TWI421091B - 包含以聚肌苷酸-聚胞苷酸為主之佐劑的黏膜免疫物質 - Google Patents

Description

包含以聚肌苷酸-聚胞苷酸為主之佐劑的黏膜免疫物質 發明領域

本發明主要涉及免疫原組合物和其使用方法。本發明特別涉及一種免疫原組合物，其包含聚核苷酸佐劑以及一或多種抗原物質，用以促進宿主體內的疾病特異性粘膜免疫反應。

發明背景

免疫系統可以産生特異性和非特異性免疫。非特異性免疫包含多種細胞作用機制，例如巨噬細胞(macrophages)或粒細胞(granulocytes)的吞噬作用(phagocytosis)以吞噬外來顆粒或抗原，以及天然殺傷細胞(NK細胞)活性等。非特異性免疫力依賴具有較低進化優勢的免疫機制，且不會展現出獲得特異性和記憶的特性，該獲得性特性是特異性免疫反應的典型特點。特異性和非特異性免疫之間的關鍵性差異是以B和T細胞的特異性反應為基礎。這些細胞主要是在被特定抗原所活化後獲得他們的反應性，而且在未來暴露於該特定抗原時展現出免疫記憶的機制。因此接種疫苗(涉及免疫特異性和記憶)是保護機體以對抗有害病原體的有效機制。

一般而言，B和T淋巴細胞在他們的細胞表面上有針對特定抗原的特定受體，能産生特異性免疫。該特異性免疫系統會對各抗原以二種方式産生免疫反應：1)體液免疫，涉及刺激B細胞産生抗體或免疫球蛋白及輔助性T細胞(主要為Th2)，以及2)細胞免疫，一般涉及包括細胞毒性T淋巴細胞(CTLs)的T細胞，儘管其他細胞(例如抗原遞呈細胞以及Th1細胞)也參與CTL反應的産生。

免疫系統已發展出一種獨特且專門的能力(repertoire)以對抗感染。人類的免疫系統可概略細分為二個交互作用的次系統。系統性免疫系統包含淋巴結、骨髓和脾臟，用以守護內臟和組織，而粘膜免疫系統包含粘膜表面相關淋巴組織和外分泌腺，以提供防禦性障壁，以對抗免病原體經由呼吸、胃腸、感覺器官和泌尿生殖通道的上皮層進入體內。

系統性和粘膜免疫系統的免疫反應已演化成為具有特定功能，而且在對抗病原體的防禦機制上仍然頗有不同的系統。例如，粘膜免疫系統大致上的特徵在於存在有特定種類的抗體，也就是免疫球蛋白A(IgA)抗體，主要是分泌型免疫球蛋白IgA(分泌型IgA)，以保護粘膜表面。分泌型IgA抗體在粘膜處中和尚未穿越粘膜屏障的病原體。

一般而言，現今的免疫策略涉及通過肌肉內、皮下、腹腔內或皮內給予抗原，致使系統性免疫系統産生不同種類的抗體(例如免疫球蛋白G(IgG))，以在病原體進入體內之後中和病原體。通過注射給予的疫苗不引發實質的分泌型IgA反應。此外，系統性免疫反應不一定會抑制病原體通過粘膜表面進入體內。因此，僅僅誘導系統性免疫反應的接種疫苗策略會使得容易通過粘膜表面受到感染的個體只能在病原體進入體內循環系統後依靠體內免疫系統打擊它。

另一方面，粘膜給予能誘導粘膜免疫反應(局部，有時在給予位置遠處)和系統性免疫反應。此外，傳統注射免疫法已知具有許多缺點，許多個體有受感染和低耐受性的危險，而在注射位置發生硬化(組織硬化)、出血(流血)和/或壞死(局部組織死亡)等情形。

但是，當佐劑能夠促進系統性免疫反應時，仍無法斷定該佐劑也一定能夠促進粘膜免疫反應。一個典型的例子是氫氧化鋁，它可以在肌肉內、皮下、腹腔或皮內給予時促進物質的系統免疫原性，但當通過注射或粘膜途徑給予時無法有效促進粘膜免疫反應。

近年來已針對新穎佐劑(包括促進粘膜免疫反應的佐劑)進行許多深入的研究。利用分泌型IgA在粘膜屏障處的保護作用的研究努力包括口部給予以及將分泌型IgA單克隆抗體直接施加在呼吸道表面，以提供保護避免病原體進入。但是，業界仍然需要一種能夠在宿主體內促進有利的粘膜免疫反應的安全且有效的佐劑。

本發明提供具有改善有效性和安全性狀態的新的免疫原組合物，以及使用該組合物來促進粘膜免疫反應的方法。本發明免疫原組合物包含聚核苷酸佐劑和抗原。

文獻

相關參考資料列示於下：1.日本專利公開案第1093540A2號；2.美國專利第4,124,702號；3.美國專利第3,692,899號；4.美國專利第3,906,092號；5.美國專利第4,389,395號；6.美國專利第4,349,538號；7.美國專利第4,024,241號；8.美國專利第3,952,097號；9. Houston et al.,Infection and Immunity,14：318－9,1976C 10. Wright and Adler－Moore, Biochemical and Biophysical Research Communications,131：949－45,1985 11. Lin,et al.,A new immunostimulatory complex(PICKCa)in experimental rabies：antiviral and adjuvant effects, Arch Virol,131：307－19,1993 12. Chinese Patent 93105862.7 13. Gupta R.K.et al.,Adjuvants－a balance between toxicity and adjuvanticity,Vaccine,11：293－306,1993 14. Arnon,R.(Ed.)Synthetic Vaccines 1：83－92,CRC Press,Inc.,Boca Raton,Fla.,1987 15. Sela,M.,Science 166：1365－1374(1969)16.美國專利第6,008,200號；17. Ellouz et al.,Biochem.& Biophy.Res.Comm.,59：1317,1974 18.美國專利第4,094,971號；19.美國專利第4,101,536號；20.美國專利第4,153,684號；21.美國專利第4,235,771號；22.美國專利第4,323,559號；23.美國專利第4,327,085號；24.美國專利第4,185,089號；25.美國專利第4,082,736號；26.美國專利第4,369,178號；27.美國專利第4,314,998號；28.美國專利第4,082,735號；29.美國專利第4,186,194號；30.美國專利第6,468,558號；31. New Trends and Developments in Vaccines,edited by Voller et al.,University Park Press,Baltimore,Md.,USA,1978 32. Klein,J.,et al.,Immunology(2nd),Blackwell Science Inc.,Boston(1997)33. Gupa R.K.and Siber G.R.,Adjuvants for human vaccines－current status,problems and future prospects,Vaccine,13(14)：1263－1276,1995 34. Richard T Kenney et al.Meeting Report－2^nd meeting on novel adjuvants currently in/close to human clinical testing,Vaccine 20 2155－2163,2002 35. Laboratory Techniques in Rabies Edited by F X Meslin,M M Kaplan,H Koprowski 4^th ,1996,Edition ISBN 92 4 1544 1

發明概要

大致而言，本發明涉及免疫原組合物，其包含聚肌苷酸－聚胞苷酸、卡那黴素和鈣的複合佐劑，以及利用這些免疫原組合物來刺激疾病特異性粘膜免疫反應的方法。

因此，本發明提供一種免疫原組合物，包含：(a)聚核苷酸佐劑，該佐劑包含：聚核糖肌苷－聚核糖胞苷酸(PIC)、至少一種抗生素以及至少一種正價離子；以及(b)至少一抗原；其中該組合物被配製成供粘膜給予之用。

特別是，本發明涉及免疫原組合物的應用，該免疫原組合物包含作為佐劑能安全使用於人類或非人類動物的聚肌苷酸－聚胞苷酸、卡那黴素和鈣的複合物，當該佐劑與抗原性和/或免疫調節性物質組合給予時促進特異性粘膜免疫反應，且在某些應用中促進特異性粘膜和系統性免疫反應。

特別是，依據本發明的免疫原組合物可包含聚核苷酸佐劑組合物，該聚核苷酸佐劑組合物中的分子在分子量上是異質的，其中該分子量為至少66,000道爾頓。

圖式簡單說明

第1圖－以含有PIKA和/或滅活型完全SARS抗原的疫苗進行免疫之後，利用ELISA法檢測肺臟上清液的特異性－分泌型IgA效價；第2圖－以含有PIKA和/或滅活型完全SARS抗原的疫苗進行免疫之後，利用ELISA法檢測血清的特異性IgA效價；第3圖－以含有PIKA和/或滅活型完全SARS抗原的疫苗進行免疫之後，利用ELISA法檢測血清的特異性IgG效價；第4圖－以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原(inactivated split influenza antigen)的疫苗進行免疫之後，利用ELISA法檢測肺臟上清液的特異性分泌型IgA效價；第5圖－以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗進行免疫之後，利用ELISA法檢測腸上清液特異性分泌型IgA效價；第6圖－以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗進行免疫化之後，利用ELISA法檢測血清特異性IgG效價；第7圖－以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗進行免疫之後，利用ELISA法檢測血清特異性IgA效價；第8圖－以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗進行免疫之後，利用ELISPOT法來檢測産生IL－2的小鼠脾細胞；第9圖－以含有PIKA或Al(OH)₃ 和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗進行免疫之後，利用ELISA法檢測肺臟上清液(稀釋32倍)的特異性分泌型IgA；第10圖－以含有PIKA或Al(OH)₃ 和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗進行免疫之後，利用ELISA法檢測腸上清液內(稀釋32倍)的特異性分泌型IgA；第11圖－以含有PIKA或鋁佐劑(alum)和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗進行免疫之後，利用ELISPOT法來檢測産生IFN－γ的小鼠脾細胞；第12圖－以含有PIKA或鋁佐劑(alum)和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗進行免疫之後，利用ELISPOT法來檢測産生IL－2的小鼠脾細胞。

較佳實施例之詳細說明

本發明可藉由後續對於本發明某些實施方案以及其中所包括的實施例的詳細內容而更容易被瞭解。

本申請在整篇內容中參照的公開文獻，這些公開文獻的內容被併入本申請中作為參考，以充分地敍述本發明所屬技術領域的水準。

在進一步敍述本發明之前，應明瞭本發明不會被局限於所述特定實施方案中，因為這些實施方案必然是多樣的。亦應明瞭本說明書中所使用的術語僅是為了闡述特定實施方案，而非作為限制，因為本發明的範圍將會被界定在所附權利要求中。

除非另行界定，本說明書中所使用的所有技術和科學術語均和本案所屬技術領域中技術人員所普遍明瞭的意義相同。現在就實施本發明的優選方法和材料加以敍述，但是和本說明書中所述方法和材料類似或等效的任何方法和材料均可用以實施或測試本發明。本說明書中所提到的所有公開文獻均被並入于此作為參考，以揭示並說明所述公開文獻中的方法及/或材料。

應注意，如本案說明書和權利要求中所使用的用語，除非前後文意指明另有其他意義，否則單數形式用語“a”、“and”和“the”包括複數形式用語。因此，例如提及“免疫原組合物”即包括多種這樣的組合物，提及“抗原”即包括提及一或多個抗原以及熟習於本領域的技術人員所知悉的等價物等等。此外應注意，權利要求可被撰寫成排除任何可選擇性成分。因此，此說明是要作為使用例如“僅有(solely)”、“只有(only)”等排除性用語在權利要求構成要件的相關敍述內容時或是使用“負向”限制(“negative”limitation)時的在先引用基礎(antecedent basis)。

名詞定義

在陳述本發明的詳細內容之前，應當瞭解被使用於本說明書中的數個術語。

使用於此處的術語“佐劑”是指增加或改變宿主對於抗原化合物的免疫反應的任何物質或物質混合物。特定地說：1.“PICKCa”此術語是一般性地指稱由Poly I：C、卡那黴素和鈣所構成的組合物，而和組合物的特定物理和免疫原性無關。

2.“Av－PICKCa”是指PICKCa在商業上被使用作為抗病毒藥劑的形式。

3.“PIKA”是指本發明組合物，包含Poly I：C、抗生素(例如卡那黴素)以及正價離子(例如鈣)，其中所述PIKA的特徵在於物理特性(例如分子量、尺寸等)，以使得PIKA在給予後可展現出佐劑的特性，且具有相較於以PICKCa為例更低的副作用(例如毒性降低)以及相較於以AV－PICKCa為例更高的效力強度(例如刺激加強的免疫反應)。

“Poly I：C”或“PIC”等術語是指含有聚核糖肌苷和聚核糖胞苷核酸的組合物，亦分別稱作為聚肌苷酸－聚胞苷酸。

“含PIC的分子”或“含PIC的化合物”是非限制性地指稱PIC，它可選擇性地通過複合或組合以上所述含PIC的分子的組合物中的抗生素(例如卡那黴素)以及正價離子(例如鈣)中的至少一者或二者。在一具體例中，在複合物中該含PIC的分子不包含聚－L－賴氨酸或其衍生物。

在本發明佐劑組合物的前後文中所使用的“異質”此術語是指該組合物的成份(例如含PIC的分子)在分子量、尺寸或此二者的物理特性上不是均一的。當組合物被描述成對於給定物理特性呈異質，且進一步通過該物理特性的數值範圍來描述時，即是將該組合物敍述成實質上包含以具有分佈在所述範圍內的物理特性為特徵的分子。雖然該組合物可能不會含有代表所述範圍的下及上限內的每一物理特性數值的分子，但該組合物通常會包含至少一個具有該上限數值或下限數值物理特性的分子。在某些具體例中，該組合物可包含位於用以描述該組合物的所述物理特性範圍以外的分子。這些在組合物中位於所定範圍以外的分子不會實質影響該組合物的基本和新穎特性。

“粘膜”或“粘膜表面”等術語是指和外在環境直接或間接接觸的表面、通道或腔穴，包括呼吸道、消化道、感覺和泌尿生殖系統的表面。"胃腸道的粘膜表面"此術語是指腸(包括小腸和大腸)、直腸、胃壁內襯層(stomach(gastric)lining)、口腔等的粘膜。

“被配製成供粘膜給予使用”此術語是指適合給予粘膜(例如給予粘膜表面或粘膜)因而兼容於粘膜的組合物。在一些實施方案中，該組合物被配製成通過直腸、陰道、鼻、口、眼(opthamalic)以外的途徑給予粘膜(例如該組合物被配製成通過肺部給予而給予肺組織)。

“個體”此術語在此和“宿主”、“主體”和“動物”互換使用，包括人類及所有畜養(如家畜和寵物)和野生的動物及禽鳥，其非限制性地包括牛、馬、乳牛、豬、綿羊、山羊、狗、貓、兔、鹿、貂、雞、鴨、鵝、火雞、鬥雞等。

“抗體”此術語包括多克隆及單克隆抗體以及這些抗體的抗原化合物結合片段，包括Fab、F(ab’)2、Fd、Fv片段，以及這些抗體和片段的單鏈衍生物。此外，“抗體”此術語包括天然發生的抗體以及非天然發生的抗體，包括例如嵌合型(chimeric)、雙功能型(bifunctional)和人源化(humanized)抗體，以及相關的合成異構形式(isoforms)。“抗體”此術語可和“免疫球蛋白”互換使用。

如本說明書中所使用，“抗原化合物”此術語是指可在適當情形下被免疫系統所辨識(例如結合至抗體或被加工，以誘導細胞免疫反應)的任何物質。

“抗原”是指一種物質，包括呈現疫苗形式的組合物，其中該疫苗本身包含抗原化合物，且可以包含或可以不包含除了PIKA以外的佐劑，當通過適當途徑(例如胃腸道外(parenterally))給予時，該抗原會引起例如形成抗體等特異性免疫反應，該抗體包括特定地結合至該抗原的抗體。抗原的兩個特性在於它們的免疫原性以及它們的抗原性，免疫原性也就是它們在活體內引起特異性免疫反應的能力，抗原性也就是它們被抗原誘導産生的抗體選擇性辨識的能力。

如本說明書中所使用，“抗原”包括但不限於細胞、細胞提取物、蛋白質、脂蛋白、糖蛋白、核蛋白、多肽、肽、多糖、多糖結合物、多糖的肽類比體、脂肪、糖脂質、碳水化合物、病毒、病毒提取物、細菌、細菌提取物、真菌、真菌提取物、多細胞生物例如寄生蟲以及過敏原。抗原可為外源性(例如來自於被給予該抗原的個體以外的其他來源，例如來自於不同的物種)或是內源性(例如源自於宿主體內，例如身體的疾病因子、癌症抗原、病毒感染細胞所産生的抗原等等)。抗原可以是天然型(例如天然産生的)、合成型或重組型。抗原包含粗提取物、完整細胞和純化抗原，其中“純化”此術語是指該抗原呈現相較於抗原通常存在的環境和/或相較於粗提取物(例如抗原的培養形式)更為豐富的形式。

本說明書中所使用的“免疫原組合物”此術語是指二或更多種物質(例如抗原和佐劑)的組合，當將這些物質給予宿主時會共同激發免疫反應。

“多肽”、“肽”、“寡肽”和“蛋白質”等術語在本說明書中可互換使用，它們的意思是任何長度氨基酸聚合物形式，該聚合物形式可包括編碼和非編碼性氨基酸、經化學或生化修飾或衍生的氨基酸以及具有修飾肽主鏈的多肽。

“抗原化合物有效量”是指抗原化合物的用量將會致使個體産生針對該抗原化合物的特異性免疫反應，該抗原化合物可選擇性地和佐劑組合。

“免疫反應”此術語是指脊椎動物個體的免疫系統對於抗原化合物或免疫原化合物的任何反應。典型的免疫反應包括但不限於局部及系統性細胞及體液免疫反應，例如包括抗原特異性誘導的CD8＋CTLs在內的細胞毒性T淋巴細胞(CTL)反應、包括T－細胞增殖反應和細胞因子釋出作用在內的輔助T－細胞反應，以及包括抗體反應在內的B－細胞免疫反應。

本說明書所使用的“引發免疫反應”(“eliciting an immune response”)此術語是一般性地包含免疫反應的誘導及/或增強induction and/or potentiation)。

“誘導免疫反應”(“inducing an immune response”)此術語是指刺激、起始或誘導免疫反應。

“增強免疫反應”(“potentiating an immune response”)是指既存的免疫反應被改善、助長、補充、擴增、加強(enhanced)、增加或延長。

“加強免疫反應”(“enhanced immune response”)此表達方式或類似表達方式的意思是，相較於先前的免疫反應狀態，免疫反應被提高、改善或加強，而對宿主有利，所述先前的免疫反應狀態是例如給予本發明的免疫原組合物之前的免疫反應狀態。

“粘膜免疫反應”和“粘膜免疫”等術語在本項技術中是為人所熟知的術語，這些術語是指該免疫反應至少部分的特徵在於在胃腸道組織(包括直腸組織)、陰道組織和呼吸道組織等粘膜組織中産生分泌型IgA和/或刺激粘膜CTL反應。

“體液免疫(humoral immunity)”和“體液免疫反應(humoral immune response)”等術語是指因應抗原刺激而産生抗體分子的免疫形式。

“細胞免疫(cell－mediated immunity)”和“細胞免疫反應(cell－mediated immune response)”等術語是指淋巴細胞所提供的免疫防禦力，例如T淋巴細胞在靠近受害細胞時所提供的防禦力。細胞免疫反應通常包括淋巴細胞的增殖。當測量到“淋巴細胞的增殖”時，會測量到淋巴細胞對特定抗原反應的增殖能力。淋巴細胞增殖是指B細胞、T－輔助細胞或CTL的細胞增殖。

“免疫原量”此術語是指，相較於沒有聚核苷酸佐劑時抗原所引發的免疫反應，加入本發明的免疫原組合物共同給予時足以刺激免疫反應抗原化合物用量。

“免疫增強量(immunopotentiating amount)”此術語是指，相較於沒有聚核苷酸佐劑時所觀察到的抗體效價及/或細胞免疫反應，當佐劑和本發明組合物內的抗原化合物共同給予時，致使抗體效價及/或細胞免疫反應增加所需的佐劑量。

本說明書中所使用的“治療”此術語是一般性地指稱獲得所需藥理和/或生理效應。該效應從完全地和/或部分地防止疾病或其症狀的角度來看可以是屬於預防性質的，和/或該效應從完全地和/或部分地穩定或治癒疾病和/或疾病所導致的不利影響來看可以是屬於治療性質的。本說明書中所使用的“治療”此術語涵蓋對於個體(特別是哺乳動物個體，更特別是人類)的疾病的任何處理，且包括：(a)預防可能有罹病傾向但尚未診斷出罹病的個體發生疾病或症狀；(b)遏制疾病症狀，例如阻止該疾病症狀的發展；或是舒緩疾病症狀，例如致使該疾病或症狀消退；(c)降低疾病傳染物質所産生的産物水平(例如毒素、抗原等)；(d)降低對於疾病傳染物質的不利生理反應(例如發燒、組織水腫等)。

如本說明書中所使用，“混合”此術語包括用以組合組合物的成份的任何方法；這些方法包括但不限於摻合、分配、溶解、乳化、凝集、懸浮或將組合物的組成份合理地(physically)加以組合的其他方法。

化合物的“藥學上可接受的鹽”意指該鹽是藥用上可接受的，且擁有母化合物的所需藥理活性。這些鹽包括：(1)酸加成鹽，例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等無機酸形成的鹽；或是和例如乙酸、丙酸、已酸、環戊丙酸、羥乙酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、蘋果酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、3－(4－羥基苯酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2－乙二磺酸、2－羥基乙磺酸、苯磺酸、4－氯苯磺酸、2－萘磺酸、4－甲苯磺酸、樟腦磺酸、葡庚糖酸、4,4'－亞甲基雙－(3－羥基－2－烯－1－羧酸)、3－苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乳酸(tertiary butylacetic acid)、月桂基硫酸、葡萄糖酸、谷氨酸、羥基萘甲酸、水楊酸、硬脂酸、粘康酸等有機酸等共同形成鹽；或是(2)當母化合物中所存在的酸性質子被如鹼金屬離子、鹼土族金屬離子或鋁離子等金屬離子所置換，或是配位有如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、胺基丁三醇(tromethamine)、葡甲胺(N－methylglucamine)等有機鹼時，所形成的鹽。

本說明書中所使用的“單位劑型”此術語是指在實體上呈分離的單位，適合作為使用於人類和動物個體的單位劑量，各個單位含有預定量的本發明化合物，該預定量經計算後呈現足以和藥學/生理上可接受的稀釋劑、載劑或載體共同産生所需效應的用量。

本發明的例示性實施方案

本發明關於用在人類、非人類動物或細胞培養物中誘導和/或加強免疫反應的免疫原組合物和方法，該免疫反應可為粘膜和/或系統性、體液及/或細胞免疫反應。一般而言，依據本發明的免疫原組合物包含抗原(“抗原組合物”)和佐劑。該佐劑的存在會加強或改變對於該抗原的免疫反應。該佐劑可通過影響免疫球蛋白和/或趨化因子和/或細胞因子的亞型(異構型)的産生而改變免疫反應的品質。結果使得先天性免疫力、體液及/或細胞免疫反應因該佐劑的存在而更加有效。

一個特別的優點在於PIKA佐劑和抗原物質相組合可有效地引起特異體液免疫反應，從而加強保護性免疫。

另一個重要優點在於PIKA佐劑和抗原物質相組合可引起特異細胞免疫反應，而該特異細胞免疫反應是治療用疫苗在限制和治療細胞內病毒、細菌和寄生蟲感染時所需要的。

因此，本發明包括組合物，該組合物具有特殊的産物特性，使組合物特別適合使用作為疫苗，以給予動物及/或人類，以滿足對引發有益免疫反應的安全佐劑的需求。

因此，本發明提供可安全地使用於人類和動物的佐劑和免疫原組合物。

因此，本發明提供免疫原組合物，其包含：(a)聚核苷酸佐劑，該佐劑包含聚核糖肌苷－聚核糖胞苷酸(PIC)、至少一種抗生素以及至少一種正價離子；(b)至少一種抗原；其中該組合物被配製成供粘膜給予使用。

特別是，依據本發明的免疫原組合物可包含聚核苷酸佐劑組合物，該組合物中的分子在分子量上是異質的，其中該分子量為至少66,000道爾頓。

具體上說，本發明提供PIKA佐劑組合物，其包含聚核苷酸、抗生素以及正價離子，其中該聚核苷酸可為聚核糖肌苷－聚核糖胞苷酸(PIC)；該抗生素可為卡那黴素，以及該離子可為鈣。

在一個特別相關方面，本發明提供用以加強抗原化合物的抗原性的免疫原組合物，其包含可引發抗原特異性細胞免疫反應的聚核苷酸佐劑組合物。

在一個特別相關方面，本發明提供用以加強抗原化合物的抗原性的免疫原組合物，其包含可引發抗原特異性體液免疫反應的聚核苷酸佐劑組合物。

在一個特別相關方面，本發明提供用以增進抗原化合物的抗原性的免疫原組合物，其包含可引發細胞和體液結合的抗原特異性免疫反應的聚核苷酸佐劑組合物。

在一個特別相關方面，本發明提供佐劑組合物或含有佐劑組合物的免疫原組合物，其中該佐劑組合物或免疫原組合物被冷凍乾燥。

在一個特別相關方面，本發明提供聚核苷酸佐劑組合物在製備用以加強宿主免疫原反應的藥劑上的用途。

聚核苷酸佐劑

本發明免疫原組合物具有含PIC的聚核苷酸佐劑(例如PIKA組合物)通常包含聚核糖肌苷酸、聚核糖胞苷酸、抗生素(例如卡那黴素)，以及二價離子(例如鈣)。請明瞭，本說明書以PIKA作為這種含PIC的佐劑的範例。

相關含PIC的佐劑可利用在本領域中可得的方法來製造。含PIC的佐劑組合物可通過任何適當方法所製造。例如，聚核苷酸佐劑組合物可通過在一個具有pH6至pH8的pH值的氯化鈉/磷酸鈉緩衝液內，將聚肌苷酸、聚胞苷酸、抗生素和正價離子來源加以混合而製成。聚肌苷酸和聚胞苷酸的濃度通常為0.1至10 mg/ml、0.5至5 mg/ml或是0.5 to 2.5 mg/ml。增色值(hyperchromicity value)應高於10%、高於15%、高於20%或高於50%。PIC的製備以及和抗生素(如卡那黴素)和正價離子(如鈣)的組合通常是在符合于國際優良方法規範(Good Manufacturing Process)的品質標準下進行。

在本發明的某些實施方案中，該佐劑的抗生素組份是卡那黴素。當該抗生素是卡那黴素時，在一些實施方案中，聚核苷酸佐劑組合物內的卡那黴素可和一或多種抗生素共同使用或被一或多種抗生素所取代，這些抗生素選自於包括妥布拉黴素(tobramycin)、蒽環類抗生素(anthracyclines)、硫酸丁酰苷菌素(butirosin sulfate)、慶大黴素、潮黴素、艾米康絲菌素(amikacin)、雙去氧卡那黴素、暗黴素、美它酰胺(metrzamide)、新黴素、嘌呤黴素、鏈黴素和鏈脲黴素所構成的群組中。本發明聚核苷酸佐劑組合物內的抗生素(例如卡那黴素等)的濃度通常為約10單位/ml至100,000單位/ml，約100單位/ml至10,000單位/ml，或約500單位/ml至5,000單位/ml。

在本發明的某些實施方案中，該聚核苷酸佐劑組合物進一步包含正價離子(陽離子)，通常是二價陽離子，且通常是一個鹼金屬的陽離子。在本發明的組合物內，該正價離子一般被用作為正價離子的來源，例如鹽或複合物，例如有機或無機鹽或複合物，且通常是無機鹽或有機複合物。典型的正價離子包括但不必然限於鈣、鎘、鋰、鎂、鈰、銫、鉻、鈷、氘、鎵、碘、鐵或鋅。

該正價離子可以呈任何適當的鹽或有機複合物的形式，包括但不必然限於氯化物、氟化物、氫氧化物、磷酸鹽或硫酸鹽。例如，當該正價離子是鈣時，則該離子可呈碳酸鈣、氯化鈣、氟化鈣、氫氧化鈣、磷酸鈣或硫酸鈣的形式。

本發明的組合物內可配有正價離子(例如鈣)，該正價離子的濃度位於約10μmol至10 mmol/ml的範圍內，通常為約50μmol至5 mmol/ml，且更常為約100μmol至1 mmol/ml。本說明書中所使用的“μmol”此術語意指微摩爾。

當本發明佐劑組合物中的正價離子是鈣時，則它可和其他正價離子相組合或被其他正價離子所取代，這些正價離子包括鎘、鋰、鎂、鈰、銫、鉻、鈷、氘、鎵、碘、鐵或鋅，其中這些離子可呈無機鹽或有機複合物的形式。

所得的組合物是含PIC的佐劑，其進一步含有抗生素和正價離子。在特定實施方案中，當該抗生素是卡那黴素及該正價離子是鈣時，該産品可稱為PICKCa。在相關實施方案中，PICKCa組合物可含有無不同物理特性限制的分子。

PIKA佐劑組合物

在特定的實施方案中，聚核苷酸佐劑是PIKA。PIKA可通過多種方式來制得，以從PICKCa來制得特別有利。PIKA可通過涉及分離和/或濃縮具有所限定分子大小和/或分子量的分子的額外方法，而從PICKCa制得。利用過濾、層析、熱處理、離心分離、電泳和類似方法來分離和濃縮具有特定特性的聚核苷酸分子均為標準方法，且為本領域技術人員所知悉。

該免疫原組合物可被製備成為乾燥粉末、液態溶液、懸浮液或乳劑。所需免疫原組合物配方的製備被一般性地敍述在Vaccine 4^th Edition by Stanley A Plotkin et al.,W.B.Saunders Company；4th edition 2003。適當的配方亦被敍述在例如A.Gennaro(2000)“Remington：The Science and Practice of Pharmacy,”20^th edition,Lippincott,Williams,& Wilkins；Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems(1999)H.C.Ansel et al.,eds.,7^th ed.,Lippincott,Williams,& Wilkins；以及Handbook of Pharmaceutical Excipients(2000)A.H.Kibbe et al.,eds.,3^rd ed.Amer.Pharmaceutical Assoc.；Methods in Molecular Medicine,Vol.87：Vaccine Protocols,2nd edition(2003),Humana Press；Mucosal Vaccines(1996),Kiyono et al.,eds.,Academic Press；以及Vaccine Adjuvants：Preparation Methods and Research Protocols(2000)D.T.O'Hagan,Humana Press。

在特別相關的實施方案中，本發明的特點是被通稱為PIKA的佐劑，其包含聚核糖肌苷－聚核糖胞苷酸(PIC)、抗生素(例如卡那黴素)以及正價離子(例如鈣離子)，其中該組合物含有在分子量上為異質的佐劑分子，該分子的分子量為約66,000至1,200,000道爾頓。也就是說，該佐劑組合物包含重量分佈於約66,000至1,200,000道爾頓的範圍內的分子。

在相關實施方案中，該組合物中的PIKA聚核苷酸佐劑組合物分子是異質的，也就是說這些佐劑分子的重量分佈在某分子量範圍內，其中該分子量為約300,000至1,200,000道爾頓，或是約66,000至660,000道爾頓，或是約300,000至660,000道爾頓，或是約300,000至2,000,000道爾頓，或是約66,000至約100,000道爾頓，100,000至200,000道爾頓，或是約300,000至約4,000,000道爾頓，或是約500,000至1,000,000道爾頓，或是約1,000,000至1,500,000道爾頓，或是約1,500,000至2,000,000道爾頓，或是約2,000,000至2,500,000道爾頓，或是約2,500,000至3,000,000道爾頓，或是約3,000,000至3,500,000道爾頓，或是約3,500,000至4,000,000道爾頓，或是約4,000,000至4,500,000道爾頓，或是約4,500,000至5,000,000道爾頓。

在相關實施方案中，該組合物中的PIKA聚核苷酸佐劑組合物分子具有平均分子量，該平均分子量等於或高於66,000道爾頓，或是等於或高於150,000道爾頓，或是等於或高於250,000道爾頓，或是等於或高於350,000道爾頓，或是等於或高於500,000道爾頓，或是等於或高於650,000道爾頓，或是等於或高於750,000道爾頓，或是等於或高於1,000,000道爾頓，或是等於或高於1,200,000道爾頓，或是等於或高於1,500,000道爾頓，或是等於或高於2,000,000道爾頓。

在特別相關的實施方案中，本發明的特點是被通稱為PIKA的佐劑，其包含聚核糖肌苷－聚核糖胞苷酸(PIC)、抗生素以及正價離子，其中該組合物含有在分子尺寸上呈異質的佐劑分子，也就是說這些佐劑分子的尺寸分佈在某分子尺寸範圍內，這些佐劑分子的沈降係數單位(Svedbergs)為約6.43S至24.03S。

在相關實施方案中，該組合物中的PIKA聚核苷酸佐劑組合物分子是異質的，也就是說這些佐劑分子的尺寸分佈在某分子尺寸範圍內，其中該分子尺寸為約12.8S至24.03S，或是約3至12S，或是約6.43至18.31S，或是約12.8至18.31S，或是約12.8S至30.31S，或是約12.8S至41.54S，或是約13.5S至18.31S，或是約13.5S至24.03S，或是約16.14至22.12S，或是約22.12S至26.6S，或是約26.6S至30.31S，或是約30.31S至33.55S，或是約33.55S至36.45S，或是約36.45S至39.1S，或是約39.1S至41.54S，或是約41.54S至43.83S，或是約43.83S至45.95S。

在其他相關實施方案中，該聚PIKA核苷酸佐劑組合物具有一平均沈降係數單位(Svedbergs)，該平均沈降係數高於9，或是高於12，或是高於13.5，或是高於15，或是高於16，或是高於17，或是高於18，或是高於19，或是高於20，或是高於21，或是高於22，或是高於25，或是高於30。

免疫原性質

包括有PIKA和抗原的免疫原組合物通常能夠以至少二種方式來誘導抗原特異性免疫反應：i)體液免疫反應，涉及刺激B細胞産生抗體或免疫球蛋白(其他細胞亦涉及産生抗體反應，例如抗原遞呈細胞(包括巨噬細胞及輔助T細胞(Th1和Th2))，以及ii)細胞免疫反應，一般涉及T細胞、包括細胞毒T淋巴細胞和其他涉及細胞毒T淋巴細胞反應産生的細胞，例如Th1和/或Th2細胞以及抗原遞呈細胞。

此外，該聚核苷酸佐劑組合物可通過影響所産生的免疫球蛋白亞型(異構型)以及它們的親和力，來改變免疫反應的性質。

因此，本發明免疫原組合物所誘導的免疫原反應的程度和性質可通過測量由免疫系統的細胞所産生的細胞因子、趨化因子和抗體等分子的存在而進行評估。

本發明提供包含PIKA佐劑的新穎免疫原物質，該免疫原物質通過誘導粘膜免疫反應來促進宿主體內免疫反應的整體水平。在某些實施方案中，本發明的免疫原組合物誘導粘膜免疫反應並加強免疫的系統水平。誘導粘膜免疫反應以及加強系統性免疫對於治療通過粘膜表面進入體內的病原性有機體所起的傳染病是非常重要的。

本說明書所提供的實施例顯示當經腹腔注射含有PIKA和SARS抗原的免疫原組合物時會誘導系統性免疫反應，其中特異性IgA和特異性IgG在血液中的表達量是系統性免疫活性的測量值。但是，當經腹腔注射含有PIKA和SARS抗原的相同免疫原組合物時沒有誘導粘膜免疫反應，其中特異性分泌型IgA的表達量是粘膜免疫活性的測量值。

令人意外地，從特異性分泌型IgA在粘膜表面的表達顯示，當經粘膜給予含有PIKA和SARS抗原的相同免疫原組合物時可以誘導粘膜免疫反應。

實施例1顯示存在於經過腹腔注射給予的免疫原組合物中的PIKA佐劑不會誘導加強的特異性分泌型IgA在粘膜內的表達。但是，存在於通過粘膜給予的免疫原組合物中的PIKA佐劑能以劑量依賴形式誘導特異性分泌型IgA在粘膜內的表達(表A)。

存在於通過腹腔注射給予的免疫原組合物中的PIKA佐劑會以劑量依賴形式增進IgA在血液內的存在量。此外，存在於通過粘膜給予的免疫原組合物中的PIKA佐劑也會以劑量依賴形式增進特異性IgA在血液內的水平(表B)。

另外，存在於通過腹腔注射給予的免疫原組合物中的PIKA佐劑會以劑量依賴形式增進IgG在血液內的存在量。存在於通過粘膜給予的免疫原組合物中的PIKA佐劑也會以劑量依賴形式增進特異性IgG在血液內的水平(表C)。

這些實施例的結果概要地顯示在圖1至3中。

通過粘膜傳輸PIKA和SARS抗原的疫苗組合物在血液中所誘導産生的特異性IgG比腹腔給藥所觀察到的水平高70%(表B)。因此存在於通過粘膜給予的免疫原物質中的PIKA佐劑具有令人意想不到的其他好處，也就是在粘膜和系統性免疫次系統中都能夠誘導免疫反應。

實施例2顯示PIKA的存在誘導粘膜和系統性免疫反應。此外，意外地發現通過粘膜給予含有PIKA的免疫原組合物能夠在遠端粘膜位置誘導粘膜免疫反應。此外，意外地發現通過粘膜給予含有PIKA的免疫原組合物能夠誘導T細胞免疫反應。

實施例2中所使用的流感抗原是來自於Sanofi Pasteur藥廠且經過許可的人用流感疫苗VAXIGRIP，含有H1N1、H3N2病毒株和b/Shanghai5/361/2002病毒株。

通過皮下注射單獨給予流感抗原以及給予含有流感抗原和PIKA的組合物能誘導強烈的特異性系統體液免疫反應，但在肺臟和腸的粘膜表面所測得的分泌型IgA産生量顯示其不能誘導顯著的特異性粘膜免疫反應。

在肺臟和腸的粘膜表面所測得的分泌型IgA産生量顯示，通過鼻滴劑單獨給予流感抗原以及給予流感抗原結合鋁佐劑(一種經過許可的疫苗抗原)也不能誘導顯著的特異性粘膜免疫反應(參見表E和F、第4和5圖)。

相反地，測量分泌型IgA産生量顯示存在於含有流感抗原的免疫原組合物中的PIKA能在肺粘膜表面誘導超乎預期地強烈的特異性粘膜位置(表E和第4圖)。

此外，本案發明人觀察到分泌型IgA的存在顯示遠端腸粘膜位置也發生強烈的特異性粘膜免疫反應(表F和第5圖)。

此外，給予含有PIKA和流感抗原的免疫原組合物能誘導強烈的特異性系統反應，包括測量血清中的特異性IgA和特異性IgG所顯示的體液免疫反應(參見表G和H、第6和7圖)以及測量脾細胞所産生的I1－2所顯示的T細胞免疫反應(表I和第8圖)。

實施例3進一步顯示PIKA的存在不但加強了粘膜免疫反應，更特異性地增強了細胞免疫反應。相較之下，在相同的實驗條件下使用鋁佐劑不會加強粘膜免疫活性和細胞免疫反應的程度。

其他特徵

在另一個實施方案中，本發明的免疫原組合物進一步通過PIKA佐劑和抗原的相對存在量來界定，其中該存在量是通過數量、濃度、體積、分子數目或其他被認可的度量中的一個或多個進行測量。

在相關實施方案中，本發明的免疫原組合物包含聚核苷酸佐劑組合物和抗原，其中佐劑和抗原的存在量是通過分子的重量或數目來界定，而呈現下列比例：低於1比1,000、低於1比900、低於1比800、低於1比700、低於1比500、低於1比400、低於1比300、低於1比200、低於1比100、低於1比50、低於1比10、低於1比5、低於1比2、約1比1、高於2比1、高於5比1、高於10比1、高於50比1、高於100比1、高於200比1、高於300比1、高於400比1、高於500比1、高於600比1、高於700比1、高於800比1、高於900比1、高於1,000比1。

在另一個相關實施方案中，本發明的免疫原組合物是通過劑量來界定，該劑量是指欲給予以便誘導最佳免疫反應的免疫原組合物用量，或是另外的給予劑量範圍，其涵蓋用以引起免疫反應所需要的最低劑量，至過量即會潛在性地誘導不良副作用因而在醫學上無法證明可增加有利反應的最高劑量。

在某些特別相關的實施方案中，該免疫原組合物包含聚核苷酸佐劑組合物和抗原，其中抗原的單位劑量是以數量來計算，該數量為高於0.1μg、高於0.5μg、高於0.001 mg、高於0.005 mg、高於0.01 mg、高於0.025 mg、高於0.05 mg、高於0.075 mg、高於0.1 mg、高於0.25 mg、高於0.5 mg、高於1.2 mg、高於1.4 mg、高於1.6 mg、高於1.8 mg、高於2.0 mg、高於2.5 mg、高於3 mg、高於3.5 mg、高於4 mg、高於5 mg、高於6 mg、高於7 mg、高於8 mg、高於9 mg、高於10 mg、高於15 mg、高於20 mg、高於25 mg或是高於50 mg。

抗原的最佳量和抗原相對於PIKA佐劑的最佳比例可通過觀測宿主體內的抗體效價和其他免疫原反應等標準研究方法來確認。

抗原

在特別相關的實施方案中，本發明提供一種免疫原組合物，包含聚核苷酸佐劑組合物以及抗原或疫苗，其中該抗原的來源為人類抗原、非人類動物抗原、植物抗原、源自於病毒、細菌(包括分枝桿菌(Mycobacterium))、真菌或寄生蟲中的任一種的感染物的一種或多種抗原、癌腫抗原、過敏性成分以及例如會導致自體免疫疾病的其他抗原。

在某些實施方案中，該抗原可從粗制或純化的天然來源衍生而來，並以它的原始存活形式來使用，或是於被殺死、滅活、截短、減毒或轉形成為不可回復形式或是去毒或突變成為無毒性形式或被過濾或純化後使用。

在某些實施方案中，該抗原是被分離的微生物抗原，例如病毒抗原、細菌抗原、真菌抗原、過敏性成分抗原、癌腫抗原或自體免疫抗原。在其他實施方案中，抗原是完整的滅活抗原。使完整抗原滅活的方法為業界所熟知；任何習用方法均可使用以使抗原滅活，且可針對相關抗原種類而適當地選用。這些使抗原滅活的方法包括例如利用光反應性化合物；氧化劑；輻射線(例如UV射線；γ－射線)；核黃素和UV射線的組合；溶劑－去污劑處理(例如以有機溶劑三－N－丁基－磷酸酯和Tween 80等去污劑來處理)；聚乙二醇處理；巴斯德滅菌法(熱處理)以及低pH處理；以胃蛋白酶或胰蛋白酶進行溫和酶處理；亞甲藍(MB)光處理；以二甲基亞甲藍(DMMB)和可見光進行處理；以S－59(一種補骨脂內酯衍生物)和UVA照射進行處理以及類似方法。

在特別相關的實施方案中，抗原可通過固相合成法來合成，或是可通過重組遺傳技術而獲得，或是可被人為製造以類比病原體的免疫原性質。

抗原可為非細胞型、囊封型、感染性克隆(infectious clone)、複製子(replicon)、具載體型(vectored)、微囊封型(microencapsulated)、單價、二價或多價的。

在一些實施方案中，本發明的免疫原組合物包含聚核苷酸佐劑以及至少二種不同的抗原，例如在一些實施方案中，本發明的免疫原組合物包含二種抗原、三種抗原、四種抗原、五種抗原或是超過五種抗原。

多肽抗原可利用本領域所熟知標準蛋白純化方法從天然來源分離，這些標準方法包括但不限於液相層析法(例如高效液相層析法、快速蛋白液相層析法等)、尺寸排阻層析法、凝膠電泳(包括一維凝膠電泳、二維凝膠電泳)、親和層析法或其他純化技術。可使用固相肽合成技術，這些技術是熟習于本領域技術人員所知悉的。請參見Jones,The Chemical Synthesis of Peptides (Clarendon Press,Oxford)(1994)。一般而言，在這些方法中，肽是通過將活化單體單元順序加入結合有增長肽鏈的固相來製造。建構完成的重組DNA技術可用以製造多肽，這些方法包括但不限於例如將表達構建體導入適當的宿主細胞中(例如在體外細胞培養基中生長成一單細胞實體的真核宿主細胞，例如酵母菌、昆蟲細胞、哺乳動物細胞等，或原核細胞(例如在體外細胞培養基中生長的原核細胞)，該表達構建體含有編碼多肽的核苷酸序列，而産生遺傳基因改變的宿主細胞；在適當的培養條件下，蛋白質可被該遺傳基因改變的宿主細胞所制得。

在一些實施方案中，該抗原為純化抗原，例如具有約25%至50%的純度、約50%至約75%的純度、約75%至約85%的純度、約85%至約90%的純度、約90%至約95%的純度、約95%至約98%的純度、約98%至約99%的純度，或高於99%的純度。

抗原可為非細胞型、囊封型、感染性克隆(infectious clone)、複製子(replicon)、具載體型(vectored)、微囊封型(microencapsulated)、單價、二價或多價的。

本發明的聚核苷酸佐劑組合物亦可用於促進免疫反應，該免疫反應是針對運用DNA疫苗和/或DNA表達蛋白所産生的抗原。這些疫苗中用以編碼抗原的DNA序列可以是“裸露的”，或是被容納在一個如脂質體的載體系統內。

在一個特別相關方面，該新穎的疫苗組合物可通過選用抗原和PIKA佐劑相組合來界定。

在一個特別相關的實施方案中，本發明提供聚核苷酸佐劑組合物和其使用方法，其中該聚核苷酸佐劑組合物包含PIKA佐劑以及抗原，其中典型的抗原包括但不限於表N所述通過粘膜表面進入宿主的傳染病病原體所具有的抗原。因此，表N敍述可作為抗原來源的有機體以及該抗原感染粘膜而導致的疾病。

在特別相關的實施方案中，本發明提供一種聚核苷酸佐劑組合物和其使用方法，其中該聚核苷酸佐劑組合物包含PIKA佐劑以及通過粘膜表面進入宿主的過敏成份抗原，其中該抗原是來自人類或動物過敏起源，該過敏起源包括植物、動物、真菌、昆蟲食品、藥物、灰塵和塵蟎等。

過敏原包括但不限於環境空氣過敏原(aeroallergens)；豕草/花粉熱(ragweed/hayfever)等植物花粉；雜草花粉過敏原；牧草花粉過敏原；石茅高梁(Johnson grass)；樹木花粉過敏原；黑麥草(ryegrass)；屋塵蟎(例如Der p I,Der f I等)等蜘蛛類過敏原：儲藏室粉蟎過敏原；日本柳杉花粉/乾草熱；黴菌孢子過敏原；動物過敏原(例如狗、天竺鼠、倉鼠、沙鼠、大鼠、小鼠等過敏原)；食物過敏原(例如甲殼類水産品過敏原；例如花生等堅果類；柑橘類水果)；昆蟲過敏原；毒液：(膜翅目昆蟲(Hymenoptera)、胡蜂、蜜蜂、木胡蜂、黃蜂、火蟻)；來自於蟑螂、跳蚤、蚊子等其他環境昆蟲的過敏原；鏈球菌抗原等細菌過敏原；蛔蟲抗原等寄生蟲過敏原；病毒抗原；真菌孢子；藥物過敏原；抗生素；青黴素(penicillins)和相關化合物；其他抗生素；激素(胰島素)、酶(鏈激酶(streptokinase))等完整蛋白；可作為不完全抗原或半抗原(haptens)的所有藥物和它們的代謝物；可作為半抗原並作為過敏原的工業用化學品和它們的代謝物(例如酸酐(例如苯偏三甲酸酐)和異氰酸酯(例如甲苯二異氰酸酯))；麵粉(例如導致麵包師哮喘症(Baker's asthma)的過敏原、蓖麻籽、咖啡豆和前述工業用化學品等職業過敏原；蚤過敏原；以及非人類動物中的人類蛋白。

過敏原包括但不限於細胞、細胞提取物、蛋白質、多肽、肽、多糖、多糖結合物、多糖的肽或非肽類比體以及其他分子、小分子、脂肪、糖脂質和碳水混合物。

特定天然、動物和植物過敏原的範例包括但不限於下列屬所特有的蛋白：犬屬(Canine)(家犬(Canis familiaris))；表皮蟎屬(Dermatophagoides)(例如粉塵蟎(Dermatophagoides farinae))；貓屬(Felis)(家貓(Felis domesticus))；豚草屬(Ambrosia)(豚草(Ambrosia artemiisfolia))；黑麥草屬(Lolium)(例如多年生黑麥草(Lolium perenne)或多花黑麥草(Lolium multiflorum))；柳杉屬(Cryptomeria)(日本柳杉(Cryptomeria japonica))；鏈格孢屬(Alternaria)(煉格孢菌(Alternaria alternate))；榿木屬(Alder)；赤楊屬(Alnus)(Alnus gultinoasa)；樺屬(Betula)(瘤皮樺(Betula verrucosa))；櫟屬(Quercus)(白橡(Quercus alba))；木犀屬(Olea)(油橄欖(Olea europa))；蒿屬(Artemisia)(野艾(Artemisia vulgaris))；車前草屬(Plantago)(例如長葉車前草(Plantago lanceolata))；牆草屬(Parietaria)(例如直牆草(Parietaria officinalis)或猶大牆草(Parietaria judaica))；小蠊屬(Blattella)(例如德國小蠊(Blattella germanica))；蜜蜂屬(Apis)(例如Apis multiflorum)；柏木屬(Cupressus)(例如絲柏(Cupressus sempervirens)、亞利桑那柏(Cupressus arizonica)和大果柏(Cupressus macrocarpa)；圓柏屬(Juniperus)(例如Juniperus sabinoides、鉛筆柏(Juniperus virginiana)、杜松(Juniperus communis)和Juniperus ashei)；側柏屬(Thuya)(例如東方側柏(Thuya orientalis)；扁柏屬(Chamaecyparis)(例如日本扁柏(Chamaecyparis obtusa))；大蠊屬(Periplaneta)(例如美洲大蠊(Periplaneta americana))；鵝觀草屬(Agropyron)(例如偃麥草(Agropyron repens))；黑麥屬(Secale)(例如黑麥(Secale cereale))；小麥屬(Triticum)(例如小麥(Triticum aestivum))；鴨茅屬(Dactylis)(例如鴨茅(Dactylis glomerata))；狐茅屬(Festuca)(例如草地狐茅(Festuca elatior))；早熟禾屬(Poa)(例如草地早熟禾(Poapratensis)或加拿大早熟禾(Poa compressa))；燕麥屬(Avena)(例如燕麥(Avena sativa))；絨毛草屬(Holcus)(例如絨毛草(Holcus lanatus))；黃花茅屬(Anthoxanthum)(例如黃花茅(Anthoxanthum odoratum))；燕麥草屬(Arrhenatherum)(例如燕麥草(Arrhenatherum elatius))；剪股穎屬(Agrostis)(例如小糠草(Agrostis alba))；梯牧草屬(Phleum)(例如梯牧草(Phleum pretense))；鷸草屬(Phalaris)(例如鷸草(Phalaris arundinacea))；雀稗屬(Paspalum)(例如百喜草(Paspalum notatum))；高梁屬(Sorghum)(例如石茅高粱(Sorghum halepensis))；和雀麥屬(Bromus)(例如無芒雀麥(Bromus inermis))。

在特別相關的實施方案中，本發明提供一種聚核苷酸佐劑組合物和其使用方法，其中該聚核苷酸佐劑組合物包含PIKA佐劑以及通過粘膜表面進入宿主的自體免疫抗原。

其他成份

在一些實施方案中，本發明的免疫原組合物除了聚核苷酸佐劑和抗原以外，另包含一或多種成份例如免疫調節劑、載劑等。

在一個特別相關的實施方案中，本發明提供一種免疫原組合物和其使用方法，其中該免疫原組合物包含PIKA佐劑、抗原或疫苗，以及另外的種免疫調節物質(包含佐劑在內)，其中適合的免疫調節物質包括但不限於：鋁組合物例如氫氧化鋁；含有免疫原物質的水包油乳劑組合物或是乳劑，包括完全弗氏佐劑(Complete Freund’s Adjuvant)；含有經乾燥和熱殺滅的結核分枝桿菌的水包油乳劑；不完全弗氏佐劑(Incomplete Freund’s Adjuvant)；含有分枝桿菌細胞壁成份的乳劑；含有角鯊烯(squalene)的乳劑(MF－59)；去毒化的內毒素；脂質A衍生物，包括微生物單磷脂酰脂質A(MPL)；半抗原；硝化纖維素吸收性蛋白；皂甙，包含從皂質樹Quillaja Saponoria皮分離而來的免疫調節劑顆粒，例如QS21；人類內源性免疫調節劑；從細菌衍生而來的包括去甲基化的CpG二聚核苷酸的佐劑；含有去甲基化的CpG二聚核苷酸的寡脫氧核苷酸(例如合成寡核苷酸)；脂質體(例如包括如磷脂等可生物降解性材料的脂質體)；(由如聚乳酸乙醇酸共聚物(PLGA)、聚膦腈(polyphosphazene)和聚酐等多種聚合物製成的聚合微球體)；介白素－2；卡介苗；粒性白細胞及單核細胞集落刺激因子(Granulocyte Monocyte－Colony Stimulating Factor)；Montanide ISA－51；鑰孔蟲戚血藍蛋白(Keyhole limpet hemocyanin)；DNA；蛋白；囊封型抗原(encapsulated antigens)；免疫刺激複合物(ISCOM’s)；霍亂毒素和霍亂毒素衍生物；小帶閉合毒素(zonula occludens toxin)；大腸桿菌不耐熱腸毒素(Escherichia coli heat－labile enterotoxin)；不耐熱性毒素和不耐熱性毒素衍生物；百日咳毒素和百日咳毒素衍生物；胞壁酰二肽(muramyl dipeptide)衍生物；賽比克藥廠(Seppic)的montanide系列佐劑；聚－二(羧負離子基苯氧基)膦腈(poly－di(carboxylatophenoky)phosphazene)以及利甚曼原蟲延長因子(leishmania elongation factor)。

當本發明的免疫原組合物和另一個佐劑共同給予時，聚核苷酸佐劑可在給予該另一個佐劑之前和/或之後和/或同時給予。例如，聚核苷酸佐劑可在初次給予抗原時併合給予，隨後追加給予含有其中一種佐劑或所有二種佐劑的疫苗。選擇性地，初次給予的疫苗可排除聚核苷酸佐劑，但後續給予病人含有該聚核苷酸佐劑的免疫原物質。

在某些實施方案中，本發明的免疫原組合物可以和細胞因子或是IL－1、IL－2、IL－4、IL－5、IL－6、IL－7、IL－10、IL－12、IL－15等其他輔助刺激分子共同給予。

在相關實施方案中，本發明提供一種免疫原物質，包含PIKA佐劑、抗原物質或加有適當載劑的物質。該載劑可為例如油水乳劑、脂質載體或鋁鹽、脂質體卷(cochleates)、ISCOMs、脂質體、活細菌載體、活病毒載體、微球體、核酸疫苗、聚合物、聚合物環、氟化鈉、轉基因植物、病毒小體(virosomes)、類病毒顆粒，以及其他習用傳輸載體。

聚核苷酸佐劑可直接給予個體或是和傳輸複合物共同給予。該傳輸複合物是合併有靶標手段的物質，例如對於樹突細胞(dendritic cell)等靶標細胞表面具有更高親和力和/或增加被靶標細胞吸收的分子。傳輸複合物的範例包括但不限於並有下列物質的核酸傳輸複合物：固醇(例如膽固醇)、脂肪(例如陽離子脂肪、病毒小體體或脂質體)或是靶標細胞特異性結合劑(例如能被靶標細胞特異性受體所辨識的配體)。優選的複合物在活體內是足夠穩定以防止在被靶標細胞內化之前顯著解偶聯(uncoupling)。但是，該複合物在細胞內的適當條件下是可以裂解的。

在一個相關實施方案中，含有PIKA佐劑的組合物不包含poly－L－賴氨酸或其衍生物。

組合套裝(Kits)

在某些實施方案中，本發明提供包含本發明免疫原組合物的組合套裝。在某些實施方案中，本發明提供組合套裝，包含分別位在不同配方內的聚核苷酸佐劑和抗原。

在相關實施方案中，本發明提供一種組合套裝，包含聚核苷酸佐劑和免疫原化合物。

在相關實施方案中，本發明提供一種組合套裝，包含聚核苷酸佐劑和免疫原化合物，其中該免疫原物質是抗原。

在一些實施方案中，本發明的組合套裝包含配製於無菌液體(例如水性)配方內的本發明免疫原組合物，其中該配方是無菌的且盛裝在無菌容器、無菌小管或無菌注射筒內。

在一些實施方案中，本發明的組合套裝包含被配製成注射用的本發明免疫原組合物。在一些實施方案中，本發明的組合套裝包含配製於無菌液體配方內的本發明免疫原組合物，盛裝在無菌注射筒內；還有針頭。本發明的組合套裝包含配製於無菌液體配方內且呈單位劑量(例如單次劑量)的本發明免疫原組合物，盛裝在無菌注射筒內；還有針頭。

在一些實施方案中，本發明的組合套裝包含被冷凍乾燥且被盛裝在無菌容器內的本發明免疫原組合物，以及含有用以復原冷凍乾燥組合物的無菌液體的容器。在一些實施方案中，該組合套裝另包含復原冷凍乾燥組合物的無菌液體的指南。

在一些實施方案中，本發明的組合套裝包含免疫原組合物，該免疫原組合物被配製成通過直腸、陰道、鼻、口(包括經呼吸道吸入)、眼(opthamalically)、局部、肺部、眼球或透皮來給予，以及一適當傳輸裝置，例如吸入器、栓劑(suppository)、施用器等。

在一些實施方案中，本發明的組合套裝另包含例如有關給予劑量和給予頻率的使用指南。在一些實施方案中，指南是被直接印刷在組合套裝上。在其他的實施方案中，指南是被設置成為包裝內容物的印刷品。指南亦可被設置在其他媒介物上，例如呈數位或類似形式的電子媒體上，例如錄音匣、錄音帶、光盤、多功能數碼光盤等。

配方

本發明的免疫原組合物可被配置在任一種配方中。例如，本發明的免疫原組合物可被製備成為一種可注射型、乾燥粉末、液態溶液例如水性或生理食鹽水溶液，或成為懸浮液、油膏、乳劑、片劑、丸劑、糖衣片、膠囊、凝膠、糖漿或漿液。在一些實施方案中，本發明免疫原組合物被配製成供粘膜傳輸之用，例如通過吸入來傳輸、通過呼吸道傳輸、口部傳輸、經直腸傳輸、經陰道傳輸等。所需免疫原組合物配方的製備被一般性地敍述在Vaccine 4^th Edition by Stanley A Plotkin et al.,W.B.Saunders Company；4th edition 2003。適當的配方亦被敍述在例如A.Gennaro(2000)“Remington：The Science and Practice of Pharmacy,”20^th edition,Lippincott,Williams,& Wilkins；Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (1999)H.C.Ansel et al.,eds.,7^th ed.,Lippincott,Williams,& Wilkins；以及Handbook of Pharmaceutical Excipients(2000)A.H.Kibbe et al.,eds.,3^rd ed.Amer.Pharmaceutical Assoc。

本發明的免疫原組合物可被微囊封、並入脂質體卷(encochleated)、塗布在微型金質顆粒上、或是容納於脂質體、氣霧劑或以植入皮膚內的片劑，或是被乾燥於尖銳物件上以刮擦進入皮膚內。

在另一個實施方案中，本發明的免疫原物質可單獨傳輸或與分散系統併合傳輸。在一些實施方案中，該懸浮液系統是選自於由例如大分子複合物、奈米膠囊、微球體、微珠粒和脂體基質系統所構成的群組中。脂體基質系統可選擇性地含有水包油乳劑、微胞(micelles)、混合微胞(mixed micelles)或脂質體(liposomes)。

在某些實施方案中，含有PIKA佐劑的本發明免疫原組合物是呈藥學上可接受性溶液的形式，該溶液可例行性地含有藥學上可接受濃度的鹽、緩衝劑、防腐劑、兼容性載劑、佐劑和其他任擇性治療用組份。該組合物可含有例如崩解劑、粘合劑、包覆劑、膨脹劑、潤滑劑、香料、甘味劑或助溶劑等添加劑。

在某些實施方案中，含有PIKA佐劑的本發明免疫原組合物是以其原物形式或藥學上可接受的鹽形式來給予。

在某些實施方案中，PIKA佐劑組合物以及包含PIKA佐劑和抗原化合物的免疫原組合物可被冷凍乾燥，以呈固體形式長時穩定保存。冷凍乾燥技術是本領域技術人員所知悉的。

在一個特別相關方面，本發明提供佐劑組合物或免疫原組合物，其中該免疫原組合物，或是被包含在該免疫原組合物的佐劑組合物，呈現固體或液體形式或是位於溶液或懸浮液內。

例如，對於以水溶液進行胃腸道外給予而言，該溶液在必要時應該被適當地緩衝化，且先以足量的生理食鹽水或葡萄糖來稀釋以使其呈現等張。這些特定的水性溶液特別適用於靜脈、腹腔、皮下、肌肉、皮內、吸入、鼻腔、透皮、陰道和眼睛給予。關於這點，本領域技術人員將可參照本案揭示內容而知悉可供使用的無菌水性媒介物。可供本發明使用的典型注射媒介物包括含有或不含有分散劑及/或防腐劑的緩衝液，以及食用油、礦物油、魚肝油、角鯊烯(squalene)、一－、二－或三酸甘油酯，以及這些成份的混合物。

在一些實施方案中，本發明的免疫原組合物將會被配製成適合經粘膜給予的特定形式。這些無菌和非無菌的形式包括例如膠囊、液態溶液、液滴、乳劑、懸浮液、酏劑(elixirs)、油膏、栓劑、凝膠、膠囊(包括軟膠囊)、噴劑、吸入劑、氣霧劑、粉末、片劑、包衣片、微膠囊、滴劑、丸劑、糖衣錠(dragees)、糖漿、漿液、灌腸劑(enemas)、顆粒或菱錠(lozenges)。可以運用任何惰性載劑，例如生理食鹽水或磷酸鹽緩衝化生理食鹽水、穩定劑、驅動劑等任何惰性載劑，該惰性載劑被包封在用以幫助粘膜給予的明膠膠囊或是微膠囊或載體內，或是可以運用使得本發明方法所使用的化合物具有適用于本發明方法的溶解性質的任何載劑。

本發明的免疫原組合物可憑藉通過呼吸道吸入途徑(經口腔、氣管內、鼻內)的藥用傳輸系統來給予個體。因此，本發明的免疫原組合物可被配製成適合吸入給予的形式。該藥用傳輸系統適合於將本發明的細菌組合物局部給予至支氣管的粘膜被覆層而進行吸入性治療。本發明可運用依賴壓縮氣體驅動力的系統而將細菌組合物噴出容器。為達成此一目的，可使用氣霧劑或加壓容器。因此在一些實施方案中，本發明的免疫原組合物被配製成可例如通過吸入而傳輸至呼吸組織中。在一些實施方案中，本發明的免疫原組合物被氣霧化以産生氣霧劑。

本說明書所使用的“氣霧劑”此術語是依據它的慣用意義來使用，意指被加壓推進氣體攜載至施行治療位置的極細微液態或固態顆粒。當藥用氣霧劑被運用于本發明時，該氣霧劑含有免疫原組合物，而該免疫原組合物可被溶解、懸浮或乳化在由流體載劑和抛射劑所構成的混合物中。在一些實施方案中，本發明的免疫原組合物是與流體載劑和抛射劑共同配製而成。氣霧劑可呈溶液、懸浮液、乳劑、粉末或半固體製劑的形式。本發明所使用的氣霧劑是意圖以細微固態顆粒或液態氣霧的形式通過個體的呼吸道來給予。被本領域技術人員知悉的各種抛射劑均可被使用。適當抛射劑的範例包括但不限於碳氫化合物或其他適當氣體。以加壓氣霧劑為例，其劑量單位可通過設置以傳輸經計算的用量的值來設定。

數個不同種類的呼吸道吸入方法可被使用于本發明。本發明的免疫原組合物基本上可被配製成三種不同種類的吸入用配方。第一，本發明的免疫原組合物可與低沸點抛射劑共同配製。這種配方通常通過習用定量吸入器(MDI's)來給予。但是，可運用美國專利第5,404,871號和第5,542,410號中所論及的技術來測量個體的呼吸體積和流速，而將習用MDI's加以改裝以獲得重復給藥的能力。

選擇性地，本發明的免疫原組合物可被配製在水性或酒精溶液中，並通過習用霧化器來傳輸。在一些實施方案中，這種溶液配方是利用例如美國專利第5,497,763號、第5,544,646號、第5,718,222號和第5,660,166號中所揭露的裝置和系統來霧化。

另外，本發明的免疫原組合物可被配製成乾粉配方。這種配方的給予方式可透過産生該粉末的氣霧之後再簡單地吸入該乾粉配方。這種給予方式的實施技術被敍述在美國專利第5,775,320號和美國專利第5,740,794號中。

適合鼻內給予的配方包括鼻用噴劑、鼻用滴劑、氣霧劑配方等。

本發明提供一種用以將本發明的免疫原組合物傳輸至個體的氣道或呼吸道內的套裝(package)。一般而言，適合呼吸道傳輸的套裝包含容納適合傳輸至呼吸道(例如通過呼吸道吸入)的可流動配方的容器、如前所述的聚核苷酸佐劑和抗原。在一些實施方案中，該套裝是計量給藥吸入器，而且該聚核苷酸佐劑和抗原與抛射劑共同配製。

在一些實施方案中，本發明的免疫原組合物被配製成持續釋放配方(例如控制釋放型配方)。例如，在一些實施方案中，本發明的免疫原組合物被配製成丸劑或柱體，並以貯釋注射劑(depot injections)或植入物的形式植入肌肉內或皮下。這種植入物通常會應用可生物降解性聚合物等習知惰性材料。可注射的貯釋形式可通過在聚乳酸－聚甘醇酸(polylactide－polyglycolide)等可生物降解性聚合物中形成本發明免疫原組合物的微膠囊基質(matrices)來製成。其他適用的可生物降解性聚合物的範例包括多正酯類(poly(orthoesters))和聚酐(poly(anhydrides))。可注射的貯釋配方亦可通過將組合物埋覆在可與身體組織兼容的脂質體或微乳劑內來製成。傳輸釋放系統亦包括下列範例：以聚合物為基礎的系統、微膠囊、脂肪、水凝膠釋放系統、矽橡膠系統(sylastic systems)、肽系統、以肽為基礎的系統、蠟質覆膜、壓片、部分融合型植入物。其他形式的持續釋放劑是本領域技術人員所知悉的。

對於經口部傳輸而言，本發明的免疫原組合物在一些實施方案中含有腸溶性包衣材料。適合的腸溶性包衣材料包括醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯(HPMCAS)、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯(HPMCP)、醋酸纖維素鄰苯二甲酸酯(CAP)、醋酸聚乙烯鄰苯二甲酸酯(PVPA)、Eudragit^TM 和蟲膠(shellac)。

如美國專利第6,346,269號所述，本發明的免疫原組合物和一或多種藥用賦形劑共同配製並包覆腸溶性包衣，以作為適當口服配方的一個非限制性實施例。例如，將本發明的免疫原組合物和穩定劑塗覆在含有藥學可接受性賦形劑的核心表面，以形成包覆有活性成分的核心；將次包覆層塗覆在該包覆有活性成分的核心，接著再包覆以腸溶性包衣層。該核心通常包括藥用非活性成分，例如乳糖、澱粉、甘露醇、羧甲基纖維素鈉、澱粉羥乙酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、色素、藻酸鹽、滑石、二氧化鈦、硬脂酸、硬脂酸鹽、微晶纖維素、甘油、聚乙二醇、檸檬酸三乙酯、檸檬酸三丁酯、三乙酸戊酯、磷酸氫鈣、磷酸鈉、硫酸鈣、環糊精和蓖麻油。適合的溶劑包括水性溶劑。適合的穩定劑包括鹼金屬和鹼土族金屬、磷酸鹽和有機酸鹽和有機胺。次包覆層包括粘合劑、增塑劑和抗粘劑中的一或多者。適合的抗粘劑包括滑石、硬脂酸、硬脂酸鹽、硬脂酰富馬酸鈉、二十二酸甘油酯(glyceryl behenate)、高嶺土和納米級二氧化矽(aerosil)。適合的粘合劑包括聚乙烯吡咯酮(PVP)、明膠、羥乙基纖維素(HEC)、羥丙基纖維素(HPC)、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、乙酸乙烯酯(VA)、聚乙烯醇(PVA)、甲基纖維素(MC)、乙基纖維素(EC)、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯(HPMCP)、醋酸纖維素鄰苯二甲酸酯(CAP)、黃單胞菌膠(xanthan gum)、藻酸、藻酸鹽、Eudragit^TM 、甲基丙烯酸/甲基異丁烯酸和醋酸聚乙烯鄰苯二甲酸酯的共聚物(PVAP)。適合的增塑劑包括甘油、聚乙二醇、檸檬酸三乙酯、檸檬酸三丁酯、三乙酸戊酯和蔥麻油。適合的腸溶性包衣材料包括醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯(HPMCAS)、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯(HPMCP)、醋酸纖維素鄰苯二甲酸酯(CAP)、醋酸聚乙烯鄰苯二甲酸酯(PVPA)、Eudragit^TM 和蟲膠(shellac)。

適合的口服配方亦包括以下列任何形式配製而成的本發明免疫原組合物：微型顆粒(參見例如美國專利第6,458,398號)；可生物降解性大分子(參見例如美國專利第6,703,037號)；可生物降解性水膠(參見例如Graham and McNeill(1989)Biomaterials 5：27－36)；可生物降解性顆粒載體(參見例如美國專利第5,736,371號)；可生物吸收性內酯聚合物(參見例如美國專利第5,631,015號)；緩慢釋放型蛋白質聚合物(參見例如美國專利第6,699,504號；Pelias Technologies,Inc.)；聚乳酸共聚乙醇酸交酯/聚乙二醇嵌段共聚物(polylactide－co－glycolide/polyethylene glycol block copolymer)(參見例如美國專利第6,630,155號；Atrix Laboratories,Inc.)；含有可生物兼容性聚合物和被分散在該聚合物中的金屬陽離子穩定劑顆粒的組合物(參見例如美國專利第6,379,701號；Alkermes Controlled Therapeutics,Inc.)；以及微球體(參見例如美國專利第6,303,148號；Octoplus,B.V.)。

適合的口服配方亦包括以下列任何形式配製而成的本發明免疫原組合物：載劑例如Emisphere(Emisphere Technologies,Inc.)；TIMERx，一種將黃原膠(xanthan)和刺槐豆膠(locust bean gums)加以組合而成的親水性基質，它在右旋糖的存在下會在水中形成一種強力粘膠(Penwest)；Geminex^TM (Penwest)；Procise^TM (GlaxoSmithKline)；SAVIT^TM (Mistral Pharma Inc.)；RingCap^TM (Alza Corp.)；Smartrix(Smartrix Technologies,Inc.)；SQZgel^TM (MacroMed,Inc.)；Geomatrix^TM (Skye Pharma,Inc.)；OrosTri－layer(Alza Corporation)等。

美國專利第6,296,842號(Alkermes Controlled Therapeutics,Inc.)和美國專利第6,187,330號(Scios,Inc.)等專利中所敍述的配方也適用于本發明。

含有腸吸收促進劑的配方也適用于本發明。適合的腸吸收促進劑包括但不限於鈣螯合劑(例如檸檬酸鹽、乙二胺四乙酸)；表面活性劑(例如十二烷基硫酸鈉、膽鹽、棕櫚酰肉鹼(palmitoylcarnitine)和脂肪酸鈉鹽)；毒素(例如小帶閉合毒素(zonula occludens toxin))等。

在相關實施方案中，本發明免疫原組合物和一或多種能夠抑制胃腸酶和/或酸所造成的降解作用的成分共同配製。在一些實施方案中，本發明免疫原組合物和一或多種能夠保護組合物成分免於被胃腸酶和/或酸所降解的成分共同配製。

在一些實施方案中，本發明免疫原組合物和一或多種能夠促進粘膜組織吸收的成分共同配製。

在一些實施方案中，本發明免疫原組合物被配製成供陰道傳輸使用，因而提供一種陰道傳輸系統。在一個典型的實施方案中，該陰道傳輸系統是一個含有本發明免疫原組合物的棉塞或棉塞類裝置。藥物傳輸用棉塞已為業界所熟知，且任何此類棉塞均可使用于本發明的藥物傳輸系統中。藥物傳輸用棉塞被敍述在例如美國專利第6,086,909號中。當使用棉塞或棉塞類裝置時，有許多方法可以將本發明免疫原組合物納入該裝置中。例如，本發明免疫原組合物可被納入位在該裝置端點處的膠狀生物粘著性貯存工具中。選擇性地，本發明免疫原組合物可以呈現粉末材料的形式而被定位在棉塞端點處。本發明免疫原組合物也可以被棉塞端點處的纖維所吸收，例如通過將本發明免疫原組合物溶解在一藥學上可接受的載劑內並使棉塞纖維吸收本發明免疫原組合物。本發明免疫原組合物也可以被溶解在包覆材料中，再將該包覆材料施加在棉塞端點上。選擇性地，本發明免疫原組合物可以被納入於嵌入型栓劑中，而該栓劑置於棉塞端點處。

在其他的實施方案中，本發明免疫原組合物被配製成和陰道環合併使用，因而提供陰道環形式的陰道傳輸系統。陰道環通常由惰性彈性材料環所構成，該惰性彈性材料環塗覆有另一層含有本發明免疫原組合物的彈性材料。該環易於置入並留置一段所需的時間(例如7天)，而後由使用者取出。該環可選擇性地包含未含有本發明免疫原組合物的第三種速率控制型彈性材料外層。本發明免疫原組合物可被納入於聚乙二醇中，而該聚乙二醇遍佈在整個矽膠彈性材料環以作為本發明免疫原組合物的貯存工具。

在其他的實施方案中，適當的陰道傳輸系統是一種陰道海綿。本發明免疫原組合物被納入於一矽膠基質中，而該矽膠基質被塗覆在不含藥物的圓柱形聚氨基甲酸酯陰道海棉上，如文獻所述。

可以使用于本發明的藥物傳輸系統的其他例子是子宮套(pessaries)、片劑和栓劑。這些系統已被廣泛地敍述在文獻中。

另一種系統是含有本發明免疫原組合物的容器(例如管)，該容器適合和施用器(例如直腸或陰道傳輸用施用器)共同使用。本發明免疫原組合物被納入于可利用施用器施加於陰道內的油膏、洗劑、泡沫、糊劑、軟膏和凝膠中。油膏、洗劑、泡沫、糊劑、軟膏和凝膠形式的藥物的製備方法可見於文獻中。適用系統的例子是一種不含香精的標準洗劑配方，含有甘油、神經酰胺(ceramides)、礦物油、凡士林(petrolatum)、對羥苯甲酸酯(parabens)、香精和水，例如以JERGENS^TM 為商標所販售的産品(Andrew Jergens Co.,Cincinnati,Ohio)。對於熟習藥用配方相關技術的人士來說，適合使用于本發明組合物中的無毒性藥學上可接受系統是顯而易見的，而且許多例子被敍述在Remington’s Pharmaceutical Sciences,19th Edition,A.R.Gennaro,ed.,1995中。適當載劑的選擇是依據所需特定陰道劑型的確切性質而定，例如活性成分是否會被配製成油膏、洗劑、泡沫、軟膏、糊劑、溶液或凝膠，以及依據活性成分的同一性(identity)而定。其他適合的傳輸裝置被敍述在美國專利第6,476,079號中。

方法

在一個特別相關方面，本發明提供用以刺激和/或促進對於抗原化合物的免疫反應的方法，包含將本發明的免疫原組合物給予宿主。在一些實施方案中，該宿主是人類。在其他實施方案中，該宿主是非人類動物，例如非人類哺乳動物、禽鳥物種等。

另外，本發明提供一種通過將免疫原組合物給予宿主而用以促進對於抗原化合物的免疫反應的方法。該宿主是人類或非人類動物。給予方式是通過肌肉內、腹腔、靜脈、皮下或皮內注射等胃腸道外注射方式來傳輸。在其他實施方案中，該免疫原組合物可以注射以外的方式(例如不以機械方式來破壞上皮細胞屏障的方式)經皮內傳輸。在其他實施方案中，該免疫原組合物可通過直腸、陰道、鼻、口(包括經呼吸道吸入)、眼、局部、肺部、眼球或透皮來傳輸。

個體會透過環境接觸而暴露於抗原中，因而會有發展出例如過敏反應、傳染病、自體免疫疾病或癌症的危險。在其他實施方案中，個體因先前通過環境接觸而暴露於抗原中，結果罹患傳染病、自體免疫疾病、癌症或過敏症。

在某些實施方案中，該佐劑和該抗原共同被給予。在其他實施方案中，該佐劑是在給予該抗原之前或之後被給予。

本發明的免疫原組合物在一些實施方案中是通過粘膜給予的。粘膜給予方式包括例如通過呼吸道吸入而給予至呼吸組織、鼻滴劑、眼滴劑等；口服給予；或是例如利用栓劑通過肛門、陰道途徑給予等。

在一個特別相關方面，本發明提供一種用以增進對於抗原化合物的免疫反應的方法，包含將用以增進抗原化合物的抗原性的免疫原組合物給予宿主，該免疫原組合物包含聚核苷酸佐劑組合物。在這些實施方案中的某些實施方案中，宿主是人類。在其他實施方案中，該宿主是非人類動物(例如宿主是非人類靈長類動物、齧齒類動物或其他非人類哺乳動物、禽鳥物種等)。

在某些實施方案中，該聚核苷佐劑組合物可被使用在疫苗內。該疫苗組成可選擇性地含有其他佐劑。所涵蓋的疫苗種類為抗傳染性呼吸系統、消化系統、泌尿生殖系統或感覺系統的疾病、過敏和抗自體免疫疾病。

本發明的免疫原組合物是以有效量被給予，也就是說，本發明的免疫原組合物的用量在選定給予途徑中可有效地引發、誘導或加強免疫反應。在一些實施方案中，免疫反應是被特定病原性微生物所産生的抗原所引發。在一些實施方案中，本發明的免疫原組合物的用量可有效地遏制和/或根除病原性微生物的感染和/或降低感染所併發的症狀。

例如，在一些實施方案中，將本發明的免疫原組合物給予個體可有效地治療傳染病，其中傳染病的治療包含下列一或多者：降低病原體在個體內的數目(例如降低病毒負荷量(viral load)、細菌負荷量(bacterial load)、降低原蟲數目、降低蠕蟲數目)和/或降低傳染病相關參數，該參數包括但不限於傳染物質所産生的産物水平(例如毒素、抗原等)；以及降低對於該傳染物質的非所需生理反應(例如發燒、組織水腫等)。

本發明免疫原組合物用以誘導和/或加強免疫反應(例如粘膜免疫反應)所需的精確用量是隨著個體不同，依據個體的物種、年齡、體重及一般狀態，被治療或預防的疾病、感染或病況的嚴重性，所使用的特定化合物及它的給予形式等而有所變化。本領域技術人員得知本說明書的展示內容後，可僅僅利用常規行實驗而決定適當的用量。初次給予後，個體可再接受一或多次適當間隔的追加免疫。

在一些實施方案中，一系列劑量的本發明免疫原組合物被給予。在這些實施方案中，第一劑本發明免疫原組合物是為了給予疫苗。第二劑本發明免疫原組合物是在個體因暴露於該第一劑而已經被免疫致敏化(immunologically primed)之後再給予該個體。加強免疫劑(booster)可在初次免疫化數日、數周或數月之後給予，依據病人的反應和狀況而定。例如，加強劑在給予第一劑約2日至約12個月後給予，例如在給予第一劑約2日至約7日、約1周至約2周、約2周至約4周、約4周至約8周、約8周至約6個月、或6個月至約12個月後給予。本發明亦可利用第三、四、五、六劑或後續劑量來進行第三、四、五、六次或後續加強免疫的應用。

在某些實施方案中，給予手段可包含數個替代性途徑的組合，例如：在系統性給予劑量(例如腹腔、肌肉內、皮下或皮內給予)之後接續以粘膜傳輸劑量(例如經鼻內吸入)，反之亦然。所給予的至少一劑中將會包含PIKA佐劑以作為完整流程的一部分。

在某些實施方案中，聚核苷佐劑可以和給予病人的第一劑抗原或是和給予病人的任何後續配劑或是和給予病人的所有配劑合併給予。

在某些實施方案中，所給予的免疫原組合物的組成可以在初次給予劑和加強劑之間和/或在數個加強免疫劑劑量之間具有變化。舉例來說，所給予的初次配劑劑量可包含DNA疫苗，而加強免疫劑劑量是呈重組蛋白疫苗的形式。所給予的至少一劑中將會包含PIKA佐劑以作為完整流程的一部分。

運用標準分析方法可容易地測定對於抗原的抗體反應是否已經在個體內被誘導或加強。例如，酶聯免疫吸附分析(ELISA)、放射性免疫分析(RIA)、免疫沈降分析和蛋白印迹(“Western”印迹)分析等免疫分析以及中和分析(例如體外或體內的病毒感染性中和分析可用以測定體液或其他生物樣品(例如個體的血清、分泌物或其他流體)內對於微生物抗原具有特異性的抗體的存在。

運用標準分析方法可容易地測定對於抗原的CD4免疫反應是否已經在個體內被誘導，例如螢光－活化細胞分類法(fluorescence－activated cell sorting(FACS))(請參見例如Waldrop et al.(1997)J.Clin.Invest. 99：1739－1750)；細胞內細胞因子分析用以測定抗原刺激後細胞因子的産生(參見例如Suni et al.(1998)J.Immunol.Methods 212：89－98；Nomura et al.(2000)Cytometry 40：60－68；Ghanekar et al.(2001)Clin.Diagnostic Lab.Immunol. 8：628－631)；MHC－肽多聚體染色分析，例如利用被可檢測地標記(例如被螢光標記)的可溶性第II類MHC/肽多聚體(參見例如Bill and Kotzin(2002)Arthritis Res. 4：261－265；Altman et al.(1996)Science 274：94－96；以及Murali－Krishna et al.(1998)Immunity 8：177－187)；酶連結免疫點(ELISPOT)分析(參見例如Hutchings et al.(1989)J.Immunol.Methods 120：1－8；以及Czerkinsky et al.(1983)J.Immunol.Methods 65：109－121)等。作為細胞內細胞因子分析的一個非限制性實施例，全血被抗原和共刺激抗體(例如抗－CD28、抗－CD49d)刺激2小時或以上；加入佈雷菲德菌素A(Brefeldin A)以抑制細胞因子分泌；以及處理細胞以利用針對CD4以及針對TNF－α、IFN－γ和IL－2等細胞因子的螢光標記抗體進行FACS分析。

運用數種習用分析方法可以測定對於抗原(例如病原體)的抗原特異性CD8(例如細胞毒T細胞；“CTL”)反應是否被誘導，這些分析方法包括但不限於通過測量CTL對於細胞表面上表達抗原的靶標細胞所造成的特異性分解作用，其中靶標細胞已合併有可檢測標記，該標記在靶標細胞分解後會釋出且可利用例如⁵¹ Cr－釋放分析、以鑭螢光為基礎的細胞分解分析等方法來測量。

適合進行治療的個體

適合利用本發明誘導對於微生物病原體的免疫反應的方法以及治療或預防微生物病原體感染的方法來進行治療的個體，包括已被病原性微生物感染的個體；易被病原性微生物感染但尚未被感染的個體；以及具有被病原性微生物感染的危險性但尚未被感染的個體。適合的個體包括嬰兒、幼童、青少年和成人。

適合利用本發明誘導對於微生物病原體的免疫反應的方法以及治療或限制微生物病原體感染的方法來進行治療的個體包括小兒科目標族群，例如約1歲至約17歲之間的個體，包括嬰兒(例如約1個月至約1歲)、幼童(例如約1歲至約12歲)和青少年(例如約13歲至約17歲)。

適合利用本發明誘導對於微生物病原體的免疫反應的方法以及治療或限制微生物病原體感染的方法來進行治療的個體包括新生兒，例如1天至約14天齡的個體(例如人類新生兒)，例如約1天至約2天齡、約2天至約10天齡、或是約10天至約14天齡。

在特定實施方案中，該個體是約10歲或更年少(例如約5歲或更年少)的人類兒童，且免疫原組合物在下列一或多個時間被給予：出生後2周、1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、12個月、15個月、18個月或21個月，或是在2歲、3歲、4歲、5歲、6歲、7歲、8歲、9歲或10歲時。在一些實施方案中，本發明的免疫原組合物被給予在約6個月至約6歲的年齡範圍的個體，其中該個體在約6個月齡時接受第一劑，並在例如2歲、4歲和6歲時接受例如2－3劑的後續加強免疫劑。

在特定實施方案中，該個體是約17歲至49歲的人類成人。在一些實施方案中，該個體是一位50至65歲、65歲至75歲、75至85歲或超過85歲的老年人類成人。

在一些實施方案中，本發明的免疫原組合物是在個體與微生物病原體的實際或潛在來源(例如已知被微生物病原體所感染或懷疑被感染的個體)接觸之後(例如在確認或懷疑接觸之後)立即給予該個體。例如，在一些實施方案中，本發明的免疫原組合物是在個體和已知被微生物病原體所感染或懷疑被感染的個體接觸之後約1小時內、約2小時內、約5小時內、約8小時內、約12小時內、約18小時內、約24小時內、約2日內、約4日內、約7日內、約2周內或1個月內給予該個體。

在一些實施方案中，本發明的免疫原組合物被給予已知或懷疑是微生物病原體的攜帶者的個體，無論他們是否顯現感染症狀。

適合利用本發明誘導對於微生物病原體的免疫反應的方法以及治療或限制微生物病原體感染的方法來進行治療的個體包括缺乏CD4^＋ T細胞的個體(“CD4^＋ －缺陷”個體)，例如具有低於正常數目的功能性CD4^＋ T淋巴細胞的個體。本說明書所使用的“正常個體”此術語的意思是，所具有的CD4^＋ T淋巴細胞水平和功能是位在族群正常範圍內的個體，就人類而言，通常每毫升血液中具有600至1500個CD4^＋ T淋巴細胞。CD4^＋ －缺陷個體包括罹患獲得性免疫缺陷症或原發性免疫缺陷症的個體。獲得性免疫缺陷症可能是因放射線治療或化學治療等所造成的暫時性CD4^＋ 缺乏。

具有健康完整的免疫系統但具有轉變成CD4^＋ 缺乏的危險性的個體(“高危險”個體)亦適合以本發明的方法來治療。高危險個體包括但不限於較一般族群具有更高可能性轉變成CD4^＋ 缺乏的個體。具有轉變成CD4^＋ 缺乏的危險性的個體包括但不限於因為和被HIV感染的個體進行性活動而具有受HIV感染的危險性的個體；靜脈藥物使用者；可能被暴露於受HIV感染的血液、血液製品或其他受HIV所污染的體液的個體；通過受HIV感染個體的産道的嬰兒；被HIV感染母親所哺育的嬰兒等。

適合利用本發明用以治療過敏的配方和方法來進行治療的個體包括已被診斷出患有過敏的個體。可以接受本說明書所述方法和藥劑來進行治療的個體包括已知對於一或多種過敏原具有過敏反應(allergic hypersensitivity)的個體。可以接受治療的個體包括罹患前述任何一種過敏性疾病的個體。具有對於一或多種過敏原産生過敏反應的危險性的個體也可以接受治療。接受一或多個治療過敏性疾病的標準療程但治療失敗的個體也適合利用本發明。

適合接受治療的個體包括居住在工業國家的個體；居住在開發中國家的個體；居住在鄉村地區的個體；居住在較偏遠隔離地區的個體等。

本發明的免疫原組合物的目標族群是依據微生物病原體的不同而有所變化的。

以上所述內容是一般性地敍述本發明。以下描述實施例將可協助瞭解本發明。這些實施例僅以例示說明為目的，而非意圖對於本發明的範圍加以限制。當情勢所趨或為因時制宜時，當可思及本發明在形式上的變化和等效性取代。雖然本說明書使用特定的術語，但是這些術語是意圖供說明之用，而不是以限制為目的。

實施例 實施例1：通過腹腔和粘膜給予PIKA和SARS抗原所誘導的系統性免疫反應

這個實施例顯示含有PIKA和SARS抗原的免疫原組合物當通過腹腔注射給予時能誘導強烈的系統性免疫反應，且當通過粘膜給予時能在給予位置局部和遠端粘膜引起強烈的免疫反應(例如粘膜和系統性兩者的免疫反應)。

6個各含3只balb/c小鼠的群組被接種以SARS抗原和PIKA(一種由主要位在約66kDa至1,200kDa的重量分佈範圍內的PIKA分子所構成的異質組合物)的組合物。抗原和佐劑的用量敍述在下表A至C。二周後給予重復接種，再過二周後另外給予加強免疫劑。

在第六周，取血樣並通過ELISA檢測血清中的特異性IgA和特異性IgG的存在量。處死小鼠並摘取肺臟，加以切片並洗滌以取得上清液。檢驗所得粘膜提取液中的特異性分泌型IgA存在量。

表A、B和C(以及第1、2和3圖)中所呈現的結果顯示，依據特異性IgG在血液內的表達量呈現劑量依賴性增加的測量值來看，PIKA存在於該通過腹腔注射給予的免疫原組合物中能夠加強系統性免疫反應。但是，依據特異性分泌型IgA在從肺臟取得的樣品中的存在量測量值來看，沒有觀察到粘膜免疫活性受到任何衝擊。依據特異性分泌型IgA在肺粘膜表面的表達量呈現劑量依賴性增加的測量值來看，PIKA佐劑存在於該通過粘膜給予的免疫原組合物中能夠加強粘膜免疫反應。此外，依據特異性IgA和IgG在血清樣品內的存在量的測量值來看，系統性免疫反應呈現劑量依賴性的加強情形。

實施例2：給予PIKA和流感抗原所誘導的粘膜和系統性免疫反應

這個實施例顯示一種含有PIKA和流感抗原的免疫原物質當通過粘膜給予時能在給予位置局部和遠端(也就是在呼吸系統和腸粘膜處)引起強烈的粘膜免疫反應並引起系統性免疫反應。

如表D所述，5個群組的balb/c小鼠在第0天和第20天時以表D中所述組合物接種疫苗。

所使用的流感抗原是來自於Sanofi Pasteur藥廠且經過許可供人體使用的滅活裂解型純化流感抗原疫苗VAXIGRIP，該疫苗含有H1N1、H3N2病毒株和b/Shanghai5/361/2002病毒株。

在第35天後收集血液樣品並以ELISA法檢驗特異性體液免疫反應的存在情形。

在第7周之後處死小鼠，並摘取肺臟和腸，加以切片並洗滌以取得上清液。以ELISA法檢驗所得粘膜提取物中的特異性分泌型IgA存在量。

表E中所呈現的結果顯示，依據特異性分泌型IgA在肺粘膜表面的表達量測量值來看，PIKA佐劑存在於該通過粘膜給予的免疫原組合物中能夠在肺臟中加強粘膜免疫反應。

此外，表F(第5圖)中所呈現的結果顯示，依據特異性分泌型IgA在腸粘膜表面的表達量測量值來看，PIKA佐劑存在於該通過粘膜給予的免疫原組合物中能夠在遠端腸粘膜的位置加強粘膜免疫反應。

此外，下列結果顯示依據特異性IgG(表G，第6圖)和特異性IgA(表H，第7圖)在血液樣品中的表達量測量值來看，PIKA佐劑存在於該通過粘膜給予的免疫原組合物中能夠加強系統性免疫反應。

製備脾臟細胞的懸浮液，並將來自於各只小鼠的細胞懸浮液的樣品置入ELISPOT培養板的6－12孔中並加以培養。該ELISPOT培養板的各孔容納有200μl的脾細胞懸浮液，等於每孔約有2.5 x 10⁵ 個細胞。對於各只小鼠的脾細胞培養樣品來說，半數含有脾細胞的孔是以培養基來培育，另外半數的孔是利用流感抗原進行刺激。培養板是在環境受控制的條件下於37℃培育20小時之後，再進行最後準備並利用標準型ELISPOT培養板讀數機來讀取資料。

下表I(也請參見第8圖)的結果顯示每個孔中産生IL－2的細胞數目。相較於單獨給予PIKA或流感抗原，給予含有PIKA和流感抗原的免疫原物質所誘導的IL－2産生性細胞水平顯著較高。這個結果指出抗原和PIKA能誘導T細胞免疫反應。

實施例3：給予PIKA和流感抗原所誘導的粘膜和系統性免疫反應

這個實施例顯示將一種含有PIKA和流感抗原的免疫原物質給予粘膜表面之後能誘導強烈的抗原特異性粘膜和系統性體液免疫反應以及T細胞免疫反應。

5個balb/c小鼠的群組(每組各含3只)在第0天、第14天和第30天時被接種以下表所敍述的組合物。所使用的流感抗原是來自於Sanofi Pasteur藥廠且經過許可供人體使用的滅活裂解型純化流感抗原疫苗VAXIGRIP，該疫苗含有類H1N1、H3N2病毒株和b/Shanghai5/361/2002病毒株。

在第三次免疫之後第14天收集血液樣品並以ELISA法檢驗特異性血清IgG的存在量。

在第三次免疫之後第14天處死小鼠，並摘取肺臟和腸，加以切片並洗滌以取得上清液。以ELISA法檢驗所得上清液中的特異性分泌型IgA存在量。

表J(第9圖)中所呈現的結果顯示，依據特異性分泌型IgA在肺粘膜表面的表達量測量值來看，PIKA存在於該通過粘膜給予的免疫原組合物中能夠在肺臟中加強粘膜免疫反應。以鼻內給予Al(OH)₃ 和抗原來進行免疫無法誘導肺粘膜表面産生分泌型IgA。

表K(第10圖)中所呈現的結果顯示，依據特異性分泌型IgA在腸粘膜表面的表達量測量值來看，PIKA存在於該通過粘膜給予的免疫原組合物中能夠在腸內加強粘膜免疫反應。以鼻內給予Al(OH)₃ 和抗原來進行免疫無法誘導腸粘膜表面産生分泌型IgA。

製備脾臟細胞的懸浮液，並將來自於各只小鼠的細胞懸浮液的樣品置入ELISPOT培養板的6孔中並加以培養。該ELISPOT培養板的各孔容納有200μl的脾細胞懸浮液，等於每孔約有3.0 x 10⁵ 個細胞。對於各只小鼠的脾細胞培養樣品來說，半數含有脾細胞的孔是以培養基來培育，另外半數的孔是利用流感抗原進行刺激。培養板是在37℃、5% CO₂ 下培育20小時之後，再進行最後準備並利用標準型ELISPOT培養板讀數機來讀取資料。

下表L(也請參見第11圖)的結果顯示每1.0 x 10⁶ 個脾細胞中産生IFN－γ的細胞數目。相較於單獨給予PIKA或流感抗原，給予含有PIKA和流感抗原的免疫原物質所誘導的産生IFN－γ的細胞水平顯著較高。

下表M(也請參見第12圖)的結果顯示每1.0 x 10⁶ 個脾細胞中産生IL－2的細胞數目。相較於單獨給予PIKA或流感抗原，給予含有PIKA和流感抗原的免疫原物質所誘導的産生IL－2的細胞水平顯著較高。

PIKA誘導脾細胞增加生産IFN－γ和IL－2的能力指出以鼻內給予和皮下注射抗原和PIKA來進行免疫能夠誘導強烈的T細胞免疫反應。以鼻內給予Al(OH)₃ 和抗原來進行免疫無法較單獨給予抗原進一步促進T細胞反應。

但是，當鼻內給予或皮下注射Al(OH)₃ 和抗原時無法促進加強的T細胞免疫反應。

第1圖－以含有PIKA和/或滅活型完全SARS抗原的疫苗進行免疫之後，利用ELISA法檢測肺臟上清液的特異性－分泌型IgA效價；第2圖－以含有PIKA和/或滅活型完全SARS抗原的疫苗進行免疫之後，利用ELISA法檢測血清的特異性IgA效價；第3圖－以含有PIKA和/或滅活型完全SARS抗原的疫苗進行免疫之後，利用ELISA法檢測血清的特異性IgG效價；第4圖－以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原(inactivated split influenza antigen)的疫苗進行免疫之後，利用ELISA法檢測肺臟上清液的特異性分泌型IgA效價；第5圖－以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗進行免疫之後，利用ELISA法檢測腸上清液特異性分泌型IgA效價；第6圖－以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗進行免疫化之後，利用ELISA法檢測血清特異性IgG效價；第7圖－以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗進行免疫之後，利用ELISA法檢測血清特異性IgA效價；第8圖－以含有PIKA和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗進行免疫之後，利用ELISPOT法來檢測産生IL－2的小鼠脾細胞；第9圖－以含有PIKA或Al(OH)₃ 和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗進行免疫之後，利用ELISA法檢測肺臟上清液(稀釋32倍)的特異性分泌型IgA；第10圖－以含有PIKA或Al(OH)₃ 和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗進行免疫之後，利用ELISA法檢測腸上清液內(稀釋32倍)的特異性分泌型IgA；第11圖－以含有PIKA或鋁佐劑(alum)和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗進行免疫之後，利用ELISPOT法來檢測産生IFN－γ的小鼠脾細胞；第12圖－以含有PIKA或鋁佐劑(alum)和/或滅活裂解型流感抗原的疫苗進行免疫之後，利用ELISPOT法來檢測産生IL－2的小鼠脾細胞。

Claims (20)

1. 一種免疫原組合物，其包含：(a)聚核苷酸佐劑，該佐劑包含：聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(PIC)、至少一種抗生素以及至少一種正價離子；(b)至少一種抗原；其中該組合物被配製成供粘膜給予之用，其中該組合物包含聚核苷酸佐劑組合物，該聚核苷酸佐劑組合物中的分子在分子量上是異質的，其中該分子量為至少66,000道爾頓。
2. 一種免疫原組合物，其包含：(a)聚核苷酸佐劑，該佐劑包含：聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(PIC)、至少一種抗生素以及至少一種正價離子；(b)至少一種抗原；其中該組合物被配製成供粘膜給予之用，其中該組合物包含聚核苷酸佐劑組合物，該聚核苷酸佐劑組合物中的分子在分子量上是異質的，其中該分子量為約66,000道爾頓至1,200,000道爾頓。
3. 一種免疫原組合物，其包含：(a)聚核苷酸佐劑，該佐劑包含：聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(PIC)、至少一種抗生素以及至少一種正價離子；(b)至少一種抗原；其中該組合物被配製成供粘膜給予之用，其中該組合物包含聚核苷酸佐劑組合物，該聚核苷酸佐劑組合物中的分子在分子量上是異質的，其中該分子量為至少150,000道爾頓。
4. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所述的免疫原組合物，其中該免疫原組合物進一步包含至少一種免疫調控劑。
5. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所述的免疫原組合 物，其中該免疫原組合物進一步包含一種免疫原組合物，其包含：(a)聚核苷酸佐劑，該佐劑包含：聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(PIC)、至少一種抗生素以及至少一種正價離子；(b)至少一種抗原；其中該組合物被配製成供粘膜給予之用，以及至少一種促進粘膜吸收的成分。
6. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所述的免疫原組合物，其中該免疫原組合物或是該免疫原組合物中所含有的佐劑是呈現液體、液態溶液、液滴、固體、膠囊、乳劑、懸浮液、酏劑、油膏、栓劑、凝膠、軟膠囊、噴劑、吸入劑、氣霧劑、片劑、包衣片、丸劑、糖衣錠、粉末、糖漿、漿液、微型膠囊、灌腸劑、顆粒或菱錠的形式。
7. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所述的免疫原組合物，其中該佐劑組合物或該免疫原組合物中的至少一者被冷凍乾燥。
8. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所述的免疫原組合物，其中該免疫原組合物是通過吸入、直腸傳輸、陰道傳輸、鼻部傳輸、口部傳輸、肺部傳輸、眼部傳輸、局部傳輸、眼球傳輸或透皮傳輸來給予。
9. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所述的免疫原組合物，其用以加強宿主的粘膜免疫反應。
10. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所述的免疫原組合物，其用以加強宿主的粘膜和系統性免疫反應。
11. 一種如申請專利範圍第1至3項中任一項所述的免疫原組合物或該免疫原組合物中所含佐劑在製造用以加強 宿主的粘膜免疫反應的藥物上的用途。
12. 如申請專利範圍第11項所述的用途，其該藥物用以加強宿主的粘膜和系統性免疫反應。
13. 如申請專利範圍第11項所述的用途，其中該藥物是用以加強局部和遠端位置的粘膜免疫反應。
14. 一種如申請專利範圍第1至3項中任一項所述的免疫原組合物或該免疫原組合物中所含佐劑在製造用以誘導宿主的T細胞免疫反應的藥物上的用途。
15. 如申請專利範圍第11至14項中任一項所述的用途，其中該藥物是通過吸入、直腸傳輸、陰道傳輸、鼻部傳輸、口部傳輸、肺部傳輸、眼部傳輸、局部傳輸、眼球傳輸或透皮傳輸來給予。
16. 如申請專利範圍第11至14項中任一項所述的用途，其中該宿主罹患傳染病，並且通過給予該抗原化合物激發免疫反應以對抗引起該傳染病的病原體。
17. 一種組合套裝，其包含如申請專利範圍第1至3項中任一項所述的免疫原組合物。
18. 一種傳輸系統，其包含如申請專利範圍第1至3項中任一項所述的免疫原組合物，其中該傳輸系統促進該免疫原組合物傳輸至粘膜表面。
19. 如申請專利範圍第11至14項中任一項所述的用途，其中該宿主是人類。
20. 如申請專利範圍第11至14項中任一項所述的用途，其中該宿主是非人類動物。