JP2005517899A - コロイド状磁気粒子を使用した分析物の検出方法 - Google Patents
コロイド状磁気粒子を使用した分析物の検出方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2005517899A JP2005517899A JP2003546110A JP2003546110A JP2005517899A JP 2005517899 A JP2005517899 A JP 2005517899A JP 2003546110 A JP2003546110 A JP 2003546110A JP 2003546110 A JP2003546110 A JP 2003546110A JP 2005517899 A JP2005517899 A JP 2005517899A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- analyte
- particles
- magnetic field
- colloidal
- magnetic
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000012491 analyte Substances 0.000 title claims abstract description 55
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 title claims abstract description 38
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 72
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 claims abstract description 63
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 59
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 33
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 12
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 28
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 28
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 28
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 12
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 9
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 9
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 8
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 7
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 claims description 6
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 6
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 claims description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 4
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 4
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 claims description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 claims description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 claims description 3
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 claims description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 2
- 239000013566 allergen Substances 0.000 claims description 2
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 claims description 2
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000010291 electrical method Methods 0.000 claims description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000010985 leather Substances 0.000 claims description 2
- 238000010297 mechanical methods and process Methods 0.000 claims description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 claims description 2
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 claims description 2
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 claims description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 2
- 239000005080 phosphorescent agent Substances 0.000 claims description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 2
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 claims 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 claims 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 claims 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims 1
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 claims 1
- 238000004848 nephelometry Methods 0.000 claims 1
- 238000005375 photometry Methods 0.000 claims 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 12
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 10
- UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N Iron oxide Chemical compound [Fe]=O UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 9
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 7
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 6
- 239000000696 magnetic material Substances 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 5
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 5
- 235000013980 iron oxide Nutrition 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 description 5
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 description 5
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000005653 Brownian motion process Effects 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 238000005537 brownian motion Methods 0.000 description 2
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N iron(III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]=O JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- -1 3-dimethylaminopropyl Chemical group 0.000 description 1
- 108050001427 Avidin/streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 241001415846 Procellariidae Species 0.000 description 1
- WGLPBDUCMAPZCE-UHFFFAOYSA-N Trioxochromium Chemical compound O=[Cr](=O)=O WGLPBDUCMAPZCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 229910000423 chromium oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- IVMYJDGYRUAWML-UHFFFAOYSA-N cobalt(ii) oxide Chemical class [Co]=O IVMYJDGYRUAWML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000001739 density measurement Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000012631 diagnostic technique Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 125000003700 epoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003302 ferromagnetic material Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- VBMVTYDPPZVILR-UHFFFAOYSA-N iron(2+);oxygen(2-) Chemical class [O-2].[Fe+2] VBMVTYDPPZVILR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N iron(II,III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]O[Fe]=O SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000007885 magnetic separation Methods 0.000 description 1
- 230000005415 magnetization Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 1
- 229910000480 nickel oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- GNRSAWUEBMWBQH-UHFFFAOYSA-N oxonickel Chemical compound [Ni]=O GNRSAWUEBMWBQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 239000002861 polymer material Substances 0.000 description 1
- 238000009597 pregnancy test Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000012798 spherical particle Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000004808 supercritical fluid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 229910000859 α-Fe Inorganic materials 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54326—Magnetic particles
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54326—Magnetic particles
- G01N33/5434—Magnetic particles using magnetic particle immunoreagent carriers which constitute new materials per se
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54346—Nanoparticles
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Investigating Or Analyzing Materials By The Use Of Magnetic Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
Abstract
本発明は、液体媒体中に少なくとも１つの分析物を検出しそして／又は定量するための方法に関し、そして検出されそして／又は評価される分析物に対し特異的な少なくとも１のリガンドと、表面にて官能化されたコロイド状磁気粒子を使用すること、及びそれが、分析される前記媒体と前記粒子を接触させる工程、前記磁気粒子を鎖状に構成させるに十分な強度にて前記媒体に磁場を印加する工程、鎖の2つの隣接する粒子上に、それぞれ存在する少なくとも２つの特異的リガンドと関連した分析物の対又は組み合わせができるに十分な時間にわたり前記磁場を保持する工程、その磁場を除去させる工程、及び前記分析物の存在及び／又は非存在を、在場合により前記磁気粒子の永続した鎖の存在及び／又は非存在を介しその濃度を決定する工程、を含むことを特徴とする。
Description
本発明は、液体、生物的又は合成した試料の少なくとも1つの分析種の検出に有益で、そして凝集反応試薬に類似する試薬及びこの種の結合(coupling)を含む方法に関する。
今日まで多くの「凝集」方法が、これまで提案されてきた。これらは、主に診断目的として抗原及び／又は抗体の検出に適用されている。特にこれらの方法は、バイオアッセイ(妊娠試験,血塊(clotting)試験)又は感染性疾患の診断として適用される。しかしながらこうした方法は、通常感受性に制限される。実際にこれらの試験の一般的原理は、分析物が存在するゲル状コロイド粒子の形性体を検出することである。この種の試験において分析物を、２つのコロイド粒子に結合させる必要があり、そのコロイド粒子の表面を、極めて広くセンス(sense)し分析物を認識する分子で被覆する必要がある。
より詳細には本発明は、コロイド状凝集反応試薬として磁気粒子の使用を基盤としている。
今日まで多くの「凝集」方法が、これまで提案されてきた。これらは、主に診断目的として抗原及び／又は抗体の検出に適用されている。特にこれらの方法は、バイオアッセイ(妊娠試験,血塊(clotting)試験)又は感染性疾患の診断として適用される。しかしながらこうした方法は、通常感受性に制限される。実際にこれらの試験の一般的原理は、分析物が存在するゲル状コロイド粒子の形性体を検出することである。この種の試験において分析物を、２つのコロイド粒子に結合させる必要があり、そのコロイド粒子の表面を、極めて広くセンス(sense)し分析物を認識する分子で被覆する必要がある。
より詳細には本発明は、コロイド状凝集反応試薬として磁気粒子の使用を基盤としている。
その磁気粒子は、生物的な分離技術又は診断技術(WO 94/09368;EP 180 384;WO 98/51435)にてすでに使用されている。磁気による分離では、操作を速く簡単に行うことができ、そして必要な装置も単純であることが見出された。捕捉される分析物を認識する分子にて被覆された磁気粒子を使用すると、磁力の効果により複合混合物から問題とする分析物を分離することができる。この方法は、たとえば「ELISA」法(酵素結合免疫法)に使用するには適切である。
使用される磁気粒子は、たとえばマグネタイト、フェライト、酸化クロム、酸化ニッケルなどの磁性材料をマトリックスにして通常天然の有機物質に組み入れる。これらは、分離される活性種と、反応する抗原、ハプテン又は特定型の抗体の反応基により、その表面にて官能化される。
残留磁気に対する問題を回避するためには、通常超常磁性材料は従来の強磁性材料より好ましい。強く磁化し且つ飽和磁化(100mTより大きい）を有し、そして外部磁場がない状態で何ら残留磁気を示さない鉄の流体は、コロイド状超常磁性材料の調製方法に組み入れるには極めて良好な候補である。
残留磁気に対する問題を回避するためには、通常超常磁性材料は従来の強磁性材料より好ましい。強く磁化し且つ飽和磁化(100mTより大きい）を有し、そして外部磁場がない状態で何ら残留磁気を示さない鉄の流体は、コロイド状超常磁性材料の調製方法に組み入れるには極めて良好な候補である。
本発明に関しては、磁場の効果により特異的な構造の構成に適合するよう、コロイド状磁性体が示す性能としての利点を得ることが、目的である。
本例において、磁場により誘導される凝集体は、分離されている「鎖」又は「クラスター」と称する鎖の群を、容積当たりのコロイド物の画分に依存して作りだされる。以後鎖又はクラスターを、同一なものとして鎖と称することにする。これらの構造や形成に関する詳細な文献は、多くの刊行物から見出だすことができるであろう。
本例において、磁場により誘導される凝集体は、分離されている「鎖」又は「クラスター」と称する鎖の群を、容積当たりのコロイド物の画分に依存して作りだされる。以後鎖又はクラスターを、同一なものとして鎖と称することにする。これらの構造や形成に関する詳細な文献は、多くの刊行物から見出だすことができるであろう。
換言すると磁場がないと粒子が分散した形状となる。磁場が存在すればこうした粒子が配向され、水溶液中に粒子の鎖を形成する。もちろんこれら鎖の形成は可逆的であり、そして磁場が除去されると熱振動の影響下で急に鎖の形成をなくする。都合の良いことにこうした粒子サイズが有意に小さく、そのためブラウン運動及び分極可能であれば、これらの鎖が、印加された磁場の軸に沿ってそして重力に影響されず直ちに形成される。この現象を、図1Aに概略的に示している。図1Bは、磁場におけるこうした粒子にて形成される鎖の顕微鏡写真を示す。
液体媒体中で特定種を検出しそして／又は定量することを目的として、磁場の効果により迅速に粒子鎖状を構成すると言うコロイド状磁気粒子の性能を、本発明者が明示的に実証したことは驚くべきことである。
本例においてこれらコロイド状磁気粒子が、特定リガンドによりその表面に被覆され、そして分散される連続相には、少なくとも2つの特異的リガンドと反応できる種が含まれる時、その磁場が、磁場により誘導される鎖において、2の相違し且つ隣接する粒子に対し、関係する種の結合を触媒することになる。磁場が除去された後、種に結合した粒子が永続的な鎖状の構成を存続し、そのため分析される媒体中で標的種の存在が示される。
より具体的には、本発明の第一の目的は、液体媒体中に少なくとも1つの分析物を検出しそして／又は定量するための方法であり、それは検出されそして／又は評価される分析物に特異的な少なくとも１つのリガンドと、その表面にて官能化されたコロイド状磁気粒子を使用し：
1.前記媒体と接触させるよう前記粒子を誘導する工程、
2.前記磁気粒子が鎖の形状を構成するに十分な強さで、前記媒体に磁場を印加する工程、
3.鎖の2の隣接する粒子上にそれぞれ存在する少なくとも2つの特異的リガンドと、関係分析物の結合又は組み合わせができるに十分な時間にわたりこの磁場を保持する工程、
4.磁場を除去する工程、そして
5.前記分析物の存在及び／又は不存在を決定し、そして適切な場合前記液体媒体中にコロイド状磁気粒子における永続的な鎖の存在及び／又は不存在によりその濃度を決定する工程、
を含むことが特徴である。
1.前記媒体と接触させるよう前記粒子を誘導する工程、
2.前記磁気粒子が鎖の形状を構成するに十分な強さで、前記媒体に磁場を印加する工程、
3.鎖の2の隣接する粒子上にそれぞれ存在する少なくとも2つの特異的リガンドと、関係分析物の結合又は組み合わせができるに十分な時間にわたりこの磁場を保持する工程、
4.磁場を除去する工程、そして
5.前記分析物の存在及び／又は不存在を決定し、そして適切な場合前記液体媒体中にコロイド状磁気粒子における永続的な鎖の存在及び／又は不存在によりその濃度を決定する工程、
を含むことが特徴である。
なお留意することは、一覧として記載されているこれらの工程の順序が、本発明の好ましい例に対応するが、本発明の内容から違った順序にて行うことも可能であり、たとえば分析される媒体を導入する前に、磁場を活性化することにより行うことができる。
本発明に関しては、検出され、評価され又は置き換えられると考えられる分析物により結合されたコロイド状磁気粒子を、収集することも可能である。
本発明に関しては、検出され、評価され又は置き換えられると考えられる分析物により結合されたコロイド状磁気粒子を、収集することも可能である。
本発明の記載内容において、さらに極めて多様な磁場をそして勾配形状の磁場を、さらには極めて多様な「凝集セル」の形状を使用することもできる。これらの多様性は、迅速なリガンド-受容体の結合、及び永続的な鎖の検出の両方を、その場合により最適化し易くそれが、その条件により長さ及び厚みを有意に変動させることができる。特に本発明は、チャンネル幅又は高さが100μmより小さい微量流動装置を含む。チャンネルの軸に直角又は並行に配位された磁場を使用することができる。都合のよい事にこの方法は、分析装置などの診断ツールにて実施される。自動分析装置が特に好ましい。
永続的な鎖のより具体的特徴付けに関し、それが、分析される媒体が簡単な顕微鏡試験により行はれるという利点がある。しかしながら特に自動分析装置を使用する場合には、その鎖の存在を光学的に検出することが好ましい。そのため光の散乱を測定することにより、たとえば光度計又は濁度計にて測定することにより、鎖の存在を検出することができる。別の変更では、たとえばCCDカメラにより捕捉された画像を処理するという構成である。この変更は、微細な鎖のサイズを分析することができるという利点を有する。何か適切な光源、好ましくはレザーが、これら検出の変更として使用することができる。
もちろん、従来の凝集化と比較できる鎖の形成には、第一に分析される媒体中の分析物の濃度に、そして第二に粒子の濃度に依存する。概要的には、前記媒体中に存在する分析物が有意的に多くなれば、鎖の長さが有意に長くなり、そして粒子の濃度が有意に濃くなれば、形成する鎖の厚みが有意に厚くなり、そして凝集化により有意に比較可能であると考えることができる。本発明の内容にから永続的な鎖状に形成された磁気粒子の密度を定量することにより、分析物の濃度を決定できることが分る。この密度の測定は、従来技術により行うことができる。従って校正基準は、所定の分析物に対し予め確立することができる。従って液体媒体中で低濃度の分析物を検出するには好適であることが分る。
以下の例に示すように、その鎖は、同一のリガンドと受容体の結合対(ビオチン-ストレプトアビジン)にて行われる従来の凝集反応法では10-5mol/lであるのに対し、抗原の本例において、10-9mol/lの桁の分析物の濃度を持続する。適切な利点としては本濃度の閾値が、同一の抗原と抗体の対で、そして磁場のない状態にて行はれた従来の凝集反応法にて期待されるゲルの凝集又は生成を持続するに必要な濃度閾値より低い。
そのためクレームされた本方法は、従来の凝集反応法から取り換え可能であり、そして評価の感受性を有意に増大させるという利点がある。
そのためクレームされた本方法は、従来の凝集反応法から取り換え可能であり、そして評価の感受性を有意に増大させるという利点がある。
本発明の目的として、用語「コロイド状」の意味は、粒子の大きさが、5と10,000nmとの間、より好ましくは100と500nmとの間にあることを意味する。それには、できるだけ小さい粒子を使用すると同時に十分な磁気感受性を保証し、磁気双極子力及びブラウン運動の結合作用により直ちに凝集できることが、特に適切な利点である。一般にこの調整は、通常包含される酸化鉄である、磁気材料の量が最大である場合、数ミクロン以下の粒径に向けそして、好ましくは約0.1から0.5ミクロンにて達成される。
上記理由のため、コロイド状超常磁性粒子を使用することが好ましい。本発明に必要な品質を有するコロイド状超常磁性粒子を作成するため、幾つか異なる種類の技術が存在する。これらには、たとえば水溶性鉄流動体と天然又は合成ポリマー材料とを共沈殿させる技術、又は有機相中に鉄流動体を乳化させる技術がある。
上記理由のため、コロイド状超常磁性粒子を使用することが好ましい。本発明に必要な品質を有するコロイド状超常磁性粒子を作成するため、幾つか異なる種類の技術が存在する。これらには、たとえば水溶性鉄流動体と天然又は合成ポリマー材料とを共沈殿させる技術、又は有機相中に鉄流動体を乳化させる技術がある。
制御された方法において、この種のコロイド材料を得るための好ましい技術は、乳化後の重合及びグラフト処理方法の原理に基づいている。特にこれらの乳化物が、有機の鉄流動体と界面活性剤の豊富な水溶相から成る混合液を共有することにより生成することができる。鉄流動体の有機相が水溶相にわずかに溶けるように、鉄流動体が選択される。本例において、各小滴を、球状に凝集化した極微小な(ナノメータ状)粒子に、関係磁気材料を、好ましくは各小滴に約60容量%の酸化鉄酸を有する磁性鉄酸化物(マグヘマイト(maghemite))に変換される。
従って得られる粒子は、その反応が小滴中にて起こるように、スチレンなどの疎水性モノマーを導入することにより重合される。重合体の端部に水溶性官能モノマーを導入することにより、官能化した表面が得られる。
こうした2つの処理、すなわち乳化及び重合化を合わせることにより、非常に酸化鉄の富んだ、そして重合化及び官能化された層により被覆された球状の粒子と成る。この乳化物を調製するため、特に文献では、J.Bibette in J.and Magn.Mat.V.122,p.37(1993) and in WO 97/38787 and FR 2800836にて公開された方法で行はれる。
こうした2つの処理、すなわち乳化及び重合化を合わせることにより、非常に酸化鉄の富んだ、そして重合化及び官能化された層により被覆された球状の粒子と成る。この乳化物を調製するため、特に文献では、J.Bibette in J.and Magn.Mat.V.122,p.37(1993) and in WO 97/38787 and FR 2800836にて公開された方法で行はれる。
都合のよいことに、組み入れられた磁気材料は、酸化鉄類、酸化コバルト類、又は最終分裂し、安定化した金属から選択され、そして好ましくはマグヘマイト(maghemite)である。粒子に組み入れられのは、40容量%の率で、好ましくは60容量%である。
本発明の好ましい変更例によれば、基本的な磁気材料は鉄の流動体である。
したがって得られたコロイド状磁気粒子が、従来の工業方法により大量のリガンドにて、これらの表面における固定化に適合できるかぎり、とくに有利なもである。
本発明の好ましい変更例によれば、基本的な磁気材料は鉄の流動体である。
したがって得られたコロイド状磁気粒子が、従来の工業方法により大量のリガンドにて、これらの表面における固定化に適合できるかぎり、とくに有利なもである。
都合の良いことに、これらは、本発明に記載されている免疫測定法、及び凝集反応法として特に使用される試薬に変換できるよう、極めて多様な特異的リガンドと組合せることができる。
リガンドと称する分子を、吸収性相互作用、共有結合性相互作用、及び／又は高親和性相互作用により、コロイド状磁気粒子の表面にて固定化することができる。
たとえば共有結合(coupling)は、粒子の表面に存在する化学反応基を用いて行うことができる。
リガンドと称する分子を、吸収性相互作用、共有結合性相互作用、及び／又は高親和性相互作用により、コロイド状磁気粒子の表面にて固定化することができる。
たとえば共有結合(coupling)は、粒子の表面に存在する化学反応基を用いて行うことができる。
これらの反応基の明示により、記載の基が、カルボキシル基、アミノ基、アルデヒド基、及びエポキシ基からより特異的に作成することができる。特徴付されると考えられる分析物が、反応性化学種である場合、これらの反応基自体が、標的分析物に対する特異的リガンドの役割を果すことができる。
高親和性相互作用から起こる固定化に関しては、 (ポリ)カルボハイドレイト/イレクチン(electin)、ビオチン又はビオチン化された化合物/アビジン又はストレプトアビジン、タンパク質受容体及びその特異的リガンド、ハプテン/抗体などの２つの相対する高親和性対により通常媒介される。
最後に粒子の表面にリガンドを結合させることは、直接か、又はさらに「リンカー」又は「スペーサー」という語句を用いて言及されるスペーサー要素を使用するかのいずれかにて行うことがでいる。
高親和性相互作用から起こる固定化に関しては、 (ポリ)カルボハイドレイト/イレクチン(electin)、ビオチン又はビオチン化された化合物/アビジン又はストレプトアビジン、タンパク質受容体及びその特異的リガンド、ハプテン/抗体などの２つの相対する高親和性対により通常媒介される。
最後に粒子の表面にリガンドを結合させることは、直接か、又はさらに「リンカー」又は「スペーサー」という語句を用いて言及されるスペーサー要素を使用するかのいずれかにて行うことがでいる。
これら共有結合又は高親和性の相互作用により、天然又は合成リガンドを固定化することができ、その天然又は合成リガンドには、ペプチド、たとえば糖タンパク質、脂質タンパク質、及び他の類似した又は誘導された構造体にて遊離又は複合形状のタンパク質、免疫グロブリン、DNA又はRNA及びこれらの相同体などの核酸、単糖又は2糖、オリゴ糖、及び多糖類などの糖類、脂質、ホルモン、受容体、代謝物又は他の生化学物質などがあげられる。
クレームされる方法により検出できそして／又は評価できる分析物は、本発明の官能化された粒子により、特異的でそして高い親和性相互作用の可能な物質が好ましい。従ってこれらは、免疫反応により決定できる抗原及び抗体、又はハイブリット反応により検出できる核酸、及びより一般的にあらゆる種類のタンパク質にて可能である。
好ましくは、その分析物が、分析される媒体中で前記粒子の核酸係数に少なくとも等しい核酸係数を有する。
クレームされる方法により検出できそして／又は評価できる分析物は、本発明の官能化された粒子により、特異的でそして高い親和性相互作用の可能な物質が好ましい。従ってこれらは、免疫反応により決定できる抗原及び抗体、又はハイブリット反応により検出できる核酸、及びより一般的にあらゆる種類のタンパク質にて可能である。
好ましくは、その分析物が、分析される媒体中で前記粒子の核酸係数に少なくとも等しい核酸係数を有する。
同定される分析物が、それが天然の形状にて、2つの異なるリガンドと、たとえば共通的に幾つかの結合部位を提供する抗原及び抗体の同じ方法にて、反応することができる。
対照的な例において、分析物が、その特異的リガンドの１の少なくとも2分子に対し反応を求めるようにするため、分析される媒体を、クレームされる方法を行う前に予備処理する。特にこうした種類の予備処理は、上記「高親和性」対となる１方の相手の少なくとも1分子により分析物を官能化させることから成る。この種の予備処理を行うことは、競合する当業者の技術的範囲内である。
対照的な例において、分析物が、その特異的リガンドの１の少なくとも2分子に対し反応を求めるようにするため、分析される媒体を、クレームされる方法を行う前に予備処理する。特にこうした種類の予備処理は、上記「高親和性」対となる１方の相手の少なくとも1分子により分析物を官能化させることから成る。この種の予備処理を行うことは、競合する当業者の技術的範囲内である。
本発明の第一の例は、液体試料中で抗体種の分析物を検出しそして／又は定量することに関し、その抗体類には、たとえばウイルス、バクテリア又はプロトーザ及び他の感染剤などの病原体に対する抗体、腫瘍に対する抗体、アレルゲンに対する抗体、自己免疫に対する抗体などが含まれる。
本発明の第二の例は、遊離抗原などの抗原を検出しそして／又は定量することに関し、その抗原類としては、遊離抗原などの抗原、たとえば血液タンパク質、及び血塊因子、代謝物、ホルモン、媒体などの因子類、又は支持体に結合する抗原、たとえば微生物の表面抗原、膜結合受容体に結合する抗原、血液群の抗原及び主要組織適応系の抗原が含まれる。
本発明の第二の例は、遊離抗原などの抗原を検出しそして／又は定量することに関し、その抗原類としては、遊離抗原などの抗原、たとえば血液タンパク質、及び血塊因子、代謝物、ホルモン、媒体などの因子類、又は支持体に結合する抗原、たとえば微生物の表面抗原、膜結合受容体に結合する抗原、血液群の抗原及び主要組織適応系の抗原が含まれる。
さらにクレームされる方法は、たとえば天然又は人工による薬品などの非生物的分子を検出しそして／又は定量することに使用でき、問題の薬品が直接リガンドに2重の親和性を有すると理解されている。
これが例にないとしても、予備処理は、会合により指定されたリガンドに対して、この種の分析物を2価にする必要がある。本発明は、特に分析化学、及び微小分析化学に特に有意な利点となる。
本発明の特定の変更によれば、幾つかの種類のコロイド状磁気粒子を、凝集反応試薬と同様の方法にて使用することができる。これは、分析物が2種類のリガンドに容易に反応させる場合適切である。さらに本発明により用いられるコロイド状粒子は、第二の標識を移送することができる。
これが例にないとしても、予備処理は、会合により指定されたリガンドに対して、この種の分析物を2価にする必要がある。本発明は、特に分析化学、及び微小分析化学に特に有意な利点となる。
本発明の特定の変更によれば、幾つかの種類のコロイド状磁気粒子を、凝集反応試薬と同様の方法にて使用することができる。これは、分析物が2種類のリガンドに容易に反応させる場合適切である。さらに本発明により用いられるコロイド状粒子は、第二の標識を移送することができる。
この標識化処理は、顕微鏡による検出形態と第二の検出形態とを組み合わせることができるか、又は単に顕微鏡による検出の改良が可能である限り、有意な利点である。特にこの補足標識(supplementary label)は、視覚的、光学的、機械的及び／又は電気的に特徴付けすることができる。本発明のこの変更による鎖の特徴付けは、顕微鏡下での視覚により直接的に、及び選択される標識の特性による光学的、機械的及び／又は電気的な方法により間接的に行うことができる。本発明に適した標識を明示するために記載されていることでは、特に着色剤、蛍光剤又はリン蛍光剤から生成することができる。
分析される液体媒体は、たとえば生物流体物などの合成、あるいは天然のもので良い。 特にこれらは、身体内の体液、たとえば血液(全体又は画分化して)、血清、血漿、唾液、尿又は脳脊髄液などにて良く、希釈又は希釈されない状態にて使用される。
磁場に関しては、それは、当業者周知の種々の手段、たとえばヘルムホルツ・コイル(Helmholtz coils)、電磁体又は永久磁石などにより作り出される。
印加される連続的磁場は、通常1と500mTとの間、好ましくは1から100mTの間である。
こうした磁場を作りだす簡単な手段は、永久磁石又は電磁石の北極及び南極のそれぞれ２極を、「凝集」帯域のいずれかの側に配置することである。別の手段では、電流発生装置にて磁化されるヘルムホルツ・コイル(Helmholtz coil)にて、特に円形にて同心円である軸によりチャンネルを構成したものである。
磁場に関しては、それは、当業者周知の種々の手段、たとえばヘルムホルツ・コイル(Helmholtz coils)、電磁体又は永久磁石などにより作り出される。
印加される連続的磁場は、通常1と500mTとの間、好ましくは1から100mTの間である。
こうした磁場を作りだす簡単な手段は、永久磁石又は電磁石の北極及び南極のそれぞれ２極を、「凝集」帯域のいずれかの側に配置することである。別の手段では、電流発生装置にて磁化されるヘルムホルツ・コイル(Helmholtz coil)にて、特に円形にて同心円である軸によりチャンネルを構成したものである。
本発明の好ましい例によれば、振動(交番)磁場がかけられる。
磁場を振動(交番)により、評価される分析物が、2つの粒子上にそれぞれ存在し、隣接した状態の2つの特異的リガンドである確率を、増大させることができる
各磁場サイクルにて、すでに形成された鎖に影響することなく、鎖を形成又は伸張させるため、粒子を互いに会合させることができる。従ってこれは、官能化されたコロイド状磁気粒子のリガンドと、評価される分析物との間の反応を完了させることができることを意味する。
したがって、それは、低濃度の分析物を評価することができ、さらにその評価を有意な感受性にて得ることができる。
磁場を振動(交番)により、評価される分析物が、2つの粒子上にそれぞれ存在し、隣接した状態の2つの特異的リガンドである確率を、増大させることができる
各磁場サイクルにて、すでに形成された鎖に影響することなく、鎖を形成又は伸張させるため、粒子を互いに会合させることができる。従ってこれは、官能化されたコロイド状磁気粒子のリガンドと、評価される分析物との間の反応を完了させることができることを意味する。
したがって、それは、低濃度の分析物を評価することができ、さらにその評価を有意な感受性にて得ることができる。
しかしながら、本発明を使用する幾つかには、不均一な磁場が必要な場合があることを留意すべきである。特に粒子を凝集化できる磁場、及び正確な位置に鎖を集中させる勾配のある磁場の使用が求められる場合がある。磁場とその勾配の両方を、同時に又は別々に操作することができる。したがって、分析物を最初に濃縮することができ、さらにそれらを十分なサイズの凝集体を形成することにより視覚化ができる。本発明の内容の1部である他の適用に、微量流動チャンネルに凝集化を行うことは、好ましいことになろう。それは、たとえば(E.M.Lawrenceら、Int.J.of Modern Phys.B,8,2765-2777,1994)にて周知であり、それがカラムの直径及び空間(spacing)、又は磁気粒子が富んだ鎖は、磁場及びセルの厚みに依存する。従って、予測される印加にもっとも適切な凝集条件を選択することができる。
分析される媒体を導入する手段は：
試料が、ゲル電気泳動「Electrophoresisi:theory,techniques and biochemical and clinical applications,A.T.Andrews,Oxford University Press,NY 1986」にて沈殿されている1又は複数のノッチ又は「ウエル」、
あるいは、毛細管式電気泳動(たとえば「Capillary Electrophoresis」P.D.Grossman,J.C.Colburn published by Academic Press,San Diego,CA,USA,1992を参照)における過剰圧力又は減圧系、
あるいは、液体静脈血を電気泳動にかけるような、細流試料を継続的に送り出す(runout)チャンネル、
あるいは、クロマドグラフィーに使用される試料を導入する方法(「Chromatography and supercritique」[Liquid chromatography and supercritical fluid chromatography],R.Rosset,M.Caude,A.Jardy,published by Masson,Paris 1991;「Practical High Performance Liquid Chromatography」,V.R.Meyer,published by John Wiley,Chichester,NY,USA;「Chromatography of polymers」、T.Prodver,published by ACS publ.,Washington DC,1993)の1つ、
あるいは、自動分析装置に従来使用されるキュベット又は他の容器、
から成る。
試料が、ゲル電気泳動「Electrophoresisi:theory,techniques and biochemical and clinical applications,A.T.Andrews,Oxford University Press,NY 1986」にて沈殿されている1又は複数のノッチ又は「ウエル」、
あるいは、毛細管式電気泳動(たとえば「Capillary Electrophoresis」P.D.Grossman,J.C.Colburn published by Academic Press,San Diego,CA,USA,1992を参照)における過剰圧力又は減圧系、
あるいは、液体静脈血を電気泳動にかけるような、細流試料を継続的に送り出す(runout)チャンネル、
あるいは、クロマドグラフィーに使用される試料を導入する方法(「Chromatography and supercritique」[Liquid chromatography and supercritical fluid chromatography],R.Rosset,M.Caude,A.Jardy,published by Masson,Paris 1991;「Practical High Performance Liquid Chromatography」,V.R.Meyer,published by John Wiley,Chichester,NY,USA;「Chromatography of polymers」、T.Prodver,published by ACS publ.,Washington DC,1993)の1つ、
あるいは、自動分析装置に従来使用されるキュベット又は他の容器、
から成る。
その最も簡単な方法において、実験は以下の手順に従って、そしてこれに基づいて行はれ、それが、多様な変更が容易に想像されることになろう。
上記特性を有するコロイド状粒子が、評価される抗原に特異的な抗体とグラフト結合される。自明性の関係にて、ストレプトアビジン-ビオチン、リガンド-受容体結合対が、この記載にて考慮される。ストレプトアビジンが、粒子上にてグラフト結合されることから、試料を介し検出される抗原は、ビオチン分子がその両端にてグラフト結合される小さなポリエチレングリコール重合体である。この十分な量の抗原が、粒子と1容量％以上の画分にて混合されると、従来の凝集化方法にて予測されるゲル状の凝集体が、数秒又は数分程度でも見ることができる。C*は、この値より低い従来の走査における凝集化が、もはや検知できない抗原濃度であると考えられる。
上記特性を有するコロイド状粒子が、評価される抗原に特異的な抗体とグラフト結合される。自明性の関係にて、ストレプトアビジン-ビオチン、リガンド-受容体結合対が、この記載にて考慮される。ストレプトアビジンが、粒子上にてグラフト結合されることから、試料を介し検出される抗原は、ビオチン分子がその両端にてグラフト結合される小さなポリエチレングリコール重合体である。この十分な量の抗原が、粒子と1容量％以上の画分にて混合されると、従来の凝集化方法にて予測されるゲル状の凝集体が、数秒又は数分程度でも見ることができる。C*は、この値より低い従来の走査における凝集化が、もはや検知できない抗原濃度であると考えられる。
本発明による実験では、C*より極めて低く、そしてC*/xとして言及されるC濃度で抗原と、0.1 %桁(order)の容量当たりの画分にて粒子を混合し、その混合物を直角断面(厚み20乃至50μm)の毛細管に吸引し、そしてその毛細管の軸に対し並行な磁場を印加しする、ということから構成される。その磁場を、毛管のいずれかの側に配置された２つも磁石により印加することができる。その磁場は、試料に対し少なくとも500ガウスの強度にて２分間保持される。次に毛細管を顕微鏡により観察し、鎖又は凝集体の存在を検出する。
従って、ビオチン-ストレプトアビジン対の例では、磁場に基づく凝集による凝集体の検出が、最大C*/1000の桁の抗原濃度まで出来ることが、達成される。
クレームされる方法は、微量流動系における少なくとも1つの分析物を検出し、そして適切であれば定量するに特に良好な利点である。この特定の例において微量流動系の第一の帯域における磁気による凝集化、及び異なる領域における検出を行うことができる。この例は、凝集化を受けなかった粒子から、粒子の永続的な鎖を分離するために特に適切な利点がある。
クレームされる方法は、微量流動系における少なくとも1つの分析物を検出し、そして適切であれば定量するに特に良好な利点である。この特定の例において微量流動系の第一の帯域における磁気による凝集化、及び異なる領域における検出を行うことができる。この例は、凝集化を受けなかった粒子から、粒子の永続的な鎖を分離するために特に適切な利点がある。
本発明による方法の特に適切な適用では、同じ評価法において幾つかの分析物を同時に評価するため、複数基準の分析を構成している。
本例によれば、官能化されたコロイド状磁気粒子の幾つかの集団が用いられる。各集団の粒子を、検出される分析物の1に対し特異的な少なくとも1つのリガンドにて官能化される。
交番磁場を印加することにより、同じ集団の粒子から構成され、各分析物に特異的な鎖を順次生成する。
これらを識別しそして評価内容を読み出すことができるために、コロイド状磁気粒子の種々の集団が、検出される各分析物に特異的な２次標識を移送する。
本例によれば、官能化されたコロイド状磁気粒子の幾つかの集団が用いられる。各集団の粒子を、検出される分析物の1に対し特異的な少なくとも1つのリガンドにて官能化される。
交番磁場を印加することにより、同じ集団の粒子から構成され、各分析物に特異的な鎖を順次生成する。
これらを識別しそして評価内容を読み出すことができるために、コロイド状磁気粒子の種々の集団が、検出される各分析物に特異的な２次標識を移送する。
さらに本発明の対象物は、液体媒体中に、好ましくは生物的な体液中に、少なくとも１つの分析物を検出する試薬キットで、少なくとも前記1つの分析物に特異的な少なくとも１のリガンドと、その表面にて官能化された少なくともコロイド状磁気粒子を含むことを特徴とする。
本発明は、以下の例によって、そして明示されている図に従いより明確に表示されることになる。
本発明は、以下の例によって、そして明示されている図に従いより明確に表示されることになる。
コロイド状磁気粒子を使用し分析物を検出
本実施例は、アビジン/ストレプトアビジンの高い親和性の対から誘導される代表的分析物の検出を明示し、そして所定の分析物に対しクレームされる方法の感受性閾値を特徴付けることを目的としている。その分析物がビオチンから成り、そしてストレプトアビジンが、コロイド状粒子上にてグラフト結合される。
より詳細には、ビオチン化された分析物が、質量5000のポリエチレングリコール重合体より構成され、その上にビオチン分子がその両端にてグラフト結合される。これらの生成物を商業的に入手することができる(Shearwater USA)。
本実施例は、アビジン/ストレプトアビジンの高い親和性の対から誘導される代表的分析物の検出を明示し、そして所定の分析物に対しクレームされる方法の感受性閾値を特徴付けることを目的としている。その分析物がビオチンから成り、そしてストレプトアビジンが、コロイド状粒子上にてグラフト結合される。
より詳細には、ビオチン化された分析物が、質量5000のポリエチレングリコール重合体より構成され、その上にビオチン分子がその両端にてグラフト結合される。これらの生成物を商業的に入手することができる(Shearwater USA)。
ストレプトアビジンにてグラフト結合されたコロイド状超常磁性粒子が、予め得られる。コロイド粒子が、J.Bibette in J.Magn. and Magn.Mat.V.122,P.37(1993) and F.Leal Calderon,T.Stora,O.Mondain-Monval,P.Poulin and J.Bibette,Phys.Rev.Lett.,72,2959(1994) により公開された手順により、又は T.Mason and J.Bibette,phys.Rev.Lett.77,3481(1996) and in WO 97/38787にて公開された手順に従い得られる。これら粒子の重合体を、ER 2800836出願の記載の方法により得ることができる。カルボキシ部位にストレプトアビジンをグラフト結合させることは、当業者に周知である。文献では、Molday RS,Dreyer WJ,Rembaum A,Yen SP,J Cell Biol 1975 Jan;64(1):75-88 1986,Jul;156(1):220-2を参照。磁場の下での凝集反応法は、「PEG-ビオチン」分析物とストレプトアビジン-グラフト結合のコロイド状磁気粒子とを混合させることである。所望による検出方法では、顕微鏡下にて直接観察される。
10-4乃至10-2桁の容量Φ当たり所定粒子の画分に対し、その評価法の感受性の限界を検出するように、分析物Cの濃度を種々変化させる。
各評価に対し関係混合物を、厚み50μのフラット毛細管に吸入し、それを２つのフラット磁石の間に置き、そこで生成磁場を約50mTより大きくし、毛細管の軸に対し並行にする。この磁場を、市販フラット磁石を用い生成する。それを約２分間にわたり印加し、そしてその毛細管を、磁場のない状態にて顕微鏡下で観察する。その方法は、鎖又は凝集体の存在が(図２を参照)、顕微鏡下にて見出される場合、可能(posotive)であり、そしてその粒子が、熱振動の作用下にて自然に再分散する場合、不可能(negative)である。
本例による本方法では分析物の濃度は、最大低さが10-9mol/lの桁まで可能(positive)である。比較として10-5mol/lより低いと従来の凝集反応法では、行うことは不可能である。
各評価に対し関係混合物を、厚み50μのフラット毛細管に吸入し、それを２つのフラット磁石の間に置き、そこで生成磁場を約50mTより大きくし、毛細管の軸に対し並行にする。この磁場を、市販フラット磁石を用い生成する。それを約２分間にわたり印加し、そしてその毛細管を、磁場のない状態にて顕微鏡下で観察する。その方法は、鎖又は凝集体の存在が(図２を参照)、顕微鏡下にて見出される場合、可能(posotive)であり、そしてその粒子が、熱振動の作用下にて自然に再分散する場合、不可能(negative)である。
本例による本方法では分析物の濃度は、最大低さが10-9mol/lの桁まで可能(positive)である。比較として10-5mol/lより低いと従来の凝集反応法では、行うことは不可能である。
補足研究として、鎖の平均長さを、試験される分析物の濃度(ビオチン化されたBSA,8対12のビオチン/BSA)の関数として決定した。図3は、10mTの磁場にて30分後(実線)及び磁場をなくして24時間後(破線)の鎖の平均長さを、ビオチン化したBSAの濃度の関数として明示する。
なを留意することは磁場の印加により、10-9mol/l以下の低い場合がある分析物の濃度では、その分析物を速く検知することができ、そのことは、現在販売されている評価法のものより感受性が有意に高いことを示している。
さらに留意することは、形成される鎖の平均長さは、分析物の濃度の関数として増大する。従って本発明の方法は、鎖の平均長さの決定により試験される分析物を定量的に検出することもできる。
さらに留意することは、形成される鎖の平均長さは、分析物の濃度の関数として増大する。従って本発明の方法は、鎖の平均長さの決定により試験される分析物を定量的に検出することもできる。
抗-vWF免疫グロブリンG(IgG)にてグラフト結合されたコロイド状磁気粒子の調製及びフォンビルブラント因子(von Willebrand factor)の評価法(assaying)
リン酸緩衝液(20mM,pH7.2)中で、1容量%のコロイド状磁気粒子(径206nm,Ademtech,Franceから入手)を含むコロイド粒子の溶液200μlを調製する。
その粒子を活性化させるために、1-メチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジ-イミド(EDAC) (0.01g/l)の200μl水溶液をその溶液に加え、そしてその混合物を、44℃にて20分間継続して攪拌する。次に過剰なEDACを、0.001%のTween20の水溶液にて洗浄し除去する。
リン酸緩衝液(20mM,pH7.2)中で、1容量%のコロイド状磁気粒子(径206nm,Ademtech,Franceから入手)を含むコロイド粒子の溶液200μlを調製する。
その粒子を活性化させるために、1-メチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジ-イミド(EDAC) (0.01g/l)の200μl水溶液をその溶液に加え、そしてその混合物を、44℃にて20分間継続して攪拌する。次に過剰なEDACを、0.001%のTween20の水溶液にて洗浄し除去する。
次に活性化された粒子の400μlのコロイド溶液を、400μlのIgG溶液(水398μl中で20mg/mlのIgG溶液1.7μl)に加えることにより、IgGsがコロイド状粒子上にてグラフト結合される。その溶液を44℃にて20分間継続して攪拌し、さらに周囲温度にて10分間攪拌する。
次に過剰なIgG溶液を、飽和緩衝液(0.001%のTween20を含むグリシン-BSA緩衝液)にてすすぎ洗により除去する。従って得られたグラフト結合された粒子を、1.2μmフィルターを通しろ過することにより分離する。
次に過剰なIgG溶液を、飽和緩衝液(0.001%のTween20を含むグリシン-BSA緩衝液)にてすすぎ洗により除去する。従って得られたグラフト結合された粒子を、1.2μmフィルターを通しろ過することにより分離する。
このように調製され、グラフト結合された粒子は、調節された密度及び配向のグラフト結合した抗体を呈する。さらにそのグラフト処理は、その溶液中で表面活性剤又は他のタンパク質が存在する場合でさえ安定である。
フォンビルブラント因子アッセイに対し、200%(2国際単位)のフォンビルブラント因子を含むLiatest(商標)vVF較正血漿(calibration plasma)(STA(商標)vWF較正物(Calibrator)、Diagnostica Stagoから入手)が使用され、そしてこの評価法を使用するために指示された手順は、グラフト結合された磁気粒子のコロイド状溶液を使用することを除いて、実質的にそれに従って行はれる。
フォンビルブラント因子アッセイに対し、200%(2国際単位)のフォンビルブラント因子を含むLiatest(商標)vVF較正血漿(calibration plasma)(STA(商標)vWF較正物(Calibrator)、Diagnostica Stagoから入手)が使用され、そしてこの評価法を使用するために指示された手順は、グラフト結合された磁気粒子のコロイド状溶液を使用することを除いて、実質的にそれに従って行はれる。
フォンビルブラント因子を100%,1%,及び0.1%に希釈した血漿を、Owren-Koller緩衝液にて調製する。Owren-Koller緩衝液を、コントロール(0%)として使用する。
次に、2容量のグリシン緩衝液、及びグラフト結合された磁気粒子の3容量のコロイド溶液を、それぞれ1容量のこれら希釈液に加える。
次に、2容量のグリシン緩衝液、及びグラフト結合された磁気粒子の3容量のコロイド溶液を、それぞれ1容量のこれら希釈液に加える。
次に得られた溶液を、断面が50μmの四角形の毛細管(square capillary)に入れる。その構成物を、70mTの強度の磁場に5分間置いた。その磁場を除去した後、その試料を、光学顕微鏡の支持台(platform)に置いた。図4A,B,C及びDは、試験された種々の希釈液に対する顕微鏡下の試料の外観を示す。特に留意すべきことは、さらに記載された方法により、コントロール(0%)から0.1%の試料を視覚的に識別することができる。この結果は、Liatest(商標)に対し明示された2%という検出された閾値より良好である。
Claims (27)
- 液体媒体中にて少なくとも1つの分析物を検出しそして／又は定量するための方法において、検出されそして／又は評価される分析物に対し特異的な少なくとも１つのリガンドと、表面にて官能化されたコロイド状磁気粒子を使用すること、及び：
1．前記粒子を分析される前記媒体と接触させるようにする工程、
2．前記磁気粒子を鎖形状に構成させるために十分な強度にて、前記媒体に磁場をかける工程、
3．鎖の2つ連続して隣接する粒子にそれぞれ存在する少なくとも２つの特異的リガンドと、関連する分析物の結合又は組み合わせができるに十分な期間にわたり前記磁場を保持する工程、
4．磁場をとり除く工程、並びに
5．前記分析物の存在及び／又は不存在の決定、そして適切な場合、コロイド状磁気粒子の永続的 (permanent) 鎖の存在及び／又は不存在における濃度の決定の工程、
を含むことを特徴とする方法。 - 前記粒子がコロイド状超常磁性粒子であることを特徴とする請求項１記載の方法。
- 前記コロイド状超常磁性粒子が、水溶性の鉄流動体と重合体との共沈殿により、又は有機相中で鉄流動体との乳化により得られることを特徴とする、請求項２記載の方法。
- コロイド状磁気粒子におけるサイズが、5と10,000との間、そしてより好ましくは100と500nmとの間であることを特徴とする請求項１乃至３のいずれか１項記載の方法。
- 特定リガンドが、吸収相互作用、共有結合による相互作用、及び／又は高親和性相互作用により粒子の表面にて固定化されることを特徴とする請求項１乃至４のいずれか1項記載方法。
- 固定化されるリガンドが、高親和性結合対２つの一方であることを特徴とする請求項１乃至５のいずれか一項記載の方法。
- そのリガンドは、(ポリ)カルボハイドレイト/エレクチン、ビオチン又はブオチン化化合物/アビジン又はストレプトアビジン、タンパク質受容体及びその特定リガンド、及びハプテン/抗体などの結合対の双方の一方から選択されることを特徴とする請求項６記載の方法。
- 固定されるリガンドは、ペプチド、遊離又は複合形状の糖タンパク質、リポタンパク質及び他の類似又は誘導される構造体を含むタンパク質、DNA又はRNA及びこれらの相同体、単糖又は2糖、オリゴ糖、及び多糖などの糖類、脂質、ホルモン、受容体、代謝産物又は他の生物的物質から選択される化合物であることを特徴とする請求項１乃至７のいずれか１項記載の方法。
- 標的とされる分析物が、抗原、抗体及び核酸及び／又はタンパク質であることを特徴とする請求項１乃至８のいずれか１項記載の方法。
- 分析される媒体が、分析物をその特異的リガンドの１の少なくとも２分子に対する反応性が求められるようにするため、前もって予備処理されることを特徴とする請求項１乃至９のいずれか１項記載の方法。
- 上記予備処理は、高親和性結合対の相手側の１と、分析物の官能化を含むことを特徴とする請求項１０記載の方法。
- ウイルス、細菌又は原虫及び他の感染物などの病原体に特異的抗体、腫瘍に対する抗体、アレルゲンに対する抗体、又は自己抗体などの分析物を検出し、そして／又は定量するための請求項１乃至１１の何れか１項記載の方法。
- 遊離抗原などの抗原類、たとえば血液タンパク質及び血塊因子、代謝産物、ホルモン又は媒体などの因子、又は支持体に結合される抗原、たとえば微生物の表面抗原、膜結合受容体、血液群の抗原、及び主要組織適合系による抗原などを検出し、そして／又は定量するための請求項１乃至１１の何れか１項記載方法。
- さらにコロイド状磁気粒子が、第二標識を移送することを特徴とする請求項１乃至１３の何れか１項記載の方法。
- 本標識が、視覚的で、所望により機械的又は電気的に特徴付けられることを特徴とする請求項１４記載の方法。
- 本標識が、色彩の顔料及び蛍光剤又はリン蛍光剤から選択されることを特徴とする請求項１４又は１５記載の方法。
- 検出される種々の分析物に対し特異的な少なくとも１つのリガンドと、それぞれ官能化されたコロイド状磁気粒子の幾つかの集団とが、使用されることを特徴とする請求項１乃至１６の何れか１項記載の方法。
- 磁場が連続性であることを特徴とする請求項１乃至１７のいずれか１項記載の方法。
- 連続磁場が、5乃至500mT、好ましくは10乃至100mTであることを特徴とする請求項１８記載の方法。
- 磁場が交番することを特徴とする請求項１乃至１９の何れか１項記載の方法。
- その鎖の特徴付けが、顕微鏡下で視覚により直接行はれるか、そして／又は適切な場合に何らかの光学的、機械的、又は電気的な方法により間接的に行はれることを特徴とする請求項１乃至２０の何れか1項記載の方法。
- この鎖の特徴付けが、測光法又は比濁分析法により行はれることを特徴とする請求項２１記載の方法。
- この鎖の特徴付けが、画像処理により行はれることを特徴とする請求項２１記載の方法。
- CCDカメラが、画像捕捉装置として使用されることを特徴とする請求項２３記載の方法。
- レザーを光源として使用することを特徴とする請求項２１乃至２４の何れか1項記載の方法。
- 液体媒体中に分析物を検出するための試薬キットにおいて、標的分析物に対し特異的な少なくとも１つのリガンドと、表面にて官能化された少なくともコロイド状磁気粒子を含むことを特徴とする試薬キット。
- 微量流動系において、少なくとも１つの分析物を検出しそして／又は定量するための、請求項１乃至２５の何れか１項記載の方法の使用。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR0115011A FR2832507B1 (fr) | 2001-11-20 | 2001-11-20 | Methode de detection d'analyte(s) a l'aide de particules magnetiques colloidales |
| PCT/FR2002/003974 WO2003044532A1 (fr) | 2001-11-20 | 2002-11-20 | Methode de detection d'analyte(s) a l'aide de particules magnetiques colloidales |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2005517899A true JP2005517899A (ja) | 2005-06-16 |
| JP2005517899A5 JP2005517899A5 (ja) | 2006-01-05 |
Family
ID=8869592
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2003546110A Pending JP2005517899A (ja) | 2001-11-20 | 2002-11-20 | コロイド状磁気粒子を使用した分析物の検出方法 |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7332353B2 (ja) |
| EP (1) | EP1446666B1 (ja) |
| JP (1) | JP2005517899A (ja) |
| KR (1) | KR20050044559A (ja) |
| CN (1) | CN100501403C (ja) |
| AT (1) | ATE431553T1 (ja) |
| AU (1) | AU2002361324A1 (ja) |
| BR (1) | BR0214233A (ja) |
| CA (1) | CA2467050A1 (ja) |
| DE (1) | DE60232353D1 (ja) |
| ES (1) | ES2325917T3 (ja) |
| FR (1) | FR2832507B1 (ja) |
| HU (1) | HU225636B1 (ja) |
| MX (1) | MXPA04004679A (ja) |
| NO (1) | NO20042579L (ja) |
| PL (1) | PL368690A1 (ja) |
| RU (1) | RU2004118490A (ja) |
| WO (1) | WO2003044532A1 (ja) |
| ZA (1) | ZA200403903B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015508158A (ja) * | 2012-02-02 | 2015-03-16 | ホリバ・エービーエックス・エスエーエスＨｏｒｉｂａ Ａｂｘ Ｓａｓ | 生物学的試料から血液学的なおよび生化学的な測定を実行するための、装置および方法 |
Families Citing this family (31)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2878960A1 (fr) * | 2004-12-08 | 2006-06-09 | Centre Nat Rech Scient | Procede pour mettre en oeuvre un test d'agglutination dans un microcanal |
| US9733315B2 (en) * | 2005-07-27 | 2017-08-15 | University Of Houston | Nanomagnetic detector array for biomolecular recognition |
| US7564245B2 (en) | 2005-08-31 | 2009-07-21 | T2 Biosystems, Inc. | NMR device for detection of analytes |
| US8586389B2 (en) * | 2005-09-28 | 2013-11-19 | Kent State University | Ligand concentrating, liquid crystal biosensor system |
| EP1979751A1 (en) | 2006-01-25 | 2008-10-15 | Koninklijke Philips Electronics N.V. | Device for analyzing fluids |
| KR100738496B1 (ko) * | 2006-07-27 | 2007-07-11 | 한양대학교 산학협력단 | 자성 미세입자 및 배향성 고정화 리간드를 이용한 항체단백질 분리방법 |
| AU2007317787B2 (en) | 2006-11-08 | 2012-07-12 | T2 Biosystems, Inc. | NMR systems for in vivo detection of analytes |
| KR100823684B1 (ko) * | 2006-12-06 | 2008-04-21 | 한국전자통신연구원 | 바코드 ｄｎａ를 이용한 생물학적 표적 물질의 검출 방법 |
| FR2919390B1 (fr) | 2007-07-27 | 2009-10-30 | Bertin Technologies Soc Par Ac | Procede de dosage d'un analyte dans un milieu liquide |
| JP2011503541A (ja) * | 2007-11-06 | 2011-01-27 | ティツー・バイオシステムズ・インコーポレーテッド | 磁気共鳴緩和測定用の小型の磁石およびｒｆコイル |
| WO2009072457A1 (ja) * | 2007-12-03 | 2009-06-11 | Tokyo Institute Of Technology | 被覆磁性微粒子を用いたバイオセンシング方法及び該方法に用いるバイオセンシング装置 |
| FR2928656B1 (fr) * | 2008-03-14 | 2011-08-26 | Biomerieux Sa | Procede de detection en temps reel de microorganismes dans un milieu de culture liquide par agglutination. |
| US9157974B2 (en) | 2008-10-29 | 2015-10-13 | T2 Biosystems, Inc. | NMR detection of coagulation time |
| EP2492665A1 (en) * | 2009-10-19 | 2012-08-29 | Tokyo Institute of Technology | Biosensor using magnetic microparticles |
| US9023607B2 (en) * | 2010-04-26 | 2015-05-05 | Intellectual Discovery Co., Ltd. | Method for early diagnosis of alzheimer'S disease using phototransistor |
| FR2959820B1 (fr) * | 2010-05-10 | 2013-03-15 | Bertin Technologies Sa | Procede de dosage d'un analyte dans un milieu liquide |
| US8409807B2 (en) | 2010-10-22 | 2013-04-02 | T2 Biosystems, Inc. | NMR systems and methods for the rapid detection of analytes |
| BR122020001802B1 (pt) | 2010-10-22 | 2021-05-18 | T2 Biosystems, Inc | métodos para detectar a presença de um patógeno em uma amostra de sangue total e para detectar um analito em uma amostra |
| US8563298B2 (en) | 2010-10-22 | 2013-10-22 | T2 Biosystems, Inc. | NMR systems and methods for the rapid detection of analytes |
| EP2541250A1 (en) | 2011-06-30 | 2013-01-02 | Koninklijke Philips Electronics N.V. | Molecular architecture on magnetic particles for affinity assays with low non-specific binding |
| EP2732046B1 (en) | 2011-07-13 | 2017-09-06 | T2 Biosystems, Inc. | Nmr methods for monitoring blood clot formation |
| EP2748651B1 (en) | 2011-09-21 | 2017-08-30 | T2 Biosystems, Inc. | Nmr methods for endotoxin analysis |
| DE102011089798B4 (de) | 2011-12-23 | 2021-06-10 | Biophysical Tools GmbH | Massiv paralleler Test molekularer Wechselwirkungen basierend auf magnetischen Nano- und Mikropartikeln |
| US9562271B2 (en) | 2012-04-20 | 2017-02-07 | T2 Biosystems, Inc. | Compositions and methods for detection of Candida species |
| AU2013355183A1 (en) | 2012-12-07 | 2015-06-11 | T2 Biosystems, Inc. | Methods for monitoring tight clot formation |
| WO2017114901A1 (en) * | 2015-12-29 | 2017-07-06 | N.V. Nutricia | Nutritional formula with non-digestible oligosaccharides and non-replicating lactic acid producing bacteria |
| JP2019512208A (ja) | 2016-01-21 | 2019-05-16 | ティー２ バイオシステムズ，インコーポレーテッド | 細菌を迅速に検出するｎｍｒ法及びシステム |
| US11585882B2 (en) * | 2018-04-11 | 2023-02-21 | Mars Sciences Limited | Superparamagnetic particle imaging and its applications in quantitative multiplex stationary phase diagnostic assays |
| JP7264998B2 (ja) * | 2018-05-30 | 2023-04-25 | セプマグ、システムズ、ソシエダッド、リミターダ | 生物学的及び化学的物質を検出するための光磁気泳動法 |
| CN112970076A (zh) * | 2018-07-19 | 2021-06-15 | 贝克曼库尔特有限公司 | 磁性颗粒 |
| CA3211098A1 (en) | 2021-03-09 | 2022-09-15 | Chantal Fournier-Wirth | Detection of infectious agent based on recombinase polymerase amplification combined with a magnetic field-enhanced agglutination |
Family Cites Families (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK140815B (da) * | 1975-06-10 | 1979-11-19 | Weeke Bengt | Fremgangsmåde til påvisning eller bestemmelse af antistoffer i legemsvæsker ved hjælp af kendte antigener eller til bestemmelse af antigener ved hjælp af kendte antistoffer fra legemsvæsker samt et middel til anvendelse ved udøvelse af fremgangsmåden. |
| US4554088A (en) * | 1983-05-12 | 1985-11-19 | Advanced Magnetics Inc. | Magnetic particles for use in separations |
| US4622298A (en) * | 1984-08-09 | 1986-11-11 | Becton, Dickinson And Company | Detection and quantitation of microorganisms, leukocytes and squamous epithelial cells in urine |
| US5512332A (en) * | 1985-10-04 | 1996-04-30 | Immunivest Corporation | Process of making resuspendable coated magnetic particles |
| US5639620A (en) | 1990-10-31 | 1997-06-17 | Coulter Corporation | Polymeric particles having a biodegradable gelatin or aminodextran coating and process for making same |
| US5637469A (en) * | 1992-05-01 | 1997-06-10 | Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods and apparatus for the detection of an analyte utilizing mesoscale flow systems |
| JP3547437B2 (ja) * | 1992-10-15 | 2004-07-28 | クールター インターナショナル コーポレイション | ゼラチン−アミノデキストラン被膜を有する粒子およびその製造方法 |
| US5298741A (en) * | 1993-01-13 | 1994-03-29 | Trustees Of Tufts College | Thin film fiber optic sensor array and apparatus for concurrent viewing and chemical sensing of a sample |
| GB9524393D0 (en) * | 1995-11-29 | 1996-01-31 | Mini Agriculture & Fisheries | Extraction and labelling of materials |
| US5817458A (en) | 1996-10-15 | 1998-10-06 | The Avriel Group, Amcas Division Inc. | Reagent system for detecting HIV-infected peripheral blood lymphocytes in whole blood |
| JP2001503859A (ja) * | 1996-10-15 | 2001-03-21 | バイオ―テック・イメイジング・インコーポレイテッド | Ｈｉｖ感染細胞の検出試薬系およびそのためのキット |
| WO1998051435A1 (en) * | 1997-05-14 | 1998-11-19 | Weixin Tang | Fully-coated, uniform-sized metallic particles |
| DE19822123C2 (de) * | 1997-11-21 | 2003-02-06 | Meinhard Knoll | Verfahren und Vorrichtung zum Nachweis von Analyten |
| EP1179585B1 (en) * | 1997-12-24 | 2008-07-09 | Cepheid | Device and method for lysis |
| CA2318779C (en) * | 1998-01-22 | 2009-08-25 | Luminex Corporation | Microparticles with multiple fluorescent signals |
-
2001
- 2001-11-20 FR FR0115011A patent/FR2832507B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
2002
- 2002-11-20 US US10/496,114 patent/US7332353B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-11-20 HU HU0402276A patent/HU225636B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2002-11-20 BR BR0214233-3A patent/BR0214233A/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-11-20 ES ES02796851T patent/ES2325917T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-11-20 AU AU2002361324A patent/AU2002361324A1/en not_active Abandoned
- 2002-11-20 CA CA002467050A patent/CA2467050A1/fr not_active Abandoned
- 2002-11-20 JP JP2003546110A patent/JP2005517899A/ja active Pending
- 2002-11-20 DE DE60232353T patent/DE60232353D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-11-20 PL PL02368690A patent/PL368690A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2002-11-20 AT AT02796851T patent/ATE431553T1/de not_active IP Right Cessation
- 2002-11-20 RU RU2004118490/15A patent/RU2004118490A/ru not_active Application Discontinuation
- 2002-11-20 EP EP02796851A patent/EP1446666B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 2002-11-20 CN CNB028230337A patent/CN100501403C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-11-20 MX MXPA04004679A patent/MXPA04004679A/es not_active Application Discontinuation
- 2002-11-20 WO PCT/FR2002/003974 patent/WO2003044532A1/fr active Application Filing
- 2002-11-20 KR KR1020047007733A patent/KR20050044559A/ko not_active Application Discontinuation
-
2004
- 2004-05-20 ZA ZA200403903A patent/ZA200403903B/en unknown
- 2004-06-18 NO NO20042579A patent/NO20042579L/no not_active Application Discontinuation
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015508158A (ja) * | 2012-02-02 | 2015-03-16 | ホリバ・エービーエックス・エスエーエスＨｏｒｉｂａ Ａｂｘ Ｓａｓ | 生物学的試料から血液学的なおよび生化学的な測定を実行するための、装置および方法 |
| US10073086B2 (en) | 2012-02-02 | 2018-09-11 | Horiba Abx Sas | Device and method for carrying out haematological and biochemical measurements from a biological sample |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2832507B1 (fr) | 2004-02-20 |
| CN100501403C (zh) | 2009-06-17 |
| US20050048673A1 (en) | 2005-03-03 |
| MXPA04004679A (es) | 2005-05-17 |
| ES2325917T3 (es) | 2009-09-24 |
| AU2002361324A1 (en) | 2003-06-10 |
| EP1446666B1 (fr) | 2009-05-13 |
| WO2003044532A1 (fr) | 2003-05-30 |
| US7332353B2 (en) | 2008-02-19 |
| PL368690A1 (en) | 2005-04-04 |
| BR0214233A (pt) | 2004-09-21 |
| HU225636B1 (en) | 2007-05-02 |
| CA2467050A1 (fr) | 2003-05-30 |
| HUP0402276A3 (en) | 2005-11-28 |
| DE60232353D1 (de) | 2009-06-25 |
| NO20042579L (no) | 2004-06-18 |
| RU2004118490A (ru) | 2005-04-20 |
| FR2832507A1 (fr) | 2003-05-23 |
| HUP0402276A2 (hu) | 2005-02-28 |
| ATE431553T1 (de) | 2009-05-15 |
| CN1589405A (zh) | 2005-03-02 |
| EP1446666A1 (fr) | 2004-08-18 |
| ZA200403903B (en) | 2005-06-23 |
| KR20050044559A (ko) | 2005-05-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2005517899A (ja) | コロイド状磁気粒子を使用した分析物の検出方法 | |
| JP4053092B2 (ja) | 媒体中の分析物を単離、特には検出又は定量する方法 | |
| JP4271034B2 (ja) | 磁場を用いた結合アッセイ方法 | |
| KR100606387B1 (ko) | 힘 판별 분석 | |
| JP5200003B2 (ja) | 磁場を用いた試料中の標的分子の検出 | |
| US10386364B2 (en) | Magnetic bead aggregation assay system | |
| US20100279887A1 (en) | Nonlinear magnetophoretic separation of biological substances | |
| JP2625577B2 (ja) | 磁気標識した結合要素を用いた磁気制御型結合アッセイ | |
| JP2009515179A (ja) | 特に血液型の抗体／抗原複合体の存在の証明のための磁気的免疫診断方法 | |
| KR20130051647A (ko) | 자성 입자를 이용한 바이오 물질의 분석 방법 | |
| US20080268481A1 (en) | Sensitive Magnetic Catch Assay By Building a Strong Binding Couple | |
| US20080309323A1 (en) | Method for biochemical analysis | |
| JPH07504987A (ja) | 磁気標識した結合要素を用いた結合親和力の測定方法 | |
| JPH05504828A (ja) | 毛管の流れ装置および二重捕捉アツセイ法 | |
| RU2543631C2 (ru) | Способ функционализации поверхности магнитных наночастиц | |
| JPH09229936A (ja) | 磁性粒子を用いる被検物質の測定方法並びに該方法に使用する担体及び測定器具 | |
| JPH10239317A (ja) | 地帯現象抑制測定方法及び測定試薬 | |
| Baudry et al. | Colloids for studying molecular recognition | |
| PERRIN | Capture and detection of biomolecules using dual colloid particles | |
| KR20150006318A (ko) | pH 미터를 이용한 바이오 물질 검출 방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20051020 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20051020 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20080122 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20080421 |
|
| A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20080428 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20090120 |