JP2012032282A - プラズモン励起センサチップおよびこれを用いたプラズモン励起センサ、並びにアナライトの検出方法 - Google Patents
プラズモン励起センサチップおよびこれを用いたプラズモン励起センサ、並びにアナライトの検出方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2012032282A JP2012032282A JP2010172152A JP2010172152A JP2012032282A JP 2012032282 A JP2012032282 A JP 2012032282A JP 2010172152 A JP2010172152 A JP 2010172152A JP 2010172152 A JP2010172152 A JP 2010172152A JP 2012032282 A JP2012032282 A JP 2012032282A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- plasmon excitation
- excitation sensor
- transparent dielectric
- sensor chip
- thin film
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 230000005284 excitation Effects 0.000 title claims abstract description 153
- 239000012491 analyte Substances 0.000 title claims abstract description 43
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 49
- 239000010409 thin film Substances 0.000 claims abstract description 113
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 97
- 239000010408 film Substances 0.000 claims abstract description 61
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 29
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 110
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 110
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 69
- 229910052809 inorganic oxide Inorganic materials 0.000 claims description 38
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000002120 nanofilm Substances 0.000 claims description 15
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 13
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 13
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 claims description 12
- 238000004381 surface treatment Methods 0.000 claims description 12
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 9
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 8
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 8
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 claims description 7
- NJNWCIAPVGRBHO-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyethyl-dimethyl-[(oxo-$l^{5}-phosphanylidyne)methyl]azanium Chemical group OCC[N+](C)(C)C#P=O NJNWCIAPVGRBHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229920000233 poly(alkylene oxides) Polymers 0.000 claims description 5
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 claims description 5
- 150000003077 polyols Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000001302 tertiary amino group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 abstract description 17
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 11
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 abstract description 2
- 238000012538 light obscuration Methods 0.000 abstract 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 72
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 41
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 36
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 36
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 25
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 25
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 24
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 24
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 23
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 21
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 20
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 230000008569 process Effects 0.000 description 18
- 229910004298 SiO 2 Inorganic materials 0.000 description 16
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 16
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 16
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 16
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000006087 Silane Coupling Agent Substances 0.000 description 15
- 239000000463 material Substances 0.000 description 15
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 15
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 14
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 13
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 12
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 11
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 11
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 11
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 10
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 10
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 10
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 10
- 239000002094 self assembled monolayer Substances 0.000 description 10
- 239000013545 self-assembled monolayer Substances 0.000 description 10
- -1 silicon halide Chemical class 0.000 description 10
- 102100023635 Alpha-fetoprotein Human genes 0.000 description 9
- 238000004544 sputter deposition Methods 0.000 description 9
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 9
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 8
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 8
- 230000005660 hydrophilic surface Effects 0.000 description 8
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 229920002379 silicone rubber Polymers 0.000 description 7
- 239000004945 silicone rubber Substances 0.000 description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- 229920000089 Cyclic olefin copolymer Polymers 0.000 description 6
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 239000004205 dimethyl polysiloxane Substances 0.000 description 6
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 6
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920000435 poly(dimethylsiloxane) Polymers 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 5
- 239000012114 Alexa Fluor 647 Substances 0.000 description 4
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 4
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 4
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 4
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 4
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 150000003512 tertiary amines Chemical group 0.000 description 4
- 238000007740 vapor deposition Methods 0.000 description 4
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 229910045601 alloy Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000956 alloy Substances 0.000 description 3
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 3
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 3
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 3
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 3
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 3
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 229910052761 rare earth metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 150000002910 rare earth metals Chemical class 0.000 description 3
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 3
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 3
- JCZPMGDSEAFWDY-SQOUGZDYSA-N (2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanamide Chemical compound NC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO JCZPMGDSEAFWDY-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 2
- WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N (3-aminopropyl)triethoxysilane Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)CCCN WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- JMKBPENVULMVDP-UHFFFAOYSA-N 10-aminodecane-1-thiol Chemical compound NCCCCCCCCCCS JMKBPENVULMVDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100025475 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Human genes 0.000 description 2
- 102000004641 Fetal Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010003471 Fetal Proteins Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 2
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical class C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N coumarin Chemical compound C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002788 crimping Methods 0.000 description 2
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 2
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 150000004706 metal oxides Chemical class 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 2
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 2
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 229920001709 polysilazane Polymers 0.000 description 2
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- BBEAQIROQSPTKN-UHFFFAOYSA-N pyrene Chemical compound C1=CC=C2C=CC3=CC=CC4=CC=C1C2=C43 BBEAQIROQSPTKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- NDVLTYZPCACLMA-UHFFFAOYSA-N silver oxide Chemical compound [O-2].[Ag+].[Ag+] NDVLTYZPCACLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- QGKMIGUHVLGJBR-UHFFFAOYSA-M (4z)-1-(3-methylbutyl)-4-[[1-(3-methylbutyl)quinolin-1-ium-4-yl]methylidene]quinoline;iodide Chemical compound [I-].C12=CC=CC=C2N(CCC(C)C)C=CC1=CC1=CC=[N+](CCC(C)C)C2=CC=CC=C12 QGKMIGUHVLGJBR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BCHZICNRHXRCHY-UHFFFAOYSA-N 2h-oxazine Chemical compound N1OC=CC=C1 BCHZICNRHXRCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AGIJRRREJXSQJR-UHFFFAOYSA-N 2h-thiazine Chemical compound N1SC=CC=C1 AGIJRRREJXSQJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IHXWECHPYNPJRR-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxycyclobut-2-en-1-one Chemical compound OC1=CC(=O)C1 IHXWECHPYNPJRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001316595 Acris Species 0.000 description 1
- 239000012099 Alexa Fluor family Substances 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 229910052693 Europium Inorganic materials 0.000 description 1
- YCKRFDGAMUMZLT-UHFFFAOYSA-N Fluorine atom Chemical compound [F] YCKRFDGAMUMZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N Methyl methacrylate Chemical compound COC(=O)C(C)=C VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002151 Pleural effusion Diseases 0.000 description 1
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 229910052771 Terbium Inorganic materials 0.000 description 1
- BOTDANWDWHJENH-UHFFFAOYSA-N Tetraethyl orthosilicate Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)OCC BOTDANWDWHJENH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003926 acrylamides Chemical class 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005210 alkyl ammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 102000013529 alpha-Fetoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical group 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 229960000956 coumarin Drugs 0.000 description 1
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000005685 electric field effect Effects 0.000 description 1
- 238000007772 electroless plating Methods 0.000 description 1
- 238000010894 electron beam technology Methods 0.000 description 1
- 238000009713 electroplating Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- OUDSFQBUEBFSPS-UHFFFAOYSA-N ethylenediaminetriacetic acid Chemical group OC(=O)CNCCN(CC(O)=O)CC(O)=O OUDSFQBUEBFSPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005281 excited state Effects 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- GVEPBJHOBDJJJI-UHFFFAOYSA-N fluoranthrene Natural products C1=CC(C2=CC=CC=C22)=C3C2=CC=CC3=C1 GVEPBJHOBDJJJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000005283 ground state Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 125000000717 hydrazino group Chemical group [H]N([*])N([H])[H] 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 150000003949 imides Chemical class 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000001746 injection moulding Methods 0.000 description 1
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N iodoacetamide Chemical compound NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 1
- ZBKFYXZXZJPWNQ-UHFFFAOYSA-N isothiocyanate group Chemical group [N-]=C=S ZBKFYXZXZJPWNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 229910052747 lanthanoid Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002602 lanthanoids Chemical class 0.000 description 1
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229910044991 metal oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 1
- PSZYNBSKGUBXEH-UHFFFAOYSA-N naphthalene-1-sulfonic acid Chemical compound C1=CC=C2C(S(=O)(=O)O)=CC=CC2=C1 PSZYNBSKGUBXEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910001000 nickel titanium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000623 nickel–chromium alloy Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000510 noble metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052755 nonmetal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000005304 optical glass Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 229920006254 polymer film Polymers 0.000 description 1
- 229920000098 polyolefin Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 239000010970 precious metal Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 239000011546 protein dye Substances 0.000 description 1
- 230000010349 pulsation Effects 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 239000004065 semiconductor Substances 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 125000005372 silanol group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 229910001923 silver oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000009751 slip forming Methods 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 150000003461 sulfonyl halides Chemical class 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- KZMWNMQETCHSTH-UHFFFAOYSA-N trimethylazanium dichloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)C.[Cl-].C[NH+](C)C KZMWNMQETCHSTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AAAQKTZKLRYKHR-UHFFFAOYSA-N triphenylmethane Chemical compound C1=CC=CC=C1C(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 AAAQKTZKLRYKHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000439 tumor marker Substances 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
Abstract
【解決手段】本発明は、透明誘電体基板の表面に金属薄膜が形成され、該金属薄膜の表面に透明誘電体層が形成された構造を有し、且つ、該透明誘電体層の表面における空気中での水との接触角が0°以上50°以下であるプラズモン励起センサチップ、及び、これを用いたプラズモン励起センサを提供する。
【選択図】図1
Description
透明誘電体基板の表面に金属薄膜が形成され、
該金属薄膜の表面に透明誘電体層が形成された
構造を有し、且つ、
該透明誘電体層の表面における空気中での水との接触角が0°以上50°以下である
ことを特徴とする。
本発明のプラズモン励起センサチップにおいて、透明誘電体層が、無機酸化膜および親水性有機分子膜のうちの少なくともいずれか1つからなることが好ましい。
本発明のプラズモン励起センサチップの一実施態様として、透明誘電体基板が、金属薄膜形成用平面、プリズム部およびサンプル保持部を含む一体化構造体ブロックであるプラズモン励起センサチップが挙げられる。その一態様において、一体化構造体ブロックは、樹脂製のブロックである。
本発明の第3の態様に係るアナライトの検出方法は、
工程(p):上記第2の態様に係るプラズモン励起センサに検体を接触させる工程、および
工程(q):該プラズモン励起センサに形成したアナライト−リガンド複合体の生成を、表面プラズモン共鳴を通じて増強された蛍光発光に基づいて検出する工程
を含むことを特徴とする。
〔プラズモン励起センサチップ〕
本発明に係るプラズモン励起センサチップ11は、
透明誘電体基板111の表面に金属薄膜112が形成され、
該金属薄膜112の表面に透明誘電体層113が形成された
構造を有し、且つ、
該透明誘電体層113の表面における空気中での水との接触角が0〜50°であることを特徴とする。
すなわち、本発明に係るプラズモン励起センサチップ11は、透明誘電体基板111、金属薄膜112、および一定の親水性を有する透明誘電体層113を含んでいる。
本発明において、プラズモン励起センサチップ11の構造を支持する誘電体基板として透明誘電体基板111が用いられる。本発明において、誘電体基板として透明誘電体基板111を用いるのは、後述する金属薄膜112への光照射をこの誘電体基板を通じて行うからである。
また、透明誘電体基板111は、d線(588nm)における屈折率〔nd〕が好ましくは1.40〜2.20である。
本発明で透明誘電体基板111として用いられる透明平面基板は、通常、ガラス製または、ポリカーボネート(PC)、ポリメチルメタクリレート(PMMA)、シクロオレフィンポリマー(COP)などの光学樹脂製の透明平面基板である。
酸による洗浄処理としては、0.001〜1Nの塩酸中に、1〜3時間浸漬することが好ましい。
プラズマによる洗浄処理としては、例えば、プラズマドライクリーナー(ヤマト科学(株)製のPDC200)中に、0.1〜30分間浸漬させる方法が挙げられる。
本発明で透明誘電体基板111として用いられる一体化構造体ブロックは、金属薄膜形成用平面、プリズム部およびサンプル保持部を含む。この一体化構造体ブロックは、金属薄膜形成用平面とプリズム部とが一体化された構造を有しており、この金属薄膜形成用平面は、プリズム部における光反射面に位置する。また、一体化構造体ブロックは、この金属薄膜形成用平面を囲うように連続的に形成された側面構造を有しており、この側面構造と金属薄膜形成用平面とからなる凹部がサンプル保持部を構成している。すなわち、金属薄膜形成用平面はサンプル保持部の底面を構成し、側面構造はサンプル保持部の側面を構成する。本発明で透明誘電体基板111として一体化構造体ブロックを用いる利点としては、プラズモン励起センサチップの交換が容易となることから、アナライト検出のハイスループット化が可能となる点、および、金属薄膜形成用平面とプリズム部とが一体化された構造により金属薄膜形成用平面とプリズム部との界面における入射光の反射を抑制できる点にある。
本発明に係るプラズモン励起センサチップ11では、透明誘電体基板111の一方の表面に金属薄膜112を形成する。金属薄膜112は、光源からの照射光により表面プラズモン励起を引き起こすことで電場を発生させる。ここで、アナライトの検出を蛍光分子からの発光量に基づいて行う場合、金属薄膜112による電場の発生により蛍光分子が発光し、さらに、その発光が増強される。
本発明に係るプラズモン励起センサチップ11では、金属薄膜112の表面に透明誘電体層113が形成されている。金属薄膜112から生じる電場の効果を最大限に得る観点から、本発明においては、金属薄膜112の表面に透明誘電体層113が直接形成されていることが好ましい。プラズモン励起センサとして使用する際にアナライトなどの生体分子による非特異吸着を抑制し、それによりアナライト検出の際のアッセイ効率を向上させる観点から、透明誘電体層113は親水性表面を有しており、具体的には、透明誘電体層113の表面における空気中での水との接触角は0°以上50°以下、好ましくは0°以上30°以下である。
本発明で透明誘電体層113として用いられる無機酸化膜は、主として親水性無機酸化物からなる膜である。ここで、親水性無機酸化物として、シリカおよびチタニアが挙げられるが、これらに限定されるものではない。透明誘電体層113をこのような無機酸化膜で構成すると、アナライト等の生体分子による非特異吸着を抑制することができるのでアッセイ効率が向上するほか、アナライトの検出の際に金属薄膜112による蛍光分子の消光を抑制することができ、さらに、金属薄膜112によりもたらされる電場増強の効果を向上できる利点がある。また、高い親水性により金属薄膜112の汚れを抑制することもできる。さらに、無機酸化膜を透明誘電体層113として用いると、上記透明誘電体基板111からの金属薄膜112の剥離を抑制することもできる。
また、透明誘電体層113として用いられる無機酸化膜の表面には、後述する親水性有機分子膜に用いられる有機分子が直接または官能性シランカップリング剤を介してさらに結合していてもよい。例えば、無機酸化膜の表面に、フッ素系のポリマー被膜、PEG(ポリエチレングリコール)、MPC(ホスファチジルコリン)ポリマー等の有機分子からなる親水性構造がさらに形成されていてもよい。このとき、この有機分子からなる親水性構造には、後述するリガンド121をプラズモン励起センサチップ11に固定するためのリガンド固定用結合基として、アミノ基、チオール基、カルボキシル基、ヒドロキシ基などの官能基が含まれていてもよい。
なお、形成する無機酸化膜の厚さは、使用する親水性無機酸化膜形成剤の濃度および反応時間などの反応条件を適宜調整することにより制御することができる。
本発明では、透明誘電体層113が親水性有機分子膜からなるものであってもよい。ここで、親水性有機分子膜は、表面に親水性基、例えば、ポリアルキレンオキサイド構造、ポリオール構造、ポリアミン構造、3級アミン構造、4級アンモニウム構造およびホスホリルコリン構造のうち少なくともいずれか1つを有する親水性有機分子膜が挙げられるが、これらに限定されるものではない。透明誘電体層113をこのような親水性有機分子膜で構成すると、アナライト等の生体分子による非特異吸着を抑制することができるのでアッセイ効率が向上するほか、アナライトの検出の際に金属薄膜112による蛍光分子の消光を抑制することができる。
親水性有機分子膜には、後述するリガンド121をプラズモン励起センサチップ11に固定するためのリガンド固定用結合基として、アミノ基、チオール基、カルボキシル基などの官能基を有していてもよい。このリガンド固定用結合基は、上記親水性基と同じでもよいし、異なっていてもよい。
なお、形成する親水性有機分子膜の厚さは、使用する親水性有機分子の濃度および反応時間などの反応条件を適宜調整することにより制御することができる。
本発明の第2の態様は、
上述したプラズモン励起センサチップ11の、前記透明誘電体層113が存在する表面にリガンド121が結合しているプラズモン励起センサ10である。
本発明に係るプラズモン励起センサ10では、上述したプラズモン励起センサチップ11のうち、透明誘電体層113を形成した側の表面にリガンド121を結合させる。このリガンド121は、プラズモン励起センサ10に、検体中のアナライトを固定させる目的で用いられるものである。
本発明においてリガンド121として抗体が用いられる場合、蛍光分子をアナライトと結合させる目的で、後述する工程(p−1)においてもリガンドが用いられることがある。そのため、本発明においては、プラズモン励起センサに予め固定されるリガンドを「第1のリガンド」と称し、後述する工程(p−1)で用いられるリガンドを「第2のリガンド」と称することがある。
本発明のプラズモン励起センサ10において、プラズモン励起センサチップ11への、リガンド121の結合態様は特に限定されるものではない。
本発明の第3の態様は、
工程(p):上述したプラズモン励起センサ10に検体を接触させる工程、および
工程(q):該プラズモン励起センサに形成したアナライト−リガンド複合体の生成を、表面プラズモン共鳴を通じて増強された蛍光発光に基づいて検出する工程
を含むアナライトの検出方法である。
本発明の検出方法において、工程(p)は上述したプラズモン励起センサに検体を接触させる工程である。
本発明において、「検体」とは、本発明のアッセイ法による測定対象となる種々の試料をいう。
なお、本発明の検出方法における検出対象となるアナライトが核酸等の場合には、後述する蛍光分子を予め導入した検体を上記「検体」として用いてもよい。
本発明において「アナライト」は、上記透明誘電体層113表面に固定化された第1のリガンド121を特異的に認識され(または、認識し)結合し得る分子または分子断片を意味する。このような「分子」または「分子断片」として、例えば、核酸(一本鎖であっても二本鎖であってもよいDNA、RNA、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、PNA(ペプチド核酸)等、またはヌクレオシド、ヌクレオチドおよびそれらの修飾分子)、タンパク質(ポリペプチド、オリゴペプチド等)、アミノ酸(修飾アミノ酸も含む。)、糖質(オリゴ糖、多糖類、糖鎖等)、脂質、またはこれらの修飾分子、複合体などが挙げられ、具体的には、AFP(αフェトプロテイン)等のがん胎児性抗原や腫瘍マーカー、シグナル伝達物質、ホルモンなどであってもよく、特に限定されない。
本発明において、「接触」とは、プラズモン励起センサのリガンド121等が固定化されている面が送液中に浸漬されている状態で、この送液中に含まれる対象物をこのプラズモン励起センサと接触させることをいう。この「接触」によって、リガンド121と上記アナライトとが結合したアナライト−リガンド複合体が形成される。工程(p)では、上記検体とプラズモン励起センサとの「接触」は、流路中に循環する送液に検体が含まれ、プラズモン励起センサのリガンドが固定化されている片面のみが該送液中に浸漬されている状態において、プラズモン励起センサと検体とを接触させる態様が好ましい。
このような固定方法の例としては、小規模ロット(実験室レベル)では、まず、プラズモン励起センサの金属薄膜112および透明誘電体層113が形成されている表面上に、一定の厚さを有するシリコーンゴム製シートまたはOリングを載せることによって流路の側面構造を形成し、次いで、その上に送液導入口及び送液排出口を設けてある光透過性の天板(例えば、PMMA基板)を配置することによって流路の天井面を形成し、その後、これらを圧着して適当な留め具により固定する方法などが挙げられる。このとき、側面構造を構成する材料として、その中央部に任意の形状および大きさを有する穴を開けてある、適当な厚さを有するシリコーンゴム製シートを用いると、この穴の内周がプラズモン励起センサ部の流路の側面構造となることから、所要の形状および大きさを有する流路を容易に形成することができるので好ましい。例えば、まず、該プラズモン励起センサの金属薄膜112が形成されている表面に、流路高さ0.5mmを有する穴あきポリジメチルシロキサン(PDMS)製シートを該プラズモン励起センサの金属薄膜112および透明誘電体層113が形成されている部位を囲むようにして配置し、次いで、このポリジメチルシロキサン(PDMS)製シートの上に、予め送液導入口及び送液排出口を設けてあるPMMA基板を配置し、その後、該PMMA基板と該ポリジメチルシロキサン(PDMS)製シートと該プラズモン励起センサとを圧着し、ビス等の留め具により固定する方法が好ましい。また、プラズモン励起センサに、シリコーンゴム製シートまたはOリングと光透過性の天板とを圧着し、固定するにあたっては、必要に応じて、シリコーンゴムまたはステンレスなどの材質でできた適当なスペーサーを併用してもよい。
送液の総量、すなわち流路の容積としては、通常0.0001〜20mL、好ましくは0.01〜1mLである。
送液の流速は、通常1〜2,000μL/min、好ましくは5〜500μL/minである。
洗浄工程とは、工程(p)を経て得られたプラズモン励起センサの表面、および後述する工程(p−1)を経て得られるプラズモン励起センサの表面のうち少なくともいずれか一方を洗浄する工程である。
洗浄液を循環させる時間は、通常0.5〜180分間、好ましくは5〜60分間である。
前記リガンドとして抗体を用いる場合、本発明の検出方法には工程(p−1)として、前記工程(p)により検体を接触させたプラズモン励起センサに、第2のリガンドと蛍光分子とからなるコンジュゲートを接触させ、これらを反応させる工程がさらに含まれる。この工程(p−1)において、前記工程(p)でプラズモン励起センサに形成したアナライト−リガンド複合体の蛍光修飾を行うことにより、後述する工程(q)においてアナライト−リガンド複合体の生成量を蛍光発光量の形で定量することが可能となる。
本発明において、「蛍光分子」とは、本発明において、所定の励起光を照射する、または電界効果を利用して励起することによって蛍光を発光する分子を意味し、該「蛍光」は、燐光など各種の発光も含む。
これらの蛍光色素は1種単独で用いてもよく、また2種以上併用してもよい。
「第2のリガンドと蛍光分子からなるコンジュゲート」は、リガンドとして2次抗体を用いる場合、検体中に含有されるアナライト(標的抗原)を認識し結合し得る抗体であることが好ましい。
送液を循環させる温度、時間および流速は、それぞれ上記工程(p)の場合と同様である。
本発明の検出方法において、工程(q)は、前記工程(p)を経て得られたプラズモン励起センサに形成したアナライト−リガンド複合体の生成を、表面プラズモン共鳴を通じて増強された蛍光発光に基づいて検出する工程である。工程(q)は、通常、アナライト−リガンド複合体に結合した蛍光分子からの蛍光発光を検出することにより行われ、具体的には、工程(p)および必要に応じて行われる工程(p−1)を経て得られたプラズモン励起センサについて、透明誘電体基板111の、金属薄膜112とは反対側の表面から、プリズムを経由してレーザ光を照射し、表面プラズモン共鳴を通じて励起された蛍光分子から発光された蛍光量を測定することにより行われる。
本発明で用いる光源は、前記金属薄膜112にプラズモン励起を生じさせることができるものであれば、特に制限がないものの、波長分布の単一性および光エネルギーの強さの点で、レーザ光を光源として用いることが好ましい。レーザ光は、光学フィルタを通して、プリズムに入射する直前のエネルギーおよびフォトン量を調節することが望ましい。
「カットフィルタ」は、外光(装置外の照明光)、励起光(励起光の透過成分)、迷光(各所での励起光の散乱成分)、プラズモンの散乱光(励起光を起源とし、プラズモン励起センサ表面上の構造体または付着物などの影響で発生する散乱光)、酵素蛍光基質の自家蛍光、などの各種ノイズ光を除去するフィルタであって、例えば、干渉フィルタ、色フィルタなどが挙げられる。
本発明において、上記光学系は「駆動装置」の形で統合されていてもよい。本発明の駆動装置は、上記プラズモン励起センサを用いて、本発明を実施するためのものである。
「送液ポンプ」としては、例えば、送液が微量な場合に好適なマイクロポンプ、送り精度が高く脈動が少なく好ましいが循環することができないシリンジポンプ、簡易で取り扱い性に優れるが微量送液が困難な場合があるチューブポンプなどが挙げられる。
本発明のアッセイ法において、工程(r)は、前記工程(q)で得られた測定結果から、前記検体中に含まれるアナライトの量を算出する工程である。
さらに、工程(r)においては、上記工程(p)の前に測定した“ブランク蛍光シグナル”、上記工程(q)で得られた“測定蛍光シグナル”、および何も修飾していない金属基板を流路に固定し、超純水を流しながらSPFSを測定して得られたシグナルを“初期ノイズ”としたとき、下記式(1a)で表されるアッセイS/N比を算出することができる:
アッセイS/N比=|Ia/Io|/In (1a)
(上記式(1a)において、Iaはアッセイ蛍光シグナル、Ioはブランク蛍光シグナル、Inは初期ノイズである)。
アッセイS/N比=|Ia|/|Ian| (1b)
(上記式(1b)において、Ianはアッセイノイズシグナル、Iaは上記式(1a)の場合と同様にアッセイ蛍光シグナルである)。
抗αフェトプロテイン(AFP)モノクローナル抗体(6D2、2.5mg/mL、ミクリ免疫研究所(株)製)を、市販のAlexa Fluor647ラベリングキット(Molecular Probes社製)により調製し、Alexa Fluor 647標識抗AFPモノクローナル抗体溶液を得た。
以下の実施例および比較例で用いた標識抗体は、すべて同様の方法により調製されたものである。
(工程1:金属薄膜の形成)
厚さ1mmのガラス製の透明平面基板「S-LAL 10」((株)オハラ製。屈折率〔nd〕=1.72)を、プラズマドライクリーナーでプラズマ洗浄した。プラズマ洗浄された基板表面に金薄膜をスパッタリング法により形成した。金薄膜の厚さは52nmであった。
前記工程1により得られた基板を、10−アミノ−1−デカンチオールを1mM含むエタノール溶液に12時間以上浸漬し、金薄膜の片面にSAM(Self Assembled Monolayer;自己組織化単分子膜)を形成した。この基板を、前記エタノール溶液から取り出し、エタノールおよびイソプロパノールでそれぞれ洗浄した後、エアガンを用いて乾燥させた。得られたSAMが固定化された金属基板をカルボキシメチルデキストラン(名糖産業(株)製、分子量500万、置換度1.08)1mg/mL水溶液に浸漬した。更に、1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(EDC:(株)同人化学研究所製)、N−ヒドロキシコハク酸イミド(NHS:Thermo Scientific社製)をそれぞれ0.5mMになるように加え1.5時間室温で反応させ、アミノ基末端のSAMとカルボキシメチルデキストランのカルボキシル基とのアミドカップリングを行うことによりカルボキシメチルデキストランを固定化させた。反応終了後、1 Nの水酸化ナトリウムを基板表面に滴下し、室温で30分反応させることにより、活性エステル化されていたカルボキシル基をカルボン酸に変換した。このようにして、カルボキシメチルデキストランが表面に固定化されたプラズモン励起センサチップが得られた。
1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(EDC:(株)同人化学研究所製)およびN−ヒドロキシコハク酸イミド(NHS:Thermo Scientific社製)をそれぞれ100mM含むMES(2−モルホリノエタンスルホン酸)系バッファー(25mM MES バッファー、 10mM NaCl(pH6.0)混合液)を、前記工程2により得られたプラズモン励起センサチップに滴下し、20分室温で反応させ、当該センサチップに組み込まれているカルボキシメチルデキストランを活性エステル化した。
工程3で得られたプラズモン励起センサのうちの抗体が結合された側の面に、測定領域を形成するための、流路長7mm、幅2mmの厚さ2mmのポリメチルメタクリレート(PMMA)製流路を載せた。このPMMA製流路には、送液導入用の穴(送液導入口)および送液排出用の穴(送液排出口)が形成されている。これらセンサ、およびPMMA製流路の積層物を外周部で圧着してビスで固定し、プラズモン励起センサ部を構築した。
前記工程1〜4により作製された表面プラズモン励起センサに、まず、AFP(2.0mg/mL溶液、Acris Antibodies GmbH社)が0.1ng/mLとなるようPBSバッファー(pH7.4)で希釈した溶液を、5000μL/minにて25分間フローさせた。洗浄工程として、0.05%Tween20を含んだTBS溶液(pH7.4)を5000μL/minにて2分間フローさせた。
前記比較例1の工程1〜3を下記工程1〜2で置き換えた以外は、比較例1と全く同様の操作を行い比較例2の測定を行った。すなわち、比較例2では、比較例1のようなSAMの形成およびデキストランによる表面処理を行う代わりに、センサ表面をSiO2で被覆しており、このSiO2上に抗体を物理吸着により固定している。ここで、このSiO2は特別な親水化処理を行っていないものである。
厚さ1mmのガラス製の透明平面基板「S-LAL 10」((株)オハラ製。屈折率〔nd〕=1.72)を、プラズマドライクリーナーでプラズマ洗浄した。プラズマ洗浄された基板表面に金薄膜をスパッタリング法により形成し、更にSiスパッタをO2存在下に行いSiO2皮膜を形成したところ、SiO2皮膜を有するプラズモン励起センサチップが得られた。このプラズモン励起センサチップにおいて、金薄膜の厚さは48nm、SiO2皮膜の厚さは800nmであった。
前記工程1で得られたプラズモン励起センサチップについて、SiO2を被覆した金薄膜の上に裏回り防止用の外枠を付した後、抗αフェトプロテイン(AFP)モノクローナル抗体(1D5、1.8mg/mL、ミクリ免疫研究所(株)製)を、当該抗体が50μg/mLとなるよう、MES(2−モルホリノエタンスルホン酸)系バッファー(25mM MES バッファー、 10mM NaCl(pH6.0))にて希釈して得られた溶液を加えた。室温で3時間浸漬後、PBSバッファーで洗浄し最後に、1%BSA−TBSバッファー(pH7.4)溶液を、このセンサチップに滴下し、40分間室温で反応させることによってブロッキング処理をし、プラズモン励起センサを完成させた。
前記比較例1の工程1〜3を下記工程1〜3で置き換えた以外は、比較例1と同様の方法でプラズモン励起センサチップおよびプラズモン励起センサを作製し、測定を行った。すなわち、この実施例1は、下記のように、工程2において親水性シランカップリング剤による表面処理をSiO2皮膜に施したことを除き比較例2と同様の工程でセンサを作製した実施例である。
厚さ1mmのガラス製の透明平面基板「S-LAL 10」((株)オハラ製。屈折率〔nd〕=1.72)を、プラズマドライクリーナーでプラズマ洗浄した。プラズマ洗浄された基板表面に金薄膜をスパッタリング法により形成し、更にSiスパッタをO2存在下に行いSiO2皮膜を形成した。金薄膜の厚さは49nm、SiO2皮膜の厚さは800nmであった。
このようにして得られたSiO2を被覆した金薄膜の上に裏回り防止用の外枠を付した後、SIT8189.0(Gelest社製親水性シランカップリング剤(N−(3−トリエトキシシリルプロピル)グルコンアミド,50%エタノール溶液))を2g、および3−アミノプロピルトリエトキシシラン(信越シリコーン社製抗体固定化用シランカップリング剤)を1g取りEtOH40gで調整した液で満たし50℃で2時間反応後、水洗し100℃で1時間加熱乾燥を行って親水性表面を形成した。このようにして、親水性表面を有するプラズモン励起センサチップが得られた。
ここで用いられたSIT8189.0は、4級アンモニウム基を有するシランカップリング剤である。
抗αフェトプロテイン(AFP)モノクローナル抗体(1D5、1.8mg/mL、ミクリ免疫研究所(株)製)を、当該抗体が50μg/mL含まれるようMES(2−モルホリノエタンスルホン酸)系バッファー(25mM MES バッファー、 10mM NaCl(pH6.0))にて希釈し、更に1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(EDC:(株)同人化学研究所製)およびN−ヒドロキシコハク酸イミド(NHS:Thermo Scientific社製)それぞれ100mM含有するMES(2−モルホリノエタンスルホン酸)系バッファー(25mM MES バッファー、 10mM NaCl(pH6.0))混合液を加えて、3分室温で反応させて活性エステル型抗体溶液を調製した。そして、この活性エステル型抗体溶液に、前記工程2で得られたプラズモン励起センサチップの親水性表面を2時間浸漬させて抗体を固定化した。
工程2で親水性膜を形成した以外は、比較例1と同様にプラズモン励起センサチップおよびプラズモン励起センサを作製しアッセイを行った。すなわち、実施例2では、プラズモン励起センサチップの作製にあたり、比較例1の工程1〜2を下記工程1〜2に変更した。
厚さ1mmのガラス製の透明平面基板「S-LAL 10」((株)オハラ製。屈折率〔nd〕=1.72)を、プラズマドライクリーナーでプラズマ洗浄した。プラズマ洗浄された基板表面に金薄膜をスパッタリング法により形成した。金薄膜の厚さは50nmであった。
前記工程1により得られた基板を、10−アミノ−1−デカンチオールを1mM含むエタノール溶液に12時間以上浸漬し、金薄膜の片面にSAM(Self Assembled Monolayer;自己組織化単分子膜)を形成した。この基板を、前記エタノール溶液から取り出し、エタノールおよびイソプロパノールでそれぞれ洗浄した後、エアガンを用いて乾燥させた。得られたSAMがパターニングされた金属基板をカルボキシメチルデキストラン(名糖産業(株)製、分子量500万、置換度1.08)1mg/mL水溶液に浸漬した。更に、1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(EDC:(株)同人化学研究所製)、N−ヒドロキシコハク酸イミド(NHS:Thermo Scientific社製)をそれぞれ0.5mMになるように加え1.5時間室温で反応させ、アミノ基末端のSAMとカルボキシメチルデキストランのカルボキシル基とのアミドカップリングを行うことによりカルボキシメチルデキストランを固定化させた。反応終了後、1 Nの水酸化ナトリウムを基板表面に滴下し、室温で30分反応させることにより、活性エステル化されていたカルボキシル基をカルボン酸に変換した。更にスピンコーターを用いてフレッセラ(登録商標)R(松下電工社製超親水性膜形成剤)を乾燥膜厚が10nmとなるように塗布し、30分放置した後水洗して超親水性皮膜を形成したプラズモン励起センサチップを得た。
このプラズモン励起センサチップに形成された超親水性皮膜は、表面に多量のシラノール基を有するものである。
実施例1の工程1〜3を下記の工程1〜3に変更したことを除き、実施例1と同様の工程でプラズモン励起センサチップおよびプラズモン励起センサを作製し測定を行った。
厚さ1mmのガラス製の透明平面基板「S-LAL 10」((株)オハラ製。屈折率〔nd〕=1.72)を、プラズマドライクリーナーでプラズマ洗浄した。プラズマ洗浄された基板表面に金薄膜をスパッタリング法により形成した。金薄膜の厚さは50nmであった。
金薄膜をスピンコーターにセットし、NL110A(アクアミカ社製親水性ポリシラザン)を乾燥膜厚が10nmとなる条件で塗布を行った。100℃で30分加熱乾燥を行い、親水性皮膜を形成した。更に3−アミノプロピルトリエトキシシラン(信越シリコーン社製抗体固定化用シランカップリング剤)を2g取りEtOH40gと水10gを加えて調整した液を滴下して自然乾燥後、水洗し、100℃で1時間加熱乾燥を行って親水性表面を形成した。このようにして、親水性表面を有するプラズモン励起センサチップが得られた。
抗αフェトプロテイン(AFP)モノクローナル抗体(1D5、1.8mg/mL、ミクリ免疫研究所(株)製)を、当該抗体が50μg/mL含まれるようMES(2−モルホリノエタンスルホン酸)系バッファー(25mM MES(2−モルホリノエタンスルホン酸) バッファー、 10mM NaCl(pH6.0))にて希釈し、更に1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(EDC:(株)同人化学研究所製)およびN−ヒドロキシコハク酸イミド(NHS:Thermo Scientific社製)それぞれ100mM含有するMES(2−モルホリノエタンスルホン酸)系バッファー(25mM MES バッファー、 10mM NaCl(pH6.0))混合液を加えて、3分室温で反応させて活性エステル型抗体溶液を調製した。そして、この活性エステル型抗体溶液に前記工程2で得られたプラズモン励起センサチップの親水性表面を2時間浸漬させて抗体を固定化した。
実施例1のシランカップリング剤の代わりにSIT8415.0 (Gelest社製親水性シランカップリング剤(塩化N−トリメトキシシリルプロピル−N,N,N−トリメチルアンモニウム,50%メタノール溶液))を用いたことを除き、上記実施例1と同様の工程でプラズモン励起センサチップおよびプラズモン励起センサを作製し測定を行った。
以上の実施例および比較例それぞれについて、空気中での水との接触角を測定し、また、上記のように測定したブランクシグナルおよびアッセイシグナルから下記式によりS/N比を算出した。
S/N比=|(アッセイシグナル)|/|(ブランクシグナル)|
表2の結果から明らかなように、通常のサンドイッチイムノアッセイを行った通常基板の比較例1、2および親水化処理を行った本発明の実施例1〜4とでは接触角が明確に異なることが分かる。アッセイを行った結果で比較すると、カルボキシメチルデキストラン使用系においては比較例1に対して実施例2のシグナルが大きく、カルボキシメチルデキストラン不使用系においては比較例2に対して実施例1,3,4のシグナルが大きいことから、消光現象が起きにくいことが推察される。またもS/Nが良いことから非特異吸着が低減されていることが推察される。また長時間、あるいは再利用した時の安定性では更に違いが大きくなる。
11・・・プラズモン励起センサチップ
111・・・透明誘電体基板
112・・・金属薄膜
113・・・透明誘電体層
121・・・リガンド
Claims (15)
- 透明誘電体基板の表面に金属薄膜が形成され、
該金属薄膜の表面に透明誘電体層が形成された
構造を有し、且つ、
該透明誘電体層の表面における空気中での水との接触角が0°以上50°以下であるプラズモン励起センサチップ。 - 前記接触角が0°以上30°以下である請求項1に記載のプラズモン励起センサチップ。
- 前記透明誘電体層が、無機酸化膜および親水性有機分子膜のうちの少なくともいずれか1つからなる請求項1または2に記載のプラズモン励起センサチップ。
- 前記無機酸化膜が、シリカまたはチタニアを含む請求項3に記載のプラズモン励起センサチップ。
- 前記無機酸化膜が、シリカ前駆モノマーによる表面処理により形成される請求項4に記載のプラズモン励起センサチップ。
- 前記無機酸化膜が、チタニア前駆モノマーによる表面処理により形成される請求項4に記載のプラズモン励起センサチップ。
- 前記親水性有機分子膜が、ポリアルキレンオキサイド構造、ポリオール構造、ポリアミン構造、3級アミン構造、4級アンモニウム構造およびホスホリルコリン構造のうち少なくともいずれか1つを有する請求項3に記載のプラズモン励起センサチップ。
- 前記透明誘電体層の厚さが5nm〜80nmである請求項1〜7のいずれかに記載のプラズモン励起センサチップ。
- 前記透明誘電体層の厚さが200nm〜1000nmである請求項1〜7のいずれかに記載のプラズモン励起センサチップ。
- 前記透明誘電体基板が、金属薄膜形成用平面、プリズム部およびサンプル保持部を含む一体化構造体ブロックである請求項1〜9のいずれかに記載のプラズモン励起センサチップ。
- 前記一体化構造体ブロックが、樹脂製のブロックである請求項10に記載のプラズモン励起センサチップ。
- 前記請求項1〜11のいずれかに記載のプラズモン励起センサチップの、前記透明誘電体層が存在する表面にリガンドが結合しているプラズモン励起センサ。
- 前記リガンドが抗体である請求項12に記載のプラズモン励起センサ。
- 下記工程(p)〜(q)を含むアナライトの検出方法:
工程(p):前記請求項12または13に記載のプラズモン励起センサに検体を接触させる工程、および
工程(q):該プラズモン励起センサに形成したアナライト−リガンド複合体の生成を、表面プラズモン共鳴を通じて増強された蛍光発光に基づいて検出する工程。 - 前記工程(q)が、前記アナライト−リガンド複合体に結合した蛍光分子からの蛍光発光を検出することにより行われる請求項14に記載の検出方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2010172152A JP5516198B2 (ja) | 2010-07-30 | 2010-07-30 | プラズモン励起センサチップおよびこれを用いたプラズモン励起センサ、並びにアナライトの検出方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2010172152A JP5516198B2 (ja) | 2010-07-30 | 2010-07-30 | プラズモン励起センサチップおよびこれを用いたプラズモン励起センサ、並びにアナライトの検出方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2012032282A true JP2012032282A (ja) | 2012-02-16 |
JP5516198B2 JP5516198B2 (ja) | 2014-06-11 |
Family
ID=45845861
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010172152A Active JP5516198B2 (ja) | 2010-07-30 | 2010-07-30 | プラズモン励起センサチップおよびこれを用いたプラズモン励起センサ、並びにアナライトの検出方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP5516198B2 (ja) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2012047621A (ja) * | 2010-08-27 | 2012-03-08 | Konica Minolta Holdings Inc | プラズモン励起センサチップおよびこれを用いたアッセイ法 |
KR101296967B1 (ko) | 2012-06-05 | 2013-08-14 | 성균관대학교산학협력단 | 스핀코팅법을 이용한 spr 바이오센서용 프리즘모듈 제조방법 |
US9847046B2 (en) | 2014-07-09 | 2017-12-19 | Samsung Display Co., Ltd. | Display apparatus and method of testing the same |
CN112005101A (zh) * | 2018-08-28 | 2020-11-27 | 松下知识产权经营株式会社 | 传感器基板及其制造方法 |
Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002242486A (ja) * | 2001-02-13 | 2002-08-28 | Nagase & Co Ltd | 防汚性墓石およびその製造方法 |
JP2003139698A (ja) * | 2001-10-31 | 2003-05-14 | Hitachi Housetec Co Ltd | シリカ膜の評価方法及びシリカ被覆された成形体 |
JP3883926B2 (ja) * | 2002-07-31 | 2007-02-21 | 富士フイルムホールディングス株式会社 | 測定装置 |
JP2007078620A (ja) * | 2005-09-16 | 2007-03-29 | National Agriculture & Food Research Organization | 樹脂製マイクロチャネルアレイの製造方法及びこれを用いた血液測定方法 |
JP2007256268A (ja) * | 2006-02-22 | 2007-10-04 | Fujifilm Corp | バイオセンサー |
JP2008209379A (ja) * | 2007-02-01 | 2008-09-11 | Fujifilm Corp | バイオセンサー用基板 |
JP2009510423A (ja) * | 2005-09-27 | 2009-03-12 | サントル・ナシオナル・ドゥ・ラ・ルシェルシュ・シアンティフィーク(セーエヌエールエス) | 表面プラズモン共鳴(spr)検出用の新規チップ |
JP2010008263A (ja) * | 2008-06-27 | 2010-01-14 | Fujifilm Corp | 検出方法、検出用試料セルおよび検出用キット |
JP2010008247A (ja) * | 2008-06-27 | 2010-01-14 | Fujifilm Corp | 検出方法、検出装置、検出用試料セルおよび検出用キット |
WO2010041736A1 (ja) * | 2008-10-10 | 2010-04-15 | コニカミノルタホールディングス株式会社 | 表面プラズモンを利用したアッセイ法 |
-
2010
- 2010-07-30 JP JP2010172152A patent/JP5516198B2/ja active Active
Patent Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002242486A (ja) * | 2001-02-13 | 2002-08-28 | Nagase & Co Ltd | 防汚性墓石およびその製造方法 |
JP2003139698A (ja) * | 2001-10-31 | 2003-05-14 | Hitachi Housetec Co Ltd | シリカ膜の評価方法及びシリカ被覆された成形体 |
JP3883926B2 (ja) * | 2002-07-31 | 2007-02-21 | 富士フイルムホールディングス株式会社 | 測定装置 |
JP2007078620A (ja) * | 2005-09-16 | 2007-03-29 | National Agriculture & Food Research Organization | 樹脂製マイクロチャネルアレイの製造方法及びこれを用いた血液測定方法 |
JP2009510423A (ja) * | 2005-09-27 | 2009-03-12 | サントル・ナシオナル・ドゥ・ラ・ルシェルシュ・シアンティフィーク(セーエヌエールエス) | 表面プラズモン共鳴(spr)検出用の新規チップ |
JP2007256268A (ja) * | 2006-02-22 | 2007-10-04 | Fujifilm Corp | バイオセンサー |
JP2008209379A (ja) * | 2007-02-01 | 2008-09-11 | Fujifilm Corp | バイオセンサー用基板 |
JP2010008263A (ja) * | 2008-06-27 | 2010-01-14 | Fujifilm Corp | 検出方法、検出用試料セルおよび検出用キット |
JP2010008247A (ja) * | 2008-06-27 | 2010-01-14 | Fujifilm Corp | 検出方法、検出装置、検出用試料セルおよび検出用キット |
WO2010041736A1 (ja) * | 2008-10-10 | 2010-04-15 | コニカミノルタホールディングス株式会社 | 表面プラズモンを利用したアッセイ法 |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2012047621A (ja) * | 2010-08-27 | 2012-03-08 | Konica Minolta Holdings Inc | プラズモン励起センサチップおよびこれを用いたアッセイ法 |
KR101296967B1 (ko) | 2012-06-05 | 2013-08-14 | 성균관대학교산학협력단 | 스핀코팅법을 이용한 spr 바이오센서용 프리즘모듈 제조방법 |
US9847046B2 (en) | 2014-07-09 | 2017-12-19 | Samsung Display Co., Ltd. | Display apparatus and method of testing the same |
CN112005101A (zh) * | 2018-08-28 | 2020-11-27 | 松下知识产权经营株式会社 | 传感器基板及其制造方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP5516198B2 (ja) | 2014-06-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5652393B2 (ja) | Spfs−lpfs系による測定方法に供するプラズモン励起センサおよびアッセイ法 | |
JP5428322B2 (ja) | プラズモン励起センサを用いたアッセイ法 | |
JP5772612B2 (ja) | 表面プラズモン励起増強蛍光分光法を利用する蛍光測定装置用センサチップを用いたアッセイ方法、およびアッセイ用キット | |
JP5958339B2 (ja) | 近接場増強蛍光センサチップ | |
JP5516198B2 (ja) | プラズモン励起センサチップおよびこれを用いたプラズモン励起センサ、並びにアナライトの検出方法 | |
WO2010123073A1 (ja) | 刺激応答性ポリマーを有するプラズモン励起センサを用いたアッセイ法 | |
JP5660035B2 (ja) | 融合タンパク質含有集合体、その製造方法及び該集合体を用いたアッセイ法 | |
JP5541003B2 (ja) | プラズモン励起センサチップおよびこれを用いたアッセイ法 | |
JP2013145139A (ja) | Spfs(表面プラズモン励起増強蛍光分光法)を用いたミオグロビンの免疫学的測定法 | |
EP2607888B1 (en) | Spfs sensor equipped with non-specific adsorption type purification mechanism | |
JP5754309B2 (ja) | 表面プラズモン励起増強蛍光分光法を利用して蛍光量を測定する定量分析方法ならびにそれに用いられる定量分析用キットおよびアナライト解離抑制剤 | |
WO2010041736A1 (ja) | 表面プラズモンを利用したアッセイ法 | |
JP2011169609A (ja) | プラズモン励起センサを用いたアッセイ法 | |
JPWO2011074373A1 (ja) | 表面プラズモン増強蛍光測定装置及びチップ構造体 | |
JP5459143B2 (ja) | Spfs(表面プラズモン励起増強蛍光分光法)により測定される蛍光シグナルの補正方法およびこれを用いたアッセイ方法、並びにこれらの方法に用いられる構造体および表面プラズモン共鳴センサー | |
JP2011127991A (ja) | プラズモン励起センサおよび該センサを用いたアッセイ法 | |
JP2011232149A (ja) | プラズモン励起センサおよびその製造方法、ならびにアナライトの検出方法 | |
JP5245125B2 (ja) | 表面プラズモンを利用したアッセイ法 | |
JP5565125B2 (ja) | Spfs(表面プラズモン励起増強蛍光分光法)またはそれを利用した測定方法ならびにそれらの測定方法用の表面プラズモン共鳴センサ | |
JP5169891B2 (ja) | 表面プラズモンを利用したアッセイ法 | |
JP5298877B2 (ja) | プラズモン励起センサを用いたアッセイ法 | |
JP5516197B2 (ja) | プラズモン励起センサおよび該センサを用いたアッセイ法 | |
WO2010084953A1 (ja) | プラズモン励起センサおよびそれを用いたアッセイ法 | |
JP5298876B2 (ja) | プラズモン励起センサおよびそれを用いたアッセイ法 | |
JP2012026923A (ja) | Spfs(表面プラズモン励起増強蛍光分光法)またはそれを用いた測定法用の表面プラズモン励起センサ、それを作製するためのキットならびに表面プラズモン励起センサを備えたspfsまたはそれを用いた測定法用測定装置 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20130410 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20131120 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20131210 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140210 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20140304 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20140317 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5516198 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |