JP2007187451A - 核酸固定用成形体および核酸固定化方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】プラスチック基材の表面に、少なくとも親水性高分子樹脂による親水性コート層を積層してなる核酸固定用成形体であって、前記基材の中心線表面平均粗さRaが0.10μm以上であり、前記親水性コート層の厚さが、前記基材の中心線平均表面粗さRaの5%以上90%以下であることを特徴とする核酸固定用成形体による。また、核酸固定用成形体に核酸プローブ含有水溶液を滴下し、乾燥させることによる。
Description
核酸マイクロアレイとは複数の遺伝子を同時に解析できる技術であり、塩基配列決定法のみではなく、遺伝子の発現量や多型などを効率よく調べる方法として開発され、テーラーメイド医療、菌類などの生物学的分類の特定および疾病の診断などへの応用が展開されている。
1.プラスチック基材の表面に、少なくとも親水性高分子樹脂による親水性コート層を積層してなる核酸固定用成形体であって、前記基材の中心線表面平均粗さRaが100nm以上1000nm以下であり、前記親水性コート層の厚さが、前記基材の中心線平均表面粗さRaの5%以上90%以下であることを特徴とする、核酸固定用成形体。
2.前記親水性コート層の接触角が、0°以上60°以下である、前項1に記載の核酸固定用成形体。
3.前記プラスチックが、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリプロピレン、ポリアミド、およびアクリル系樹脂から選択される何れかである、前項1または2に記載の核酸固定用成形体。
4.前記親水性高分子樹脂が、シロキサン系樹脂、ポリビニルアルコール、エチレンビニルアルコール、ポリ酢酸ビニル、ポリエチレングリコール、ポリエステル系樹脂、アクリル系樹脂、およびメラニン系樹脂から選択される1種または複数を主成分とするものである、前項1〜3の何れか1項に記載の核酸固定用成形体。
5.前項1〜4の何れか1項に記載の核酸固定用成形体に対して、核酸プローブを含有する核酸プローブ含有水溶液を滴下し、乾燥させることを特徴とする、核酸固定用成形体への核酸プローブ固定化方法。
6.前記核酸プローブにポリチミンが予め付加されることを特徴とする、前項5に記載の核酸プローブ固定化方法。
7.前記乾燥時に、紫外線を照射することを特徴とする、前項5または6に記載の核酸プローブ固定化方法。
天然親水性高分子物質として、カルボキシメチルデンプン、ジアルデヒドデンプンなどのデンプン系;カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースなどのセルロース系;タンニン、リグニン系、アルギン酸、アラビアゴムヘパリン、キチン、キトサンなどの多糖類などを例示することができる。
表面平均粗さが0.19μmを示す白色ポリエチレンテレフタレートフイルム(東レ(株)ルミラーE20)を基材(以下「基材A」と記する。尚、以降に示す成形体は全て押出成形法により製造された物であることを予め断っておく。)として使用し、前記フィルムの片側に、グラビアコーターにより親水性高分子樹脂(松下電工(株)製フレッセラR)を固形分濃度を0.1%までイソプロピルアルコールにて希釈して塗工厚みが0.1μm(平均表面粗さの約53%)になるように塗工を行い、親水性コート層を積層することにより、本発明に係る核酸固定用成形体を得た。また親水性コート層面側の純水接触角を測定したところ18°を示した。
基材として表面粗さが0.13μm白色ポリエチレンテレフタレートフイルム(東洋紡績(株)クリスパーK1211)を使用した以外は実施例1と同様にして親水性コート層を有する本願発明に係る核酸固定用成形体を得た。また親水性コート層側の純水接触角を測定したところ、19°を示した。
親水性コート層を形成する親水性高分子樹脂として、ポリビニルアルコール(日本合成化学 ゴーセファイマーZ100)に コロイダルシリカ 粒径 20nmを1%添加したものを用いた。これを塗工し乾燥した後に純水接触角が60°以下になるように調整した上で、0.1μm厚みの塗工を施した以外は、実施例1と同様にして基材Aに親水性コート層を有する構成を備えた核酸固定用成形体を得た。また親水性コート層面側の純水接触角を測定したところ、18°を示した。
実施例1で得た核酸固定用成形体に対し、さらに親水性コート層の表面に対して酸素プラズマ処理を行い、核酸固定用成形体を得た。また親水性コート層面側の純水接触角を測定したところ、12°を示した。
基材Aに対し、親水性コート層の厚みが約0.3μm(平均表面粗さの約150%)とした以外は実施例1と同様にして作製し、核酸固定用成形体を得た。
プラスチック層として表面平均粗さが0.07μmの平滑なポリエチレンテレフタレートフイルム(東洋紡A4100)を使用し、その上にグラビアコーターで親水性コート層(実施例1、2に同じ)を0.1μm塗布し核酸固定用成形体を得た。
基材Aに親水性コーティングを行わずに、基材Aをそのまま核酸固定用成形体とした。
基材Aに親水性コーティングを行わず、直接、酸素プラズマ処理したものを核酸固定用成形体とした。
実施例1〜4と、比較例1〜4の核酸固定用成形体に核酸プローブを固定化し、その検出を目視で判定することにより核酸の固定化が良好に行われたかどうかを検討した。
核酸プローブとしては、配列番号1に示される核酸プローブ(シグマジェノシスジャパン社提供)を用いた。配列表の配列番号1の核酸プローブは、第1エクソンと第2エクソンの間のイントロン領域内に存在するエストロゲン受容体対立遺伝子(Xba I多型)のうち、制限酵素Xba Iにより切断されない配列(x型)を検出することができるものである。この核酸プローブに5’末端をターミナルトランスフェラーゼ(New England Biolab社製)を用いて、ポリチミンの付加を行った。具体的には、ターミナル・トランスフェラーゼ(20unit/μl)を4μl、チミジン三リン酸(10pmol/μl)を10μl、配列番号1の核酸プローブ(50mM)を4μl、製品添付のNEBuffer 4を5μl、および製品添付のカコジル酸緩衝液を5μl含んだ精製水50μlを調製した後、37℃で4時間反応させ、製品添付の20×SSC緩衝液50μlを加えることで、ポリチミン付加された核酸プローブ(約300bp)2pmol/μlをそれぞれ得た。
次に、ポリチミン付加された配列番号1の核酸プローブを1.0pmol/μlとなるように、製品添付の10×SSC緩衝液で希釈し、実施例1〜4と、比較例1〜4の核酸固定用成形体にそれぞれ0.5μLずつ塗布し、312nmの紫外線を2分間照射して固定化することで、核酸マイクロアレイを製造した。
xx型の検体のゲノムDNAを配列番号2に示した塩基配列を有するフォワードプライマーおよび3に示した塩基配列を有し、かつ5’末端にビオチンを結合させたリバースプライマー、およびTaq DNAポリメラーゼ(ロシュ・ダイアグノスティクス社製)を用いたPCR法によりXba I多型を含む塩基配列の増幅を行った。PCRの反応条件は、変性過程を94℃、30秒、アニール過程を55℃、20秒、鎖伸長過程を72℃、20秒とし、この工程を30サイクルおこない増幅を行った。
配列番号3:cctgcaccag aatatgttac c 21
増幅したDNA溶液20μLに、水酸化ナトリウム(5M)、エチレンジアミン四酢酸(0.05M)の溶液(20μL)を加えてよく攪拌し、5分間放置して、増幅したDNAを1本鎖に変性した。この試料溶液中に、ドデシル硫酸ナトリウム(0.01w/v%)、塩化ナトリウム(1.8w/v%)、クエン酸ナトリウム(1.0w/v%)の溶液(1mL)および上記核酸マイクロアレイをそれぞれ加え、反応温度45℃のもとで30分間振とうして反応させた。その後、アルカリホスファターゼ標識ストレプトアビジンを加え、さらにニトロブルーテトラゾリウム(NBT)および5−ブロモ−4−クロロ−3−インドリルホスファターゼ p−トルイジニル塩(BCIP)を加えて、検出ストリップ上の各プローブと結合した試料に結合したアルカリホスファターゼを発色させた。
Claims (7)
- プラスチック基材の表面に、少なくとも親水性高分子樹脂による親水性コート層を積層してなる核酸固定用成形体であって、前記基材の中心線表面平均粗さRaが100nm以上1000nm以下であり、前記親水性コート層の厚さが、前記基材の中心線平均表面粗さRaの5%以上90%以下であることを特徴とする、核酸固定用成形体。
- 前記親水性コート層の接触角が、0°以上60°以下である、請求項1に記載の核酸固定用成形体。
- 前記プラスチックが、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリプロピレン、ポリアミド、およびアクリル系樹脂から選択される何れかである、請求項1または2に記載の核酸固定用成形体。
- 前記親水性高分子樹脂が、シロキサン系樹脂、ポリビニルアルコール、エチレンビニルアルコール、ポリ酢酸ビニル、ポリエチレングリコール、ポリエステル系樹脂、アクリル系樹脂、およびメラニン系樹脂から選択される1種または複数を主成分とするものである、請求項1〜3の何れか1項に記載の核酸固定用成形体。
- 請求項1〜4の何れか1項に記載の核酸固定用成形体に対して、核酸プローブを含有する核酸プローブ含有水溶液を滴下し、乾燥させることを特徴とする、核酸固定用成形体への核酸プローブ固定化方法。
- 前記核酸プローブにポリチミンが予め付加されることを特徴とする、請求項5に記載の核酸プローブ固定化方法。
- 前記乾燥時に、紫外線を照射することを特徴とする、請求項5または6に記載の核酸プローブ固定化方法。
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JP2012504412A (ja) * | 2008-10-01 | 2012-02-23 | コーニンクレッカ フィリップス エレクトロニクス エヌ ヴィ | 支持体上の核酸の検査及び品質管理方法 |
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Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002214232A (ja) * | 2001-01-12 | 2002-07-31 | Toray Ind Inc | 選択結合性物質固定化フィルム及びそれを用いた被検物質の測定方法 |
JP2003009860A (ja) * | 2001-06-27 | 2003-01-14 | Fuji Photo Film Co Ltd | 区画培養基板及びそれを用いたdnaチップ |
JP2003121442A (ja) * | 2001-10-17 | 2003-04-23 | Osaka Gas Co Ltd | バイオチップ用基板およびバイオチップ |
JP2003139705A (ja) * | 2001-10-30 | 2003-05-14 | Sumitomo Bakelite Co Ltd | マイクロチップ用基板 |
JP2003329678A (ja) * | 2002-05-08 | 2003-11-19 | Kyocera Corp | 生化学的検査用の検査基板および固相担体 |
JP2005534942A (ja) * | 2002-08-08 | 2005-11-17 | シーメンス アクチエンゲゼルシヤフト | バイオセンサーテクノロジーのためのポリアクリルアミドをベースとするヒドロゲルからなる認識層 |
JP2005333882A (ja) * | 2004-05-27 | 2005-12-08 | Nipro Corp | 核酸検出装置 |
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2006
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Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002214232A (ja) * | 2001-01-12 | 2002-07-31 | Toray Ind Inc | 選択結合性物質固定化フィルム及びそれを用いた被検物質の測定方法 |
JP2003009860A (ja) * | 2001-06-27 | 2003-01-14 | Fuji Photo Film Co Ltd | 区画培養基板及びそれを用いたdnaチップ |
JP2003121442A (ja) * | 2001-10-17 | 2003-04-23 | Osaka Gas Co Ltd | バイオチップ用基板およびバイオチップ |
JP2003139705A (ja) * | 2001-10-30 | 2003-05-14 | Sumitomo Bakelite Co Ltd | マイクロチップ用基板 |
JP2003329678A (ja) * | 2002-05-08 | 2003-11-19 | Kyocera Corp | 生化学的検査用の検査基板および固相担体 |
JP2005534942A (ja) * | 2002-08-08 | 2005-11-17 | シーメンス アクチエンゲゼルシヤフト | バイオセンサーテクノロジーのためのポリアクリルアミドをベースとするヒドロゲルからなる認識層 |
JP2005333882A (ja) * | 2004-05-27 | 2005-12-08 | Nipro Corp | 核酸検出装置 |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009092592A (ja) * | 2007-10-11 | 2009-04-30 | Toyobo Co Ltd | 核酸固定用基材、核酸固定用基材の製造方法、核酸検査用デバイス、核酸検査用デバイスの製造方法、並びに核酸検査方法 |
JP2012504412A (ja) * | 2008-10-01 | 2012-02-23 | コーニンクレッカ フィリップス エレクトロニクス エヌ ヴィ | 支持体上の核酸の検査及び品質管理方法 |
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JP2015519882A (ja) * | 2012-04-09 | 2015-07-16 | エーピーディーエヌ (ビー.ブイ.アイ.) インコーポレイテッド | Dna結合のためのプラズマ処理 |
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