JP2021521868A - 高麗人参の実多糖体を含むインフルエンザウイルス感染の予防又は抑制用組成物 - Google Patents

Abstract

本明細書は、高麗人参の実多糖体を有効成分として含むインフルエンザウイルス感染の予防又は抑制用組成物に関して記述する。前記高麗人参の実多糖体は、特定の成分及び構造によってインフルエンザウイルスの活性又は感染阻害効果を奏し、具体的に、ノイラミニダーゼ活性阻害効果に優れる。
【選択図】図１４

Description

本明細書は、高麗人参の実多糖体を含むインフルエンザウイルス感染の予防又は抑制用組成物に関して記述する。

インフルエンザは、感染の初期症状が一般の風邪（急性ウイルス性鼻咽頭炎）と症状が似ていてひどい風邪とも呼ばれるが、風邪とはその原因や病症が全く異なる疾病である。主にライノウイルス（ｒｈｉｎｏｖｉｒｕｓ）、コロナウイルス（ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）、アデノウイルス（ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）、呼吸系発疹ウイルス（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ）などによって誘発される風邪とは異なり、インフルエンザはインフルエンザウイルスによって誘発される。

インフルエンザは、高熱、寒気、筋肉痛、関節痛といったような深刻な病症を引き起こし、且つ高熱や合併症の発病危険が高いため死亡にも至らせることがある。高病原性又は高感染性の新型や変異型インフルエンザウイルスによるパンデミックインフルエンザ（ｐａｎｄｅｍｉｃ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）が発生すれば多くの死亡者が出る危険性があり、これに対する対策が必要な実情である。

インフルエンザの治療は、インフルエンザウイルスそのものをターゲットにしてウイルスの活性や感染メカニズムを直接的に遮断することによって可能となる。インフルエンザの治療剤としてＭ２抑制剤であるアマンタジン（ａｍａｎｔａｄｉｎｅ）とリマンタジン（ｒｉｍａｎｔａｄｉｎｅ）、ノイラミニダーゼ（ｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅ、ＮＡ）抑制剤であるザナミビル（ｚａｎａｍｉｖｉｒ、Ｒｅｌｅｎｚａ(登録商標)）とタミフル（ｏｓｅｌｔａｍｉｖｉｒ、Ｔａｍｉｆｌｕ(登録商標)）が常用され、Ｍ２抑制剤はＡ型インフルエンザウイルスだけに作用し、ＮＡ抑制剤はＡ型及びＢ型インフルエンザウイルスに効果を奏する。タミフルの場合、悪心、嘔吐、神経系や精神系の異常などの副作用をもっており、タミフルを含む前記常用治療剤に対する耐性の様相が報告されたことがある。

そこで、インフルエンザウイルス感染を予防し又は抑制して治療する効果に優れ且つ副作用や耐性のない素材についての要求が存在する。

中国特許出願公開第１０３７０５５６１号公報

一観点において、本発明が解決しようとする課題は副作用なしに効果的にインフルエンザ感染を予防又は抑制する組成物を提供することである。

他の観点において、本発明が解決しようとする課題は、インフルエンザターゲット治療剤として作用する組成物を提供することである。

また他の観点において、本発明が解決しようとする課題は、インフルエンザウイルスの感染メカニズムを遮断してインフルエンザウイルス感染を予防又は抑制することができる組成物を提供することである。

また他の観点において、本発明が解決しようとする課題は、ノイラミニダーゼ活性を抑制してインフルエンザウイルス感染を抑制する効果を奏する組成物を提供することである。

また他の観点において、本発明が解決しようとする課題は、Ａ型及びＢ型インフルエンザウイルスの双方に作用可能なインフルエンザウイルス感染の予防又は抑制用組成物を提供することである。

また他の観点において、本発明が解決しようとする課題は、低い投与量で顕著に優れたインフルエンザウイルス感染の予防又は抑制効果を奏する組成物を提供することである。

また他の観点において、本発明が解決しようとする課題は、天然物であって副作用がないか低く、且つ耐性のないインフルエンザ感染の予防又は抑制用組成物を提供することである。

一実施例において、本発明は、高麗人参の実多糖体を含むインフルエンザウイルス感染の予防又は抑制用組成物を提供する。

一観点において、本発明は、副作用なしに効果的にインフルエンザ感染を予防又は抑制する組成物を提供することができる。

他の観点において、本発明は、インフルエンザターゲット治療剤として作用する組成物を提供することができる。

また他の観点において、本発明は、インフルエンザウイルスの感染メカニズムを遮断してインフルエンザウイルス感染を予防又は抑制することができる組成物を提供することができる。

また他の観点において、本発明は、ノイラミニダーゼ活性を抑制してインフルエンザウイルス感染を抑制する効果を奏する組成物を提供することができる。

また他の観点において、本発明は、Ａ型及びＢ型インフルエンザウイルスの双方に作用可能なインフルエンザウイルス感染の予防又は抑制用組成物を提供することができる。

また他の観点において、本発明は、低い投与量で顕著に優れたインフルエンザウイルス感染の予防又は抑制効果を奏する組成物を提供することができる。

また他の観点において、本発明は、天然物であって副作用がないか低く、且つ耐性のないインフルエンザ感染の予防又は抑制用組成物を提供することができる。

従来のインフルエンザ治療剤のインフルエンザ阻害メカニズムを示した模式図であって、ヘマグルチニン（ｈａｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）阻害（ａ）、ｍＲＮＡ合成阻害（ｂ）、ノイラミニダーゼ（ｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅ）阻害（ｃ）を示す。 β−グルコシルヤリブ試薬によってアラビノガラクタンを検出する反応を模式的に示したものである。 高麗人参の実水溶性物質の分画を示したグラフである。 高麗人参の実多糖体のクロマトグラフィー結果を示したグラフである。 標準物質、高麗人参の実多糖体、及び紅参の根多糖体のβ−グルコシルヤリブ試薬処理によるリーゼガング環を示した写真である。 標準物質、高麗人参の実多糖体、及び紅参の根多糖体のβ−グルコシルヤリブ試薬処理によるリーゼガング環の面積を比較して示したグラフである。 ＣＶＴ処理群へのＮＷＳウイルスの接種時のノイラミニダーゼ活性阻害効果を確認したグラフである。 高麗人参の実多糖体処理群へのＮＷＳウイルスの接種時のノイラミニダーゼ活性阻害効果を確認したグラフである。 ＣＶＴ処理群へのＣＡウイルスの接種時のノイラミニダーゼ活性阻害効果を確認したグラフである。 高麗人参の実多糖体処理群へのＣＡウイルスの接種時のノイラミニダーゼ活性阻害効果を確認したグラフである。 試験例４の動物モデルにおけるインフルエンザ感染実験スケジュールを示した模式図である。 ウイルスを接種してから３日後の肺病変指標を示したグラフである。 ウイルスを接種してから５日後の肺病変指標を示したグラフである。 ウイルスを接種してから７日後の肺病変指標を示したグラフである。 高麗人参の実多糖体を投与した場合の、ウイルスを接種してから３日後の肺病変組織写真を示したものである。 ＣＶＴ投与群、陽性対照群、及び陰性対照群の、ウイルスを接種してから７日後の肺病変組織写真を示したものである。 高麗人参の実多糖体を投与した場合の、ウイルスを接種してから３日後の肺病変組織写真を示したものである。 ＣＶＴ投与群、陽性対照群、及び陰性対照群の、ウイルスを接種してから７日後の肺病変組織写真を示したものである。 ウイルスを接種してから３日後のウイルス感染水準を確認したＲＴ−ＰＣＲ結果である。 ウイルスを接種してから５日後のウイルス感染水準を確認したＲＴ−ＰＣＲ結果である。 ウイルスを接種してから７日後のウイルス感染水準を確認したＲＴ−ＰＣＲ結果である。

以下、添付の図面を参照して、本出願の実施例をより詳細に説明することにする。なお、本出願に開示された技術はここで説明される実施例に限定されるものではなく、他の形態に具体化することもできる。ここで紹介される実施例は、単に開示された内容が徹底且つ完全なものになるように、また当業者に本出願の思想を十分に伝えられるようにするために提供されるものである。図面では各構成要素を明確に表現するために構成要素の幅や厚さなどの大きさをやや拡大して示した。また、説明の便宜上、構成要素の一部のみを図示したりもしているが、当業者であれば構成要素の残りの部分についても容易に把握できるはずである。さらに、当該分野における通常の知識を有する者であれば本出願の技術的思想を逸脱しない範囲内で本出願の思想を多様な他の形態に具現できるはずである。

本発明の一実施例によれば、高麗人参の実多糖体を有効成分として含むインフルエンザウイルス感染の予防又は抑制用組成物を提供することができる。高麗人参の実多糖体は、特定の成分及び構造によってインフルエンザウイルスの活性又は感染阻害効果を奏し、具体的に、ノイラミニダーゼ活性阻害効果に優れる。これにより、本発明の実施例による組成物は、顕著に優れたインフルエンザウイルス感染の予防又は抑制効果を奏することができる。

インフルエンザウイルスはＡ、Ｂ、Ｃ型などに分類され、Ａ型及びＢ型が一般的であり、最も流行っている種類はＡ型インフルエンザウイルスである。Ａ型インフルエンザウイルスはＯｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅに属するエンベロープ（ｅｎｖｅｌｏｐｅ）を有する一本鎖ネガティブ鎖ＲＮＡ（ｓｉｎｇｌｅ−ｓｔａｎｄｅｄ ｎｅｇａｔｉｖｅ−ｓｅｎｓｅ ＲＮＡ）ウイルスであって、表面抗原である１６種のヘマグルチニン（Ｈａｅｍａｇｌｕｔｉｎｉｎｅ）（Ｈ１〜Ｈ１６）と９種のノイラミニダーゼ（Ｎｅｕｒａｍｉｎａｓｅ）（Ｎ１〜Ｎ９）によって亜型が決められる。

図１は、従来のインフルエンザ治療剤であるアマンタジン（ａｍａｎｔａｄｉｎｅ）とザナミビル（ｚａｎａｍｉｖｉｒ、Ｒｅｌｅｎｚａ(登録商標)）、タミフル（ｏｓｅｌｔａｍｉｖｉｒ、Ｔａｍｉｆｌｕ(登録商標)）、リバビリン（ｒｉｂａｖｉｒｉｎ）のインフルエンザウイルス生活周期阻害メカニズムを示す。インフルエンザウイルスターゲッティング治療剤の代表的阻害メカニズムは、（ａ）ウイルスの細胞浸透に関与するヘマグルチニン（ｈａｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）阻害、（ｂ）ｍＲＮＡ合成阻害、及び（ｃ）ウイルス放出のためのノイラミニダーゼ（ｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅ）阻害が挙げられる。

本発明の一実施例に係る高麗人参の実多糖体は、前記ノイラミニダーゼ活性を阻害して感染された細胞からインフルエンザウイルスが放出できないようにするので、他の細胞を感染させることを防ぐことができる。

本発明の一実施例に係る高麗人参の実多糖体は、インフルエンザウイルスの増殖を阻害して抗ウイルス効果を奏し、これにより、インフルエンザウイルス感染の予防、抑制、又は治療効果を奏することができる。

前記インフルエンザウイルスは、前記高麗人参の実多糖体のノイラミニダーゼ活性抑制作用によって感染が予防又は抑制されるインフルエンザウイルスであって、例えば、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、又はＣ型インフルエンザウイルスのうちの一種以上であってよい。前記インフルエンザウイルスは、Ａ型インフルエンザウイルスであってよく、例えば、Ｈ１Ｎ１、Ｈ１Ｎ２、Ｈ２Ｎ２、Ｈ３Ｎ２、Ｈ５Ｎ１、Ｈ６Ｎ１、Ｈ７Ｎ２、Ｈ７Ｎ３、Ｈ７Ｎ７、Ｈ７Ｎ９、Ｈ９Ｎ２、又はＨ１０Ｎ７のうちの一種以上のインフルエンザウイルスであってよい。

高麗人参の実多糖体は、高麗人参（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ.ａ. Ｍｅｙｅｒ）の地上部のうち実の部位に由来した多糖成分であってよい。一例において、前記高麗人参の実は、高麗人参の実の果肉、果皮、または果肉及び果皮の両方を含む部位であってよい。

前記高麗人参の実多糖体は、高麗人参の実をエタノールを用いて抽出した後、エタノールに溶解していない抽出不可溶成分から得ることができる。例えば、前記エタノール抽出不可溶成分を、水を用いて抽出して水溶性成分のみを選り出すことができ、該水溶性成分に含まれている高麗人参の実多糖体を有効成分として用いてよい。例えば、前記水溶性成分を濃縮し、エタノールで沈澱させた後、低分子量成分を除去して、高麗人参の実多糖体を得ることができる。

例えば、種を取り除いた高麗人参の実を５０〜１００％エタノールを用いて抽出した後、抽出不可溶成分を体積３〜１０倍の水で加温抽出して水溶性抽出物を得る。水溶性抽出物を固形分が１０〜５０重量％になるように濃縮し、これに体積２〜５倍のエタノールを用いて沈澱させた後、分画分子量（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｗｅｉｇｈｔ Ｃｕｔ ｏｆｆ）１０,０００〜３０,０００で分離して低分子量成分を除去して高麗人参の実多糖体を得ることができる。前記低分子量成分の除去は、限外ろ過膜を用いた限外ろ過などのろ過、透析、２〜１０倍体積の５０〜１００％エタノールによる１〜１０回の繰り返しの溶解処理などによって行ってよい。一例において、前記低分子量成分の除去後に乾燥を行ってよい。前記乾燥は、凍結、熱風、噴霧又は真空処理などによって行ってよい。

一例において、前記高麗人参の実の水溶性成分を水抽出する前に酵素処理をさらに含んでよい。前記酵素は、食品に用いられる酵素であれば制限されずに使用可能であるが、例えば、アミラーゼ、プロテアーゼ、ペクチナーゼ、リパーゼ、セルラーゼ、キシラナーゼ、β−グルカナーゼ、又はプルラナーゼから選ばれたものであってよい。前記酵素処理では、例えば、４０〜６０℃で１０〜６０分間酵素と反応させてよい。

前記高麗人参の実多糖体は、アラビノース、ガラクトース、ガラクツロン酸、及びグルクロン酸を含んでよい。

一例において、前記多糖体の総重量に対して、ガラクツロン酸及びグルクロン酸を合計含量で０．１重量％以上、０．２重量％以上、０．３重量％以上、０．４重量％以上、０．５重量％以上、０．６重量％以上、０．７重量％以上、０．８重量％以上、０．９重量％以上、１重量％以上、２重量％以上、３重量％以上、４重量％以上、５重量％以上、６重量％以上、７重量％以上、８重量％以上、９重量％以上、又は１０重量％以上であり、且つ２５重量％以下、２４重量％以下、２３重量％以下、２２重量％以下、２１重量％以下、２０重量％以下、１９重量％以下、１８重量％以下、１７重量％以下、１６重量％以下、１５重量％以下、１４重量％以下、１３重量％以下、１２重量％以下、１１重量％以下、１０重量％以下、９重量％以下、８重量％以下、７重量％以下、６重量％以下、５重量％以下、又は４重量％以下で含んでよい。例えば、前記含量は、０．１重量％〜２５重量％、又は０．５重量％〜２０重量％の範囲であってよい。

前記ガラクツロン酸は、多糖体の総重量に対して、０．１重量％以上、０．２重量％以上、０．３重量％以上、０．４重量％以上、０．５重量％以上、０．６重量％以上、０．７重量％以上、０．８重量％以上、０．９重量％以上、１重量％以上、２重量％以上、３重量％以上、４重量％以上、５重量％以上、６重量％以上、７重量％以上、８重量％以上、９重量％以上、又は１０重量％以上であり、且つ２０重量％以下、１９重量％以下、１８重量％以下、１７重量％以下、１６重量％以下、１５重量％以下、１４重量％以下、１３重量％以下、１２重量％以下、１１重量％以下、１０重量％以下、９重量％以下、８重量％以下、７重量％以下、６重量％以下、５重量％以下、又は４重量％以下で含んでよい。前記含量は、例えば、０．１重量％〜２０重量％、０．１重量％〜１５重量％、１重量％〜５重量％、５重量％〜１５重量％、又は０．５重量％〜５重量％の範囲であってよい。

前記グルクロン酸は、多糖体の総重量に対して、０．１重量％以上、０．２重量％以上、０．３重量％以上、０．４重量％以上、０．５重量％以上、０．６重量％以上、０．７重量％以上、０．８重量％以上、０．９重量％以上、１重量％以上、２重量％以上、３重量％以上、４重量％以上、５重量％以上、６重量％以上、又は７重量％以上であり、且つ１０重量％以下、９重量％以下、８重量％以下、７重量％以下、６重量％以下、５重量％以下、又は４重量％以下で含んでよい。前記含量は、例えば、０．１重量％〜１０重量％、０．５重量％〜５重量％、又は０．１重量％〜５重量％の範囲であってよい。

一例において、前記アラビノースは、多糖体の総重量に対して、２重量％〜３０重量％の範囲で含んでよい。

一例において、前記ガラクトースは、多糖体の総重量に対して、５重量％〜５０重量％の範囲で含んでよい。

前記高麗人参の実多糖体は、アラビノガラクタン（ａｒａｂｉｎｏｇａｌａｃｔａｎ）構造を高い割合で含む。アラビノガラクタン構造の検出の際は、β−グルコシルヤリブ試薬（β−ｇｌｕｃｏｓｙｌ Ｙａｒｉｖ ｒｅａｇｅｎｔ）を用いてよい。図２にβ−グルコシルヤリブ試薬によってアラビノガラクタンを検出する反応を模式的に示す。β−グルコシルヤリブ試薬は、１,３,５−ｔｒｉ−（β−グルコピラノシル−オキシフェニルアゾ）−２,４,６−トリヒドロキシベンゼン（４−１,３,５−ｔｒｉ−（４−β−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌｏｘｙｐｈｅｎｙｌａｚｏ）−２,４,６−ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｅｎｅ）であって、アラビノガラクタンのうちのＩＩ型のアラビノ−β−３,６−ガラクタン（ａｒａｂｉｎｏ−β−３,６−ｇａｌａｃｔａｎ）と特異的に反応して赤色沈澱を形成する。β−グルコシルヤリブ試薬を処理して生成される赤色リーゼガング環の面積とアラビノガラクタン構造の含有濃度は濃度依存的に比例する。前記高麗人参の実多糖体は、同一濃度の標準アラビノ−β−３,６−ガラクタン（ａｒａｂｉｎｏ−β−３,６−ｇａｌａｃｔａｎ）で生成されるリーゼガング環の大きさを１００％としたとき、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、又は８０％以上であり、且つ９０％以下、８０％以下、７０％以下、又は６０％以下の大きさのリーゼガング環面積を示してよい。例えば、前記リーゼガング環面積は、５０％〜９０％、５０％〜８０％の範囲であってよい。

前記高麗人参の実多糖体の重量平均分子量は、１０ｋＤａ以上であってよい。前記高麗人参の実多糖体は、分子量７０ｋＤａ〜８０ｋＤａで主ピーク（ｐｅａｋ）を有してよい。

前記高麗人参の実多糖体は、種々の多糖成分の総合体であって、含まれる成分の組み合わせによる相乗効果によって顕著なインフルエンザウイルスの活性又は感染阻害効果を奏し、具体的に、ノイラミニダーゼ活性阻害効果に優れる。

本発明の実施例に係る組成物は、前記有効成分を含む種々の形態の食品添加剤又は機能性食品として提供されてよい。前記有効成分を含む発酵乳、チーズ、ヨーグルト、ジュース、生菌製剤、及び健康食品などとして加工されてよく、その他、種々の食品添加剤の形態で用いられてよい。

本発明の実施例に係る組成物は健康食品用組成物であってよい。

本発明の実施例に係る健康食品用組成物は、前記有効成分を組成物の総重量に対して、０．０００１重量％〜９９重量％、例えば、０．０１重量％〜６０重量％の範囲で含んでよいが、これに制限されない。

本実施例に係る健康食品用組成物は、有効成分を基準にして一日に体重１ｋｇ当たり０．００１〜５００ｍｇ、例えば、０．００５〜１００ｍｇ、０．０１〜５０ｍｇ、０．０１〜１０ｍｇの範囲の量で投与できるように１〜数回に分けて提供されてよい。前記組成物は、有効成分を前記のような少量使用でも上述した効果を有意に奏することができる。

具体例において、前記健康食品用組成物は、丸剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、キャラメル剤、又はドリンク剤などで剤形化することができる。他の具体例において、液剤、粉末、顆粒、錠剤、又はティーバッグなどの形態で加工されてもよい。

前記組成物は、単純飲用、注射投与、スプレー方式、又はスクイーズ方式などの様々な方法で投与されてよい。

前記組成物は、本発明の主効果を損なわない範囲内で主効果に相乗効果を与え得る他の成分などを含有してよい。例えば、物性改善のために、香料、色素、殺菌剤、酸化防止剤、防腐剤、保湿剤、増粘剤、無機塩類、乳化剤、及び合成高分子物質などの添加剤をさらに含んでよい。その他にも、水溶性ビタミン、油溶性ビタミン、高分子ペプチド、高分子多糖、及び海草エキスなどの補助成分をさらに含んでよい。前記成分は、剤形又は使用目的に応じて当業者が適宜選定して配合してよく、その添加量は、本発明の目的及び効果を損なわない範囲内で選択されてよい。例えば、前記成分の添加量は、組成物の全重量を基準に、０．０１重量％〜５重量％、例えば、０．０１重量％〜３重量％の範囲であってよいが、これに制限されることではない。

本発明一実施例において、前記組成物は薬学組成物であってよい。

本実施例において、前記組成物は、高麗人参の実多糖体を含んでインフルエンザウイルスの感染予防、感染減少、又はインフルエンザの治療が可能な組成物であってよい。

一例において、前記組成物は、インフルエンザウイルス感染による疾患の予防又は治療用組成物であってよい。前記インフルエンザウイルス感染による疾患は、ひどい風邪、咽喉炎、気管支炎、及び肺炎などを含んでよいが、これらに制限されない。

前記薬学組成物は、経口又は非経口の種々の剤形であってよい。製剤化する場合には、通常用いる充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩解剤、界面活性剤などの希釈剤又は賦形剤を用いて調剤される。経口投与のための固形製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、軟質又は硬質カプセル剤などが含まれ、これらの固形製剤は、一種以上の化合物に少なくとも一種以上の賦形剤、例えば、澱粉、炭酸カルシウム、スクロース（ｓｕｃｒｏｓｅ）又はラクトース（ｌａｃｔｏｓｅ）、ゼラチンなどを混ぜて調剤される。また、単純な賦形剤の他、ステアリン酸マグネシウム、タルクなどといった潤滑剤も用いられる。経口投与のための液状製剤としては、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤などが該当するが、よく用いられる単純希釈剤である水、リキッドパラフィンの他、種々の賦形剤、例えば、湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが含まれてよい。非経口投与のための製剤には、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、坐剤が含まれる。非水性溶剤、懸濁溶剤としては、プロピレングリコール（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ）、ポリエチレングリコール、オリーブオイルなどの植物性油、オレイン酸エチルなどの注射可能なエステルなどが用いられてよい。坐剤の基剤としては、ウィテプゾール（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、マクロゴール、トゥイーン（ｔｗｅｅｎ）６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチンなどが用いられてよい。

本明細書に係る組成物の薬学的投与形態は、これらの薬学的に許容可能な塩の形態で用いられてもよく、また、単独で、又は他の薬学的活性化合物との結合だけでなく適切な集合で用いられてよい。前記塩としては、薬学的に許容されるものであれば特に限定されず、例えば、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、フッ化水素酸、臭化水素酸、ギ酸、酢酸、酒石酸、乳酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸などを用いてよい。

本明細書に係る組成物は、目的とするところに応じて、非経口投与又は経口投与してよく、一日に体重１ｋｇ当たり０．００１〜５００ｍｇ、例えば、０．００５〜１００ｍｇ、０．０１ｍｇ〜１０ｍｇの範囲の量で１回〜数回に分けて投与していてよい。特定の患者に対する投与用量は、患者の体重、年齢、性別、健康状態、食餌、投与時間、投与方法、排泄率、疾患の重症度などに応じて変えてよい。

本明細書に係る薬学組成物は、それぞれ通常の方法に従って、散剤、顆粒剤、錠剤、軟質または硬質カプセル剤、懸濁液、エマルジョン、シロップ、エアロゾルなどの経口型剤形、軟膏、クリームなどの皮膚外用剤、坐剤、注射剤、及び滅菌注射溶液などをはじめ、薬剤学的製剤に適合した如何なる形態で剤形化して用いられてもよい。

本発明の他の実施例によれば、前記高麗人参の実多糖体のインフルエンザウイルス感染の予防又は抑制用途を提供することができる。前記用途は、インフルエンザ感染の減少用途又はインフルエンザを治療する用途、又はインフルエンザウイルス感染による疾患の予防用途又は治療用途を含んでよい。高麗人参の実多糖体と効果、投与形態などに関しては上述した通りであるため、それらに関する説明を省略する。

本発明また他の実施例によれば、前記高麗人参の実多糖体を含むインフルエンザウイルス感染の予防用又は抑制用組成物を製造するための高麗人参の実多糖体の用途であってよい。前記用途は、インフルエンザ感染の減少用途又はインフルエンザを治療する用途、又はインフルエンザウイルス感染による疾患の予防用途又は治療用途を含んでよい。高麗人参の実多糖体と効果、投与形態などに関しては上述した通りであるため、それらに関する説明を省略する。

本発明また他の実施例によれば、前記高麗人参の実多糖体を対象に投与することを含むインフルエンザウイルス感染の予防方法、インフルエンザウイルスの抑制方法、インフルエンザ感染の減少方法、又はインフルエンザの治療方法を提供することができる。これらの方法は、インフルエンザウイルス感染による疾患の予防方法又は治療方法を含んでよい。これらの方法は、高麗人参の実多糖体を含む上述したような組成物を対象に投与することを含んでよい。高麗人参の実多糖体と効果、投与形態などに関しては上述した通りであるため、それらに関する説明を省略する。

一例において、前記方法は、インフルエンザウイルスの抑制、インフルエンザ感染の減少、又はインフルエンザの治療を必要とする対象に高麗人参の実多糖体を投与することを含んでよい。前記投与は、有効量の高麗人参の実多糖体を対象に投与することを含んでよい。

以下、実施例を挙げて本発明についてより具体的に説明する。なお、これらの実施例は、単に本発明を例示するためのものに過ぎず、本発明の範囲がこれらの実施例によって制限されると解釈されないことは当業界において通常の知識を有する者にとって自明であろう。

［製造例１］高麗人参の実多糖体の製造
種を取り除いた高麗人参の実を１０倍体積の９０％エタノールで抽出して水溶性成分を沈澱させ上澄液を除去した。沈澱された抽出不可溶成分を体積２０倍の水にて９０℃で５時間加温抽出した。抽出物を固形分が３０重量％になるように濃縮し、濃縮物の体積２倍の９０％エタノールを加えて沈澱させた。沈澱された水溶性成分の高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）結果を図３に示す。沈殿物を限外ろ過にかけて分画分子量（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｗｅｉｇｈｔ Ｃｕｔ ｏｆｆ）２０,０００で分離して低分子量成分を除去し、凍結乾燥して、７０〜８０ｋＤａの分子量を主ピーク（ｐｅａｋ）とする分子量１０ｋＤａ以上の高麗人参の実多糖体を得た。製造された高麗人参の実多糖体の高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）結果は図４に示す。

［製造例２］紅参多糖体の製造
高麗人参の実に代えて紅参根を用いたことを除いては、前記製造例１と同じ方法にて紅参多糖体を製造した。

［試験例１］アラビノガラクタンの検出
アラビノ−β−３,６−ガラクタンの存在を確認するためのβ−グルコシルヤリブ試薬（β−ｇｌｕｃｏｓｙｌ Ｙａｒｉｖ ｒｅａｇｅｎｔ；Ｂｉｏｓｕｐｐｌｉｅｓ、Ｐａｒｋｖｉｌｌｅ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）との反応性検討は、ＨｏｌｓｔとＣｌａｒｋｅの方法（Ｖａｎ Ｈｏｌｓｔ ＧＪ、Ｃｌａｒｋｅ ＡＥ. Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ−ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｐｌａｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｂｙ ｓｉｎｇｌｅ ｒａｄｉａｌ ｇｅｌ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ. Ａｎａｌ. Ｃｈｅｍ. １４８：４４６−４５０（１９８５））によってラジカルゲル拡散法（Ｓｉｎｇｌｅ ｒａｄｉｃａｌ ｇｅｌ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ）で測定した。

β−グルコシルヤリブ試薬１０μｇ／ｍｌを含有した０．１５Ｍ ＮａＣｌアガロース平板を調製し、直径２．５ｍｍのウェル（ｗｅｌｌ）を作り、濃度別に希釈した標準物質であるアラビアガム（ｇｕｍ Ａｒａｂｉｃ）と試料５μｇを含有した溶液をウェル（ｗｅｌｌ）にそれぞれ注入した。前記平板を湿潤状態で１５時間定置して反応させ、生成された赤色のリーゼガング環を観察してアラビノ−β−３,６−ガラクタンの存在の有無を確認し、試料とβ−グルコシルヤリブ試薬との反応性は生成されたリーゼガング環の広さを求めて相互比較した。試料としては、図５に示されるように、標準物質６２．５、１２５、２５０、５００及び１０００μｇ／ｍｌ、製造例１及び製造例２の多糖体をそれぞれ１００、５００及び１０００μｇ／ｍｌの濃度で用いた。

生成された赤色のリーゼガング環の面積を測定し、アラビノ−β−３,６−ガラクタンの相対含量を図６に示した。図６の結果は、標準物質１０００μｇ／ｍｌ濃度処理群に対して各試料１０００μｇ／ｍｌ処理群の面積を比較したものである。

図６の結果から、高麗人参の実多糖体は、紅参多糖体に比べ、２倍以上の高含量でアラビノガラクタン構造を含むことを確認することができる。

［試験例２］高麗人参の実多糖体のインフルエンザウイルス増殖抑制評価
イヌの腎臓細胞株であるＭＤＣＫ（Ｍａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙ ｃａｎｉｎｅ ｋｉｄｎｅｙ、ＡＴＣＣ：ＣＣＬ−３４）を用いて高麗人参の実多糖体の抗ウイルス効果を確認した。

９６−ウェルマイクロプレート（ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ）にＭＤＣＫ細胞を各ウェル当たり１×１０^５／ｗｅｌｌになるように入れ、ＥＭＥＭ培地（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ １００ ｕｎｉｔｓ、ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ １００μｇ、１０％ＦＢＳ）で培養した。ＭＤＣＫ細胞が単層（ｍｏｎｏｌａｙｅｒ）になると、抗生剤のみを含むＥＭＥＭ培地で２回洗浄した。Ｈ１Ｎ１菌株（Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ｖｉｒｕｓ ｓｕｂｔｙｐｅ／Ｈ１Ｎ１／ｐｄｍ）を１００ＴＣＩＤ５０になるように希釈しＥＰチューブに入れた。これに試料として前記製造例１の高麗人参の実多糖体（ＡＰＧＰ）を濃度別に希釈して各チューブに入れた後、４℃で１時間反応させた。陽性対照群の試料としてアメリカニンジン（Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ）抽出物であるＣＶＴ−Ｅ００２（ＣＯＬＤ−ＦＸ(登録商標)、以下、「ＣＶＴ」）を用いた。１時間後に前記反応液を予め洗浄したＭＤＣＫ細胞に一濃度当たり３ウェルずつそれぞれ接種して３５℃で１時間培養した。１時間後にプレートの培地を全て除去しＰＢＳで１回洗浄した後、抗生剤と１０μｇ／ｍＬトリプシンが添加されたＥＭＥＭ培地を各ウェルに１００ｍｌずつ分けて３７℃で４８〜７２時間培養した。

Ｈ１Ｎ１菌株に感染し試料を無処理した対照群において完全に細胞変性効果（Ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃ ｅｆｆｅｃｔ、ＣＰＥ）が現われるまで４８〜７２時間培養し、倒立顕微鏡で毎日細胞状態を観察した。細胞変性効果は、感染による細胞ラウンディング（ｒｏｕｎｄｉｎｇ）、脱離（ｄｅｔａｃｈｍｅｎｔ）後の死滅（ｄｅａｔｈ）を含む。培養４８〜７２時間後の細胞生存率を調べるために、Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ ｋｉｔ−８（Ｄｏｊｉｎ、Ｋｕｍａｎｏｔｏ、Ｊａｐａｎ、ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ ｓａｌｔ ＷＳＴ−８）を各ウェル当たり１０ｍｌずつ入れて３５℃で２時間反応させた後、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。

高麗人参の実多糖体の場合、０．７８１２５〜３．１２５ｍｇ／ｍｌの範囲内でインフルエンザウイルスを処理したときにＭＤＣＫ細胞の細胞変性効果（Ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃ ｅｆｆｅｃｔ、ＣＰＥ）が抑制されることを確認することができた。

前記表１は、試料別のＳＩ指数（Ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎｄｅｘ）を表す。ＣＣ_５０（５０％ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）値は、試料が５０％細胞死滅を誘導する濃度であって、数値が大きいほど安全な物質に該当し、ＥＣ_５０（５０％ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）値は、ウイルスが５０％抑制される濃度であって、数値が小さいほどウイルスを抑制する効能に優れることを示す。

ＳＩ指数が大きいほどウイルス増殖抑制効果に優れ、対照群であるＣＶＴの場合、抗ウイルス効果が全く奏されないのに対し、高麗人参の実多糖体の場合、７．９５の高い数値を示している。このような数値は、生物学的に知られた単独物質であるＥＧＣＧ（５．６）、レスベラトロール（２）（Ｋｉｍ、Ｙ．；Ｎａｒａｙａｎａｎ、Ｓ．；Ｃｈａｎｇ、Ｋ．Ｏ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｂｙ ｐｌａｎｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｉｓｏｑｕｅｒｃｅｔｉｎ。Ａｎｔｉｖｉｒ．Ｒｅｓ．２０１０，８８，２２７−２３５。）の場合よりも顕著に高い値であって、優れたインフルエンザウイルス抑制効果を奏することが分かる。

［試験例３］高麗人参の実多糖体のノイラミニダーゼ抑制分析
インフルエンザウイルスのようにウイルスの増殖にウイルス表面のノイラミニダーゼ（ＮＡ）タンパク質システムを用いるウイルスに対する抗ウイルス活性を測定する一つの指標として用いられる。ノイラミニダーゼ（ｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅ）活性抑制試験は、ＷＨＯ（Ｓｔａｎｄａｒｄ ｏｐｅｒａｔｉｎｇ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ）で推奨する方法に準拠して実施した。

２種の哺乳類由来のＨ１Ｎ１ウイルス菌株ＮＷＳ（Ａ／ＮＷＳ／３３）及びＣＡ（Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７/２００９）を用いてノイラミニダーゼ抑制ＩＣ５０で酵素抑制活性を分析した。前記ウイルス菌株は、ＥＭＥＭ（Ｅａｇｌｅ’ｓ ｍｉｎｉｍｕｍ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｍｅｄｉｕｍ）培地内でＭＤＣＫ細胞株に感染させた後、該細胞でウイルスを活性化させたウイルス培養液を用いた。試料として製造例１の高麗人参の実多糖体（ＡＰＧＰ）を用い、陽性対照群としてアメリカニンジン（Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ）抽出物であるＣＶＴ−Ｅ００２（ＣＯＬＤ−ＦＸ(登録商標)、以下、「ＣＶＴ」）を用い、試料の濃度別のノイラミニダーゼ活性抑制度を分析した。

濃度別の試料液（ＡＰＧＰ、ＣＶＴ）１０μｌとウイルス培養液５０μｌとを室温で４５分間反応させた後、２００μＭ ＭＵＮＡＮＡ基質（２’−（４−ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌ）−α−Ｄ−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｎｅｕｒａｍｉｎｉｃ ａｃｉｄ,）５０μｌを添加してから１時間反応させた後、８３％エタノールに０．１４Ｍ ＮａＯＨが溶かされた停止液１００μｌを添加して反応を終了させ、分光蛍光光度計（ｓｐｅｃｔｒｏｆｌｕｏｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ）（ＡＢＩ／Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）にてＥｘ．３６０ｎｍ／Ｅｍ．４４０ｎｍで蛍光（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）を測定して酵素活性抑制率を算出した。試料を添加していない無処理対照群の蛍光（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）値を１００％としたときの抑制率（％）を図７〜図１０に示す。

図７〜図１０の結果から、高麗人参の実多糖体は、ノイラミニダーゼ活性を濃度依存的に抑制し、そのＩＣ_５０値が陽性対照群であるＣＶＴに対して約１／４〜１／５の値を示しており、顕著に優れたノイラミニダーゼ活性抑制効果を奏することを確認することができる。

［試験例４］動物モデルにおけるインフルエンザウイルス感染実験
７週齢のマウス（ＳＰＦ ＢＡＬＢ／ｃ ｍｏｕｓｅ）に、マウス用ゾンデ（ｚｏｎｄｅ）を用いて、試料である高麗人参の実抽出物（ＡＰＧＰ）０．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、陽性対照群試料であるアメリカニンジン（Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ）抽出物であるＣＶＴ−Ｅ００２（ＣＯＬＤ−ＦＸ(登録商標)、以下、「ＣＶＴ」）２００ｍｇ／ｋｇを経口投与した。試料はウイルスの接種１４日前に投与し、ウイルスの接種前までに一日に１回ずつ投与した。インフルエンザウイルスの接種は、エーテルを用いて痲酔してから哺乳類インフルエンザウイルス（Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ｖｉｒｕｓ ｓｕｂｔｙｐｅ／Ｈ１Ｎ１／ＮＷＳ ｓｔｒａｉｎ）をＬＤ０又はＬＤ７０の用量で鼻腔から実施した。図１１にインフルエンザウイルス感染実験のスケジュールを模式図で示す。無処理対照群（Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ）は試料の代わりにＰＢＳを投与しウイルスの接種を実施していない実験群であり、ウイルス対照群（Ｖｉｒｕｓ ｃｏｎｔｒｏｌ）は、試料の代わりにＰＢＳの投与及びウイルスの接種を実施していない実験群である。

前記したように感染させたマウスを以下のウイルス接種時点から３日（３ｄｐｉ）、５日（５ｄｐｉ）及び７日（７ｄｐｉ）経過した時点での組織病変及びウイルス再分離率実験に供した。

［試験例５］動物モデルにおける組織病理学的病変分析
前記試験例４のようにしてインフルエンザウイルスを接種させたマウスをウイルスの接種時点からそれぞれ３日（３ｄｐｉ）、５日（５ｄｐｉ）及び７日（７ｄｐｉ）経過した時点で犠牲させ、肺組織を分離して、Ｈ＆Ｅ染色によって組織病理学的病変分析に用いた。図１５〜図１８は肺病変組織の写真を示す。病変の数をカウントして数値化し、これを、無処理対照群（Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ）を１００％として算出した肺病変指標（Ｌｕｎｇ ｉｎｄｅｘ）にして図１２〜図１４に示す。

図１２〜図１４の結果から、高麗人参の実多糖体を経口投与したときに肺病変指標が緩和されることを確認することができる。特に、陽性対照群であるＣＶＴの場合、高麗人参の実多糖体の投与量の４０倍に至る量を処理してはじめて高麗人参の実多糖体と同等な水準の効果を奏することが分かる。

［試験例６］ウイルスの再分離率分析
前記試験例４のようにインフルエンザウイルスを接種させたマウスをウイルスの接種時点からそれぞれ３日（３ｄｐｉ）、５日（５ｄｐｉ）及び７日（７ｄｐｉ）経過した時点で犠牲させ、分離した肺組織からＲＮＡを抽出した。抽出されたＲＮＡにてｃＤＮＡ合成Ｋｉｔを用いてｃＤＮＡライブラリの構築後、ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＲＴ−ＰＣＲを行って再分離されたウイルスのコピー（ｃｏｐｙ）数を算出し、ウイルス感染の水準を確認した。その結果を図１９〜図２１に示す。

図１９〜図２１の結果から、高麗人参の実多糖体を投与したときにウイルス感染の水準が顕著に低減することを確認することができる。特に、図１９では、高麗人参の実多糖体５、５０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与群の場合、ウイルスの接種から３日までウイルス感染が全く発生していないことを示しており、これより、高麗人参の実多糖体が優れたインフルエンザウイルス感染の予防効果を奏する確認することができる。さらには、陽性対照群であるＣＶＴの場合、高麗人参の実多糖体の投与量の４０倍に至る量を処理してはじめて高麗人参の実多糖体と同等な水準の効果を奏することが分かる。

Claims (9)

1. 高麗人参の実多糖体を含むインフルエンザウイルス感染の予防又は抑制用組成物。
2. 前記高麗人参の実多糖体は、アラビノース、ガラクトース、ガラクツロン酸、及びグルクロン酸を含む、請求項１に記載の組成物。
3. 前記ガラクツロン酸及びグルクロン酸を前記高麗人参の実多糖体の総重量に対して０．１重量％〜２５重量％の範囲で含む、請求項２に記載の組成物。
4. 前記高麗人参の実多糖体は、β−グルコシルヤリブ試薬（β−ｇｌｕｃｏｓｙｌ Ｙａｒｉｖ ｒｅａｇｅｎｔ）の処理時に標準アラビノ−β−３,６−ガラクタン（ａｒａｂｉｎｏ−β−３,６−ｇａｌａｃｔａｎ）を１００％としたとき、４０％以上の反応を示す、請求項１に記載の組成物。
5. 前記高麗人参の実多糖体は、高麗人参の実のエタノール不溶性分画中の水溶性成分由来のものである、請求項１に記載の組成物。
6. 前記高麗人参の実多糖体は、インフルエンザのノイラミニダーゼ（ｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅ）活性を抑制する、請求項１に記載の組成物。
7. 前記インフルエンザは、Ｈ１Ｎ１、Ｈ１Ｎ２、Ｈ２Ｎ２、Ｈ３Ｎ２、Ｈ５Ｎ１、Ｈ６Ｎ１、Ｈ７Ｎ２、Ｈ７Ｎ３、Ｈ７Ｎ７、Ｈ７Ｎ９、Ｈ９Ｎ２、又はＨ１０Ｎ７のうちの一種以上を含む、請求項１に記載の組成物。
8. 当該組成物は健康機能食品用である、請求項１に記載の組成物。
9. 当該組成物は薬学組成物である、請求項１に記載の組成物。
   

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