JP2008531725A - オリゴペプチドの局所適用及び経皮送達のための組成物及び方法 - Google Patents
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Abstract
Description
方法:
動物の治療の24時間前にピロカルピン溶液及び齧歯類麻酔薬を調製した。ピロカルピン溶液は15ml遠心チューブ中で0.9%NaCl中1mg/mlの濃度で作製した。その溶液はボルテックスで2分間よく混合してから、PURADISC 25 TFディスポフィルターを通して滅菌バイアルに濾過することにより滅菌した。次にピロカルピン溶液をフォイルで覆った。3.75mlの100mg/mlケタミン、3.00mlの20mg/mlキシラジン、及び23.25mlの食塩水を配合してボルテックスでよく混合することにより齧歯類麻酔薬カクテルを調製した。
BO:BOTOX(登録商標)単独
BP:KNR+BOTOX(登録商標)
BQ:KNT+BOTOX(登録商標)
BR:オリゴペプチドEEMQRR単独
BS:KNR+オリゴペプチドEEMQRR
BT:KNT+オリゴペプチドEEMQRR
BO:70μlBOTOX(登録商標)及び70μlPBS
BP:70μlBOTOX(登録商標)、35μlKNR骨格及び35μlPBS
BQ:70μlBOTOX(登録商標)、35μlKNT骨格及び35μlPBS
BR:70μlオリゴペプチドEEMQRR及び70μlPBS
BS:70μlオリゴペプチドEEMQRR、35μlKNR骨格及び35μl PBS
BT:70μlオリゴペプチドEEMQRR、35μlKNT骨格及び35μl PBS
1.0.07mlの麻酔薬カクテルを腹腔内に注射し、必要なときにはイソフルランで補完して動物を麻酔した。
方法:
本研究における参加者は、研究に参加する前から既に存在する主観的腋窩多汗症を有していた。重量測定による腋窩発汗は両腕で50mg/5分を超えていた。被験者は18歳以上で健康であり、抗コリン薬又はアミノグリコシド又はカルシウムチャンネル遮断薬で同時に治療していなかった(不使用期間60日)。
順化及び投薬域の準備:
患者を休息位で72〜77°F(22〜25℃)の室温で15分間順応させた。患者はシャツを全部脱ぎ両腋窩を露出した。各腋窩で毛の生えた皮膚を1cm超える投薬域地図を描いた。投薬域を、50mlコニカルチューブから予め濡らした滅菌ガーゼパッドで、下から上へ同じ方向へガーゼの一面を使用して5回長く撫でて洗い清めた。この洗浄ステップをさらに3回繰り返した。腋窩の上から下へ乾燥滅菌ガーゼをしっかり当てて動かし、腋窩を乾燥し、次に腋窩の下のひだに濾紙を置くことによりさらに乾燥して、濾紙を試験部位に置いて5分間そのままにした。患者は休息位で両腕を身体から離して坐った。患者は最初の重量測定の前1分間腋窩を触らずに休息した。
患者は45度の角度に傾斜して、腋窩を十分露出させるために両手を一緒に頭の後ろに当てた。予め秤量した濾紙をコニカルチューブから取り出して、濾紙の先端を腋窩のひだの線に合わせてそれを患者の腋窩の下に置いた。患者は両腕を身体の脇に下し、両腕を体幹に密着させて坐った。濾紙を両腋窩の下に確実に置いたときに計時を開始した。2つの腋窩は同時に測定した。5分後、濾紙を腋窩から取り外して、各々を同じそれぞれのコニカルチューブに置き、チューブから汗が蒸発するのを防止するためにキャップを堅く締めた。汗の産生は1分の間隔でさらに2回繰り返した。
患者は腋窩を十分露出させるために両手を一緒に頭の後ろに当てた。ヨウ素溶液を滅菌ガーゼパッドで腋窩域に適用してから、完全に風乾させた。ヨウ素により覆った部位を綿球を使用して薄いデンプン層で被包した。患者は両腕を体幹に密着させて坐った。5分後に、患者は腋窩を十分露出させるために、両腕を上げて両手を一緒に頭の後ろに当てた。左右の腋窩の開始前の状態及びヨウ素デンプン反応後を写真撮影した。腋窩は先ず70%EtOHで、次いで滅菌脱イオン水で清浄した。
製剤:
第1処置:
左腕:600μlのKN−T(食塩水及び1%EtOH中に1mg/ml)を600μlのオリゴペプチドEEMQRR(1%EtOHを足した食塩水中に10%)に加え、反転により混合し、混合物を5分間室温で静置した。600μlの4%HPC(1%EtOH)を加え、徹底的に混合した。その均一な溶液を3mlの注射器に移した。
左腕:500μlのKN−T(食塩水及び5%EtOH中に1mg/ml)を500μlのテトラ−アスパラギン酸−オリゴペプチドEEMQRR(食塩水及び5%EtOH中に10%)に加え、反転により混合し、混合物を5分間室温で静置した。500μlの4%HPC(1%EtOH)を加え、徹底的に混合した。その均一な溶液を3mlの注射器に移した。
滅菌手袋を着用して、薬剤を投薬部位に注射器で均一に広げ、指で1分間マッサージした。患者は両腕を身体の横に下げて1時間インキュベートした。インキュベート終了時に投薬部位を滅菌ガーゼで清浄した。
材料及び方法:
D10(修飾アセチルヘキサペプチド、Revance Therapeutics社製、Mountain View, CA)
ポリリジンペプチド(担体):Kn21T
体重27〜33gの雄CD1マウス(Charles River社、Wilmington, MA)を使用した。マウスは5群に分けて収容し、治療前に食糧及び水の不断給餌を可能にした。動物は、酸素と混合した1.5%イソフルランを使用して麻酔し、研究期間中麻酔したままにした。Andis Edjer IIコードレス充電式電気バリカン(Andis社製、Sturtevant, WI)で、各マウスの後肢の投薬部位を注意して剃毛した。投薬部位は、アセトン洗浄又は脱イオン水洗浄で準備した。投薬部位は処置適用前に完全に乾燥させた。処置しない正常マウス並びに基剤の製剤(無毒素)を等容量で局所適用して処置したマウスを対照にした。局所処置の2〜3.5時間後に筋収縮力を測定した。
1.ミクロ遠心チューブ中で、0.9%のNaCl及び5%のEtOHを含むKn21T担体の1.0mg/ml原液を作製し、ボルテックスにより混合した。
1.酸素と混合した1.5%イソフルランでマウスを麻酔した。
四肢は、動くのを防止するために、大腿骨と脛骨を通したキルシュナー鋼線を使用して、木製のテーブルに留めることにより固定した。腓腹筋はその場に残した。針金縫合糸をアキレス腱の下端の周囲で結んだ。次に腱を縫合糸から遠位で横に切断し、縫合糸を力変換器(FT03型、Grass社製、West Warwick, RI)に取り付け、力変換器はさらに力変換増幅器(13−G4615−50型、Gould社製、Cleveland, OH)に接続した。D10処置した側の坐骨神経を、最大等尺性単収縮が得られるまで、電圧を上げて直接刺激した(SD9刺激装置、Grass社製、West Warwick, RI)。次に、最大の強直性の力が発生するまで刺激の周波数を増加させた。単収縮は1つの運動単位の刺激により発生させられ、強直は超最大の刺激によりすべての運動単位の総和を適用することにより発生させられる。同じ手順を対照四肢で繰り返した。応答は、力変換器に結合させた較正してある記録用オシレータ(RS3800、Gould社製、Cleveland, OH)で記録した。(Ma J, Elsaidi GA, Smith TL, et al. Time course of recovery of juvenile skeletal muscle after botulinum toxin A injection. Am. J. Phys. Med. Rehabil. 2004; 83(10):774-780)。
C57BL/6マウスの筋力発生の正常値は、以前のボツリヌス毒素Aの注射による研究において60±15グラムの平均単収縮力及び240±30グラムの強直力を有している。今回の予備的な前臨床研究においては、同程度の54±2グラムの平均単収縮力及び241±20グラムの強直力が見出された。
本研究は、マウスの肢を通しての10%D10の局所適用は、運動力発生を効果的に減少させることができることを証明することに役立ち、治療の利益を示す。
Claims (68)
- 配列番号1のアミノ酸配列を含む6〜約20アミノ酸のオリゴペプチドを含み、-(gly)n1-(arg)n2(下付き文字n1は0〜約20の整数であり、下付き文字n2は独立に約5〜約25の奇数の整数である)、HIV−TAT、アンテナペディアPTD、及びHIV−TAT若しくはアンテナペディアPTDのフラグメント又はそれらの混合物から独立に選択された、正に荷電した分岐基が結合した正に荷電した担体をさらに含む組成物。
- 配列番号1がオリゴペプチドのC末端を構成する請求項1に記載の組成物。
- オリゴペプチドのN末端が3〜約14個の中性アミノ酸を含む請求項2に記載の組成物。
- オリゴペプチドのN末端が4個のアスパラギン酸分子を含む請求項3に記載の組成物。
- 配列番号1がオリゴペプチドのN末端を構成する請求項1に記載の組成物。
- オリゴペプチドのC末端が3〜約14個の中性アミノ酸を含む請求項5に記載の組成物。
- オリゴペプチドのC末端が4個のアスパラギン酸分子を含む請求項6に記載の組成物。
- オリゴペプチドが誘導体化されている請求項1に記載の組成物。
- オリゴペプチドが、アセチル基、パルミトイル基からなる群から選択された分子で誘導体化されている請求項8に記載の組成物。
- オリゴペプチドが組換えにより産生される請求項1に記載の組成物。
- クリーム剤、ローション剤、軟膏、ゲル剤又は液剤である請求項1に記載の組成物。
- 緩衝剤をさらに含む請求項11に記載の組成物。
- 放出制御組成物である請求項1に記載の組成物。
- 食塩水をさらに含む請求項1に記載の組成物。
- 緩衝剤をさらに含む請求項14に記載の組成物。
- 正に荷電した担体が、-(gly)n1-(arg)n2(下付き文字n1は約0〜約20の整数であり、下付き文字n2は独立に約5〜約25の奇数の整数である)から独立に選択された正に荷電した分岐基を有する第2のオリゴペプチドを含む請求項1に記載の組成物。
- 下付き文字n1が0〜約8の整数である請求項16に記載の組成物。
- 下付き文字n1が約2〜約5の整数である請求項16に記載の組成物。
- 下付き文字n2が約7〜約17の奇数の整数である請求項16に記載の組成物。
- 下付き文字n2が約7〜約13の奇数の整数である請求項16に記載の組成物。
- 担体が、HIV−TAT及びそのフラグメントから選択された、正に荷電した分岐基が結合した第2のオリゴペプチドを含む請求項16に記載の組成物。
- 分岐基が、式(gly)p-RGRDDRRQRRR-(gly)q、(gly)p-YGRKKRRQRRR-(gly)q、又は(gly)p-RKKRRQRRR-(gly)q(式中、下付き文字p及びqは各々独立に0〜20の整数である)を有する正に荷電したHIV−TATフラグメントである請求項21に記載の組成物。
- 正に荷電した分岐基が、全担体重量の少なくとも約0.05重量%を占める請求項1に記載の組成物。
- 正に荷電した分岐基が、全担体重量の約0.5〜約45重量%を占める請求項1に記載の組成物。
- 正に荷電した分岐基が、全担体重量の約0.1〜約30重量%を占める請求項1に記載の組成物。
- 骨格が正に荷電したオリゴペプチドを含む請求項1に記載の組成物。
- 骨格が正に荷電したポリリジンを含む請求項26に記載の組成物。
- ポリリジンが約10,000〜1,500,000の分子量を有する請求項27に記載の組成物。
- ポリリジンが約25,000〜約1,200,000の分子量を有する請求項27に記載の組成物。
- ポリリジンが約100,000〜約1,000,000の分子量を有する請求項27に記載の組成物。
- 骨格が正に荷電した非ペプチド担体を含む請求項1に記載の組成物。
- 骨格が正に荷電したポリアルキレンイミンを含む請求項31に記載の組成物。
- ポリアルキレンイミンがポリエチレンイミンである請求項32に記載の組成物。
- ポリエチレンイミンが約10,000〜約2,500,000の分子量を有する請求項33に記載の組成物。
- ポリエチレンイミンが約100,000〜約1,800,000の分子量を有する請求項33に記載の組成物。
- ポリエチレンイミンが約500,000〜約1,400,000の分子量を有する請求項33に記載の組成物。
- 請求項1に記載の組成物の治療有効量を投与することを含む、ジストニー、筋痙攣、自律神経障害、脳性麻痺、パーキンソン病、振戦、てんかん、内耳障害、筋疾患、神経絞扼障害、多汗症、ざ瘡、粘膜分泌、乾癬、糖尿病関連皮膚疾患、創傷治癒、乳腺疾患、発毛、泌尿器系疾患、神経精神障害、癌及び高カルシウム血症からなるリストから選択された医学的状態と関連する症状を軽減する方法。
- 頭皮、顔面、頚部、肩、腕、腋窩、手、手掌、背中、脚、足及び足底からなる群から選択された身体領域に、組成物を投与することをさらに含む請求項37に記載の方法。
- 医学的状態が自覚的又は臨床的多汗症である請求項38に記載の方法。
- 組成物を腋窩に投与する請求項39に記載の方法。
- 組成物を顔面に投与する請求項39に記載の方法。
- 組成物を前頭部に投与する請求項39に記載の方法。
- 組成物を手掌に投与する請求項39に記載の方法。
- 組成物を足底に投与する請求項39に記載の方法。
- 配列番号1のアミノ酸配列を含む7〜約20アミノ酸のオリゴペプチドを含む化合物。
- オリゴペプチドが8〜約20アミノ酸である請求項45に記載の化合物。
- オリゴペプチドが9〜約20アミノ酸である請求項45に記載の化合物。
- オリゴペプチドが10〜約20アミノ酸である請求項45に記載の化合物。
- 請求項45に記載の化合物の治療有効量を投与することを含む、ジストニー、筋痙攣、自律神経障害、脳性麻痺、パーキンソン病、振戦、てんかん、内耳障害、筋疾患、神経絞扼障害、多汗症、ざ瘡、粘膜分泌、乾癬、糖尿病関連皮膚疾患、創傷治癒、乳腺疾患、発毛、泌尿器系疾患、神経精神障害、癌及び高カルシウム血症からなるリストから選択された医学的状態と関連する症状を軽減する方法。
- 頭皮、顔面、頚部、肩、腕、腋窩、手、手掌、背中、脚、足及び足底からなる群から選択された身体領域に、化合物を投与することをさらに含む請求項49に記載の方法。
- 医学的状態が自覚的又は臨床的多汗症である請求項50に記載の方法。
- 化合物を腋窩に投与する請求項51に記載の方法。
- 化合物を顔面に投与する請求項51に記載の方法。
- 化合物を前頭部に投与する請求項51に記載の方法。
- 化合物を手掌に投与する請求項51に記載の方法。
- 化合物を足底に投与する請求項51に記載の方法。
- 配列番号1のアミノ酸配列を含む6〜約20アミノ酸のオリゴペプチドを含む組成物の治療有効量を被験者に局所投与するためのキットであって、前記組成物並びに-(gly)n1-(arg)n2(下付き文字n1は0〜約20の整数であり、下付き文字n2は独立に約5〜約25の奇数の整数である)、HIV−TAT、アンテナペディアPTD、及びHIV−TAT若しくはアンテナペディアPTDのフラグメントから独立に選択された正に荷電した分岐基又はそれらの混合物が結合した正に荷電した担体を含むキット。
- 特製アプリケーターをさらに含む請求項57に記載のキット。
- 特製アプリケーターが健康管理専門家により使用されるように設計されている請求項58に記載のキット。
- 特製アプリケーターが被験者による自己投与のために設計されている請求項58に記載のキット。
- 化合物及び担体を含む予め製剤化された組成物を含む請求項57に記載のキット。
- 化合物及び担体が、投与の前に配合されるように別々に製剤化されている請求項57に記載のキット。
- 化合物が、皮膚を通して化合物を被験者に投与するためのデバイスに含まれている請求項57に記載のキット。
- デバイスが皮膚パッチである請求項63に記載のキット。
- 担体が、正に荷電した分岐基が結合したポリマー骨格をさらに含み、担体と化合物との間の結びつきが非共有結合である請求項57に記載のキット。
- 結合している正に荷電した分岐基が、-(gly)n1-(arg)n2(下付き文字n1は0〜約20の整数であり、下付き文字n2は独立に約5〜約25の奇数の整数である)、HIV−TAT及びそのフラグメント、並びにアンテナペディアPTD又はそれらの混合物から独立に選択される請求項65に記載のキット。
- 化合物が、皮膚を通してオリゴペプチドを被験者に投与するためのデバイスに含まれている請求項66に記載のキット。
- デバイスが皮膚パッチである請求項67に記載のキット。
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