RU2008133987A

RU2008133987A - Способы сбора и селекции популяции эмбрионоподобных стволовых клеток из периодонтальной фолликулярной ткани взрослого человека

Info

Publication number: RU2008133987A
Application number: RU2008133987/13A
Authority: RU
Inventors: Грегорио ЛАИНО (IT); Грегорио ЛАИНО; Джанпаоло ПАПАЧЧО (IT); Джанпаоло ПАПАЧЧО; РОЗА Альфредо ДЕ (IT); РОЗА Альфредо ДЕ; Риккардо Д`АКУИНО (IT); Риккардо Д`АКУИНО; Антонио ГРАЦИАНО (IT); Антонио ГРАЦИАНО
Original assignee: Теслаб С.Р.Л. (It); Теслаб С.Р.Л.
Priority date: 2006-02-20
Filing date: 2007-02-19
Publication date: 2010-02-27
Also published as: RU2433172C2; WO2007096115A2; CN101384708B; SG183587A1; US20090291065A1; CN101384708A; EP1991665A2; MY148336A; ITNA20060017A1; AU2007218265A1; WO2007096115A3; JP2009527223A; BRPI0707974A2; US8187879B2; CA2642904A1; KR20080104274A

Abstract

1. Способ выделения, наращивания и хранения популяции стволовых клеток, которые происходят из зубного фолликула человека и называются FENC (происходящие из фолликулов стволовые клетки зародышевого нервного гребня), предусматривающий: ! a) сбор фолликулярного мешочка в стерильных условиях, расщепление, рост и наращивание первичной культуры; ! b) необязательно амплификацию; ! c) сортировку на FAC-сортере. ! 2. Способ по п.1, где расщепление проводится с применением протеолитических ферментов и антител. ! 3. Способ по п.2, где ферментативное расщепление проводится посредством водного раствора, содержащего: 3 мг/мл коллагеназы типа I, 4 мг/мл диспазы, 100 ед./мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 500 мкг/мл кларитромицина в PBS. ! 4. Способ по п.2, где ферментативное расщепление проводится в течение 1 часа при 37°С при встряхивании. ! 5. Способ по п.1, где рост и наращивание первичной культуры осуществляют с применением культуральной среды, специализированной для стволовых клеток. ! 6. Способ по п.5, где культуральная среда состоит из Mega Cell, дополненной 10% плодной бычьей сывороткой (FBS), 100 мкМ 2-фосфо-аскорбиновой кислоты, 2 мМ L-глутамина, 100 ед./мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина. ! 7. Способ по п.5, где инкубация происходит при 37°С в атмосфере 5% CO2 в течение 15-20 дней, со сменой среды каждые 3 дня. ! 8. Способ по любому из пп.1-7, в котором сортировка на FAC-сортере проводится с применением антител к SSEA-4, TRA 1-60, TRA 1-81, CD133, CD90, flk-1 как маркерам стволовых клеток. ! 9. Применение FENC, полученных посредством способа по любому из пп.1-8, для получения остеогенных предшественников, остеобластов, миобластов, хондроцитов, адипоцитов, нейронов, глиальных клеток. ! 10. Применен�

Claims

1. Способ выделения, наращивания и хранения популяции стволовых клеток, которые происходят из зубного фолликула человека и называются FENC (происходящие из фолликулов стволовые клетки зародышевого нервного гребня), предусматривающий:

a) сбор фолликулярного мешочка в стерильных условиях, расщепление, рост и наращивание первичной культуры;

b) необязательно амплификацию;

c) сортировку на FAC-сортере.

2. Способ по п.1, где расщепление проводится с применением протеолитических ферментов и антител.

3. Способ по п.2, где ферментативное расщепление проводится посредством водного раствора, содержащего: 3 мг/мл коллагеназы типа I, 4 мг/мл диспазы, 100 ед./мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 500 мкг/мл кларитромицина в PBS.

4. Способ по п.2, где ферментативное расщепление проводится в течение 1 часа при 37°С при встряхивании.

5. Способ по п.1, где рост и наращивание первичной культуры осуществляют с применением культуральной среды, специализированной для стволовых клеток.

6. Способ по п.5, где культуральная среда состоит из Mega Cell, дополненной 10% плодной бычьей сывороткой (FBS), 100 мкМ 2-фосфо-аскорбиновой кислоты, 2 мМ L-глутамина, 100 ед./мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина.

7. Способ по п.5, где инкубация происходит при 37°С в атмосфере 5% CO₂ в течение 15-20 дней, со сменой среды каждые 3 дня.

8. Способ по любому из пп.1-7, в котором сортировка на FAC-сортере проводится с применением антител к SSEA-4, TRA 1-60, TRA 1-81, CD133, CD90, flk-1 как маркерам стволовых клеток.

9. Применение FENC, полученных посредством способа по любому из пп.1-8, для получения остеогенных предшественников, остеобластов, миобластов, хондроцитов, адипоцитов, нейронов, глиальных клеток.

10. Применение остеогенных предшественников, остеобластов, миобластов, хондроцитов, адипоцитов, нейронов, глиальных клеток для получения аутологичных препаратов, применяемых в протоколах клеточной терапии для лечения патологий скелетного аппарата, дегенерации мышечной ткани, патологий центральной нервной системы, дегенерации миелина, онкологических заболеваний и в пластической хирургии.