提供一個可作為抗原來源的典型病毒病原體以及與這些機體相關的疾病的列表。
表2提供一個可作為抗原來源的典型細菌病原體以及與這些機體相關的疾病的列表。
表3提供一個可作為抗原來源的典型真菌病原體以及與這些機體相關的疾病的列表。
表4提供一個可作為抗原來源的典型寄生蟲以及與這些機體相關的疾病的列表。
表5提供一個可作為抗原來源的典型癌腫(例如以組織種類來分類)的列表。
 較佳實施例之詳細說明
本發明可通過後續對於本發明一些實施方案描述以及其中所包括的實施例的詳細內容而更容易被瞭解。
本申請在整篇內容中參照公開文獻，這些公開文獻的內容被並入本申請中作為參考，以充分地敍述本發明所屬技術領域的水準。
在進一步敍述本發明之前，應明瞭本發明不會被局限於所述特定實施方案中，因為這些實施方案必然是多樣的。亦應明瞭本說明書中所使用的用語僅是為了闡述特定實施方案，而非作為限制，因為本發明的範圍將會被僅僅界定在所附的權利要求中。
除非另行界定，本說明書中所使用的所有技術和科學用語均和本案所屬技術領域中的技術人員所普遍明瞭的意義相同。現在就實施本發明的優選方法和材料加以敍述，但是和本說明書中所述方法和材料類似或等效的任何方法和材料均可用以實施或測試本發明。本說明書中所提到的所有公開文獻均被並入於此作為參考，以揭示並說明所述公開文獻中的方法和/或材料。
應注意，如本申請說明書和權利要求中所使用的用語，除非前後文意指明另有其他意義，否則單數形用語“a”、“and”和“the”包括複數形用語。因此，例如提及“免疫原組合物”即包括該組合物的的複數形式，提及“該抗原”即包括提及一或多個抗原以及熟習於本領域技術人士所知悉的等效體等等。此外應注意，權利要求可被撰寫成排除任何可選擇性成分。因此，此一說明是要作為使用例如“僅有(solely)”、“只有(only)”等排除性用語於權利要求構成要件的相關載述內容時或是使用“負向”限制(“negative” limitation)時的前述基礎(antecedent basis)。
名詞定義
在陳述本發明的詳細內容之前，應當瞭解被使用於本說明書中的數個用語。
使用於此處的“佐劑”此用語是指增加或改變宿主對於抗原化合物的免疫反應的任何物質或物質混合物。特定地說：1.“PICKCa”此用語是一般性地指稱由PIC卡那黴素和鈣所構成的組合物，而和組合物的特定物理和免疫原性無關。
2.“Av－PICKCa”是指PICKCa在商業上被使用作為抗病毒藥劑的形式。
3.“PIKA”是指本發明組合物，包含PIC、抗生素(例如卡那黴素)以及陽離子(例如鈣)，其中所述PIKA的特徵在於物理特性(例如本說明書中所敍述的分子量、尺寸等)，以使得PIKA在給予後可展現出一個佐劑的特性，且具有相較於以PICKCa為例更低的副作用(例如毒性降低)以及相較於以Av－PICKCa為例更高的效力強度(例如促進增強的免疫反應)。
“聚I：C”或“PIC”等用語是指含有聚核糖肌苷和聚核糖胞苷核酸的組合物，亦分別稱作為聚肌苷酸－聚胞苷酸。
“含PIC分子”或“含PIC化合物”是非限制性地指稱PIC，它可選擇性地通過複合或組合所述含PIC分子的組合物中的抗生素(例如卡那黴素)以及陽離子(例如鈣)中的至少一者或二者。在一實施方案中，在複合物中該含PIC分子不包含聚－L－賴氨酸或其衍生物。
在本發明佐劑組合物的前後文中所使用的“異質”此用語是指該組合物的成份(例如含PIC分子)在分子量、尺寸或此二者的物理特性上不是均一的。當組合物被描述成對於給定物理特性呈異質，且進一步通過該物理特性的數值範圍來描述時，即是將該組合物敍述成實質上包含以具有分佈在所述範圍內的物理特性為特徵的分子。雖然該組合物可能不會含有代表所述範圍的下及上限內的每一物理特性數值的分子，但該組合物通常會包含至少一個具有該上限數值或下限數值物理特性的分子。在某些實施方案中，該組合物可包含位於用以描述該組合物的所述物理特性範圍以外的分子。這些在組合物中位於所定範圍以外的分子不會實質影響該組合物的基本的和新穎的特性。
“個體”此用語在此和“宿主”、“主體”和“動物”互換使用，包括人類及所有畜養(如家畜和寵物)和野生的動物及禽鳥，其非限制性地包括牛、馬、乳牛、豬、綿羊、山羊、狗、貓、兔、鹿、貂、雞、鴨、鵝、火雞、鬥雞等。
“抗體”此用語包括多克隆抗體及單克隆抗體以及這些抗體的抗原化合物結合片段，包括Fab、F(ab’)2、Fd、Fv片段，以及這些抗體和片段的單鏈衍生物。此外，“抗體”此用語包括天然發生的抗體以及非天然發生的抗體，包括例如嵌合型(chimeric)、雙功能型(bifunctional)和人源化(humanized)抗體，以及相關的合成異構形式(isoforms)。“抗體”此用語可和“免疫球蛋白”互換使用。
如本說明書中所使用，“抗原化合物”此用語是指可在適當情形下被免疫系統所辨識(例如結合至抗體或被加工，以誘導細胞免疫反應)的任何物質。
如本說明書中所使用，“抗原”包括但不限於細胞、細胞提取物、蛋白質、脂蛋白、糖蛋白、核蛋白、多肽、肽、多糖、多糖綴合物、多糖的肽仿真體、脂肪、糖脂質、糖類、病毒、病毒提取物、細菌、細菌提取物、真菌、真菌提取物、多細胞生物例如寄生蟲、以及過敏原。抗原可為外源性(例如來自於被給予該抗原的個體以外的其他來源，例如來自於一個不同的物種)或是內源性(例如源自於宿主體內，例如身體的疾病因子、癌抗原、病毒感染細胞所産生的抗原等等)。抗原可以是天然型(例如天然産生的)、合成型或重組型。抗原包含細胞提取物、完整細胞和純化抗原，其中“純化”此用語是指該抗原呈現相較於抗原通常存在的環境和/或相較於粗提物(例如抗原的培養形式)更為豐富的形式。
本說明書中所使用的“免疫原組合物”此用語是指由二或更多種物質(例如抗原和佐劑)所構成的組合，當將這些物質給予宿主時會共同激發免疫反應。
“多肽”、“肽”、“寡肽”和“蛋白”等用語在本說明書中可互換使用，它們的意思是任何長度氨基酸聚合物形式，該聚合物形式可包括編碼和非編碼性氨基酸、經化學或生化修飾或衍生的氨基酸以及具有修飾肽主鏈的多肽。
“抗原化合物有效量”是指抗原化合物的用量將會致使個體産生針對該抗原化合物的特異性免疫反應，該抗原化合物可選擇性地和佐劑組合。
“免疫反應”此用語是指脊椎動物個體的免疫系統對於抗原性或免疫原性化合物的任何反應。典型的免疫反應包括但不限於局部及系統性細胞及體液免疫反應，例如包括CD8＋CTLs的抗原特異性誘導作用在內的細胞毒性T淋巴細胞(CTL)反應、包括T－細胞增殖反應和細胞因子釋出作用在內的輔助T－細胞反應，以及包括抗體反應在內的B－細胞免疫反應。
本說明書所使用的“誘導免疫反應”此用語是一般性地包含免疫反應的誘導和/或增強(induction and/or potentiation)。
“誘導免疫反應”此用語是指刺激、起始或誘導一個免疫反應。
“增強(potentiating)免疫反應”是指一個既存的免疫反應被改善、助長、補充、擴增、促進、增加或延長。
“增強免疫反應”此表達方式或類似表達方式的意思是，相較於先前的免疫反應狀態，免疫反應被提高、改善或上升，而對宿主有利，所述先前的免疫反應狀態例如給予本發明的免疫原組合物之前的免疫反應狀態。
“體液免疫力(humoral immunity)”和“體液免疫反應(humoral immune response)”等用語是指因應抗原刺激而産生抗體分子的免疫形式。
“細胞免疫(cell－mediated immunity)”和“細胞免疫反應(cell－mediated immune response)”等用語是指淋巴細胞所提供的免疫防禦力，例如T淋巴細胞在靠近受害細胞時所提供的防禦力。細胞免疫反應通常包括淋巴細胞的增殖。當測量“淋巴細胞的增殖”時，會測量淋巴細胞因應特定抗原的增殖能力。淋巴細胞增殖是指B細胞、T－輔助細胞或細胞毒性T－淋巴細胞(CTL)的細胞增殖。
“免疫原量”此用語是指，相較於沒有聚核苷酸佐劑時抗原所誘導的免疫反應，當與本發明的免疫原組合物共同給予時足以刺激免疫反應的抗原用量。
“免疫增效量(immunopotentiating amount)”此用語是指，相較於沒有聚核苷酸佐劑時所觀察到的抗體效價和/或細胞免疫反應水平，當佐劑和在本發明組合物中的抗原化合物共同給予時，致使抗體效價和/或細胞免疫反應增加所需的佐劑量。
本說明書中所使用的“治療”此用語是一般性地指稱獲得所需藥理和/或生理效應。該效應從完全地和/或部分地防止疾病或其症狀的角度來看可以是屬於預防性質的，和/或該效應從完全地和/或部分地穩定或治癒疾病和/或疾病所導致的負面效果來看可以是屬於醫療性質的。本說明書中所使用的“治療”此用語涵蓋對於個體(特別是哺乳動物個體，更特別是人類)體內的疾病的任何處理，且包括：(a)預防可能有罹病傾向但尚未診斷出罹病的個體發生疾病或症狀；(b)遏制疾病症狀，例如阻止該疾病症狀的發展；或是舒緩疾病症狀，例如致使該疾病或症狀消退；(c)降低疾病傳染物質所産生的産物水平(例如毒素、抗原等)；(d)降低對於疾病傳染物質的不利生理反應(例如發燒、組織水腫等)。
如本說明書中所使用，“混合”此用語包括用以組合組合物的成份的任何方法；這些方法包括但不限於摻合、分配、溶解、乳化、凝集、懸浮或將組合物的組成份合理地加以組合的其他方法。
“藥學上可接受的鹽”的化學物意指該鹽是藥用上可接受的，且擁有母化合物的所需藥理活性。這些鹽包括：(1)合成鹽的酸，例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等無機酸共同形成鹽；或是和例如乙酸、丙酸、已酸、環戊丙酸、羥乙酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、蘋果酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、3－(4－羥基苯酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2－乙二磺酸、2－羥基乙磺酸、苯磺酸、4－氯苯磺酸、2－萘磺酸、4－甲苯磺酸、樟腦磺酸、葡庚糖酸、4,4’－亞甲基雙－(3－羥基－2－烯－1－羧酸)、3－苯基丙酸、三甲基乙酸、三級丁基乳酸、月桂基硫酸、葡萄糖酸、谷氨酸、羥基萘甲酸、水楊酸、硬脂酸、粘康酸等有機酸等共同形成鹽；或是(2)當母化合物中所存在的酸性質子被如鹼金族金屬離子、鹼土族金屬離子或鋁離子等金屬離子所置換，或是配位有如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨基丁三醇(tromethamine)、甲基葡萄糖胺(N－methylglucamine)等有機鹼時，所形成的鹽。
本說明書中所使用的“單位劑型”此用語是指數個在實體上呈分離的單位，適合作為使用於人類和動物個體的單位劑量，各個單位含有一預定量的本發明化合物，該預定量經計算後呈現一個足以和藥學/藥理上可接受的稀釋劑、載劑或載體共同産生所需效應的用量。
本發明的例示性實施方案
本發明涉及用在人類、非人類動物或細胞培養物中引起和/或促進免疫反應的免疫原組合物和方法，該免疫反應可為體液和/或細胞免疫反應。一般而言，本發明免疫原組合物包含抗原(“抗原組合物”)和佐劑。該佐劑的存在會促進或改變對於該抗原的免疫反應。該佐劑可通過影響免疫球蛋白、趨化因子和/或細胞因素的亞型(異構型)的産生而改變免疫反應的品質。結果先天性免疫力、體液和/或細胞免疫反應因該佐劑的存在而更加有效。
一個特別的優點在於PIKA佐劑和抗原物質相組合可有效地引起特異體液免疫反應，從而增進保護性免疫力。
另一個重要優點在於PIKA佐劑和抗原物質相組合可引起特異細胞免疫反應，而該特異細胞免疫反應是治療用疫苗在限制和治療細胞內病毒、細菌和病原感染時以及臨床疾病治療(例如治療癌症或自體免疫疾病)時所需要的。
因此，本發明包括組合物，這些組合物具有特殊的産物特性，使這些組合物特別適合使用作為疫苗，以給予動物和/或人類，以因應對於誘導有益免疫反應之安全佐劑的需求。
因此，本發明提供可安全地使用於人類和動物的佐劑和免疫原組合物。
因此，本發明提供一種免疫原組合物，包含：(a)聚核苷酸佐劑，該佐劑包含：聚核糖肌苷－聚核糖胞苷酸(PIC)、至少一種抗生素以及至少一個正價離子；以及(b)至少一個抗原；其中該組合物被配製成供持續釋放給予之用。
依據本發明的免疫原組合物可包含聚核苷酸佐劑組合物，該組合物中的分子在分子量上是異質的，其中該分子量為至少66,000道爾頓。66,000道爾頓的數值相當於約6.4S沈降係數單位(Svedbergs)的分子尺寸。因此，66,000至1,200,000道爾頓的分子量範圍相當於約6.4至24.0沈降係數單位的分子尺寸。
在一些實施方案中，PIKA佐劑組合物包含聚核苷酸、一種抗生素以及一個正價離子，其中該聚核苷酸可為聚核糖肌苷－聚核糖胞苷酸(PIC)；該抗生素可為卡那黴素，以及該離子可以是鈣。
在一個特別相關方面，本發明提供一種用以增進抗原化合物的抗原性的免疫原組合物，包含可誘導抗原特異性細胞免疫反應的聚核苷酸佐劑組合物。
在一個特別相關方面，本發明提供一種用以增進抗原化合物的抗原性的免疫原組合物，包含可誘導抗原特異性體液免疫反應的聚核苷酸佐劑組合物。
在一個特別相關方面，本發明提供用以增進抗原化合物之抗原性的免疫原組合物，包含可誘導特定細胞和體液合併免疫反應的聚核苷酸佐劑組合物。
在一個特別相關方面，本發明提供佐劑組合物或含有佐劑組合物的免疫原組合物，其中該佐劑組合物或該免疫原組合物被冷凍乾燥。
在一個特別相關方面，本發明提供聚核苷酸佐劑組合物在製備一用以誘導宿主免疫原反應的藥劑上的用途。
聚核苷酸佐劑
本發明免疫原組合物具有含PIC聚核苷酸佐劑(例如PIKA組合物)通常包含聚肌苷酸、聚胞苷酸、一種抗生素(例如卡那黴素)，以及二價離子(例如鈣)。請明瞭，本說明書以PIKA作為這種含PIC佐劑的範例。
相關含PIC佐劑可利用在本領域中可得的方法來製造。含PIC佐劑組合物可通過任何適當方法所製造。例如，聚核苷酸佐劑組合物可通過在具有pH6至pH8的pH值的氯化鈉/磷酸鹽緩衝液內，將聚肌苷酸、聚胞苷酸、種抗生素和正價離子來源加以混合而製成。聚肌苷酸和聚胞苷酸的濃度通常為0.1至10 mg/ml，通常為0.5至5 mg/ml且更常為0.5至2.5 mg/ml。增色值(hyperchromicity value)應高於10%、高於15%、高於20%或高於50%。PIC的製備以及和抗生素(如卡那黴素)和正價離子(如鈣)的組合通常是在符合於國際優良制程規範(Good Manufacturing Process)的品質標準下進行。
在本發明的某些實施方案中，該佐劑的抗生素組份是卡那黴素。當該抗生素是卡那黴素時，在一些實施方案中，聚核苷酸佐劑組合物內的卡那黴素可和一或多種抗生素共同使用或被一或多種抗生素所取代，這些抗生素選自於包括泰百黴素、蒽環黴素、丁苷菌素硫酸鹽、慶大黴素、潮黴素、艾米康絲菌素、雙去氧卡那黴素、暗黴素、美它酰胺、新黴素、嘌呤黴素、鏈黴素和鏈脲黴素所構成的群組中。本發明聚核苷酸佐劑組合物內的抗生素(例如卡那黴素等)的濃度通常為約10單位/ml至100,000單位/ml，約100單位/ml至10,000單位/ml，或約500單位/ml至5,000單位/ml。
在本發明的某些實施方案中，該聚核苷酸佐劑組合物更包含正價離子(陽離子)，通常是二價正價離子，且通常是鹼金族金屬的陽離子。在本發明的組合物內，該正價離子一般被用作為正價離子的來源，例如鹽或複合物，例如一種有機或無機鹽或複合物，且通常是無機鹽或有機複合物。典型的正價離子包括但不必然限於鈣、鎘、鋰、鎂、鈰、銫、鉻、鈷、氘、鎵、碘、鐵或鋅。
該正價離子可以呈任何適當的鹽或有機複合物的形式，包括但不必然限於氯化物、氟化物、氫氧化物、磷酸鹽或硫酸鹽。例如，當該正價離子是鈣時，則該離子可呈碳酸鈣、氯化鈣、氟化鈣、氫氧化鈣、磷酸鈣或硫酸鈣的形式。
本發明的組合物內可配有正價離子(例如鈣)，該正價離子的濃度位在約10 umol至10 mmol/ml的範圍內，通常為約50 umol至5 mmol/ml，且更常為約100 umol至1 mmol/ml。本說明書中所使用的“umol”此用語意指微摩爾。
當本發明佐劑組合物中的正價離子是鈣時，則它可和其他正價離子相組合或被其他正價離子所取代，這些正價離子包括鎘、鋰、鎂、鈰、銫、鉻、鈷、氘、鎵、碘、鐵或鋅，其中這些離子可呈無機鹽或有機複合物的形式。
所得的組合物是含PIC佐劑組合物，其另含有抗生素和正價離子。在一特定實施方案中，當該抗生素是卡那黴素及該正價離子是鈣時，該産品可稱為PICKCa。在相關實施方案中，PICKCa組合物可無限制地含有不同物理特性的分子。
PIKA佐劑組合物
在特定的例示性實施方案中，該含PIC佐劑是PIKA。PIKA可通過多種方式來制得，以從PICKCa來制得特別有利。PIKA可通過涉及分離和/或濃縮具有所界定分子尺寸和/或分子量之分子的額外制程，而從PICKCa制得。利用過濾、層析、熱處理、離心分離、電泳和類似方法來分離和濃縮具有特定特性的聚核苷酸分子均為標準製備方法，且為熟習於本領域技術人士所知悉。
在特別相關的實施方案中，本發明的特點是被通稱為PIKA的佐劑，其包含聚核糖肌苷－聚核糖胞苷酸(PIC)、抗生素(例如卡那黴素)以及正價離子(例如鈣離子)，其中該組合物含有在分子量上為異質的佐劑分子，該分子的分子量為約66,000至1,200,000道爾頓。也就是說，該佐劑組合物包含重量分佈於約66,000至1,200,000道爾頓的範圍內的分子。
在相關實施方案中，該組合物中的PIKA聚核苷酸佐劑組合物分子是異質的，也就是說這些佐劑分子的重量分佈在分子量範圍內，其中該分子量為約300,000至1,200,000道爾頓，或是約66,000至660,000道爾頓，或是約300,000至660,000道爾頓，或是約300,000至2,000,000道爾頓，或是約66,000至約100,000道爾頓，100,000至200,000道爾頓，或是約300,000至約4,000,000道爾頓，或是約500,000至1,000,000道爾頓，或是約1,000,000至1,500,000道爾頓，或是約1,500,000至2,000,000道爾頓，或是約2,000,000至2,500,000道爾頓，或是約2,500,000至3,000,000道爾頓，或是約3,000,000至3,500,000道爾頓，或是約3,500,000至4,000,000道爾頓，或是約4,000,000至4,500,000道爾頓，或是約4,500,000至5,000,000道爾頓。
在相關實施方案中，該組合物中的PIKA聚核苷酸佐劑組合物分子具有平均分子量，該平均分子量等於或高於66,000道爾頓，或是等於或高於150,000道爾頓，或是等於或高於250,000道爾頓，或是等於或高於350,000道爾頓，或是等於或高於500,000道爾頓，或是等於或高於650,000道爾頓，或是等於或高於750,000道爾頓，或是等於或高於1,000,000道爾頓，或是等於或高於1,200,000道爾頓，或是等於或高於1,500,000道爾頓，或是等於或高於2,000,000道爾頓。
在特別相關的實施方案中，本發明的特點是一種被通稱為PIKA的聚核苷酸佐劑，包含聚核糖肌苷－聚核糖胞苷酸(PIC)、抗生素以及正價離子，其中該組合物含有在分子尺寸上呈異質的佐劑分子，也就是說這些佐劑分子的尺寸分佈在一個分子尺寸範圍內，這些佐劑分子的沈降係數單位(Svedbergs)為約6.43S至24.03S。
在相關實施方案中，該組合物中的PIKA聚核苷酸佐劑組合物分子是異質的，也就是說這些佐劑分子的尺寸分佈在一個分子尺寸範圍內，其中該分子尺寸為約12.8S至24.03S，或是約3至12S，或是約6.43至18.31S，或是約12.8至18.31S，或是約12.8S至30.31S，或是約12.8S至41.54S，或是約13.5S至18.31S，或是約13.5S至24.03S，或是約16.14至22.12S，或是約22.12S至26.6S，或是約26.6S至30.31S，或是約30.31S至33.55S，或是約33.55S至36.45S，或是約36.45S至39.1S，或是約39.1S至41.54S，或是約41.54S至43.83S，或是約43.83S至45.95S。
在其他相關實施方案中，該PIKA聚核苷酸佐劑組合物具有一平均沈降係數單位(Svedbergs)，該平均沈降係數高於9，或是高於12，或是高於13.5，或是高於15，或是高於16，或是高於17，或是高於18，或是高於19，或是高於20，或是高於21，或是高於22，或是高於25，或是高於30。
免疫原性質
一種包括有PIKA和抗原的免疫原組合物能夠以至少二種方式來引起抗原特異性免疫反應：i)體液免疫反應，涉及刺激B細胞産生抗體或免疫球蛋白(其他細胞亦涉及産生抗體反應過程，例如抗原遞呈細胞(APCs，包括巨噬細胞)及輔助T細胞(Th1和Th2)，以及ii)細胞免疫反應，一般涉及T細胞、包括細胞毒性T淋巴細胞(CTLs)和其他涉及CTL反應産生的細胞，例如Th1和/或Th2細胞以及抗原遞呈細胞。
此外，該聚核苷酸佐劑組合物可通過影響所産生的免疫球蛋白亞型(異構型)以及它們的親和力，來改變免疫反應的性質。
因此，本發明免疫原組合物所誘導的免疫原反應的程度和性質可通過測量由免疫系統的細胞所産生的細胞因子、趨化因子和抗體等分子的存在而進行評估。
白介素－4主要是由活化的Th2細胞所産生。白介素－4(IL－4)的産生會活化B細胞，從而産生IgG1和IgE免免疫球蛋白(抗體)，其可在血清樣品中測量。IL－4被視為Th2免疫反應的一個指標和典型細胞因子。Th2細胞可促進抗體反應。
白介素－2(IL－2)主要是由活化的Th1細胞、NK細胞和淋巴因子活化型殺傷細胞(LAK)所産生。IL－2可幫助T細胞的增殖和成熟，此為有效的適應性細胞免疫反應中的一個必要階段。
干擾素－γ (INF－γ )可由多種細胞産生，包括天然殺傷細胞和CD4＋ 和CD8＋ T細胞，在適應性免疫反應中扮演一必要角色，包括將巨噬細胞活化成為具有高度微生物殺傷力的細胞。另外，干擾素－γ是影響誘使特定Th1T細胞發展的因子，從而向上調控適應性細胞免疫反應。
本發明思及將本發明聚核苷酸佐劑和抗原共同使用的方法，以例如誘導機體內的抗原特異性體液反應和/或特異性細胞，例如T細胞免疫反應。所誘導的免疫反應可為在之前沒有免疫的個體中對於抗原的反應，或是可用以促進之前已有的免疫反應(例如加強劑)。已發現本發明的含PIKA免疫原組合物已被發現具有本說明書所敍述的優異性質。
許多不同種類的抗原已在活體內測試其於存在或不存在PIKA佐劑下誘導免疫反應的能力。受測抗原包括：乙型肝炎adw型表面抗原重組蛋白、滅活裂解型流感疫苗(得自於Sanofi Pasteur藥廠的VAXIGRIP)、合成型HIV肽抗原、第2型單純皰疹病毒gD抗原重組蛋白、重組型炭疽菌保護蛋白抗原、滅活型全病毒禽流感抗原品系H5N1和滅活型全病毒嚴重急性呼吸道綜合症(SARS)滅活抗原。
在各例中，PIKA佐劑和抗原的共同存在相較於抗原或PIKA單獨存在更能夠增進細胞因子的表達。特別是，細胞因子干擾素－γ、IL－2和IL－4的增進表達(參見實施例1.1、1.2、1.3、1.4、1.5和1.6)顯示PIKA佐劑的存在更能激發專一性適應免疫力，更特別是，細胞因子干擾素－γ、IL－2的增強表達顯示主要的Th1細胞免疫力在PIKA佐劑的存在下被顯著地增強。細胞免疫反應活性是治療細胞內病毒、細菌和寄生蟲感染所必須的關鍵特性，且對於發展治療用疫苗特別重要。
此外，含PIKA組合物通過CD4＋ T細胞而刺激干擾素－γ的産生(實施例1.3、1.4、1.5和1.6)。此種特性確認PIKA可增強宿主的適應性免疫反應。
血清內被觀測到的抗體增加顯示PIKA佐劑誘導有利的體液免疫反應。隨著將PIKA加入免疫原組合物，觀察到特異性抗體IgG的效價增加(參見實施例1.1、1.2、1.4、1.5、1.6、2,3、5和6)。
當PIKA佐劑與滅活抗原(實施例1.2、1.6、2、3、4和6)、肽抗原(實施例1.3)和重組型抗原(實施例1.1、1.4、1.5、5和7)相組合時，可促進宿主體內的免疫反應。
PIKA佐劑的一個特性在於提供適當保護以限制和/或根除宿主體內的感染，和/或降低因病原感染所導致的疾病症狀的危險性。實施例1.2和6中所使用的抗原VAXIGRIP(Sanofi Pasteur)本身就是一種人用流感疫苗，其可引起被認為足以提供保護的免疫力程度以防止實際流感病毒感染。免疫系統所表達的有益細胞因子(IL－2、干擾素－γ和IL－4)和特異性IgG的水平顯示，添加PIKA至VAXIGRIP可進一步增進免疫反應。
為進一步展現PIKA的保護性質，24只10天齡雞被接種以一種含有PIKA和滅活禽流感抗原的組合物，該禽流感抗原包括病毒株H5N1和H9N2(實施例3)。這些雞只隨後以活的H5N1病毒加以攻毒，並觀察二周。觀察期間結束時，被接種以PIKA/抗原組合物的雞只存活率為83%，相較之下，對照組中24只未預先接種PIKA/抗原組合物的雞只被暴露於活病毒，存活率只有17%。
在顯示PIKA佐劑的治療促進性質的相關實驗中，數隻Balb/c鼠被攻毒以野生型狂犬病病毒的一個病毒株(實施例4)。感染之後，三群動物在治療時被接種以不同的狂犬病疫苗。被接種以倉鼠腎細胞滅活純化型狂犬病抗原加上PIKA的組合的鼠群存活率達到80%。給予倉鼠腎細胞純化型狂犬病抗原和鋁佐劑的第二群鼠的存活率為15%。另外，給予Sanofi－Aventis的“Verorab”－Vero細胞滅活狂犬病疫苗的第三群鼠具有20%的存活率。
為進一步展現PIKA佐劑的性質，實施例7顯示PIKA和adw型HBsAg的共同存在能促進在小鼠血清內特異性IgG1(表26圖35)的産生，並更顯著地促進IgG2a(表27圖36)的效價。此觀察結果的結論是PIKA可促進治療性免疫反應，特別是Th1偏好型免疫反應。
在一個相關實驗中(實施例7)，PIKA在含adw型HBsAg的疫苗配方中的存在顯示可促進被CD8T細胞肽抗原表位所刺激的脾細胞産生干擾素－γ 。這個結果顯示PIKA誘導CD8＋T細胞免疫反應(表28圖37)。
另外，(實施例7)PIKA存在於含HbsAg的疫苗配方中顯示可促使活體外和2ug/ml CD8 T細胞肽抗原表位共同培養6天的脾細胞産生干擾素－γ 。這個結果顯示PIKA誘導中心記憶T細胞反應。
其他特徵
在另一實施方案中，本發明的免疫原組合物進一步通過PIKA佐劑和抗原的相對存在量來界定，其中該存在量是通過數量、濃度、體積、分子數目或其他被認可的度量來測量。
在相關實施方案中，本發明的免疫原組合物包含聚核苷酸佐劑組合物和一或多種抗原，其中佐劑和抗原的存在量是通過分子的重量或數目來界定，而呈現下列比例：低於1比1,000、低於1比900、低於1比800、低於1比700、低於1比500、低於1比400、低於1比300、低於1比200、低於1比100、低於1比50、低於1比10、低於1比5、低於1比2、約1比1、高於2比1、高於5比1、高於10比1、高於50比1、高於100比1、高於200比1、高於300比1、高於400比1、高於500比1、高於600比1、高於700比1、高於800比1、高於900比1、高於1,000比1。
在另一個相關實施方案中，本發明的免疫原組合物是通過劑量來界定，該劑量是指欲給予以便誘導最佳免疫反應的疫苗用量，或是另指給予劑量範圍，其涵蓋用以引起免疫反應所需要的最低劑量，至過量即會潛在性地誘導不良副作用因而在醫學上無法證明可增加有利反應的最高劑量。
在某些特別相關的實施方案中，該免疫原組合物包含聚核苷酸佐劑組合物和抗原，其中抗原的單位劑量是以數量來計算，該數量為高於0.1ug、高於0.5ug、高於0.001 mg、高於0.005 mg、高於0.01 mg、高於0.025 mg、高於0.05 mg、高於0.075 mg、高於0.1 mg、高於0.25 mg、高於0.5 mg、高於1.2 mg、高於1.4 mg、高於1.6 mg、高於1.8 mg、高於2.0 mg、高於2.5 mg、高於3 mg、高於3.5 mg、高於4 mg、高於5 mg、高於6 mg、高於7 mg、高於8 mg、高於9 mg、高於10 mg、高於15 mg、高於20 mg、高於25 mg或是高於50 mg。
抗原的最佳量和抗原相對於PIKA佐劑的最佳比例可通過觀測宿主體內的抗體效價和其他免疫反應等標準研究方法來確認。
抗原
在特別相關的實施方案中，本發明提供聚核苷酸佐劑組合物以及抗原或疫苗，其中該抗原的來源為人類抗原、動物抗原、植物抗原、源自於病毒、細菌(包括分枝桿菌(Mycobacterium))、真菌或寄生蟲中的任一種的感染物的一種或多種製劑、癌腫抗原、過敏性成分以及例如會導致自體免疫疾病的其他抗原。
在某些實施方案中，該抗原可從粗制或純化的天然來源衍生而來，並以它的原始存活形式來使用，或是於被殺死、滅活、截短、減毒或轉形成為不可回復形式或是去毒或突變成為無毒性形式或被過濾或純化後使用。
在某些實施方案中，該抗原是被分離的微生物抗原，例如病毒抗原、細菌抗原、真菌抗原、過敏性成分抗原、癌腫抗原或自體免疫抗原。在其他實施方案中，抗原是完整的滅活抗原。使完整抗原滅活的方法為業界所熟知；任何常用方法均可使用以使抗原滅活，且可針對相關抗原種類而適當地選用。這些使抗原滅活的方法包括例如利用光反應性化合物；氧化劑；輻射線(例如UV射線；γ－射線)；核黃素和UV射線的組合；溶劑－去污劑處理(例如以有機溶劑三－N－丁基－磷酸酯和Tween 80等去污劑來處理)；聚乙二醇處理；巴斯德滅菌法(熱處理)；以及低pH處理；以胃蛋白酶或胰蛋白酶進行溫和酶處理；亞甲藍(MB)光處理；以二甲基亞甲藍(DMMB)和可見光進行處理；以S－59(一種補骨脂內酯衍生物)和UVA照射進行處理；以及類似方法。
在特別相關的實施方案中，抗原可通過固相合成法來合成，或是可通過重組遺傳技術而獲得，或是可被人為製造以仿真病原體的免疫原性質。
多肽抗原可利用本技藝所熟知標準蛋白純化方法從天然來源分離，這些標準方法包括但不限於液相層析法(例如高效液相層析法、快速蛋白液相層析法等)、尺寸排它性層析法、凝膠電泳(包括一維凝膠電泳、二維凝膠電泳)、親和層析法或其他純化技術。可使用固相肽合成技術，這些技術是熟習於本領域技術人士所知悉的。請參見Jones,The Chemical Synthesis of Peptides (Clarendon Press,Oxford)(1994)。一般而言，在這些方法中，肽是通過將活化單體單元順序加入結合有增長肽鏈的固相來製造。建構完成的重組DNA技術可用以製造多肽，這些方法包括但不限於例如將表達構建體導入適當的宿主細胞中(例如在活體外細胞培養基中生長成為單細胞實體的真核宿主細胞，例如酵母菌、昆蟲細胞、哺乳動物細胞等，或原核細胞(例如在活體外細胞培養基中生長的)，該表達構建體含有編碼一多肽的核苷酸序列，而産生遺傳基因改變的宿主細胞；在適當的培養條件下，蛋白質可被該遺傳基因改變的宿主細胞所制得。
在一些實施方案中，該抗原為純化抗原，例如具有約25%至50%的純度、約50%至約75%的純度、約75%至約85%的純度、約85%至約90%的純度、約90%至約95%的純度、約95%至約98%的純度、約98%至約99%的純度，或高於99%的純度。
抗原可為非細胞型、囊封型、感染性克隆(infectious clone)、擴增片段(replicon)、具載體型(vectored)、微囊封型(microencapsulated)、單價、二價或多價的。
本發明的聚核苷酸佐劑組合物亦可用於促進免疫反應，該免疫反應是針對運用DNA疫苗和/或DNA表達蛋白所産生的抗原。這些疫苗中用以編碼抗原的DNA序列可以是“裸露的”，或是被容納在一個如脂質體的載體系統內。
在一個特別相關方面，本發明的免疫原組合物可通過選用一或多種抗原和PIKA佐劑相組合來界定。
具體上說，本發明提供免疫原組合物和其使用方法，其中該免疫原組合物包含PIKA佐劑以及病毒抗原，其中典型的抗原包括但不限於表1所述一或多種病毒的抗原。
具體上說，本發明提供免疫原組合物和其使用方法，其中該免疫原組合物包含PIKA佐劑以及細菌抗原，其中典型的抗原包括但不限於表2所述一或多種細菌的抗原。
具體上說，本發明提供一種免疫原組合物和其使用方法，其中該免疫原組合物包含PIKA佐劑以及真菌抗原，其中典型的抗原包括但不限於表3所述一或多種真菌的抗原。
具體上說，本發明提供一種免疫原組合物和其使用方法，其中該免疫原組合物包含PIKA佐劑以及寄生蟲抗原，其中典型的抗原包括但不限於表4所述一或多種寄生蟲的抗原。
本發明提供一種免疫原組合物和其使用方法，其中該免疫原組合物包含PIKA佐劑以及過敏成份抗原(“過敏原”)或疫苗，其中該抗原或疫苗的來源是從源自於人類或動物過敏成分來源的病原衍生而來或是仿真該病原來産生，該病原包括植物、動物、真菌、昆蟲、食品、藥物、灰塵和塵蟎等。
過敏原包括但不限於環境空氣過敏原；豕草/花粉熱(ragweed/hayfever)等植物花粉；雜草花粉過敏原；牧草花粉過敏原；石茅高梁(Johnson grass)；樹木花粉過敏原；黑麥草(ryegrass)；屋塵蟎(例如Der p I,Der f I等)等蜘蛛類過敏原；儲藏室粉蟎過敏原；日本柳杉花粉熱；黴菌孢子過敏原；動物過敏原(例如狗、天竺鼠、倉鼠、沙鼠、大鼠、小鼠等過敏原)；食物過敏原(例如甲殼類水産品過敏原；例如花生等堅果類；柑橘類水果)；昆蟲過敏原；毒液：(膜翅目昆蟲(Hymenoptera)、胡蜂、蜜蜂、木胡蜂、黃蜂、火蟻)；來自於蟑螂、跳蚤、蚊子等其他環境昆蟲的過敏原；鏈球菌抗原等細菌過敏原；蛔蟲抗原等寄生蟲過敏原；病毒抗原；真菌孢子；藥物過敏原；抗生素；青黴素(penicillins)和相關化合物；其他抗生素；激素(胰島素)、酶(鏈激酶(streptokinase))等完整蛋白；可作為不完全抗原或半抗原(haptens)的所有藥物和它們的代謝物；可作為半抗原並作為過敏原的工業用化學品和它們的代謝物(例如酸酐(例如苯偏三甲酸酐)和異氰酸酯(例如甲苯二異氰酸酯))；麵粉(例如導致麵包師哮喘症(Baker’s asthma)的過敏原、蓖麻籽、咖啡豆和前述工業用化學品等職業過敏原；蚤過敏原；以及非人類動物中的人類蛋白。
過敏原包括但不限於細胞、細胞提取物、蛋白質、多肽、肽、多糖、多糖綴合物、多糖的肽或非肽仿真體以及其他分子、小分子、脂肪、糖脂質和糖類。
特定天然、動物和植物過敏原的範例包括但不限於下列屬所特有的蛋白：犬屬(家犬(Canis familiaris))；Dermatophagoides(例如粉塵蟎(Dermatophagoides farinae))；貓屬(家貓(Felis domesticus))；豚草屬(豚草(Ambrosia artemiisfolia))；黑麥草屬(例如多年生黑麥草(Lolium perenne)或多花黑麥草(Lolium multiflorum))；柳杉屬(日本柳杉(Cryptomeria japonica))；鏈格孢屬(煉格孢菌(Alternaria alternate))；紅樺(Alder)；赤楊屬(Alnus gultinoasa)；樺屬(瘤皮樺(Betula verrucosa))；櫟屬(白橡(Quercus alba))；木犀屬(油橄欖(Olea europa))；蒿屬(野艾(Artemisia vulgaris))；車前草(例如長葉車前草(Plantago lanceolata))；牆草屬(例如直牆草(Parietaria officinalis)或猶大牆草(Parietaria judaica))；小蠊屬(例如德國小蠊(Blattella germanica))；蜜蜂(例如Apis multiflorum)；柏木屬(例如絲柏(Cupressus sempervirens)、亞利桑那柏(Cupressus arizonica)和大果柏(Cupressus macrocarpa)；圓柏屬(例如Juniperus sabinoides、鉛筆柏(Juniperus virginiana)、杜松(Juniperus communis)和Juniperus ashei)；側柏屬(例如東方側柏(Thuya orientalis)；扁柏屬(例如日本扁柏(Chamaecyparis obtuse))；大蠊屬(例如美洲大蠊(Periplaneta Americana))；鵝觀草屬(例如偃麥草(Agropyron repens))；黑麥屬(例如黑麥(Secale cereale))；小麥屬(例如小麥(Triticum aestivum))；鴨茅屬(例如鴨茅(Dactylis glomerata))；狐茅屬(例如草地狐茅(Festuca elatior))；早熟禾屬(例如草地早熟禾(Poa pratensis)或加拿大早熟禾(Poa compressa))；燕麥屬(例如燕麥(Avena sativa))；絨毛草屬(例如絨毛草(Holcus lanatus))；黃花茅屬(例如黃花茅(Anthoxanthum odoratum))；燕麥草屬(例如燕麥草(Arrhenatherum elatius))；剪股穎屬(例如小糠草(Agrostis alba))；梯牧草屬(例如梯牧草(Phleum pretense))；鷸草屬(例如鷸草(Phalaris arundinacea))；雀稗屬(例如百喜草(Paspalum notatum))；高梁屬(例如石茅高粱(Sorghum halepensis))；和雀麥屬(例如無芒雀麥(Bromus inermis))。
在一個相關實施方案中，本發明提供聚核苷酸佐劑組合物和其使用方法，其中該免疫原組合物包含PIKA佐劑以及自體免疫抗原或疫苗。
具體上說，本發明提供免疫原組合物和其使用方法，其中該免疫原組合物僅包含PIKA佐劑或PIKA與癌腫抗原的組合，其中典型的抗原包括但不限於表5所述一或多種癌腫的抗原。
在一個相關實施方案中，癌腫抗原的來源可為：1).病毒蛋白，例如乙型肝炎病毒(HBV)、Epstein－Barr病毒(EBV)和人類乳頭瘤病毒(HPV)，其分別在肝細胞癌、淋巴癌和子宮頸癌的發展上具有重要性；2).完整癌細胞，其可經過滅活和/或這些細胞的未純化和/或半純化提取物；3).腫瘤相關抗原(TAAs)例如腫瘤特異性致癌蛋白、糖基化蛋白、神經節糖苷、糖脂、粘質素(mucins)、肽、糖類和抗獨特型(anti－idiotype)單株抗體。
在一個相關實施方案中，含聚核苷酸佐劑的免疫原組合物可通過防止既有癌腫繼續生長、防止治癒的癌腫復發、或是去除未被先前療程所滅殺的癌細胞，而用以治療癌腫。此療程可在其他療程之前、同時或之後給予個體，因此可形成治療癌症的完整組合式療程的一部分。
在一個相關實施方案中，治療用癌腫疫苗可以誘導腫瘤特異性免疫反應以對抗原發性腫瘤和轉移性腫瘤。另外，誘導強免疫力可促使建立免疫記憶力，從而降低或遏制腫瘤的復發。癌腫疫苗可誘導特異性抗體來對抗腫瘤相關性表面抗原，優選為誘導細胞免疫反應，且更優選為具有誘導Th1免疫反應的偏好。
本發明的免疫原組合物可包含各種習知腫瘤特異性抗原或腫瘤相關抗原(TAA)中的任何一種。可以使用但並非必須使用完整的TAA分子。取而代之地，可使用TAA的一部分，例如它的一個抗原表位。可被使用於YFV中的腫瘤相關抗原(或是它的含抗原表位片段)包括但不限於MAGE－2、MAGE－3、MUC－1、MUC－2、HER－2、高分子量黑色素瘤相關抗原MAA、GD2、癌胚抗原(CEA)、TAG－72、卵巢相關抗原OV－TL3和MOV18、TUAN、甲型幼兒蛋白(AFP)、OFP、CA－125、CA－50、CA－19－9、腎腫瘤相關抗原G250、EGP－40(也被稱作為EpCAM)、S100(惡性黑色素瘤相關抗原)、p53以及p21ras。任何TAA(包括前述任何TAA和或它的抗原表位)的合成型類似物均可使用。另外，組合物內可以包含一或多種TAAs(或它的抗原表位元)的組合。
在一些實施方案中，本發明的免疫原組合物包含聚核苷酸佐劑以及至少二種不同的抗原，例如在一些實施方案中，本發明的免疫原組合物包含二種抗原、三種抗原、四種抗原、五種抗原或是超過五種抗原。
其他成份
在一些實施方案中，本發明的免疫原組合物除了PIKA佐劑和抗原以外，另包含一或多種成份例如免疫調節劑、載劑等。
在一特別相關的實施方案中，本發明提供一種免疫原組合物和其使用方法，其中該免疫原組合物包含PIKA佐劑、抗原或疫苗，以及另一種免疫調節物質(包含佐劑在內)，其中適合的免疫調節物質包括但不限於；鋁組合物例如氫氧化鋁；含有免疫原物質的水包油乳劑組合物或是乳劑，包括完全弗氏佐劑(Complete Freund’s Adjuvant)；含有經乾燥和熱殺滅的結核桿菌的水包油乳劑；不完全弗氏佐劑(Incomplete Freund’s Adjuvant)；含有分枝桿菌細胞壁成份的乳劑；含有角鯊烯(squalene)的乳劑(MF－59)；去毒化的內毒素；脂質A衍生物，包括微生物單磷脂酰脂質A(MPL)；半抗原；硝化纖維素吸收性蛋白；皂甙，包含從皂質樹Quillaja saponoria皮分離而來的免疫調節劑顆粒，例如QS21；人類內源性免疫調節劑；從細菌衍生而來的佐劑，包括去甲基化的CpG二聚核苷酸；寡聚脫氧核苷酸(例如合成寡核苷酸)，含有去甲基化的CpG二聚核苷酸；脂質體(例如由如磷脂等可生物降解性材料製成的脂質體)；可生物降解性聚合微球體(由如聚乳酸－共－甘醇酸(PLGA)、聚膦腈(polyphosphazene)和聚酐等多種聚合物製成的聚合微球體)；白介素－2；卡介苗；顆粒性白血球及單核球群落刺激因子；Montanide ISA－51；鑰孔蟲戚血藍蛋白(Keyhole limpet hemocyanin)；DNA；蛋白；囊封型抗原(encapsulated antigens)；免疫刺激複合物(ISCOM’s)；霍亂毒素和霍亂毒素衍生物；小帶閉合毒素(zonula occludens toxin)；大腸桿菌忌熱性腸毒素(Escherichia coli heat－labile enterotoxin)；忌熱性毒素和忌熱性毒素衍生物；百日咳毒素和百日咳毒素衍生物；胞壁酰二肽(muramyl dipeptide)衍生物；賽比克藥廠(Seppic)的montanide系列佐劑；聚－二(羧負離子基苯氧基)膦腈以及利甚曼原蟲延長因子(leishmania elongation factor)。
當本發明的免疫原組合物和另佐劑共同給予時，聚核苷酸佐劑可在給予該另佐劑之前和/或之後和/或同時給予。例如，聚核苷酸佐劑可在初次給予抗原時併合給予，隨後追加給予一劑含有其中一種佐劑或所有二種佐劑的疫苗。選擇性地，初次給予的疫苗可排除聚核苷酸佐劑，但後續給予病人含有該聚核苷酸佐劑的免疫原物質。
在某些實施方案中，本發明的免疫原組合物可以和細胞因子或是例如IL－1、IL－2、IL－4、IL－5、IL－6、IL－7、IL－10、IL－12、IL－15等其他輔助刺激分子共同給予。
在一個相關實施方案中，本發明提供一種免疫原物質，包含PIKA佐劑、一或多種抗原物質，加上一適當載劑。該載劑可為例如油水乳劑、懸浮液、脂質載劑、鋁鹽、脂質體卷(cochleates)、ISCOMs、脂質體、活細菌載體、活病毒載體、微球體、核酸疫苗、聚合物、聚合物環、氟化鈉、轉基因植物、病毒原質體(virosomes)、類病毒顆粒，以及其他常用傳輸載體。
聚核苷酸佐劑可直接給予個體或是和傳輸複合物共同給予。該傳輸複合物是一種併合有致標手段的物質，例如對於諸如樹突細胞(dendritic cell)等標的細胞表面具有更高親和力和/或易被標的細胞所吸收的分子。傳輸複合物的範例包括但不限於並有下列物質的核酸傳輸複合物：固醇(例如膽固醇)、脂肪(例如正價離子脂肪、病毒原質體或脂質體)或是標的細胞特異性結合成份(例如能被一標的細胞特異性受體所辨識的配位體)。優選的複合物在活體內是足夠穩定以防止在被標的細胞內化之前顯著崩解。但是，該複合物在細胞內的適當條件下是可以裂解的。
在相關實施方案中，含有PIKA佐劑的組合物不包含聚－L－賴氨酸或其衍生物。
組合套裝(Kits)
在某些實施方案中，本發明提供一種包含本發明免疫原組合物的組合套裝。在某些實施方案中，本發明提供一種組合套裝，包含分別位元在不同配方內的PIKA佐劑和抗原。
在一個相關實施方案中，本發明提供一種組合套裝，包含聚核苷酸佐劑和免疫原化合物，其中該免疫原物質是抗原。
在一些實施方案中，本發明的組合套裝包含配製於無菌液體(例如水性)配方內的本發明免疫原組合物，其中該配方是無菌的且盛裝在無菌容器、無菌小管或無菌注射筒內。
在一些實施方案中，本發明的組合套裝包含被配製成注射用的本發明免疫原組合物。在一些實施方案中，本發明的組合套裝包含配製於無菌液體配方內的本發明免疫原組合物，盛裝在無菌注射筒內；以及針頭。本發明的組合套裝包含配製於無菌液體配方內且呈一單位劑量(例如單次劑量)的本發明免疫原組合物，盛裝在無菌注射筒內；以及針頭。
在一些實施方案中，本發明的組合套裝包含被冷凍乾燥且被盛裝在無菌容器內的本發明免疫原組合物，以及含有用以復原冷凍乾燥組合物的無菌液體的容器。在一些實施方案中，該組合套裝另包含復原冷凍乾燥組合物的無菌液體的指南。
在一些實施方案中，本發明的組合套裝包含一免疫原組合物，該免疫原組合物被配製成通過直腸、陰道、鼻、口(包括經呼吸道吸入)、眼、局部、肺臟、眼球或透皮來給予，以及適當傳輸裝置，例如吸入器、栓劑施用器等。
在一些實施方案中，本發明的組合套裝另包含例如有關給予劑量和給予頻率的使用指南。在一些實施方案中，指南是被直接印刷在組合套裝上。在其他的實施方案中，指南是被設置成為包裝內容物的印刷品。指南亦可被設置在其他媒介物上，例如呈數位或類比形式的電子媒體上，例如錄音匣、錄音帶、光盤、多功能數位光盤等。
配方
本發明的免疫原組合物可被配置在任一種配方中。例如，本發明的免疫原組合物可被製備成為一種可注射型溶液、乾燥粉末、液態溶液例如水性或生理食鹽水溶液，或成為懸浮液、油膏、乳劑、片劑、包衣片劑、微膠囊、栓劑、液滴、藥片、顆粒、糖衣錠、膠囊、凝膠、糖漿或漿液。所需免疫原組合物配方的製備被一般性地敍述在Vaccine 4th Edition by Stanley A Plotkin et al.,W.B. Saunders Company；4th edition 2003。適當的配方亦被敍述在例如A.Gennaro(2000)“Remington：The Science and Practice of Pharmacy,” 20th edition,Lippincott,Williams,& Wilkins；Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems(1999)H.C. Ansel et al.,eds.,7th ed.,Lippincott,Williams,& Wilkins；以及Handbook of Pharmaceutical Excipients(2000)A.H. Kibbe et al.,eds.,3rd ed.Amer.Pharmaceutical Assoc.；Methods in Molecular Medicine,Vol.87：Vaccine Protocols,2nd edition(2003),Humana Press；Mucosal Vaccines(1996),Kiyono et al.,eds.,Academic Press；以及Vaccine Adjuvants：Preparation Methods and Research Protocols(2000)D.T. O’Hagan,Humana Press。
本發明的免疫原組合物可被微囊封、並入脂質體卷(encochleated)、塗布在微型金質顆粒上、或是容納於脂質體、氣霧劑或丸片內以植入皮膚，或是被乾燥於一尖銳物件(例如一針頭)上以刮擦進入皮膚內。
在另一實施方案中，本發明的免疫原物質可單獨傳輸或與懸浮液系統併合傳輸。在一些實施方案中，該懸浮液系統是選自於由例如巨分子複合物、奈米膠囊、微球體、微珠粒和脂體基質系統所構成的群組中。脂體基質系統可選擇性地含有水包油乳劑、微胞(micelles)、混合微胞(mixed micelles)或脂質體(liposomes)。
在某些實施方案中，含有PIKA佐劑的本發明免疫原組合物是呈藥學上可接受性溶液的形式，該溶液可例行性地含有藥學上可接受濃度的鹽、緩衝劑、防腐劑、兼容性載劑、佐劑和其他任擇性治療用組份。該組合物可含有例如崩解劑、粘合劑、包覆劑、膨脹劑、潤滑劑、香料、甘味劑或助溶劑等添加劑。
在某些實施方案中，含有PIKA佐劑的本發明免疫原組合物是以其原物形式或藥學上可接受的鹽形式來給予。
本發明的免疫原組合物可以無菌和非無菌形式來使用，例如膠囊、液態溶液、液滴、乳劑、懸浮液、酏劑(elixirs)、油膏、栓劑、凝膠、軟膠囊、噴劑、吸入劑、氣霧劑、粉末、片劑、包衣片、菱錠(lozenges)、微膠囊、栓劑、糖衣錠(dragees)、糖漿、漿液、顆粒、灌腸劑(enemas)或藥片。可以運用任何惰性載劑，例如生理食鹽水或磷酸鹽緩衝化生理食鹽水、穩定劑、驅動劑等任何惰性載劑，該惰性載劑被包封在用以幫助給藥的明膠膠囊內或是在微膠囊或載體內，或是可以運用使得本發明方法所使用的化合物具有適用於本發明方法的溶解性質的任何載劑。
在某些實施方案中，PIKA佐劑組合物以及包含PIKA佐劑和抗原化合物的免疫原組合物可被冷涷乾燥，以呈固體形式長時穩定保存。冷涷乾燥法是熟習本領域技術人士所知悉的。
在一個特別相關方面，本發明提供佐劑組合物或免疫原組合物，其中該免疫原組合物，或是被包含在該免疫原組合物的佐劑組合物，呈現固體或液體形式或是位於溶液或懸浮液或乳劑內。
本發明的免疫原組合物可借著通過呼吸道吸入途徑(經口腔、氣管內、鼻內)的藥用傳輸系統來給予個體。因此，本發明的免疫原組合物可被配製成適合吸入給予的形式。該藥用傳輸系統適合於將本發明的細菌組合物局部給予至支氣管的粘膜被覆層而進行吸入性治療。本發明可運用依賴壓縮氣體驅動力的系統而將細菌噴出容器。為達成此一目的，可使用氣霧劑或加壓容器。
本說明書所使用的“氣霧劑”此用語是依據它的慣用意義來使用，意指被加壓推進氣體攜載至施行治療地址的極細微液態或固態顆粒。當藥用氣霧劑被運用於本發明時，該氣霧劑含有免疫原組合物，而該免疫原組合物可被溶解、懸浮或乳化在由流體載劑和拋射劑所構成的混合物中。氣霧劑可呈溶液、懸浮液、乳劑、粉末或半固體製劑的形式。本發明所使用的氣霧劑是意圖以細微固態顆粒或液態氣霧的形式通過個體的呼吸道來給予。被熟習本項技術人士所知悉的各種拋射劑均可被使用。適當拋射劑的範例包括但不限於烴類或其他適當氣體。以加壓氣霧劑為例，其劑量可通過設置一閥件來設定，以傳輸經計算的用量。
數個不同種類的呼吸道吸入方法可被使用於本發明。本發明的免疫原組合物基本上可被配製成三種不同種類的吸入用配方。第一，本發明的免疫原組合物可與低沸點拋射劑共同配製。這種配方通常通過常用定量吸入器(MDI’s)來給予。但是，可運用美國專利第5,404,871號和第5,542,410號中所論及的技術來測量個體的呼吸體積和流速，而將常用MDI’s加以改裝以增進重復給藥的能力。
選擇性地，本發明的免疫原組合物可被配製在水性或酒精溶液中，並通過常用霧化器來傳輸。在一些實施方案中，這種溶液配方是利用例如美國專利第5,497,763號、第5,544,646號、第5,718,222號和第5,660,166號中所揭露的裝置和系統來霧化。
另外，本發明的免疫原組合物可被配製成乾粉配方。這種配方的給予方式可透過産生該粉末的氣霧之後再簡單地吸入該乾粉配方。這種給予方式的實施技術被敍述在美國專利第5,775,320號和美國專利第5,740,794號中。
適合鼻內給予的配方包括鼻用噴劑、鼻用滴劑、氣霧劑配方等。
在一些實施方案中，本發明的免疫原組合物被配製成持續釋放劑(例如控制釋放型配方)。例如，在一些實施方案中，本發明的免疫原組合物被配製成丸片或柱體，並以貯釋注射劑(depot injections)或植入物的形式植入肌肉內或皮下。這種植入物通常會應用如可生物降解性聚合物等習知惰性材料。可注射的貯釋形式可通過在如聚乳酸聚甘醇酸(polylactide－polyglycolide)等可生物降解性聚合物中形成本發明免疫原組合物的微膠囊基質來製成。其他適用的可生物降解性聚合物的範例包括聚(原酸酯)(poly(orthoesters))和聚酐。可注射的貯釋配方亦可通過將組合物埋覆在可與身體組織兼容的脂質體或微乳劑內來製成。傳輸釋放系統亦包括下列範例：以聚合物為基礎的系統、微膠囊、脂肪、水凝膠釋放系統、矽橡膠系統(sylastic systems)、肽系統、以肽為基礎的系統、蠟質覆膜、壓片、部分融合型植入物。其他形式的持續釋放劑是熟習於本領域技術人士所知悉的。
方法
在一個特別相關方面，本發明提供一種用以刺激和/或促進對於抗原化合物的免疫反應的方法，包含將本發明的免疫原組合物給予宿主。在一些實施方案中，該宿主是人類。在其他實施方案中，該宿主是非人類動物，例如非人類哺乳動物、禽鳥物種等。
在某些實施方案中，該聚核苷佐劑組合物可被使用在疫苗內。該疫苗組合物可選擇性地含有其他佐劑。所涵蓋的疫苗種類為抗傳染病、抗癌症、抗過敏和抗自體免疫疾病。
另外，本發明提供一種用以促進對於抗原化合物的免疫反應的方法，包含將本發明的免疫原組合物給予宿主。該宿主是人類或非人類動物。
在某些實施方案中，該佐劑和該抗原共同被給予。在其他實施方案中，該佐劑是在給予該抗原之前或之後被給予。
本發明的免疫原組合物在一些實施方案中是通過肌肉內、腹腔內、靜脈、皮下或皮內注射等胃腸道外注射來傳輸。在其他實施方案中，該免疫原組合物是以注射以外的方式(例如不以機械裝置來破壞上皮細胞障壁的方式)經皮內傳輸。在其他實施方案中，該免疫原組合物是通過直腸、陰道、鼻、口(包括經呼吸道吸入)、眼、眼球、局部、肺臟或透皮來傳輸。
個體會透過環境接觸而暴露於抗原中，因而會有發展出例如過敏反應、傳染病、自體免疫疾病或癌症的危險。在其他實施方案中，個體因先前透過環境接觸而暴露於抗原中，結果罹患傳染病、自體免疫疾病、癌症或過敏症。
在某些實施方案中，當含有聚核苷酸佐劑的免疫原組合物的給予形式是用以治療癌症時，傳輸方式是將該免疫原組合物直接注射進入腫瘤或腫瘤附近。在一些實施方案中，該免疫原組合物是平均地傳輸於腫瘤表面或內部以增進生物分佈性，從而增進治療效果。
例如，對於以水溶液進行胃腸道外給予而言，該溶液在必要時應該被適當地緩衝化，且先以足量的生理食鹽水或葡萄糖來稀釋以使其呈現等張。這些特定的水性溶液特別適用於靜脈和腹腔內給予。關於這點，熟習本領域技術人士將可參照本申請揭示內容而知悉可供使用的無菌水性媒介物。可供本發明使用的典型注射媒介物包括含有或不含有分散劑和/或防腐劑的緩衝液，以及食用油、礦物油、鱈魚肝油、角鯊烯(squalene)、一－、二－或三酸甘油酯，以及這些成份的混合物。
本發明的免疫原組合物是以有效量被給予，也就是說，本發明的免疫原組合物的用量在選定給予途徑中可有效地刺激、誘導或增進免疫反應。在一些實施方案中，免疫反應是被特定病原性微生物所産生的抗原所激發。在一些實施方案中，本發明的免疫原組合物的用量可有效地遏制和/或根除病原性微生物的感染和/或降低感染所並發的症狀。
例如，在一些實施方案中，將本發明的免疫原組合物給予個體可有效地治療一傳染病，其中傳染病的治療包含下列一或多者：降低病原體在個體內的數目(例如降低病毒負荷量、降低細菌負荷量(bacterial load)、降低原蟲數目、降低蠕蟲數目)和/或降低傳染病相關參數，該參數包括但不限於傳染物質所産生的産物水平的降低(例如毒素、抗原等)；以及降低對於該傳染物質的非所需生理反應(例如發燒、組織水腫等)。
這些組成所需的精確用量是隨著個體不同，依據個體的物種、年齡、體重及一般狀態，被治療或預防的疾病、感染或病況的嚴重性，所使用的特定化合物及它的給予形式等而有所變化。熟習本領域技術人士得知本說明書的公開的內容後，可僅僅利用例行實驗而決定適當的用量。初次給予後，個體可再接受一或多次適當間隔的追加免疫。
在一些實施方案中，一系列劑量的本發明免疫原組合物被給予。在這些實施方案中，第一劑本發明免疫原組合物是為了給予疫苗。第二劑本發明免疫原組合物是在個體因暴露於該第一劑而已經被免疫致敏化之後再給予該個體。加強劑(booster)可在初次免疫數日、數周或數月之後給予，依據病人的反應和狀況而定。例如，加強劑在給予第一劑約2日至約12個月後給予，例如在給予第一劑約2日至約7日、約1周至約2周、約2周至約4周、約4周至約8周、約8周至約6個月、或6個月至約12個月後給予。本發明亦思及利用第三、四、五、六劑或後續劑量來進行第三、四、五、六次或後續加強免疫的應用。
在某些實施方案中，給予手段可包含數個替代性途徑的組合，例如：在系統性給予劑型(例如腹腔、肌肉內、皮下或皮內給予)之後接續以粘膜傳輸劑型(例如經鼻內吸入)，反之亦然。
在某些實施方案中，聚核苷佐劑可以和給予病人的第一劑抗原或是和給予病人的任何後續配劑或是和給予病人的所有配劑合併給予。所給予的至少一劑中將會包含PIKA佐劑以作為完整流程的一部分。
在某些實施方案中，所給予的免疫原組合物的組成可以在初始給予和加強劑之間和/或數個加強之間具有變化。舉例來說，所給予的初次配劑可包含DNA疫苗，而加強劑是呈重組蛋白疫苗的形式。所給予的至少一劑中將會包含PIKA佐劑以作為完整流程的一部分。
運用標準分析方法可容易地測定對於抗原的抗體反應是否已經在個體內被誘導或促進。例如，酶連結免疫吸附分析(ELISA)、放射性免疫分析(RIA)、免疫沈降分析和蛋白墨點(“western blot”)分析等免疫分析以及中和分析(例如活體外或活體內的病毒感染性中和分析可用以測定體液或其他生物樣品(例如個體的血清、分泌物或其他流體)內對於微生物抗原具有特異性的抗體的存在。
運用標準分析方法可容易地測定對於抗原的CD4免疫反應是否已經在個體內被誘導，例如螢光－活化細胞分類法(fluorescence－activated cell sorting(FACS))(請參見例如Waldrop et al.(1997)J.Clin.Invest. 99：1739－1750)；細胞內細胞因子分析用以測定抗原刺激後細胞因子的産生(參見例如Suni et al.(1998)J.Immunol.Methods 212：89－98；Nomura et al.(2000)Cytometry 40：60－68；Ghanekar et al.(2001)Clin.Diagnostic Lab.Immunol. 8：628－631)；MHC－肽多聚體染色分析，例如利用可被檢測地標誌(例如被螢光標誌)的可溶性第II類MHC/肽多聚體(參見例如Billand Kotzin(2002)Arthritis Res. 4：261－265；Altman et al.(1996)Science 274：94－96；以及Murali－Krishna et al.(1998)Immunity 8：177－187)；酶連結免疫點(ELISPOT)分析(參見例如Hutchings et al.(1989)J.Immunol.Methods 120：1－8；以及Czerkinsky et al.(1983)J.Immunol.Methods 65：109－121)等。作為細胞內細胞因子分析的一個非限制性實施例，全血被抗原和共刺激抗體(例如抗－CD28、抗－CD49d)刺激2小時以上；加入佈雷菲德菌素A(Brefeldin A)以抑制細胞因子分泌；以及處理細胞以利用針對CD4以及針對TNF－α、IFN－γ和IL－2等細胞因子的螢光標誌抗體進行FACS分析。
運用常用分析方法可以測定對於抗原(例如病原體)的抗原特異性CD8(例如細胞毒性T細胞；“CTL”)反應是否被誘導，這些分析方法包括但不限於通過測量CTL對於細胞表面上表達出抗原的標的細胞所造成的特異性分解作用，其中標的細胞已並有可檢測標誌，該標誌在標的細胞分解後會釋出且可利用例如51 Cr－釋放分析、以鑭螢光為基礎的細胞分解分析等方法來測量。
適合進行治療的個體
適合利用本發明誘導對於微生物病原體的免疫反應的方法以及治療或預防微生物病原體感染的方法來進行治療的個體，包括已被病原性微生物感染的個體；易被病原性微生物感染但尚未被感染的個體；以及具有被病原性微生物感染的危險性但尚未被感染的個體。適合的個體包括嬰兒、幼童、青少年和成人。
適合利用本發明誘導對於微生物病原體的免疫反應的方法以及治療或限制微生物病原體感染的方法來進行治療的個體包括小兒科目標族群，例如約1歲至約17歲之間的個體，包括嬰兒(例如約1個月至約1歲)、幼童(例如約1歲至約12歲)和青少年(例如約13歲至約17歲)。
適合利用本發明誘導對於微生物病原體的免疫反應的方法以及治療或限制微生物病原體感染的方法來進行治療的個體包括新生兒，例如1天至約14天齡的個體(例如人類新生兒)，例如約1天至約2天齡、約2天至約10天齡、或是約10天至約14天齡。
在特定實施方案中，該個體是一位約10歲或更年少(例如約5歲或更年少)的人類兒童，且免疫原組合物在下列一或多個時間被給予：出生後2周、1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、12個月、15個月、18個月或21個月，或是在2歲、3歲、4歲、5歲、6歲、7歲、8歲、9歲或10歲時。在一些實施方案中，本發明的免疫原組合物被給予一位元在約6個月至約6歲的年齡範圍的個體，其中該個體在約6個月齡時接受第一劑，並在例如2歲、4歲和6歲時接受2－3劑的後續加強劑。
在特定實施方案中，該個體是一位約17歲至49歲的人類成人。在一些實施方案中，該個體是一位50至65歲、65歲至75歲、75至85歲或超過85歲的老年人類成人。
在一些實施方案中，本發明的免疫原組合物是在一個體與微生物病原體的實際或潛在來源(例如已知被微生物病原體所感染或懷疑被感染的個體)接觸之後(例如在確認或懷疑接觸之後)立即給予該個體。例如，在一些實施方案中，本發明的免疫原組合物是在個體已知被微生物病原體所感染或懷疑被感染的個體接觸之後約1小時內、約2小時內、約5小時內、約8小時內、約12小時內、約18小時內、約24小時內、約2日內、約4日內、約7日內、約2周內或1個月內給予該個體。
在一些實施方案中，本發明的免疫原組合物被給予已知或懷疑是微生物病原體的攜帶者的個體，無論他們是否顯現感染症狀。
適合利用本發明誘導對於微生物病原體的免疫反應的方法以及治療或限制微生物病原體感染的方法來進行治療的個體包括缺乏CD4＋ T細胞的個體(「CD4＋ －缺乏性」個體)，例如具有低於正常數目的功能性CD4＋ T淋巴細胞的個體。本說明書所使用的「正常個體」此用語的意思是，所具有的CD4＋ T淋巴細胞水平和功能是位在族群正常範圍內的個體，就人類而言，通常每毫升血液中具有600至1500個CD4＋ T淋巴細胞。CD4＋ －缺乏性個體包括罹患後天免疫不全症或原發性免疫不全症的個體。後天免疫不全症可能是因放射線治療或化學治療等所造成的暫時性CD4＋ 缺乏。
具有健康完整的免疫系統但具有轉變成CD4＋ 缺乏的危險性的個體(「高危險」個體)亦適合以本發明的方法來治療。高危險個體包括但不限於較一般族群具有更高可能性轉變成CD4＋ 缺乏的個體。具有轉變成CD4＋ 缺乏的危險性的個體包括但不限於因為和被HIV感染的個體進行性活動而具有受HIV感染的危險性的個體；靜脈藥物使用者；可能被暴露於受HIV感染的血液、血液製品或其他受HIV所污染的體液的個體；通過受HIV感染個體的産道的嬰兒；被HIV感染母親所哺育的嬰兒等。
適合利用本發明治療癌症的方法來進行治療的個體包括已被致癌物質所感染的個體；易於罹患癌症但尚未被診斷出罹患癌症的個體；以及具有罹患癌症的危險但尚未被診斷出罹患癌症的個體。適合的個體包括嬰兒、幼童、青少年和成人。
適合利用本發明治療癌症的方法來進行治療的個體包括已被診斷出罹患癌症的個體。先前已接受例如化學治療或放射線治療來治療癌症而現在正監控該先前所治療的癌症是否復發的個體；以及接受骨髓移植手術或其他器官移植手術的個體。
適合利用本發明用以治療過敏的配方和方法來進行治療的個體包括已被診斷出患有過敏的個體。可以接受本說明書所述方法和藥劑來進行治療的個體包括已知對於一或多種過敏原具有過敏反應(allergic hypersensitivity)的個體。可以接受治療的個體包括罹患前述任何一種過敏性疾病的個體。具有對於一或多種過敏原産生過敏反應的危險性的個體也可以接受治療。接受一或多個治療過敏性疾病的標準療程但治療失敗的個體也適合利用本發明。
適合接受治療的個體包括居住在工業國家的個體；居住在發展中國家的個體；居住在鄉村地區的個體；居住在較偏遠隔離地區的個體等。
本發明的免疫原組合物的目標族群是依據微生物病原體的不同而有所變化的。
以上所述內容是一般性地敍述本發明。以下描述實施例將可協助瞭解本發明。這些實施例僅以例示說明為目的，而非意圖對於本發明的範圍加以限制。當情勢所趨或為因時制宜時，當可思及本發明在形式上的變化和等效性取代。雖然本說明書使用特定的用語，但是這些用語是意圖供說明之用，而不是以限制為目的。
實施例 實施例1：PIKA和各種抗原相組合以誘導特異性免疫反應
這個實施例涉及利用PIKA和各種抗原相組合以在活體內刺激特異性免疫反應。這個研究利用共通流程進行一系列獨立實驗，但每次利用一種不同的抗原。受測抗原包括：乙型肝炎adw型表面抗原重組蛋白、滅活裂解型流感疫苗(得自於Sanofi Pasteur的VAXIGRIP)、合成型HIV肽抗原、第2型單純皰疹病毒gD抗原重組蛋白、重組型炭疽菌保護蛋白抗原、滅活型全病毒禽流感抗原品系H5N1和滅活型全病毒嚴重急性呼吸道綜合症(SARS)滅活抗原。
個別實驗的流程涉及將陣列Balb/c小鼠(每組3只)接種以抗原組合物、抗原和PIKA佐劑(一種由主要位在約66kDa至1,200kDa的重量分佈範圍內的PIKA分子所構成的異質組合物)、PIKA、含有磷酸鹽緩衝溶液(PBS)的對照組。
依據所使用的各種抗原給予實際劑量。在初次注射後第10至14天，給予小鼠相同的加強劑疫苗。在加強劑注射後第10至14天採取血液樣品，隨後處死小鼠並從脾臟取得組織樣品。實驗結果是以各組內個別小鼠的測驗結果的平均值來呈現。
製備脾臟細胞的懸浮液，並將來自於各只小鼠的細胞懸浮液的樣品置入ELISPOT培養板的6－12孔中並加以培養。該ELISPOT培養板的各孔容納有200ul的脾細胞懸浮液，每孔約有2×105 至1×106 個細胞(詳見下表)。對於各只小鼠的脾細胞培養樣品來說，半數含有脾細胞的孔是以培養基來培育，另外半數的孔是利用特定抗原的兩種不同濃度其中一種來刺激並進行評估。培養板是在環境受控制的條件下於37℃培育20小時之後，再進行最後準備並利用具標準型ELISPOT培養板讀數機來讀取資料。
運用本領域技術人員所知悉的標準ELISPOT測驗法來檢測産生細胞因子IL－4、IL－2和干擾素－γ的細胞數目。
運用流式細胞篩選分析法(Flow Cytometry analysis)來檢測CD4＋ T細胞所産生的干擾素－γ。螢光－活化細胞分類儀(FACS)的應用是本領域技術人員所知悉的。簡單來說，濃度為2.5×106 個細胞/ml的脾細胞溶液被製備並分置於個別小管，每個樣品置入2ml。隨後製備接受抗原刺激的樣品，並在環境受控制的條件下於37℃培育5小時。接著將樣品加以洗滌並染色，再置入具標準型FACS讀數機中讀取資料。
運用本領域技術人員所知悉的標準ELISA測驗法來檢測從處死動物所取得的血清中的特異性抗體效價。
實施例1.1：重.組型乙型肝炎表面抗原(HBsAg)adw 下表6所顯示的結果是利用乙型肝炎adw型表面抗原重組蛋白來檢測産生干擾素－γ、IL－2和IL－4的細胞存在數目的ELISPOT測驗結果。表6中的資料(也請一併參見第1、2和3圖)代表ELISPOT讀數和斑點形成細胞(spot forming cells)的數目，也就是産生細胞因子的細胞數目的直接測量值。
斑點形成細胞數目隨著PIKA佐劑的加入而顯著增加(相較於僅加入抗原)顯示將PIKA佐劑加入乙型肝炎表面抗原重組蛋白可以促進被培養的脾細胞表達細胞因子干擾素－γ、IL－2和IL－4。所觀察到的細胞因子表達顯示PIKA佐劑的存在促進了體液和細胞免疫系統的適應性免疫反應。
對於處死前所採血液樣品所進行的ELISA測驗結果(下表7和第4圖)顯示PIKA的存在明顯地促進了免疫反應，該免疫反應是通過血清中所測得的特異性抗體效價來計算。
得到的結論是PIKA佐劑的加入促進了對於HBsAg的整體免疫反應，特別是特異性免疫反應，更特別是適應性免疫反應，且主要是Th1偏好型免疫反應以及促進細胞免疫反應。
實施例1.2：VAXIGRIP(Sanofi Pasteur)，含有類H1N1、H3N2病毒株和b/Shanghai5/361/2002病毒株的滅活純化流感抗原 下表8所顯示的結果是利用VAXIGRIP疫苗(由Sanofi Pasteur藥廠所生産的一種滅活裂解人類流感疫苗)來檢測産生干擾素－γ、IL－2和IL－4的細胞存在數目的ELISPOT測驗結果。表8中的資料(也請一併參見第5、6和7圖)代表ELISPOT讀數和斑點形成細胞的數目，也就是細胞因子産生量的直接測量值。
斑點形成細胞數目隨著PIKA佐劑的加入而顯著增加(相較於僅加入抗原)顯示將PIKA佐劑加入流感抗原可以促進被培養的脾細胞表達細胞因子干擾素－γ、IL－2和IL－4。所觀察到的細胞因子表達顯示PIKA佐劑的存在促進了體液和細胞免疫系統的適應性免疫反應。
對於處死前所採血液樣品所進行的ELISA測驗結果(下表9和第8圖)顯示PIKA的存在明顯地促進了免疫反應，該免疫反應是通過血清中所測得的特異性抗體效價來測量。
得到的結論是PIKA佐劑的加入促進了對於流感抗原的整體免疫反應，特別是特異性免疫反應，更特別是適應性免疫反應，又更特別是細胞免疫反應。
VAXIGRIP是一種經過認可的流感疫苗，它被認為可以顯著地降低罹患流感的危險性。PIKA的加入促進了細胞因子的産生水平，因而顯示含有VAXIGRIP和PIKA的疫苗亦可激發免疫反應而顯著地降低罹患流感的危險性。
實施例1.3：合成型HIV肽抗原 下表10所顯示的結果是利用HIV肽抗原來檢測産生干擾素－γ、IL－2和IL－4的細胞存在數目的ELISPOT測驗結果。表10中的資料(也請一併參見第9、10和11圖)代表ELISPOT讀數和斑點形成細胞的數目，也就是細胞因子産生量的直接測量值。
斑點形成細胞數目隨著PIKA佐劑的加入而顯著增加(相較於僅加入抗原)顯示將PIKA佐劑加入HIV抗原可以促進被培養的脾細胞表達細胞因子干擾素－γ、IL－2和IL－4。所觀察到的細胞因子表達顯示PIKA佐劑的存在促進了體液和細胞免疫系統的適應性免疫反應。
FACS分析的結果顯示在下表11(也請一併參見第12圖)。産生干擾素－γ的CD4＋ T細胞只存在於含有PIKA和HIV抗原的配方的事實確認了適應性免疫反應已到達成熟階段且PIKA能幫助這個過程的完成。
得到的結論是PIKA佐劑的加入促進了對於HIV抗原的整體免疫反應，特別是特異性免疫反應，更特別是適應性免疫反應，又更特別是細胞免疫反應。
實施例1.4：來自於炭疽桿菌(Bacillus Anthracis)的重組型炭疽菌保護蛋白抗原(rPA) 下表12所顯示的結果是利用重組炭疽菌抗原來檢測産生干擾素－γ、IL－2和IL－4的細胞存在數目的ELISPOT測驗結果。表12中的資料(也請一併參見第13、14和15圖)代表ELISPOT讀數和斑點形成細胞的數目，也就是細胞因子産生量的直接測量值。
斑點形成細胞數目隨著PIKA佐劑的加入而顯著增加(相較於僅加入抗原)顯示將PIKA佐劑加入炭疽菌抗原可以促進被培養的脾細胞表達細胞因子干擾素－γ、IL－2和IL－4。所觀察到的細胞因子表達顯示PIKA佐劑的存在促進了體液和細胞免疫系統的適應性免疫反應。
FACS分析的結果顯示在下表13(也請一併參見第16圖)。産生干擾素－γ的CD4＋ T細胞只存在於含有PIKA和rPA抗原的配方的事實確認了適應性免疫反應已到達成熟階段且PIKA能幫助這個過程的完成。
對於處死前所採血液樣品所進行的ELISA測驗結果(下表14以及第16和17圖)顯示PIKA的存在明顯地促進了免疫反應，該免疫反應是通過血清中所測得的特異性抗體效價來測量。
初次施打疫苗之後16周，利用標率ELISA測驗法來評估來自於原始A和B組小鼠的血液樣品中的特異性抗體存在量，可以觀察到一致性的結果。再次，PIKA和炭疽菌抗原的共同存在可誘導顯著較高的免疫反應，該免疫反應是通過血清中所測得的特異性抗體效價來測量。
得到的結論是PIKA佐劑的加入促進了對於rPA的整體免疫反應，特別是特異性免疫反應，更特別是適應性免疫反應，又更特別是細胞免疫反應。
實施例1.5：2型單純皰疹病毒gD抗原重組蛋白 下表15所顯示的結果是利用重組型單純皰疹病毒抗原來檢測干擾素－γ、IL－2和IL－4的存在量的ELISPOT測驗結果。表15中的資料(也請一併參見第19、20和21圖)代表ELISPOT讀數和斑點形成細胞的數目，也就是細胞因子産生量的直接測量值。
斑點形成細胞數目隨著PIKA佐劑的加入而顯著增加(相較於僅加入抗原)顯示將PIKA佐劑加入單純皰疹病毒抗原可以促進被培養的脾細胞表達細胞因子干擾素－γ、IL－2和IL－4。所觀察到的細胞因子表達顯示PIKA佐劑的存在促進了體液和細胞免疫系統的適應性免疫反應。
FACS分析的結果顯示在下表16(也請一併參見第22圖)。産生干擾素－γ的CD4＋ T細胞只存在於含有PIKA和HSV抗原的配方的事實確認了適應性免疫反應已到達成熟階段且PIKA能幫助這個過程的完成。
對於處死前所採血液樣品所進行的ELISA測驗結果(下表17以及第23圖)顯示PIKA的存在明顯地促進了免疫反應，該免疫反應是通過血清中所測得的特異性抗體效價來測量。
得到的結論是PIKA佐劑的加入促進了對於HSV抗原的整體免疫反應，特別是特異性免疫反應，更特別是適應性免疫反應，又更特別是細胞免疫反應。
實施例1.6：滅活H5N1全病毒(禽流感)抗原 下表18所顯示的結果是利用滅活未純化型H5N1抗原來檢測干擾素－γ、IL－2和IL－4的存在量的ELISPOT測驗結果。表18中的資料(也請一併參見第24、25和26圖)代表ELISPOT讀數和斑點形成細胞的數目，也就是細胞因子産生量的直接測量值。
斑點形成細胞數目隨著PIKA佐劑的加入而顯著增加(相較於僅加入抗原)顯示將PIKA佐劑加入H5N1抗原可以促進被培養的脾細胞表達細胞因子干擾素－γ、IL－2和IL－4。所觀察到的細胞因子表達顯示PIKA佐劑的存在促進了體液和細胞免疫系統的適應性免疫反應。
FACS分析的結果顯示在下表19(也請一併參見第27圖)。産生干擾素－γ的CD4＋ T細胞只存在於含有PIKA和H5N1抗原的配方的事實確認了適應性免疫反應已到達成熟階段且PIKA能幫助這個過程的完成。
對於處死前所採血液樣品所進行的ELISA測驗結果(下表20以及第28圖)顯示PIKA的存在明顯地促進了免疫反應，該免疫反應是通過血清中所測得的特異性抗體效價來測量。
得到的結論是PIKA佐劑的加入促進了對於H5N1抗原的整體免疫反應，特別是特異性免疫反應，更特別是適應性免疫反應，又更特別是細胞免疫反應。
實施例2：滅活型全病毒SARS抗原
這個實驗的目標在於顯示將PIKA加入SARS抗原能促進免疫反應並刺激宿主免疫系統以産生SARS特異性保護抗體。
在這個研究計劃中，6個各含4只Balb/c小鼠的群組(經腹腔注射)被接種以SARS抗原組合、抗原加上PIKA(一種由主要位在約66kDa至1,200kDa的重量分佈範圍內的PIKA分子所構成的異質組合物)、PIKA或對照組。參見下表21(請一併參見第29圖)。
在第0天、第14天和第28天時將相同劑量給予各群組。第6周時抽取一血液樣品並測驗血清中的IgG的存在量，以此為疾病特異性抗體的存在測量值。將血清稀釋16,000倍，接著利用ELISA讀數器來測量IgG的存在量，這個過程是本領域技術人員所知悉的。輸出的數值為光學密度(O.D.)的讀數，其中該數值愈高表示IgG的存在量愈高。
各群組實驗結果的平均值呈現在表21，該資料顯示PIKA佐劑的存在和IgG表達的增加之間具有相關性。
得到的結論是PIKA和SARS抗原的共同存在能以劑量相依賴的方式來增加IgG的表達，從而促進宿主的免疫反應。
實施例3：PIKA疫苗提供對抗H5N1和H9N2感染的免疫保護作用
這個實驗的目標在於顯示含有PIKA佐劑的禽流感疫苗能夠保護雞只免於禽流感活病毒的感染。
這個研究是在2個各具有24只SPF雞的群組中進行。在10天齡雞只的頸部通過皮下接種以一劑700ul的含PIKA(一種由主要位在66kDa至660kDa的重量範圍內的PIKA分子所構成的異質組合物)和二株禽流感病毒(H5N1和H9N2)的疫苗。該組合物含有呈現約為2：1的比例的抗原和PIKA佐劑。
在第7、14和21天時在雞只的翼下部分採取數個血液樣品。測驗來自於各雞只的血液樣品中的特異性H5和H9抗體的存在量。
在第21天時，以活的H5N1病毒來攻毒雞只，再觀察14天。記錄暴露在活的H5N1病毒後第14天的雞只存活率。
各群組的平均結果(表22，請一併參見第30和31圖)顯示PIKA的存在誘導特異性抗體的産生。
在施打抗原/PIKA組合物疫苗的24只雞中，有21只(83%)在暴露於活的H5N1病毒後第14天仍存活。在沒有接受疫苗但仍暴露於活的H5N1病毒的對照組24只雞中，14天後僅有4只(17%)存活。
得到的結論是PIKA疫苗能夠提供顯著的免疫保護作用水平以對抗H5N1病毒。
實施例4：PIKA疫苗提供對抗狂犬病感染的免疫保護作用
這個研究的目標在於顯示含有PIKA佐劑的狂犬病疫苗能夠提供對抗狂犬病感染的免疫保護作用。
4個群組(分別編號I、ii、iii和iv)各包含20只Balb/c SPF Kunming小鼠，各只小鼠被攻毒以100ul的野生型狂犬病病毒株CQ92。各群組接受不同種類疫苗的接種：i)一由PIKA(一種由主要位在66kDa至660kDa的重量範圍內的PIKA分子所構成的異質組合物)和倉鼠腎細胞滅活純化型狂犬病抗原所構成的組合物，其中該PIKA和狂犬病抗原呈現1比4的體積比；ii)Sanofi－Aventis藥廠的Veroab vero細胞滅活型狂犬病疫苗；iii)倉鼠腎細胞滅活純化型狂犬病疫苗和鋁佐劑(alum adjuvant)；以及iv)磷酸鹽緩衝溶液對照組。感染後第30至40分鐘、第3天、第6天和第9天通過皮下注射動物大腿而給予60ul的疫苗。
各群組的存活率顯示在表23。(請一併參見第32圖)。
得到的結論是PIKA的存在顯著地增進了倉鼠腎細胞滅活純化型狂犬病抗原所提供的免疫保護作用。
實施例5：PIKA和乙型肝炎疫苗誘導血清中特異性抗體的産生
這個實驗的過程涉及將3個群組的Balb/c小鼠(每組3只小鼠)通過皮下注射施打下列組合物疫苗：第A組，僅有4ug的乙型肝炎adw型表面抗原；第B組，4ug抗原和75ug的PIKA佐劑(一種由主要位在約66kDa至1,200kDa的重量分佈範圍內的PIKA分子所構成的異質組合物)；以及第C組，僅有100ug PIKA。
在初次注射後第10至14天，通過皮下注射給予小鼠相同的加強劑疫苗。在加強劑注射後第10至14天採取血液樣品，並利用本領域技術人員所知悉的標準ELISA測驗法來檢驗特異性抗體的效價。
各群組實驗結果的平均值呈現在下表24(以及第33圖)，這些資料顯示PIKA的存在促進了對於乙型肝炎抗原的免疫反應，該免疫反應是通過觀測血清樣品中的特異性抗體效價來測量。
從這個實驗得到的結論是含有PIKA和乙型肝炎抗原的免疫原物質誘導了顯著免疫反應的産生，該免疫反應是通過血清樣品中的特異性抗體效價來測量。
實施例6：PIKA和流感疫苗誘導血清中特異性抗體的産生
這個實驗的過程涉及將2個群組的Balb/c小鼠(每組3只小鼠)通過皮下注射施打下列組合物疫苗：第A組，僅有4ug的Sanofi VAXIGRIP流感疫苗；以及第B組，4ug抗原和100ug的PIKA佐劑(一種由主要位在約66kDa至1,200kDa的重量分佈範圍內的PIKA分子所構成的異質組合物)。
在初次注射後第20天，通過皮下注射給予小鼠相同的加強劑疫苗。在初次施打疫苗後第35天採取血液樣品，並利用本領域技術人員所知悉的標準ELISA測驗法來檢驗特異性抗體的效價。
各群組實驗結果的平均值呈現在下表25(以及第34圖)，這些資料顯示PIKA的存在促進了對於流感疫苗抗原的免疫反應，該免疫反應是通過觀測血清樣品中的特異性抗體效價來測量。
從這個實驗得到的結論是含有PIKA和流感抗原的免疫原物質誘導了顯著免疫反應的産生，該免疫反應是通過血清樣品中的特異性抗體效價來測量。
實施例7：PIKA和乙型肝炎(adw型表面抗原)疫苗誘導治療性免疫反應
這個實驗的過程涉及將數個各含有4只6至10周齡的Balb/c小鼠的群組接種以商業上可購得的adw型HbsAg組合物，該組合物含有或不含有PIKA佐劑(一種由主要位在約66kDa至1,200kDa的重量分佈範圍內的PIKA分子所構成的異質組合物)；PIKA；或是含有磷酸鹽緩衝溶液(PBS)的對照組。
在小鼠背部兩側給予初次皮下注射各100ul。實際劑量提供於下表所顯示的實驗結果中。接著在初次注射後第21天給予小鼠相同的加強劑疫苗。在第42天時採取二個血液樣品，隨後處死小鼠並從脾臟取得細胞以供測試之用。
進行ELISPOT分析法以篩選出分泌抗原特異性干擾素－γ 的T細胞。令來自於HBsAg的CD8 T細胞肽表位(IPQSLDSWWTSL)在5ug/ml的濃度下活體外刺激取自於各只小鼠的一個脾細胞樣品，以測量IPQSLDSWWTSL－特異性CD8＋細胞的存在量。
以2ug/ml的HBsAg肽IPQSLDSWWTSL在活體外再刺激第二個脾細胞樣品歷時6天。利用5ug/ml的HBsAg肽IPQSLDSWWTSL作為活體外刺激劑進行ELISPOT分析以檢測干擾素－γ 。進行這個分析是為了檢測免疫之後的中心記憶細胞反應。
利用ELISA分析來測量HBV抗原特異性抗體(特別是IgG1和IgG2a抗體)在血清中的存在量。在攝氏4度下，將數個Nunc Immunoplate Maxisorp培養板塗布以HbsAg(6ug/ml，配在PBS/0.01% Tween 20內)過夜。以PBS/Tween洗滌這些培養板，並以配在PBS內的5% FCS進行封閉處理2小時。加以洗滌後，加入配在PBS/Tween內的血清稀釋液2小時。加以洗滌後，加入綴合有生物素(biotin)的大鼠抗小鼠IgG1單克隆抗體的1/3000稀釋液，或是綴合有生物素的大鼠抗小鼠IgG2a單克隆抗體的1/1500稀釋液。加以洗滌後，加入鏈黴親和素HRP(streptavidin HRP)(1/10,000稀釋於PBS/Tween)歷時1小時。加以洗滌後，以ABTS和過氧化氫(1000：1)加入，歷時20分鐘。接著測量在405nm下的光密度(OD)，實驗結果是以各群組的平均值來呈現。
以配有PIKA佐劑的HBsAg進行免疫的小鼠的IgG1反應相較於僅以HBsAg進行免疫的小鼠反應高出約5倍。IgG1的效價是以劑量相依賴形式增加(表26和第35圖)。
以配有PIKA佐劑的HBsAg進行免疫的小鼠的IgG2a反應相較於僅以HBsAg進行免疫的小鼠反應顯著為高。IgG2a的效價是以劑量相依賴形式增加，提示以Th1為主的免疫反應增加(表27和第36圖)。
CD8肽表位特異性活體外刺激的ELISPOT分析顯示對於僅以HBsAg進行免疫的小鼠無法測得反應。相對地，在利用配有PIKA的HBsAg進行免疫之後，表達干擾素－γ 的細胞可以容易地測得且呈現劑量相依賴形式，提示PIKA促進了治療性免疫反應(表28和第37圖)。
培養脾細胞6天之後所進行的ELISPOT分析顯示來自被含有HbsAg和PIKA佐劑的配方所免疫的小鼠中能夠産生干擾素－γ 的脾細胞數目是兩倍於來自僅給予HBsAg的小鼠的脾細胞數目。這結果確認了PIKA的存在能夠促進中心記憶細胞的活化(表28和第38圖)。
第1圖－以含有PIKA和/或HBsAg adw的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生干擾素－γ 的小鼠脾細胞；第2圖－以含有PIKA和/或HBsAg adw的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL－2的小鼠脾細胞；第3圖－以含有PIKA和/或HBsAg adw的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測被小鼠脾細胞所産生的IL－4；第4圖－以含有PIKA和/或HBsAg adw的疫苗進行免疫後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清(稀釋400倍)的特異性IgG效價；第5圖－以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原(inactivated split influenza antigen)的疫苗進行免疫之後，利用ELISPOT法來檢測産生干擾素－γ 的小鼠脾細胞；第6圖－以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL－2的小鼠脾細胞；第7圖－以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL－4的小鼠脾細胞；第8圖－以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清(稀釋900倍)的特異性IgG效價；第9圖－以含有PIKA和/或HIV gp120抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生干擾素－γ 的小鼠脾細胞；第10圖－以含有PIKA和/或HIV gp120抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL－2的小鼠脾細胞；第11圖－以含有PIKA和/或HIV gp120抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL－4的小鼠脾細胞；第12圖－以含有PIKA和/或HIV gp120抗原的疫苗進行免疫後，利用FACS法來分析小鼠脾細胞，圖中顯示表達干擾素－γ 的CD4＋細胞百分率；第13圖－以含有PIKA和/或炭疽菌rPA抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生干擾素－γ 的小鼠脾細胞；第14圖－以含有PIKA和/或炭疽菌rPA抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL－2的小鼠脾細胞；第15圖－以含有PIKA和/或炭疽菌rPA抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL－4的小鼠脾細胞；第16圖－以含有PIKA和/或炭疽菌rPA抗原的疫苗進行免疫後，利用FACS法來分析小鼠脾細胞，圖中顯示表達干擾素－γ 的CD4＋細胞百分率；第17圖－以含有PIKA和/或炭疽菌rPA抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清(稀釋400倍)的特異性IgG效價；第18圖－以含有PIKA和/或炭疽菌rPA抗原的疫苗進行免疫16周之後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清的特異性IgG效價；第19圖－以含有PIKA和/或HSV2－gD抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生干擾素－γ 的小鼠脾細胞；第20圖－以含有PIKA和/或HSV2－gD抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL－2的小鼠脾細胞；第21圖－以含有PIKA和/或HSV2－gD抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL－4的小鼠脾細胞；第22圖－以含有PIKA和/或HSV2－gD抗原的疫苗進行免疫後，利用FACS法來分析小鼠脾細胞，圖中顯示表達干擾素－γ 的CD4＋細胞百分率；第23圖－以含有PIKA和/或HSV2－gD抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清(稀釋2,700倍)的特異性IgG效價；第24圖－以含有PIKA和/或滅活H5N1抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生干擾素－γ 的小鼠脾細胞；第25圖－以含有PIKA和/或滅活H5N1抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL－2的小鼠脾細胞；第26圖－以含有PIKA和/或滅活H5N1抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISPOT法來檢測産生IL－4的小鼠脾細胞；第27圖－以含有PIKA和/或滅活H5N1抗原的疫苗進行免疫後，利用FACS法來分析小鼠脾細胞，圖中顯示表達干擾素－γ 的CD4＋細胞百分率；第28圖－以含有PIKA和/或滅活H5N1抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清(稀釋900倍)的特異性IgG效價；第29圖－以含有PIKA和/或全部滅活SARS抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清(稀釋16,000倍)的特異性IgG效價；第30圖－以含有PIKA和/或滅活H5抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISA法檢測來自於雞血清的特異性抗體H5N1的效價；第31圖－以含有PIKA和/或滅活H9抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISA法檢測來自於雞血清的特異性抗體H9N2的效價；第32圖－暴露於野生型狂犬病毒後再接受狂犬病疫苗治療的小鼠的存活率；第33圖－以含有PIKA和/或HBsAg adw的疫苗進行免疫後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清的特異性抗體效價；第34圖－以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗進行免疫後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清的特異性抗體效價；第35圖－以含有PIKA和/或HBsAg的疫苗進行免疫之後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清的特異性IgG1效價；第36圖－以含有PIKA和/或HBsAg的疫苗進行免疫之後，利用ELISA法檢測來自於小鼠血清的特異性IgG2a效價；第37圖－以含有PIKA和/或HBsAg的疫苗進行免疫之後，利用ELISPOT法來檢測産生干擾素－γ 的小鼠脾細胞；第38圖－以含有PIKA和/或HBsAg的疫苗進行免疫之後，以2ug/ml的IPQ肽再刺激6天，利用ELISPOT法來檢測産生干擾素－γ 的小鼠脾細胞。

Claims (19)

  1. 一種免疫原組合物，其包含：(a)聚核苷酸佐劑，該佐劑包含：聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(PIC)、卡那鰴素及鈣離子；以及(b)至少一種病毒抗原；其中該抗原是腺病毒(adeniviridae)、沙粒病毒(arenaviridae)、星狀病毒(astroviridae)、本揚病毒(bunyaviridae)、杯狀病毒(cliciviridae)、黃病毒(flaviviridae)、D型肝炎病毒(hepatitis delta virus)、肝炎病毒(hepeviridae)、皰疹病毒科(herpesviridae)、單分子負鏈RNA病毒(mononegavirales)、巢病毒(nidovirales)、小RNA病毒(piconaviridae)、正黏液病毒(orthomyxoviridae)、乳頭瘤病毒(papillomaviridae)、細小病毒(parvoviridae)、多瘤病毒(polyomaviridae)、痘病毒(poxviridae)、呼腸孤病毒(reoviridae)、反轉錄病毒(retroviridae)或披膜病毒(togaviridae)中的一個抗原，其中該組合物包含聚核苷酸佐劑組合物，該聚核苷酸佐劑組合物中的分子在分子量上是異質的，其中該分子量為從約66,000道爾頓至1,200,000道爾頓，且平均分子量大於9沈降係數單位(Svedbergs)。
  2. 一種免疫原組合物，其包含：(a)聚核苷酸佐劑，該佐劑包含：聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(PIC)、卡那鰴素及鈣離子；以及(b)至少一種細菌抗原；其中該抗原是放線菌(actinobacteria)、衣原體(chlamydiae)、革蘭式陽性菌(firmicutes)、變形菌(proteobacteria)或螺旋體 (spirochaetes)中的一個抗原，其中該組合物包含聚核苷酸佐劑組合物，該聚核苷酸佐劑組合物中的分子在分子量上是異質的，其中該分子量為從約66,000道爾頓至1,200,000道爾頓，且平均分子量大於9沈降係數單位(Svedbergs)。
  3. 一種免疫原組合物，其包含：(a)聚核苷酸佐劑，該佐劑包含：聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(PIC)、卡那鰴素及鈣離子；以及(b)至少一種真菌抗原；其中該抗原是子囊菌(ascomycota)、擔子菌(basidiomycota)或後生動物(metoza)中的一個抗原，其中該組合物包含聚核苷酸佐劑組合物，該聚核苷酸佐劑組合物中的分子在分子量上是異質的，其中該分子量為從約66,000道爾頓至1,200,000道爾頓，且平均分子量大於9沈降係數單位(Svedbergs)。
  4. 一種免疫原組合物，其包含：(a)聚核苷酸佐劑，該佐劑包含：聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(PIC)、卡那鰴素及鈣離子；以及(b)至少一種寄生蟲抗原；其中該抗原是肉足鞭毛門(phylum sarcomastigophora)、頂覆門(phylum apicomplexa)、纖毛門(phylum ciliophora)、扁形動物門(phylum plathyhelminthes)、線蟲門(phylum nematode)或節肢動物門(phylum arthropoda)中的一個抗原，其中該組合物包含聚核苷酸佐劑組合物，該聚核苷酸佐劑組合物中的分子在分子量上是異質的，其中該分子量為從約66,000道爾頓至1,200,000道爾頓，且平均分子量大於9沈降係數單位(Svedbergs)。
  5. 一種免疫原組合物，其包含：(a)聚核苷酸佐劑，該佐劑包含：聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(PIC)、卡那鰴素及鈣離子；以及(b)至少一種癌腫抗原；其中該抗原是骨胳、腦部、乳房、消化道/腸胃道、內分泌、眼部、泌尿生殖器、生殖細胞、婦科、頭頸部、血液、肺部、骨胳肌肉、神經、呼吸系統/胸腔或皮膚癌中的一種癌腫抗原，其中該組合物包含聚核苷酸佐劑組合物，該聚核苷酸佐劑組合物中的分子在分子量上是異質的，其中該分子量為從約66,000道爾頓至1,200,000道爾頓，且平均分子量大於9沈降係數單位(Svedbergs)。
  6. 一種免疫原組合物，其包含：(a)聚核苷酸佐劑，該佐劑包含：聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(PIC)、卡那鰴素及鈣離子；以及(b)由二或更多種抗原所構成的組合；其中這些抗原是腺病毒(adeniviridae)、沙粒病毒(arenaviridae)、星狀病毒(astroviridae)、本揚病毒(bunyaviridae)、杯狀病毒(cliciviridae)、黃病毒(flaviviridae)、D型肝炎病毒(hepatitis delta virus)、肝炎病毒(hepeviridae)、單分子負鏈RNA病毒(mononegavirales)、巢病毒(nidovirales)、小RNA病毒(piconaviridae)、正黏液病毒(orthomyxoviridae)、乳頭瘤病毒(papillomaviridae)、細小病毒(parvoviridae)、多瘤病毒(polyomaviridae)、痘病毒(poxviridae)、呼腸孤病毒(reoviridae)、反轉錄病毒(retroviridae)、披膜病毒(togaviridae)、放線菌(actinobacteria)、衣原體 (chlamydiae)、革蘭式陽性菌(firmicutes)、變形菌(proteobacteria)、螺旋體(spirochaetes)、子囊菌(ascomycota)、擔子菌(basidiomycota)、肉足鞭毛門(phylum sarcomastigophora)、頂覆門(phylum apicomplexa)、纖毛門(phylum ciliophora)、扁形動物門(phylum plathyhelminthes)、線蟲門(phylum nematode)、節肢動物門(phylum arthropoda)、子囊菌(ascomycota)、擔子菌(basidiomycota)及/或後生動物(metoza)中的抗原，其中該組合物包含聚核苷酸佐劑組合物，該聚核苷酸佐劑組合物中的分子在分子量上是異質的，其中該分子量為從約66,000道爾頓至1,200,000道爾頓，且平均分子量大於9沈降係數單位(Svedbergs)。
  7. 如申請專利範圍第1至6項中任一項的免疫原組合物，其另外包含至少一個免疫調節物。
  8. 如申請專利範圍第1至6項中任一項的免疫原組合物，其中該抗原為滅活微生物、減毒微生物、重組型多肽和/或合成型多肽。
  9. 如申請專利範圍第1至6項中任一項的免疫原組合物，其中該免疫原組合物或是該免疫原組合物中所含有的聚核苷酸佐劑是呈現液體、溶液、滴液、固體、膠囊、乳劑、懸浮液、酏劑、油膏、栓劑、凝膠、軟膠囊、噴劑、吸入劑、氣霧劑、片劑、包衣片、微膠囊、栓劑、糖衣錠(dragees)、糖漿、漿液、灌腸劑、顆粒、粉末、片劑或菱錠(lozenges)的形式。
  10. 如申請專利範圍第1至6項中任一項的免疫原組合物，其中該佐劑組合物或免疫原組合物中的至少一者被冷凍乾燥。
  11. 一種組合套裝，包含如申請專利範圍第1至6項中任一項的免疫原組合物。
  12. 一種如申請專利範圍第1至6項中任一項的免疫原組合物在製造藥物上的用途，該藥物是用以促進宿主對於該抗原的免疫反應。
  13. 如申請專利範圍第12項的用途，其中該宿主罹患傳染病，且給予該抗原至該宿主激發免疫反應以對抗造成該傳染病的病原體。
  14. 如申請專利範圍第12項的用途，其中該給予是通過胃腸道外注射、肌肉內注射、腹腔內注射、靜脈注射、皮下注射、局部傳輸、透皮傳輸或皮內傳輸來進行。
  15. 如申請專利範圍第13項的用途，其中該給予是通過胃腸道外注射、肌肉內注射、腹腔內注射、靜脈注射、皮下注射、局部傳輸、透皮傳輸或皮內傳輸來進行。
  16. 如申請專利範圍第12項的用途，其中該宿主是人類。
  17. 如申請專利範圍第13項的用途，其中該宿主是人類。
  18. 如申請專利範圍第12項的用途，其中該宿主是非人類動物。
  19. 如申請專利範圍第13項的用途，其中該宿主是非人類動物。
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Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006131023A1 (en) * 2005-06-08 2006-12-14 Newbiomed Pika Pte Ltd Polyinosinic acid-polycytidylic acid-based adjuvant
US20070166239A1 (en) * 2006-01-13 2007-07-19 Haixiang Lin Mucosal immunogenic substances comprising a polyinosinic acid - polycytidilic acid based adjuvant
US20070166800A1 (en) * 2006-01-13 2007-07-19 Haixiang Lin Immunogenic substances comprising a polyinosinic acid-polycytidilic acid based adjuvant
JP2011525169A (ja) * 2008-02-15 2011-09-15 へミスフェリックス・バイオファーマ，インコーポレーテッド Ｔｏｌｌ様受容体３の選択的アゴニスト
US9303068B2 (en) 2012-11-30 2016-04-05 The Regents Of The University Of California D-amino acid derivative-modified peptidoglycan and methods of use thereof
RU2627447C2 (ru) * 2013-05-14 2017-08-08 ЗОИТИС СЕРВИСЕЗ ЭлЭлСи Новые вакцинные композиции, содержащие иммуностимулирующие олигонуклеотиды
US9580758B2 (en) 2013-11-12 2017-02-28 Luc Montagnier System and method for the detection and treatment of infection by a microbial agent associated with HIV infection
RU2678981C2 (ru) * 2014-12-23 2019-02-05 Йишенг Байофарма (Сингапур) Пте Лтд Композиция от бешенства, содержащая адъювант pika
WO2016176380A1 (en) * 2015-04-28 2016-11-03 The Procter & Gamble Company Compositions comprising whole, non-viable micrococcus for improving skin health
CN105396130A (zh) * 2015-11-10 2016-03-16 林海祥 皮氨钙佐剂及含有皮氨钙佐剂的疫苗
CA3005492C (en) * 2015-11-17 2023-01-10 Bioncotech Therapeutics Sl Novel pharmaceutical composition comprising particles comprising a complex of a double-stranded polyribonucleotide and a polyalkyleneimine
CN106075431A (zh) * 2016-03-23 2016-11-09 林海祥 皮氨钙联合佐剂及含有皮氨钙联合佐剂的疫苗
CN114632091A (zh) * 2016-04-01 2022-06-17 依生生物制药(新加坡)私人有限公司 用于治疗癌症的含有聚核苷酸的药物组合物
CN106075432A (zh) * 2016-04-27 2016-11-09 林海祥 皮卡钙联合佐剂及含有皮卡钙联合佐剂的疫苗
CN109125264B (zh) 2017-06-19 2020-10-30 林海祥 一种抗感染抗肿瘤的粘膜免疫制剂
KR20200047524A (ko) 2017-08-10 2020-05-07 이쉥 바이오파마(싱가포르)피티이 리미티드 B형 간염 바이러스 감염을 치료 및/또는 예방하기 위한 조성물 및 이의 용도
JP7366434B2 (ja) * 2018-06-29 2023-10-23 信福（北京）医▲薬▼科技有限公司 免疫応答を強化するための複合物
CN109078180B (zh) * 2018-06-29 2019-05-31 信福(北京)医药科技有限公司 用于增强免疫响应的复合物
CN109663126A (zh) * 2019-03-01 2019-04-23 龙阔（苏州）生物工程有限公司 一种疫苗佐剂及其应用及猪繁殖与呼吸综合征疫苗
AU2021278137A1 (en) * 2020-05-29 2023-01-05 Beijing Yisheng Biotechnology Co., Ltd. Pharmaceutical composition comprising polynucleotides and use thereof for prevention or treatment of COVID-19
US20230201340A1 (en) * 2020-05-29 2023-06-29 Children's Medical Center Corporation Adjuvants for severe acute respiratory syndrome-related coronavirus (sars-cov) vaccines
WO2024102079A1 (en) * 2022-11-09 2024-05-16 Zeno Therapeutics Pte Ltd Compositions comprising polyinosinic-polycytidylic acid, epstein-barr (ebv) virus-like particles and ebv-specific car-t cells for improving immune cell therapy

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1095951A (zh) * 1993-05-31 1994-12-07 林海祥 聚肌胞复合物免疫佐剂及含有该佐剂的疫苗

Family Cites Families (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3692899A (en) * 1969-12-17 1972-09-19 Us Health Education & Welfare Inhibition of transplanted tumor growth by polyinosinic-polycytidylic acid in mice
US3666646A (en) * 1970-05-15 1972-05-30 Merck & Co Inc Reduction of molecular weight in polynucleotides using ultrasonic radiation
US4124702A (en) * 1971-07-06 1978-11-07 Merck & Co., Inc. Polynucleotides active as inducers of interferon production in living animal cells
US3906092A (en) * 1971-11-26 1975-09-16 Merck & Co Inc Stimulation of antibody response
US4186194A (en) * 1973-10-23 1980-01-29 Agence Nationale De Valorisation De La Recherche (Anvar) Water soluble agents effective as immunological adjuvants for stimulating, in the host the immune response to various antigens and compositions, notably vaccines containing said water soluble agents
US3952097A (en) * 1974-09-27 1976-04-20 The United States Of America As Represented By The Department Of Health, Education And Welfare Nuclease-resistant hydrophilic complex of polyriboinosinic-polyribocytidylic acid
US4024241A (en) * 1974-09-27 1977-05-17 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Health, Education And Welfare Nuclease-resistant hydrophilic complex of polyriboinosinic-polyribocytidylic acid
FR2321896A1 (fr) * 1975-08-29 1977-03-25 Anvar Agents adjuvants immunologiques actifs en solution aqueuse
US4153684A (en) * 1976-03-10 1979-05-08 Agence Nationale De Valorisation De La Recherche (Anvar) Immunizing and anti-infectious adjuvant agents constituted by N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-glutamic acid derivatives
US4082735A (en) * 1976-04-26 1978-04-04 Syntex (U.S.A.) Inc. Novel immunological adjuvant compounds and methods of preparation thereof
US4082736A (en) * 1976-04-26 1978-04-04 Syntex (U.S.A.) Inc. Novel immunological adjuvant compounds and methods of preparation thereof
GB1563561A (en) * 1976-06-23 1980-03-26 Daiichi Seiyaku Co Muramyldipeptide derivatives and process for the preparation thereof
FR2368282A1 (fr) * 1976-10-22 1978-05-19 Anvar Adjuvant immunologique constitue par le p-amino-phenyl de n-acetyl-muramyl-l-alanyl-d-isoglutamine
US4140761A (en) * 1977-04-11 1979-02-20 The United States Of America As Represented By The Department Of Health, Education & Welfare Modification of hepatitis B virus infection in chronic carriers of hepatitis B surface antigen
JPS55111499A (en) * 1979-02-21 1980-08-28 Takeda Chem Ind Ltd Glucosamine derivative and its preparation
CA1185237A (en) * 1979-02-28 1985-04-09 Yuichi Yamamura 6-deoxyglucosamine-peptide derivatives, their production and use
NZ194880A (en) 1979-09-17 1983-07-15 Merck & Co Inc Interferon-inducing composition containing modified polyriboinosinic-polyribocytidylic acid
US4349538A (en) * 1979-12-07 1982-09-14 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Nuclease-resistant hydrophilic complex of polyriboinosinic-polyribocytidylic acid
FR2476488A2 (fr) 1980-02-25 1981-08-28 Government Us America Nouveau complexe hydrophile, resistant aux nucleases, d'acide polyriboinosinique-polyribocytidylique, son procede de preparation et son application comme inducteur d'interferon
JPS572220A (en) 1980-06-09 1982-01-07 Toray Ind Inc Production of interferon
US4389395A (en) * 1981-01-09 1983-06-21 Lerner A Martin Low molecular weight complex of polyriboinosinic-polyribocytidylic acid and method of inducing interferon
US4400375A (en) * 1981-11-23 1983-08-23 Eli Lilly And Company Tobramycin-double stranded RNA complex suitable for inducing interferon
DE3678308D1 (de) * 1985-02-07 1991-05-02 Takeda Chemical Industries Ltd Verfahren zur herstellung von mikrokapseln.
US4857315A (en) 1986-09-29 1989-08-15 Mount Sinai Hospital Corporation Compositions containing golgi alpha-mannosidase II inhibitors
JPH01186818A (ja) 1988-01-18 1989-07-26 Yamasa Shoyu Co Ltd ポリリボイノシン酸・ポリリボシチジル酸・ポリ−ｌ−リジン複合体製剤
US5230883A (en) * 1989-05-04 1993-07-27 Wisconsin Alumni Research Foundation Method for localization and treatment of tumors using polylysine complexes
ATE252894T1 (de) * 1995-01-05 2003-11-15 Univ Michigan Oberflächen-modifizierte nanopartikel und verfahren für ihre herstellung und verwendung
US6096291A (en) * 1996-12-27 2000-08-01 Biovector Therapeutics, S.A. Mucosal administration of substances to mammals
CA2203843C (en) * 1997-04-28 2013-07-23 Her Majesty The Queen, In Right Of Canada, As Represented By The Ministe R Of National Defence Liposome-encapsulated poly iclc
US6514948B1 (en) * 1999-07-02 2003-02-04 The Regents Of The University Of California Method for enhancing an immune response
JP4817625B2 (ja) 2003-08-11 2011-11-16 一般財団法人阪大微生物病研究会 粘膜免疫誘導アジュバントを含む新規ワクチン
CA2564525A1 (en) * 2004-04-28 2005-11-10 Paradigm Therapeutics Limited Ion channel
WO2006131023A1 (en) * 2005-06-08 2006-12-14 Newbiomed Pika Pte Ltd Polyinosinic acid-polycytidylic acid-based adjuvant
US20070166239A1 (en) * 2006-01-13 2007-07-19 Haixiang Lin Mucosal immunogenic substances comprising a polyinosinic acid - polycytidilic acid based adjuvant
US20070166800A1 (en) * 2006-01-13 2007-07-19 Haixiang Lin Immunogenic substances comprising a polyinosinic acid-polycytidilic acid based adjuvant

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1095951A (zh) * 1993-05-31 1994-12-07 林海祥 聚肌胞复合物免疫佐剂及含有该佐剂的疫苗

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Lin HX et al., A new immunostimulatory complex (PICKCa) in experimental rabies: antiviral and adjuvant effects. Arch Virol. 1993;131(3-4):307-19. *
宗建超等，"聚丙烯醯胺凝膠電泳法檢測聚肌胞卡鈣(PICKCa)及其原料多聚肌苷酸(PI)、多聚胞苷酸(PC)的分子量研究"，藥物分析雜誌，第13期第4卷第219-222頁，1993年 *

Also Published As

Publication number Publication date
US8303966B2 (en) 2012-11-06
WO2007081287A9 (en) 2007-12-21
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US20070166800A1 (en) 2007-07-19
BRPI0621181A2 (pt) 2011-11-22
AU2006335367A1 (en) 2007-07-19
ZA200806339B (en) 2010-03-31
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RU2008133217A (ru) 2010-02-20
NZ570379A (en) 2012-07-27
WO2007081287A1 (en) 2007-07-19
CN101166559A (zh) 2008-04-23
US20130115244A1 (en) 2013-05-09
AU2006335367B2 (en) 2012-08-30
IL192746A0 (en) 2009-02-11
KR20080091106A (ko) 2008-10-09

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