JP2007507232A - 乳汁中に外因性タンパク質を産生するトランスジェニック哺乳動物を作製するプロセスおよびそれによって産生されるトランスジェニック哺乳動物 - Google Patents
乳汁中に外因性タンパク質を産生するトランスジェニック哺乳動物を作製するプロセスおよびそれによって産生されるトランスジェニック哺乳動物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2007507232A JP2007507232A JP2006534064A JP2006534064A JP2007507232A JP 2007507232 A JP2007507232 A JP 2007507232A JP 2006534064 A JP2006534064 A JP 2006534064A JP 2006534064 A JP2006534064 A JP 2006534064A JP 2007507232 A JP2007507232 A JP 2007507232A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- mammal
- growth hormone
- human
- plasmid
- milk
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 title claims abstract description 179
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 title claims abstract description 149
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 title claims abstract description 124
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 title claims abstract description 124
- 239000008267 milk Substances 0.000 title claims abstract description 124
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 113
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 105
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 52
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 25
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 claims abstract description 137
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 claims abstract description 130
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 claims abstract description 130
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims abstract description 85
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 55
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims abstract description 49
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 36
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 claims abstract description 27
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 claims abstract description 26
- 102000011632 Caseins Human genes 0.000 claims abstract description 22
- 235000021247 β-casein Nutrition 0.000 claims abstract description 21
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims abstract description 20
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 238000010367 cloning Methods 0.000 claims abstract description 3
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 claims description 72
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 claims description 72
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 70
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 48
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 claims description 44
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 claims description 36
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 24
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 claims description 20
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 14
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 claims description 14
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 12
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 claims description 12
- 241000283707 Capra Species 0.000 claims description 11
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 claims description 11
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 claims description 11
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 claims description 11
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 claims description 9
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 9
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 9
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 claims description 8
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 7
- 230000009027 insemination Effects 0.000 claims description 7
- 210000004216 mammary stem cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 claims description 6
- 241001244729 Apalis Species 0.000 claims description 5
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 claims description 5
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 claims description 5
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 claims description 4
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 claims description 4
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims description 4
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 4
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 claims description 3
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 claims description 2
- 101000868138 Ovis aries Somatotropin Proteins 0.000 claims 3
- 101000868144 Sus scrofa Somatotropin Proteins 0.000 claims 3
- 108010006025 bovine growth hormone Proteins 0.000 claims 3
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 claims 2
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 claims 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 abstract description 14
- 238000012546 transfer Methods 0.000 abstract description 11
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 abstract description 7
- 238000001890 transfection Methods 0.000 abstract description 6
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 69
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 47
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 33
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 28
- 239000000463 material Substances 0.000 description 27
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 18
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 18
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- 244000309466 calf Species 0.000 description 17
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 15
- 230000031864 metaphase Effects 0.000 description 14
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 13
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 13
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 12
- BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N geneticin Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C(C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N 0.000 description 12
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 11
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 11
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 10
- 238000002270 exclusion chromatography Methods 0.000 description 10
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 9
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 8
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 8
- 235000021277 colostrum Nutrition 0.000 description 8
- 210000003022 colostrum Anatomy 0.000 description 8
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 8
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 8
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 8
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 8
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 8
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 7
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 7
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 7
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 7
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 6
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 6
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 6
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 6
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 6
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 6
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 5
- 230000018199 S phase Effects 0.000 description 5
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 5
- 230000007159 enucleation Effects 0.000 description 5
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 5
- 210000004508 polar body Anatomy 0.000 description 5
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 5
- 230000008672 reprogramming Effects 0.000 description 5
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 5
- 101000741065 Bos taurus Beta-casein Proteins 0.000 description 4
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 4
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 4
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 4
- 206010042573 Superovulation Diseases 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 3
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 3
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 230000016507 interphase Effects 0.000 description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- XNOPRXBHLZRZKH-DSZYJQQASA-N oxytocin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](N)C(=O)N1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(N)=O)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 XNOPRXBHLZRZKH-DSZYJQQASA-N 0.000 description 3
- 229960001723 oxytocin Drugs 0.000 description 3
- 230000032696 parturition Effects 0.000 description 3
- 238000010374 somatic cell nuclear transfer Methods 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 3
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 2'-(4-ethoxyphenyl)-5-(4-methylpiperazin-1-yl)-2,5'-bibenzimidazole Chemical compound C1=CC(OCC)=CC=C1C1=NC2=CC=C(C=3NC4=CC(=CC=C4N=3)N3CCN(C)CC3)C=C2N1 PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 2
- 108091060290 Chromatid Proteins 0.000 description 2
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical compound NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 2
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 2
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 2
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102400000050 Oxytocin Human genes 0.000 description 2
- XNOPRXBHLZRZKH-UHFFFAOYSA-N Oxytocin Natural products N1C(=O)C(N)CSSCC(C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C1CC1=CC=C(O)C=C1 XNOPRXBHLZRZKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101800000989 Oxytocin Proteins 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 2
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 2
- 210000001109 blastomere Anatomy 0.000 description 2
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 2
- 244000309464 bull Species 0.000 description 2
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 2
- 210000004756 chromatid Anatomy 0.000 description 2
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 2
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 2
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 2
- 230000021121 meiosis Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 2
- 210000000633 nuclear envelope Anatomy 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 229940085913 pluset Drugs 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 2
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 2
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- BTIHMVBBUGXLCJ-OAHLLOKOSA-N seliciclib Chemical compound C=12N=CN(C(C)C)C2=NC(N[C@@H](CO)CC)=NC=1NCC1=CC=CC=C1 BTIHMVBBUGXLCJ-OAHLLOKOSA-N 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 230000002381 testicular Effects 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 2
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 241000394635 Acetomicrobium mobile Species 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 241000599985 Beijerinckia mobilis Species 0.000 description 1
- UYIFTLBWAOGQBI-BZDYCCQFSA-N Benzhormovarine Chemical compound C([C@@H]1[C@@H](C2=CC=3)CC[C@]4([C@H]1CC[C@@H]4O)C)CC2=CC=3OC(=O)C1=CC=CC=C1 UYIFTLBWAOGQBI-BZDYCCQFSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 description 1
- 230000005778 DNA damage Effects 0.000 description 1
- 231100000277 DNA damage Toxicity 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 1
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 240000004658 Medicago sativa Species 0.000 description 1
- 235000017587 Medicago sativa ssp. sativa Nutrition 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- BVIAOQMSVZHOJM-UHFFFAOYSA-N N(6),N(6)-dimethyladenine Chemical compound CN(C)C1=NC=NC2=C1N=CN2 BVIAOQMSVZHOJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Natural products CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 102000001938 Plasminogen Activators Human genes 0.000 description 1
- 108010001014 Plasminogen Activators Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000242583 Scyphozoa Species 0.000 description 1
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 208000035199 Tetraploidy Diseases 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- WAHQVRCNDCHDIB-QZYSPNBYSA-N [(3s,8r,9s,10r,13s,14s,17r)-17-acetyl-17-acetyloxy-6,10,13-trimethyl-1,2,3,8,9,11,12,14,15,16-decahydrocyclopenta[a]phenanthren-3-yl] 3-cyclopentylpropanoate Chemical compound O([C@@H]1C=C2C(C)=C[C@H]3[C@@H]4CC[C@]([C@]4(CC[C@@H]3[C@@]2(C)CC1)C)(OC(=O)C)C(C)=O)C(=O)CCC1CCCC1 WAHQVRCNDCHDIB-QZYSPNBYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003466 anti-cipated effect Effects 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 102000006635 beta-lactamase Human genes 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 210000003969 blast cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000003710 calcium ionophore Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 1
- 229940105774 coagulation factor ix Drugs 0.000 description 1
- 229940105778 coagulation factor viii Drugs 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 210000001771 cumulus cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 229940026692 decadron Drugs 0.000 description 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Natural products CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 229930182833 estradiol Natural products 0.000 description 1
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 description 1
- 229950002007 estradiol benzoate Drugs 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- CJAONIOAQZUHPN-KKLWWLSJSA-N ethyl 12-[[2-[(2r,3r)-3-[2-[(12-ethoxy-12-oxododecyl)-methylamino]-2-oxoethoxy]butan-2-yl]oxyacetyl]-methylamino]dodecanoate Chemical compound CCOC(=O)CCCCCCCCCCCN(C)C(=O)CO[C@H](C)[C@@H](C)OCC(=O)N(C)CCCCCCCCCCCC(=O)OCC CJAONIOAQZUHPN-KKLWWLSJSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 230000003176 fibrotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000007366 host health Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N ionomycin Natural products O1C(CC(O)C(C)C(O)C(C)C=CCC(C)CC(C)C(O)=CC(=O)C(C)CC(C)CC(CCC(O)=O)C)CCC1(C)C1OC(C)(C(C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N ionomycin Chemical compound O1[C@H](C[C@H](O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)/C=C/C[C@@H](C)C[C@@H](C)C(/O)=C/C(=O)[C@@H](C)C[C@@H](C)C[C@@H](CCC(O)=O)C)CC[C@@]1(C)[C@@H]1O[C@](C)([C@@H](C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N 0.000 description 1
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 1
- 230000006651 lactation Effects 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229960002985 medroxyprogesterone acetate Drugs 0.000 description 1
- PSGAAPLEWMOORI-PEINSRQWSA-N medroxyprogesterone acetate Chemical compound C([C@@]12C)CC(=O)C=C1[C@@H](C)C[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@](OC(C)=O)(C(C)=O)CC[C@H]21 PSGAAPLEWMOORI-PEINSRQWSA-N 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000021243 milk fat Nutrition 0.000 description 1
- 235000021239 milk protein Nutrition 0.000 description 1
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 1
- 230000027291 mitotic cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- 210000000472 morula Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 101150111412 npt gene Proteins 0.000 description 1
- 230000006911 nucleation Effects 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 238000012510 peptide mapping method Methods 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036417 physical growth Effects 0.000 description 1
- 229940127126 plasminogen activator Drugs 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 239000000583 progesterone congener Substances 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 239000013014 purified material Substances 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 239000002684 recombinant hormone Substances 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000011012 sanitization Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
- A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/61—Growth hormone [GH], i.e. somatotropin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/873—Techniques for producing new embryos, e.g. nuclear transfer, manipulation of totipotent cells or production of chimeric embryos
- C12N15/877—Techniques for producing new mammalian cloned embryos
- C12N15/8771—Bovine embryos
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/101—Bovine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/01—Animal expressing industrially exogenous proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/008—Vector systems having a special element relevant for transcription cell type or tissue specific enhancer/promoter combination
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
ヒトの健康管理に関与するタンパク質因子およびホルモンは、一般的に、この数十年間、抽出によってか、または組換え技術によって製薬産業により生成された。所望の遺伝子を含む遺伝的構築物の発現は、細菌、酵母または哺乳類細胞株で首尾よく発現された。しかし、複雑なタンパク質(例えば、適切なグリコシル化パターンを必要とするタンパク質)を得るために哺乳類細胞培養物を使用することは、高コストの手順を伴う。
Campbell,K.H.ら、Nature 380、1996年、p.64−66 Wells,D.N.ら、Biol Reprod 57、1997年、p.385−393 Wilmut,I.ら、Nature 385、1997年、p.810−813 Baguisi,A.ら、Nat Biotechnol 17、1999年、p.456−461 Cibelli,J.B.ら、Science 280、1998年、p.1256−1258 Kato,Y.ら、Science 282、1998年、p.2095−2098 Wells,D.N.ら、Reprod Fertil Dev 10、1998年、p.369−378 Stice,S.L.およびKeefer,C.L.、Biol Reprod 48、1993年、p.715−719 Westhusin,M.E.ら、J Reprod Fertil 95、1992年、p.475−480 Collas,P.ら、Anal Biochem 208、1993年、p.1−9 Liu,L.ら、Mol Reprod Dev 49、1998年、p.298−307 Willadsen,S.M.、Nature 320、1986年、p.63−65 McGrath,J.およびSolter,D.、Dev Biol N Y 4、1985年、p.37−55 Tsunoda,Y.ら、J Reprod Fertil 96、1992年、p.275−281 Collas,P.およびRobl,J.M.、Biol Reprod 45、1991年、p.455−465 Cheong,H.T.ら、Biol Reprod 48、1993年、p.958−963 Kwon,O.Y.およびKono,T.、ProcNatl Acad Sci U S A 93、1996年、p.13010−13013 Wakayama,T.ら、Nature 394、1998年、p.369−374 Wells,D.N.ら、Biol Reprod 60、1999年、p.996−1005 Liu,L.ら、Mol Reprod Dev 47、1997年、p.255−264
本発明は、非ヒトトランスジェニック哺乳動物に関し、この非ヒトトランスジェニック哺乳動物は、その乳汁における予想外に高レベルの組換え成長ホルモンの産生によって特徴付けられる。組換え成長ホルモンはヒト成長ホルモンであり得るが、これに限定されない。非ヒトトランスジェニック哺乳動物はウシ種の動物であり得るが、これに限定されない。
本発明は、非ヒトトランスジェニック哺乳動物に関し、この非ヒトトランスジェニック哺乳動物は、その乳汁における予想外に高レベルの組換え成長ホルモンの産生によって特徴付けられる。この哺乳動物は、ウシ種の動物であり得るが、これに限定されない。トランスジェニック哺乳動物の他の種は、ブタ種、ヒツジ種、ヤギ種、または齧歯動物種であり得るが、これらに限定されない。
上記非ヒトトランスジェニック哺乳動物はウシ種の動物であり得るが、これに限定されない。
(発現プラスミドの構築)
本発明者らは、ヒト成長ホルモン遺伝子のコード配列に融合された、ウシβカゼイン遺伝子プロモーターの大部分(5’非コードβカゼイン遺伝子領域の短いフラグメントを含む)を有する構築物を生成した。様々な構築物で使用したβカゼイン領域を、3.8kbpから約1.3kbpまで減少させた。hGH遺伝子は、内因性のポリAシグナルが含まれるか否かに依存して約2kbp〜2.2kbpを含む。
この構築物の目的は、宿主生物におけるそのポリAシグナルに並んですぐ下流に融合されたhGH遺伝子の特異的に調節された転写を誘導するβカゼインプロモーター領域の最小限の伸長を提供することである。
PB1 5’TCTACTCGAGGATCATCTATCTGTCCCAAAG(配列番号1)および
PB2 5’CTAGGATCCAATGATCTGATTTTGTGG(配列番号2)
を使用することにより、3.8kbpの元の遺伝子プロモーター領域からの1.3kbpのフラグメントのPCR増幅後、βカゼインの短いプロモーターを得た。このフラグメントは、1230bpの標準プロモーターと、49bpのβカゼイン遺伝子の第1の非コードエキソンとを含む。
PB4 5’CTAGGATCCATGGCTACAGGTAAGCGCC(配列番号3)および
GHTE 5’ATGCTGTGTCTGGACGTCCT(配列番号4)
を使用して、元のウシゲノムhGHクローンでのPCR技術によって得た。βカゼインプロモーターフラグメントを、Klenow酵素で平滑末端化し、pVEXのBamHI充填部位(filled−in site)に挿入した。組換えクローンを選択した後、本発明者らは、pVEXで下流に位置する固有のHindIII部位をhGHコード領域に挿入するために使用するのに適切な特定の方向を選択する。
次いで、プラスミドpRβhGH(ジェネティシン耐性遺伝子を含む別のプラスミドを伴う)、pRNeo、pRNeoGreenまたはpVEβcashGHを、リン酸カルシウム法またはリポソーム法を用いて体細胞の初期培養物をトランスフェクションするために使用した。概して、ウシ胎仔線維芽細胞を使用してトランスフェクトした。
(卵母細胞の除核および除核された成熟卵母細胞における中期核移植)
(ウシ卵母細胞の収集およびインビトロ成熟)
ウシ卵母細胞を食肉処理場の卵巣から吸引し、TCM−199 + 5%FCS中、39℃で24時間成熟させた。その成熟培地を使用前にCO2で少なくとも2時間平衡化した。成熟卵母細胞を、1mg/mlのウシ精巣ヒアルロニダーゼを含む温TL−HEPES中で2分間ボルテックスすることによって裸にした。
(除核)
卵母細胞を、Narishige液圧マイクロマニピュレータ(hydraulic micromanipulator)およびNikon Diaphot顕微鏡を用いて機会的に除核した。除核を、20μmの斜めにとがったピペットを用いて行った。卵母細胞を予め、5μg/mlのビスベンズイミジン(Hoechst 33342、Sigma Chemical Co.,St.Louis.MO,USA)色素で20分間染色した。中期を、紫外線下での染色された染色体の可視化によって除核した。ピペットに吸引した後、中期染色体を評価した。トランスジェニック体細胞を卵黄周囲腔に移植し、除核された卵母細胞としっかりと向かい合わせた。
トランスジェニック体細胞および除核された卵母細胞を、融合される膜が電極と平行になるように、手動で融合チャンバーに並べた。これを、ガラス製の胚取扱い用ピペットを用いて行った。
融合を、1回の180ボルト/cmの電気パルス(BTX Electro Cell Manipulator 200、BTX Inc.,San Diego,Ca,USA)を15μ秒間用いて行い、BTX Optimizer−Graphic Pulse Analyzerでモニタリングした。2つの0.5mmステンレススチールワイヤ電極からなる、胚をパルスするためのチャンバーを、ガラス顕微鏡スライドに0.5mm離して取り付けた。推定接合体を、融合、溶解およびフラグメント化についてモニタリングした。
接合体を受精48時間後に卵割について評価し、7日〜9日後に桑実胚または胚盤胞への発生について評価した。
(細胞培養および胚培養)
様々なドナー細胞、培養系および卵母細胞レシピエント処理を、手順を単純化することおよびウシクローニングプログラムにおける胚の生存率を増加させることを目的とした実験で試験した。成体の線維芽細胞をドナー細胞として使用する場合、再構築された胚について3つの培養系を使用した:TCM−199 + 5%FCS、Menezo + 5%FCS(いずれも同時培養物としてVERO細胞を含む)、および同時培養物は含まないがO2濃度が低いSOF。ドナー細胞が遺伝的に改変された胎仔線維芽細胞および非遺伝的に改変された胎仔線維芽細胞である場合、SOF培地もまた、再構築された胚を培養するために使用した。最後に、遺伝的に改変された胎仔線維芽細胞をドナー細胞として使用する場合、受容性の卵母細胞を予めロスコビチン(R)で試験して、減数分裂を中断させ、レシピエントの有用性を最適化した。卵母細胞を食肉処理場の卵巣から吸引し、TCM−199 + 5%FCS中、39℃で24時間成熟させた。R処理群について、卵母細胞を、成熟前にTCM 199 + 5%FCS中の25μMのRで、39℃で24時間インキュベートした。成熟卵母細胞を、1mg/mlのウシ精巣ヒアルロニダーゼを含むTL HEPES中で3分間ボルテックスすることによって裸にした。中期を評価し、卵母細胞をUV光下でのHoechst 33342(5μg/ml)による可視化(6秒未満)によって除核した。Augus雄ウシに由来する成体の線維芽細胞および45日齢のJersey胎仔雌性に由来する胎仔線維芽細胞をドナー細胞として使用した。ネオマイシン耐性遺伝子を含む構築物を用いるトランスフェクションをリポソームを用いて行った。ジェネティシンで10日間〜15日間選択した後、G0/G1期のドナー細胞を、電気パルスによって除核された卵母細胞に融合した。3時間後、5μMイオノマイシンを含むTL−HEPES中で4分間、そして2mM 6−DMAPで3時間インキュベーションすることにより、活性化を誘導した。次いで、その卵母細胞をTL−HEPESで洗浄し、TCM−199 + 5%FCS + 10g/lアルブミンまたはMenezo + 2%FCS(いずれもVERO細胞を含む)のいずれかで、あるいはSOF培地および5%CO2 + 5%O2 + 90%N2雰囲気において同時培養した。概して、2つの線維芽細胞を、1頭のレシピエントウシあたり非外科的に移植し、30〜35日目に妊娠を超音波検査によって決定した。卵割(48時間)、線維芽細胞への発生(7日目〜9日目)を記録し、カイ二乗により分析した。卵割率および線維芽細胞への発生は、胚をSOFで培養した場合により高かった。しかし、様々な培養条件またはドナー細胞の供給源に起因する妊娠率では、差異は観察されなかった。24時間の減数分裂成熟の中断は、レシピエント卵母細胞の発生能力を損なわなかった。従って、ロスコビチンによる処理は、NT手順に対する卵母細胞のアベイラビリティを増大させるために使用され得る。以下の表1を参照のこと。
移植されたウシは、妊娠を正常に自然分娩まで経過させることが可能である。最終的に、外科的アプローチ(Caesarea)が分娩に使用され得る。新生仔に最初の48時間の間、Igリッチの初乳を与え、次いで、人工の食物を、のちに天然の食物(そのすべては動物起源の化合物を含まない)を使用した。
(トランスジェニック子ウシおよび産生された組換えタンパク質に対して行った試験)
本実施例において、本発明者らは、実施例1〜3に記載される手順の結果として得られた特定のトランスジェニック子ウシ、およびそのウシによって産生された組換えタンパク質に対して行った試験の完全な記載を示す。それにもかかわらず、同一のアッセイのセットが、トランスジェニック子ウシを得るための他の方法(例えば、以下の実施例5および6に記載される方法)の結果として出生する動物に対して行われることが明らかであるはずである。
予期されるように、処置が終了した翌日にウシは初乳の産生を開始し、次いで、徐々に産生される流体の質が乳汁に変化した。収集した流体を適切に保存し、徹底的に分析した。
(サブクローニングによってトランスジェニック子ウシを得ること)
トランスジェニック子ウシの耳由来の5つの組織サンプルを、1.5mm直径の針(その針の先端はこの目的のために予め斜めにしていた)を使用して取得した。そのサンプルを、抗生物質および抗真菌剤を含むPBSベースの培地中、冷凍下で研究室に送った。
(過排卵させたトランスジェニックウシの人工授精によってトランスジェニック子ウシを得ること)
トランスジェニックウシを得るための代替的なアプローチが本実施例に開示される。この方法は、ホルモン処置によってトランスジェニック雌ウシを過排卵させる工程;その雌ウシを人工授精させる工程;そのようにして産生された胚を再収集する工程;代理雌ウシへのその胚の移植工程;およびその動物の出生までの妊娠の発生工程を包含する。この手順の説明は以下に示される。
1日目(すなわち、手順を開始した日)の午前に、150μgのプロスタグランジン(D(+)−クロルプロステロール、Arsaprost(登録商標)、Arsa)を、筋肉内経路によってトランスジェニック雌ウシに投与した。その動物を、約15%のタンパク質(1日目の前に、その動物に、同一のタンパク質含量を有する2kgの飼料を与えていた)を含む1日4kgの食餌に供した。8日目の午前に、プロゲステロンのCIDR(体内薬物放出制御(controlled internal drug release))デバイスを膣内に置いた。さらに、50mgのプロゲステロンおよびエストラジオールを筋肉内経路によって投与した。動物に与えた飼料の量を、同一のタンパク質含量で6kg/日に増やした。次いで、FSHおよびLH(PLUSET(登録商標)、Calier)の2回の筋肉内注射を12日目、13日目および14日目に(1回は午前に、もう1回は午後に)行った。次の日(15日目)、PLUSET(登録商標)の2回の注射(1回は午前に、もう1回は午後に)および各々150μgのプロスタグランジンの2回の注射(同一の投与レジメン)を筋肉内経路により行って処置を続けた。16日目の午前に、CIDRを取り外した。過排卵段階の全体にわたって投与したPLUSET(登録商標)の総量は350IUであった。
この段階は、ドナーのジャージー雄ウシ由来の精液(これは、予め入手し、精子の生存度を維持するために凍結させていた)の3回の連続投与(1回目および2回目は、それぞれ17日目の午前および午後、そして最後は18日目の午前)を包含する。
26日目の午前に、雌ウシの子宮の両方の角を1lのDAMPBS(Nutricell(登録商標))でフラッシングすることによって、胚の収集を行った。その直後に、1頭のレシピエント雌ウシあたり2つの胚を非外科的に移植し、超音波検査によって妊娠を30日〜35日目に決定した。
(乳汁からの組換えhGHの精製)
一旦おおよその分子量、ウエスタンブロットの結果および子ウシの乳汁で産生された組換えhGHの生物学的活性が妥当であることを確認すると、徹底的な精製プロセスを行った。なぜなら、生物薬学的生成物を製造する場合、上記生成物中に起こり得る混入物の存在を回避するために、目的のタンパク質を精製して均一にすべきであることが不可欠であるからである。このプロセスは、以下の工程を包含する:遠心分離によって乳汁の皮膜を得、得られた上清を希釈して、最終的にカゼインのミセル中に保持される組換えhGHのより良好な可溶性を達成する(清澄)工程;およびこの溶液を流動層によるアニオン交換クロマトグラフィーカラムを通過させる工程(この工程に対する代替はイムノアフィニティーカラムの使用である、以下の実施例8を参照のこと);得られる溶液を逆相HPLC(C4)工程に供する(subdue)工程;その後、組換えhGHが多い画分をアニオン交換クロマトグラフィーに供する工程。
新鮮な乳汁を、0.5%溶液を得るために、十分量のTween 80と混合した。Tween 80の添加後、2M Tris−HClを添加して7.3±0.1のpHを得た。その後、生成物を30分間ホモジナイズし、次いで、脂肪層を分離させるために14000gで遠心分離した。その後、得られた溶液を、1500μS/cm以下の伝導率まで0.5% Tween 80で希釈した。pHを、2M Tris−HClで7.3±0.1に調整し、次いで、生成物を0.8μm孔径の膜で濾過し、都合よく保管した。
上記工程から得られる物質を、以下のパラメーターに従って、アニオン交換マトリックスを用いてクロマトグラフする:
1.機器:
A.カラム:
1)直径:5cm
2)層の高さ:30cm(コンパクト層)
3)マトリックス:
a.Streamline Q XL(Amersham)
b.容量:600ml
2.溶液および緩衝液:
A.0.5N NaOH
B.20%エタノール
C.緩衝液A:20mM Tris.HCl、pH7.3
D.緩衝液B:500mM Tris.HCl、pH7.3
E.緩衝液C:20mM Tris.HCl、150mM NaCl、pH7.3
F.緩衝液D:20mM Tris.HCl、500mM NaCl、pH7.3
3.クロマトグラフされる物質
A.清澄した乳汁
B.サンプル条件:
1)容量:25±5l
2)伝導率:≦1500μS/cm
3)pH:7.3±0.1 。
上記工程から得られる物質を、以下のパラメーターに従ってクロマトグラフする:
1.機器:
A.カラム:
1)直径:4cm
2)層の高さ:48cm
3)マトリックス
a.BakerBond Wide−Pore Butyl(C4)15μm prep LC Packing(Baker)
b.容量:600ml
2.溶液および緩衝液
A.可動相1(MP1):30mM NaHCO3(pH7.2):純水:アセトニトリル(35:55:10)
B.可動相2(MP2):30mM NaHCO3(pH7.2):純水:アセトニトリル(20:10:70)
C.50%メタノール
3.クロマトグラフされる物質
A.上記工程から得られる、選択した画分のプール
B.サンプル条件:
1)容量:30±15l
2)pH:7.3±0.3 。
上記工程から得られる物質を、アニオン交換マトリックスを用いて、以下のとおりにクロマトグラフする:
1.機器:
A.カラム:
1)直径:5cm
2)層の高さ:25cm
3)マトリックス
a.Source 30Q(Pharmacia)
b.容量:500ml
2.溶液および緩衝液
A.20%エタノール
B.溶液K:0.5N NaOH、3M NaCl
C.溶液L:50mM Tris、pH7.50
D.溶液M:0.1N HCl、3M NaCl
E.可動相3(MP3):溶液L:アセトニトリル(70:30)
F.可動相4(MP4):50mM Tris、0.1M NaCl(pH7.50):アセトニトリル(70:30)
3.クロマトグラフされる物質
A.上記工程から得られる、選択した画分
B.サンプル条件:
1)容量:4.5±1l
2)pH:7.2±0.2 。
上記工程から得られる物質を分子排除マトリックスを用いて、以下のとおりにクロマトグラフする:
1.機器:
A.カラム:
1)直径:5cm
2)層の高さ:25cm
3)マトリックス
a.Cellufine GH25(Millipore)
b.容量:500ml
2.溶液および緩衝液:
A.0.5N NaOH
B.20%エタノール
C.緩衝液C:150mM NaH2PO4、pH7.2
D.緩衝液G:320mM グリシン、10mM NaH2PO4、0.1% Tween 80、pH6.9
3.クロマトグラフされる物質
A.上記工程から得られる、選択した画分
B.サンプル条件:
1)容量:0.5±0.2l
2)pH:7.5±0.5 。
上記実施例から得られる画分を、以下に記載する条件に従って濃縮した:
1.機器:
A.蠕動ポンプ:Watson Marlow − カタログ番号302S
B.チュービング:Watson Marlow − カタログ番号902.0080.016
C.濃縮機:Prep Scale Millipore − カタログ番号CDU F006LC
2.溶液および緩衝液:
A.0.28%ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)
B.0.06%トリトン
C.0.125N NaOH
D.緩衝液G:320mMグリシン、10mM NaH2PO4、0.1% Tween 80、pH6.9
3.処理される物質
A.上記実施例から得られる、選択した画分
B.サンプル条件:
1)容量:1.0±0.5l
2)伝導率:1200±100μS/cm
3)pH:6.9±0.1 。
上記工程から得られる物質を、分子排除マトリックスを用いて、以下のとおりにクロマトグラフする:
1.機器:
A.カラム:
1)直径:5cm
2)層の高さ:92cm
3)マトリックス
a,Sephacryl S−200 High Resolution(Amersham Pharmacia)
b.容量:1,800ml
2.溶液および緩衝液:
A.0.5N NaOH
B.20%エタノール
C.緩衝液H:320mMグリシン、2.2mM NaH2PO4、1.8mM Na2HPO4、pH7.30
3.クロマトグラフされる物質
A.上記工程から選択され、濃縮された画分
B.サンプル条件:
1)容量:40±20ml
2)伝導率:1,200±100μS/cm
3)pH:7.3±0.1 。
(乳汁からのhGHの精製についての代替的手順)
先に記載した精製方法の代わりに、乳汁中に含まれる組換えhGHを精製するために、代替的スキームが使用され得る。実施例7に記載した手順と本実施例で示される代替的手順との間の主な相違は、前者の第2工程が流動層によるアニオン交換クロマトグラフィーを包含する一方で、後者の対応する工程がイムノアフィニティークロマトグラフィーを伴うことである。両方の手順の清澄工程もまた、わずかに異なる。両方の精製スキームの残りは同一なので、代替的手順の最初の2つの工程のみを以下に記載する。
新鮮な乳汁を、0.5%溶液を得るために十分量のTween 80と混合した。Tween 80の添加後、1M Trisを添加して、7.3±0.3のpHを得た。その後、生成物を30分間ホモジナイズし、次いで、脂肪層を分離させるために14000gで遠心分離した。その後、得られる溶液を緩衝液S(50mM Tris.HCl、500mM NaCl、0.5% Tween 80、pH7.3)で20倍に希釈し、次いで、0.45μm孔径の膜で濾過し、都合よく保管した。
上記工程から得られる物質を、以下のパラメーターに従って、イムノアフィニティー相互作用マトリックス(抗GHモノクローナル抗体(Bio Sidus製)に共有結合したAffigel 10 Ester Agarose、BioRad製)を用いてクロマトグラフした:
1.機器:
A.カラム:
1)直径:30cm
2)層の高さ:15cm
3)マトリックス:
a.抗GHモノクローナル抗体(Bio Sidus)に共有結合したAffigel 10 Ester Agarose(BioRad)
b.容量:10l
2.溶液および緩衝液:
A.緩衝液A:50mM Tris.HCl、500mM NaCl、pH7.2
B.緩衝液B:100mM クエン酸、pH3.0
C.緩衝液C:150mM NaH2PO4、pH7.2
D.緩衝液D:50mM Tris.HCl、500mM NaCl、500mMグアニジン.HCl、pH7.2
E.緩衝液E:50mM Tris.HCl、500mM NaCl、pH7.2、0.2%アジ化ナトリウム、0.1g/lゲンタミシン
3.クロマトグラフされる物質
A.清澄された乳汁
B.サンプル条件:
1)容量:30〜50l
2)伝導率:45±15mS/cm
3)pH:7.3±0.3 。
(純粋な組換えhGHの品質管理)
純粋な組換えhGHの2つのバッチを、一連のアッセイに供して、その生成物が天然のhGHと区別できないことを確認した。そのような手順としては、SDS/PAGE、ウエスタンブロット、インビトロ(細胞nb2)およびインビボ(下垂体切除ラット)での生物学的活性、ペプチドマッピング、完全なアミノ酸配列の決定、等電点電気泳動(IEF)、ならびに逆相HPLC分析およびサイズ排除HPLC分析が挙げられるが、これらに限定されない。これらすべてのアッセイで得られた結果は、組換えhGHおよび天然のhGHの両方について全く同じであり、これは、純粋な組換えhGHが天然のhGHと正確に一致し、それゆえ生物薬学的生成物を製造するのに適切であることを証明する。
Claims (77)
- βカゼインプロモーターに作動可能に連結された目的のタンパク質をコードする遺伝子と、βラクタマーゼ遺伝子とを含む、プラスミド。
- 前記目的のタンパク質が、成長ホルモンである、請求項1に記載のプラスミド。
- 前記成長ホルモンが、哺乳類成長ホルモンである、請求項2に記載のプラスミド。
- 前記哺乳類成長ホルモンが、ヒト成長ホルモン、ウシ成長ホルモン、ブタ成長ホルモン、ヒツジ成長ホルモン、ヤギ成長ホルモンまたは齧歯動物成長ホルモンである、請求項3に記載のプラスミド。
- 前記哺乳類成長ホルモンが、ヒト成長ホルモンである、請求項4に記載のプラスミド。
- pRβhGHである、請求項5に記載のプラスミド。
- ネオマイシン耐性遺伝子をさらに含む、請求項6に記載のプラスミド。
- pRNeoである、請求項7に記載のプラスミド。
- サイトメガロウイルス(CMV)プロモーターに作動可能に連結された緑色蛍光タンパク質(GFP)をコードする遺伝子をさらに含む、請求項8に記載のプラスミド。
- pRNeoGreenである、請求項9に記載のプラスミド。
- 前記βカゼインプロモーターが、1230bpの全長βカゼインプロモーターと、49bpの該βカゼイン遺伝子の第1の非コードエキソンとを含む、請求項5に記載のプラスミド。
- ネオマイシン耐性遺伝子をさらに含む、請求項11に記載のプラスミド。
- pVEβcashGHである、請求項12に記載のプラスミド。
- ApaLIでの消化によって前記βラクタマーゼ遺伝子が切除された、請求項8に記載のプラスミドの直鎖状フラグメント。
- ApaLIでの消化によって前記βラクタマーゼ遺伝子が切除された、請求項10に記載のプラスミドの直鎖状フラグメント。
- ApaLIでの消化によって前記βラクタマーゼ遺伝子が切除された、請求項13に記載のプラスミドの直鎖状フラグメント。
- プラスミドpRβhGH。
- プラスミドpRNeo。
- プラスミドpRNeoGreen。
- 請求項1〜19に記載の遺伝的構築物を哺乳類細胞にトランスフェクションするための方法であって、リポソーム利用のためのカチオン性脂質の組み合わせ工程を包含する、方法。
- その乳汁中に組換え成長ホルモンを産生する、非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- 前記哺乳動物が、ウシ種、ブタ種、ヒツジ種、ヤギ種または齧歯動物種の哺乳動物である、請求項21に記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- 前記哺乳動物がウシ種の哺乳動物である、請求項22に記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- 前記成長ホルモンが哺乳類成長ホルモンである、請求項21に記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- 前記哺乳類成長ホルモンが、ヒト成長ホルモン、ウシ成長ホルモン、ブタ成長ホルモン、ヒツジ成長ホルモン、ヤギ成長ホルモンまたは齧歯動物成長ホルモンである、請求項24に記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- 前記哺乳類成長ホルモンがヒト成長ホルモンである、請求項25に記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- 前記ヒト成長ホルモンが、乳汁1Lあたり約1.0g hGHよりも高いレベルで産生される、請求項26に記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- 前記ヒト成長ホルモンが、乳汁1Lあたり約2.0g hGHよりも高いレベルで産生される、請求項27に記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- 前記ヒト成長ホルモンが、乳汁1Lあたり約3.0g hGHよりも高いレベルで産生される、請求項28に記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- 前記ヒト成長ホルモンが、乳汁1Lあたり約4.0g hGHよりも高いレベルで産生される、請求項29に記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- 前記ヒト成長ホルモンが、乳汁1Lあたり約5.0g hGHよりも高いレベルで産生される、請求項30に記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- 前記ヒト成長ホルモンが、乳汁1Lあたり約6.0g hGHよりも高いレベルで産生される、請求項31に記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- 前記哺乳動物による前記組換え成長ホルモンの産生が、該成長ホルモンを含む乳汁をより多く産生するように該哺乳動物を刺激する、請求項21に記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- 請求項21に記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物であって、そのゲノムは統合されたプラスミドを含み、該プラスミドは成長ホルモンの遺伝子を含み、該遺伝子は、該哺乳動物の乳腺細胞において該遺伝子の発現を誘導するプロモーターに作動可能に連結される、非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- 前記哺乳動物が、ウシ種、ブタ種、ヒツジ種、ヤギ種または齧歯動物種の哺乳動物である、請求項34に記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- 前記哺乳動物がウシ種の哺乳動物である、請求項35に記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- 前記成長ホルモンの遺伝子が、ヒト成長ホルモンの遺伝子、ウシ成長ホルモンの遺伝子、ブタ成長ホルモンの遺伝子、ヒツジ成長ホルモンの遺伝子、ヤギ成長ホルモンの遺伝子または齧歯動物成長ホルモンの遺伝子である、請求項34に記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- 前記成長ホルモンの遺伝子が、ヒト成長ホルモンの遺伝子である、請求項37に記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- 前記プロモーターがβカゼインプロモーターである、請求項38に記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- 前記プラスミドがpRβhGHである、請求項39に記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- 前記プラスミドがネオマイシン耐性遺伝子をさらに含む、請求項40に記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- 前記プラスミドがpRNeoである、請求項41に記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- 前記哺乳動物による前記組換え成長ホルモンの産生が、該成長ホルモンを含む乳汁をより多く産生するように該哺乳動物を刺激する、請求項34に記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- その乳汁中に組換えヒト成長ホルモンを産生するウシ種の非ヒトトランスジェニック哺乳動物であって、そのゲノムは統合されたプラスミドを含み、該プラスミドは、該ヒト成長ホルモンの遺伝子と、該哺乳動物の乳腺細胞において該遺伝子の発現を誘導するβカゼインプロモーターとを含む、非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- 前記プラスミドがpRβhGHである、請求項44に記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- 前記プラスミドがネオマイシン耐性遺伝子をさらに含む、請求項45に記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- 前記プラスミドがpRNeoである、請求項46に記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- 前記統合されたプラスミドが、前記哺乳動物の体細胞および生殖細胞に見出される、請求項44に記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- 前記哺乳動物による組換えヒト成長ホルモンの産生が、該ホルモンを含む乳汁をより多く産生するように該哺乳動物を刺激する、請求項44に記載の非ヒトトランスジェニック哺乳動物。
- 非ヒトトランスジェニック哺乳動物を作製する方法であって、
a)成長ホルモンをコードする遺伝子を得る工程;
b)該遺伝子をプラスミドにクローニングし、それによって、該遺伝子が乳腺細胞において該遺伝子の発現を誘導するプロモーターに作動可能に連結され、発現プラスミドを得る工程;
c)該発現プラスミドが体細胞のゲノムに組み込まれるように、該体細胞を該発現プラスミドでトランスフェクトし、トランスジェニック体細胞を得る工程;
d)成熟卵母細胞を除核して、除核された卵母細胞を得る工程;
e)該トランスジェニック体細胞の1つを、該除核された卵母細胞と融合し、単細胞胚を得る工程;
f)該胚を受容性の哺乳動物の子宮に移植する工程;および
g)該トランスジェニック哺乳動物の出生を通じて妊娠をモニタリングする工程
を包含する、方法。 - 前記プロモーターがβカゼインプロモーターであり、前記成長ホルモンがヒト成長ホルモンである、請求項50に記載の方法。
- 前記発現プラスミドがpRβhGHである、請求項51に記載の方法。
- 前記発現プラスミドがネオマイシン耐性遺伝子をさら含む、請求項52に記載の方法。
- 前記発現プラスミドがpRNeoである、請求項53に記載の方法。
- 前記哺乳動物が、その乳汁中に組換えヒト成長ホルモンを産生するウシであり、そのゲノムは統合されたプラスミドを含み、該プラスミドは、該ヒト成長ホルモンの遺伝子と、該哺乳動物の乳腺細胞において該遺伝子の発現を誘導するβカゼインプロモーターとを含む、請求項50に記載の方法。
- 前記プラスミドがpRβhGHである、請求項55に記載の方法。
- 前記プラスミドがネオマイシン耐性遺伝子をさらに含む、請求項56に記載の方法。
- 前記プラスミドがpRNeoである、請求項57に記載の方法。
- 前記体細胞が線維芽細胞である、請求項50に記載の方法。
- 前記トランスジェニック体細胞が、その乳汁中に前記組換え成長ホルモンを産生するためのトランスジェニックである雌性からの単離によって得られる、請求項50に記載の方法。
- 前記トランスジェニック体細胞が線維芽細胞である、請求項60に記載の方法。
- 非ヒトトランスジェニック哺乳動物を作製する方法であって、
a)雌性の非ヒト哺乳動物を過排卵させる工程であって、該雌性の非ヒト哺乳動物は、その乳汁中に組換え成長ホルモンを産生するためのトランスジェニックである、工程;
b)該哺乳動物を、雄性の非ヒトかつ非トランスジェニックの哺乳動物から得られた精液と人工授精させて、胚を産生させる工程;
c)該胚を収集する工程;
d)該胚を受容性の哺乳動物の子宮に移植する工程;および
e)該トランスジェニック哺乳動物の出生を通じて妊娠をモニタリングする工程
を包含する、方法。 - 非ヒトトランスジェニック哺乳動物を作製する方法であって、
a)雌性の非ヒト哺乳動物を過排卵させる工程であって、該雌性の非ヒト哺乳動物は、その乳汁中に組換え成長ホルモンを産生するためのトランスジェニックである、工程;
b)該哺乳動物を、雄性の非ヒト哺乳動物から得られた精液と人工授精させて、胚を産生させる工程であって、該雄性の非ヒト哺乳動物は、該組換え成長ホルモンを産生するためのトランスジェニックである、工程;
c)該胚を収集する工程;
d)該胚を受容性の哺乳動物の子宮に移植する工程;および
e)該トランスジェニック哺乳動物の出生を通じて妊娠をモニタリングする工程
を包含する、方法。 - 非ヒトトランスジェニック哺乳動物を作製する方法であって、
a)雌性の非ヒトかつ非トランスジェニックの哺乳動物を過排卵させる工程;
b)該哺乳動物を、雄性の非ヒト哺乳動物から得られた精液と人工授精させて、胚を産生させる工程であって、該雄性の非ヒト哺乳動物は、組換え成長ホルモンを産生するためのトランスジェニックである、工程;
c)該胚を収集する工程;
d)該胚を受容性の哺乳動物の子宮に移植する工程;および
e)該トランスジェニック哺乳動物の出生を通じて妊娠をモニタリングする工程
を包含する、方法。 - 前記哺乳動物が、ウシ種、ブタ種、ヒツジ種、ヤギ種または齧歯動物の哺乳動物である、請求項50、60、62、63または64のいずれか1項に記載の方法。
- 前記哺乳動物がウシ種の哺乳動物である、請求項65に記載の方法。
- 前記成長ホルモンが哺乳類成長ホルモンである、請求項50、60、62、63または64のいずれか1項に記載の方法。
- 前記哺乳類成長ホルモンが、ヒト成長ホルモン、ウシ成長ホルモン、ブタ成長ホルモン、ヒツジ成長ホルモン、ヤギ成長ホルモンまたは齧歯動物成長ホルモンである、請求項67に記載の方法。
- 前記哺乳類成長ホルモンがヒト成長ホルモンである、請求項68に記載の方法。
- 前記哺乳動物が、乳汁1Lあたり約1.0g hGHより高いレベルでヒト成長ホルモンを産生する、請求項69に記載の方法。
- 前記哺乳動物が、乳汁1Lあたり約2.0g hGHより高いレベルでヒト成長ホルモンを産生する、請求項70に記載の方法。
- 前記哺乳動物が、乳汁1Lあたり約3.0g hGHより高いレベルでヒト成長ホルモンを産生する、請求項71に記載の方法。
- 前記哺乳動物が、乳汁1Lあたり約4.0g hGHより高いレベルでヒト成長ホルモンを産生する、請求項72に記載の方法。
- 前記哺乳動物が、乳汁1Lあたり約5.0g hGHより高いレベルでヒト成長ホルモンを産生する、請求項73に記載の方法。
- 前記哺乳動物が、乳汁1Lあたり約6.0g hGHより高いレベルでヒト成長ホルモンを産生する、請求項74に記載の方法。
- 前記哺乳動物による前記組換え成長ホルモンの産生が、該成長ホルモンを含む乳汁をより多く産生するように該哺乳動物を刺激する、請求項50、60、62、63または64のいずれか1項に記載の方法。
- 前記組換え成長ホルモンをコードし、乳腺細胞においてその遺伝子の発現を誘導するプロモーターに作動可能に連結される遺伝子が、該哺乳動物の体細胞および生殖細胞に見出される、請求項50、60、62、63または64のいずれか1項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US50673503P | 2003-09-30 | 2003-09-30 | |
US50673603P | 2003-09-30 | 2003-09-30 | |
US55602604P | 2004-03-25 | 2004-03-25 | |
US55602704P | 2004-03-25 | 2004-03-25 | |
PCT/US2004/032019 WO2005033281A2 (en) | 2003-09-30 | 2004-09-29 | A process of making transgenic mammals that produce exogenous proteins in milk and transgenic mammals produced thereby |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2007507232A true JP2007507232A (ja) | 2007-03-29 |
Family
ID=34427057
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2006534022A Pending JP2007507510A (ja) | 2003-09-30 | 2004-09-29 | トランスジェニック哺乳動物の乳汁中に外因性タンパク質を産生するためのプロセスおよびそれからタンパク質を精製するためのプロセス |
JP2006534064A Pending JP2007507232A (ja) | 2003-09-30 | 2004-09-29 | 乳汁中に外因性タンパク質を産生するトランスジェニック哺乳動物を作製するプロセスおよびそれによって産生されるトランスジェニック哺乳動物 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2006534022A Pending JP2007507510A (ja) | 2003-09-30 | 2004-09-29 | トランスジェニック哺乳動物の乳汁中に外因性タンパク質を産生するためのプロセスおよびそれからタンパク質を精製するためのプロセス |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (5) | US7718845B2 (ja) |
EP (2) | EP1685245A4 (ja) |
JP (2) | JP2007507510A (ja) |
AR (2) | AR047720A1 (ja) |
AU (2) | AU2004278747B2 (ja) |
BR (2) | BRPI0415146A (ja) |
CA (2) | CA2540667A1 (ja) |
MX (1) | MXPA06003553A (ja) |
WO (2) | WO2005033274A2 (ja) |
Families Citing this family (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2540667A1 (en) * | 2003-09-30 | 2005-04-14 | Sterrenbeld Biotechnologie North America, Inc. | A process for producing exogenous protein in the milk of trangenic mammals and a process for purifying proteins therefrom |
WO2006057466A1 (en) * | 2004-11-23 | 2006-06-01 | Korea Research Institute Of Bioscience And Biotechnology | Beta-casein gene targeting vector using homologous recombination |
GB2438760A (en) * | 2004-12-22 | 2007-12-05 | Ambrx Inc | Methods for expression and purification of recombinant human growth hormone |
US20070067842A1 (en) * | 2005-08-08 | 2007-03-22 | Greene Michael P | Systems and methods for collecting files related to malware |
US8383125B2 (en) | 2006-03-23 | 2013-02-26 | Agriculture Victoria Services Pty, Limited | Antimicrobial protein |
CN1970750B (zh) * | 2006-12-11 | 2010-10-13 | 中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所 | 一种利用抗菌肽培育具有抗乳房炎病奶牛重构胚的方法 |
RU2010100911A (ru) * | 2007-06-13 | 2011-07-20 | Стэрнбэлт Байэутекнолэджай Нос Эмерикэ, Инк. (US) | Плазмида, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую модифицированный предшественник инсулина, и способ ее трансфекции в клетки млекопитающего, трансгенное млекопитающее, продуцирующее указанный предшественник, и способ его получения |
EP2242478A2 (en) * | 2008-01-02 | 2010-10-27 | Kringle Pharma Inc. | Topical compositions for delivery of proteins and peptides |
WO2009111838A1 (en) * | 2008-03-13 | 2009-09-17 | Agriculture Victoria Services Pty Limited | Method of treatment using antimicrobial composition |
US9238878B2 (en) | 2009-02-17 | 2016-01-19 | Redwood Bioscience, Inc. | Aldehyde-tagged protein-based drug carriers and methods of use |
AU2012205301B2 (en) | 2011-01-14 | 2017-01-05 | Redwood Bioscience, Inc. | Aldehyde-tagged immunoglobulin polypeptides and method of use thereof |
JP2012210199A (ja) * | 2011-03-31 | 2012-11-01 | National Agriculture & Food Research Organization | 体外発育卵母細胞をレシピエント卵子とするクローン動物個体の作成法 |
CN102628045A (zh) * | 2012-04-09 | 2012-08-08 | 西北农林科技大学 | 一种干扰BVDV复制的shRNA表达载体及构建的重组细胞 |
KR101504824B1 (ko) | 2013-05-31 | 2015-03-23 | 씨제이헬스케어 주식회사 | 고당화된 지속형 인간 성장호르몬 단백질 및 이의 제조방법 |
WO2013183948A1 (ko) * | 2012-06-05 | 2013-12-12 | 씨제이제일제당 (주) | 고당화된 지속형 인간 성장호르몬 단백질 및 이의 제조방법 |
FR3025515B1 (fr) | 2014-09-05 | 2016-09-09 | Lab Francais Du Fractionnement | Procede de purification d'un anticorps monoclonal |
FR3034420A1 (fr) | 2015-03-31 | 2016-10-07 | Lab Francais Du Fractionnement | Anticorps monoclonaux anti-cd303 |
CN109071634A (zh) | 2016-04-26 | 2018-12-21 | R.P.谢勒技术有限责任公司 | 抗体偶联物及其制备和使用方法 |
FR3060394B1 (fr) | 2016-12-16 | 2019-05-24 | Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies | Combinaison d'anticorps anti-cd303 et anti-amhrii |
FR3060395B1 (fr) | 2016-12-16 | 2019-05-24 | Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies | Combinaison d'anticorps anti-cd303 et anti-her2 |
FR3076294B1 (fr) | 2017-12-29 | 2022-01-28 | Lab Francais Du Fractionnement | Procede de purification d'anticorps a partir de lait brut |
CA3223956A1 (en) | 2021-12-20 | 2023-06-29 | Vetoquinol Sa | Anti-canine interleukine-31-receptor a (il-31ra) antibodies and the uses thereof |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2002086103A1 (en) * | 2001-04-20 | 2002-10-31 | Monash University | A method of nuclear transfer |
WO2003055302A1 (en) * | 2001-12-21 | 2003-07-10 | The Curators Of The University Of Missouri | Knockout swine and methods for making the same |
Family Cites Families (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4371462A (en) * | 1982-01-21 | 1983-02-01 | Genex Corporation | Method for purification of anterior pituitary hormones |
JPH04506751A (ja) | 1989-09-11 | 1992-11-26 | ティー エスアイ コーポレーション | 遺伝子導入動物の乳汁中での成長ホルモンの生産 |
US5633076A (en) * | 1989-12-01 | 1997-05-27 | Pharming Bv | Method of producing a transgenic bovine or transgenic bovine embryo |
US5160312A (en) * | 1990-02-09 | 1992-11-03 | W. R. Grace & Co.-Conn. | Cryopreservation process for direct transfer of embryos |
US5827690A (en) | 1993-12-20 | 1998-10-27 | Genzyme Transgenics Corporatiion | Transgenic production of antibodies in milk |
US6011197A (en) * | 1997-03-06 | 2000-01-04 | Infigen, Inc. | Method of cloning bovines using reprogrammed non-embryonic bovine cells |
AU702218B2 (en) * | 1997-03-31 | 1999-02-18 | Kyushu-Taiyoukasei., Ltd. | Liner film for bulk container and container liner |
US6451527B1 (en) * | 1997-08-29 | 2002-09-17 | Selective Genetics, Inc. | Methods using genetic package display for selecting internalizing ligands for gene delivery |
CA2259368C (en) * | 1998-01-16 | 2010-10-05 | Agrobiogen Gmbh | Efficient nucleus transfer with foetal fibroblasts |
GB9807464D0 (en) | 1998-04-07 | 1998-06-10 | Pharming Bv | Purification of human acid µ-glucosidase |
US20030005468A1 (en) * | 1998-06-19 | 2003-01-02 | Meade Harry M. | Methods and vectors for improving nucleic acid expression |
EP1090132A1 (en) * | 1998-06-26 | 2001-04-11 | PPL Therapeutics (Scotland) Limited | Methods for production of recombinant polypeptides |
JP2001197846A (ja) * | 2000-01-18 | 2001-07-24 | Ys New Technology Kenkyusho:Kk | 免疫寛容動物の作製方法 |
MXPA03004313A (es) * | 2000-11-17 | 2007-02-27 | Hematech Llc | Expresion de inmunoglobulinas xenogenas (humanas) en ungulados transgenicos, clonados. |
US7105314B2 (en) * | 2001-04-02 | 2006-09-12 | Novo Nordisk A/S | Method for making human insulin precursors |
CA2540667A1 (en) * | 2003-09-30 | 2005-04-14 | Sterrenbeld Biotechnologie North America, Inc. | A process for producing exogenous protein in the milk of trangenic mammals and a process for purifying proteins therefrom |
-
2004
- 2004-09-29 CA CA002540667A patent/CA2540667A1/en not_active Abandoned
- 2004-09-29 WO PCT/US2004/031819 patent/WO2005033274A2/en active Application Filing
- 2004-09-29 AR ARP040103538A patent/AR047720A1/es unknown
- 2004-09-29 US US10/952,377 patent/US7718845B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2004-09-29 EP EP04789272A patent/EP1685245A4/en not_active Withdrawn
- 2004-09-29 MX MXPA06003553A patent/MXPA06003553A/es active IP Right Grant
- 2004-09-29 BR BRPI0415146-1A patent/BRPI0415146A/pt not_active IP Right Cessation
- 2004-09-29 AR ARP040103539A patent/AR047721A1/es active IP Right Grant
- 2004-09-29 JP JP2006534022A patent/JP2007507510A/ja active Pending
- 2004-09-29 JP JP2006534064A patent/JP2007507232A/ja active Pending
- 2004-09-29 WO PCT/US2004/032019 patent/WO2005033281A2/en active Application Filing
- 2004-09-29 US US10/952,376 patent/US7807862B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2004-09-29 BR BRPI0415147-0A patent/BRPI0415147A/pt not_active Application Discontinuation
- 2004-09-29 AU AU2004278747A patent/AU2004278747B2/en not_active Ceased
- 2004-09-29 AU AU2004278763A patent/AU2004278763A1/en not_active Abandoned
- 2004-09-29 CA CA002540854A patent/CA2540854A1/en not_active Abandoned
- 2004-09-29 EP EP04789169.2A patent/EP1687421B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2007
- 2007-07-11 US US11/822,985 patent/US20080060089A1/en not_active Abandoned
- 2007-07-11 US US11/822,984 patent/US20080229438A1/en not_active Abandoned
-
2010
- 2010-05-17 US US12/781,500 patent/US20110072526A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2002086103A1 (en) * | 2001-04-20 | 2002-10-31 | Monash University | A method of nuclear transfer |
WO2003055302A1 (en) * | 2001-12-21 | 2003-07-10 | The Curators Of The University Of Missouri | Knockout swine and methods for making the same |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP1685245A2 (en) | 2006-08-02 |
BRPI0415147A (pt) | 2006-11-28 |
US20050177878A1 (en) | 2005-08-11 |
AR047720A1 (es) | 2006-02-15 |
WO2005033274A3 (en) | 2005-07-14 |
AU2004278747A1 (en) | 2005-04-14 |
CA2540667A1 (en) | 2005-04-14 |
WO2005033281A2 (en) | 2005-04-14 |
JP2007507510A (ja) | 2007-03-29 |
US20080229438A1 (en) | 2008-09-18 |
AU2004278763A1 (en) | 2005-04-14 |
US20110072526A1 (en) | 2011-03-24 |
US7807862B2 (en) | 2010-10-05 |
US7718845B2 (en) | 2010-05-18 |
AU2004278747B2 (en) | 2011-04-28 |
US20050177879A1 (en) | 2005-08-11 |
EP1687421A4 (en) | 2006-12-20 |
BRPI0415146A (pt) | 2006-11-28 |
EP1687421A2 (en) | 2006-08-09 |
US20080060089A1 (en) | 2008-03-06 |
WO2005033274A2 (en) | 2005-04-14 |
CA2540854A1 (en) | 2005-04-14 |
EP1685245A4 (en) | 2007-01-03 |
MXPA06003553A (es) | 2007-02-02 |
EP1687421B1 (en) | 2018-06-27 |
AR047721A1 (es) | 2006-02-15 |
WO2005033281A3 (en) | 2005-05-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20080060089A1 (en) | Process for producing exogenous protein in the milk of transgenic mammals and a process for purifying proteins therefrom | |
JPH01500162A (ja) | ペプチドの産生方法 | |
EP0871357B1 (en) | Method for development of transgenic goats | |
EP0972017B1 (de) | Effizienter kerntransfer mit fetalen fibroblasten | |
US20040025193A1 (en) | Method for the rapid selection of homozygous primary cell lines for the production of transgenic animals by somatic cell nuclear transfer | |
JP2010528677A (ja) | 乳中に外因性タンパク質を産生するトランスジェニック哺乳動物 | |
CN111073900B (zh) | 一种提高猪克隆胚胎发育效率的方法 | |
RU2390562C2 (ru) | Способ получения трансгенных млекопитающих, которые продуцируют экзогенные белки в молоке, и трансгенные млекопитающие, полученные таким способом | |
JP2007505604A (ja) | トランスジェニック動物の乳汁におけるドミナントネガティブ膜貫通型レセプターの発現 | |
Lee et al. | Integration and Expression of Goat ${\beta}-Casein/hGH $ Hybrid Gene in a Transgenic Goat | |
Park et al. | Production of transgenic recloned piglets harboring the human granulocyte-macrophage colony stimulating factor (hGM-CSF) gene from porcine fetal fibroblasts by nuclear transfer | |
CN101413003A (zh) | 在转基因哺乳动物的奶中生产外源蛋白的方法以及从其中纯化蛋白的方法 | |
MXPA06003480A (en) | A process of making transgenic mammals that produce exogenous proteins in milk and transgenic mammals produced thereby | |
DEYKIN et al. | RESEARCH RESULTS IN PHARMACOLOGY | |
KR20110117841A (ko) | Pepck 과발현 형질전환 복제 개과 동물 및 이의 생산방법 | |
JP2005525098A (ja) | ウサギの核クローニング方法並びにその用法 | |
Michalska | Production and characterization of transgenic mice and pigs carrying the porcine growth hormone gene | |
JP2005512568A (ja) | 精嚢組織特異的プロモーター及びその利用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20070928 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100816 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20101115 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20101122 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20101215 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20101222 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20110114 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20110121 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20110408 |