JP2006519583A5 - - Google Patents
Download PDFInfo
- Publication number
- JP2006519583A5 JP2006519583A5 JP2004546306A JP2004546306A JP2006519583A5 JP 2006519583 A5 JP2006519583 A5 JP 2006519583A5 JP 2004546306 A JP2004546306 A JP 2004546306A JP 2004546306 A JP2004546306 A JP 2004546306A JP 2006519583 A5 JP2006519583 A5 JP 2006519583A5
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- antibody
- fragment
- gdf
- amino acids
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 claims description 232
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 claims description 232
- 102100019916 MSTN Human genes 0.000 claims description 201
- 108010056852 Myostatin Proteins 0.000 claims description 201
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 94
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 73
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 62
- 102100003272 GDF11 Human genes 0.000 claims description 45
- 101700065866 GDF11 Proteins 0.000 claims description 45
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 44
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 43
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 claims description 43
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 claims description 43
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 43
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 40
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 40
- 210000003205 Muscles Anatomy 0.000 claims description 35
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 34
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 32
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 27
- 101710024843 ACVR2B Proteins 0.000 claims description 22
- 230000001965 increased Effects 0.000 claims description 20
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 18
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 14
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 13
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 12
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 claims description 12
- 210000000988 Bone and Bones Anatomy 0.000 claims description 11
- 208000001072 Type 2 Diabetes Mellitus Diseases 0.000 claims description 10
- 206010022489 Insulin resistance Diseases 0.000 claims description 9
- 201000000585 muscular atrophy Diseases 0.000 claims description 8
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 7
- 229920001850 Nucleic acid sequence Polymers 0.000 claims description 7
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 7
- 201000010874 syndrome Diseases 0.000 claims description 7
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 claims description 7
- 210000000577 Adipose Tissue Anatomy 0.000 claims description 6
- 208000002705 Glucose Intolerance Diseases 0.000 claims description 6
- 206010028289 Muscle atrophy Diseases 0.000 claims description 6
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 claims description 6
- 206010007867 Tissue disorder Diseases 0.000 claims description 6
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 claims description 5
- 206010022114 Injury Diseases 0.000 claims description 5
- 208000003627 Muscular Dystrophy Diseases 0.000 claims description 5
- 201000006938 muscular dystrophy Diseases 0.000 claims description 5
- 206010013801 Duchenne muscular dystrophy Diseases 0.000 claims description 4
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 4
- 206010028302 Muscle disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000006883 Neuromuscular Disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000004361 Obstructive Lung Disease Diseases 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- 201000010770 muscular disease Diseases 0.000 claims description 4
- 206010006895 Cachexia Diseases 0.000 claims description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N D-Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 3
- 108009000020 Glucose Homeostasis Proteins 0.000 claims description 3
- 208000001076 Sarcopenia Diseases 0.000 claims description 3
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 claims description 3
- 230000003412 degenerative Effects 0.000 claims description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 3
- 230000014101 glucose homeostasis Effects 0.000 claims description 3
- 206010002026 Amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 claims description 2
- 210000004165 Myocardium Anatomy 0.000 claims description 2
- 208000003295 Carpal Tunnel Syndrome Diseases 0.000 claims 2
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 claims 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims 2
- 230000000069 prophylaxis Effects 0.000 claims 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N D-serine Chemical compound OC[C@@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N 0.000 claims 1
- 229960000310 ISOLEUCINE Drugs 0.000 claims 1
- 108090001122 Immunoglobulin A Proteins 0.000 claims 1
- 229940099472 Immunoglobulin A Drugs 0.000 claims 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims 1
- 206010028315 Muscle injury Diseases 0.000 claims 1
- 201000002773 amyotrophic lateral sclerosis type 13 Diseases 0.000 claims 1
- 230000020763 muscle atrophy Effects 0.000 claims 1
- 230000002107 myocardial Effects 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 58
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 39
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 37
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 31
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 31
- 108090001095 Immunoglobulin G Proteins 0.000 description 21
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 21
- 102100002977 CDR1 Human genes 0.000 description 18
- 101700073818 CDR1 Proteins 0.000 description 18
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 18
- 101710038213 AKR1C4 Proteins 0.000 description 17
- 101710034060 RUNX1T1 Proteins 0.000 description 17
- 108010059616 Activins Proteins 0.000 description 14
- 102100008240 INHBE Human genes 0.000 description 14
- 239000000488 activin Substances 0.000 description 14
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 14
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 13
- 210000002027 Muscle, Skeletal Anatomy 0.000 description 12
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 12
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 12
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 12
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 102100017875 S100A8 Human genes 0.000 description 11
- 101710023380 S100A8 Proteins 0.000 description 11
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 10
- 102000018358 Immunoglobulins Human genes 0.000 description 10
- 108060003951 Immunoglobulins Proteins 0.000 description 10
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N Tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 10
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 101710040922 Os08g0547100 Proteins 0.000 description 9
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 9
- 238000003571 reporter gene assay Methods 0.000 description 9
- 230000003442 weekly Effects 0.000 description 9
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000037182 bone density Effects 0.000 description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 8
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 8
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M buffer Substances [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 7
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 7
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 239000003636 conditioned culture media Substances 0.000 description 6
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 description 6
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 6
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 230000002194 synthesizing Effects 0.000 description 6
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 5
- 210000003314 Quadriceps Muscle Anatomy 0.000 description 5
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 5
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 5
- 230000003899 glycosylation Effects 0.000 description 5
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 5
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 5
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 5
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 5
- OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N precursor Substances N#CC(C)(C)N=NC(C)(C)C#N OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 5
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 1,2-dihydrobenzotriazol-4-one Chemical compound O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 1-[(1S,2R,3R,4S,5R,6R)-3-carbamimidamido-6-{[(2R,3R,4R,5S)-3-{[(2S,3S,4S,5R,6S)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-3-(methylamino)oxan-2-yl]oxy}-4-formyl-4-hydroxy-5-methyloxolan-2-yl]oxy}-2,4,5-trihydroxycyclohexyl]guanidine Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 229920001405 Coding region Polymers 0.000 description 4
- 210000003194 Forelimb Anatomy 0.000 description 4
- 229940072221 IMMUNOGLOBULINS Drugs 0.000 description 4
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 4
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 4
- 208000008466 Metabolic Disease Diseases 0.000 description 4
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 description 4
- 206010027425 Metabolic bone disease Diseases 0.000 description 4
- 241000283898 Ovis Species 0.000 description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 4
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 4
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 230000001808 coupling Effects 0.000 description 4
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 4
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 4
- 230000001809 detectable Effects 0.000 description 4
- -1 for example Polymers 0.000 description 4
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 4
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L sodium carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 4
- 229920000160 (ribonucleotides)n+m Polymers 0.000 description 3
- 210000004900 C-terminal fragment Anatomy 0.000 description 3
- 102000004420 EC 2.7.3.2 Human genes 0.000 description 3
- 108010042126 EC 2.7.3.2 Proteins 0.000 description 3
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 3
- 108060001084 Luciferase family Proteins 0.000 description 3
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 3
- 229920000272 Oligonucleotide Polymers 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 3
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 description 3
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial Effects 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 3
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000037240 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 3
- 239000012133 immunoprecipitate Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000002609 media Substances 0.000 description 3
- 230000001404 mediated Effects 0.000 description 3
- 108010045030 monoclonal antibodies Proteins 0.000 description 3
- 102000005614 monoclonal antibodies Human genes 0.000 description 3
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 3
- 230000036231 pharmacokinetics Effects 0.000 description 3
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 3
- 230000002829 reduced Effects 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory Effects 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N β-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- 102100001249 ALB Human genes 0.000 description 2
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 2
- 210000003719 B-Lymphocytes Anatomy 0.000 description 2
- 102000007350 Bone Morphogenetic Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010007726 Bone Morphogenetic Proteins Proteins 0.000 description 2
- 206010065687 Bone loss Diseases 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 229940098773 Bovine Serum Albumin Drugs 0.000 description 2
- 108091003117 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 230000037250 Clearance Effects 0.000 description 2
- 206010061428 Decreased appetite Diseases 0.000 description 2
- 210000002351 Embryonic Muscle Cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940088598 Enzyme Drugs 0.000 description 2
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 229960002743 Glutamine Drugs 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N HCl Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 206010060378 Hyperinsulinaemia Diseases 0.000 description 2
- 206010058359 Hypogonadism Diseases 0.000 description 2
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N Imidazole Chemical compound C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 102400000401 Latency-associated peptide Human genes 0.000 description 2
- 208000002720 Malnutrition Diseases 0.000 description 2
- 229960004452 Methionine Drugs 0.000 description 2
- OSWPMRLSEDHDFF-UHFFFAOYSA-N Methyl salicylate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1O OSWPMRLSEDHDFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N Methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N N,N'-Diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010053643 Neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 2
- 229940049954 Penicillin Drugs 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 241001272996 Polyphylla fullo Species 0.000 description 2
- 208000005770 Secondary Hyperparathyroidism Diseases 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 230000037165 Serum Concentration Effects 0.000 description 2
- 229960005322 Streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 2
- 230000037034 TERMINAL HALF LIFE Effects 0.000 description 2
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Tris Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Vitamin C Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 206010047626 Vitamin D deficiency Diseases 0.000 description 2
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000001058 adult Effects 0.000 description 2
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 2
- 229960000070 antineoplastic Monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 2
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 2
- 229960000626 benzylpenicillin Drugs 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 2
- 230000001413 cellular Effects 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 230000001684 chronic Effects 0.000 description 2
- 230000035512 clearance Effects 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement Effects 0.000 description 2
- 230000002354 daily Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 201000010870 diseases of metabolism Diseases 0.000 description 2
- 239000002612 dispersion media Substances 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 2
- 230000004190 glucose uptake Effects 0.000 description 2
- 230000002641 glycemic Effects 0.000 description 2
- 230000003451 hyperinsulinaemic Effects 0.000 description 2
- 201000008980 hyperinsulinism Diseases 0.000 description 2
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 2
- 230000000366 juvenile Effects 0.000 description 2
- 230000000670 limiting Effects 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000001071 malnutrition Effects 0.000 description 2
- 235000000824 malnutrition Nutrition 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cells Anatomy 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 230000000051 modifying Effects 0.000 description 2
- 229960000060 monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 2
- 230000000921 morphogenic Effects 0.000 description 2
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 210000003098 myoblast Anatomy 0.000 description 2
- 230000010807 negative regulation of binding Effects 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing Effects 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 2
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutic aid Substances 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 2
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 2
- 108091008117 polyclonal antibodies Proteins 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 210000000229 preadipocyte Anatomy 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 239000001187 sodium carbonate Substances 0.000 description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 2
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 2
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N β-Alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JLPULHDHAOZNQI-ZTIMHPMXSA-N 1-hexadecanoyl-2-(9Z,12Z-octadecadienoyl)-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC JLPULHDHAOZNQI-ZTIMHPMXSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-UMZBRFQRSA-N 4-[(3R,5S,7R,12S)-3,7,12-trihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]pentanoic acid Chemical class C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CCC1(C)C1C2C2CCC(C(CCC(O)=O)C)C2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-UMZBRFQRSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-N,N-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710027066 ALB Proteins 0.000 description 1
- 230000035816 APPARENT DISTRIBUTION VOLUME Effects 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- XJKJWTWGDGIQRH-BFIDDRIFSA-N Alginic acid Chemical compound O1[C@@H](C(O)=O)[C@@H](OC)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](C)[C@@H](O)[C@H]1O XJKJWTWGDGIQRH-BFIDDRIFSA-N 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108009000433 Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) Proteins 0.000 description 1
- 229940064005 Antibiotic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- 229940083879 Antibiotics FOR TREATMENT OF HEMORRHOIDS AND ANAL FISSURES FOR TOPICAL USE Drugs 0.000 description 1
- 229940042052 Antibiotics for systemic use Drugs 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 description 1
- 229940042786 Antitubercular Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 229940093761 Bile Salts Drugs 0.000 description 1
- 208000003432 Bone Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000006386 Bone Resorption Diseases 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004899 C-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N Chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004926 Chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 108009000280 Complement Activation Proteins 0.000 description 1
- 229920000453 Consensus sequence Polymers 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KAZBKCHUSA-N D-Mannitol Natural products OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KAZBKCHUSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N D-sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108009000097 DNA Replication Proteins 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 241000252212 Danio rerio Species 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 108020004461 Double-Stranded RNA Proteins 0.000 description 1
- 206010058108 Dyslipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 229910052693 Europium Inorganic materials 0.000 description 1
- 102100014838 FCGRT Human genes 0.000 description 1
- 101710003435 FCGRT Proteins 0.000 description 1
- 230000035693 Fab Effects 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102000016970 Follistatin Human genes 0.000 description 1
- 108010014612 Follistatin Proteins 0.000 description 1
- 102000019203 Follistatin-Related Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010012820 Follistatin-Related Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- IECPWNUMDGFDKC-MZJAQBGESA-N Fusidic acid Chemical class O[C@@H]([C@@H]12)C[C@H]3\C(=C(/CCC=C(C)C)C(O)=O)[C@@H](OC(C)=O)C[C@]3(C)[C@@]2(C)CC[C@@H]2[C@]1(C)CC[C@@H](O)[C@H]2C IECPWNUMDGFDKC-MZJAQBGESA-N 0.000 description 1
- 108060008201 GDNF Proteins 0.000 description 1
- 102100000369 GDNF Human genes 0.000 description 1
- 229940096919 Glycogen Drugs 0.000 description 1
- BYSGBSNPRWKUQH-UJDJLXLFSA-N Glycogen Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O1 BYSGBSNPRWKUQH-UJDJLXLFSA-N 0.000 description 1
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 1
- 102000014015 Growth Differentiation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010050777 Growth Differentiation Factors Proteins 0.000 description 1
- 229940093922 Gynecological Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 208000005721 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 230000036499 Half live Effects 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 102000015434 Humanized Monoclonal Antibodies Human genes 0.000 description 1
- 108010064750 Humanized Monoclonal Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 210000004408 Hybridomas Anatomy 0.000 description 1
- 206010020718 Hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N Iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 1
- 210000000936 Intestines Anatomy 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-UUNJERMWSA-N Lactose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)O[C@@H]1CO)[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1 GUBGYTABKSRVRQ-UUNJERMWSA-N 0.000 description 1
- 101800001155 Latency-associated peptide Proteins 0.000 description 1
- 229940067606 Lecithin Drugs 0.000 description 1
- 206010061227 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004185 Liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 Lung Anatomy 0.000 description 1
- 101000070647 MSTN Proteins 0.000 description 1
- 229920002521 Macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 206010025650 Malignant melanoma Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 240000006217 Mentha pulegium Species 0.000 description 1
- 235000016257 Mentha pulegium Nutrition 0.000 description 1
- 206010000546 Metabolism disorder Diseases 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 210000004080 Milk Anatomy 0.000 description 1
- 210000000214 Mouth Anatomy 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010008267 Nerve Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 108010061543 Neutralizing Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 206010049088 Osteopenia Diseases 0.000 description 1
- 210000001672 Ovary Anatomy 0.000 description 1
- 241000282520 Papio Species 0.000 description 1
- 241001504519 Papio ursinus Species 0.000 description 1
- 229940072417 Peroxidase Drugs 0.000 description 1
- 108090000437 Peroxidases Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 1
- 230000036823 Plasma Levels Effects 0.000 description 1
- 108010022233 Plasminogen Activator Inhibitor 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 229920002732 Polyanhydride Polymers 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 229920001710 Polyorthoester Polymers 0.000 description 1
- 229920001451 Polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 241000282405 Pongo abelii Species 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 102100007015 SERPINE1 Human genes 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N Saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940081974 Saccharin Drugs 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000002491 Severe Combined Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N Sucrose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)[C@@]1(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N TFA trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940033663 Thimerosal Drugs 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L Thiomersal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940024982 Topical Antifungal Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H Tricalcium phosphate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 208000007089 Vaccinia Diseases 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K [O-]P([O-])([O-])=O Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000003070 absorption delaying agent Substances 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000000240 adjuvant Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 229940050528 albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal Effects 0.000 description 1
- 230000000111 anti-oxidant Effects 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungals Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 125000004429 atoms Chemical group 0.000 description 1
- 230000003190 augmentative Effects 0.000 description 1
- 238000000211 autoradiogram Methods 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic Effects 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 229940000635 beta-Alanine Drugs 0.000 description 1
- 102000006635 beta-Lactamases Human genes 0.000 description 1
- 108020004256 beta-Lactamases Proteins 0.000 description 1
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal Effects 0.000 description 1
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000006065 biodegradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 239000001055 blue pigment Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 230000024279 bone resorption Effects 0.000 description 1
- 230000037118 bone strength Effects 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L cacl2 Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000005591 charge neutralization Effects 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 108091006028 chimera Proteins 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 229960005188 collagen Drugs 0.000 description 1
- 229940075614 colloidal silicon dioxide Drugs 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 238000003271 compound fluorescence assay Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 230000001054 cortical Effects 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000010192 crystallographic characterization Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- VOLSCWDWGMWXGO-UHFFFAOYSA-N cyclobuten-1-yl acetate Chemical compound CC(=O)OC1=CCC1 VOLSCWDWGMWXGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing Effects 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K dihydroxy(stearato)aluminium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[Al](O)O UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N edta Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000534 elicitor Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic Effects 0.000 description 1
- 239000005038 ethylene vinyl acetate Substances 0.000 description 1
- 230000001610 euglycemic Effects 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N europium Chemical compound [Eu] OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000002518 glial Effects 0.000 description 1
- 201000003617 glucocorticoid-induced osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 230000004153 glucose metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000007446 glucose tolerance test Methods 0.000 description 1
- 230000034659 glycolysis Effects 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000001050 hortel pimenta Nutrition 0.000 description 1
- 102000024158 human MSTN protein Human genes 0.000 description 1
- 201000001820 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 239000003701 inert diluent Substances 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000893 inhibin Substances 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 229940079866 intestinal antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl β-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000021 kinase assay Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 230000001665 lethal Effects 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 238000003670 luciferase enzyme activity assay Methods 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229960001047 methyl salicylate Drugs 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 230000000813 microbial Effects 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000003387 muscular Effects 0.000 description 1
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 239000003900 neurotrophic factor Substances 0.000 description 1
- 230000001264 neutralization Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000000346 nonvolatile oil Substances 0.000 description 1
- 229940005935 ophthalmologic Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 239000007968 orange flavor Substances 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 235000006678 peppermint Nutrition 0.000 description 1
- 235000015132 peppermint Nutrition 0.000 description 1
- 235000007735 peppermint Nutrition 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 1
- 230000000275 pharmacokinetic Effects 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920001200 poly(ethylene-vinyl acetate) Polymers 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000001402 polyadenylating Effects 0.000 description 1
- 239000008389 polyethoxylated castor oil Substances 0.000 description 1
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating Effects 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 1
- 238000002331 protein detection Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 108091007521 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 201000009410 rhabdomyosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 229920002033 ribozyme Polymers 0.000 description 1
- 235000019204 saccharin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000901 saccharin and its Na,K and Ca salt Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]OC(=O)C([H])(N([H])*)C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940001607 sodium bisulfite Drugs 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- DREOJRVDBCALEG-WCYHLEDJSA-M sodium;1-[5-[(3aS,4S,6aR)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoyloxy]-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].O=C1C(S(=O)(=O)[O-])CC(=O)N1OC(=O)CCCC[C@H]1[C@H]2NC(=O)N[C@H]2CS1 DREOJRVDBCALEG-WCYHLEDJSA-M 0.000 description 1
- 230000000392 somatic Effects 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000000153 supplemental Effects 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained Effects 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 230000002588 toxic Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- 230000001131 transforming Effects 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 230000003612 virological Effects 0.000 description 1
- 230000035513 volume of distribution Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Description
本願は、2002年10月22日提出の米国特許仮出願番号60/419,964号(その全体が本明細書中で参考として援用される)の優先権を主張する。
(技術分野)
技術分野は、成長分化因子8(GDF−8)に対する抗体(特にヒト抗体)および抗体フラグメント(詳細には、in vitroおよび/またはin vivoでGDF−8活性を阻害するもの)に関する。分野は、さらに、筋肉もしくは骨の変性障害またはインスリン代謝障害の診断、予防、または治療方法に関する。
技術分野は、成長分化因子8(GDF−8)に対する抗体(特にヒト抗体)および抗体フラグメント(詳細には、in vitroおよび/またはin vivoでGDF−8活性を阻害するもの)に関する。分野は、さらに、筋肉もしくは骨の変性障害またはインスリン代謝障害の診断、予防、または治療方法に関する。
(背景)
ミオスタチンとしても公知の成長分化因子8(GDF−8)は、分泌タンパク質であり、構造的に関連する成長因子の形質転換成長因子β(TGF−β)スーパーファミリー(その全てが生理学的に重要な成長調節特性および形態形成特性を有する)のメンバ−である(Kingsley et al.(1994)Genes Dev.,8:133−146;Hoodless et al.(1998)Curr.Topics Microbiol.Immunol.,228:235−272)。TGF−βと同様に、 ヒトGDF−8は、375アミノ酸長前駆体タンパク質として合成される。前駆体GDF−8タンパク質は、ホモ二量体を形成する。プロセシング時に、アミノ末端プロペプチドは、Arg−266で切断される。「潜伏期関連ペプチド(latency−associated peptide)」(LAP)として公知の切断されたプロペプチドは、ホモ二量体への非共有結合を保持し、それにより複合体を不活化することができる(Miyazono et al.(1988)J.Biol.Chem.,263:6407−6415;Wakefield et al.(1988)J.Biol.Chem.,263:7646−7654;Brown et al.(1990)Growth Factors,3:35−43;およびThies et al.(2001)Growth Factors,18:251−259)。成熟GDF−8とプロペプチドとの複合体は、一般に、「小潜在複合体(small−latent complex)」と呼ばれる(Gentry et al.(1990)Biochemistry,29:6851−6857;Derynck et al.(1995)Nature,316:701−705;およびMassague(1990)Ann.Rev.Cell Biol.,12:597−641)。成熟GDF−8に結合してその生物活性を阻害する他のタンパク質も公知である。このような阻害タンパク質には、フォリスタチンおよびフォリスタチン関連タンパク質が含まれる(Gamer et al.(1999)Dev.Biol.,208:222−232)。
ミオスタチンとしても公知の成長分化因子8(GDF−8)は、分泌タンパク質であり、構造的に関連する成長因子の形質転換成長因子β(TGF−β)スーパーファミリー(その全てが生理学的に重要な成長調節特性および形態形成特性を有する)のメンバ−である(Kingsley et al.(1994)Genes Dev.,8:133−146;Hoodless et al.(1998)Curr.Topics Microbiol.Immunol.,228:235−272)。TGF−βと同様に、 ヒトGDF−8は、375アミノ酸長前駆体タンパク質として合成される。前駆体GDF−8タンパク質は、ホモ二量体を形成する。プロセシング時に、アミノ末端プロペプチドは、Arg−266で切断される。「潜伏期関連ペプチド(latency−associated peptide)」(LAP)として公知の切断されたプロペプチドは、ホモ二量体への非共有結合を保持し、それにより複合体を不活化することができる(Miyazono et al.(1988)J.Biol.Chem.,263:6407−6415;Wakefield et al.(1988)J.Biol.Chem.,263:7646−7654;Brown et al.(1990)Growth Factors,3:35−43;およびThies et al.(2001)Growth Factors,18:251−259)。成熟GDF−8とプロペプチドとの複合体は、一般に、「小潜在複合体(small−latent complex)」と呼ばれる(Gentry et al.(1990)Biochemistry,29:6851−6857;Derynck et al.(1995)Nature,316:701−705;およびMassague(1990)Ann.Rev.Cell Biol.,12:597−641)。成熟GDF−8に結合してその生物活性を阻害する他のタンパク質も公知である。このような阻害タンパク質には、フォリスタチンおよびフォリスタチン関連タンパク質が含まれる(Gamer et al.(1999)Dev.Biol.,208:222−232)。
種々の種由来の推定アミノ酸配列のアラインメントにより、進化を通してGDF−8が高度に保存されていることが証明されている(McPherron et al.(1997)Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.,94:12457−12461)。実際、ヒト、マウス、ラット、ブタ、およびニワトリのGDF−8配列はC末端領域が100%同一であり、ヒヒ、ウシ、およびヒツジでは3アミノ酸しか異ならない。ゼブラフィッシュGDF−8が最も異なるが、以前としてヒトと88%同一である。
この保存の高さにより、GDF−8は不可欠な機能を有することが示唆される。GDF−8は、発達中および成体の骨格筋で高度に発現し、筋肉および骨形成における重要な生体プロセスの調節に関与することが見いだされた。たとえば、GDF−8ノックアウトトランスジェニックマウスは、骨格筋量の顕著な肥大および過形成(McPherron et al.(1997)Nature,387:83−90)および皮質骨構造の変化(Hamrick et al.(2000)Bone,27(3):343−349)によって特徴づけられる。骨格筋の類似の増大は、ウシのGDF−8の天然に存在する変異で明らかである(Ashmore et al.(1974)Growth,38:501−507;Swatland et al.(1994)J.Anim.Sci.,38:752−757;McPherron et al.(1997)Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.,94:12457−12461;およびKambadur et al.(1997)Genome Res.,7:910−915)。研究により、HIV感染に関連する筋肉の消耗に伴ってGDF−8発現が増大することが示されている(Gonzalez−Cadavid et al.(1998)Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.,95:14938−14943)。GDF−8はまた、筋肉特異的酵素(例えば、クレアチンキナーゼ)の産生および筋芽細胞の増殖(WO 00/43781)に関与する。その成長調節および形態形成特性に加えて、GDF−8は、多数の他の生理学的プロセス(2型糖尿病の発症におけるグルコースホメオスタシス、耐糖能障害、代謝症候群(例えば、X症候群)、外傷によるインスリン抵抗性(火傷または窒素不均衡など)、および脂肪組織障害(例えば、肥満症)が含まれる)にも関与すると考えられる(Kim et al.(2001)BBRC,281:902−906)。
多数のヒトおよび動物の障害が、機能障害筋肉組織に関連する(例えば、筋ジストロフィー(デュシェンヌ型筋ジストロフィーが含まれる)、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、筋萎縮症、組織萎縮症、脆弱性、鬱血性閉塞性肺疾患、サルコペニア、悪液質、ならびに他の疾患および病態に起因する筋消耗症候群)。今日まで、これらの障害を治療するための信頼がおける、又は有効な治療法はほとんどなかった。
特に高齢者および/または閉経後の女性における骨量の低下に関連する病態(骨粗鬆症または変形性関節症が含まれる)も多数存在する。さらに、代謝性骨疾患および障害には、慢性糖質コルチコイド療法に起因する低骨量、若年性性腺不全、アンドロゲン抑制、ビタミンD欠損症、二次性副甲状腺機能亢進症、栄養失調、および拒食症が含まれる。これらの病態のための現在利用可能な治療法は、骨吸収の阻害によって作用する。これらの治療法に代わる新規の骨形成を促進する治療法が望ましい。
したがって、特にヒトにおける筋肉量および/または強度および/または骨密度の全体的増加に寄与する新規の治療法を開発する必要がある。
(要旨)
本発明の1つの目的は、筋肉および/または骨関連障害のための安全且つ有効な治療方法を提供することである。
本発明の1つの目的は、筋肉および/または骨関連障害のための安全且つ有効な治療方法を提供することである。
本発明の別の目的は、脊椎動物の筋肉量および/または骨の強度および/または密度を増大させる方法を提供することである。
本発明のなおさらなる目的は、in vivoで安全且つ有効なGDF−8のインヒビターを提供することである。
本発明のさらに別の目的は、高い特異性および親和性でGDF−8と結合するヒト抗体およびそのフラグメントを提供することである。
したがって、筋肉および骨の変性障害の治療方法を提供する。方法はまた、正常な動物の筋肉量および骨密度の増加に有用である。Myo29、Myo28、およびMyo22と呼ばれる新規のヒト抗GDF−8抗体およびこれ由来の抗体および抗原結合フラグメントも提供する。本発明の抗体は、多数の有用な特性を有する。第1に、本抗体は、高親和性で成熟GDF−8と結合することができる。第2に、本開示の抗体は、証明するように、例えば、ActRIIB結合の阻害およびレポーター遺伝子アッセイによってin vitroおよびin vivoでGDF−8活性を阻害する。第3に、本開示の抗体は、骨格筋の量および骨密度の負の調節に関連するGDF−8活性を阻害することができる。
本発明の一定の実施形態は、Myo29、Myo28、またはMyo22のFvフラグメントのVHおよび/またはVLドメインを含む。さらなる実施形態は、これらの任意のVHおよびVLドメインの1つまたは複数の相補性決定領域(CDR)を含む。他の実施形態は、Myo29、Myo28、またはMyo22のVHドメインのH3フラグメントを含む。
他の態様は、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組成物およびGDF−8の阻害または中和方法(ヒトまたは動物の治療方法が含まれる)でのその使用を提供する。本発明の抗体を使用して、筋組織または骨密度の増加が望ましい病態を治療または予防することができる。例えば、本発明で開示の抗体を、損傷した筋肉(例えば、心筋、横隔膜など)を修復する治療法で使用することができる。疾患および障害の例には、筋ジストロフィー(デュシェンヌ型筋ジストロフィーが含まれる);筋萎縮性側索硬化症;筋萎縮症;組織萎縮症;脆弱性;管症候群;鬱血性閉塞性肺疾患;サルコペニア,悪液質、および他の筋肉消耗症候群などの筋障害および神経筋障害;脂肪組織障害(例えば、肥満症);2型糖尿病;耐糖能障害;代謝症候群(例えば、X症候群);外傷によるインスリン抵抗性(火傷または窒素不均衡など);および骨変性疾患(例えば、変形性関節症および骨粗鬆症)が含まれる。
さらに、本発明で開示の抗体を、生体サンプル中のGDF−8またはそのフラグメントを定量的または定性的に検出するための診断ツ−ルとして使用することができる。GDF−8の存在または検出量は、上記に列挙した1つまたは複数の医学的症状に相関し得る。
別の態様は、Myo29、Myo28、またはMyo22のFvフラグメント由来のVHまたはVLドメインをコードする配列を含む単離核酸を提供する。任意の本発明で開示のVHおよびVLドメイン由来の少なくとも1つのCDRをコードする配列を含む単離核酸も開示する。別の態様は、このような核酸を含む宿主細胞を提供する。
さらに別の態様は、Myo29、Myo28、またはMyo22の新規のVHおよびVLドメインおよび/またはVHおよび/またはVLドメイン由来のドメインの全てまたは一部を含む機能的抗体の産生方法を提供する。
本発明のさらなる目的を以下の説明に一部記載し、且つこれらの一部は説明から明らかであるか、本発明の実施によって得ることができる。本発明の種々の目的、態様、および利点は、添付の特許請求の範囲に特に指摘されている要素および組み合わせによって実現および達成される。
上記の一般的説明および以下の詳細な説明の両方は例示および説明のみを目的とし、特許請求の範囲のように本発明を制限しないと理解すべきである。
(詳細な説明)
(1.定義)
本明細書中で使用される、用語「抗体」は、免疫グロブリンまたはその一部をいい、その供給源、起源となる種、産生方法、および特徴と無関係に抗原結合部位を含む任意のポリペプチドを含む。非限定的な例として、用語「抗体」には、ヒト、オランウータン、マウス、ラット、ヤギ、ヒツジ、およびニワトリの抗体が含まれる。この用語には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、単一特異性抗体、多重特異性抗体、非特異性抗体、ヒト化抗体、単鎖抗体、キメラ抗体、合成抗体、組換え抗体、ハイブリッド抗体、変異抗体、およびCDRグラフティング抗体が含まれるが、これらに限定されない。本発明の目的のために、他で記載しない限り、Fab、F(ab’)2、Fv、scFv、Fd、dAbなどの抗体フラグメントおよび抗原結合機能を保持した他の抗体フラグメントも含まれる。
(1.定義)
本明細書中で使用される、用語「抗体」は、免疫グロブリンまたはその一部をいい、その供給源、起源となる種、産生方法、および特徴と無関係に抗原結合部位を含む任意のポリペプチドを含む。非限定的な例として、用語「抗体」には、ヒト、オランウータン、マウス、ラット、ヤギ、ヒツジ、およびニワトリの抗体が含まれる。この用語には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、単一特異性抗体、多重特異性抗体、非特異性抗体、ヒト化抗体、単鎖抗体、キメラ抗体、合成抗体、組換え抗体、ハイブリッド抗体、変異抗体、およびCDRグラフティング抗体が含まれるが、これらに限定されない。本発明の目的のために、他で記載しない限り、Fab、F(ab’)2、Fv、scFv、Fd、dAbなどの抗体フラグメントおよび抗原結合機能を保持した他の抗体フラグメントも含まれる。
抗体を、例えば、伝統的なハイブリドーマ技術(Kohler and Milstein(1975)Nature,256:495−499)、組換えDNA法(米国特許第4,816,567号)、または抗体ライブラリーを使用したファージディスプレイ技術(Clackson et al.(1991)Nature,352:624−628;Marks et al.(1991)J.Mol.Biol.,222:581−597)によって作製することができる。種々の他の抗体産生技術については、Antibodies:A Laboratory Manual,eds.Harlow et
al.,Cold Spring Harbor Laboratory,1988を参照のこと。
al.,Cold Spring Harbor Laboratory,1988を参照のこと。
用語「抗原結合ドメイン」は、抗原の一部または全部と特異的に結合するか相補的である領域を含む抗体分子の一部をいう。抗原が巨大な場合、抗体は抗原の特定の部分のみと結合することができる。「エピトープ」または「抗原決定基」は、抗体の抗原結合ドメインとの特異的相互作用を担う抗原分子の一部である。1つまたは複数の抗体可変ドメイン(例えば、いわゆるVHドメインからなるFd抗体フラグメント)によって抗原結合ドメインを得ることができる。抗原結合ドメインは、抗体軽鎖可変領域(VL)および抗体重鎖可変領域(VH)を含む。
用語「レパートリー」は、発現した免疫グロブリンをコードする配列の全体または一部に由来するヌクレオチド(例えば、DNA)配列の遺伝的に多様な集団をいう。例えば、H鎖についてはV、D、およびJセグメント、L鎖についてはVおよびJセグメントのin vivo再編成によって配列を作製する。あるいは、in vitro刺激および再編成が起こる応答によって細胞株から配列を作製することができる。あるいは、例えば、非再編成VセグメントとDおよびJセグメントとの組み合わせ、ヌクレオチド合成、無作為化変異誘発、および米国特許第5,565,332号に開示の他の方法によって配列の一部または全部を得ることができる。
用語「特異的相互作用」または「特異的に結合する」などは、2つの分子が生理学的条件下で比較的安定な複合体を形成することを意味する。この用語はまた、例えば、抗原結合ドメインが多数の抗原によって保有される特定のエピトープに特異的である場合に適用可能であり、この場合、抗原結合ドメインを保有する抗体はエピトープを保有する種々の抗原に結合することができる。したがって、抗体は、例えば、その両方が保有するエピトープに結合する限り、BMP−11およびGDF−8と特異的に結合することができる。
高親和性および低〜中程度の能力によって特異的結合を特徴づける。非特異的結合は、通常、親和性が低く、中程度から高い能力を有する。典型的には、親和性定数Kaが106M−1より高い、好ましくは108M−1より高い場合、結合は特異的と見なされる。必要に応じて、結合条件の変化によって実質的に特異的結合に影響を与えることなく非特異的結合を減少させることができる。このような条件は当該分野で公知であり、当業者は日常的技術を使用して適切な条件を選択することができる。条件は、通常、抗体濃度、溶液のイオン強度、温度、結合時間、非関連分子(例えば、血清アルブミン、ミルクカゼイン)の濃度などに関して定義される。条件の例を、実施例4、7、および10に示す。
句「実質的に記載の」は、関連するCDR、VH、またはVLドメインが記載の配列の特定の領域と同一であるか類似性が高いことを意味する。例えば、このような置換には、CDR(H1、H2、H3、L1、L2、またはL3)の配列中の任意の5個のアミノ酸のうちの1個または2個が含まれる。
用語「TGF−βスーパーファミリー」は、構造的に関連した成長因子のファミリ−をいう。関連する成長因子のこのファミリ−は、当該分野で周知である(Kingsley et al.(1994)Genes Dev.,8:133−146;Hoodless
et al.(1998)Curr.Topics Microbiol.Immunol.,228:235−72)。TGF−βスーパーファミリーには、骨形態形成タンパク質(BMP)、アクチビン、インヒビン、ミューラー阻害物質、グリア由来の神経栄養因子、以前として増加している成長分化因子(GDF)(GDF−8(ミオスタチン)など)が含まれる。多数のこのようなタンパク質は、構造的および/または機能的にGDF−8と関連する。例えば、GDF−11としても公知のヒトBMP−11は、アミノ酸レベルでGDF−8と90%同一である(Gamer et al.(1999)Dev.Biol.208,222−232;Nakshima et al.(1999)Mech.Dev.,80:185−189)。
et al.(1998)Curr.Topics Microbiol.Immunol.,228:235−72)。TGF−βスーパーファミリーには、骨形態形成タンパク質(BMP)、アクチビン、インヒビン、ミューラー阻害物質、グリア由来の神経栄養因子、以前として増加している成長分化因子(GDF)(GDF−8(ミオスタチン)など)が含まれる。多数のこのようなタンパク質は、構造的および/または機能的にGDF−8と関連する。例えば、GDF−11としても公知のヒトBMP−11は、アミノ酸レベルでGDF−8と90%同一である(Gamer et al.(1999)Dev.Biol.208,222−232;Nakshima et al.(1999)Mech.Dev.,80:185−189)。
用語「GDF−8」は、特異的な成長分化因子−8をいい、必要に応じて、GDF−8と構造的または機能的に関連する因子(例えば、BMP−11およびTGF−βスーパーファミリーに属する他の因子)をいう。この用語は、GDF−8の全長非プロセシング前駆体形態ならびに翻訳後切断に起因する成熟およびプロペプチド形態をいう。この用語はまた、本明細書中で考察された成熟GDF−8に関連する少なくともいくつかの生物活性を保持するGDF−8の任意のフラグメントおよび変異型(修飾された配列が含まれる)をいう。成熟ヒトGDF−8のアミノ酸配列を、配列番号49に提供する。本発明は、全ての脊椎動物種(ヒト、ウシ、ニワトリ、マウス、ラット、ブタ、ヒツジ、シチメンチョウ、ヒヒ、および魚類が含まれるが、これらに限定されない)由来のGDF−8に関する(配列情報については、例えば、McPherron et al.(1997)Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.,94:12457−12461を参照のこと)。
用語「成熟GDF−8」は、GDF−8前駆体タンパク質のカルボキシル末端ドメインから切断したタンパク質をいう。成熟GDF−8は、単量体、ホモ二量体として存在するか、GDF−8潜在複合体中に存在し得る。条件によって、成熟GDF−8は、任意または全てのこれらの異なる形態の間で平衡になり得る。その生物活性形態では、成熟GDF−8は、「活性GDF−8」ともいう。
用語「GDF−8プロペプチド」は、GDF−8前駆体タンパク質のアミノ末端ドメインから切断されたポリペプチドをいう。GDF−8プロペプチドは、成熟GDF−8上のプロペプチド結合ドメインと結合することができる。
用語「GDF−8潜在複合体」は、成熟GDF−8ホモ二量体とGDF−8プロペプチドとの間で形成されたタンパク質複合体をいう。2つのGDF−8プロペプチドがホモ二量体中の成熟GDF−8の2分子と会合して不活性四量体複合体を形成すると考えられている。潜在複合体は、1つまたは複数のGDF−8プロペプチドの代わりまたはそれに加えて他のGDF−8インヒビターを含み得る。
用語「GDF−8活性」は、活性GDF−8タンパク質に関連する1つまたは複数の生理学的成長調節活性または形態形成活性をいう。例えば、活性GDF−8は、骨格筋量の負のレギュレーターである。活性GDF−8はまた、筋肉特異的酵素(例えば、クレアチンキナーゼ)の産生を調整し、筋芽細胞増殖を刺激し、前脂肪細胞の脂肪細胞への分化を調整することができる。in vivoおよびin vitroでのGDF−8活性の測定手順の例を、実施例2、3、6、および13に記載する。
用語「GDF−8インヒビター」には、GDF−8の活性、発現、プロセシング、または分泌を阻害することができる任意の薬剤が含まれる。このようなインヒビターには、タンパク質、抗体、ペプチド、ペプチド模倣物、リボザイム、アンチセンスオリゴヌクレオチド、二本鎖RNA、およびGDF−8を特異的に阻害する他の小分子が含まれる。このようなインヒビターは、GDF−8の生物活性を「阻害」、「中和」、または「減少」すると言われる。
用語「中和する」、「中和」、「阻害」、およびその同族語は、GDF−8インヒビターの非存在下でのGDF−8活性と比較したGDF−8インヒビターによるGDF−8活性の減少をいう。活性の減少は、好ましくは、少なくとも約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、またはそれ以上である。
用語「治療」は、本明細書中の用語「治療方法」と交換可能に使用され、治療上の処置および予防(prophylactic)/予防(preventative)手段の両方をいう。治療を必要とする者には、特定の内科的疾患を既に罹患している個体および最終的に障害を獲得し得る個体(すなわち、予防手段を必要とする個体)が含まれ得る。
用語「単離された」は、その天然の環境を実質的に含まない分子をいう。例えば、単離タンパク質は、そのタンパク質が由来する細胞もしくは組織供給源由来の細胞物質または他のタンパク質を実質的に含まない。この用語は、単離タンパク質が治療組成物としての投与のために十分に純粋であるか、純度が少なくとも70%〜80%(w/w)、より好ましくは少なくとも80%〜90%(w/w)、さらにより好ましくは純度が90〜95%、最も好ましくは純度が少なくとも95%、96%、97%、98%、99%、または100%(w/w)である調製物をいう。
用語「哺乳動物」は、哺乳動物として分類された任意の動物(ヒト、家畜、動物園の動物、競技用動物、またはペット動物(イヌ、ウマ、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウシなど)が含まれる)をいう。
用語「有効用量」または「有効量」は、患者の症状を改善するか所望の生物学的結果(例えば、骨格筋量および/または骨密度の増加)が得られる化合物の量をいう。このような量は、骨格筋量および骨密度の負の制御に関連するGDF−8活性の減少に十分なはずである。以下の節に記載のように有効量を決定することができる。
(II.GDF−8に対する抗体および抗原結合フラグメント)
A.ヒト抗体Myo28、Myo29、およびMyo22
本開示は、GDF−8に対する新規の抗体およびその抗原結合フラグメントを提供する。このような抗体の非限定的な実施形態を、Myo29、Myo28、およびMyo22と呼ぶ。これらの例示的実施形態を、ヒトIgG1抗体の形態で提供する。
A.ヒト抗体Myo28、Myo29、およびMyo22
本開示は、GDF−8に対する新規の抗体およびその抗原結合フラグメントを提供する。このような抗体の非限定的な実施形態を、Myo29、Myo28、およびMyo22と呼ぶ。これらの例示的実施形態を、ヒトIgG1抗体の形態で提供する。
本発明の抗体は、固有且つ有益な特徴を有する。第1に、これらの抗体は、高親和性で成熟GDF−8と結合することができる。第2に、本発明の抗体は、例えば、ActRIIB結合の阻害およびレポーター遺伝子アッセイによって証明されるように、in vitroおよびin vivoでGDF−8活性を阻害することができる。本発明の抗体はまた、例えば、ActRIIB結合の阻害およびレポーター遺伝子アッセイによって証明されるように、BMP−11に特異的に結合し、そして/またはその活性を阻害することができる。第3に、本開示の抗体は、骨格筋量および骨密度の負の制御に関連するGDF−8活性を阻害することができる。
例示的実施形態では、本発明に開示の抗体は、GDF−8およびBMP−11の両方に特異的に結合することができる。抗体は他のタンパク質(例えば、TGF−βスーパーファミリーに属するもの(ミューラー阻害物質、グリア由来の神経栄養因子など)またはGDF−8以外の成長分化因子)とも反応することができることが意図される。一定の実施形態では、Myo29は、配列番号49のアミノ酸72〜88と同一の配列を含むタンパク質と反応する。さらなる実施形態では、Myo29は、配列Lys−Xaa1−Xaa2−Pro−Xaa3−Asn(配列番号54)(式中、Xaa1,Xaa2,およびXaa3はそれぞれ任意のアミノ酸である)を含むタンパク質と結合する。さらなる実施形態では、少なくとも1つの以下の条件を満たす:(1)Xaa1 = Met、(2)Xaa2=Ser、および(3)Xaa3 = Ile(全て互いに独立している)。他の実施形態では、Myo22は、成熟GDF−8配列中の最初の44個のN末端アミノ酸(配列番号49のアミノ酸1〜44)内のエピトープを認識する。
当業者は、本発明の抗体を使用して、上記と異なるタンパク質を検出、測定、および阻害することができると認識する。一般に、本発明の抗体を、配列番号49に記載のGDF−8の成熟形態の配列中の少なくとも100個、80個、60個、40個、または20個の連続するアミノ酸の任意の配列と少なくとも約70%、80%、90%、95%、またはそれ以上同一である配列を含む任意のタンパク質とともに使用することができる。このようなタンパク質の非限定的な例には、本明細書中に記載の種々の種由来のGDF−8配列が含まれる。標準的なアラインメントアルゴリズム(例えば、Altschul et
al.(1990)J.Mol.Biol.,215:403−410に記載のBasic Local Alignment Tool(BLAST)、Needleman
et al.(1970)J.Mol.Biol.,48:444−453のアルゴリズム、またはMeyers et al.(1988)Comput.Appl.Biosci.,4:11−17のアルゴリズムなど)によって同一率を決定する。
al.(1990)J.Mol.Biol.,215:403−410に記載のBasic Local Alignment Tool(BLAST)、Needleman
et al.(1970)J.Mol.Biol.,48:444−453のアルゴリズム、またはMeyers et al.(1988)Comput.Appl.Biosci.,4:11−17のアルゴリズムなど)によって同一率を決定する。
B.可変ドメイン
免疫グロブリンとしても公知のインタクトな抗体は、典型的には、それぞれ約25kDaの2つの軽鎖(L)およびそれぞれ約50kDaの2つの重鎖(H)から構成される四量体のグリコシル化タンパク質である。λおよびκと呼ばれる2つの軽鎖型が抗体中で見いだされる。重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して、免疫グロブリンを以下の5つの主なクラス(A、D、E、G、およびM)に割り当てることができ、これらのいくつかをサブクラス(イソ型)(例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、およびIgA2)にさらに分類することができる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造および三次元高次構造は当該分野で周知である。抗体構造の概説については、Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,eds.Harlow et al.,1988を参照のこと。簡単に述べれば、各軽鎖は、N末端可変(V)ドメイン(VL)および定常(C)ドメイン(CL)から構成される。各重鎖は、N末端Vドメイン、3つまたは4つのCドメイン、およびヒンジ領域から構成される。VHドメインに最も近いCHドメインを、CH1と命名する。VHおよびVLドメインは、超可変配列(相補性決定領域、CDR)の3つの領域のための足場を形成するフレームワーク領域(FR1、FR2、FR3、およびFR4)と呼ばれる比較的保存された配列の4つの領域からなる。CDRは、抗原との特異的相互作用を担うほとんどの残基を含む。CDRを、CDR1、CDR2、およびCDR3という。したがって、重鎖上のCDR構成要素を、H1、H2、およびH3といい、軽鎖上のCDR構成要素を、L1、L2、L3という。CDR3は、抗体結合部位内の分子多様性の最も巨大な供給源である。例えば、H3は、2アミノ酸残基ほどの短さであり得るか、26個より長くあり得る。最も小さな抗原結合フラグメントは、VHおよびVLドメインからなるFvである。Fabフラグメント(Fragment antigen binding)は、定常領域間のジスルフィド結合によって共有結合したVH−CH1およびVL−CLドメインからなる。宿主細胞中で同時発現した場合にFv中の非共有結合したVHドメインとVLドメインとが解離する傾向を克服するために、可動性があり且つ適切な長さのポリペプチドによりVHのC末端がVLのN末端と結合するかVLのC末端がVHのN末端と結合するいわゆる単鎖(sc)Fvフラグメント(scFv)を構築することができる。最も一般的に使用されているリンカーは、15残基の(Gly4Ser)3ペプチドであったが、他のリンカーも当該分野で公知である。
免疫グロブリンとしても公知のインタクトな抗体は、典型的には、それぞれ約25kDaの2つの軽鎖(L)およびそれぞれ約50kDaの2つの重鎖(H)から構成される四量体のグリコシル化タンパク質である。λおよびκと呼ばれる2つの軽鎖型が抗体中で見いだされる。重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して、免疫グロブリンを以下の5つの主なクラス(A、D、E、G、およびM)に割り当てることができ、これらのいくつかをサブクラス(イソ型)(例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、およびIgA2)にさらに分類することができる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造および三次元高次構造は当該分野で周知である。抗体構造の概説については、Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,eds.Harlow et al.,1988を参照のこと。簡単に述べれば、各軽鎖は、N末端可変(V)ドメイン(VL)および定常(C)ドメイン(CL)から構成される。各重鎖は、N末端Vドメイン、3つまたは4つのCドメイン、およびヒンジ領域から構成される。VHドメインに最も近いCHドメインを、CH1と命名する。VHおよびVLドメインは、超可変配列(相補性決定領域、CDR)の3つの領域のための足場を形成するフレームワーク領域(FR1、FR2、FR3、およびFR4)と呼ばれる比較的保存された配列の4つの領域からなる。CDRは、抗原との特異的相互作用を担うほとんどの残基を含む。CDRを、CDR1、CDR2、およびCDR3という。したがって、重鎖上のCDR構成要素を、H1、H2、およびH3といい、軽鎖上のCDR構成要素を、L1、L2、L3という。CDR3は、抗体結合部位内の分子多様性の最も巨大な供給源である。例えば、H3は、2アミノ酸残基ほどの短さであり得るか、26個より長くあり得る。最も小さな抗原結合フラグメントは、VHおよびVLドメインからなるFvである。Fabフラグメント(Fragment antigen binding)は、定常領域間のジスルフィド結合によって共有結合したVH−CH1およびVL−CLドメインからなる。宿主細胞中で同時発現した場合にFv中の非共有結合したVHドメインとVLドメインとが解離する傾向を克服するために、可動性があり且つ適切な長さのポリペプチドによりVHのC末端がVLのN末端と結合するかVLのC末端がVHのN末端と結合するいわゆる単鎖(sc)Fvフラグメント(scFv)を構築することができる。最も一般的に使用されているリンカーは、15残基の(Gly4Ser)3ペプチドであったが、他のリンカーも当該分野で公知である。
可変領域をコードする複数の生殖系列遺伝子および種々の体細胞事象の使用によって抗体が多様化する。体細胞事象には、完全なVH領域を作製するための多様性(D)遺伝子セグメントおよび連結(J)遺伝子セグメントでの可変遺伝子セグメントの組換えならびに完全なVL領域を作製するための可変遺伝子セグメントおよび連結遺伝子セグメントの組換えが含まれる。組換えプロセス自体の不正確さにより、V(D)J連結点でアミノ酸が喪失または付加される。これらの多様性の機構は、抗原曝露前の発達中のB細胞で起こる。抗原刺激後、B細胞中の発現抗体遺伝子は体細胞変異を受ける。予測生殖系列遺伝子セグメント数、これらのセグメントのランダム組換え、およびランダムVH−VL対合に基づいて、1.6×107個までの異なる抗体を産生することができる(Fundamental Immunology,3rd ed.,ed.Paul,Raven Press,New York,NY,1993)。抗体多様性に寄与する他のプロセス(体細胞変異など)を考慮した場合、1×1010個以上の異なる抗体を作製することができると考えられる(Immunoglobulin Genes,2nd ed.,eds.Jonio et al.,Academic Press,San Diego,CA,1995)。抗体多様性の作製に関与する多数のプロセスにより、同一の抗原特異性を有する独立して誘導されたモノクローナル抗体が同一のアミノ酸配列を有する可能性は低い。
したがって、本発明は、さらに、ヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリー由来の新規のCDRを提供する。本発明のCDRを保有するための構造は、一般に、天然に存在するVHおよびVLのCDRに対応する位置にCDRが存在する抗体重鎖配列もしくは軽鎖配列またはその実質的部分である。免疫グロブリン可変ドメインの構造および位置を、Sequences of Proteins of Immunological Interest,US Department of Health and Human Services,eds.Kabat et al.,1991に記載のように決定することができる。
本発明に開示された抗体のDNAおよびアミノ酸(AA)配列、そのscFvフラグメント、VHおよびVLドメイン、ならびにCDRを配列表に記載し、表1に列挙する。便宜上、VHおよびVLドメイン内の各CDRの位置を表2に列挙する。VHおよびVLドメインを除く重鎖および軽鎖の配列は、Myo29、Myo28、およびMyo22で同一である。
本発明の一定の実施形態は、Myo29、Myo28、またはMyo22のFvフラグメントのVHおよび/またはVLドメインを含む。さらなる実施形態は、任意のこれらのVHおよびVLドメインの1つまたは複数の相補性決定領域(CDR)を含む。1つの実施形態は、Myo29、Myo28、またはMyo22のVHドメインのH3フラグメントを含む。一定の実施形態では、本発明のVHおよびVLドメインは、生殖系列化されている(すなわち、これらのドメインのフレームワーク領域(FR)が、ヒト生殖系列遺伝子産物のコンセンサスアミノ酸配列に適合するように従来の分子生物学技術を使用して変化している)。他の実施形態では、フレームワーク配列は、生殖系列と異なったままである。
C.修飾抗体およびそのフラグメント
本発明のさらなる態様は、GDF−8に特異的な抗体抗原結合ドメインを得る方法を提供する。当業者は、本発明の抗体が表1に記載のVHおよびVLの特異的配列に限定されず、抗原結合能力を保持するこれらの配列の変異型も含まれることを認識する。このような変異型は、当該分野で公知の技術を使用して提供した配列に由来し得る。FRまたはCDRのいずれかのアミノ酸を、置換、欠失、または付加することができる。通常、抗体の安定性を改良して免疫原性を減少させるようにフレームワーク領域の変化をデザインする一方で、通常、抗体のその標的に対する親和性を増大させるようにCDRの変化をデザインする。このような親和性が増大する変化を、典型的に、CDR領域の変更および抗体の試験によって経験的に決定する。このような変更を、Antibody Engineering,2nd.ed.,ed.Borrebaeck,Oxford University Press,1995に記載の方法にしたがって行うことができる。
本発明のさらなる態様は、GDF−8に特異的な抗体抗原結合ドメインを得る方法を提供する。当業者は、本発明の抗体が表1に記載のVHおよびVLの特異的配列に限定されず、抗原結合能力を保持するこれらの配列の変異型も含まれることを認識する。このような変異型は、当該分野で公知の技術を使用して提供した配列に由来し得る。FRまたはCDRのいずれかのアミノ酸を、置換、欠失、または付加することができる。通常、抗体の安定性を改良して免疫原性を減少させるようにフレームワーク領域の変化をデザインする一方で、通常、抗体のその標的に対する親和性を増大させるようにCDRの変化をデザインする。このような親和性が増大する変化を、典型的に、CDR領域の変更および抗体の試験によって経験的に決定する。このような変更を、Antibody Engineering,2nd.ed.,ed.Borrebaeck,Oxford University Press,1995に記載の方法にしたがって行うことができる。
本明細書中に記載のVHドメインのアミノ酸配列変異型であるVHドメインの作製方法は、本明細書中に開示のVHドメインのアミノ酸配列中の1つまたは複数のアミノ酸を付加、欠失、置換、または挿入する工程と、任意選択的にこのようにして得られたVHドメインと1つまたは複数のVLドメインと組み合わせる工程と、GDF−8への特異的結合についてVHドメインまたはVH/VL組み合わせを試験する工程と、任意選択的にこのような抗原結合ドメインがGDF−8活性を中和する能力を試験する工程とを含む。VLドメインは、実質的に本明細書中に記載のアミノ酸配列を有し得る。
本明細書中に開示のVLドメインの1つまたは複数の配列変異型を1つまたは複数のVHドメインと組み合わせた類似の方法を使用することができる。
本発明のさらなる態様は、GDF−8と特異的に反応する抗原結合フラグメントの調製方法を提供する。この方法は、
(a)置換すべきCDR3を含むかCDR3コード領域を欠くVHドメインをコードする核酸の出発レパートリーを得る工程と、
(b)VHドメインをコードする核酸の産物レパートリーを得るためにレパートリー中のCDR3領域にドナー核酸が挿入されるように前記レパートリーと実質的に本明細書中に記載のVHCDR3(すなわち、H3)のアミノ酸配列をコードするドナー核酸とを組み合わせる工程と、
(c)前記産物レパートリーの核酸を発現する工程と、
(d)GDF−8に特異的な特異的抗原結合フラグメントを選択する工程と、
(e)前記特異的抗原結合フラグメントまたはこれをコードする核酸を回収する工程とを含む。
(a)置換すべきCDR3を含むかCDR3コード領域を欠くVHドメインをコードする核酸の出発レパートリーを得る工程と、
(b)VHドメインをコードする核酸の産物レパートリーを得るためにレパートリー中のCDR3領域にドナー核酸が挿入されるように前記レパートリーと実質的に本明細書中に記載のVHCDR3(すなわち、H3)のアミノ酸配列をコードするドナー核酸とを組み合わせる工程と、
(c)前記産物レパートリーの核酸を発現する工程と、
(d)GDF−8に特異的な特異的抗原結合フラグメントを選択する工程と、
(e)前記特異的抗原結合フラグメントまたはこれをコードする核酸を回収する工程とを含む。
さらに、本発明のVLCDR3(すなわち、L3)を置換すべきCDR3を含むかCDR3コード領域を欠くVLドメインをコードする核酸レパートリーと組み合わせた類似の方法を使用することができる。
本発明のコード配列CDR(例えば、CDR3)を、組換え(recombinant)DNAテクノロジ−を使用してCDR(例えば、CDR3)を欠く可変ドメインのレパートリーに移入することができる。例えば、Marks et al.(Bio/Technology(1992)10:779−783)は、可変ドメイン領域の5’末端に指向するか隣接するコンセンサスプライマーをヒトVH遺伝子の第3のフレームワーク領域に対するコンセンサスプライマーと組み合わせて使用してCDR3を欠くVH可変ドメインのレパートリーが得られる、抗体可変ドメインのレパートリーの産生方法を記載している。レパートリーを、特定の抗体のCDR3と組み合わせることができる。類似の技術を使用して、本発明のCDR3由来の配列を、CDR3を欠くVHまたはVLドメインのレパートリーで組み替え(shuffle)、組み替えられた完全なVHまたはVLドメインを同族VLまたはVHドメインと組み合わせて本発明の特異的抗原結合フラグメントを得ることができる。次いで、適切な抗原結合フラグメントを選択することができるように、レパートリーを、WO92/01047のファージディスプレイ系などの適切な宿主系にディスプレイすることができる。
類似の組み替えまたは組替え技術は、Stemmer(Nature(1994)370:389−391)によっても開示されており、これはβ−ラクタマーゼ遺伝子に関する技術を記載しているが、このアプローチを抗体作製のために使用することができる。
さらなる代替法は、全可変ドメイン内に変異を作製するための1つまたは複数の選択されたVHおよび/またはVL遺伝子のランダム変異誘発を使用した本発明のCDR由来の配列を保有する新規のVHまたはVL領域を作製することである。このような技術は、変異性PCRを使用したGram et al.(Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.(1992)89:3576−3580)に記載されている。
使用することができる別の方法は、VHまたはVL遺伝子のCDR領域に対する直接的変異誘発である。このような技術は、Barbas et al.(Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.(1994)91:3809−3813)およびSchier et al.(J.Mol.Biol.(1996)263:551−567)に開示されている。
同様に、1つまたは複数または3つ全てのCDRをVHまたはVLドメインのレパートリーにグラフティングし、その後GDF−8に特異的な特異的結合パートナーまたは結合フラグメントについてスクリーニングすることができる。
免疫グロブリン可変ドメインの実質的部分は、少なくともCDR領域および選択的に本明細書中に記載のscFvフラグメント由来の介在フレームワーク領域を含む。この部分はまた、少なくとも約50%のFR1およびFR4のいずれかまたは両方(50%はFR1のC末端の50%であり、50%はFR4のN末端のである)を含む。可変ドメインの実質的部分のN末端またはC末端のさらなる残基は、通常は天然に存在する可変ドメイン領域に関連しない残基であり得る。例えば、組換えDNA技術によって作製された本発明の特異的抗原結合フラグメントの構築によって、導入されたリンカーによってコードされるN末端またはC末端残基が導入されて、クローニングまたは他の操作工程を容易にすることができる。他の操作工程は、本発明の可変ドメインを免疫グロブリン重鎖を含むさらなるタンパク質配列、(例えば、ダイアボディ(diabody)の産生における)他の可変ドメイン、または以下により詳細に記載したタンパク質標識に連結するためのリンカーの導入を含む。
実施例に例示の実施形態はVHおよびVLドメインの「マッチング」対を含んでいるが、本発明は、VHまたはVLドメイン配列のいずれか(特に、VHドメイン)由来の1つの可変ドメインを含む結合フラグメントも含む。一本鎖特異的結合ドメインのいずれかの場合、これらのドメインを使用して、GDF−8に結合することができる2ドメイン特異的抗原結合ドメインを形成することができる相補性ドメインについてスクリーニングすることができる。HまたはL鎖クローンのいずれかを含む各コロニーを使用して他の鎖(LまたはH)をコードするクローンの完全なライブラリーに感染させ、WO92/01047に開示されるファージディスプレイ技術などにしたがって、得られた二鎖特異的抗原結合ドメインを選択する、WO92/01047に開示のいわゆる階層的二重組み合わせアプローチを使用したファージディスプレイスクリーニング法によってこれを行うことができる。この技術は、Marks et al.,supraにも開示されている。
放射性核種、薬物、高分子、または他の薬剤を使用した化学的方法によって抗体を抱合することができるか、1つまたは複数の本発明のCDRを含む融合タンパク質として作製することができる。
抗体融合タンパク質は、VH−VL対を含み、これらの鎖の1つ(通常VH)および別のタンパク質を1つのポリペプチド鎖として合成する。これらの産物型は、一般にさらなる機能的エレメント(小分子の活性部分)を有するかまたは抱合または融合高分子の主な分子構造の特徴を有するという点で抗体と異なる。
上記概説のアミノ酸配列の変化に加えて、抗体を、グリコシル化するか、ペグ化するか、アルブミンもしくは非タンパク質性ポリマーに結合させることができる。例えば、米国特許第4,640,835号;同第4,496,689号;同第4,301,144号;同第4,670,417号;同第4,791,192号;または同第4,179,337号に記載の様式で、本発明で開示の抗体を、例えばポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、又はポリオキシアルキレンなどの種々の非タンパク質性ポリマーの1つに結合させることができる。例えば、循環半減期を増大させるために、ポリマーへの共有結合による抱合によって、抗体を化学修飾する。典型的なポリマーおよびポリマーのペプチドへの結合方法は、米国特許第4,766,106号;同第4,179,337号;同第4,495,285号;および同第4,609,546号にも示されている。
他の実施形態では、グリコシル化パターンが変化するように(すなわち、元のまたは天然のグリコシル化パターンと異なる)抗体を修飾することができる。本明細書中で使用される、「変化した」は、1つまたは複数の炭水化物部分の欠失および/または元の抗体への1つまたは複数のグリコシル化部位の付加を意味する。グリコシル化部位のコンセンサス配列を含めるためのアミノ酸配列の変化によって達成された本発明で開示の抗体へのグリコシル化部位の付加は当該分野で周知である。抗体上の炭水化物部分の数の別の増加方法は、抗体のアミノ酸残基へのグリコシドの化学的または酵素的結合によるものである。これらの方法は、WO87/05330およびAplin and Wriston(1981)CRC Crit.Rev.Biochem.,22:259−306に記載されている。Hakimuddin et al.(1987)Arch.Biochem.Biophys.,259:52;Edge et al.(1981)Anal.Biochem.,118:131;およびThotakura et al.(1987)Meth.Enzymol.,138:350に記載のように、抗体上に存在する任意の炭水化物部分の除去を化学的または酵素的に行うことができる。
本発明の抗体を、検出可能な標識または機能的標識でタグ化することもできる。検出可能な標識には、当該分野で公知の従来の化学的性質を使用して本発明の抗体に結合することができる131Iまたは99Tcなどの放射性標識が含まれる。標識には、西洋ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファタ−ゼなどの酵素標識も含まれる。標識には、さらに、特異的同族検出可能部分(例えば、標識ビオチン)への結合を介して検出することができるビオチンなどの化学的部分が含まれる。
CDR配列が配列番号n(nは、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、また48である)に記載のCDR配列と非本質的にのみ異なる抗体は、本発明の範囲内に含まれる。非実質的相違には、CDR配列中の任意の5個のアミノ酸のうちの1個または2個の置換などのアミノ酸の小さな変化が含まれる。典型的には、アミノ酸を、類似の電荷、疎水性、または立体化学的性質を有する関連アミノ酸と置換する。このような置換は、当業者の範囲内である。CDR中と異なり、抗体の結合特性に悪影響を与えることなく構造フレームワーク領域(FR)中のより実質的な変化を行うことができる。FRの変化には、非ヒト由来のフレームワークのヒト化または抗原接触または結合部位の安定化に重要な一定のフレームワーク残基の操作(例えば、定常領域のクラスまたはサブクラスの変化、Fc受容体結合などのエフェクター機能を変化させることができる特異的アミノ酸残基の変化(Lund et al.(1991)J.Immun.147:2657−2662およびMorgan et al.(1995)Immunology 86:319−324)、または定常領域が由来する種の変化)が含まれるが、これらに限定されない。抗体は、重鎖のCH2領域にエフェクター機能が低下または変化する(例えば、Fc受容体結合および補体活性化)変異を有し得る。例えば、抗体は、米国特許第5,624,821号および同第5,648,260号などに記載の変異を有し得る。例えば、IgG1またはIgG2重鎖では、IgG1のFc部分を示す配列番号53のアミノ酸残基117および120にこのような変異を作製することができる(これらの残基は、IgG1またはIgG2の全長配列中のアミノ酸234および237に相当する)。抗体は、免疫グロブリンの2つの重鎖の間のジスルフィド結合を安定化する変異(Angal et al.(1993)Mol.Immunol.30:105−108に開示のIgG4のヒンジ領域の変異など)も有し得る。
D.核酸、クローニング系、および発現系
本発明は、さらに、本発明の抗体または結合フラグメントをコードする単離核酸を提供する。本発明の核酸は、DNAまたはRNAを含むことができ、且つ全体または部分的に合成であり得る。本明細書中に記載のヌクレオチド配列の基準は、特定の配列を有するDNA分子を含み、且つ、他で特記しない限り、TがUに置換された特定の配列を有するRNA分子を含む。
本発明は、さらに、本発明の抗体または結合フラグメントをコードする単離核酸を提供する。本発明の核酸は、DNAまたはRNAを含むことができ、且つ全体または部分的に合成であり得る。本明細書中に記載のヌクレオチド配列の基準は、特定の配列を有するDNA分子を含み、且つ、他で特記しない限り、TがUに置換された特定の配列を有するRNA分子を含む。
本発明の核酸は、本明細書中に記載の本発明のCDRまたはVHもしくはVLドメインのコード配列を含む。
本発明はまた、上記の、少なくとも1つの本発明の核酸を含むプラスミド、ベクター、転写もしくは発現カセットの形態の構築物を提供する。
本発明はまた、上記の1つまたは複数の構築物を含む宿主細胞を提供する。コードされた産物の産生方法と同様に、本明細書中に提供する任意のCDR(H1、H2、H3、L1、L2、またはL3)、VHもしくはVLドメイン、または特異的抗原結合フラグメントをコードする核酸は、本発明の態様を形成する。この方法は、コード核酸からの発現を含む。核酸を含む組換え宿主細胞の適切な条件下での培養によって発現させることができる。発現による産生後、VHもしくはVLドメイン、または特異的抗原結合フラグメントを、任意の適切な技術を使用して単離および/または精製し、必要に応じて使用することができる。
本発明の特異的抗原結合フラグメント、VHおよび/またはVLドメイン、ならびにコード核酸分子およびベクターを、例えば、その天然の環境から単離および/または精製するか、実質的に純粋もしくは均一な形態で提供するか、核酸の場合、必要な機能を有するポリペプチドをコードする配列以外の元の核酸または遺伝子を含まないか実質的に含まずに提供することができる。
種々の異なる宿主細胞におけるポリペプチドのクローニング系および発現系が周知である。適切な宿主細胞には、細菌系、哺乳動物細胞系、ならびに酵母およびバキュロウイルス系が含まれる。異種ポリペプチド発現のために当該分野で利用可能な哺乳動物細胞株には、チャイニーズハムスター卵巣細胞、HeLa細胞、ベビーハムスター腎臓細胞、NS0マウス黒色腫細胞、および多くの他の細胞が含まれる。一般的な細菌宿主は、E.coliである。抗体産生に適切な細胞については、Gene Expression Systems,eds.Fernandez et al.,Academic Press,1999を参照のこと。本発明に適合する任意の細胞を本発明で開示の抗体の産生に使用することができる。
適切な調節配列(プロモーター配列、ターミネーター配列、ポリアデニル化配列、エンハンサー配列、マーカー遺伝子、および必要に応じて他の配列が含まれる)を含む適切なベクターを選択または構築することができる。必要に応じて、ベクターは、プラスミドベクターまたはウイルスベクター(例えば、ファージまたはファージミド)であり得る。さらなる詳細については、例えば、Molecular Cloning:a Laboratory Manual:2nd ed.,Sambrook et al.,Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989を参照のこと。例えば、核酸構築物の調製、変異誘発、配列決定、細胞へのDNAの導入および遺伝子発現、ならびにタンパク質分析における核酸操作のための多数の公知の技術およびプロトコールは、Current Protocols in Molecular Biology,2nd ed.,Ausubel et al.eds.,JohnWiley & Sons,1992に詳細に記載されている。
したがって、本発明のさらなる態様は、本明細書中に開示の核酸を含む宿主細胞を提供する。なおさらなる態様は、このような核酸を宿主細胞に導入する工程を含む方法を提供する。導入は、任意の利用可能な技術を使用することができる。真核細胞のための適切な技術には、リン酸カルシウムトランスフェクション、DEAE−デキストラン、エレクトロポレーション、リポソ−ム媒介トランスフェクション、およびレトロウイルスまたは他のウイルス(例えば、ワクシニアまたは昆虫細胞についてはバキュロウイルス)を使用した形質導入が含まれ得る。細菌細胞のための適切な技術には、塩化カルシウム形質転換、エレクトロポレーション、およびバクテリオファージを使用したトランスフェクションが含まれ得る。
移入後に、例えば、遺伝子発現条件下での宿主細胞の培養によって核酸から発現させることができる。
E.微生物寄託
非生殖系列化scFvのMyo29、Myo28、またはMyo22をコードするファージミドベクターpCANTAB6でそれぞれ形質転換したE.coli培養物を、2002年10月2日にAmerican Tissue Culture Collection(ATCC)にそれぞれ受託番号PTA−4741、PTA−4740、およびPTA−4739で寄託した。寄託機関の住所は、10801 University Blvd,Manassas,VA 20110,U.S.A.である。
非生殖系列化scFvのMyo29、Myo28、またはMyo22をコードするファージミドベクターpCANTAB6でそれぞれ形質転換したE.coli培養物を、2002年10月2日にAmerican Tissue Culture Collection(ATCC)にそれぞれ受託番号PTA−4741、PTA−4740、およびPTA−4739で寄託した。寄託機関の住所は、10801 University Blvd,Manassas,VA 20110,U.S.A.である。
(II.疾患の治療方法および他の用途)
本発明の抗体は、ヒトまたは動物の種々の内科的疾患の予防、診断、または治療に有用である。抗体を使用して、GDF−8または関連タンパク質に関連する1つまたは複数の活性を阻害または減少させることができる。より好ましくは、抗体は、抗体に結合していないGDF−8と比較して1つまたは複数のGDF−8活性を阻害または減少させることができる。一定の実施形態では、1つまたは複数の本発明に開示の抗体と結合した場合、GDF−8活性は、1つまたは複数の本発明に開示の抗体に結合していない成熟GDF−8タンパク質と比較して、少なくとも50%、好ましくは少なくとも60、62、64、66、68、70、72、72、76、78、80、82、84、86、または88%、より好ましくは少なくとも90、91、92、93、または94%、さらにより好ましくは少なくとも95%〜100%阻害される。GDF−8活性の阻害を、Thies et
al.(Growth Factors(2001)18:251−259)に記載され、且つ実施例2および9に例示のpGL3(CAGA)12レポーター遺伝子アッセイ(RGA)または実施例3および6に例示のActRIIB受容体アッセイで測定することができる。
本発明の抗体は、ヒトまたは動物の種々の内科的疾患の予防、診断、または治療に有用である。抗体を使用して、GDF−8または関連タンパク質に関連する1つまたは複数の活性を阻害または減少させることができる。より好ましくは、抗体は、抗体に結合していないGDF−8と比較して1つまたは複数のGDF−8活性を阻害または減少させることができる。一定の実施形態では、1つまたは複数の本発明に開示の抗体と結合した場合、GDF−8活性は、1つまたは複数の本発明に開示の抗体に結合していない成熟GDF−8タンパク質と比較して、少なくとも50%、好ましくは少なくとも60、62、64、66、68、70、72、72、76、78、80、82、84、86、または88%、より好ましくは少なくとも90、91、92、93、または94%、さらにより好ましくは少なくとも95%〜100%阻害される。GDF−8活性の阻害を、Thies et
al.(Growth Factors(2001)18:251−259)に記載され、且つ実施例2および9に例示のpGL3(CAGA)12レポーター遺伝子アッセイ(RGA)または実施例3および6に例示のActRIIB受容体アッセイで測定することができる。
本発明に開示の抗体によって診断、治療、または予防される内科的疾患は、筋肉または神経筋障害;肥満症などの脂肪組織障害;2型糖尿病;耐糖能障害;代謝症候群(例えば、X症候群);火傷または窒素不均衡などの外傷によるインスリン抵抗性;または骨粗鬆症などの骨変性疾患である。
本発明に開示の抗体によって診断、治療、または予防される他の内科的疾患は、骨の喪失に関連する障害(骨粗鬆症(特に高齢者および/または閉経後の女性)、糖質コルチコイド誘導性骨粗鬆症、オステオペニア、変形性関節症、および骨粗鬆症関連骨折が含まれる)である。他の標的代謝性骨の疾患または障害には、慢性糖質コルチコイド療法に起因する低骨量、若年性性腺不全、アンドロゲン抑制、ビタミンD欠損症、二次性副甲状腺機能亢進症、栄養失調、および拒食症が含まれる。好ましくは、抗体を使用して、哺乳動物、特にヒトにおけるこのような内科的疾患を予防、診断、または治療する。
本発明の抗体または抗体組成物を、治療有効量で投与する。一般に、治療有効量は、被験体の年齢、病態、および性別ならびに被験体の病状の重症度によって変化し得る。医師が投薬量を決定し、必要に応じて認められた治療効果に適合するように調整することができる。このような化合物の毒性および治療効率を、例えば、LD50(集団の50%に致命的な用量)およびED50(集団の50%の治療有効量)の決定のための細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順によって決定することができる。有毒と治療効果との間の用量の比が治療指数であり、LD50/ED50比として示すことができる。高い治療指数を示す抗体が好ましい。
細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータを、ヒトで使用するための投薬量範囲の処方において使用することができる。このような化合物の投薬量は、毒性がほとんどないか全くないED50を含む循環濃度範囲内であることが好ましい。投薬量は、使用した投薬形態および使用した投与経路によってこの範囲内で変化させることができる。本発明で使用した任意の抗体について、最初に細胞培養アッセイから治療有効用量を評価することができる。細胞培養において決定したIC50(すなわち、最大の症状の阻害の半分を達成する試験抗体の濃度)を含む循環血漿濃度範囲を達成するために、動物モデルにおける投与量を処方することができる。例えば、高速液体クロマトグラフィによって血漿レベルを測定することができる。任意の特定の投薬量の効果を、適切なバイオアッセイによってモニタリングすることができる。適切なバイオアッセイの例には、DNA複製アッセイ、転写ベースのアッセイ、GDF−8タンパク質/受容体結合アッセイ、クレアチンキナーゼアッセイ、前脂肪細胞の分化に基づいたアッセイ、脂肪細胞におけるグルコース取り込みに基づいたアッセイ、および免疫学的アッセイが含まれる。
一般に、抗体またはその結合フラグメントが、1μg/kg〜150mg/kg、1μg/kg〜100mg/kg、1μg/kg〜50mg/kg、1μg/kg〜20mg/kg、1μg/kg〜10mg/kg、1μg/kg〜1mg/kg、10μg/kg〜1mg/kg、10μg/kg〜100μg/kg、100μg〜1mg/kg、および500μg/kg〜1mg/kgの用量で投与されるように組成物を投与する。好ましくは、投与後最も長時間循環抗体レベルを最大にするために、抗体をボーラス投与として投与する。ボーラス投与後、連続的注入を使用することもできる。
本発明に開示の抗体を使用した上記病状の治療、診断、または予防方法を、TGF−βスーパーファミリー中の他のタンパク質で使用することもできる。多数のこれらのタンパク質は、BMP−11などのGDF−8の構造と類似している。したがって、別の実施形態は、BMP−11またはアクチビンを阻害することができる抗体の単独または他のTGF−βインヒビター(GDF−8に対する中和抗体など)との組み合わせの被験体への投与による上記障害の治療方法を提供する。本発明の抗体を使用して、BMP−11と関連するか媒介される疾患または病態を治療することもできる。例えば、米国特許第5,639,638号および同第6,437,111号を参照のこと。
本発明の抗体を使用して、in vivoまたはin vitroでBMP−11およびGDF−8などのTGF−βスーパーファミリーに属するタンパク質の存在を検出することができる。これらのタンパク質の存在またはレベルと病状との相関により、当業者は関連する病状を診断することができる。本発明に開示の抗体によって診断することができる病状を上に記載する。
このような検出方法は当該分野で周知であり、ELISA、ラジオイムノアッセイ、免疫ブロット、ウェスタンブロット、免疫蛍光、免疫沈降、および他の類似の技術が含まれる。タンパク質(例えば、GDF−8)を検出するための1つまたは複数のこれらの技術を組み込んだ診断キット中に抗体をさらに提供することができる。このようなキットは、他の構成要素、輸送容器、説明書、またはタンパク質の検出およびキットの使用を補助するための他の材料を含むことができる。
抗体が診断を目的とする場合、例えば、リガンド基(ビオチンなど)または検出可能なマーカー基(蛍光基、放射性同位体、または酵素など)で修飾することが望ましい。所望ならば、従来技術を使用して抗体(ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体のいずれか)を標識することができる。適切な標識には、フルオロフォア、ケモフォア、放射性原子、高電子密度試薬、酵素、および特異的結合パートナーを有するリガンドが含まれる。酵素は、典型的には、その活性によって検出される。例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼを、テトラメチルベンジジン(TMB)を分光光度計で定量可能な青色色素に変換する能力によって検出することができる。他の適切な標識には、ビオチンおよびアビジンまたはストレプトアビジン、IgGおよびタンパク質A、ならびに当該分野で公知の多数の受容体−リガンド結合物が含まれ得る。他の順列および可能性は当業者に容易に明らかであり、本発明の範囲内で等価物と見なされる。
本発明のなおさらなる態様は、筋肉および骨の障害の治療で有用な治療薬の同定方法を提供する。適切なスクリーニングアッセイ(例えば、ELISAベースのアッセイ)は当該分野で公知である。このようなスクリーニングアッセイでは、第1の結合混合物を、本発明の抗体とリガンド(例えば、GDF−8、BMP−11、アクチビン)との組み合わせによって形成し、第1の結合混合物中のリガンドと抗体との間の結合量(M0)を測定する。第2の結合混合物も抗体と、リガンドと、スクリーニングすべき化合物または薬剤との組み合わせによって形成し、第2の結合混合物中のリガンドと抗体との間の結合量(M1)を測定する。次いで、例えば、M1/M0比の計算によって第1および第2の結合混合物の結合量を比較する。第1の結合混合物と比較して第2の結合混合物で結合の減少が認められる場合、化合物または薬剤はGDF−8活性を阻害することができると見なされる。結合混合物の処方および至適化は当業者のレベルの範囲内であり、このような結合混合物はまた、結合の強化または至適化に必要な緩衝液および塩を含むことができ、本発明のスクリーニングアッセイにさらなるコントロールアッセイが含まれ得る。
したがって、少なくとも約10%(すなわち、M1/M0<0.9)、好ましくは約30%を超えて抗体−リガンド結合が減少することが見いだされた化合物を同定することができ、所望ならば、ActRIIB結合アッセイ(実施例2)ならびに実施例13、15、および16に記載の他の細胞ベースのアッセイおよびin vivoアッセイなどの他のアッセイでGDF−8活性を阻害する能力について二次的にスクリーニングすることができる。
(III.薬学的組成物および投与方法)
本発明は、本発明に開示の抗体を含む組成物を提供する。このような組成物は、薬学的使用および患者への投与に適切であり得る。組成物は、典型的には、1つまたは複数の本発明の抗体および薬学的に許容可能な賦形剤を含む。本明細書中で使用される、句「薬学的に許容可能な賦形剤」には、薬学的投与に適合する任意および全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗生物質および抗真菌薬、ならびに等張化剤および吸収遅延剤などが含まれる。薬学的に活性な物質のためのこのような溶剤および薬剤の使用は当該分野で周知である。組成物は、補足的、付加的、または強化された治療機能を提供する他の活性化合物も含み得る。薬学的組成物を、投与説明書とともにコンテナ、パック、またディスペンサーに含めることもできる。
本発明は、本発明に開示の抗体を含む組成物を提供する。このような組成物は、薬学的使用および患者への投与に適切であり得る。組成物は、典型的には、1つまたは複数の本発明の抗体および薬学的に許容可能な賦形剤を含む。本明細書中で使用される、句「薬学的に許容可能な賦形剤」には、薬学的投与に適合する任意および全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗生物質および抗真菌薬、ならびに等張化剤および吸収遅延剤などが含まれる。薬学的に活性な物質のためのこのような溶剤および薬剤の使用は当該分野で周知である。組成物は、補足的、付加的、または強化された治療機能を提供する他の活性化合物も含み得る。薬学的組成物を、投与説明書とともにコンテナ、パック、またディスペンサーに含めることもできる。
本発明の薬学的組成物を、その意図する投与経路に適合するように処方する。投与方法は、当業者に公知である。局所的または経口投与することができるか、粘膜を通過することができる組成物を得ることも可能である。投与は、例えば、静脈内、腹腔内、筋肉内、腔内、皮下、または経皮であり得る。
皮内または皮下投与で使用される溶液または懸濁液には、典型的には、1つまたは複数の以下の構成要素が含まれる:注射用の水、生理食塩水、不揮発油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶媒などの滅菌希釈剤;ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌薬;アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤;エチレンジアミン四酢酸などのキレート化剤;酢酸、クエン酸、またはリン酸などの緩衝液;および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの等張化剤。塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基でpHを調整することができる。このような調製物を、ガラス製またはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジ、または複数回投与用バイアルに同封することができる。
注射に適切な薬学的組成物には、滅菌水溶液または分散液および滅菌注射用溶液または分散液の即時調製のための滅菌粉末が含まれる。静脈内投与に適切なキャリアには、生理食塩水、静菌水、Cremophor(商標)EL(BASF,Parsippany,NJ)、またはリン酸緩衝化生理食塩水(PBS)が含まれる。全ての場合において、組成物は滅菌されていなければならず、容易にシリンジで使用できる範囲の流動物であるべきである。製造および保存条件下で安定でなければならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して保存されるべきである。キャリアは、例えば、水、エタノール、ポリオ−ル(例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど)、およびその適切な混合物を含む溶媒または分散媒であり得る。例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散液の場合の必要な粒子サイズの維持、および界面活性剤の使用によって適切な流動性を維持することができる。種々の抗菌薬および抗真菌薬(例えば、パラベン、クロロブタノ−ル、フェノール、アスコルビン酸、およびチメロサールなど)によって微生物作用を防止することができる。多くの場合、組成物中に等張化剤(例えば、糖、マンニトールなどのポリアルコール、ソルビトール、および塩化ナトリウム)を含むことが好ましい。注射用組成物は、組成物中に吸収を遅延させる薬剤(例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン)を含めることによって長期間吸収され得る。
経口組成物には、一般に、不活性希釈剤または食用キャリアが含まれる。これらをゼラチンカプセルに封入するか、打錠することができる。治療のための経口投与の目的で、抗体を賦形剤に組み込み、錠剤またはカプセル形態で使用することができる。薬学的に適合する結合剤および/またはアジュバント材料を、組成物の一部として含めることができる。錠剤、丸薬、およびカプセルなどは、任意の以下の成分または類似の性質の化合物を含み得る:微結晶性セルロース、トラガカントガム、またはゼラチンなどの結合剤;デンプンまたはラクトースなどの賦形剤;アルギン酸、Primogel(商標)、またはコーンスターチなどの崩壊薬;ステアリン酸マグネシウムまたはSterotes(商標)などの潤滑剤;コロイド状二酸化ケイ素などの流動促進剤;スクロースまたはサッカリンなどの甘味料;またはペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジフレーバーなどの矯味矯臭薬。
吸入による投与のために、適切な高圧ガス(例えば、二酸化炭素などのガス)を含む加圧コンテナもしくディスペンサーまたはネブライザーからエアゾールスプレーの形態で抗体を送達させる。
経粘膜または経皮手段によって全身投与を行うこともできる。例えば、Fc部分を含む抗体の場合、組成物は、FcRn受容体媒介経路を介して粘膜(例えば、腸、口腔、または肺)を通過することができる(米国特許第6,030,613号)。例えば、ロゼンジ、鼻腔用スプレー、吸入器、または坐剤の使用によって経粘膜投与を行うことができる。経皮投与のために、活性化合物を、当該分野で公知の軟膏(ointment)、軟膏(salve)、ゲル、またはクリームに処方する。経粘膜投与または経皮投与のために、処方物に通過すべきバリアに適切な浸透剤を使用する。このような浸透剤は一般に当該分野で公知であり、例えば、界面活性剤、胆汁酸塩、およびフシジン酸誘導体が含まれる。
本発明に開示の抗体を、徐放性処方物などの身体からの急速な排除から化合物を保護するキャリア(移植片およびマイクロカプセル化した送達システムが含まれる)を使用して調製することができる。エチレンビニルアセテート、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの生分解性生体適合性ポリマーを使用することができる。このような処方物の調製方法は、当業者に自明である。本発明に開示の抗体を含むリポソーム懸濁液を、薬学的に許容可能なキャリアとして使用することもできる。例えば、米国特許第4,522,811号に記載の当業者に公知の方法にしたがって、これらを調製することができる。
投与を容易にするためおよび投薬量の均一性のために、単位投薬形態で経口または非経口組成物を処方することが有利であり得る。本明細書中で使用される、「単位投薬形態」は、処置すべき被験体のための単一投薬量として適切な物理的に個別の単位をいい、必要な薬学的キャリアと共同して所望の治療効果が得られるように所定量の活性化合物を含む単位を計算した。本発明の単位投薬形態の仕様は、活性化合物の固有の特徴および達成すべき特定の治療効果、および個体治療のためのこのような活性化合物の処方分野が本来有する制限について言及しているか、これらに直接依存する。
以下の実施例は、本発明の例示的実施形態を提供し、本発明を決して限定しない。当業者は、多数の他の実施形態が本発明の範囲内に含まれることを認識する。
本願で引用された全ての引用文献、特許、および公開された特許出願の内容全体が本明細書中で参考として援用される。
(実施例1:GDF−8の精製)
組換えヒトGDF−8タンパク質(成熟GDF−8およびGDF−8プロペプチド)を発現する選択細胞株由来の馴化培地をpH6.5に酸性化し、80×50mmPOROS(商標)SP陽イオン交換カラムと縦に並べた80×50mmPOROS(商標)HQ陰イオン交換カラムにアプライした(PerSeptive Biosystems,Foster City,CA)。通過物(flow through)をpH5.0に調整し、75×20mmPOROS(商標)SP陽イオン交換カラム(PerSeptive
Biosystems)にアプライし、NaCl勾配を使用して溶離した。SDS−PAGEによって確認したGDF−8潜在複合体を含む画分をプールし、トリフルオロ酢酸(TFA)でpH2〜3に酸性化し、粘度を低下させるために0.1%TFAで200mlにした。次いで、プールを、60×21.2mmのガードカラム(Phenomenex,Torrance,CA)を取りつけた250×21.2mmのC5カラム(Phenomenex)にアプライし、TFA/アセトニトリル勾配を使用して溶離し、GDF−8プロペプチドから成熟GDF−8を分離した。アセトニトリルを除去するために成熟GDF−8を含むプール画分を凍結乾燥によって濃縮し、20mlの0.1%TFAを添加した。次いで、サンプルを、分離を補助するために60℃に加熱した250×10mmのC5カラム(Phenomenex)にアプライした。もはやさらに分離することができなくなるまでこれを繰り返した。次いで、成熟GDF−8を含む画分をプールし、40%アセトニトリルで増量し(bring up)、60×21.2のガードカラムを取りつけた600×21.2のBioSep(商標)S−3000サイズ排除カラム(Phenomenex)にアプライした。精製成熟GDF−8を含む画分をプールし、その後の実験での使用のために濃縮した。
組換えヒトGDF−8タンパク質(成熟GDF−8およびGDF−8プロペプチド)を発現する選択細胞株由来の馴化培地をpH6.5に酸性化し、80×50mmPOROS(商標)SP陽イオン交換カラムと縦に並べた80×50mmPOROS(商標)HQ陰イオン交換カラムにアプライした(PerSeptive Biosystems,Foster City,CA)。通過物(flow through)をpH5.0に調整し、75×20mmPOROS(商標)SP陽イオン交換カラム(PerSeptive
Biosystems)にアプライし、NaCl勾配を使用して溶離した。SDS−PAGEによって確認したGDF−8潜在複合体を含む画分をプールし、トリフルオロ酢酸(TFA)でpH2〜3に酸性化し、粘度を低下させるために0.1%TFAで200mlにした。次いで、プールを、60×21.2mmのガードカラム(Phenomenex,Torrance,CA)を取りつけた250×21.2mmのC5カラム(Phenomenex)にアプライし、TFA/アセトニトリル勾配を使用して溶離し、GDF−8プロペプチドから成熟GDF−8を分離した。アセトニトリルを除去するために成熟GDF−8を含むプール画分を凍結乾燥によって濃縮し、20mlの0.1%TFAを添加した。次いで、サンプルを、分離を補助するために60℃に加熱した250×10mmのC5カラム(Phenomenex)にアプライした。もはやさらに分離することができなくなるまでこれを繰り返した。次いで、成熟GDF−8を含む画分をプールし、40%アセトニトリルで増量し(bring up)、60×21.2のガードカラムを取りつけた600×21.2のBioSep(商標)S−3000サイズ排除カラム(Phenomenex)にアプライした。精製成熟GDF−8を含む画分をプールし、その後の実験での使用のために濃縮した。
SDS−PAGEにおいて、精製成熟GDF−8は、非還元条件下で25kDaおよび還元条件下で13kDaの広いバンドとして移動した。McPherron et al.(Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.(1997)94:12457−12461)によってマウスGDF−8について類似のSDS−PAGEプロフィ−ルが報告されており、成熟タンパク質の二量体特性を反映する。活性成熟BMP−11二量体を、類似の様式で組換えヒトBMP−11を発現する細胞株由来の馴化培地から精製した。
活性成熟BMP−11を、組換えヒトGDF−8プロペプチド/成熟BMP−11キメラタンパク質を発現する細胞株由来の馴化培地から精製した。馴化培地を、50mM Tris(pH8.0)、1M NaClを含む10mlのTALON(商標)カラム(Clonetech,Palo Alto,CA)に1ml/分でロードした。結合したタンパク質を、50mM Tris(pH8.0)、1M NaCl、500mMイミダゾールで溶離した。GDF−8プロペプチド/BMP−11潜在複合体を含むプール画分を、10%TFAでpH3に酸性化した。次いで、プールを、成熟BMP−11およびGDF−8プロペプチドのより良好な分離のために60℃に加熱した250×4.6mmのJupiter C4カラム(Phenomenex,Torrance,CA)にアプライし、TFA/アセトニトリル勾配を使用して溶離した。成熟BMP−11を含むプール画分を、凍結乾燥によって濃縮した。SDS−PAGE、精製成熟BMP−11は、非還元条件下で25kDaおよび還元条件下で12kDaに移動した。
(実施例2:精製組換えヒトGDF−8の生物活性)
GDF−8の活性を証明するために、ルシフェラーゼを発現するレポーターベクターpGL3(CAGA)12を使用してレポーター遺伝子アッセイ(RGA)を開発した。CAGA配列は、TGF−β誘導性遺伝子PAI−1のプロモーター内のTGF−β応答配列であることが以前に報告されていた(Denner et al.(1998)EMBO J.,17:3091−3100)。
GDF−8の活性を証明するために、ルシフェラーゼを発現するレポーターベクターpGL3(CAGA)12を使用してレポーター遺伝子アッセイ(RGA)を開発した。CAGA配列は、TGF−β誘導性遺伝子PAI−1のプロモーター内のTGF−β応答配列であることが以前に報告されていた(Denner et al.(1998)EMBO J.,17:3091−3100)。
基本ルシフェラーゼレポータープラスミドpGL3(Promega,Madison,WI)を使用して、12個のCAGAボックスを含むレポーターベクターを作製した。アデノウイルス主要後期プロモーター(−35/+10)由来のTATAボックスおよび転写開始部位を、BglIIとHindIII部位との間に挿入した。CAGAボックスAGCCAGACAの12回反復を含むオリゴヌクレオチドをアニーリングし、XhoI部位にクローン化した。FuGENE(商標)6トランスフェクション試薬(Boehringer Manheim,Germany)を使用して、ヒト横紋筋肉腫細胞株A204(ATCC HTB−82)をpGL3(CAGA)12で一過性にトランスフェクトした。トランスフェクション後、2mMグルタミン、100U/mlストレプトマイシン、100μg/mlペニシリン、および10%ウシ胎児血清を補足したMcCoyの5A培地を含む48ウェルプレートに細胞を16時間培養した。次いで、細胞を、McCoyの5A培地中の10ng/mlのGDF−8の存在下又は非存在下で、グルタミン、ストレプトマイシン、ペニシリン、および1mg/mlのウシ血清アルブミンで、37℃にて6時間処理した。ルシフェラーゼアッセイ系(Promega)を使用して、処置した細胞中のルシフェラーゼを定量した。
図4Aは、GDF−8は、10ng/mlのED50でレポーター構築物を最大で10倍活性化し、精製組換えGDF−8が生物学的に活性であることを示す。BMP−11およびアクチビンは類似の生物学的応答を誘発した。
(実施例3:ActRIIB結合アッセイにおける精製GDF−8の結合特性)
GDF−8潜在複合体を、1モルのGDF−8複合体に対して20モルのEZ結合スルホ−NHS−ビオチン(Pierce,Rockford,Illinois,Cat.No.21217)の比で氷上で2時間ビオチン化した。0.5%TFAを使用したpHの低下によって反応を停止させ、複合体をC4 Jupiter 250×4.6mmカラム(Phenomenex)におけるクロマトグラフィに供してGDF−8プロペプチドから成熟GDF−8を分離した。TFA/CH3CN勾配を使用して溶離したビオチン化成熟GDF−8画分をプールし、濃縮し、MicroBCA(商標)タンパク質アッセイ試薬キット(Pierce,Rockford,IL,Cat.No.23235)によって定量した。
GDF−8潜在複合体を、1モルのGDF−8複合体に対して20モルのEZ結合スルホ−NHS−ビオチン(Pierce,Rockford,Illinois,Cat.No.21217)の比で氷上で2時間ビオチン化した。0.5%TFAを使用したpHの低下によって反応を停止させ、複合体をC4 Jupiter 250×4.6mmカラム(Phenomenex)におけるクロマトグラフィに供してGDF−8プロペプチドから成熟GDF−8を分離した。TFA/CH3CN勾配を使用して溶離したビオチン化成熟GDF−8画分をプールし、濃縮し、MicroBCA(商標)タンパク質アッセイ試薬キット(Pierce,Rockford,IL,Cat.No.23235)によって定量した。
上記と同一の様式で、BMP−11潜在複合体からビオチン化成熟BMP−11を調製した。1μg/mlの組換えActRIIB−Fcキメラ(R&D Systems,Minneapolis,MN,Cat.No.339−RB/CF)を含む0.2M炭酸ナトリウム緩衝液を、4℃で一晩96ウェルの平底アッセイプレート(Costar,NY,Cat.No.3590)にコートした。次いで、プレートを1mg/mlのウシ血清アルブミンでブロッキングし、標準的なELISAプロトコールにしたがって洗浄した。種々の濃度の100μアリコートのビオチン化GDF−8またはBMP−11を、ブロッキングしたELISAプレートに添加し、1時間インキュベートし、洗浄し、ストレプトアビジン−西洋ワサビペルオキシダーゼ(SA−HRP,BD PharMingen,San Diego,CA,Cat.No.13047E)およびその後のTMB(KPL,Gaithersburg,MD,Cat.No.50−76−04)の添加によってGDF−8またはBMP−11の結合量を検出した。Molecular Devicesマイクロプレートリーダーにおいて450nMで比色測定を行った。
図1に示すように、ビオチン化GDF−8およびBMP−11はActRIIB(ED50が15および40ng/mlである推定GDF−8II型受容体)にそれぞれ結合し、ActRIIB結合アッセイがin vitro結合アッセイでGDF−8およびBMP−11に感受性を示すことを示す。
(実施例4:scFvライブラリーにおけるGDF−8のパニングによるMyo22の単離)
記載の1.38×1010個のライブラリー(Vaughan et al.(1996)Nature Biotech.,14:309−314)の拡大バ−ジョンであるscFvファージミドライブラリーを使用して、GDF−8に特異的な抗体を選択した。可溶性GDF−8タンパク質(10μg/mlを含む50mM炭酸ナトリウム緩衝液(pH9.6))でマイクロタイタープレートのウェルを4℃で一晩コートした。ウェルをPBSで洗浄し、MPBS(3%Marvel(商標)脱脂粉乳を含むPBS)にて37℃で2時間ブロッキングした。精製したファージ(1012形質導入単位(tu))を含む100lの3%MPBSをブロッキングしたウェルに添加し、室温で1時間インキュベートした。ウェルをPBST(0.1%v/vのTween(商標)20を含むPBS)で10回洗浄し、次いでPBSで10回洗浄した。結合したファージ粒子を、100μlの100mMトリエチルアミンにて室温で10分間溶離し、その直後に50μlの1M Tris−HCl(pH7.4)で中和した。溶離したファージを使用して、指数関数的に成長した10mlのE.coli TG1に感染させた。感染細胞を、2TYブロス中で静置にて37℃で30分間およびその後曝気しながら37℃で30分間成長させ、2TYAGプレート上に画線し、30℃で一晩インキュベートした。コロニーをプレートから10mのl2TYブロスに掻き取り、−70℃での保存のために15%グリセロールを添加した。
記載の1.38×1010個のライブラリー(Vaughan et al.(1996)Nature Biotech.,14:309−314)の拡大バ−ジョンであるscFvファージミドライブラリーを使用して、GDF−8に特異的な抗体を選択した。可溶性GDF−8タンパク質(10μg/mlを含む50mM炭酸ナトリウム緩衝液(pH9.6))でマイクロタイタープレートのウェルを4℃で一晩コートした。ウェルをPBSで洗浄し、MPBS(3%Marvel(商標)脱脂粉乳を含むPBS)にて37℃で2時間ブロッキングした。精製したファージ(1012形質導入単位(tu))を含む100lの3%MPBSをブロッキングしたウェルに添加し、室温で1時間インキュベートした。ウェルをPBST(0.1%v/vのTween(商標)20を含むPBS)で10回洗浄し、次いでPBSで10回洗浄した。結合したファージ粒子を、100μlの100mMトリエチルアミンにて室温で10分間溶離し、その直後に50μlの1M Tris−HCl(pH7.4)で中和した。溶離したファージを使用して、指数関数的に成長した10mlのE.coli TG1に感染させた。感染細胞を、2TYブロス中で静置にて37℃で30分間およびその後曝気しながら37℃で30分間成長させ、2TYAGプレート上に画線し、30℃で一晩インキュベートした。コロニーをプレートから10mのl2TYブロスに掻き取り、−70℃での保存のために15%グリセロールを添加した。
第1ラウンドのパニング選択由来のグリセロールストック培養物にヘルパーファージを重感染させ、レスキューして第2のパニングラウンドのためのscFv抗体発現ファージ粒子を得た。このようにして、全部で3ラウンドのパニングを行った。
(実施例5:scFvライブラリーからのMyo28およびMyo29の選択)
ビオチン化GDF−8タンパク質(bioGDF−8)を使用して、可溶性選択(soluble selections)を行った。1μg/mlの濃度でbioGDF−8を使用した。実施例4に記載するように、scFvライブラリーを使用した。精製scFvファージ(1012tu)を100μlの3%MPBSで30分間ブロッキングし、ビオチン化抗体を添加し、室温で1時間インキュベートした。ファージ/抗原を、1mlの3%MPBS中にて37℃で1時間ブロッキングした50μlのDynal(商標)M280ストレプトアビジン磁性ビーズに添加し、室温でさらに15分間インキュベートした。磁性ラックを使用してビーズを補足し、0.1%(v/v)Tween(商標)20を含む1mlの3%MPBSで4回洗浄し、PBSで3回洗浄した。最後のPBSでの洗浄後、ビーズを100μlのPBS中で再懸濁し、5mlの指数関数的に成長したE.coli TG−1細胞を感染させるのに使用した。細胞およびファージを、37℃で1時間(静置で30分間および250rpmで震盪しながら30分間)インキュベートし、2TYAGプレートに広げた。プレートを30℃で一晩インキュベートし、翌日にコロニーを視覚化した。産生されたコロニーをプレートから掻き取り、上記のようにファージをレスキューした。上記のように第2ラウンドの可溶性選択を行った。
ビオチン化GDF−8タンパク質(bioGDF−8)を使用して、可溶性選択(soluble selections)を行った。1μg/mlの濃度でbioGDF−8を使用した。実施例4に記載するように、scFvライブラリーを使用した。精製scFvファージ(1012tu)を100μlの3%MPBSで30分間ブロッキングし、ビオチン化抗体を添加し、室温で1時間インキュベートした。ファージ/抗原を、1mlの3%MPBS中にて37℃で1時間ブロッキングした50μlのDynal(商標)M280ストレプトアビジン磁性ビーズに添加し、室温でさらに15分間インキュベートした。磁性ラックを使用してビーズを補足し、0.1%(v/v)Tween(商標)20を含む1mlの3%MPBSで4回洗浄し、PBSで3回洗浄した。最後のPBSでの洗浄後、ビーズを100μlのPBS中で再懸濁し、5mlの指数関数的に成長したE.coli TG−1細胞を感染させるのに使用した。細胞およびファージを、37℃で1時間(静置で30分間および250rpmで震盪しながら30分間)インキュベートし、2TYAGプレートに広げた。プレートを30℃で一晩インキュベートし、翌日にコロニーを視覚化した。産生されたコロニーをプレートから掻き取り、上記のようにファージをレスキューした。上記のように第2ラウンドの可溶性選択を行った。
(実施例6:ActRIIB受容体阻害アッセイおよびスクリーニング)
実施例4および5に記載のようにして得た産生コロニーを、100μlの2TYAGを含む96ウェルプレートに採取した。指数関数的に成長した培養物への1mMのIPTGの添加および30℃で一晩のインキュベーションによってscFv産生を誘導した。本質的に実施例3に記載のように、粗scFv含有培養物上清を、bioGDF−8のActRIIBへの結合を阻害する能力についてスクリーニングした。bioGDF−8の結合をユウロピウム標識ストレプトアビジンで検出し、時間分解蛍光アッセイ(TRF)でDELFIA(商標)試薬キット(PerkinElmer Life Sciences,Boston,MA)を使用するという点でアッセイをわずかに修正した。無関係のクローンを超える結合シグナルの阻害を示す正のクローンを採取し、活性を確認するためにアッセイした。
実施例4および5に記載のようにして得た産生コロニーを、100μlの2TYAGを含む96ウェルプレートに採取した。指数関数的に成長した培養物への1mMのIPTGの添加および30℃で一晩のインキュベーションによってscFv産生を誘導した。本質的に実施例3に記載のように、粗scFv含有培養物上清を、bioGDF−8のActRIIBへの結合を阻害する能力についてスクリーニングした。bioGDF−8の結合をユウロピウム標識ストレプトアビジンで検出し、時間分解蛍光アッセイ(TRF)でDELFIA(商標)試薬キット(PerkinElmer Life Sciences,Boston,MA)を使用するという点でアッセイをわずかに修正した。無関係のクローンを超える結合シグナルの阻害を示す正のクローンを採取し、活性を確認するためにアッセイした。
受容体阻害スクリーニングから同定された正のクローン由来の精製scFvを、上記の阻害アッセイで試験した。アッセイにおけるIC50値によって測定したクローンの能力を確立するために、scFv濃度の滴定を使用した。実験結果を図2に示す。これらのアッセイで決定したところ、Myo29、Myo28、およびMyo22のscFvについてのIC50は、それぞれ2.4nM、1.7nM、および60nMである。したがって、これらの抗体は、GDF−8活性の強力なインヒビターである。
(実施例7:ファージELISAによる特異性の特徴づけ)
抗体の特異性を決定するために、GDF−8および無関係のタンパク質に対するActRIIBスクリーニング由来の正のクローンについてファージELISAを行った。ファージミドを含む各E.coliコロニーを、ウェルあたり100μlの2TYAG培地を含む96ウェルプレートに接種した。M13K07ヘルパーファージを、10の感染多重度(moi)の指数関数的に成長した培養物に添加し、プレートを37℃でさらに1時間インキュベートした。プレートを、ベンチトップ遠心分離機にて2000rpmで10分間遠心分離した。上清を除去し、細胞ペレットを100μlの2TYAKに再懸濁し、震盪しながら30℃で一晩インキュベートした。翌日、プレートを2000rpmで10分間遠心分離し、各ウェル由来の100μlのファージ含有上清を新鮮な96ウェルプレートに移した。ファージサンプルを、ELISA前に最終濃度3%のMPBSにて室温で1時間ブロッキングした。
抗体の特異性を決定するために、GDF−8および無関係のタンパク質に対するActRIIBスクリーニング由来の正のクローンについてファージELISAを行った。ファージミドを含む各E.coliコロニーを、ウェルあたり100μlの2TYAG培地を含む96ウェルプレートに接種した。M13K07ヘルパーファージを、10の感染多重度(moi)の指数関数的に成長した培養物に添加し、プレートを37℃でさらに1時間インキュベートした。プレートを、ベンチトップ遠心分離機にて2000rpmで10分間遠心分離した。上清を除去し、細胞ペレットを100μlの2TYAKに再懸濁し、震盪しながら30℃で一晩インキュベートした。翌日、プレートを2000rpmで10分間遠心分離し、各ウェル由来の100μlのファージ含有上清を新鮮な96ウェルプレートに移した。ファージサンプルを、ELISA前に最終濃度3%のMPBSにて室温で1時間ブロッキングした。
1μg/mlのGDF−8または無関係のタンパク質を、96ウェルマイクロタイタープレートに4℃で一晩コートした。コーティング後、ウェルから溶液を取り出し、プレートを3%MPBSにて室温で1時間ブロッキングした。プレートをPBSでリンスし、各ウェルに50μlのプレブロッキングファージを添加した。プレートを室温で1時間インキュベートし、PBSTで3回洗浄し、その後PBSで3回洗浄した。各ウェルに、50μlの5,000倍希釈の抗M13−HRP抱合体(Pharmacia)を添加し、プレートを室温で1時間インキュベートした。各プレートを、PBSTで3回洗浄し、その後PBSで3回洗浄した。50μlのTMB基質を各ウェルに添加し、発色するまでインキュベートした。25μlの0.5M H2SO4の添加によって反応を停止させた。作製されたシグナルを、マイクロタイタープレートリーダーを使用した450nmの吸光度の読み取りによって測定した。GDF−8の特異的結合を確認した。
(実施例8:scFvの配列決定、IgGへの変換、および生殖系列化)
中和scFv E.coliクローンを2TYAGプレートに画線し、30℃で一晩インキュベートした。scFvクローン由来のVHおよびVL領域を増幅するために、これらのプレート由来の三連のコロニーをpCANTAB6ベクター配列オリゴを使用して配列決定した。Myo29、Myo28、およびMyo22のIgGの作製に使用したscFvフラグメントのDNA配列を、それぞれ配列番号13、配列番号7、および配列番号1に示す。
中和scFv E.coliクローンを2TYAGプレートに画線し、30℃で一晩インキュベートした。scFvクローン由来のVHおよびVL領域を増幅するために、これらのプレート由来の三連のコロニーをpCANTAB6ベクター配列オリゴを使用して配列決定した。Myo29、Myo28、およびMyo22のIgGの作製に使用したscFvフラグメントのDNA配列を、それぞれ配列番号13、配列番号7、および配列番号1に示す。
PCRおよびクローン特異的プライマーを使用して、scFvクローン由来の重鎖および軽鎖のV領域を増幅した。適切な制限酵素でPCR産物を消化し、ヒトIgG1重鎖定常ドメイン(VHドメインについて)を含むベクターまたは必要に応じてヒトλ軽鎖定常ドメイン(VLドメインについて)を含むベクターにサブクローン化した。各E.coliコロニー由来のプラスミドDNAの配列決定によってプラスミドへのV領域ドメインの正確な挿入を確認した。標準的技術によってE.coli培養物からプラスミドを調製し、標準的な技術を使用して重鎖および軽鎖構築物をCOS細胞に同時トランスフェクトした。プロテインAセファロ−ス(Pharmacia,Peapack,NJ)を使用して分泌IgGを精製し、緩衝液をPBSに交換した。
scFvクローンの配列データを使用して、各クローンの重鎖および軽鎖の最も近い生殖系列配列を同定した。適切な変異誘発プライマーを使用した標準的な部位特異的変異誘発技術を使用して適切に変異させた。配列分析によってscFv配列の変異を確認した。Myo28およびMyo29の生殖系列化scFvならびにVHおよびVLドメイン配列を、配列番号19および配列番号25にそれぞれ示す。
(実施例9:抗体の生物活性)
図3Aは、実施例3に記載のActRIIB結合アッセイにおいてMyo29の10ng/mlのビオチン化GDF−8とのプレインキュベーションにより、0.2〜0.4nMのIC50にてActRIIBへのGDF−8結合が阻害されることを示す。同様に図3Bでは、Myo29は同一のIC50でのActRIIBへのビオチン化BMP−11結合を阻害した。
図3Aは、実施例3に記載のActRIIB結合アッセイにおいてMyo29の10ng/mlのビオチン化GDF−8とのプレインキュベーションにより、0.2〜0.4nMのIC50にてActRIIBへのGDF−8結合が阻害されることを示す。同様に図3Bでは、Myo29は同一のIC50でのActRIIBへのビオチン化BMP−11結合を阻害した。
in vitroバイオアッセイにおいてMyo29はGDF−8活性も遮断した。例として、GDF−8をMyo29と室温で1時間プレインキュベートした場合、本質的に実施例2に記載のように実施したRGAアッセイで決定したところ、GDF−8の生物活性が減少した。図4Cは、Myo29の存在下におけるGDF−8のED50(20ng/ml)でのpGL3(CAGA)12レポーター活性の誘導を示す。Myo29は、15〜30ng/mlのIC50(0.1〜0.2nM)にて用量応答様式でGDF−8誘導を減少させた。Myo29は、同程度にBMP−11の生物活性も阻害した(図4B)。対照的に、本アッセイのアクチビン活性は、GDF−8およびBMP−11と比較してMyo29に影響を受けず(図4D)、これはおそらくGDF−8とアクチビンとの間の相同性が相対的に低いためである。
RGAおよびActRIIB結合アッセイにおいてMyo22およびMyo28も試験した。両抗体は、GDF−8およびBMP−11活性を遮断する。Myo28のIC50は、例えば、0.2〜0.35nMである。
(実施例10:Myo22、Myo28、およびMyo29のエピトープのマッピング)
抗体の正確なエピトープをマッピングするために、配列番号49に記載の成熟GDF−8の全配列を示す48の重複する13残基のペプチドを、スポット合成技術を使用してセルロースペーパー上で直接合成した(Molina et al.(1996)Peptide Research,9:151−155;Frank et al.(1992)Tetrahedron,48:9217−9232)。ペプチドの重複は11アミノ酸であった。このアレイでは、システインの存在によって生じる化学的な複雑さを減少させるために、システイン残基をセリンに置換した。ポリエチレングリコールで修飾したセルロースメンブレンおよびFmoc保護アミノ酸を、Abimed(Lagenfeld,Germany)から購入した。以前に記載のように、β−アラニンスペーサーのカップリングによってメンブレン上でアレイを定義し、ペプチドを標準的なDIC(ジイソプロピルカルボジイミド)/HOBt(ヒドロキシベンゾトリアゾール)カップリング化学を使用して合成した(Molina et al.(1996)Peptide Research,9:151−155;Frank et al.(1992)Tetrahedron,48:9217−9232)。
抗体の正確なエピトープをマッピングするために、配列番号49に記載の成熟GDF−8の全配列を示す48の重複する13残基のペプチドを、スポット合成技術を使用してセルロースペーパー上で直接合成した(Molina et al.(1996)Peptide Research,9:151−155;Frank et al.(1992)Tetrahedron,48:9217−9232)。ペプチドの重複は11アミノ酸であった。このアレイでは、システインの存在によって生じる化学的な複雑さを減少させるために、システイン残基をセリンに置換した。ポリエチレングリコールで修飾したセルロースメンブレンおよびFmoc保護アミノ酸を、Abimed(Lagenfeld,Germany)から購入した。以前に記載のように、β−アラニンスペーサーのカップリングによってメンブレン上でアレイを定義し、ペプチドを標準的なDIC(ジイソプロピルカルボジイミド)/HOBt(ヒドロキシベンゾトリアゾール)カップリング化学を使用して合成した(Molina et al.(1996)Peptide Research,9:151−155;Frank et al.(1992)Tetrahedron,48:9217−9232)。
活性化アミノ酸を、Abimed ASP 222ロボットを用いてスポットした。洗浄および脱保護工程を手動で行い、最終合成サイクル後にペプチドのN末端をアセチル化した。ペプチド合成後、メンブレンをメタノールで10分間洗浄し、ブロッカー(TBST(0.1%(v/v)Tween(商標)20を含むTris緩衝化生理食塩水)および1%(w/v)カゼイン)で10分間洗浄した。次いで、メンブレンを、2.5μg/mlの抗GDF−8抗体を含むブロッカーと穏やかに撹拌しながら1時間インキュベートした。ブロッカーでの10分間で3回の洗浄後、メンブレンをHRP標識二次抗体(0.25μg/mlを含むブロッカー)と30分間インキュベートした。次いで、メンブレンをブロッカーにて10分間ずつ3回およびTBSTにて10分間ずつ2回洗浄した。結合した抗体をSuperSignal(商標)West試薬(Pierce)およびデジタルカメラ(Alphananotech Fluoromager)を使用して視覚化した。結果を図5に示す。特に、図5で認められるように、Myo29のエピトープは、成熟GDF−8のアミノ酸72と88との間にマッピングされた。それに対して、Myo22は、成熟GDF−8配列の最初の44個のN末端アミノ酸(配列番号49のアミノ酸1〜44)内のエピトープを認識する。最後に、Myo28のエピトープは、成熟GDF−8の最初の98個のN末端アミノ酸内に存在する残基を含む。
Myo29エピトープをさらに特徴づけるために、スポット合成を使用して削除および置換分析を行った。置換分析では、ペプチドの各残基を個別にシステイン以外の20種の天然アミノ酸にそれぞれ置換した。上記のように、合成および結合アッセイを行った。結果を図6に示し、最初の行、最初の2つの列、および最後の3つの列は、野生型ペプチドコントロールを示す。結果は、Lys−78、Pro−81、およびAsn−83を個別に別のアミノ酸に変異させた場合、ペプチドに対するMyo29の結合親和性を有意に減少させることを示している。したがって、Myo29は、Lys−Xaa1−Xaa2−Pro−Xaa3−Asn(配列番号54)(Xaa1、Xaa2、およびXaa3はそれぞれ任意のアミノ酸のいずれかであるか、互いに独立して、Xaa1=Met、Xaa2=Ser、およびXaa3=Ile)を含む配列を認識する。
(実施例11:GDF−8の免疫沈降)
成熟GDF−8およびGDF−8複合体へのMyo29およびMyo28の結合を評価するために、免疫沈降研究を行った。GDF−8を発現するCHO細胞を、35S−メチオニンおよび35S−システインで標識した。GDF−8タンパク質(成熟GDF−8および潜在複合体)を含む100μlのこれらの細胞由来の馴化培地を、20μg/mlのMyo29またはMyo28と4℃で1時間インキュベートした。プロテインA−セファロ−ス(商標)を添加し、4℃で一晩インキュベートした。免疫沈降物を回収し、還元サンプル緩衝液中に再懸濁し、SDS−PAGEで分析した。ゲルを固定し、オ−トラジオグラフィ増強溶液で増強し、乾燥させ、オ−トラジグラム(autorad)を現像した。図7は、Myo29およびMyo28は成熟GDF−8、GDF−8潜在複合体、および非プロセシングGDF−8を免疫沈殿させることができることを示す。ウェスタンブロッティングによって決定したところ、両抗体は、非還元条件下でGDF−8二量体と結合する。
成熟GDF−8およびGDF−8複合体へのMyo29およびMyo28の結合を評価するために、免疫沈降研究を行った。GDF−8を発現するCHO細胞を、35S−メチオニンおよび35S−システインで標識した。GDF−8タンパク質(成熟GDF−8および潜在複合体)を含む100μlのこれらの細胞由来の馴化培地を、20μg/mlのMyo29またはMyo28と4℃で1時間インキュベートした。プロテインA−セファロ−ス(商標)を添加し、4℃で一晩インキュベートした。免疫沈降物を回収し、還元サンプル緩衝液中に再懸濁し、SDS−PAGEで分析した。ゲルを固定し、オ−トラジオグラフィ増強溶液で増強し、乾燥させ、オ−トラジグラム(autorad)を現像した。図7は、Myo29およびMyo28は成熟GDF−8、GDF−8潜在複合体、および非プロセシングGDF−8を免疫沈殿させることができることを示す。ウェスタンブロッティングによって決定したところ、両抗体は、非還元条件下でGDF−8二量体と結合する。
(実施例12:薬物動態学)
単回静脈内(IV)または腹腔内(IP)投与後のC57B6/SCIDマウスにおける1mg/kgの用量でのMyo29の薬物動態学(PK)を評価した。上記用量での非標識および125I標識Myo29の混合物を動物に投与し、血清中の125I放射能および注射用量の比活性に基づいて血清濃度を決定した。図8は、IVまたはIPのいずれかで投与したMyo29の時間に体する血清濃度のプロットを示す。
単回静脈内(IV)または腹腔内(IP)投与後のC57B6/SCIDマウスにおける1mg/kgの用量でのMyo29の薬物動態学(PK)を評価した。上記用量での非標識および125I標識Myo29の混合物を動物に投与し、血清中の125I放射能および注射用量の比活性に基づいて血清濃度を決定した。図8は、IVまたはIPのいずれかで投与したMyo29の時間に体する血清濃度のプロットを示す。
Myo29は、約1週間の長期末端半減期および約1ml/時間/kgの低クリアランスを示した。初期分布体積は、約83ml/kgであった。外見上の分布体積は、約227ml/kgであった。Myo29は、注射後約6時間でピーク濃度に達した。IP注射後に吸収した画分は、約77%であった。
(実施例13:筋肉量および強度に対するMyo29のin vivo効果)
Myo29がin vivoでGDF−8活性を遮断するかどうかを決定するために、成体SCIDマウスにおいてMyo29を試験した。SCIDマウスは、重症複合型免疫不全を罹患しているので、Myo29などのヒト抗体の注射後に免疫反応を起こさない。筋肉量は、Myo29で処置したマウスのGDF−8活性の指標として使用した。
Myo29がin vivoでGDF−8活性を遮断するかどうかを決定するために、成体SCIDマウスにおいてMyo29を試験した。SCIDマウスは、重症複合型免疫不全を罹患しているので、Myo29などのヒト抗体の注射後に免疫反応を起こさない。筋肉量は、Myo29で処置したマウスのGDF−8活性の指標として使用した。
8週齢の雄C57B6 SCIDマウスを秤量し、体重に関して均一に8つの群に分配した。Myo29を含むPBS緩衝液を、種々の用量(60、10、および1mg/kg)で毎週マウスに腹腔内注射した。最初の週は二重用量を投与した。賦形剤(PBS)で処置した、あるいは処置を行わなかったマウスをコントロールとして用いた。処置を4週間継続した。処置後に腓腹筋および大腿四頭筋を解剖および秤量することによって筋肉量を評価した。処置から4週間後、Myo29で処置した全ての群で筋肉量が10%〜23%の範囲で増加し、より高用量で処置した群は有意なレベルに達した(図9、p<0.01)。
別の実験では、雌CB17 SCIDマウスを、種々の用量(10、5、2.5、および1mg/kg)のMyo29で4週間または12週間毎週処置した。さらに、Myo29での4週間の処置により、腓腹筋および大腿四頭筋の重量が10%〜20%の範囲で増加した(図10Aおよび10B)。より長い処置(12週間)により、筋肉量がより増加し(12%〜28%)、Myo29で処置した全ての群は統計的に有意なレベルに達した(図11Aおよび11B)。
筋肉量の増加により筋肉がより強くなるかどうかを決定するために、前肢の筋肉の強度を、握力計(model 1027 csx,Columbus Instruments,Columbus,OH)で測定した。処置から12週間後、前肢強度は、賦形剤コントロールと比較して5mg/kgまたは10mg/kgのMyo29で処置したマウスでそれぞれ17%および23%高かった(p<0.01、図12)。この研究結果は、Myo29がin vivoでGDF−8活性を阻害して筋肉量および筋肉の強度を有意に増加させることを証明する。
(実施例14:代謝疾患の治療)
GDF−8のインヒビター(例えば、阻害抗体など)は、2型糖尿病、耐糖能障害、代謝症候群(例えば、X症候群)、外傷によるインスリン抵抗性(例えば、火傷または窒素不均衡)、および脂肪組織障害(例えば、肥満症)などの代謝障害の治療に有用である。本発明の抗GDF−8抗体を使用して、疾患を発症している被験体または確立された代謝疾患を有する被験体を治療する。
GDF−8のインヒビター(例えば、阻害抗体など)は、2型糖尿病、耐糖能障害、代謝症候群(例えば、X症候群)、外傷によるインスリン抵抗性(例えば、火傷または窒素不均衡)、および脂肪組織障害(例えば、肥満症)などの代謝障害の治療に有用である。本発明の抗GDF−8抗体を使用して、疾患を発症している被験体または確立された代謝疾患を有する被験体を治療する。
代謝障害(例えば、2型糖尿病および/肥満症)の治療のための抗GDF−8抗体の有効性を、肥満症、インスリン抵抗性、および2型糖尿病の確立されたマウスモデル(ob/ob、db/db、および致死性黄色症変異を有する株が含まれる)を使用して確認する。インスリン抵抗性を、一定のマウス株(C57BL/6Jが含まれる)の高脂肪または高カロリー飼料によって誘導することもできる。ヒトと同様に、これらのげっ歯類は、インスリン抵抗性、高インスリン血症、異常脂質血症、および高血糖症を発症するグルコースホメオスタシスの悪化を発症する。結果の評価は、血清中のグルコース、インスリン、および脂質の測定に基づく。インスリン抵抗性試験およびグルコース負荷試験によってインスリン感度の改良を測定することができる。より感度の高い技術には、血糖コントロールおよびインスリン感度の改善を評価するためのオイグリセミック高インスリン血症クランプの使用が含まれる。さらに、クランプ技術により、改良された血糖コントロールにおける主なグルコース処理組織(筋肉、脂肪、および肝臓)の役割が定量的に評価可能である。
1つの研究では、1週間から6ヶ月間Myo29(IP注射)などの抗GDF−8抗体または賦形剤での処置を行う。治療プロトコールは、異なる用量の試験および治療計画(例えば、毎日、毎週、2週間毎の注射)によって変化し得る。抗GDF−8抗体で処置したマウスは、プラシーボ処置を受けたマウスと比較して、グルコース取り込みが増加し、解糖およびグリコーゲン合成が増加し、血清中の遊離脂肪酸およびトリグリセリドが低下すると予想される。
また、GDF−8に対する阻害抗体を使用して、疾患の重症度および/または症状を予防および/または軽減する。抗GDF−8抗体を1日1回の頻度および1ヶ月に1回の頻度の皮下注射として投与することが予想される。治療継続期間は、1ヶ月から数年までの範囲であり得る。
ヒトにおける抗GDF−8の臨床効果を試験するために、2型糖尿病を罹患しているかリスクのある被験体を同定し、無作為に治療群に分けた。治療群は、プラシーボ群および抗体(異なる用量)を投与された1〜3つの群を含む。個体のグルコース代謝の変化を評価するために1ヶ月〜3年間予測的に追跡する。処置を受けた個体は改善すると予想される。
唯一の活性化合物として、又は別の化合物または組成物と組み合わせて、抗体を投与する。唯一の活性化合物として、又は別の化合物または組成物と組み合わせて投与した場合、投薬量は、好ましくは、疾患の症状の重症度および進行に依存して約1μg/kg〜20mg/kgである。適切な有効用量を、治療を行う医師によって以下の範囲から選択される:1μg/kg〜20mg/kg、1μg/kg〜10mg/kg、1μg/kg〜1mg/kg、10μg/kg〜1mg/kg、10μg/kg〜100μg/kg、100μg/kg〜1mg/kg、および500μg/kg〜1mg/kg。治療計画の例および結果を表3にまとめる。
Claims (81)
- 単離抗体またはそのフラグメントであって、以下:
a)配列番号14、配列番号26、あるいは14のフラグメントまたは配列番号26のフラグメント;
b)配列番号8、配列番号20、あるいは配列番号8のフラグメントまたは配列番号20のフラグメント;
c)配列番号2または配列番号2のフラグメント
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、
ここで、該抗体またはそのフラグメントは、GDF−8またはBMP−11と特異的に結合することができる、単離抗体。 - 配列番号16、配列番号18、配列番号30、配列番号31、配列番号32、配列番号33、配列番号34、配列番号35および配列番号36のいずれか1つのアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記抗体が、ATCC受託番号PTA−4741、PTA−4740、またはPTA−4739のE.coliによって発現するscFvフラグメントである、請求項1に記載の抗体。
- 前記抗体が、配列番号54に記載のアミノ酸配列を含むタンパク質と特異的に結合することができる、請求項1に記載の抗体。
- 配列番号54が、
(a)配列番号54の2番目のアミノ酸がメチオニンである、
(b)配列番号54の3番目のアミノ酸がセリンである、および
(c)配列番号54の5番目のアミノ酸がイソロイシンである、
のうちの少なくとも1つによって特徴づけられる、請求項4に記載の抗体。 - 前記抗体がヒト抗体である、請求項1に記載の抗体。
- 前記抗体がIgG1またはIgG4である、請求項1に記載の抗体。
- 前記抗体のアミノ酸配列が、エフェクター機能を低下または変化させるように修飾された、請求項1に記載の抗体。
- 前記アミノ酸配列が、配列番号53のアミノ酸117またはアミノ酸120に対応する残基で修飾された、請求項8に記載の抗体。
- 前記抗体がIgG1λまたはIgG1κである、請求項1に記載の抗体。
- 請求項1に記載の抗体を含む、薬学的組成物。
- 有効用量の請求項11に記載の薬学的組成物を含む、治療用組成物。
- 筋肉障害、神経筋障害、および骨変性障害から選択される障害の治療または予防のための、請求項12に記載の組成物。
- 筋ジストロフィー、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、筋萎縮症、組織萎縮症、手根管症候群、鬱血性閉塞性肺疾患、サルコペニア、悪液質、筋消耗症候群、および筋萎縮性側索硬化症から選択される障害の治療または予防のための、請求項12に記載の組成物。
- デュシェンヌ型筋ジストロフィーの治療または予防のための、請求項12に記載の組成物。
- 肥満症および脂肪組織障害から選択される障害の治療または予防のための、請求項12に記載の組成物。
- X症候群、耐糖能障害、外傷誘導性インスリン抵抗性、および2型糖尿病から選択される障害の治療または予防のための、請求項12に記載の組成物。
- 2型糖尿病の治療または予防のための、請求項12に記載の組成物。
- 肥満症の治療または予防のための、請求項12に記載の組成物。
- 損傷した筋肉の修復のための、請求項12に記載の組成物。
- 前記損傷した筋肉が心筋である、請求項20に記載の組成物。
- 前記損傷した筋肉が横隔膜である、請求項20に記載の組成物。
- 前記抗体が、1μg/kg〜150mg/kg、1μg/kg〜100mg/kg、1μg/kg〜50mg/kg、1μg/kg〜20mg/kg、1μg/kg〜10mg/kg、1μg/kg〜1mg/kg、10μg/kg〜1mg/kg、10μg/kg〜100μg/kg、100μg〜1mg/kg、および500μg/kg〜1mg/kgから選択される有効用量での投与に適している、請求項12に記載の組成物。
- 請求項1に記載の抗体をコードする単離核酸。
- 請求項24に記載の核酸を含む、発現ベクター。
- 請求項25に記載のベクターを含む、宿主細胞。
- 前記宿主細胞が、ATCC受託番号PTA−4741、PTA−4740、またはPTA−4739のE.coliである、請求項26に記載の宿主細胞。
- 前記核酸が、配列番号13、配列番号15、配列番号17、配列番号25、配列番号27および配列番号29からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項24に記載の核酸。
- GDF−8と特異的に反応する抗体の作製方法であって、該方法は、
(a)置換されるべきCDR3を含む可変ドメインかまたはCDR3コード領域を欠く可変ドメインをコードする核酸の出発レパートリーを提供する工程と
(b)可変ドメインをコードする核酸の産物レパートリーを提供するために該レパートリー中のCDR3領域にドナー核酸が挿入されるように、該レパートリーと実質的に配列番号n(nは31〜48の整数である)に記載のアミノ酸配列をコードするドナー核酸とを組み合わせる工程と
(c)該産物レパートリーの核酸を発現する工程と、
(d)GDF−8に特異的な特異的抗原結合フラグメントを選択する工程と、
(e)該特異的抗原結合フラグメントまたは該結合フラグメントをコードする核酸を回収する工程とを含む、方法。 - 請求項29に記載の方法によって産生された抗体。
- (a)請求項1に記載の抗体およびGDF−8を含む第1の結合混合物を調製する工程と、
(b)該第1の混合物中の該抗体とGDF−8との間の結合量を測定する工程と、
(c)抗体、GDF−8、試験化合物を含む第2の結合混合物を調製する工程と、
(d)該第2の混合物中の該抗体とGDF−8との間の結合量を測定する工程とを含む、GDF−8のインヒビターの同定方法。 - 治療有効量の請求項1に記載の抗体を含む、筋肉の強度または量を増大させるための組成物。
- GDF−8に対する単離抗体であって、該抗体が、GDF−8のActRIIBへの結合を阻害することができる、抗体。
- 配列番号14、配列番号8、配列番号2、配列番号26、配列番号20、あるいは配列番号14のフラグメント、配列番号8のフラグメント、配列番号2のフラグメント、配列番号26のフラグメント、または配列番号20のフラグメントのアミノ酸配列を含む、請求項33に記載の抗体。
- 治療有効量の請求項33に記載の抗体を含む、筋肉の強度を増大させるための組成物。
- 前記抗体が、BMP−11と特異的に結合することができる、請求項33に記載の抗体。
- ATCC受託番号PTA−4741、PTA−4740、またはPTA−4739のE.coliを培養する工程と、抗体を回収する工程を含む、抗体の作製方法。
- Myo29、Myo28、またはMyo22のsvFvをコードする核酸を免疫グロブリンのFc部分をコードする核酸と融合する工程と、細胞中で前記融合核酸を発現させる工程とをさらに含む、請求項37に記載の方法。
- 前記融合核酸を生殖系列化する工程をさらに含む、請求項38に記載の方法。
- 請求項39に記載の方法を使用して作製された抗体。
- 配列番号54に記載のアミノ酸配列によって特徴づけられたエピトープと特異的に結合することができる抗体。
- 哺乳動物の筋肉、骨、またはグルコースホメオスタシスの少なくとも1つの障害の治療または予防のための薬物の調製のための請求項1〜請求項10、請求項30、請求項33、請求項34、請求項36、請求項40および請求項41のいずれか1項に記載の抗体の使用。
- 前記哺乳動物がヒトである、請求項42に記載の使用。
- 前記障害が神経筋障害である、請求項42に記載の使用。
- 前記障害が、筋ジストロフィー、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、筋萎縮症、組織萎縮症、手根管症候群、鬱血性閉塞性肺疾患、サルコペニア、悪液質、筋消耗症候群、または筋萎縮性側索硬化症である、請求項42に記載の使用。
- 前記障害が肥満症または脂肪組織障害である、請求項42に記載の使用。
- 前記障害がX症候群、耐糖能障害、外傷誘導性インスリン抵抗性、または2型糖尿病である、請求項42に記載の使用。
- 哺乳動物における、(a)筋肉損傷の修復、(b)筋肉の量または強度の増大、および(c)耐糖能の増大の少なくとも1つのための薬物の調製のための、請求項1〜請求項10、請求項30、請求項33、請求項34、請求項36、請求項40、および請求項41のいずれか1項に記載の抗体の使用。
- (a)の前記損傷した筋肉が、心筋または横隔膜である、請求項48に記載の使用。
- 」 前記抗体が、1μg/kg〜150mg/kg、1μg/kg〜100mg/kg、1μg/kg〜50mg/kg、1μg/kg〜20mg/kg、1μg/kg〜10mg/kg、1μg/kg〜1mg/kg、10μg/kg〜1mg/kg、10μg/kg〜100μg/kg、100μg〜1mg/kg、および500μg/kg〜1mg/kgから選択される有効用量で哺乳動物に投与される、請求項45〜49のいずれか1項に記載の使用。
- 前記配列番号14のフラグメントが、配列番号14のアミノ酸1〜117(配列番号16)を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記配列番号14のフラグメントが、配列番号14のアミノ酸135〜239(配列番号18)を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記配列番号14のフラグメントが、配列番号14のアミノ酸31〜35(配列番号31)を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記配列番号14のフラグメントが、配列番号14のアミノ酸50〜66(配列番号32)を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記配列番号14のフラグメントが、配列番号14のアミノ酸99〜106(配列番号33)を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記配列番号14のフラグメントが、配列番号14のアミノ酸157〜167(配列番号34)を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記配列番号14のフラグメントが、配列番号14のアミノ酸183〜189(配列番号35)を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記配列番号14のフラグメントが、配列番号14のアミノ酸222〜228(配列番号36)を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記配列番号26のフラグメントが、配列番号26のアミノ酸135〜239(配列番号30)を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記配列番号8のフラグメントが、配列番号8のアミノ酸1〜121(配列番号10)を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記配列番号8のフラグメントが、配列番号8のアミノ酸138〜248(配列番号12)を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記配列番号8のフラグメントが、配列番号8のアミノ酸31〜35(配列番号37)を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記配列番号8のフラグメントが、配列番号8のアミノ酸50〜66(配列番号38)を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記配列番号8のフラグメントが、配列番号8のアミノ酸99〜110(配列番号39)を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記配列番号8のフラグメントが、配列番号8のアミノ酸160〜173(配列番号40)を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記配列番号8のフラグメントが、配列番号8のアミノ酸189〜195(配列番号41)を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記配列番号8のフラグメントが、配列番号8のアミノ酸228〜233(配列番号42)を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記配列番号20のフラグメントが、配列番号20のアミノ酸1〜121(配列番号22)を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記配列番号20のフラグメントが、配列番号20のアミノ酸138〜248(配列番号24)を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記配列番号2のフラグメントが、配列番号2のアミノ酸1〜124(配列番号4)を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記配列番号2のフラグメントが、配列番号2のアミノ酸141〜252(配列番号6)を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記配列番号2のフラグメントが、配列番号2のアミノ酸31〜35(配列番号43)を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記配列番号2のフラグメントが、配列番号2のアミノ酸50〜66(配列番号44)を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記配列番号2のフラグメントが、配列番号2のアミノ酸99〜113(配列番号45)を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記配列番号2のフラグメントが、配列番号2のアミノ酸163〜176(配列番号46)を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記配列番号2のフラグメントが、配列番号2のアミノ酸192〜198(配列番号47)を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記配列番号2のフラグメントが、配列番号2のアミノ酸231〜242(配列番号48)を含む、請求項1に記載の抗体。
- 配列番号10、配列番号12、配列番号22、配列番号24、配列番号37、配列番号38、配列番号39、配列番号40、配列番号41および配列番号42のうちのいずれか1つのアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の抗体。
- 配列番号4、配列番号6、配列番号43、配列番号44、配列番号45、配列番号46、配列番号47および配列番号48のうちのいずれか1つのアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記核酸が、配列番号7、配列番号9、配列番号11、配列番号19、配列番号21および配列番号23からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む請求項24に記載の核酸。
- 前記核酸が、配列番号1、配列番号3および配列番号5からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項24に記載の核酸。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US41996402P | 2002-10-22 | 2002-10-22 | |
US60/419,964 | 2002-10-22 | ||
PCT/IB2003/004748 WO2004037861A2 (en) | 2002-10-22 | 2003-10-22 | Neutralizing antibodies against gdf-8 and uses therefor |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010019767A Division JP5419738B2 (ja) | 2002-10-22 | 2010-01-29 | Gdf−8に対する中和抗体およびそれらの使用 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2006519583A JP2006519583A (ja) | 2006-08-31 |
JP2006519583A5 true JP2006519583A5 (ja) | 2006-12-21 |
JP4886986B2 JP4886986B2 (ja) | 2012-02-29 |
Family
ID=32176491
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2004546306A Expired - Fee Related JP4886986B2 (ja) | 2002-10-22 | 2003-10-22 | Gdf−8に対する中和抗体およびそれらの使用 |
JP2010019767A Expired - Fee Related JP5419738B2 (ja) | 2002-10-22 | 2010-01-29 | Gdf−8に対する中和抗体およびそれらの使用 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010019767A Expired - Fee Related JP5419738B2 (ja) | 2002-10-22 | 2010-01-29 | Gdf−8に対する中和抗体およびそれらの使用 |
Country Status (23)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US7261893B2 (ja) |
EP (1) | EP1554312B1 (ja) |
JP (2) | JP4886986B2 (ja) |
KR (2) | KR20050049558A (ja) |
CN (3) | CN100374465C (ja) |
AR (1) | AR047392A1 (ja) |
AU (1) | AU2003274448B2 (ja) |
BR (1) | BR0315598A (ja) |
CA (1) | CA2500490A1 (ja) |
CR (1) | CR7786A (ja) |
EC (2) | ECSP055739A (ja) |
ES (1) | ES2535872T3 (ja) |
IL (2) | IL207924A0 (ja) |
IS (1) | IS7770A (ja) |
MX (1) | MXPA05004225A (ja) |
NO (1) | NO20052242L (ja) |
NZ (1) | NZ539084A (ja) |
RU (1) | RU2360925C2 (ja) |
SG (1) | SG178619A1 (ja) |
TW (3) | TW200423958A (ja) |
UA (1) | UA91815C2 (ja) |
WO (1) | WO2004037861A2 (ja) |
ZA (1) | ZA200503249B (ja) |
Families Citing this family (123)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
TWI329129B (en) * | 2001-02-08 | 2010-08-21 | Wyeth Corp | Modified and stabilized gdf propeptides and uses thereof |
US7320789B2 (en) | 2001-09-26 | 2008-01-22 | Wyeth | Antibody inhibitors of GDF-8 and uses thereof |
WO2003072714A2 (en) * | 2002-02-21 | 2003-09-04 | Wyeth | Follistatin domain containing proteins |
JP4429729B2 (ja) | 2002-02-21 | 2010-03-10 | ワイス エルエルシー | Gasp1;フォリスタチンドメイン含有タンパク質 |
US7601351B1 (en) | 2002-06-26 | 2009-10-13 | Human Genome Sciences, Inc. | Antibodies against protective antigen |
CA2490280A1 (en) | 2002-07-01 | 2004-01-08 | Human Genome Sciences, Inc. | Antibodies that specifically bind to reg iv |
US20040138118A1 (en) * | 2002-09-16 | 2004-07-15 | Neil Wolfman | Metalloprotease activation of myostatin, and methods of modulating myostatin activity |
US7261893B2 (en) * | 2002-10-22 | 2007-08-28 | Wyeth | Neutralizing antibodies against GDF-8 and uses therefor |
US20040223966A1 (en) * | 2002-10-25 | 2004-11-11 | Wolfman Neil M. | ActRIIB fusion polypeptides and uses therefor |
ATE496938T1 (de) | 2002-12-20 | 2011-02-15 | Amgen Inc | Myostatin hemmende bindungsstoffe |
EP1635870A2 (en) * | 2003-06-02 | 2006-03-22 | Wyeth | Use of myostatin (gdf8) inhibitors in conjunction with corticosteroids for treating neuromuscular disorders |
AU2004259398A1 (en) | 2003-06-27 | 2005-02-03 | Amgen Fremont Inc. | Antibodies directed to the deletion mutants of epidermal growth factor receptor and uses thereof |
DK2332977T3 (en) * | 2004-07-23 | 2016-02-29 | Acceleron Pharma Inc | ActRII receptor polypeptides |
WO2006017647A1 (en) | 2004-08-03 | 2006-02-16 | Transtech Pharma, Inc. | Rage fusion proteins and methods of use |
BRPI0514253A (pt) * | 2004-08-12 | 2008-06-03 | Wyeth Corp | terapia de combinação para diabetes, obesidade e doenças cardiovasculares usando composições contendo inibidores de gdf-8 |
TWI384069B (zh) | 2004-08-27 | 2013-02-01 | Pfizer Ireland Pharmaceuticals | 多胜肽之製法 |
US7335491B2 (en) | 2004-08-27 | 2008-02-26 | Wyeth Research Ireland Limited | Production of anti-abeta |
TWI364458B (en) | 2004-08-27 | 2012-05-21 | Wyeth Res Ireland Ltd | Production of tnfr-lg |
NZ538097A (en) * | 2005-02-07 | 2006-07-28 | Ovita Ltd | Method and compositions for improving wound healing |
JP2008537488A (ja) * | 2005-03-23 | 2008-09-18 | ワイス | Gdf−8モジュレート物質の検出 |
CA2601086A1 (en) * | 2005-03-23 | 2006-10-12 | Wyeth | Detection of an immune response to gdf-8 modulating agents |
MX2007013217A (es) * | 2005-04-25 | 2008-03-11 | Pfizer | Anticuerpos contra miostatina. |
CN103450359B (zh) | 2005-08-19 | 2018-07-24 | 惠氏有限责任公司 | 抗gdf-8的拮抗剂抗体以及在als和其他gdf-8-相关病症治疗中的用途 |
EP1951756B1 (en) * | 2005-10-06 | 2015-01-07 | Eli Lilly And Company | Anti-myostatin antibodies |
UA92504C2 (en) * | 2005-10-12 | 2010-11-10 | Эли Лилли Энд Компани | Anti-myostatin monoclonal antibody |
CA3045808C (en) | 2005-11-23 | 2022-08-16 | Acceleron Pharma, Inc. | Activin-actriia antagonists and uses for promoting bone growth |
US8128933B2 (en) | 2005-11-23 | 2012-03-06 | Acceleron Pharma, Inc. | Method of promoting bone growth by an anti-activin B antibody |
EP1968621A2 (en) * | 2005-12-06 | 2008-09-17 | Amgen Inc. | Uses of myostatin antagonists |
US7390786B2 (en) * | 2005-12-21 | 2008-06-24 | Wyeth | Protein formulations with reduced viscosity and uses thereof |
ES2568436T3 (es) | 2006-03-31 | 2016-04-29 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Procedimiento para controlar la farmacocinética en sangre de anticuerpos |
PT2066695E (pt) * | 2006-09-05 | 2013-05-23 | Lilly Co Eli | Anticorpos anti-miostatina |
CN101511387A (zh) * | 2006-09-08 | 2009-08-19 | 惠氏公司 | 使用亲和色谱法纯化蛋白质的精氨酸洗涤液 |
KR20090069330A (ko) * | 2006-10-12 | 2009-06-30 | 와이어쓰 | 유백광/응집체를 감소시키기 위한 항체 용액 중의 이온 강도의 변화 |
MX2009004519A (es) | 2006-11-03 | 2009-05-12 | Wyeth Corp | Sustancias que inhiben la glucolisis en un cultivo de celulas. |
US20100028332A1 (en) * | 2006-12-18 | 2010-02-04 | Acceleron Pharma Inc. | Antagonists of actriib and uses for increasing red blood cell levels |
US8895016B2 (en) | 2006-12-18 | 2014-11-25 | Acceleron Pharma, Inc. | Antagonists of activin-actriia and uses for increasing red blood cell levels |
CN104524548A (zh) * | 2006-12-18 | 2015-04-22 | 阿塞勒隆制药公司 | 活化素-actrii拮抗剂及在提高红细胞水平中的用途 |
ES2415666T3 (es) * | 2007-02-01 | 2013-07-26 | Acceleron Pharma, Inc. | Composiciones farmacéuticas que comprenden antagonistas de Activina-ActRIIa para uso en la prevención o el tratamiento de metástasis de cáncer de mama o pérdida ósea relacionada con el cáncer de mama |
TW201907946A (zh) | 2007-02-02 | 2019-03-01 | 美商艾瑟勒朗法瑪公司 | 衍生自ActRIIB的變體與其用途 |
EP2484372A1 (en) * | 2007-02-09 | 2012-08-08 | Acceleron Pharma, Inc. | Activin-ActRIIa Antagonists and Uses for Promoting Bone Growth in Cancer Patients |
LT2170396T (lt) | 2007-08-03 | 2017-03-10 | Summit (Oxford) Limited | Vaistų deriniai, skirti diušeno raumenų distrofijos gydymui |
GB0715087D0 (en) | 2007-08-03 | 2007-09-12 | Summit Corp Plc | Drug combinations for the treatment of duchenne muscular dystrophy |
JOP20080381B1 (ar) | 2007-08-23 | 2023-03-28 | Amgen Inc | بروتينات مرتبطة بمولدات مضادات تتفاعل مع بروبروتين كونفيرتاز سيتيليزين ككسين من النوع 9 (pcsk9) |
CA2699936A1 (en) * | 2007-09-18 | 2009-03-26 | Acceleron Pharma Inc. | Activin-actriia antagonists and uses for decreasing or inhibiting fsh secretion |
EP3689912A1 (en) | 2007-09-26 | 2020-08-05 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Method of modifying isoelectric point of antibody via amino acid substitution in cdr |
KR100857861B1 (ko) * | 2007-10-15 | 2008-09-11 | 주식회사 바이오리더스 | Myo-2 펩타이드 중합체와 마이오스타틴의 융합단백질표면발현용 벡터 및 상기 벡터로 형질전환된 미생물 |
PE20091163A1 (es) | 2007-11-01 | 2009-08-09 | Wyeth Corp | Anticuerpos para gdf8 |
EP4238993A3 (en) | 2008-04-11 | 2023-11-29 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antigen-binding molecule capable of binding to two or more antigen molecules repeatedly |
WO2009158025A2 (en) * | 2008-06-26 | 2009-12-30 | Acceleron Pharma Inc. | Methods for dosing an actriib antagonist and monitoring of treated patients |
US8216997B2 (en) | 2008-08-14 | 2012-07-10 | Acceleron Pharma, Inc. | Methods for increasing red blood cell levels and treating anemia using a combination of GDF traps and erythropoietin receptor activators |
HRP20230761T1 (hr) | 2008-08-14 | 2023-10-13 | Acceleron Pharma Inc. | Gdf zamke |
TWI516501B (zh) | 2008-09-12 | 2016-01-11 | 禮納特神經系統科學公司 | Pcsk9拮抗劑類 |
AR074777A1 (es) * | 2008-12-19 | 2011-02-09 | Glaxo Group Ltd | Proteinas de union a antigeno |
US8138142B2 (en) * | 2009-01-13 | 2012-03-20 | Acceleron Pharma Inc. | Methods for increasing adiponectin in a patient in need thereof |
RU2011142230A (ru) | 2009-04-20 | 2013-05-27 | Пфайзер Инк. | Контроль гликозилирования белка и композиции и способы, касающиеся этого |
AU2010258931B2 (en) | 2009-06-08 | 2015-04-23 | Acceleron Pharma Inc. | Methods for increasing thermogenic adipocytes |
US8293881B2 (en) | 2009-06-12 | 2012-10-23 | Acceleron Pharma Inc. | Isolated nucleic acid encoding a truncated ActRIIB fusion protein |
CN102781518A (zh) * | 2009-09-09 | 2012-11-14 | 阿塞勒隆制药公司 | Actriib拮抗剂及其给药和用途 |
WO2011056896A1 (en) * | 2009-11-03 | 2011-05-12 | Acceleron Pharma Inc. | Methods for treating fatty liver disease |
ES2658292T3 (es) | 2009-11-17 | 2018-03-09 | Acceleron Pharma, Inc. | Proteínas ActRIIB y variantes y usos de las mismas con respecto a la inducción de la utrofina para el tratamiento de la distrofia muscular |
JO3340B1 (ar) * | 2010-05-26 | 2019-03-13 | Regeneron Pharma | مضادات حيوية لـعامل تمايز النمو 8 البشري |
AR081556A1 (es) * | 2010-06-03 | 2012-10-03 | Glaxo Group Ltd | Proteinas de union al antigeno humanizadas |
EP2606066A1 (en) | 2010-08-16 | 2013-06-26 | Amgen Inc. | Antibodies that bind myostatin, compositions and methods |
EP2638065A4 (en) | 2010-11-08 | 2014-04-09 | Acceleron Pharma Inc | ACTRIIA BINDING AGENTS AND USES THEREOF |
SG190727A1 (en) | 2010-11-30 | 2013-07-31 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Antigen-binding molecule capable of binding to plurality of antigen molecules repeatedly |
SG191977A1 (en) * | 2011-02-01 | 2013-08-30 | Genmab As | Human antibodies and antibody-drug conjugates against cd74 |
AU2012283858C1 (en) | 2011-07-20 | 2020-01-23 | Zepteon, Incorporated | Polypeptide separation methods |
KR20170021919A (ko) | 2011-10-21 | 2017-02-28 | 화이자 인코포레이티드 | 철을 첨가하여 세포 배양을 개선하는 방법 |
WO2013074557A1 (en) * | 2011-11-14 | 2013-05-23 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for increasing muscle mass and muscle strength by specifically antagonizing gdf8 and/or activin a |
US20130184351A1 (en) * | 2011-12-21 | 2013-07-18 | Jar Laboratories | Lidocaine patch and methods of use thereof |
US20130281355A1 (en) | 2012-04-24 | 2013-10-24 | Genentech, Inc. | Cell culture compositions and methods for polypeptide production |
EP2861617A1 (en) * | 2012-06-15 | 2015-04-22 | Pfizer Inc. | Improved antagonist antibodies against gdf-8 and uses therefor |
RS60318B1 (sr) | 2012-08-01 | 2020-07-31 | Ikaika Therapeutics Llc | Ublažavanje tkivnog oštećenja i fibroze pomoću anti-ltbp4 antitela |
TWI697501B (zh) | 2012-08-24 | 2020-07-01 | 日商中外製藥股份有限公司 | FcγRIIb特異性Fc區域變異體 |
JP6774164B2 (ja) | 2012-08-24 | 2020-10-21 | 中外製薬株式会社 | マウスFcγRII特異的Fc抗体 |
CN104768969B (zh) | 2012-09-13 | 2021-04-16 | 百时美施贵宝公司 | 结合至肌生成抑制素的基于纤连蛋白的支架结构域蛋白 |
CN112957462A (zh) | 2012-10-24 | 2021-06-15 | 细胞基因公司 | 用于治疗贫血的方法 |
WO2014071158A1 (en) | 2012-11-02 | 2014-05-08 | Celgene Corporation | Activin-actrii antagonists and uses for treating bone and other disorders |
WO2014163101A1 (ja) | 2013-04-02 | 2014-10-09 | 中外製薬株式会社 | Fc領域改変体 |
EP3816625A1 (en) | 2013-05-06 | 2021-05-05 | Scholar Rock, Inc. | Compositions and methods for growth factor modulation |
TW201920262A (zh) | 2013-07-30 | 2019-06-01 | 美商再生元醫藥公司 | 抗活化素a之抗體及其用途 |
US8986694B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-03-24 | Kymab Limited | Targeting human nav1.7 variants for treatment of pain |
US9034332B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-05-19 | Kymab Limited | Precision medicine by targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment |
US9914769B2 (en) | 2014-07-15 | 2018-03-13 | Kymab Limited | Precision medicine for cholesterol treatment |
US8986691B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-03-24 | Kymab Limited | Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA |
US8883157B1 (en) | 2013-12-17 | 2014-11-11 | Kymab Limited | Targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment |
US8945560B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-02-03 | Kymab Limited | Method of treating rheumatoid arthritis using antibody to IL6R |
US9023359B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-05-05 | Kymab Limited | Targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment |
US8980273B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-03-17 | Kymab Limited | Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA |
US9045548B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-06-02 | Kymab Limited | Precision Medicine by targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment |
US9045545B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-06-02 | Kymab Limited | Precision medicine by targeting PD-L1 variants for treatment of cancer |
US8992927B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-03-31 | Kymab Limited | Targeting human NAV1.7 variants for treatment of pain |
US9017678B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-04-28 | Kymab Limited | Method of treating rheumatoid arthritis using antibody to IL6R |
US9051378B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-06-09 | Kymab Limited | Targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment |
US9067998B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-06-30 | Kymab Limited | Targeting PD-1 variants for treatment of cancer |
GB201403775D0 (en) | 2014-03-04 | 2014-04-16 | Kymab Ltd | Antibodies, uses & methods |
CA2951926C (en) | 2014-06-13 | 2023-01-10 | Acceleron Pharma, Inc. | Methods and compositions for treating ulcers |
US9150660B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-10-06 | Kymab Limited | Precision Medicine by targeting human NAV1.8 variants for treatment of pain |
US9139648B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-09-22 | Kymab Limited | Precision medicine by targeting human NAV1.9 variants for treatment of pain |
MA41052A (fr) | 2014-10-09 | 2017-08-15 | Celgene Corp | Traitement d'une maladie cardiovasculaire à l'aide de pièges de ligands d'actrii |
JP6706617B2 (ja) | 2014-11-06 | 2020-06-10 | スカラー ロック インコーポレイテッドScholar Rock,Inc. | 抗プロ/潜在型−ミオスタチン抗体およびその使用 |
ES2946160T3 (es) | 2014-12-03 | 2023-07-13 | Celgene Corp | Antagonistas de activina-ActRII y usos para tratar síndrome mielodisplásico |
TWI808330B (zh) * | 2014-12-19 | 2023-07-11 | 日商中外製藥股份有限公司 | 抗肌抑素之抗體、含變異Fc區域之多胜肽及使用方法 |
TW202248212A (zh) | 2015-02-05 | 2022-12-16 | 日商中外製藥股份有限公司 | 包含離子濃度依賴之抗原結合域的抗體、Fc區變體、IL-8結合抗體與其用途 |
EP3256148A1 (en) | 2015-02-12 | 2017-12-20 | INSERM - Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale | Methods for predicting the responsiveness of a patient affected with malignant hematological disease to chemotherapy treatment and methods of treatment of such disease |
EP3283519A1 (en) | 2015-04-15 | 2018-02-21 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of increasing strength and functionality with gdf8 inhibitors |
US9902772B2 (en) | 2015-07-22 | 2018-02-27 | Sorrento Therapeutics, Inc. | Antibody therapeutics that bind LAG3 |
EA038146B1 (ru) * | 2015-09-15 | 2021-07-13 | Сколар Рок, Инк. | Антитела к про-/латентному миостатину и их применения |
WO2017104783A1 (en) * | 2015-12-18 | 2017-06-22 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Anti-myostatin antibodies, polypeptides containing variant fc regions, and methods of use |
EP3394098A4 (en) * | 2015-12-25 | 2019-11-13 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | ANTI-MYOSTATIN ANTIBODIES AND METHODS OF USE |
JP2019504064A (ja) | 2016-01-08 | 2019-02-14 | スカラー ロック インコーポレイテッドScholar Rock,Inc. | 抗プロ/潜在型ミオスタチン抗体およびその使用方法 |
PT3368069T (pt) | 2016-06-13 | 2020-11-11 | Scholar Rock Inc | Uso de inibidores da miostatina e terapias de combinação |
MY193497A (en) | 2016-06-17 | 2022-10-17 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Anti-myostatin antibodies and methods of use |
EP3494991A4 (en) | 2016-08-05 | 2020-07-29 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | COMPOSITION FOR PREVENTING OR TREATING DISEASES RELATING TO IL-8 |
WO2018083248A1 (en) | 2016-11-03 | 2018-05-11 | Kymab Limited | Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses & methods |
ES2944357T3 (es) | 2017-01-06 | 2023-06-20 | Scholar Rock Inc | Tratamiento de enfermedades metabólicas inhibiendo la activación de miostatina |
MX2020008991A (es) | 2018-03-01 | 2020-12-10 | Regeneron Pharma | Metodos para alterar la composicion corporal. |
JP7319348B2 (ja) | 2018-07-19 | 2023-08-01 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | 二重特異性抗bcma×抗cd3抗体およびそれらの使用 |
MX2021007394A (es) | 2018-12-18 | 2021-07-15 | Regeneron Pharma | Composiciones y metodos para aumentar el peso corporal y la masa muscular magra mediante el uso de antagonistas contra el receptor de leptina, gdf8 y activina a. |
AU2019406214A1 (en) | 2018-12-21 | 2021-08-05 | Northwestern University | Use of annexins in preventing and treating muscle membrane injury |
WO2020139977A1 (en) | 2018-12-26 | 2020-07-02 | Northwestern University | Use of glucocorticoid steroids in preventing and treating conditions of muscle wasting, aging and metabolic disorder |
MX2023001238A (es) * | 2020-07-31 | 2023-03-03 | Glaxosmithkline Ip Dev Ltd | Proteina de union a antigeno. |
WO2024064842A1 (en) | 2022-09-21 | 2024-03-28 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treating obesity, diabetes, and liver dysfunction |
Family Cites Families (51)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6162896A (en) * | 1991-05-10 | 2000-12-19 | The Salk Institute For Biological Studies | Recombinant vertebrate activin receptors |
JP4124480B2 (ja) | 1991-06-14 | 2008-07-23 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | 免疫グロブリン変異体 |
US5824307A (en) * | 1991-12-23 | 1998-10-20 | Medimmune, Inc. | Human-murine chimeric antibodies against respiratory syncytial virus |
AU677623B2 (en) | 1992-12-11 | 1997-05-01 | Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The | Delta-like gene expressed in neuroendocrine tumors |
US20030074680A1 (en) | 1993-03-19 | 2003-04-17 | Johns Hopkins University School Of Medicine | Growth differentiation factor-8 |
US6465239B1 (en) * | 1993-03-19 | 2002-10-15 | The John Hopkins University School Of Medicine | Growth differentiation factor-8 nucleic acid and polypeptides from aquatic species and non-human transgenic aquatic species |
US6673534B1 (en) * | 1995-10-26 | 2004-01-06 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Methods for detection of mutations in myostatin variants |
US6607884B1 (en) | 1993-03-19 | 2003-08-19 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Methods of detecting growth differentiation factor-8 |
US7393682B1 (en) | 1993-03-19 | 2008-07-01 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Polynucleotides encoding promyostatin polypeptides |
EP1333035A3 (en) * | 1993-03-19 | 2004-07-07 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Growth differentiation factor-8 |
US5994618A (en) * | 1997-02-05 | 1999-11-30 | Johns Hopkins University School Of Medicine | Growth differentiation factor-8 transgenic mice |
CA2161808C (en) | 1993-05-12 | 2008-08-05 | Anthony J. Celeste | Bmp-11 compositions |
PT716610E (pt) * | 1993-08-26 | 2006-08-31 | Genetics Inst Llc | Proteinas morfogeneticas dos ossos de seres humanos para utilizacao em regeneracao neural |
US7332575B2 (en) | 1994-03-18 | 2008-02-19 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Growth differentiation factor-8 nucleic acid and polypeptide from aquatic species, and transgenic aquatic species |
ES2251721T3 (es) * | 1994-07-08 | 2006-05-01 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Factor-11 de diferenciacion del crecimiento. |
US6008434A (en) | 1994-07-08 | 1999-12-28 | Johns Hopkins University School Of Medicine | Growth differentiation factor-11 transgenic mice |
US5723125A (en) * | 1995-12-28 | 1998-03-03 | Tanox Biosystems, Inc. | Hybrid with interferon-alpha and an immunoglobulin Fc linked through a non-immunogenic peptide |
AU6274298A (en) * | 1997-02-05 | 1998-08-25 | Johns Hopkins University School Of Medicine, The | Growth differentiation factor-8 |
AU756620B2 (en) * | 1997-07-14 | 2003-01-16 | University Of Liege | Mutations in the myostation gene cause double-muscling in mammals |
US6696260B1 (en) * | 1997-08-01 | 2004-02-24 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Methods to identify growth differentiation factor (GDF) binding proteins |
US6656475B1 (en) * | 1997-08-01 | 2003-12-02 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Growth differentiation factor receptors, agonists and antagonists thereof, and methods of using same |
AU8666398A (en) | 1997-08-01 | 1999-02-22 | Johns Hopkins University School Of Medicine, The | Methods to identify growth differentiation factor (gdf) receptors |
US6891082B2 (en) | 1997-08-01 | 2005-05-10 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Transgenic non-human animals expressing a truncated activintype II receptor |
AU8921698A (en) | 1997-08-29 | 1999-03-16 | Human Genome Sciences, Inc. | Follistatin-3 |
AU1276399A (en) | 1997-11-07 | 1999-05-31 | Genetics Institute Inc. | Neuronal uses of bmp-11 |
AU1390999A (en) | 1997-11-10 | 1999-05-31 | Johns Hopkins University School Of Medicine, The | Methods for detection of mutations in myostatin variants |
CA2319703C (en) | 1998-02-05 | 2005-09-20 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Growth differentiation factor-8 |
US6369201B1 (en) * | 1998-02-19 | 2002-04-09 | Metamorphix International, Inc. | Myostatin multimers |
US6004937A (en) | 1998-03-09 | 1999-12-21 | Genetics Institute, Inc. | Use of follistatin to modulate growth and differentiation factor 8 [GDF-8] and bone morphogenic protein 11 [BMP-11] |
EP1075272B1 (en) | 1998-05-06 | 2009-07-15 | Metamorphix, Inc. | Methods for treating diabetes by inhibiting gdf-8 |
WO2000011163A1 (en) | 1998-08-20 | 2000-03-02 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Dcr5, a bmp-binding protein, and applications thereof |
NZ513642A (en) | 1999-01-21 | 2004-02-27 | Metamorphix Inc | Growth differentiation factor inhibitors and uses therefor |
PL353855A1 (en) * | 1999-07-20 | 2003-12-01 | Pharmexa A/Spharmexa A/S | Method for down-regulating gdf-8 activity |
NZ520392A (en) | 2000-02-10 | 2005-04-29 | Abbott Lab | Antibodies that bind human interleukin-18 and methods of making and using |
BR0108499A (pt) | 2000-02-14 | 2003-03-11 | Mitsubishi Pharma Corp | Agente terapêutico para hepatite c |
AU2001241817A1 (en) | 2000-02-29 | 2001-09-12 | Zymogenetics Inc. | Kunitz domain polypeptide zkun8 |
US20030190598A1 (en) | 2000-05-26 | 2003-10-09 | Jasmid Tanha | Single-domain antigen-binding antibody fragments derived from llama antibodies |
US7037501B2 (en) * | 2001-01-04 | 2006-05-02 | Regents Of The University Of Minnesota | Myostatin immnoconjugate |
TWI329129B (en) * | 2001-02-08 | 2010-08-21 | Wyeth Corp | Modified and stabilized gdf propeptides and uses thereof |
US6552172B2 (en) | 2001-08-30 | 2003-04-22 | Habto Biotech, Inc. | Fibrin nanoparticles and uses thereof |
US7320789B2 (en) | 2001-09-26 | 2008-01-22 | Wyeth | Antibody inhibitors of GDF-8 and uses thereof |
JP4429729B2 (ja) * | 2002-02-21 | 2010-03-10 | ワイス エルエルシー | Gasp1;フォリスタチンドメイン含有タンパク質 |
WO2003072714A2 (en) | 2002-02-21 | 2003-09-04 | Wyeth | Follistatin domain containing proteins |
JP4096330B2 (ja) * | 2002-02-27 | 2008-06-04 | 独立行政法人科学技術振興機構 | 内部に制御された空隙を有するコア・シェル構造体及びそれを構成要素とする構造体並びにこれらの調製方法 |
US20040138118A1 (en) * | 2002-09-16 | 2004-07-15 | Neil Wolfman | Metalloprotease activation of myostatin, and methods of modulating myostatin activity |
US7261893B2 (en) * | 2002-10-22 | 2007-08-28 | Wyeth | Neutralizing antibodies against GDF-8 and uses therefor |
US20040223966A1 (en) | 2002-10-25 | 2004-11-11 | Wolfman Neil M. | ActRIIB fusion polypeptides and uses therefor |
ATE496938T1 (de) * | 2002-12-20 | 2011-02-15 | Amgen Inc | Myostatin hemmende bindungsstoffe |
EP1635870A2 (en) | 2003-06-02 | 2006-03-22 | Wyeth | Use of myostatin (gdf8) inhibitors in conjunction with corticosteroids for treating neuromuscular disorders |
JP2008537488A (ja) | 2005-03-23 | 2008-09-18 | ワイス | Gdf−8モジュレート物質の検出 |
CA2601086A1 (en) | 2005-03-23 | 2006-10-12 | Wyeth | Detection of an immune response to gdf-8 modulating agents |
-
2003
- 2003-10-21 US US10/688,925 patent/US7261893B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2003-10-21 AR ARP030103836A patent/AR047392A1/es unknown
- 2003-10-22 TW TW092129316A patent/TW200423958A/zh unknown
- 2003-10-22 BR BR0315598-6A patent/BR0315598A/pt active Search and Examination
- 2003-10-22 KR KR1020057007068A patent/KR20050049558A/ko active IP Right Grant
- 2003-10-22 NZ NZ539084A patent/NZ539084A/en not_active IP Right Cessation
- 2003-10-22 UA UAA200504794A patent/UA91815C2/ru unknown
- 2003-10-22 RU RU2005115477/13A patent/RU2360925C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2003-10-22 WO PCT/IB2003/004748 patent/WO2004037861A2/en active Application Filing
- 2003-10-22 SG SG2007028665A patent/SG178619A1/en unknown
- 2003-10-22 KR KR1020127008435A patent/KR20120038559A/ko not_active Application Discontinuation
- 2003-10-22 CN CNB2003801018163A patent/CN100374465C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2003-10-22 MX MXPA05004225A patent/MXPA05004225A/es active IP Right Grant
- 2003-10-22 CA CA002500490A patent/CA2500490A1/en not_active Abandoned
- 2003-10-22 CN CNA2008100039294A patent/CN101230102A/zh active Pending
- 2003-10-22 EP EP03758426.5A patent/EP1554312B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-10-22 ES ES03758426.5T patent/ES2535872T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-10-22 TW TW099106427A patent/TW201029665A/zh unknown
- 2003-10-22 TW TW099106428A patent/TW201029666A/zh unknown
- 2003-10-22 JP JP2004546306A patent/JP4886986B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2003-10-22 CN CNA2008100039307A patent/CN101220098A/zh active Pending
- 2003-10-22 AU AU2003274448A patent/AU2003274448B2/en not_active Ceased
-
2005
- 2005-03-23 IS IS7770A patent/IS7770A/is unknown
- 2005-04-07 CR CR7786A patent/CR7786A/es unknown
- 2005-04-21 EC EC2005005739A patent/ECSP055739A/es unknown
- 2005-04-21 ZA ZA200503249A patent/ZA200503249B/en unknown
- 2005-05-09 NO NO20052242A patent/NO20052242L/no not_active Application Discontinuation
-
2007
- 2007-07-13 US US11/777,525 patent/US7655763B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2009
- 2009-12-07 US US12/632,383 patent/US8420082B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2010
- 2010-01-29 JP JP2010019767A patent/JP5419738B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2010-05-11 EC EC2010005739A patent/ECSP105739A/es unknown
- 2010-09-01 IL IL207924A patent/IL207924A0/en unknown
-
2011
- 2011-09-07 IL IL215011A patent/IL215011A0/en unknown
-
2012
- 2012-11-30 US US13/691,395 patent/US8940874B2/en not_active Expired - Fee Related
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4886986B2 (ja) | Gdf−8に対する中和抗体およびそれらの使用 | |
JP2006519583A5 (ja) | ||
CA2469230C (en) | Antibody inhibitors of gdf-8 and uses thereof | |
JP4511943B2 (ja) | Pd−1に対する抗体およびその使用 | |
AU2002347773A1 (en) | Antibody inhibitors of GDF-8 and uses thereof | |
PT853661E (pt) | Membros de ligacao especifica para o factor beta de crescimento de transformacao humano; materiais e metodos | |
AU2011203351A1 (en) | Neutralizing Antibodies Against GDF-8 and Uses Therefor | |
KR20210125885A (ko) | Cd73의 면역관문을 억제하기 위한 항체 및 이의 용도 |