HU225636B1 - Method for detecting analyte(s) in fluid - Google Patents
Method for detecting analyte(s) in fluid Download PDFInfo
- Publication number
- HU225636B1 HU225636B1 HU0402276A HUP0402276A HU225636B1 HU 225636 B1 HU225636 B1 HU 225636B1 HU 0402276 A HU0402276 A HU 0402276A HU P0402276 A HUP0402276 A HU P0402276A HU 225636 B1 HU225636 B1 HU 225636B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- particles
- analyte
- magnetic
- magnetic field
- chains
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 58
- 239000012491 analyte Substances 0.000 title claims description 56
- 239000012530 fluid Substances 0.000 title description 4
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 claims description 85
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 79
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 31
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 21
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 18
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 18
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 18
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 claims description 17
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 16
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 14
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 13
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 9
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 9
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 claims description 8
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000011554 ferrofluid Substances 0.000 claims description 8
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 7
- 238000011002 quantification Methods 0.000 claims description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 6
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 5
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 claims description 5
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 4
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 claims description 4
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 4
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 4
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 claims description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 4
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 3
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 claims description 3
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 claims description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 2
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 claims description 2
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 claims description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 claims description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 2
- 239000013566 allergen Substances 0.000 claims description 2
- -1 antibodies Proteins 0.000 claims description 2
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 claims description 2
- 229940019700 blood coagulation factors Drugs 0.000 claims description 2
- 229960000182 blood factors Drugs 0.000 claims description 2
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 claims description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 claims description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 claims description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 2
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 claims description 2
- 108020004084 membrane receptors Proteins 0.000 claims description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 claims description 2
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 claims description 2
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 claims description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 2
- 239000005080 phosphorescent agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000000049 pigment Substances 0.000 claims description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 2
- 238000012800 visualization Methods 0.000 claims description 2
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 claims 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 claims 1
- 238000010291 electrical method Methods 0.000 claims 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 claims 1
- 238000010297 mechanical methods and process Methods 0.000 claims 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 19
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N Iron oxide Chemical compound [Fe]=O UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 description 9
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 8
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 239000000696 magnetic material Substances 0.000 description 6
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 6
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 235000013980 iron oxide Nutrition 0.000 description 5
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 description 5
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000007818 agglutination assay Methods 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 4
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 2
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005653 Brownian motion process Effects 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241001415846 Procellariidae Species 0.000 description 1
- WGLPBDUCMAPZCE-UHFFFAOYSA-N Trioxochromium Chemical compound O=[Cr](=O)=O WGLPBDUCMAPZCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 238000005537 brownian motion Methods 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000013626 chemical specie Substances 0.000 description 1
- 229910000423 chromium oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- IVMYJDGYRUAWML-UHFFFAOYSA-N cobalt(ii) oxide Chemical class [Co]=O IVMYJDGYRUAWML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000001739 density measurement Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 125000003700 epoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003302 ferromagnetic material Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- VBMVTYDPPZVILR-UHFFFAOYSA-N iron(2+);oxygen(2-) Chemical class [O-2].[Fe+2] VBMVTYDPPZVILR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N iron(III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]=O JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000014380 magnesium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 238000007885 magnetic separation Methods 0.000 description 1
- 230000005415 magnetization Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 229910000480 nickel oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 1
- GNRSAWUEBMWBQH-UHFFFAOYSA-N oxonickel Chemical compound [Ni]=O GNRSAWUEBMWBQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003359 percent control normalization Methods 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000009597 pregnancy test Methods 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000010008 shearing Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012798 spherical particle Substances 0.000 description 1
- 239000013077 target material Substances 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 229910000859 α-Fe Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54326—Magnetic particles
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54326—Magnetic particles
- G01N33/5434—Magnetic particles using magnetic particle immunoreagent carriers which constitute new materials per se
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54346—Nanoparticles
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Investigating Or Analyzing Materials By The Use Of Magnetic Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
(54) Eljárás és reagenskészlet analit(ok) detektálására folyékony közegben (57) Kivonat
A találmány tárgya eljárás legalább egy analit detektálására és/vagy kvantitatív meghatározására egy folyékony közegben.
A találmány lényege az, hogy olyan mágneses kolloid részecskéket alkalmaznak, amelyeket a felületükön egy detektálandó és/vagy mérendő analit legalább egy specifikus liganduma által reakcióképessé tesznek, és amely eljárás során ezeket a részecskéket érintkezésbe hozzák az analizálandó közeggel, a közeget olyan intenzitású mágneses tér hatásának teszik ki, ami elégséges a mágneses részecskék láncok formájában való szerveződésének kiváltására, ezt a mágneses teret fenntartják olyan időtartamra, ami elégséges az adott analit kapcsolódásának vagy asszociációjának létrejöttéhez legalább két specifikus ligandummal, amelyek egy lánc két egymást követő szomszédos részecskéjén vannak jelen, megszüntetik a mágneses teret, és megállapítják az analit meglétét és/vagy hiányát és adott esetben annak koncentrációját is a mágneses kolloid részecskék folytonos láncának (láncainak) a folyékony közegben való megléte vagy hiánya alapján.
HU 225 636 Β1
A leírás terjedelme 12 oldal (ezen belül 3 lap ábra)
HU 225 636 Β1
A találmány tárgya eljárás analit(ok) detektálására kolloid mágneses részecskék segítségével, vagyis olyan eljárás, amely alkalmas legalább egy analizálandó anyagfajta detektálására egy folyékony biológiai vagy szintetikus próbamintán belül, és amely eljárás magában foglalja ezen anyagfajta összekapcsolását egy reagenssel, amelyet össze lehet kötni egy agglutinációs reagenssel. A találmány tárgyát képezi az eljárás megvalósítására alkalmas reagenskészlet is.
Napjainkra már számos úgynevezett agglutinációs eljárás vált ismertté. Ezeket többségükben antigének és/vagy antitestek detektálására használják diagnosztizálás céljából. Ezeket az eljárásokat többek között biológiai méréseknél (terhességi tesztek, alvadási tesztek) alkalmazzák vagy fertőző betegségek diagnosztizálására. Ezek az eljárások azonban általában korlátozott érzékenységűek. Ezeknek a teszteknek az alapelve tulajdonképpen abból áll, hogy kimutatják egy gél képződését kolloid részecskékből, amely gél az analit jelenlétében jön létre. Az analitnak az ilyen típusú tesztnél hozzá kell tudni kapcsolódnia két kolloid részecskéhez, amelyek felületei egy, a mérendő analitot a legszélesebb értelemben felismerő molekula által vannak lefedve.
A jelen találmány részletesebben megvizsgálva a mágneses részecskék kolloid agglutinációs reagensként való alkalmazásán alapszik.
A mágneses részecskéket már alkalmazták biológiai szétválasztási technikáknál vagy diagnosztikai teszteknél (WO 94/09368; EP 180 384; WO 98/51435). A mágneses szétválasztási technikák gyorsnak bizonyultak, könnyen alkalmazhatónak, és egy viszonylag egyszerű felszerelést igényelnek. A mágneses részecskékből kiindulva, amelyek egy, a befogandó analitot felismerő molekulával vannak lefedve, a mágneses erők hatása alatt külön lehet választani a kérdéses analitot egy összetett keverékből. Ezt a folyamatot hasznosítják például az úgynevezett ELISA (Enzyme Linked Immunoassay)-tesztben. A felhasznált mágneses részecskék egy mágneses anyagot foglalnak magukban, például magnezitet, ferritet, króm-oxidot vagy nikkel-oxidot, egy általában szerves jellegű mátrixban. A mágneses részecskék reakcióképessé vannak téve a felületükön antigén, haptén vagy antitest típusú reagenscsoportok által, amelyek arra szolgálnak, hogy reakcióba lépjenek a különválasztandó aktív anyagfajtával.
A mágneses remanenciához kapcsolódó problémák kiküszöbölése érdekében általában előnyben részesítenek egy szuperparamágneses anyagot a hagyományos ferromágneses anyagokkal szemben. A ferrofluidumok, amelyek egy nagyon nagy (100 mT-nél nagyobb) telítési mágnesezettséggel rendelkeznek, és nem mutatnak semmiféle mágneses remanenciát egy külső mágneses tér hiányában, megfelelő alanyok arra, hogy bekerüljenek a szuperparamágneses kolloidok előállítási előírásaiba.
A jelen találmány célja az, hogy hasznosítsa az ilyen mágneses kolloidok képességét egy speciális szerkezeti szerveződés felvételére mágneses tér hatása alatt.
Ebben az esetben a mágneses tér által kiváltott agglutináció, a kolloidok térfogat szerinti frakciójának megfelelően, elszigetelt „láncokhoz” vagy klaszternek nevezett lánchalmazokhoz vezet. A láncokat és a klasztereket a továbbiakban megkülönböztetés nélkül láncokként említjük. Ezekről a szerkezetekről és ezek kialakulásáról számos publikációban található részletes ismertetés.
Másképp kifejezve, mágneses tér hiányában ezek a részecskék diszpergált formában jelennek meg. Mágneses tér jelenlétében viszont úgy szerveződnek, hogy vizes oldatban részecskeláncokat képeznek. Ezek a láncok természetesen reverzibilisek, és gyorsan felbomlanak a mágneses tér megszűnésekor a hőmozgás hatására. Előnyösen, ha ezek a részecskék eléggé kicsik, tehát Brown-féle részecskéknek tekinthetők és polarizálhatok, ezek a láncok gyorsan kialakulnak a rájuk alkalmazott mágneses tér tengelyében és nem érzékenyek a gravitációra.
A feltalálók nem várt módon felismerték, hogy lehetőség volna a mágneses kolloid részecskék ezen képességének kiaknázására, hogy nevezetesen mágneses tér hatására gyorsan részecskeláncokba rendeződnek, mégpedig speciális anyagfajták detektálására és kvantitatív meghatározására folyékony közegben.
Abban az esetben, amikor ezek a mágneses kolloid részecskék a felületükön specifikus ligandumokkal vannak lefedve, és az a folyamatos fázis, amelyben diszpergálva vannak, egy olyan anyagfajtát tartalmaz, amely képes reakcióba lépni legalább két specifikus ligandummal, a mágneses tér katalizálni fogja az adott anyagfajta kapcsolódását két különálló és szomszédos részecskéhez a mágneses tér által létrehozott láncban. A mágneses tér megszüntetése után az anyagfajta által rögzített részecskék folytonos láncba szerveződve maradnak, és ily módon kimutatják a megcélzott anyagfajta jelenlétét az analizált közegben.
Pontosabban szólva, a találmány alapvető tárgya olyan eljárás legalább egy analit detektálására és/vagy kvantitatív meghatározására egy folyékony közegben, amely eljárásra az jellemző, hogy olyan mágneses kolloid részecskéket alkalmazunk, amelyeket a felületükön egy detektálandó és/vagy mérendő analit legalább egy specifikus liganduma által reakcióképessé teszünk, és amely eljárás során:
1) ezeket a részecskéket érintkezésbe hozzuk az analizálandó közeggel,
2) a közeget olyan intenzitású mágneses tér hatásának tesszük ki, ami elégséges a mágneses részecskék láncok formájában való szerveződésének kiváltására,
3) ezt a mágneses teret fenntartjuk olyan időtartamra, ami elégséges az adott analit kapcsolódásának vagy asszociációjának létrejöttéhez legalább két specifikus ligandummal, amelyek egy lánc két szomszédos részecskéjén vannak jelen,
4) megszüntetjük a mágneses teret és
5) megállapítjuk az analit meglétét és/vagy hiányát és adott esetben annak koncentrációját is, a mágneses kolloid részecskék folytonos láncának (láncainak) a folyékony közegben való megléte vagy hiánya alapján.
HU 225 636 Β1
Meg kell jegyeznünk, hogy az a sorrend, amelyben az egyes lépéseket beszámoztuk, a találmány különösen előnyös megvalósítási módjának felel meg, azonban a találmány keretei között ugyanígy lehetséges egy másféle sorrend alkalmazása is, például oly módon, hogy a mágneses teret az analizálandó közeg bevezetése előtt aktiváljuk.
Ugyancsak megvalósítható a találmány keretein belül, hogy összegyűjtjük a detektálandó, mérendő vagy eltávolítandó analit által megkötött mágneses kolloid részecskéket.
Ugyancsak lehetséges a találmány szerinti eljárás olyan változata, amelynél a mágneses tér geometriája és gradiense, valamint az „agglutinációs cellák” geometriája nagyon különböző. Ezek a változatok a mindenkori esettől függően képesek egyidejűleg optimalizálni a ligandum-receptor asszociáció sebességét és a folytonos láncok detektálását, amelyek a mindenkori feltételektől függően igen változatos hosszúságúak és vastagságúak lehetnek. Különösen előnyös a találmány értelmében mikrofluidumos készülékek alkalmazása, hogy a csatornák szélessége vagy magassága kisebb legyen, mint 100 pm. Ezen csatornák tengelyére merőlegesen vagy azokkal párhuzamosan tájolt mágneses tereket lehet alkalmazni.
A találmány szerinti eljárás előnyösen alkalmazható diagnosztikai eszközökben, mint például analitikai berendezésekben. Különösen előnyösen alkalmazható a megoldás automatizált analitikai berendezésekben.
Ami a folytonos láncok részletesebb jellemzését illeti, ez előnyösen megvalósítható az analizált közeg egyszerű mikroszkópos vizsgálatával. Mindazonáltal, különösen automatizált analitikai berendezésben történő alkalmazásnál, célszerű a láncok meglétét optikai úton detektálni. így például detektálni lehet a láncok meglétét a fényszóródás mérésével, például fotometriás vagy turbidimetriás eljárással. Egy másik lehetséges változatot jelent például egy zárt láncú (CCD) kamera által felvett kép kezelése. Ennek a megvalósítási változatnak az előnye abban van, hogy lehetővé teszi a láncok méretének finomanalízisét. A detektálás ezen változataihoz felhasználható bármely erre alkalmas fényforrás, előnyösen lézer.
Természetesen a hagyományos agglutinátumokhoz asszimilálható láncok kialakulása függ egyrészt az analit koncentrációjától az analizált közegben, másrészt pedig a részecskekoncentrációtól. Lényegében úgy lehet tekinteni, hogy minél több analit van jelen az adott közegben, annál hosszabbak lesznek a láncok, és minél nagyobb a részecskekoncentráció, annál vastagabbak lesznek a láncok és asszimilálhatóbbak a halmazokhoz. A jelen találmány keretei között ily módon lehetségessé válik az analitkoncentráció meghatározása a folytonos lánc(ok)ba szerveződött mágneses részecskék sűrűségének kvantitatív meghatározása alapján. Ez a sűrűségmérés megvalósítható a hagyományos technológiákkal. Egy adott analit számára ily módon előre létrehozható egy referenciakalibrálás.
A találmány szerinti eljárás különösen érdekes az érzékenység vonatkozásában. Az eljárás ennek megfelelően különösen előnyös a folyékony közegekben levő alacsony koncentrációjú analitok detektálására.
Amint azt az alább ismertetésre kerülő példa mutatja, a láncok fennmaradnak egy 10-9 mol/l-10-5 mol/l nagyságrendű analitkoncentráció, adott esetben antigénkoncentráció mellett egy hagyományos agglutinációs teszt esetében, amelyet ugyanazzal a ligandum-receptor párral (biotin-sztreptavidin) végeztünk. Előnyösen ez a koncentrációküszöb alacsonyabb, mint amely koncentrációküszöb szükséges az aggregálódással szembeni ellenálláshoz vagy egy gél képződéséhez, amint az várható egy hagyományos agglutinációs tesztben, amelyet ugyanazzal az antigén-antitest párral hajtanak végre mágneses tér hiányában.
A találmány szerinti eljárással tehát előnyösen helyettesíthető egy hagyományos agglutinációs teszt, és jelentős mértékben növelhető a teszt érzékenysége.
A jelen találmány értelmében a „kolloid kifejezés azt jelenti, hogy a részecskék 5 és 10 000 nm, előnyösen 100 és 500 nm közötti mérettel rendelkeznek. Mindamellett különösen célszerű előnyben részesíteni a lehető legkisebb részecskéket, miközben garantáljuk kellő mágneses szuszceptibilitásukat egy azonnali agglutináció megvalósulásához a mágneses dipoláris erők és a Brown-féle mozgás együttes hatására. Általában ezt a kompromisszumot legfeljebb néhány mikrométer, előnyösen kb. 0,1-0,5 mikrométer nagyságú részecskeátmérőknél érjük el, amikor a mágneses anyag, általában kapszulázott vas-oxid mennyisége maximális.
Az előzőekben hangsúlyozott okokból előnyben részesítjük a szuperparamágneses kolloid részecskék alkalmazását.
Több különféle technológia létezik a szuperparamágneses kolloid részecskék előállítására, amelyek rendelkeznek a találmány vonatkozásában megkövetelt tulajdonságokkal. Ilyenek például egy természetes vagy szintetikus polimer anyag koprecipitációs technológiái egy vizes ferrofluidummal vagy az emulgeálásos technológiák egy szerves fázisban levő ferrofluidummal.
Az ilyen típusú kolloid anyag szabályozott módon való előállításának különösen előnyös technológiája emulgeálásos elven alapszik, amihez polimerizációs és oltási előírások kapcsolódnak. Ezek az emulziók előállíthatók többek között egy szerves ferrofluidumból és egy felületaktív anyagban gazdag vizes fázisból álló keverék nyírásával. A ferrofluidumot úgy választjuk ki, hogy szerves fázisa könnyen oldható legyen a vizes fázisban. Adott esetben minden cseppecske átalakul egy megfelelő mágneses anyag, előnyösen mágneses vas-oxid (maghemit) nanometrikus részecskéinek gömbszerű konglomerátumává, kb. 60 tf% vas-oxiddal az egyes cseppecskéken belül. Az így kapott részecskéket ezt követően polimerizáljuk egy hidrofób monomer, mint például sztirol bevezetésével, hogy a reakció a cseppecskék belsejében játszódjon le. A vízben oldódó, reakcióképes monomereknek a polimerizáció végén történő bevezetése biztosítja a felületek reakcióképessé tételét. Ezen két művelet, tudniillik az emulgeálás és a polimerizáció együttese vas-oxidban nagyon gazdag, gömbszerű részecskéket eredményez, ame3
HU 225 636 Β1 lyek egy polimerizált és reakcióképessé tett réteggel vannak bevonva. Ennek az emulziónak az elkészítéséhez alapul vehetjük többek között a J. Bibette, illetve T. Mason és J. Bibette által publikált eljárást [J. Magn. and Magn. Mát. v. 122, p. 37 (1993); Phys. Rév. Lett. 77, 3481 (1996)], valamint a WO 97/38787 és az FR 2 800 836 számú szabadalmi leírásban ismertetett eljárást.
Előnyösen a beágyazott mágneses anyagot a vas-oxidok, a kobalt-oxidok vagy a különválasztott és stabilizált fémek oxidjai által alkotott csoportból választjuk ki, és különösen előnyösen a maghemitet választjuk. Ez a mágneses anyag 40 tf/%-ban, előnyösen 60%-ban van beágyazva a részecskékbe. A találmány egy előnyös változata értelmében a mágneses alapanyag egy ferrofluidum.
Az így előállított mágneses kolloid részecskék különösen előnyösek abban a mértékben, ahogy képesek felületük szintjén nagyszámú ligandum megkötésére, és mindezt hagyományos ipari eljárások szerint.
Előnyösen a mágneses kolloid részecskék sokféle specifikus ligandumhoz asszociálhatok oly módon, hogy azokat hasznos reagensekké alakítjuk, nevezetesen az immunmérésekhez és az agglutinációs tesztekhez, amint azt a jelen találmány ismerteti.
A ligandumoknak nevezett molekulák adszorpciós, kovalens és/vagy nagy affinitású kölcsönhatások révén köthetők meg a kolloid mágneses részecskék felületén.
A kovalens összekapcsolás megvalósítható például a részecskék felszínén jelen levő, kémiai reakcióba lépni képes csoportok segítségével. Ezen csoportok szemléltető példájaként említhetjük főként a karboxil-, amino-, aldehid- és epoxicsoportokat. Abban az esetben, amikor a jellemezni kívánt analit egy reaktív kémiai anyagfajta, akkor ezek a csoportok maguk is képesek betölteni a specifikus ligandum szerepét a megcélzott analittal szemben.
Ami a nagy affinitás általi kölcsönhatásból adódó megkötést illeti, ezt általában egy nagy affinitású kötéspár két tagja közvetíti, mint például (poli)szénhidrát/elektin; biotin vagy biotinizált vegyület/avidin vagy sztreptavidin; proteinek receptora és annak specifikus liganduma; haptén/antitest stb.
Végül a ligandum megkötését a részecskék felületén megvalósíthatjuk akár közvetlenül, akár távtartó karokat alkalmazva, amelyek másik ismert neve „linker” vagy „spacer”.
Ezek a kovalens vagy nagy affinitású kölcsönhatások lehetővé teszik az olyan természetes vagy szintetikus ligandumok megkötését, mint például a peptidek, a proteinek, ezen belül a glikoproteinek, a lipoproteinek, valamint az egyéb szomszédos struktúrák vagy származékok szabad vagy komplex formában, az immunglobinok, a nukleinsavak, mint a DNS vagy RNS és ezek homológjai, a szacharidok, mint például a monoszacharidok vagy biszacharidok, oligoszacharidok és poliszacharidok, a lipidek, a hormonok, a receptorok, a metabolitok vagy egyéb biológiai anyagok.
A találmány szerinti eljárással detektálható és/vagy mérhető analitok előnyösen olyan anyagok, amelyek specifikusan és megnövelt affinitással képesek kölcsönhatásra a találmány szerint reakcióképessé tett részecskékkel. Ily módon szóba jöhetnek antigének és antitestek, amelyek meghatározhatók egy immunreakcióval, vagy nukleinsavak, amelyek detektálhatok egy hibridációs reakcióval, általánosabban véve pedig mindenféle fajta proteinek.
Előnyösen az analitok az analizálandó közegen belül legalább akkora diffúziós együtthatóval rendelkeznek, mint a részecskék.
A beazonosítandó analit természetes formájában reakcióba léphet két különálló ligandummal, például az antigének és antitestek mintájára, amelyek gyakran több asszociációs hely lehetőségét kínálják.
Ellenkező esetben, a találmány szerinti eljárás alkalmazását megelőzően az analizálandó közeg előkezelését hajtjuk végre, hogy reakcióképessé tegyük a keresett analitot egyik specifikus ligandumjának legalább két molekulájával szemben. Az ilyen típusú előkezelés állhat többek között az analit reakcióképessé tételéből a fentebb ismertetett nagy affinitású kötéspárok egyik tagjának legalább egy molekulája által. Az ilyen típusú előkezelés megvalósítása szakember köteles tudásához tartozik.
A találmány szerinti eljárás egy első megvalósítási módja antitest típusú analitok detektálására és/vagy kvantitatív meghatározására vonatkozik egy folyékony próbamintában, például olyan antitestekére, amelyek patogének, mint például vírusok, baktériumok vagy protozoák, valamint egyéb fertőző szerek ellen vannak irányítva, továbbá tumorok ellen irányított antitestek, allergének ellen irányított antitestek, vagy autoantitestek detektálására és/vagy kvantitatív meghatározására.
A találmány egy második megvalósítási módja antigének detektálására és/vagy kvantitatív meghatározására vonatkozik, amilyenek például a szabad antigének, mint a proteinek és a vérfaktorok, mint a véralvadási faktorok, a metabolitok, a hormonok, a mediátorok stb. vagy a hordozókhoz kötött antigének, mint a mikroorganizmusok felületi antigénjei, a membrános receptorok, a vércsoportok és a hisztokompatibilitás nagy rendszerének az antigénjei stb.
A találmány szerinti eljárás ugyancsak alkalmazható az olyan, nem biológiai molekulák detektálására és/vagy kvantitatív meghatározására, mint például valamennyi természetes vagy szintetikus drog, feltéve, hogy a kérdéses drog képes rendelkezni kettős affinitással egy ligandumhoz. Ha ez nem így van, akkor egy társítás általi előkezelés lesz szükséges, hogy bivalenssé tegyük ezt a típusú analitot a jelzett ligandummal szemben. Ez a találmány szerinti megoldás előnyös lehet többek között az analitikai kémiában és mikroanalitikai kémiában.
A találmány egy különleges változata értelmében többféle típusú mágneses kolloid részecskéket lehet felhasználni ugyanabban a tesztben agglutinációs reagensként. Ez előnyös lehet abban az esetben, ahol az analit könnyen reakcióképes kétféle típusú ligandumon. Egyébként a találmány szerint alkalmazott kolloid részecskék lehetnek adott esetben egy csatolt marker hordozói is.
HU 225 636 Β1
Ez a marker előnyös lehet olyankor, amikor lehetővé tudja tenni egy második detektálási mód kombinálását a mikroszkopikus detektálási móddal, vagy egyszerűen a mikroszkopikus detektálás javítását. Ez a csatolt marker jellemezhető többek között vizuálisan, optikailag, mechanikailag és/vagy elektromosan. A találmány ezen változata szerint a láncok jellemzése történhet közvetlenül, mikroszkóp általi láthatóvá tétellel, és közvetetten, egy optikai, mechanikai és/vagy elektromos módszer által, a megtartott marker természetének megfelelően. A találmány céljainak megfelelő markerek szemléltetéseként utalhatunk többek között a festékpigmentekre, valamint a fluoreszcens vagy foszforeszcens szerekre.
Az analizált folyékony közegek lehetnek szintetikusak vagy természetesek, mint például a biológiai fluidumok. Itt szóba jöhetnek többek között a testfolyadékok, mint például a vér (teljes vagy frakcionált), a szérum, a plazma, a nyál, a vizelet és az agyvíz (liquor), amelyeket hígított vagy hígítatlan formában alkalmazunk.
Ami a mágneses teret illeti, ez létrehozható különféle eszközök segítségével, amelyek jól ismertek az adott területen jártas szakember számára, mint például a Helmholtz-féle tekercsek, az eletromágnesek vagy az állandó mágnesek.
Az alkalmazott állandó mágneses tér értéke általában 1 és 500 mT, előnyösen 1 és 100 mT között van.
Általában előnyös, ha egy lényegében egyforma mágneses teret alkalmazunk. Egy ilyen mágneses tér egyszerű megvalósítása oly módon történik, hogy az úgynevezett agglutinációs zónától kétoldalt helyezzük el egy állandó mágnes vagy egy elektromágnes két pólusát, az Északot és a Délt. Egy másik megoldás abból áll, hogy egy lényegében körkörös és koncentrikus tengelyű csatornát alakítunk ki egy Helmholtz-féle tekercshez, amelyet egy áramgenerátor táplál.
A találmány egy előnyös megvalósítási módja értelmében egy oszcilláló (váltakozó) mágneses teret alkalmazunk.
A mágneses tér oszcillációja lehetővé teszi, hogy növeljük annak valószínűségét, hogy egy mérendő analit két külön részecskén jelen levő két specifikus ligandum közelében helyezkedjen el. A mágneses tér minden egyes ciklusában a részecskék asszociálódhatnak abból a célból, hogy létrehozzák vagy meghosszabbítsák a láncokat, anélkül, hogy kikezdenék a már kialakult láncokat. Ez a megvalósítási mód tehát lehetővé teszi a reakció végbevitelét a reakcióképessé tett mágneses kolloid részecskék ligandumjai és a mérendő analit között.
Ily módon mérni tudjuk az analit kisebb koncentrációit is, és így a teszt nagyobb érzékenységét érhetjük el.
Megjegyezzük ugyanakkor, hogy a találmány bizonyos alkalmazásai nem egyforma mágneses teret igényelhetnek. Ilyenkor tulajdonképpen meg lehet próbálni egyidejűleg alkalmazni egy olyan mágneses teret, amely képes biztosítani a részecskék agglutinációját, és egy olyan mágnesestér-gradienst, amely képes egy pontosan meghatározott helyen koncentrálni a láncokat. A mágneses teret és annak gradiensét lehetne egyidejűleg befolyásolni, vagy egymástól elkülönítve. Ily módon lehetséges megvizsgálni először az analitok koncentrációját, majd ezek felfedését kellő méretű halmazok kialakításával. A találmány keretei közé tartozó egyéb alkalmazásoknál előnyös lehet az agglutináció megvalósítása egy mikrofluidumos csatornában. Vannak például olyan megállapítások (Ε. M. Lawrence et al., Int. J. of Modern Phys. B, 8, 2765-2777, 1994), hogy a mágneses részecskékben gazdag oszlopok vagy láncok átmérője és térköze a mágneses tértől és a cella vastagságától függ. Ily módon lehetőség van az adott alkalmazáshoz legjobban igazodó agglutinációs feltételek megválasztására. Az analizálandó közeget bevezető eszközök állhatnak:
- egy vagy több horonyból vagy „aknából”, amelyekbe behelyezik a próbamintát, mint a gélelektroforézisnél (Electrophoresis: theory, techniques and biochemical and clinical applications, A. T. Andrews, Oxford University Press, NY, 1986),
- vagy ezenkívül egy túlnyomásos vagy vákuumos egységből, mint a kapilláriselektroforézisnél, (lásd például „Capillary Electrophoresis”, P. D. Grossman, J. C. Colbum eds, Academic Press, San Diego, CA, USA, 1992),
- vagy ezenkívül egy csatornából, amelyen keresztül egy próbaminta-szivárgás van folyamatosan elvezetve, mint a folyadékszivárogtatásos elektroforézisnél,
- vagy ezenkívül a kromatográfiában alkalmazott próbaminta-bevezetési eszközökből („Chomatographia en phase liquíde et supercritique, R. Rosset, M. Claude, A. Jardy, Masson éd., Paris 1991; „Practical High Performance Liquid Chromatography, V. R. Meyer, John Wiley ed., Chichester, NY, USA; „Chromatography of polymers”, T. Prodver ed., ÁCS publ., Washington DC, 1993)
- vagy ezenkívül küvettákból vagy egyéb tárolóedényekből, amelyeket hagyományosan az automatizált analitikai berendezésekben alkalmaznak.
Legegyszerűbb megvalósítási formájában a kísérlet az alábbi előírás szerint megy végbe, és ennek alapján könnyű elképzelni a számos egyéb változatot.
Az előzőekben ismertetett tulajdonságokkal rendelkező kolloid részecskéket beoltjuk egy mérendő antigén specifikus antitestével. Az érthetőség kedvéért ebben a leírásban a ligandum-receptor párnak a sztreptavidin-biotin párt tekintjük. Miután a sztreptavidint ráoltottuk a részecskékre, a detektálandó antigént, például egy kis molekulatömegü polietilénglikolpolimert ráoltunk erre a két végre egy biotinmolekula által. Ha ezen antigén egy kellő mennyiségét összekeverjük a részecskék 1%-os vagy ennél nagyobb térfogat szerinti frakciójával, gél formájában jelentkező agglutináció válik láthatóvá néhány másodpercig, sőt néhány percig, amint az várható a hagyományos agglutinációs tesztnél. A C* antigénkoncentrációt olyannak tekintjük, hogy ezen érték alatt az agglutináció hagyományos értelemben már nem kimutatható.
A találmány szerinti kísérlet abból áll, hogy összekeverjük a 0,1% nagyságrendű térfogat szerinti frakciót
HU 225 636 Β1 kitevő részecskéket egy, a C* koncentrációnál sokkal kisebb C koncentrációjú antigénnel, feljegyezve a C‘/x arányt, beszívjuk a keveréket egy négyszögletes keresztmetszetű kapillárisba (vastagsága 20-50 pm) és mágneses tér hatását fejtjük ki a kapilláris tengelyével párhuzamosan. A mágneses tér kifejthető két mágnesnek köszönhetően, amelyek a kapilláristól kétoldalt vannak elrendezve. A mágneses teret például két percig tartjuk fenn, legalább 500 gauss intenzitással. A kapillárist ezután megfigyeljük egy mikroszkóppal, hogy kimutassuk a láncok vagy halmazok meglétét.
A biotin-sztreptavidin pár példája ily módon lehetővé teszi annak a megvalósítását, hogy az agglutinációs előírások szerinti halmazok mágneses térben való detektálása létrejöhet egészen a C*/1000 nagyságrendű antigénkoncentrációkig.
A találmány szerinti eljárás különösen érdekes legalább egy analit detektálásához és adott esetben kvantitatív meghatározásához egy mikrofluidumos rendszerben. Ennél a speciális kiviteli változatnál elő lehet irányozni többek között a mágneses agglutináció megvalósítását a mikrofluidumos rendszer zónájában, míg a detektálást egy külön zónában. Ez a kiviteli változat előnyösen alkalmazható többek között azon részecskék folytonos láncainak elszigetelésére, amely részecskék már nincsenek kitéve agglutinációnak.
A találmány szerinti eljárás egy különösen érdekes alkalmazási területét képezi a multikritériumos analízis, lehetővé téve több analit egyidejű mérését ugyanabban a tesztben.
Ennél a megvalósítási változatnál a reakcióképessé tett mágneses kolloid részecskék több populációját alkalmazzuk. A részecskék mindegyik populációja a detektálandó analitok egyikének legalább egy specifikus liganduma által van reakcióképessé téve.
Az oszcilláló mágneses tér alkalmazása tehát az ugyanazon populáció részecskéi által képzett láncok fokozott kialakulásához vezet, amely specifikus minden egyes analitra.
Ahhoz, hogy lehetővé váljon a megkülönböztetésük és a mérés leolvasása, a mágneses kolloid részecskék különböző populációi egy specifikus csatolt markert hordoznak mindegyik detektálandó analithoz.
A jelen találmány tárgyát képezi egy reagenskészlet is legalább egy analit detektálására egy folyékony közegben, előnyösen egy biológiai folyadékban, amely reagenskészletre a találmány értelmében az jellemző, hogy legalább a legalább egy analit legalább egy specifikus liganduma által reakcióképessé tett mágneses kolloid részecskékből áll.
A találmányt a csatolt rajzon bemutatott kiviteli példák alapján ismertetjük és szemléltetjük részletesebben.
A rajzon az 1A. ábra a mágneses kolloid részecskék által a mágneses tér hatására képzett láncok kialakulási elvét szemlélteti vázlatosan, az 1B. ábra pedig mikrofelvételen mutatja az ilyen részecskékből a mágneses tér hatására az 1A. ábra szerinti módon képződött láncokat, a 2. ábra egy oltott mágneses kolloid részecskéket és biotinizált BSA-t tartalmazó oldat mikrofelvételét mutatja a mágneses tér megszüntetése után, a 3. ábra a vonalak átlagos hosszúságát az oldatban levő biotinizált BSA koncentrációjának függvényében feltüntető grafikon, a mágneses tér hatása alatt, illetve annak megszüntetése után, a 4A. ábra egy, a 2. példa szerinti oldat mikrofelvételét mutatja 0%-os hígításnál (kontroll), a 4B. ábra egy, a 2. példa szerinti oldat mikrofelvételét mutatja 0,1 %-os hígításnál, a 4C. ábra egy, a 2. példa szerinti oldat mikrofelvételét mutatja 1%-os hígításnál, míg a 4D. ábra egy, a 2. példa szerinti oldat mikrofelvételét mutatja 100%-os hígításnál.
1. példa
Egy analit detektálása kolloid mágneses részecskék segítségével
A példa az erős affinitású biotin/sztreptavidin pár által kibocsátott minta analitdetektálását szemlélteti, és a találmány szerinti eljárás érzékenységi küszöbének jellemzését célozza egy adott analitnál. Az analitot a biotin képezi, míg a sztreptavidin rá van oltva a kolloid részecskékre.
Pontosabban szólva, a biotinizált analit egy 5000 molekulatömegü polietilénglikolpolimerből áll, amely ehhez a két véghez egy biotinmolekula által kapcsolódik. Ezek a termékek a kereskedelmi forgalomból beszerezhetők (Shearwater, USA).
A sztreptavidin által oltott kolloid szuperparamágneses részecskéket már előzőleg előállítottuk. A kolloid részecskéket az alábbi publikációkban ismertetett eljárások útján kaptuk: J. Bibette, J. Magn. and Magn. Mát v. 122, p. 37 (1993); F. Leal Calderon, T. Stora, O. Mondain-Monval, P. Poulin és J. Bibette, Phys. Rév. Lett. 72, 2959 (1994); T. Mason és J. Bibette, Phys. Rév. Lett. 77, 3481 (1996); WO 9738787. Ezen részecskék polimerizációját az FR 2800836 számú szabadalmi leírásban ismertetett előírás szerint valósítottuk meg. A sztreptavidin ráoltása a karboxilcsoportokat tartalmazó helyre szakember számára jól ismert eljárás. Ennek kapcsán utalhatunk az alábbi szakirodalmi forrásokra: Molday RS, Dreyer WJ, Rembaum A, Yen SP, J. Cell. Bioi. (1975 Jan); 64 (1):75-88 és Staros JV, Wright RW, Swingle DM, Anal. Biochem. 1986 Jul; 156(1):220-2.
A mágneses tér hatása alatti agglutinációs teszt abból áll, hogy összekeverjük a sztreptavidinnel oltott mágneses kolloid részecskéket az úgynevezett PEG biotinnak nevezett analitokkal (lásd 1A. ábra). Az adott esetben alkalmazott detektálás itt mikroszkóp általi közvetlen megfigyelés.
Egy adott 10^-10-2 nagyságrendű Φ térfogat szerinti részecsketartalmú frakciónál változtatjuk az analitok C koncentrációját azért, hogy detektáljuk a teszt érzékenységi határát.
HU 225 636 Β1
Mindegyik próbához beszívjuk az adott keveréket egy 50 mikrométer vastagságú lapos kapillárisba, amelyet két lapos mágnes között helyezünk el, úgyhogy a létrehozott B mágneses tér nagyobb legyen, mint kb. 50 mT és párhuzamos legyen a kapilláris tengelyével. Ezt a B mágneses teret kereskedelmi forgalomban kapható lapos mágnesekkel hozzuk létre. Ezt körülbelül 2 percig alkalmazzuk, és a kapillárist megfigyeljük mikroszkópon keresztül a mágneses tér hatása nélkül. A teszt pozitív, ha a mikroszkóp alatt látni lehet a láncok és halmazok meglétét (lásd 1B. és 2. ábra), és negatív, ha a részecskék spontán módon újradiszpergálódnak a hőmozgás hatására.
Kitűnt, hogy ezen megvalósítási mód szerint a teszt pozitív marad egy 10~9 mol/l nagyságrendű analitkoncentrációig. Összehasonlításképpen említjük, hogy 10~5 mol/l koncentráció alatt lehetetlenné válik egy hagyományos agglutinációs teszt elvégzése.
Egy kiegészítő tanulmányban meghatároztuk a láncok átlagos hosszúságát a mérendő analit (biotinilezett BSA, 8-12 biotin/BSA) C koncentrációjának függvényében. A 3. ábra mutatja a lánc átlagos hosszát 30 percig ható, 10 mT nagyságú B mágneses tér esetén (folyamatos vonal), és 24 óra B mágnesestérhiányt követően (szaggatott vonal), a biotinilezett BSA-koncentráció függvényében.
Megállapítható, hogy a mágneses tér alkalmazása lehetővé teszi az analit gyors detektálását akár egészen 10~9 mol/l értékig csökkenő analitkoncentrációk esetén is, ami nagyobb érzékenységet mutat, mint a jelenleg forgalomban levő tesztek.
Egyébként meg kell jegyeznünk, hogy a létrejövő láncok átlagos hossza nő az analit C koncentrációjának függvényében. Ily módon a találmány szerinti eljárás lehetővé teszi a mérendő analit mennyiségben detektálását is, a láncok átlagos hosszúságától való eltérés meghatározásával.
2. példa
Anti-vWF G immunglobulinokkal (IgG) oltott mágneses kolloid részecskék elkészítése és a von Willebrand-faktor mérése
Előkészítjük részecskék 200 μΙ mennyiségű, 1 tf% mágneses kolloid részecskét (átmérő 206 nm) tartalmazó kolloid oldatát (beszerezhető a francia Ademtech cégnél) egy foszfátpufferban (20 mM, pH 7,2).
A részecskék aktiválásához az oldathoz hozzáadjuk 0,01 g/l koncentrációjú 1-etil-3-(3-dimetil-aminopropil) karbodiimid (EDAC) 200 μΙ vizes oldatát, és azt kevert állapotban tartjuk 20 percen át 44 °C-on. Az EDAC feleslegét ezután eltávolítjuk 0,001 %-os Tween 20 vizes oldatával végzett mosással.
Ezután elvégezzük az IgG ráoltását a kolloid részecskékre, hozzáadva az aktivált részecskék 400 μΙ kolloid oldatát az IgG 400 μΙ oldatához (1,7 μΙ 20 mg/ml töménységű IgG oldat 398 μΙ vízben). Az oldatot 20 percen át keverjük 44 °C-on, majd 10 percen keresztül szobahőmérsékleten.
Az IgG oldat feleslegét ezután egy telítettségi pufferrel (glicinpuffer, BSA, 0,001 %-os Tween 20) öblítés útján eltávolítjuk. Az így kapott oltott részecskéket ezután egy 1,2 pm-es szűrőn keresztüli szűréssel különválasztjuk.
Az így elkészített oltott részecskék egy szabályozott sűrűségű és tájolású antitestoltást jelentenek. Egyébként az oltás stabil, még felületaktív anyagok (detergensek) vagy az oldatban levő egyéb proteinek jelenlétében is. A von Willebrand-faktor méréséhez a Liatest® vVF kalibrálási plazmát használjuk [(STA vWF) Calibrator, beszerezhető: Diagnostica Stago], amely 200% (2 nemzetközi egység) von Willebrandfaktort tartalmaz, és lényegében úgy járunk el, ahogy az meg van adva a teszt használati utasításában, kivéve azt, hogy oltott mágneses részecskék kolloid oldatát használjuk.
Ezután elkészítjük a von Willebrand-faktor 100%-os, 1%-os és 0,1 %-os plazmahígítását Owren-Koller-féle puffer felhasználásával. Kontrollként (0%-os hígítás) az Owren-Koller-féle puffért használjuk.
Ezután ezen hígítások mindegyikének 1 térfogategységéhez hozzáadunk 2 térfogategység glicinpuffert és 3 térfogategységet az oltott mágneses részecskék kolloid oldatából.
A kapott oldatot egy 50 pm keresztmetszetű négyzetes kapillárisba helyezzük. Az együttest egy 70 mT intenzitású B mágneses tér hatása alá helyezzük 5 percre. A B mágneses tér megszüntetése után a próbamintát egy optikai mikroszkóp tárgylemezére helyezzük. A 4A., 4B., 4C. és 4D. ábrák mutatják a próbaminták mikroszkóp alatti megjelenését a vizsgált különböző hígítások esetében. Megállapítható többek között, hogy az ismertetett találmány szerinti eljárás lehetővé teszi egy 0,1 %-os próbaminta vizuális megkülönböztetését a 0%-os kontrollmintától. Ez az eredmény jobb, mint a Liatest® esetében megadott 2%-os detektálási küszöb.
Claims (27)
1) ezeket a részecskéket érintkezésbe hozzuk az analizálandó közeggel,
1. Eljárás legalább egy analit detektálására és/vagy kvantitatív meghatározására folyékony közegben, azzal jellemezve, hogy olyan mágneses kolloid részecskéket alkalmazunk, amelyeket a felületükön egy detektálandó és/vagy mérendő analit legalább egy specifikus liganduma által reakcióképessé teszünk, és amely eljárás során:
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a részecskék szuperparamágneses kolloid részecskék.
2) a közeget olyan intenzitású mágneses tér hatásának tesszük ki, ami elégséges a mágneses részecskék láncok formájában való szerveződésének kiváltására,
3. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a szuperparamágneses kolloid részecskéket egy polimer vizes ferrofluidummal való koprecipitációja vagy egy ferrofluidummal szerves fázisban való emulgeálása révén kapjuk.
3) ezt a mágneses teret fenntartjuk olyan időtartamra, ami elégséges az adott analit kapcsolódásának vagy asszociációjának létrejöttéhez legalább két specifikus ligandummal, amelyek egy lánc két egymást követő szomszédos részecskéjén vannak jelen,
4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kolloid mágneses részecskék mérete 5 és 10 000 nm, előnyösebben pedig 100 és 500 nm közé esik.
4) megszüntetjük a mágneses teret és
5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a specifikus ligandumokat megkötjük a részecskék felületén, mégpedig abszorpciós, kovalens és/vagy nagy affinitású kölcsönhatások által.
5) megállapítjuk az analit meglétét és/vagy hiányát és adott esetben annak koncentrációját is, a mágneses
HU 225 636 Β1 kolloid részecskék folytonos láncának (láncainak) a folyékony közegben való megléte vagy hiánya alapján.
6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a megkötött ligandumot egy nagy affinitású kötéspár két tagjának egyike képezi.
7. A 6. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a ligandumot a (poli)szénhidrát/elektin; biotin vagy biotinizált vegyületek/avidin vagy sztreptavidin; proteinek receptora és annak specifikus liganduma; valamint a haptén/antitest kötéspárok egyik tagja közül választjuk ki.
8. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a megkötött ligandum olyan vegyület, amelyet a peptidek, a proteinek, ezen belül a glikoproteinek, a lipoproteinek, valamint az egyéb szomszédos, szabad vagy komplex formában levő struktúrák vagy származékok, az immunglobinok, a nukleinsavak, mint a DNS vagy RNS és ezek homológjai, a szacharidok, mint például a monoszacharidok vagy biszacharidok, oligoszacharidok és poliszacharidok, a lipidek, a hormonok, a receptorok, a metabolitok vagy egyéb biológiai anyagok közül választunk ki.
9. Az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a megcélzott analitok antigének, antitestek, nukleinsavak és/vagy proteinek.
10. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az analizálandó közeget előzetesen előkezelésnek vetjük alá, aminek során reakcióképessé tesszük a keresett analitot specifikus ligandumjainak legalább két molekulájával szemben.
11. A 10. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy előkezelésként az analitot reakcióképessé tesszük egy nagy affinitású kötéspár egyik tagja által.
12. Az 1-11. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy azt olyan patogének elleni antitest típusú analit(ok) detektálására és/vagy kvantitatív meghatározására alkalmazzuk, mint a vírusok, baktériumok vagy protozoák, valamint egyéb fertőző szerek, továbbá tumorok elleni antitestek, allergének elleni antitestek és autoantitestek detektálására és/vagy kvantitatív meghatározására alkalmazzuk.
13. Az 1-11. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az olyan antigének detektálására és/vagy kvantitatív meghatározására alkalmazzuk, amilyenek például a szabad antigének, mint a proteinek és a vérfaktorok, mint a véralvadási faktorok, a metabolitok, a hormonok, a mediátorok vagy a hordozókhoz kötött antigének, mint a mikroorganizmusok felületi antigénjei, a membrános receptorok, a vércsoportok és a hisztokompatibilitás nagy rendszerének az antigénjei.
14. Az 1-13. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kolloid mágneses részecskéket csatolt marker hordozóiként alakítjuk ki.
15. A 14. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a markert vizuálisan, optikailag, mechanikailag és/vagy elektromosan jellemezzük.
16. A 14. vagy 15. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a markert festékpigmentek, valamint fluoreszcens és foszforeszcens szerek közül választjuk ki.
17. Az 1-16. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a mágneses kolloid részecskék több populációját használjuk fel, amelyeket a különböző detektálandó analitok legalább egy specifikus ligandumának alkalmazásával teszünk reakclóképessé.
18. Az 1-17. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy állandó mágneses teret alkalmazunk.
19. A 18. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az állandó mágneses tér intenzitása 5 és 500 mT, előnyösebben 10 és 100 mT között van.
20. Az 1-19. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy váltakozó mágneses teret alkalmazunk.
21. Az 1-20. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a láncok jellemzését közvetlenül, mikroszkóp általi megjelenítéssel és/vagy adott esetben közvetetten, arra alkalmas optikai, mechanikai vagy elektromos eljárás segítségével végezzük.
22. A 21. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a láncok jellemzését fotometriás vagy turbidimetriás eljárással végezzük.
23. A 21. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a láncok jellemzését képalkotó eljárással végezzük.
24. A 23. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy képrögzítőként CCD (zárt láncú) kamerát alkalmazunk.
25. A 21-24. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy fényforrásként lézert alkalmazunk.
26. Az 1-25. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy egy mikrofluidumos rendszerben valósítjuk meg.
27. Reagenskészlet analit detektálására folyékony közegben, azzal jellemezve, hogy legalább a legalább egy analit legalább egy specifikus liganduma által felületükön reakcióképessé tett mágneses kolloid részecskékből áll.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR0115011A FR2832507B1 (fr) | 2001-11-20 | 2001-11-20 | Methode de detection d'analyte(s) a l'aide de particules magnetiques colloidales |
| PCT/FR2002/003974 WO2003044532A1 (fr) | 2001-11-20 | 2002-11-20 | Methode de detection d'analyte(s) a l'aide de particules magnetiques colloidales |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP0402276A2 HUP0402276A2 (hu) | 2005-02-28 |
| HUP0402276A3 HUP0402276A3 (en) | 2005-11-28 |
| HU225636B1 true HU225636B1 (en) | 2007-05-02 |
Family
ID=8869592
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0402276A HU225636B1 (en) | 2001-11-20 | 2002-11-20 | Method for detecting analyte(s) in fluid |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7332353B2 (hu) |
| EP (1) | EP1446666B1 (hu) |
| JP (1) | JP2005517899A (hu) |
| KR (1) | KR20050044559A (hu) |
| CN (1) | CN100501403C (hu) |
| AT (1) | ATE431553T1 (hu) |
| AU (1) | AU2002361324A1 (hu) |
| BR (1) | BR0214233A (hu) |
| CA (1) | CA2467050A1 (hu) |
| DE (1) | DE60232353D1 (hu) |
| ES (1) | ES2325917T3 (hu) |
| FR (1) | FR2832507B1 (hu) |
| HU (1) | HU225636B1 (hu) |
| MX (1) | MXPA04004679A (hu) |
| NO (1) | NO20042579L (hu) |
| PL (1) | PL368690A1 (hu) |
| RU (1) | RU2004118490A (hu) |
| WO (1) | WO2003044532A1 (hu) |
| ZA (1) | ZA200403903B (hu) |
Families Citing this family (32)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2878960A1 (fr) * | 2004-12-08 | 2006-06-09 | Centre Nat Rech Scient | Procede pour mettre en oeuvre un test d'agglutination dans un microcanal |
| US9733315B2 (en) * | 2005-07-27 | 2017-08-15 | University Of Houston | Nanomagnetic detector array for biomolecular recognition |
| EP1932009B1 (en) * | 2005-08-31 | 2014-02-12 | T2 Biosystems, Inc. | Nmr device for detection of analytes involving magnetic particles |
| US8586389B2 (en) * | 2005-09-28 | 2013-11-19 | Kent State University | Ligand concentrating, liquid crystal biosensor system |
| US8084270B2 (en) | 2006-01-25 | 2011-12-27 | Koninklijke Philips Electronics N.V. | Device for analyzing fluids |
| KR100738496B1 (ko) * | 2006-07-27 | 2007-07-11 | 한양대학교 산학협력단 | 자성 미세입자 및 배향성 고정화 리간드를 이용한 항체단백질 분리방법 |
| EP2084550A1 (en) | 2006-11-08 | 2009-08-05 | T2 Biosystems, Inc. | Nmr systems for in vivo detection of analytes |
| KR100823684B1 (ko) | 2006-12-06 | 2008-04-21 | 한국전자통신연구원 | 바코드 ｄｎａ를 이용한 생물학적 표적 물질의 검출 방법 |
| FR2919390B1 (fr) * | 2007-07-27 | 2009-10-30 | Bertin Technologies Soc Par Ac | Procede de dosage d'un analyte dans un milieu liquide |
| US8519708B2 (en) * | 2007-11-06 | 2013-08-27 | T2 Biosystems, Inc. | Small magnet and RF coil for magnetic resonance relaxometry |
| CN101952725B (zh) * | 2007-12-03 | 2014-12-10 | 多摩川精机株式会社 | 使用了包覆磁性微粒的生物传感方法以及用于该方法的生物传感装置 |
| FR2928656B1 (fr) * | 2008-03-14 | 2011-08-26 | Biomerieux Sa | Procede de detection en temps reel de microorganismes dans un milieu de culture liquide par agglutination. |
| CA2741550C (en) | 2008-10-29 | 2018-12-04 | T2 Biosystems, Inc. | Nmr detection of coagulation time |
| WO2011049044A1 (ja) * | 2009-10-19 | 2011-04-28 | 国立大学法人東京工業大学 | 磁性微粒子を用いるバイオセンサ |
| US9023607B2 (en) * | 2010-04-26 | 2015-05-05 | Intellectual Discovery Co., Ltd. | Method for early diagnosis of alzheimer'S disease using phototransistor |
| FR2959820B1 (fr) * | 2010-05-10 | 2013-03-15 | Bertin Technologies Sa | Procede de dosage d'un analyte dans un milieu liquide |
| US8563298B2 (en) | 2010-10-22 | 2013-10-22 | T2 Biosystems, Inc. | NMR systems and methods for the rapid detection of analytes |
| CA2815085C (en) | 2010-10-22 | 2022-06-21 | T2 Biosystems, Inc. | Nmr systems and methods for the rapid detection of analytes |
| US8409807B2 (en) | 2010-10-22 | 2013-04-02 | T2 Biosystems, Inc. | NMR systems and methods for the rapid detection of analytes |
| EP2541250A1 (en) | 2011-06-30 | 2013-01-02 | Koninklijke Philips Electronics N.V. | Molecular architecture on magnetic particles for affinity assays with low non-specific binding |
| JP6122848B2 (ja) | 2011-07-13 | 2017-04-26 | ティー２ バイオシステムズ，インコーポレーテッド | 血餅形成をモニタリングするためのｎｍｒ法 |
| US10620205B2 (en) | 2011-09-21 | 2020-04-14 | T2 Biosystems, Inc. | NMR methods for endotoxin analysis |
| DE102011089798B4 (de) | 2011-12-23 | 2021-06-10 | Biophysical Tools GmbH | Massiv paralleler Test molekularer Wechselwirkungen basierend auf magnetischen Nano- und Mikropartikeln |
| FR2986617B1 (fr) | 2012-02-02 | 2015-03-27 | Horiba Abx Sas | Dispositif et procede pour effectuer des mesures hematologiques et biochimiques a partir d'un echantillon biologique |
| EP2839038B1 (en) | 2012-04-20 | 2019-01-16 | T2 Biosystems, Inc. | Compositions and methods for detection of candida species |
| CA2893591A1 (en) | 2012-12-07 | 2014-06-12 | T2 Biosystems, Inc. | Methods for monitoring tight clot formation |
| CN108697141A (zh) * | 2015-12-29 | 2018-10-23 | N·V·努特里奇亚 | 含有不可消化寡糖和非复制型产乳酸细菌的营养配方物 |
| WO2017127731A1 (en) | 2016-01-21 | 2017-07-27 | T2 Biosystems, Inc. | Nmr methods and systems for the rapid detection of bacteria |
| US11585882B2 (en) * | 2018-04-11 | 2023-02-21 | Mars Sciences Limited | Superparamagnetic particle imaging and its applications in quantitative multiplex stationary phase diagnostic assays |
| WO2019229276A1 (es) * | 2018-05-30 | 2019-12-05 | Pragmatic Diagnostics, S.L. | Método optomagnetoforético para la detección de sustancias biológicas y químicas |
| BR112021000731A2 (pt) * | 2018-07-19 | 2021-04-13 | Beckman Coulter, Inc. | Partículas magnéticas |
| EP4305198A1 (en) | 2021-03-09 | 2024-01-17 | Etablissement Français du Sang | Detection of infectious agent based on recombinase polymerase amplification combined with a magnetic field-enhanced agglutination |
Family Cites Families (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK140815B (da) * | 1975-06-10 | 1979-11-19 | Weeke Bengt | Fremgangsmåde til påvisning eller bestemmelse af antistoffer i legemsvæsker ved hjælp af kendte antigener eller til bestemmelse af antigener ved hjælp af kendte antistoffer fra legemsvæsker samt et middel til anvendelse ved udøvelse af fremgangsmåden. |
| US4554088A (en) * | 1983-05-12 | 1985-11-19 | Advanced Magnetics Inc. | Magnetic particles for use in separations |
| US4622298A (en) * | 1984-08-09 | 1986-11-11 | Becton, Dickinson And Company | Detection and quantitation of microorganisms, leukocytes and squamous epithelial cells in urine |
| US5512332A (en) * | 1985-10-04 | 1996-04-30 | Immunivest Corporation | Process of making resuspendable coated magnetic particles |
| US5639620A (en) * | 1990-10-31 | 1997-06-17 | Coulter Corporation | Polymeric particles having a biodegradable gelatin or aminodextran coating and process for making same |
| US5637469A (en) * | 1992-05-01 | 1997-06-10 | Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods and apparatus for the detection of an analyte utilizing mesoscale flow systems |
| CA2146964C (en) * | 1992-10-15 | 2005-11-29 | Olavi Siiman | Particles having gelatin-aminodextran coatings of and processes for making same |
| US5298741A (en) * | 1993-01-13 | 1994-03-29 | Trustees Of Tufts College | Thin film fiber optic sensor array and apparatus for concurrent viewing and chemical sensing of a sample |
| GB9524393D0 (en) * | 1995-11-29 | 1996-01-31 | Mini Agriculture & Fisheries | Extraction and labelling of materials |
| AP9901515A0 (en) * | 1996-10-15 | 1999-06-30 | Bio Tech Imaging Inc | Reagent system and kit or detecting HIV infected cells. |
| US5817458A (en) * | 1996-10-15 | 1998-10-06 | The Avriel Group, Amcas Division Inc. | Reagent system for detecting HIV-infected peripheral blood lymphocytes in whole blood |
| AU7685498A (en) * | 1997-05-14 | 1998-12-08 | Weixin Tang | Fully-coated, uniform-sized metallic particles |
| DE19822123C2 (de) * | 1997-11-21 | 2003-02-06 | Meinhard Knoll | Verfahren und Vorrichtung zum Nachweis von Analyten |
| ATE400358T1 (de) * | 1997-12-24 | 2008-07-15 | Cepheid | Vorrichtung und verfahren zur lyse |
| EP1049807B1 (en) * | 1998-01-22 | 2003-05-07 | Luminex Corporation | Microparticles with multiple fluorescent signals |
-
2001
- 2001-11-20 FR FR0115011A patent/FR2832507B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
2002
- 2002-11-20 PL PL02368690A patent/PL368690A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2002-11-20 MX MXPA04004679A patent/MXPA04004679A/es not_active Application Discontinuation
- 2002-11-20 BR BR0214233-3A patent/BR0214233A/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-11-20 DE DE60232353T patent/DE60232353D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-11-20 CA CA002467050A patent/CA2467050A1/fr not_active Abandoned
- 2002-11-20 ES ES02796851T patent/ES2325917T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-11-20 AU AU2002361324A patent/AU2002361324A1/en not_active Abandoned
- 2002-11-20 JP JP2003546110A patent/JP2005517899A/ja active Pending
- 2002-11-20 HU HU0402276A patent/HU225636B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2002-11-20 KR KR1020047007733A patent/KR20050044559A/ko not_active Application Discontinuation
- 2002-11-20 US US10/496,114 patent/US7332353B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-11-20 CN CNB028230337A patent/CN100501403C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-11-20 AT AT02796851T patent/ATE431553T1/de not_active IP Right Cessation
- 2002-11-20 RU RU2004118490/15A patent/RU2004118490A/ru not_active Application Discontinuation
- 2002-11-20 EP EP02796851A patent/EP1446666B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 2002-11-20 WO PCT/FR2002/003974 patent/WO2003044532A1/fr active Application Filing
-
2004
- 2004-05-20 ZA ZA200403903A patent/ZA200403903B/en unknown
- 2004-06-18 NO NO20042579A patent/NO20042579L/no not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HUP0402276A3 (en) | 2005-11-28 |
| NO20042579L (no) | 2004-06-18 |
| ZA200403903B (en) | 2005-06-23 |
| CA2467050A1 (fr) | 2003-05-30 |
| DE60232353D1 (de) | 2009-06-25 |
| AU2002361324A1 (en) | 2003-06-10 |
| BR0214233A (pt) | 2004-09-21 |
| CN100501403C (zh) | 2009-06-17 |
| FR2832507A1 (fr) | 2003-05-23 |
| RU2004118490A (ru) | 2005-04-20 |
| CN1589405A (zh) | 2005-03-02 |
| US7332353B2 (en) | 2008-02-19 |
| EP1446666B1 (fr) | 2009-05-13 |
| ES2325917T3 (es) | 2009-09-24 |
| KR20050044559A (ko) | 2005-05-12 |
| FR2832507B1 (fr) | 2004-02-20 |
| EP1446666A1 (fr) | 2004-08-18 |
| HUP0402276A2 (hu) | 2005-02-28 |
| JP2005517899A (ja) | 2005-06-16 |
| PL368690A1 (en) | 2005-04-04 |
| US20050048673A1 (en) | 2005-03-03 |
| MXPA04004679A (es) | 2005-05-17 |
| ATE431553T1 (de) | 2009-05-15 |
| WO2003044532A1 (fr) | 2003-05-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU225636B1 (en) | Method for detecting analyte(s) in fluid | |
| JP7249281B2 (ja) | 磁気式多ビーズアッセイのための方法および装置 | |
| JP4271034B2 (ja) | 磁場を用いた結合アッセイ方法 | |
| US20080206104A1 (en) | Accurate Magnetic Biosensor | |
| US20070224604A1 (en) | Method of Determining the Presence and/or Concentration of Substances of Interest in Fluids | |
| CA2589071C (en) | Particle based binding assay | |
| Moser et al. | On-chip immuno-agglutination assay with analyte capture by dynamic manipulation of superparamagnetic beads | |
| US20100279887A1 (en) | Nonlinear magnetophoretic separation of biological substances | |
| WO2010086772A1 (en) | System and method for assay | |
| US20040067502A1 (en) | Multiplex assays using nanoparticles | |
| US20220397572A1 (en) | Bead systems, methods, and apparatus for magnetic bead-based analyte detection |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |