JP2011509075A - 核酸の配列決定のためのシステムおよび方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、National Institutes of Healthによって与えられたDMR−0602684の下で、政府の支援を受けてなされた。政府は、本発明に一定の権利を有する。
この出願は、2007年12月21日に出願された、Weitzらによる表題「Systems and Methods for Nucleic Acid Sequencing」の米国仮特許出願第61/008,862号、および2008年9月19日に出願された、Weitzらによる表題「Systems and Methods for Nucleic Acid Sequencing」の米国仮特許出願第61/098,710号(各々、参考として本明細書に援用される)の利益を主張する。
本発明は、流体液滴中で核酸を配列決定することを含む、核酸を配列決定するためのシステムおよび方法に関する。
配列番号1は、合成DNA配列のACTTCGである;
配列番号2は、合成DNA配列の*GATCCであり、*は信号発信実体である;
配列番号3は、合成DNA配列のGATCTGNNNNであり、Nはユニバーサル塩基である;
配列番号4は、合成DNA配列のCATATCである;
配列番号5は、合成DNA配列のGATCTNGNNNであり、Nはユニバーサル塩基である;
配列番号6は、合成DNA配列のCXACATCであり、Xは、A、C、GまたはTの1つである;
配列番号7は、合成DNA配列のGACTCTGTCCCTCCCTTGTCTACCCTGTGCGTCCCTACTCTACCである;
配列番号8は、合成DNA配列のビオチン−CCTATCCCCTGTGTGCCTTGCCTATCCCCTGTTGCGTGTCTCAGである;
配列番号9は、合成DNA配列のCTAAGTTAである;
配列番号10は、合成DNA配列のCTNAGNTAであり、Nはユニバーサル塩基である;
配列番号11は、合成DNA配列のCTANNTTAであり、Nはユニバーサル塩基である;
配列番号12は、合成DNA配列のCGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAATCCGTAATCATGGCCATである。
f(n)=(4nl+4n2...)/4(nl+n2..)、式中
nl+n2+...=R、
によって得られ、式中、f(n)は、全ライブラリと比較して合成されねばならないプローブの割合であり、Rは最終連結プローブの長さであり、n1、n2は、共に連結される第1、第2の...プローブ内の塩基の数である。いくつかの場合で、核酸プローブの少なくとも2個の、少なくとも3個の、少なくとも4個の、少なくとも5個の、少なくとも6個などの群が提供され得る。本明細書に記載する連結方法は、核酸プローブの2個を超える群を含むように拡大され得る。連結により形成されたプローブの全長は、長さが少なくとも6、少なくとも7、少なくとも8、少なくとも9、少なくとも10、少なくとも11、少なくとも12、少なくとも13、少なくとも14、少なくとも15、少なくとも16残基などである。
DNA配列決定方法の非限定的な例を、以下の予言的な実施例に記載する。図は、例証目的のためだけに5merを使用して表示する。他の長さも使用され得る。さらに、ロックド核酸残基、および/またはユニバーサル残基などの修飾残基もいくつかの場合で使用され得る。
図6を参照して方法例を議論する。特にこの方法は、ビーズに基づく標識方法、修飾ヌクレオチド、および蛍光を使用する例である。図6Aは、識別要素として使用される複数の色分けビーズ、たとえばLuminex Corporationが製造したようなビーズを示す。この実施例のビーズは、たとえば2つの別の染料の蛍光強度に基づいて100の区別可能な種類に分類できる直径5μmのビーズである(150)。これらのビーズに任意に1〜100の番号を付ける。
この実施例は、ビーズベースの標識方法、Taqmanプローブ、および蛍光を利用する。実施例1と同様に、液滴は、4セットの識別要素ビーズタイプそれぞれから得た1個の構成要素を有する。図7Aは、図6に示したように、1個の液滴171中の考えられる構成要素の例を示す。この実施例の液滴ではTaqman分析が使用されるであろう。
この詳細な実施例は、DNA連結、ビーズ標識および蛍光を利用する。Luminex Corporationは、図8Aに示すように、100個の区別可能なビーズ210に分離できるビーズを提供している。各ビーズタイプは特定のバイオアッセイに特異的な試薬でコーティングすることが可能であり、試料からの特異的検体の捕捉および検出が可能となる。レーザは、各ビーズ粒子を識別する内部染料、およびアッセイ中に捕捉された任意のレポータ染料も励起する。
いくつかの、しかしすべてではない実施形態において、本明細書に記載したシステムおよび方法のすべての構成要素がマイクロ流体性である。検出のための機器装置をここで示す。
この実施例は、本発明の一実施形態において、単一の液滴内中の少なくとも4個の異なる着色ビーズならびに蛍光偏光(FP)および/または蛍光強度(FI)を、液滴がチャネルを通過するときに分析およびデコードする装置を示す。レーザは、Power Technology,Inc.(Alexander,AR)を含む複数の製造者から購入され得る。光学縦列例を図10に示す。この光学縦列はモジュール式であり、フィルタおよびレーザは必要なときに交換できる。検出装置を5個備えたこの構成例は、2つの異なる発光波長にてFPを読み取ることができる。該装置は、FPを3つのチャネルで測定できるであろう。PDMSチップが上に設置されるステージは加熱される。
この実施例は、市販のLuminexビーズ(直径5.6um)に似た、複数の区別可能な蛍光ビーズの調製について説明する。FPは、染料濃度とは無関係であり得て(たとえばフルオレセインの1M濃度は、同じFPを0.01Mとして有する)、標識の際に独立変数として処理され得る。したがって、1つの染料が2次元において10単位で変化する場合、それは100の染料標識を生成するために使用できる。したがって2つの染料によって、10,000の標識が生成され得る。図12は、染料をより大きい分子に結合することによって、染料のFPを変更できることを示す。図12Aは、フルオレセイン330、ビオチン331およびビオチン+ストレプトアビジン332のFPを示す。図12Bは、2つの異なる化合物の相対濃度を変化させることによって、総FP値を制御自在に変更できることを示す。FPがフルオロフォアの濃度とは無関係に制御され得ることに注意することが重要である。
識別要素はいくつかの場合で、直径約10nm〜100umに及ぶサイズのポリスチレンビーズであり得て、ビーズは染色され得る。一例として、利用される染料は、近赤外および/または赤外領域にまで及ぶ蛍光を呈するスクアリン酸ベースの分子であることが可能である。これにより独立した濃度の2つ以上の染料が各ビーズに均一に吸収されて、ビーズ中に存在する染料の数それぞれについて複数の蛍光シグナルが生じる、再現プロセスが可能となる。異なる蛍光特徴を備えたビーズの集団を作製するために、この実施例では、得られた集団が前の集団と光学的に重複しないように、染料の割合を十分に増大することによって、赤色:オレンジ色染料の比を変更することができる。たとえば、ビーズの所与の集団の2つの染料の濃度と前記集団のX−Yマップの位置との間に関係があり得る。各位置は、線形蛍光チャネルユニットで表されるような第1の色(FL3)または第2の色(FL2)の染料の強度によって割り当てられ得る。ビーズがカラムを垂直に上昇するとき、ビーズ内の第1の色および第2の色の染料の量はどちらも増加させることができる。このことは、一方の染料から他方の染料へのエネルギー移動のためであり得る。列を左から右へ水平に移動するとき、定常のFL3値を維持するために、一方の染料を減少させることができる。これは、一方の染料のスペクトルが他方の染料の領域に重複するためであり得る。この方法を使用して、ビーズの複数の重複しない集合を構築することができる。2つのパラメータ、すなわち蛍光色および色強度または輝度(蛍光チャネル単位トで表される)を利用してビーズを分類することができる。
この実施例は、一実施形態によるDNAテンプレート調製について説明する。この実施例では、改良Aeromist Nebulizer(Alliance Medical,Russellville,MO)を使用して、DNA断片化を実施する。噴霧された断片のサイズ分布は、DNA 1000 LabChipを使用してAgilent 2100 BioAnalyzer(Agilent,Palo Alto,CA)で、噴霧物質の分割量2uLを分析することによって決定できる。
この実施例は、本発明の一実施形態において、液滴の集合の調製について説明する。この実施例では、Luminexビーズは特定のバイオアッセイに特異的な試薬でコーティングされ、試料からの特異的検体の捕捉および検出が可能となる。レーザは、各ビーズを識別する内部染料、およびアッセイ中に捕捉された任意の信号発信実体も励起した。
本発明のいくつかの実施形態において、DNAの連結は液滴中で行うことができる。これはこのような連結の説明例である。この実施例において、T4 DNAリガーゼの存在時(レーン3)および非存在時(レーン4)のテンプレートDNA+33mer+ホスホリル化7merの同時流を図14に表す。水相をポリアクリルアミドゲルに添加した。40merを生じる7merの33merへの連結は液滴内で起こった。
以下の実施例は、区別可能な核酸プローブおよび区別可能な識別要素を含む液滴のライブラリを使用する、核酸プローブの標的核酸へのハイブリダイゼーションの測定について記載する。
以下の実施例は、エマルジョンベースのマイクロ流体アッセイからのリアルタイム高スループットデータ取り込みを可能にする液滴検出のためのシステムおよび方法について説明する。
図37は、緑色波長フィルタ下のマイクロ流体液滴のCCDカメラビデオ取り込みからの静止フレームを示す。この画像では、密充填液滴の間の境界は区別が困難であるが、液滴グレアは容易に目視できる。この画像では、フルオレセインを含む液滴はは色がより明るく見えるが、Cy5を含む液滴は画像ではより暗く見える。図38は、CCDカメラ静止画像の強度閾値を示す。図39Aおよび39Bは、蛍光強度読み取り値のためのマスクおよびマスクオーバーレイをそれぞれ示す。図40および図41は、緑色フィルタカメラおよび赤色フィルタカメラそれぞれからの画像を示す。図42は、フルオレセイン(暗い灰色)およびCy5(明るい灰色)を含む液滴の2つの別個の集団を示す、緑色および赤色カメラデータのオーバーレイを含む合成画像を示す。図43は、秒でサンプリングした50,000のデータ点の強度カウントのヒストグラムを示し、(a)緑色チャネルおよび(b)赤色チャネルは予想された二峰性分布を示している。
Claims (109)
- 核酸プローブおよび少なくとも1つの識別要素を含有する第1のマイクロ流体液滴を提供する工程、
標的核酸を含む第2のマイクロ流体液滴を提供する工程、ならびに、
該第1のマイクロ流体液滴および該第2のマイクロ流体液滴を融合して融合液滴を形成する工程を含む、方法。 - 前記融合液滴内に含有された前記標的核酸を決定する工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記標的核酸の少なくとも一部の配列を決定する工程を含む、請求項2に記載の方法。
- 前記標的核酸を表面に接触させずに該標的核酸を決定する工程を含む、請求項2に記載の方法。
- 前記融合液滴内に含有された前記少なくとも1つの識別要素を決定することによって、前記標的核酸の少なくとも一部を決定する工程をさらに含む、請求項2に記載の方法。
- 前記液滴が少なくとも3つの区別可能な識別要素を含有する、請求項1に記載の方法。
- 前記液滴が少なくとも4つの区別可能な識別要素を含有する、請求項6に記載の方法。
- 前記少なくとも1つの識別要素を決定する工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 蛍光を使用して前記少なくとも1つの識別要素を決定する工程をさらに含む、請求項8に記載の方法。
- 少なくとも1つの識別要素が粒子である、請求項1に記載の方法。
- 少なくとも1つの識別要素が蛍光性である、請求項10に記載の方法。
- 前記核酸プローブが少なくとも4個の残基を含有する、請求項1に記載の方法。
- 前記核酸プローブが少なくとも5個の残基を含有する、請求項1に記載の方法。
- 前記核酸プローブが少なくとも6個の残基を含有する、請求項1に記載の方法。
- 前記核酸プローブが少なくとも1個のロックド核酸残基を含有する、請求項1に記載の方法。
- 前記核酸プローブが少なくとも1個のユニバーサル残基を含有する、請求項1に記載の方法。
- 前記核酸プローブが信号発信実体を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記標的核酸および前記核酸プローブの結合を測定する工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記標的核酸および前記少なくとも1つの識別要素の結合を測定する工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記標的核酸および前記核酸プローブの結合を測定する工程が前記信号発信実体の変化を測定する工程を含む、請求項18に記載の方法。
- 前記標的核酸および前記核酸プローブの結合を決定する工程が該核酸プローブの少なくとも一部の蛍光の変化を測定する工程を含む、請求項18に記載の方法。
- 前記核酸プローブが消光剤を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記核酸プローブが増感剤を含む、請求項1に記載の方法。
- ポリメラーゼを前記融合液滴に提供する工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記第1の流体液滴および前記第2の流体液滴の少なくとも1つがポリメラーゼをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記ポリメラーゼがTaqポリメラーゼである、請求項25に記載の方法。
- 前記標的核酸および前記核酸プローブの結合時に、前記ポリメラーゼが前記消光剤を該核酸プローブから解離させる、請求項25に記載の方法。
- 前記核酸プローブが少なくとも1つの識別要素に対して固定される、請求項1に記載の方法。
- 前記核酸プローブが核酸配列を含み、前記少なくとも1つの識別要素がオリゴヌクレオチドを含み、該核酸配列が該オリゴヌクレオチドに連結されている、請求項28に記載の方法。
- 前記少なくとも1つの識別要素がそれに対して固定された少なくとも1つのオリゴヌクレオチドを有する、請求項1に記載の方法。
- 前記液滴が4つの区別可能な識別要素を含有し、各区別可能な識別要素がそれに対して固定された少なくとも1つのオリゴヌクレオチドを有する、請求項1に記載の方法。
- 前記4つの区別可能な識別要素のそれぞれに対して固定された前記オリゴヌクレオチドそれぞれが、他のオリゴヌクレオチドに対して1つの位置でのみ異なる配列を有する、請求項31に記載の方法。
- それぞれの前記オリゴヌクレオチドが複数のユニバーサル残基を含有する、請求項32に記載の方法。
- それぞれの前記オリゴヌクレオチドが1つの位置を除いて全ての位置においてユニバーサル残基より成る、請求項33に記載の方法。
- 複数の識別要素を含むマイクロ流体液滴を提供する工程;
該液滴を変形させて、該複数の識別要素それぞれが標的区域を個別に通過するように該液滴に該標的区域を通過させる工程;ならびに
該標的区域を通過する該複数の識別要素それぞれを測定する工程;
を含む、方法。 - 前記マイクロ流体液滴が核酸および核酸プローブをさらに含有する、請求項35に記載の方法。
- 前記核酸が前記複数の識別要素を決定することによって決定される、請求項36に記載の方法。
- 前記複数の識別要素の少なくともいくつかが粒子である、請求項35に記載の方法。
- 前記複数の識別要素の少なくともいくつかがナノ粒子である、請求項35に記載の方法。
- 前記複数の識別要素の少なくともいくつかが蛍光性である、請求項35に記載の方法。
- 液滴に、第1の識別要素と、該第1の識別要素と区別可能な第2の識別要素と、該第1の識別要素および該第2の識別要素から区別可能な第3の識別要素を添加することによって、核酸プローブを含有する該液滴の少なくとも一部を測定する工程を含む、方法。
- 前記液滴に前記第1、前記第2、および前記第3の識別要素それぞれから区別可能な第4の識別要素を添加する工程をさらに含む、請求項41に記載の方法。
- 前記液滴に含有された核酸を決定する工程を含む、請求項41に記載の方法。
- 前記核酸および前記核酸プローブの結合を測定する工程をさらに含む、請求項43に記載の方法。
- 前記第1、前記第2、および前記第3の識別要素がそれぞれ粒子である、請求項41に記載の方法。
- 少なくとも6つの識別要素を定義する工程であって、該識別要素が少なくとも3つの群に分類され、各群は該要素のうちの少なくとも2つを有する、工程;
少なくとも8つの区別可能な種のそれぞれを、該8つの区別可能な種のうち2つが識別要素の同じセットと関連しないように、該少なくとも3つの群それぞれから選択される少なくとも1つの識別要素と関連付ける工程;ならびに
少なくとも8つの区別可能な液滴を調製する工程であって、各液滴は、該少なくとも8つの異なる種のうち1つおよび該少なくとも3つの群それぞれから得た関連付けた要素を含有する、工程;
を含む、方法。 - 少なくとも約10の区別可能な識別要素を定義する工程を含む、請求項46に記載の方法。
- 少なくとも約40の区別可能な識別要素を定義する工程を含む、請求項47に記載の方法。
- 少なくとも約100の区別可能な識別要素を定義する工程を含む、請求項48に記載の方法。
- 前記要素を少なくとも4つの群に分類する工程を含む、請求項46に記載の方法。
- 各群が少なくとも約5つの要素を有する、請求項46に記載の方法。
- 各群が少なくとも約10の要素を有する、請求項46に記載の方法。
- 少なくとも約10の区別可能な種のそれぞれを関連付ける工程を含む、請求項46に記載の方法。
- 少なくとも約30の区別可能な種のそれぞれを関連付ける工程を含む、請求項46に記載の方法。
- 少なくとも約100の区別可能な種のそれぞれを関連付ける工程を含む、請求項46に記載の方法。
- 少なくとも約300の区別可能な種のそれぞれを関連付ける工程を含む、請求項46に記載の方法。
- 少なくとも約1,000の区別可能な種のそれぞれを関連付ける工程を含む、請求項46に記載の方法。
- 少なくとも約4,000の区別可能な種のそれぞれを関連付ける工程を含む、請求項46に記載の方法。
- 前記種が核酸プローブである、請求項46に記載の方法。
- 少なくとも約100個の区別可能な液滴を調製する工程を含む、請求項46に記載の方法。
- 少なくとも約1000個の区別可能な液滴を調製する工程を含む、請求項46に記載の方法。
- 標的核酸を前記少なくとも8個の区別可能な液滴それぞれに添加する工程をさらに含む、請求項46に記載の方法。
- 前記液滴の少なくともいくつかがマイクロ流体性である、請求項46に記載の方法。
- 複数の区別可能な核酸プローブおよび複数の区別可能な識別要素を提供する工程;
該複数の区別可能な核酸プローブから少なくとも1個の核酸プローブと、該複数の区別可能な識別要素から少なくとも3つの区別可能な識別要素を選択する工程;
該選択した1個の核酸プローブおよび該少なくとも3つの区別可能な識別要素を含有する流体液滴を形成する工程;ならびに
1個の核酸プローブおよび該少なくとも3つの区別可能な識別要素をそれぞれ含有する少なくとも10の区別可能な流体液滴を含む、流体液滴の集団を形成するために該選択工程および該形成工程を反復する工程;
を含む、方法。 - 前記複数の区別可能な識別要素から少なくとも4つの区別可能な識別要素を選択する工程を含む、請求項64に記載の方法。
- 少なくとも約10の区別可能な識別要素を提供する工程を含む、請求項64に記載の方法。
- 少なくとも約20の区別可能な識別要素を提供する工程を含む、請求項66に記載の方法。
- 少なくとも約40の区別可能な識別要素を提供する工程を含む、請求項67に記載の方法。
- 少なくとも約10の区別可能な核酸プローブを提供する工程を含む、請求項64に記載の方法。
- 少なくとも約100の区別可能な核酸プローブを提供する工程を含む、請求項64に記載の方法。
- 少なくとも約1,000の区別可能な核酸プローブを提供する工程を含む、請求項64に記載の方法。
- 少なくとも約100個の区別可能な流体液滴を含む流体液滴の集団を形成するために前記選択工程および前記形成工程を反復する工程を含む、請求項64に記載の方法。
- 少なくとも約1,000個の区別可能な流体液滴を含む流体液滴の集団を形成するために前記選択工程および前記形成工程を反復する工程を含む、請求項64に記載の方法。
- 1個の核酸プローブおよび少なくとも3つの区別可能な識別要素を選択する行為が:
前記複数の区別可能な識別要素を少なくとも3つの群に分類する工程;ならびに
該少なくとも3つの群それぞれから1つの識別要素を選択する工程;
を含む、請求項64に記載の方法。 - 核酸プローブをそれぞれ含有する第1の複数の少なくとも10個の区別可能な流体液滴;ならびに
少なくとも3つの区別可能な識別要素をそれぞれ含有する第2の複数の少なくとも10個の区別可能な流体液滴;
を含む、キット。 - 前記第1の流体液滴が少なくとも第1の核酸プローブおよび第2の核酸プローブを含有する、請求項1に記載の方法。
- 前記第1のマイクロ流体液滴が、前記第1の核酸プローブを含むマイクロ流体液滴および第2の核酸プローブを含むマイクロ流体液滴を融合することによって形成される、請求項76に記載の方法。
- リガーゼを前記融合した液滴に供給する工程をさらに含む、請求項76に記載の方法。
- 前記第1の核酸プローブが前記第2の核酸プローブに連結される、請求項76に記載の方法。
- 前記第1の核酸プローブおよび前記第2の核酸プローブの配列を決定する工程をさらに含む、請求項76に記載の方法。
- 前記液滴が第1の核酸プローブおよび第2の核酸プローブを含有する、請求項41に記載の方法。
- 前記第1および前記第2の核酸プローブと前記液滴内に含有された標的核酸との関連を決定する工程をさらに含む、請求項81に記載の方法。
- 流体液滴の第1の集団を形成するための区別可能な核酸プローブの第1の群および区別可能な識別要素の第1の群、ならびに流体液滴の第2の集団を形成するための区別可能な核酸プローブの第2の群および区別可能な識別要素の第2の群に対する提供、選択、形成および反復工程を完了させる工程を含む、請求項64に記載の方法。
- 前記核酸プローブの第1の群が前記核酸プローブの第2の群と実質的に同様である、請求項83に記載の方法。
- 前記核酸プローブの第1の群が前記核酸プローブの第2の群とは異なる、請求項84に記載の方法。
- 前記識別要素の第1の群が前記識別要素の第2の群と実質的に同様である、請求項83に記載の方法。
- 前記識別要素の第1の群が前記識別要素の第2の群とは異なる、請求項84に記載の方法。
- 前記核酸プローブの少なくともいくつかが少なくとも3個の核酸残基を含む、請求項83に記載の方法。
- 前記核酸プローブの少なくともいくつかが少なくとも1つのユニバーサル残基をさらに含む、請求項83に記載の方法。
- 核酸プローブの少なくとも1つの群が3個の残基を含む考えられるすべての配列の少なくとも一部を含む、請求項83に記載の方法。
- 核酸プローブの少なくとも1つの群が4個の残基を含む考えられるすべての配列の少なくとも一部を含む、請求項83に記載の方法。
- 前記第1の集団からの少なくとも1個の流体液滴を前記第2の集団からの少なくとも1個の流体液滴と融合して第3の流体液滴とする工程を含む、請求項83に記載の方法。
- 液滴の第3の集団を形成するために、前記第1の集団からの実質的にすべての液滴を前記第2の集団からの実質的にすべての液滴と融合する工程を反復する工程を含む、請求項92に記載の方法。
- 液滴グレアが液滴内の光散乱のために複数の液滴の実質的にすべてで生成されるように、表面上の該複数のマイクロ流体液滴に光を向ける工程;ならびに
該液滴グレアの位置に基づいて液滴の位置を決定する工程;
を含む方法。 - 前記光が前記複数のマイクロ流体液滴に非直交角度で向けられる、請求項94に記載の方法。
- 前記マイクロ流体液滴から生じる非散乱光を測定する工程をさらに含む、請求項94に記載の方法。
- 非散乱光を測定する行為と、液滴グレアを定量する行為が実質的に同時である、請求項96に記載の方法。
- 前記液滴グレアが前記液滴による散乱光の実質的な集束によって生成される、請求項94に記載の方法。
- 前記液滴が実質的に単分散である、請求項94に記載の方法。
- 前記非散乱光が蛍光により生成される、請求項94に記載の方法。
- 前記複数のマイクロ流体液滴から生じる前記液滴グレアを定量する工程をさらに含む、請求項94に記載の方法。
- 表面上の複数のマイクロ流体液滴;
該表面上に配置された該複数のマイクロ流体液滴に対して直交して光を集束させることができる第1の光源;
該表面上に配置された該複数のマイクロ流体液滴に対して実質的に非直交の角度で光を集束させることができる第2の光源;ならびに
該表面上に配置された該複数のマイクロ流体液滴から生じた、該第2の光源から生じる散乱光および該第1の光源から生じる非散乱光を撮像することができる撮像装置;
を備えた、撮像システム。 - 前記撮像装置が、前記表面上に配置された前記複数のマイクロ流体液滴から生じた前記散乱光および前記非散乱光を同時に撮像することができる、請求項102に記載の撮像システム。
- 前記撮像装置がカメラである、請求項102に記載の撮像システム。
- 前記カメラがCCDカメラである、請求項104に記載の撮像システム。
- 前記第1の光源がLEDである、請求項102に記載の撮像システム。
- 撮像システムが少なくとも1,000個のマイクロ流体液滴を同時に撮像することができる、請求項103に記載の撮像システム。
- 撮像システムが少なくとも5,000個のマイクロ流体液滴を同時に撮像することができる、請求項107に記載の撮像システム。
- 撮像システムが少なくとも10,000個のマイクロ流体液滴を同時に撮像することができる、請求項108に記載の撮像システム。
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