JP2010008263A - 検出方法、検出用試料セルおよび検出用キット - Google Patents
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Abstract
【解決手段】蛍光標識の励起に起因して生じる光の量に基づいて被検出物質の量を検出する検出方法において、蛍光標識として、蛍光色素分子15を、この蛍光色素分子15から生じる蛍光Lfを透過させる透光材料16により包含してなる蛍光物質Fを用いる。そして、蛍光物質Fを光導波モードの染み出しによるエバネッセント波Ewによって励起する。
【選択図】図3A
Description
Margarida M. L. M. Vareiro, et al., Analytical Chemistry, Vol. 77, No. 8, p.2426-2431 (2005) 坪井一真、外2名、「光導波モード増強蛍光観察を用いたカテコールアミンの高感度検出」、第54回応用物理学関係連合講演会講演予稿集、応用物理学会、2007年、p.1378(28p−SA−4)
誘電体プレートの一面に、金属層と光導波層とをこの順に有するセンサチップを用意し、
光導波層上に被検出物質および蛍光標識物質を含む試料を接触させると共に、
誘電体プレートと金属層との界面に対し、誘電体プレート側から全反射条件を満たすように励起光を入射して、この界面に第1のエバネッセント波を発生せしめ、
第1のエバネッセント波を、光導波層内で光導波モードと結合させることにより、光導波層の上面に第2のエバネッセント波を発生せしめ、
第2のエバネッセント波により、蛍光標識物質の蛍光標識を励起し、
蛍光標識の励起に起因して生じる光の量に基づいて被検出物質の量を検出する方法であって、
蛍光標識として、蛍光色素分子を、蛍光色素分子から生じる蛍光を透過させる透光材料により包含してなる蛍光物質を用いることを特徴とするものである。
蛍光標識の励起に起因して生じる光の量に基づいて被検出物質の量を検出する検出方法に使用される検出用試料セルであって、
液体試料が流下される流路を有する基台と、
流路の上流側に設けられた流路に液体試料を注入するための注入口と、
流路の下流側に設けられた、注入口から注入された液体試料を下流側に流すための空気孔と、
注入口と空気孔との間の流路に設けられたセンサチップ部であって、流路の内壁面の一部として設けられた誘電体プレート、このプレートの試料接触面側の所定領域に順に設けられた金属層および光導波層からなるセンサチップ部と、
光導波層上に固定された、被検出物質と特異的に結合する第1の結合物質と、
センサチップ部より上流側の流路内に固定された、被検出物質と特異的に結合する第2の結合物質、または第1の結合物質と特異的に結合すると共に被検出物質と競合する第3の結合物質が修飾された蛍光物質とを備えてなることを特徴とするものである。
蛍光標識の励起に起因して生じる光の量に基づいて被検出物質の量を検出する検出方法に使用される検出用キットであって、
液体試料が流下される流路を有する基台と、流路の上流側に設けられた流路に液体試料を注入するための注入口と、流路の下流側に設けられた、注入口から注入された液体試料を下流側に流すための空気孔と、注入口と空気孔との間の流路に設けられたセンサチップ部であって、流路の内壁面の一部として設けられた誘電体プレート、このプレートの試料接触面側の所定領域に順に設けられた金属層および光導波層からなるセンサチップ部と、光導波層上に固定された、被検出物質と特異的に結合する第1の結合物質とを備えた試料セル、および
液体試料と同時もしくは液体試料の流下後に、流路内に流下される標識用溶液であって、被検出物質と特異的に結合する第2の結合物質、または第1の結合物質と特異的に結合すると共に被検出物質と競合する第3の結合物質が修飾された蛍光物質を含む標識用溶液とを備えてなることを特徴とするものである。
この特定の入射角度は、反射光(全反射した入射光Lo)をモニタリングすることにより確認することができる。これは、第1のエバネセント波が光導波モードと結合するときに、反射光が急激に増減するためである。
以上を踏まえ図面を参照して、本発明の第1の実施形態に係る検出方法およびそれに用いられる蛍光検出装置について説明する。図3Aは装置の全体図である。各図において説明の便宜上、各部の寸法は実際のものとは異ならせている。
励起光照射光学系20により励起光Loが誘電体プレート11と金属層12aとの界面に対して全反射角以上の特定の入射角度で入射されることにより、この界面上に生じる第1のエバネッセント波(図示省略)が光導波モードと結合して、光導波層12b上の液体試料S側に第2のエバネッセント波Ewが誘起される。この第2のエバネッセント波Ewにより光導波層12b表面に電場増強領域が形成される。このとき、第2のエバネッセント波Ewによる電場増強領域内に蛍光物質Fが存在する場合には、その蛍光物質Fが励起されて蛍光Lfが発生する。なお、この電場増強領域外の蛍光物質Fは励起されず蛍光Lfを発しない。光検出器30は、この蛍光Lfを検出する。
なお、被検出物質(抗原A)の標識のタイミングは特に制限されず、被検出物質(抗原A)を第1の結合物質(1次抗体B1)に結合させる前に、予め試料に蛍光標識(蛍光物質F)を添加しておいてもよい。
まず、ポリスチレン粒子(Estapor社、φ500nm、10%Solid、カルボキシル基、製品番号K1―050)を調液して0.1%Solid in phosphate(ポリスチレン溶液:pH7.0)を作製する。
次に、蛍光色素分子(林原生物化学研究所、NK−2014、励起波長:780nm)0.3mgの酢酸エチル溶液(1mL)を作製する。
上記ポリスチレン溶液と蛍光色素溶液を混合し、エバポレートしながら含浸を行った後、遠心分離(15000rpm、4℃、20分を2回)を行い、上清を除去する。
以上の工程により、蛍光色素分子から生じる蛍光を透過する機能を有するポリスチレンにより蛍光色素分子15を内包してなる蛍光物質Fを得ることができる。このような手順で、ポリスチレン粒子に蛍光色素を含浸させて作製された蛍光物質Fの粒径はポリスチレン粒子の粒径と同一(上記例ではφ500nm)となる。
本発明では、蛍光標識として、蛍光色素分子を、該蛍光色素分子から生じる蛍光を透過する材料により包含してなる蛍光物質を用いることにより、染み出し長の長い第2のエバネッセント波を最大限利用して、蛍光物質内の蛍光色素分子を効率よく励起することができ、より高感度かつ定量性の高い検出が可能となる。
第2の実施形態の検出方法および装置について図3Bを参照して説明する。図3Bに示す放射光検出装置1’は、第1の実施形態の蛍光検出装置1と光検出器30の配置位置が異なる。具体的に放射光検出装置1’は、光検出器30を、蛍光が金属層に表面プラズモンを励起することによって誘電体プレートと金属層との界面の誘電体プレート側へ放射される、表面プラズモンからの放射光を検出するように配置したものである。ここでは、第1の実施形態と同じ構成要素には同じ参照符号を付してあり、第1の実施形態と同様の要素についての説明は特に必要のない限り省略する。
第1の実施形態と同様に、励起光照射光学系20により励起光Loが誘電体プレート11と金属層12aとの界面に対して全反射角以上の特定の入射角度で入射されることにより、この界面上に生じる第1のエバネッセント波(図示省略)が光導波モードと結合して、光導波層12b上の液体試料S側に第2のエバネッセント波Ewが誘起される。この第2のエバネッセント波Ewにより光導波層12b表面に電場増強領域が形成される。このとき、第2のエバネッセント波Ewによる電場増強領域内に蛍光物質Fが存在する場合には、その蛍光物質Fが励起されて蛍光Lfが発生する。なお、この電場増強領域外の蛍光物質Fは励起されず蛍光Lfを発しない。そして、光導波層12b上で生じた蛍光Lfが、金属層12aに表面プラズモンを励起することによって、誘電体プレートと金属層との界面の誘電体プレート側へ特定の角度で放射光Leが放射される(この現象をSurface Plasmon-Coupled Emission(SPCE)という。)。光検出器30は、この放射光Leを検出するように配置されている。
第3の実施形態の検出方法および装置について図4〜6を参照して説明する。ここでは、第1の実施形態と同じ構成要素には同じ参照符号を付してある。
試料セル50は、基台51と、基台51上に液体試料Sを保持し、液体試料Sの流路52を形成するスペーサ53と、液体試料Sを注入する注入口54aおよび流路52を流下した液体試料Sを排出する排出口となる空気孔54bを備えたガラス板からなる上板54とを備えている。また、注入口54aから流路52に至る箇所にはメンブレンフィルター55が備えられ、流路52下流の空気孔54bに接続する部分には廃液だめ56が形成されている。なお、本実施形態では、スペーサ53により構成された流路52を上部に有する基台51は誘電体プレートで構成されており、センサチップ部の誘電体プレートを兼ねている。基台51はセンサチップ部となる一部のみ誘電体プレートで構成されたものであってもよい。
被検出物質である抗原を含むか否かの検査対象である血液(全血)を試料セル50の注入口から注入し、アッセイを行う手順について図6を参照して説明する。
step2:血液Soはメンブレンフィルター55により濾過され、赤血球、白血球などの大きな分子が残渣となる。
step3:血漿S(メンブレンフィルター55で血球分離された血液)が毛細管現象で流路52に染み出す。または反応を早め、検出時間を短縮するために、空気孔54bにポンプを接続し、血漿Sをポンプの吸引、押し出し操作によって流下させてもよい。図6中において血漿Sは斜線領域で示している。
step4:流路52に染み出した血漿Sと2次抗体B2が付与された蛍光物質とが混ぜ合わされ、血漿S中の抗原Aが標識2次抗体B2と結合する。
step5:血漿Sは流路52に沿って空気孔54b側へと徐々に流れ、標識2次抗体B2と結合した抗原Aが、第1の測定エリア58上に固定されている1次抗体B1と結合し、抗原Aが1次抗体B1と標識2次抗体B2で挟み込まれたいわゆるサンドイッチが形成される。
step6:抗原Aと結合しなかった標識2次抗体B2の一部は第2の測定エリア59上に固定されている1次抗体B0と結合する。さらに抗原Aまたは1次抗体B0と結合しなかった標識2次抗体B2が測定エリア上に残っている場合があっても、後続の血漿Sが洗浄の役割を担い、プレート上に浮遊および非特異吸着していた標識2次抗体B2を洗い流す。
τ=h2/D ・・・(1)
ここで、h:拡散距離、D:拡散定数である。
D=KBT/3πηd ・・・(2)
ここで、KB:ボルツマン定数、T:絶対温度、η:溶媒の粘性、d:流体力学半径である。
既述のように、蛍光物質の材質には水溶媒(屈折率n=1.33)より屈折率の高いポリスチレンやガラスを用いている。例えばポリスチレンの屈折率n=1.59〜1.60である。このような高屈折率の蛍光物質が光導波層近傍に位置することによって第2のエバネッセント波の発生が阻害される場合がある。この現象を例えばプリズム層101、金属層102a(屈折率n<1)、SiO2光導波層102b(屈折率n=1.45〜1.46)、溶媒層103の4層に分けた多層膜近似で考察した。図9AはSiO2光導波層102b上に水溶媒層のみである場合に、図9BはSiO2光導波層102bにポリスチレンの蛍光物質104が存在する場合に、プリズム層101側から光ビームを入射してSiO2光導波層102b表面に生じせしめた電場Eを模式的に示している。
プリズム層101、溶媒層103(103’)は十分な膜厚があり、プリズム層101、金属層102aおよびSiO2光導波層102bの屈折率、膜厚がすでに決まっていると仮定すると、SiO2光導波層102b表面上に誘起される第2のエバネッセント波の状態はSiO2光導波層102b上の溶媒屈折率によって決まる。図10は、SiO2光導波層102b上に水溶媒層のみである場合(実線で示す)と、SiO2光導波層102b上にポリスチレン層が存在する場合(破線で示す)について、励起光の界面への入射角度と反射率との関係をシミュレーションにより求めたグラフである。このグラフから溶媒側に水溶媒層がある場合には、第2のエバネッセント波が発生する共鳴角が存在するが、ポリスチレン層がある場合には第2のエバネッセント波が発生しない(共鳴角が現れない)ことがわかる。
これは、第1のエバネッセント波がSiO2光導波層102b内で光導波モードと結合するための条件が満たされなくなったためである。すなわち、SiO2光導波層102b(屈折率n=1.45)は、両側を屈折率の小さい金属層102a(屈折率n<1)および水溶媒(屈折率n=1.33)によって挟まれることにより、光導波路としての役割を果たしていたが、水溶媒側にポリスチレン(屈折率n=1.59)が存在することにより、この界面で全反射が生じなくなったためである。このことから、屈折率の高い蛍光物質(ポリスチレンやガラス製)を用いてアッセイを行い、光導波層102b近傍に蛍光物質が固定されると、第2のエバネッセント波の発生が阻害されてその電場強度が低減してしまい、蛍光測定ができなくなると推察される(図9B)。
1pMの抗原濃度の検体について、アッセイ時の条件を検出領域の直径を1mm(面積3.1mm2)、流路を流下する検体量を30μl(この検体量は一般的な簡易血液診断装置において、流路に流す前の前処理後、あるいはメンブレンフィルターによって血球分離された後の標準的な値である。)、抗原捕捉率を0.2%(一般的に抗原捕捉率は、0.2%〜2%程度であることから、ここでは、捕捉率が最低であった場合でも検出可能とするため、0.2%に設定した。)とすると、1.2×104個/mm2の抗原を検出領域に固定し検出できればよい。ここで、1.2×104個/mm2を目標固定量とする。一方、落射蛍光検出装置(LAS−4000、落射蛍光式、富士フイルム社製)を用いて測定した、前述の手順で作製した蛍光物質(直径300nm、励起波長542nm、蛍光波長612nm)の検量線データを図12に示す。ここでは中心波長520nmの緑色LEDの励起光を用い、緑色蛍光用フィルタを通して蛍光を検出した結果を示している。このときの検出限界密度はエラーバーが蛍光検出装置のバックグラウンド値の3σ(σは標準偏差)と交わった1.0×103個/mm2であった。
一方、蛍光物質の粒径を大きくすると内包される蛍光色素分子量が増加するため蛍光信号強度も増大し検出光量の点で有利になるが、2次元平面上の一定面積に固定できる蛍光物質の個数は立体障害の観点から固定量に限界がある。ダイナミックレンジ2桁として100pMを検出上限濃度とすると、固定量は1.2×106個/mm2となる。このとき、1つの抗原に対し1つの蛍光物質が結合するとして最密充填となる大きさは、φ500nmである。このことから目標固定量を実現できる蛍光物質の上限サイズはφ500nmである。
以上の観点から、蛍光物質のさらに好ましい粒径は130nm〜500nmである。
第4の実施形態の検出方法として、本発明の一実施形態の検出用キットを用いた方法について図13および14を参照して説明する。図13および14において、上述の試料セルと同一の要素には同一符号を付し、詳細な説明を省略する。
被検出物質である抗原を含むか否かの検査対象である血液(全血)を試料セル61の注入口から注入し、アッセイを行う手順について図14を参照して説明する。
step2:血液Soはメンブレンフィルター55により濾過され、赤血球、白血球などの大きな分子が残渣となる。引き続き、血漿S(メンブレンフィルター55で血球分離された血液)が毛細管現象で流路52に染み出す。または反応を早め、検出時間を短縮するために、空気孔にポンプを接続し、血漿Sをポンプの吸引、押し出し操作によって流下させてもよい。図14において血漿Sは斜線領域で示している。
step3:血漿Sは流路52に沿って空気孔54b側へと徐々に流れ、血漿S中の抗原Aが、第1の測定エリア58上に固定されている1次抗体B1と結合する。
step4:2次抗体B2が修飾された蛍光物質Fを含む標識用溶液63を供給口54aから注入する。
step5:2次抗体B2が修飾された蛍光物質Fが毛細管現象により流路52に染み出す。または反応を早め、検出時間を短縮するために、空気孔にポンプを接続し、標識用溶液63をポンプの吸引、押し出し操作によって流下させてもよい。
step6:蛍光物質Fは徐々に下流側に流れ、標識2次抗体B2が抗原Aと結合し、抗原Aが1次抗体B1と標識2次抗体B2で挟み込まれたいわゆるサンドイッチが形成される。
前述の手順で作製した蛍光物質溶液(蛍光物質の直径500nm、励起波長502nm、蛍光波長510nm)に50mM MESバッファーおよび、5.0mg/mLの抗hCGモノクローナル抗体(Anti−hCG 5008 SP−5、Medix Biochemica社)溶液を加えて撹拌する。これにより蛍光物質への抗体の修飾がなされる。
次に、400mg/mLのWSC(品番01−62−0011、和光純薬)水溶液を加え室温で攪拌する。
さらに、2mol/L Glycine水溶液を添加し撹拌した後、遠心分離にて、粒子を沈降させる。
最後に、上清を取り除き、PBS(pH7.4)を加え、超音波洗浄機により蛍光物質を再分散させる。さらに遠心分離を行い、上清を除いた後、1%BSAのPBS(pH7.4)溶液500μL加え、蛍光物質を再分散させて標識用溶液とする。
蛍光物質Fの表面に金属被膜19を備えた場合、センサチップ10の光導波層12b上に発生した第2のエバネッセント波が蛍光物質Fの金属被膜19のウィスパリング・ギャラリー・モードにカップリングし、蛍光物質F内の蛍光色素分子15をさらに高効率に励起できる。なお、ウィスパリング・ギャラリー・モードとは、ここで用いられるφ5300nm以下程度の蛍光物質Fのような微小球の球表面に局在し、周回する電磁波モードである。
この金属被膜された蛍光物質F’は、例えば、この金属被膜19上に抗原Aと特異的に結合する2次抗体B2を修飾し、上述の第1の実施形態から第4の実施形態における蛍光物質Fと同様にして利用することができる。
まず、前述手順により蛍光物質を作製し、その表面にポリエチレンイミン(PEI)(エポミン、日本触媒社)を修飾する。
次に、粒子表面のPEIに粒径15nmのPdナノ粒子(平均粒径19nm、徳力本社)を吸着させる。
Pdナノ粒子が吸着したポリスチレン粒子を無電解金メッキ液(HAuCl4、小島化学薬品社)に浸漬させることで、Pdナノ粒子を触媒とする無電界メッキを利用して、ポリスチレン粒子表面に金膜を作製する。
図17Aに示すように、例えば、抗原Aと同一の免疫反応を示す2次抗体C3(第3の結合物質)を蛍光物質Fに修飾させておく。光導波層12b上には、抗原Aおよび2次抗体C3といずれとも特異的に結合する1次抗体C1(第1の結合物質)を固定化しておく。2次抗体C3が修飾された蛍光物質Fを所定濃度で、抗原Aと混合し、光導波層12b上に固定化された1次抗体C1に競合的に反応させる(抗原−抗体反応)。抗原Aと蛍光物質Fとの混合時における蛍光物質Fの濃度は既知である。
step2:血液Soはメンブレンフィルター55により濾過され、赤血球、白血球などの大きな分子が残渣となる。
step3:血漿S(メンブレンフィルター55で血球分離された血液)が毛細管現象で流路52に染み出す。または反応を早め、検出時間を短縮するために、空気孔54bにポンプを接続し、血漿Sをポンプの吸引、押し出し操作によって流下させてもよい。図18において血漿Sは斜線領域で示している。
step4:流路52に染み出した血漿Sと標識2次抗体C3が付与された蛍光物質Fとが混ぜ合わされる。
step5:血漿Sは流路52に沿って空気孔54b側へと徐々に流れ、抗原Aと標識2次抗体C3とが競合して、第1の測定エリア58’上に固定されている1次抗体C1と結合する。
step6:第1の測定エリア58’上の1次抗体C1と結合しなかった標識2次抗体C3の一部は、第2の測定エリア59’上に固定されている1次抗体C0と結合する。さらに1次抗体C1またはC0と結合していない標識2次抗体C3が測定エリア上に残っている場合があっても、後続の血漿Sが洗浄の役割を担い、プレート上に浮遊および非特異吸着していた標識2次抗体C3を洗い流す。
図19Aに示すように、石英プリズム上に金膜(50nm)、SiO2膜(600nm)を順に有するセンサチップを用いた。
図19Bに示すように、石英プリズム上に金膜(50nm)、SiO2膜(550nm)、金膜(5nm)を順に有するセンサチップを用いた。
図19Cに示すように、石英プリズム上に金膜(30nm)、SiO2膜(550nm)、金膜(30nm)、SiO2膜(550nm)を順に有するセンサチップを用いた。
一般的に用いられる表面プラズモンによる電場増強を比較例とした。すなわち図19Dに示すように、石英プリズム上に金膜(50nm)を有するセンサチップを用いて表面プラズモンを誘起した。
上記第3および第4の実施形態においては、蛍光標識の励起に起因して生じる光として、蛍光物質に内包される蛍光色素分子から生じる蛍光を用いる場合について述べてきたが、これらの実施形態はこのような場合に限られるものではない。すなわち、上記第3および第4の実施形態においても、蛍光標識の励起に起因して生じる光として、蛍光物質に内包される蛍光色素分子から生じる蛍光が金属層に表面プラズモンを励起することにより誘電体プレートと金属層との界面の誘電体プレート側へ放射される、表面プラズモンからの放射光を検出することによって、測定をすることが可能である。
1’ 放射光検出装置
3、10 センサチップ
11 誘電体プレート
12a 金属層
12b 光導波層
13 試料保持部
15 蛍光色素分子
16 透光材料
19 金属被膜
20 励起光照射光学系
21 光源
22 プリズム
30 光検出器
50、61 試料セル
51 誘電体プレート
52 流路
53 スペーサ
54 上板
57 蛍光物質吸着エリア
58、59 検出エリア
A 抗原(被検出物質)
B1 1次抗体(第1の結合物質)
B2 2次抗体(第2の結合物質)
F 蛍光物質
Lo 励起光
Lf 蛍光
S 試料
Claims (20)
- 誘電体プレートの一面に、金属層と光導波層とをこの順に有するセンサチップを用意し、
前記光導波層上に試料を接触させることにより、前記試料に含有される被検出物質の量に応じた量の蛍光標識物質を前記光導波層上に結合させると共に、
前記誘電体プレートと前記金属層との界面に対し、該誘電体プレート側から全反射条件を満たすように励起光を入射して、該界面に第1のエバネッセント波を発生せしめ、
前記第1のエバネッセント波を、前記光導波層内で光導波モードと結合させることにより、該光導波層の上面に第2のエバネッセント波を発生せしめ、
該第2のエバネッセント波により、前記蛍光標識物質の蛍光標識を励起し、
該蛍光標識の励起に起因して生じる光の量に基づいて前記被検出物質の量を検出する検出方法であって、
前記蛍光標識として、蛍光色素分子を、該蛍光色素分子から生じる蛍光を透過させる透光材料により包含してなる蛍光物質を用いることを特徴とする検出方法。 - 前記蛍光物質の粒径が、5300nm以下であることを特徴とする請求項1に記載の検出方法。
- 前記蛍光物質の粒径が、100nm〜700nmであることを特徴とする請求項2に記載の検出方法。
- 前記蛍光物質の表面に、前記蛍光を透過する厚みの金属皮膜が設けられていることを特徴とする請求項1から3いずれかに記載の検出方法。
- 前記光導波層が、1層以上の光導波材料からなる内部光導波層を含む積層構造を有するものであることを特徴とする請求項1から4いずれかに記載の検出方法。
- 前記積層構造が、前記金属層側から順に前記内部光導波層および内部金属層の交互積層構造であることを特徴とする請求項5に記載の検出方法。
- 前記蛍光標識の励起に起因して生じる前記光として、該励起によって該蛍光標識から生じる蛍光を検出することを特徴とする請求項1から6いずれかに記載の検出方法。
- 前記蛍光標識の励起に起因して生じる前記光として、該励起によって該蛍光標識から生じる蛍光が前記金属層に表面プラズモンを励起することにより前記界面の前記誘電体プレート側へ放射される、前記表面プラズモンからの放射光を検出することを特徴とする請求項1から6いずれかに記載の検出方法。
- 蛍光標識の励起に起因して生じる光の量に基づいて被検出物質の量を検出する検出方法に使用される検出用試料セルであって、
液体試料が流下される流路を有する基台と、
前記流路の上流側に設けられた該流路に前記液体試料を注入するための注入口と、
前記流路の下流側に設けられた、前記注入口から注入された前記液体試料を該下流側に流すための空気孔と、
前記注入口と前記空気孔との間の前記流路に設けられたセンサチップ部であって、前記流路の内壁面の一部として設けられた誘電体プレート、該プレートの試料接触面側の所定領域に順に設けられた金属層および光導波層からなるセンサチップ部と、
前記光導波層上に固定された、被検出物質と特異的に結合する第1の結合物質と、
前記センサチップ部より上流側の前記流路内に固定された、前記被検出物質と特異的に結合する第2の結合物質、または前記第1の結合物質と特異的に結合すると共に前記被検出物質と競合する第3の結合物質が修飾された蛍光物質とを備えてなることを特徴とする検出用試料セル。 - 前記蛍光物質の粒径が、5300nm以下であることを特徴とする請求項9に記載の検出用試料セル。
- 前記蛍光物質の粒径が、100nm〜700nmであることを特徴とする請求項10に記載の検出用試料セル。
- 前記蛍光物質の表面に、前記蛍光を透過する厚みの金属皮膜が設けられていることを特徴とする請求項9から11いずれかに記載の検出用試料セル。
- 前記光導波層が、1層以上の光導波材料からなる内部光導波層を含む積層構造を有するものであることを特徴とする請求項9から12いずれかに記載の検出用試料セル。
- 前記積層構造が、前記金属層側から順に前記内部光導波層および内部金属層の交互積層構造であることを特徴とする請求項13に記載の検出用試料セル。
- 蛍光標識の励起に起因して生じる光の量に基づいて被検出物質の量を検出する検出方法に使用される検出用キットであって、
液体試料が流下される流路を有する基台と、前記流路の上流側に設けられた該流路に前記液体試料を注入するための注入口と、前記流路の下流側に設けられた、前記注入口から注入された前記液体試料を該下流側に流すための空気孔と、前記注入口と前記空気孔との間の前記流路に設けられたセンサチップ部であって、前記流路の内壁面の一部として設けられた誘電体プレート、該プレートの試料接触面側の所定領域に順に設けられた金属層および光導波層からなるセンサチップ部と、前記光導波層上に固定された、前記被検出物質と特異的に結合する第1の結合物質とを備えた試料セル、および
前記液体試料と同時もしくは前記液体試料の流下後に前記流路内に流下される標識用溶液であって、前記被検出物質と特異的に結合する第2の結合物質、または前記第1の結合物質と特異的に結合すると共に前記被検出物質と競合する第3の結合物質が修飾された蛍光物質を含む標識用溶液とを備えてなることを特徴とする検出用キット。 - 前記蛍光物質の粒径が、5300nm以下であることを特徴とする請求項15に記載の検出用キット。
- 前記蛍光物質の粒径が、100nm〜700nmであることを特徴とする請求項16に記載の検出用キット。
- 前記蛍光物質の表面に、前記蛍光を透過する厚みの金属皮膜が設けられていることを特徴とする請求項15から17いずれかに記載の検出用キット。
- 前記光導波層が、1層以上の光導波材料からなる内部光導波層を含む積層構造を有するものであることを特徴とする請求項15から18いずれかに記載の検出用キット。
- 前記積層構造が、前記金属層側から順に前記内部光導波層および内部金属層の交互積層構造であることを特徴とする請求項19に記載の検出用キット。
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