JP2008520687A5 - - Google Patents

Description

細胞外基質タンパク質は、細胞接着を促進することにおいて有効である可能性があるが、ポリ-L/D-オルニチンまたはポリ-L/D-リシンなどの異なるアミノ酸ポリマーが、各個別の細胞系に対して特定の濃度で、細胞に対して有毒である可能性がある。また、インキュベーションの継続時間は、培養皿の表面に沈着した本ポリマーの最終量に影響を及ぼし、細胞の生存度に影響する可能性がある。本開示の方法で使用されるNSCにおいて、ポリマーの濃度は、約0.1μg/mlから約1mg/mlの間の範囲内とすることができる。一実施形態では、100μg/mlのポリ-D-リシンを、中性pHの0.01M HEPES緩衝液または水で溶解し、培養容器に加える。培養容器を室温で1時間インキュベートする。次に、培養容器を水で完全にすすぎ、使用前に乾燥させる。

Claims (14)

1. a)増殖集団の少なくとも20%が、前記レシピエントの脊髄でニューロンを発生させることができるように、細胞接着を促進することができる、0.1μg/mlから約1mg/mlの一種以上のポリマーで被覆した培養皿中において、少なくとも1種の哺乳動物から分離した神経幹細胞を増殖集団へ増殖させること、および
   b)前記増殖集団を濃縮すること
   を含む、神経幹細胞の増殖集団を調製するin vitroにおける方法であって前記細胞の増殖が、分化することなしに、細胞の倍増が30回を上回る方法。
2. 前記神経幹細胞が、中枢神経系、末梢神経系、骨髄、末梢血、臍帯血および少なくとも1つの胚からなる群から選択される供給源から分離される、請求項1に記載の方法。
3. 前記哺乳動物が、発育中の哺乳動物である、請求項2に記載の方法。
4. 前記発育中の哺乳動物の在胎齢が、6.5週から20週までの間である、請求項3に記載の方法。
5. 前記神経幹細胞が、ヒトの胎児の脊髄から分離される、請求項3に記載の方法。
6. 前記神経幹細胞を増殖することが、血清の不存在下で、前記神経幹細胞を培養することを含む、請求項1に記載の方法。
7. 前記神経幹細胞を増殖することが、前記神経幹細胞を少なくとも1種の増殖因子に曝露させることを含む、請求項1に記載の方法。
8. 前記増殖因子が、bFGF、EGF、TGF-α、aFGFおよびその組合せからなる群から選択される、請求項7に記載の方法。
9. 前記増殖集団が、in vivoで少なくとも1,000のGABAを産生するニューロンを発生させることができる、請求項1に記載の方法。
10. 前記増殖集団が、in vivoで少なくとも1,000のグリシンを産生するニューロンを発生させることができる、請求項1に記載の方法。
11. 前記増殖集団の少なくとも40%が、脊髄でニューロンを発生させることができる、請求項1に記載の方法。
12. 前記増殖集団の少なくとも30%が、in vitroでニューロンに分化することができる、請求項1に記載の方法。
13. 前記増殖集団が、治療有効量の少なくとも1種の増殖因子を分泌するために十分なニューロンに分化することができる量の神経幹細胞を含む、請求項1に記載の方法。
14. 前記治療有効量の増殖集団が、少なくとも1,000のニューロンを発生させることができる、請求項1に記載の方法。