JP3897717B2

JP3897717B2 - 細胞移植治療材料およびその製造方法

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Publication number: JP3897717B2
Application number: JP2003058934A
Authority: JP
Inventors: 晃井上; 洋之入江; 正寛斎藤; 透清野
Original assignee: Olympus Corp
Current assignee: Olympus Corp
Priority date: 2002-04-23
Filing date: 2003-03-05
Publication date: 2007-03-28
Anticipated expiration: 2023-03-05
Also published as: JP2004000497A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、歯周病治療等に用いられる細胞移植治療材料およびその製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来より、歯周病治療は、病原菌に感染した部位を対症療法による手段で対処することにより行われてきた。しかし、歯周病は大きな組織崩壊を伴うので、自然修復は難しく、治療後の組織再生が問題となる。現在までに、ゴアテックス膜もしくはポリ乳酸膜などの人工材料を用いた再生療法が開発され、一部の臨床ケースではその有効性が示されている。
【０００３】
しかし、人工材料のみでは再生能力に限界があるため、近年では、細胞成長因子や異種動物より抽出製造された生理活性物質と人工材料とを併用した歯周組織再生療法が開発されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、生理活性物質を用いても、欠損の少ない部位にその有効性を示すことができるが、大きな組織崩壊を伴うケースについては、その欠損部位を補うまでには至っていない。また、創傷部位の細胞のみに生理活性物質を作用させ、組織修復の全てを託すことにも限界がある。
【０００５】
歯周組織は、セメント質、歯根膜および歯槽骨により構成され、咀嚼機能を支持する重要な役割を果たしている。特に、歯根膜は、セメント質と歯槽骨を結合するコラーゲン繊維束（シャーピー繊維）により強大な咬合力に耐え得るため、重要な役割を果たしている。
【０００６】
従って、歯周病により崩壊した組織の修復には、細胞移植治療を併用した再生療法を確立することが望まれている。特に、セメント質形成能を有する細胞を歯根表面に供給し、歯周組織独特のシャーピー繊維構造を再構築することが重要になる。そのためには、セメント質形成能力を有するセメント芽細胞前駆体を採取する技術開発が必要になる。しかし、現在まで、培養セメント芽細胞前駆体に関する報告は見られていない。
【０００７】
本発明は、このような事情の下になされ、組織崩壊を伴う歯周病に対しても、歯周組織の修復を可能とする細胞移植治療材料およびその製造方法を提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
上記課題を解決するため、本発明は、歯周病治療に用いられる細胞移植治療材料において、歯小嚢組織または歯根膜組織から採取された歯周組織幹細胞を含むことを特徴とする細胞移植治療材料を提供する。
【０００９】
このような本発明の細胞移植治療材において、歯周組織幹細胞は、歯小嚢組織または歯根膜組織の酵素消化により単離され、更にこれに遺伝子を導入して不死化することにより、セメント質形成能を有する細胞が得られる。
【００１０】
本発明の細胞移植治療材は、このような歯周組織幹細胞を、生体吸収性材料からなる担体に複合させたものとすることが出来る。生体吸収性材料としては、リン酸カルシウム系セラミックス材料、例えば水酸化アパタイトセラミックス（以下、ＨＡＰ）やβ−リン酸三カルシウムセラミックス（以下、β−ＴＣＰ）を用いることが出来、特にβ−ＴＣＰを好ましく用いることが出来る。
【００１１】
本発明はまた、歯周病治療等に用いられる細胞移植治療材料の製造方法において、歯小嚢組織または歯根膜組織を採取する工程、前記歯小嚢組織または歯根膜組織を酵素消化し、歯周組織幹細胞を得る工程、前記歯周組織幹細胞を遺伝子導入により不死化する工程、および前記不死化した歯周組織幹細胞を生体吸収性材料からなる担体に複合する工程を備えることを特徴とする細胞移植治療材料の製造方法を提供する。
【００１２】
以上のように構成される本発明によれば、組織崩壊を伴う歯周病に対しても、歯周組織の修復を可能とする細胞移植治療材料が提供される。
【００１３】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の実施の形態について説明する。
【００１４】
本発明の細胞移植治療材料は、歯周組織幹細胞を含むことを特徴とする。歯周組織幹細胞は、歯胚の歯根部分に付着している歯小嚢組織または歯根膜から採取される。なお、好ましくは歯小嚢組織から採取するものがよいが、歯根膜組織から採取した細胞集団内にも歯周組織幹細胞が存在することが確認されている。
本発明において歯周組織幹細胞を採取する生物は、任意の生物を意図し、好ましくは哺乳類であり、より好ましくはヒトである。また、歯周組織幹細胞は、移植治療を受ける生物個体と同一の個体から採取したものが好ましいが、移植治療を受ける生物個体と同一の種に属する別の個体から採取したものでもよい。
【００１５】
採取した歯小嚢組織または歯根膜組織を、例えば細菌性コラゲナーゼで酵素消化することにより、歯周組織幹細胞を単離することが出来る。なお、酵素消化法としては、段階的酵素消化法を用いることが望ましく、１回法では、セメント質形成能を有する歯周組織幹細胞を十分に得ることが困難である。同様に、細胞の採取方法としてのカバーガラスを用いて組織を固定し、細胞をアウトグロース（ｏｕｔｇｒｏｗｔｈ）させる方法によっても、セメント質形成能を有する歯周組織幹細胞を得ることは困難である。
【００１６】
本発明において不死化操作は、細胞を不死化するために使用可能であることが知られている任意の遺伝子を導入することにより行うことができる。具体的には、細胞のがん化を誘導するがん遺伝子とテロメラーゼ活性を付与する遺伝子を遺伝子導入することにより、細胞を不死化することができる。より具体的には、上述のとおり単離して得られた歯周組織幹細胞は、ヒトパピローマウイルスＥ６、Ｅ７ｃＤＮＡとヒトテロメラーゼ逆転写酵素サブユニットｈＴＥＲＴｃＤＮＡの遺伝子導入により、その形質を維持したまま不死化される（後述の実施例１参照）。また、上述のとおり単離して得られた歯周組織幹細胞は、ヒトｂｍｉ−１ｃＤＮＡとヒトテロメラーゼ逆転写酵素サブユニットｈＴＥＲＴｃＤＮＡの遺伝子導入により、その形質を維持したまま不死化される（後述の実施例２参照）。これら不死化操作により、クローン化されたセメント質形成能を有する歯周組織幹細胞（セメント芽細胞前駆体）の増殖能を維持することが出来る。
【００１７】
なお、不死化されていないプライマリー細胞を増殖した場合、繊維芽細胞が細胞集団の大半を占めてしまい、セメント芽細胞前駆体が除外されてしまう可能性が大きい。実際に、継代を繰り返した細胞では、セメント質形成能は見られない。従って、歯周組織の再生には、不死化により得られたセメント芽細胞前駆体を用いることが必要となる。
【００１８】
以上のように不死化・増殖した歯周組織幹細胞を生体吸収性材料からなる担体に複合させ、培養することにより、歯周組織幹細胞を複合した細胞移植治療材料を得ることが出来る。
【００１９】
生体吸収性材料からなる担体への不死化した歯周組織幹細胞の複合は、歯周組織幹細胞を含む懸濁液中に担体粉末を添加し、歯周組織幹細胞を培養することにより行うことが出来る。
生体吸収性材料からなる担体への不死化した歯周組織幹細胞の複合は、１×１０^４〜１０^７個／ｍｌの細胞浮遊液に担体粉末を十分に浸すことで行うことができる。例えば、１×１０^４〜１０^７個／ｍｌの細胞浮遊液１ｍＬに担体粉末を約４０ｍｇ浸すことで行うことができる。
【００２０】
本発明に使用される生体吸収性材料としては、有機材料として、例えば、乳酸、グリコール酸、ラクトンの重合体もしくは共重合体、コラーゲン、アルブミン、デキストラン、脂肪酸エチルエステル、ゼラチン、キチン、キトサン、フィブロイン等を挙げることが出来る。なお、天然由来材料も、抗原性の無い材料を用いることができる。
【００２１】
また、セラミックスとして、生体適合性および骨伝導性に優れたリン酸カルシウム系セラミックス材料を用いることができる。水酸化アパタイトセラミックス（ＨＡＰ）やβ−リン酸三カルシウムセラミックス（β−ＴＣＰ）は、その代表的な材料である。これらセラミックス材料は、公知の手法により作製することができる。以下、水酸化アパタイトセラミックスおよびβ−リン酸三カルシウムセラミックスを、それぞれＨＡＰおよびβ−ＴＣＰと称する。本発明で細胞浮遊液に添加される担体粉末は、担体であるセラミックスを公知の手法で粉砕することにより得ることができる。
ＨＡＰは、優れた骨伝導性を有し、骨組織と直接結合するが、非吸収性で長期的に生体内に残存してしまう。一方、β−ＴＣＰは、優れた骨伝導能を有し、骨組織と直接結合する上、骨組織中で経時的に吸収され、自家骨に置換されるという性質を有する。これらの材料は、骨補填の用途に応じて使い分けることが出来る。
【００２２】
特に、β−ＴＣＰは、生体適合性、骨形成に優れている上、生体吸収性にも優れ、骨欠損部などに充填する場合、経時的に自家骨に置換するという特徴を有する。そのため、本発明に使用されるリン酸カルシウム系セラミックス材料としては、β−ＴＣＰが最も好ましい。
【００２３】
β−ＴＣＰは、メカノケミカル法で作製したβ−ＴＣＰであって、気孔率５０〜９０％、連通する気孔径５０〜１０００μｍと５μｍ以下の気孔を有するものであることが好ましい。なお、β−ＴＣＰは、一般的に骨伝導能と生体吸収性の性質を併せ有するが、その合成プロセスによりその性能は左右され、メカノケミカル法により合成されたβ−ＴＣＰが最も骨補填材として優れている。
【００２４】
また、多孔質の気孔性状は、β−ＴＣＰ内部への細胞の進入などに寄与する５０〜１０００μｍの気孔と、生体内での吸収を効率良くさせる５μｍ以下の気孔とを有することが望ましい。
【００２５】
以下、本発明の実施例を示し、本発明についてより具体的に説明する。
実施例１
１．歯周組織幹細胞の採取
２歳の成牛の下顎より永久犬歯歯胚（歯根部分に付着している歯小嚢組織）を採取し、このウシ歯小嚢組織を３ｍｇ／ｍｌの細菌性コラゲナーゼ（Ｒｏｃｈｅ製）で１０分間、１０分間、および２０分間の３回の処理を行い、歯小嚢組織周囲に付着している骨組織およびセメント質を取り除いた。その後、更に４０分間の処理を５回行い、歯小嚢細胞を単離した。単離された歯小嚢細胞を、以後、歯周組織幹細胞と称する。
なお、本実施例では、このように段階的酵素消化法を用いているが、１回法で酵素消化を行うと、歯周組織幹細胞の採取が困難であるばかりか、骨芽細胞もしくは繊維芽細胞が主成分を占めてしまうので望ましくない。
【００２６】
このようにして得た歯周組織幹細胞を１０％ウシ胎児血清、５０μｇ／ｍｌのアスコルビン酸、１００ｕｎｉｔｓ／ｍｌのストレプトマイシンとペニシリンを添加したα−最小必須培地（α−ＭＥＭ：ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）に懸濁した。
【００２７】
次いで、この懸濁細胞を３５ｍｍ培養皿に単層培養した。単層培養は、細胞数に応じて、プラスチック製の６穴培養プレート、１００ｍｍ培養皿を用いて行った。培養は、５％ＣＯ_２および９５％空気の雰囲気下で３７℃にて行い、３日毎に培養液を新鮮なものに交換した。細胞が８０％の集密状態になると、常法に従って、０．２５％トリプシンおよび１ｍＭのＥＤＴＡで処理を行い、継代培養した。
【００２８】
２．歯周組織幹細胞の不死化
不死化は、清野らの方法（Ｎａｔｕｒｅ，１９９８，３９６（６７０６）２３−２４）に従い、次のようにして行った。即ち、ヒトパピローマウイルスＥ６，Ｅ７ｃＤＮＡとヒトテロメラーゼ逆転写酵素サブユニットｈＴＥＲＴｃＤＮＡをそれぞれ（ｐＬＸＳＮおよびｐＬＸＳＨ）レトロウイルスベクターに組み込み、ＶＳＶ−Ｇｐｓｅｕｄｔｙｐｅｄ組み換えレトロウイルスを製作した。次に、これら組み換えレトロウイルスを用いて、２０％集密状態の細胞に、ヒトパピローマウイルスＥ６、Ｅ７ｃＤＮＡ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素サブユニットｈＴＥＲＴｃＤＮＡの順に遺伝子導入を行った。なお、各遺伝子は、ＰＣＲ法によりクローニングしたものを使用した。
【００２９】
その後、ＴＲＡＰアッセイ法によりテロメラーゼ活性を確認した。ここで、ヒトパピローマウイルスＥ６，Ｅ７の発現により、細胞周期回転が維持され、またテロメラーゼの活性化により、テロメア短小化に伴う細胞増殖の停止を回避することができる。つまり、上記二つの遺伝子導入により、細胞は無限増殖能を得て、不死化したことを示している。
【００３０】
上述の実験により、細胞はヒトパピローマウイルスＥ６，Ｅ７の発現およびテロメラーゼ活性を得て、不死化したことを確認することができた。
【００３１】
細胞のクローニングは、次のようにして行った。即ち、不死化した細胞を０．２５％トリプシンおよび１ｍＭのＥＤＴＡで処理し、懸濁させた後、９６穴培養プレートに１穴あたり１個の細胞が入るように播種した。２週間の単層培養後、細胞１個からの増殖が確認されたプレートを顕微鏡下で選択し、０．２５％トリプシンおよび１ｍＭのＥＤＴＡで処理し、２４穴プレート、３５ｍｍ培養皿、１００ｍｍ培養皿の順に継代培養した。最終的にクローン化された細胞は、１００ｍｍ培養皿で培養を行った。
【００３２】
３．クローン化した歯周組織幹細胞の担体への複合化
クローン化した細胞を１×１０^６個の密度で１ｍｌのα−ＭＥＭ中に懸濁し、これにβ−ＴＣＰを加え、９０分間培養した。β−ＴＣＰは、メカノケミカル法で作製したβ−ＴＣＰであって、気孔率７５％、連通する気孔径５０〜１０００μｍと５μｍ以下の気孔を有するものを用いた。β−ＴＣＰの添加量は、４０ｍｇであった。この培養により、本発明の細胞移植治療材料が作製された。
【００３３】
４．細胞移植治療材料のセメント質形成能の評価
その後、この細胞とβ−ＴＣＰの混合物をマウスフィブリン糊で固め、重症複合型免疫不全症マウスの皮下へ移植した。なお、既に本発明者は、この方法により、ウシ歯胚、歯小嚢より採取した細胞がセメント質形成を誘導出来ることを確認している。
【００３４】
移植して４週間後、移植片を取り出し、二つに分割し、一方を４％パラフィンにて固定した後、ギ酸で脱灰して組織標本を作製した。この組織標本について、坑セメント質由来細胞接着因子（ＣＡＰ）モノクローナル抗体を用いた免疫染色により、セメント質形成の確認を行った。他方の移植片について、ＲＴ−ＰＣＲ法でセメント質形成に関連する遺伝子である骨シアロ蛋白質、オステオカルシン、オステオポンチンおよびＩ型コラーゲンの発現を確認した。ここで、ＣＡＰの発現は、セメント芽細胞であることを示し、骨シアロ蛋白質、オステオカルシン、オステオポンチンおよびＩ型コラーゲンの発現は、セメント質基質の再生を示している。
【００３５】
細胞形態は、ヘマトキシリン−エオジンによる染色により観察し、また免疫染色は常法に従って行った。細胞の固定と光学観察による形態観察を行った。即ち、クローン化した細胞の移植片をヘマトキシリン−エオジンによる染色により観察した。図１は、細胞移植片の組織を表す写真である。図１から明らかなように、細胞とβ−ＴＣＰは強固に接着しており、また細胞はβ−ＴＣＰ周囲に石灰化物を産生し、その周囲には繊維組織の形成が観察された。なお、図１において、矢印は石灰化物を示す。また、坑ＣＡＰモノクローナル抗体を用いた免疫染色により、β−ＴＣＰ周囲に形成された石灰化物がセメント質であることが確認された。
【００３６】
また、移植片のＲＴ−ＰＣＲ法の結果より、骨シアロ蛋白質、オステオカルシン、オステオポンチンおよびＩ型コラーゲンのｍＲＮＡの発現を確認することができたことから、この細胞がセメント質基質蛋白質を産生していることが認められた。
【００３７】
以上のように、本実施例により、ウシ歯小嚢組織から単離し、不死化した細胞をβ−ＴＣＰに複合した材料は、優れたセメント質形成能を示し、歯周組織の修復に有効であることが確認された。
【００３８】
実施例２
細胞を不死化するために導入する遺伝子として、ヒトｂｍｉ−１ｃＤＮＡとヒトテロメラーゼ逆転写酵素サブユニットｈＴＥＲＴｃＤＮＡを組合わせて用いた以外、実施例１と同様にして、細胞移植治療材料を作製し、そのセメント質形成能を評価した。
【００３９】
１．歯周組織幹細胞の採取
実施例１の「１．歯周組織幹細胞の採取」の欄に記載したとおり、歯小嚢細胞を単離、培養し、歯周組織幹細胞を採取した。
【００４０】
２．歯周組織幹細胞の不死化
不死化は、清野らの方法（Ｎａｔｕｒｅ，１９９８，３９６（６７０６）２３−２４）に従い、次のようにして行った。即ち、ヒトｂｍｉ−１ｃＤＮＡとヒトテロメラーゼ逆転写酵素サブユニットｈＴＥＲＴｃＤＮＡをそれぞれ（ｐＬＸＳＮおよびｐＬＸＳＨ）レトロウイルスベクターに組み込み、ＶＳＶ−Ｇｐｓｅｕｄｔｙｐｅｄ組み換えレトロウイルスを製作した。次に、これら組み換えレトロウイルスを用いて、２０％集密状態の細胞に、ヒトｂｍｉ−１ｃＤＮＡ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素サブユニットｈＴＥＲＴｃＤＮＡの順に遺伝子導入を行った。
【００４１】
その後、抗ヒトｂｍｉ−１抗体を用いたｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇ法でヒトｂｍｉ−１の発現を確認し、またＴＲＡＰアッセイ法によりテロメラーゼ活性を確認した。ここで、ヒトｂｍｉ−１の発現により、細胞周期回転が維持され、またテロメラーゼの活性化により、テロメア短小化に伴う細胞増殖の停止を回避することができる。つまり、上記二つの遺伝子導入により、細胞は無限増殖能を得て、不死化したことを示している。図２は、遺伝子導入により不死化されたウシ歯周組織幹細胞が、ヒトｂｍｉ−１を発現し、テロメラーゼ活性を獲得したことを示す。図２において、レーン１は、不死化されていないウシ歯小嚢細胞をサンプルとした場合を示し、レーン２は、遺伝子導入により不死化されたウシ歯周組織幹細胞をサンプルとした場合を示す。
【００４２】
上述の実験により、細胞はヒトｂｍｉ−１の発現およびテロメラーゼ活性を得て、不死化したことを確認することができた。
【００４３】
細胞のクローニングは、実施例１の「２．歯周組織幹細胞の不死化」の欄に記載したとおり行った。
【００４４】
３．クローン化した歯周組織幹細胞の担体への複合化
クローン化した細胞は、実施例１の「３．クローン化した歯周組織幹細胞の担体への複合化」の欄に記載したとおり、β−ＴＣＰに複合化し、本発明の細胞移植治療材料を作製した。
【００４５】
４．細胞移植治療材料のセメント質形成能の評価
作製された細胞移植治療材料を、実施例１の「４．細胞移植治療材料のセメント質形成能の評価」の欄に記載したとおり、重症複合型免疫不全症マウスの皮下へ移植し、移植４週間後の細胞移植片について、以下に記載するとおりセメント質形成能を評価した。
【００４６】
移植して４週間後、移植片を取り出し、二つに分割し、一方を４％パラフィンにて固定した後、ギ酸で脱灰して組織標本を作製した。この組織標本について、坑セメント質由来細胞接着因子（ＣＡＰ）モノクローナル抗体を用いた免疫染色により、セメント質形成の確認を行った。他方の移植片について、ＲＴ−ＰＣＲ法でセメント質形成に関連する遺伝子である骨シアロ蛋白質、オステオカルシン、オステオポンチンおよびＩ型コラーゲンの発現を確認した。ここで、ＣＡＰの発現は、セメント芽細胞であることを示し、骨シアロ蛋白質、オステオカルシン、オステオポンチンおよびＩ型コラーゲンの発現は、セメント質基質の再生を示している。
【００４７】
細胞形態は、ヘマトキシリン−エオジンによる染色により観察し、また免疫染色は常法に従って行った。細胞の固定と光学観察による形態観察を行った。即ち、クローン化した細胞の移植片をヘマトキシリン−エオジンによる染色により観察した。図３は、細胞移植片の組織を表す写真である。図３において、「ＢＤＦＣ」は、単に単離しただけの（不死化していない）ウシ歯小嚢細胞を細胞移植治療材料として用いた場合の移植片を示し、「ＢＤＦＣ^Bmi-1+hTERT」は、不死化したがクローン化していない歯周組織幹細胞を細胞移植治療材料として用いた場合の移植片を示し、「ＢＣＰ−Ｂ８」は、不死化した後にクローン化した歯周組織幹細胞を細胞移植治療材料として用いた場合の移植片を示す。
図３から明らかなように、クローン化した歯周組織幹細胞ＢＣＰ−Ｂ８は、ウシ歯小嚢細胞（ＢＤＦＣ）、不死化ＢＤＦＣ（ＢＤＦＣ^Bmi-1+hTERT）と同じくセメント質形成能を有しており、またこれらすべての細胞とβ−ＴＣＰは強固に接着しており、また細胞はβ−ＴＣＰ周囲に石灰化物を産生し、その周囲には繊維組織の形成が観察された。なお、図３において、矢印は石灰化物を示す。また、坑ＣＡＰモノクローナル抗体を用いた免疫染色により、β−ＴＣＰ周囲に形成された石灰化物がセメント質であることが確認された。
【００４８】
また、移植片のＲＴ−ＰＣＲ法の結果より、骨シアロ蛋白質、オステオカルシン、オステオポンチンおよびＩ型コラーゲンのｍＲＮＡの発現を確認することができたことから、この細胞がセメント質基質蛋白質を産生していることが認められた。
【００４９】
以上のように、本実施例により、ウシ歯小嚢組織から単離し、不死化した細胞をβ−ＴＣＰに複合した材料は、優れたセメント質形成能を示し、歯周組織の修復に有効であることが確認された。
本実施例のようにヒトｂｍｉ−１ｃＤＮＡとヒトテロメラーゼ逆転写酵素サブユニットｈＴＥＲＴｃＤＮＡを用いて不死化を行うと、実施例１と比較して歯周組織再生能力は高かった。
【００５０】
【発明の効果】
以上、詳細に説明したように、本発明によれば、組織崩壊を伴う歯周病に対しても、歯周組織の修復を可能とする細胞移植治療材料を提供することができる。本発明に係る細胞移植治療材料により、いかなる歯周病をも克服し、咀嚼を介したＱＯＬの向上に大きく貢献することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【図１】ヒトパピローマウイルスＥ６，Ｅ７ｃＤＮＡとヒトテロメラーゼ逆転写酵素サブユニットｈＴＥＲＴｃＤＮＡを遺伝子導入して不死化した歯周組織幹細胞を移植した場合の細胞移植片の組織を表す写真。
【図２】（ａ）抗ヒトｂｍｉ−１抗体を用いたｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇ法によりヒトｂｍｉ−１の発現を確認した電気泳動写真、（ｂ）ＴＲＡＰアッセイ法によりテロメラーゼ活性を確認した電気泳動写真。
【図３】ヒトｂｍｉ−１ｃＤＮＡとヒトテロメラーゼ逆転写酵素サブユニットｈＴＥＲＴｃＤＮＡを遺伝子導入して不死化した歯周組織幹細胞を移植した場合の細胞移植片の組織を表す写真。

Claims

歯周病治療に用いられる細胞移植治療材料であって、
歯小嚢組織を酵素消化することにより歯周組織幹細胞を採取し、採取された歯周組織幹細胞を遺伝子導入により不死化することにより得られる、セメント質形成能を有する不死化された歯周組織幹細胞を含む、細胞移植治療材料。
セメント質形成能を有する不死化された前記歯周組織幹細胞を、生体吸収性材料からなる担体に複合してなることを特徴とする請求項１に記載の細胞移植治療材料。
歯周病治療に用いられる細胞移植治療材料の製造方法において、
歯小嚢組織を酵素消化し、歯周組織幹細胞を得る工程、
前記歯周組織幹細胞を遺伝子導入により不死化する工程、および
前記不死化した歯周組織幹細胞を生体吸収性材料からなる担体に複合する工程
を備えることを特徴とする細胞移植治療材料の製造方法。
前記不死化が、細胞のがん化を誘導するがん遺伝子とテロメラーゼ活性を付与する遺伝子を歯周組織幹細胞に遺伝子導入することにより行なわれることを特徴とする、請求項１または２に記載の細胞移植治療材料。
前記不死化工程が、細胞のがん化を誘導するがん遺伝子とテロメラーゼ活性を付与する遺伝子を歯周組織幹細胞に遺伝子導入することにより行なわれることを特徴とする、請求項３に記載の細胞移植治療材料の製造方法。