JP2005220347A - 局所的送達の治療用抗血栓剤として有用なトリエタノールアミンを伴う低分子量ヘパリン塩、それらの調製方法、ヘパリン塩の吸湿性を除去するためのプロセス、抗血栓療法における局所的使用のための薬学組成物及びそれにおける使用 - Google Patents

Abstract

【課題】 局所的送達のための治療用抗血栓剤として有用であるトリエタノールアミンを伴う低分子量のヘパリン塩の提供。
【解決手段】 本発明の低分子量ヘパリン塩は、その合計質量の少なくとも６０％が８０００Ｄａ未満の分子量及び４０００〜６０００Ｄａの平均分子量をもち、６．１〜７．５重量％の有機硫黄含有量（理論値６．８％）及び４２．６〜５２．１重量％のトリエタノールアミン含有量（理論値４７．４重量％）を有する。
【選択図】 なし

Description

本発明は、解重合された酸性多糖類の塩形成によって得られる新しい化学物質、特に有機塩基トリエタノールアミンを伴う低分子量ヘパリンに関する。その上、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）を伴う前記低分子量ヘパリン塩（ＬＭＷＨ）を含有する薬学製剤が、局所的経路によるその治療的送達のために記述されている。その上、本発明は、トリエタノールアミンを伴う前記低分子量ヘパリン塩を調製するための新しいプロセスにも関する。ヘパリン塩の吸湿性を除去するためのプロセス、抗血栓療法における局所的使用のための薬学組成物そしてそれにおける使用も同様に記述されている。

酸性多糖類全般そして特にヘパリンは、米国特許第４９７７２５０号／欧州特許第２６８８８５号の中で充分に報告されたプロセスによって解重合され得る。

前記文書は、ヘパリン、ヘパラン硫酸塩及びデルマタン硫酸塩を含む多糖類特にグリコサミノグリカン硫酸塩の化学的解重合のためのプロセスならびに、得られた生成物の抗血栓剤としての使用について記述している。

解重合反応はきわめて特定的な条件で実施されなくてはならないものの、該プロセスは実際、技術的規模で再現可能であり、抗血栓剤として確かな価値を有する、医学的実践により充分認知されている解重合化合物（特に低分子量ヘパリン）の獲得を可能にしてくれるものである。
言及された文書は、注射用抗血栓剤としてのその使用に関するヨーロッパ薬局方明細書に従った低分子量ヘパリンを、注射用ヘパリンＵＳＰグレードから出発して獲得することを可能にするものである。
酸性多糖類特にグリコサミノグリカン硫酸の化学的分解のためのその他のプロセスが、アルゼンチン特許第２４３５４０号、スペイン特許第２００７３７３号、イタリア特許第１２２４２６０号、Ｐａｔ．ＢＥ８７００８６１号の中で詳述されており、同様にして、原料として注射用ヘパリンＵＳＰ／欧州特許第グレードから出発して低分子量ヘパリンを獲得することを可能にしている。

いずれの場合でも、上述の方法によって得られる解重合された生成物は、強いイオン性、多大な分子量（平均４０００〜６０００Ｄａ）、脂肪及び脂質全般に対する低親和力を有し、水−オクタノールへの分配が全く無い物質であるために、皮膚送達が不可能な低分子量ヘパリンのナトリウム塩である。

低分子ヘパリンの（そしてさらには、そのより高い分子量のため、出発ヘパリンの）これらの強いイオン特性は、この物質の局所的送達用抗血栓剤としての使用を著しく制限してきており、事実、今日まで、静脈瘤、痔、外傷性又は術後血腫（形成外科手術又は顔面復元術）の緩和又は予防のための、局所的使用向けの低分子量ヘパリンを含有するものとして知られている薬学調製物は全く存在していない。

本発明は、新しい化合物、即ちトリエタノールアミンを伴う低分子量ヘパリン塩、ならびに該化合物の代替的調製プロセスについて詳述している。トリエタノールアミンは対象の酸性多糖類の親油性を増大させ、多糖類との安定した塩の形成により皮膚を通してのその通過を可能にし、ヘパリンを塩形成させる、好ましくはナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム及びアンモニウムの中から選択される無機対イオンを置換し、かくしてその親水性を減少させその親油性を増大させるために使用される。最も好ましく使用される無機対イオンはナトリウムである。

このことから、低分子量ヘパリン構造自体はトリエタノールアミン（ＴＥＡ）との塩形成プロセスによって改変されず、従って、対応する化学量論的変動ではないことからその測定可能な生物学的特性（抗Ｘａ、抗ＩＩａ）についてのいかなる変動も受けない、ということが推測される。

研究を目的として、低分子量ヘパリン塩、特にジエチルアミン、トリエチルアミン、トリブチルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン及びコリン塩が調製され試験された。

全てのケースにおいて、本発明の実施のために選択された有機塩基は、いかなる皮膚刺激も生み出さずこのトリエタノールアミンを用いて塩形成された酸性多糖類の皮膚浸透を大幅に可能にするため、薬品及び化粧品用皮膚調製物（ならびに毛髪ケア製品）におけるその認識済みの用途に起因して、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）とした。

低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）とトリエタノールアミン（ＴＥＡ）の反応によって得られる塩は、その高い吸湿性のためきわめて扱いにくい、ろう様の外観をもつコハク色の物質である。ＬＭＷＨ−ＴＥＡ塩のこれらの特性のため、薬学的最終製品（クリーム、ジェル、軟こう）の調製におけるその精確な用量決定はきわめて困難になっている。

従って、本発明のもう１つの特徴は、（それがその獲得プロセスから水溶液の形で得られることから）マンニトール又はソルビトールの存在下での前記ＬＭＷＨ−ＴＥＡ塩の凍結乾燥にある。両方の単糖ポリアルコール共、アミンＴＥＡと反応してシッフ塩基といった物質又はその他のタイプの寄生的反応を提供しうるアルデヒド基（潜在的又は非潜在的）を含有せず、皮膚刺激を呈さず、生物学相容性をもち、化学的に安定し、かつ市販されていることから、前記ＬＭＷＨ−ＴＥＡ塩に対し化学的に中性である。

特に、最終的固体凍結乾燥物中におけるＬＭＷＨ−ＴＥＡ／マンニトールの極めて適切な比が重量／重量比で６０：４０であり、これは、薬学製品の調製において計量により充分に用量決定される可能性のある、充分に操作された安定した非吸湿性の凍結乾燥済み固体を提供する、ということが実験的にわかっている。

従って、本発明の詳細な特徴には、化学的に中性で生物学的に相容性ある不活性担体（好ましくはマンニトール又はソルビトール）上での凍結乾燥によりＬＭＷＨ−ＴＥＡ塩の吸湿性を低減させるための概念及び方法が含まれている。

本出願の一般性により制限されることのない以下の例は、得られたプロセス及び製品について記述するものである。

例１
ヘパリンの解重合
２０％溶液を５００ｍｌ獲得するのに充分な量で、１００ｇの注射用ヘパリンＵＳＰ／ＥＰグレードを蒸留水中に溶解させる。
溶液を、撹拌、ｐＨ計電極、加熱及び還流冷却剤の備わった４口フラスコの中に入れる。この水溶液を９４〜９６℃に加熱し、次に（予め冷蔵した８０ｇ／Ｌの次亜塩素酸塩ナトリウム１ｌをＨＣｌでｐＨ６に合わせることで調製した）１Ｍの次亜塩素酸塩溶液を０／５℃の温度で添加する。６０分の反応において２９０ｍｌの１ＭのＨＣｌＯ溶液を添加し、その間適宜水溶液の形でＨＣｌ又はＮａＯＨを添加することによってｐＨを５．０〜６．０に恒常に保つ。
６０分の反応が完了した後、３％の塩化ナトリウムを添加し、勢いよく撹拌しながら２体積のエタノールを添加すること、反応生成物を急速に沈殿させ、かくして解重合反応の即時封鎖を生み出す。

ＴＥＡでの塩形成
含水アルコール上清をひとたび傾潟させた時点で、蒸留水中に、５％ｗ／ｖの溶液を提供するのに充分な量でこの沈殿した多糖類（ＬＭＷＨナトリウム塩）を溶解させる。ｐＨを酢酸溶液で５．０〜５．５に調節し、その溶液を、蒸留水中の５％のＴＥＡ溶液に対するダイアフィルトレーション（カットオフ５０００Ｄａ）に付す（ｐＨは酢酸で５．０〜５．５に調整）。かくして、２０体積の酢酸トリエタノールアンモニウムが使用される。
その後、ダイアフィルトレーションを受けた溶液を１０体積の蒸留水でのダイアフィルトレーションに付して、溶液から遊離ＴＥＡ残渣を除去する。
溶液を、限外ろ過装置から放出させ、凍結乾燥し、以下の比較分析を提示するトリエタノールアミンを伴う低分子量のヘパリン塩である、１４０ｇのろう質の明るい琥珀色のきわめて吸湿性の高い生成物を得る：

注：抗Ｘａ及び抗ＩＩａの生物学的強度を、ヨーロッパ薬局方ＥＰ２００２；「低分子質量ヘパリン」に従って、平均分子量（秤量された平均Ｍｗ）及び分子量分布と共に測定した。さらに、標準及びゲージは、言及した文献の中で引用されているものそのものである。ＨＰＬＣ（Ｍｇ₂ＳＯ₄、０．２ＭｐＨ５．０）によるクロマトグラフィ試験のための泳動緩衝液においては、ＴＥＡがＮａ⁺により置換され、かくして申告された値がＬＭＷＨ−ＴＥＡ塩のものではなくナトリウム多糖類の値である、ということに注目すべきである。

例２
ヘパリンの解重合
２０％ｗ／ｖ溶液を５００ｍｌ提供するのに充分な量で１００ｇの注射用ヘパリンＵＳＰ／ＥＰグレードを蒸留水中に溶解させ、それを、加熱、撹拌及び還流冷却剤の備わったフラスコに移す。
２０ｍｌの３０％Ｈ₂Ｏ₂及び１ｍｌの１．５％ＦｅＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ水溶液から成る試薬を８０℃で暖め、撹拌下で添加する。
４０分間加熱と撹拌を続行し、２％のＮａＣｌを添加し、反応を直ちに停止して、２体積のエタノールを添加することによって解重合した多糖類を沈殿させる。
得られた沈殿物を、１０％溶液を提供するのに充分な量で蒸留水中に溶解させ、この溶液を０．４２ｃｍ²／ｃｍ²×分の流速で、イオン交換樹脂Amberlite（登録商標） ＩＲ−１２０（Ro Haas）（従相Ｈ⁺）を含有する１Ｌの容量のクロマトグラフィカラム（φ５．２ｃｍ×高さ５０ｃｍ）の中に導入する。トリエタノールアミン ＮＦグレードを滴下により加えることによって、ｐＨを５．０〜５．５の値に調整しながら、氷溶容器上に酸性溶離剤を収集する。通過がひとたび完了した時点で、中性溶離剤が得られるまでカラムを蒸留水で洗浄する。洗液及び溶離剤を収集し、トリエタノールアミンの添加によりｐＨを５．０〜５．５に調整した。
それを凍結乾燥して、吸湿性の高いろう質で琥珀色のトリエタノールアミンを伴う低分子量のヘパリン塩、ＬＭＷＨ−ＴＥＡ塩１５０ｇを得る。
以下のものは比較分析である：

例１と同じ説明がこの例にもあてはまる。

例３
マンニトールの存在下での凍結乾燥：ＬＭＷＨ−ＴＥＡに固有の吸湿性の問題の解決
例２で得たＬＭＷＨ−ＴＥＡ１８．６ｇを、１２５ｍｌの１５％ｗ／ｖ溶液を提供するのに充分な量で蒸留水中に溶解させる。１２．４０ｇのマンニトールＵＳＰを撹拌下で添加し、これは、初期溶液がこの例のように１５％より高い濃度をもたない場合、室温できわめて良く溶解する。
この溶液を凍結乾燥させて、粉砕に付すことのできる、吸湿性がかなり低減した結晶質の乾燥した粉末を得る。粉砕した粉末は流動性をもち、凝固状態にはならない。
以下の分析表は、比較を目的として示されている。

例４
低強度ヘパリンの画分の解重合
注射用ヘパリンを調製するにあたり、変動する濃度でデルマタン硫酸塩及びコンドロイチン硫酸塩と共に低い抗凝固活性のヘパリンを含有する副産物が得られる。これらの副産物の解重合された生成物をトリエタノールアミンで塩形成させ、抗血栓剤として局所的に使用することができる。
本発明の一般性を制限するものではないこの例は、以下の分析によって特徴づけされる低強度ヘパリンの画分から出発する（０２１３４０９ＩＩＡ）。
ＵＳＰ強度：４５ｉｕ／ｍｇ
比旋光度：＋４１°
組成（電気泳動法）：
１２％の「低速移動」（ＳＭ）画分
７７％の「高速移動」（ＦＭ）画分
１１％のデルマタン硫酸塩
電気泳動は、Cappelletti, R et al, Anal. Biochem. 99 311-315 (1979) に従って実施された。

５０ｇの上述の画分を、２５０ｍｌの２０％溶液を提供するのに充分な量で蒸留水中に溶解させる。温度計、加熱、撹拌及び還流冷却剤の備わった５００ｍｌ容量のフラスコの中に溶液を入れる。これを９５〜９８℃まで暖め、次に５８０ｍｌの１Ｍの次亜塩素酸塩溶液（０〜５℃の温度で８０ｇ／ｌのＮａＣＩＯ溶液を塩酸でｐＨ６に調整することによって得られたもの）を６０分間かけて添加し、その間、適宜塩酸又は水酸化ナトリウムを加えることにより５．０〜６．０の恒常なｐＨ値をつねに保つ。溶液の添加がひとたび完了した時点で、２体積のエタノールを加えることによりそれを沈殿させる。沈殿物を構成する解重合した多糖類を、５％溶液を提供するのに充分な量で蒸留水中に溶解させ、ｐＨを酢酸溶液で５．０〜５．５の値に調整する。このようにして得られた透明な溶液を、酢酸で５．０〜５．５に調整されたｐＨの水中トリエタノールアミン５％溶液に対するＵＦカットオフ１０００Ｄａのカセットの備わった適切な限外ろ過装置内でのダイアフィルトレーションプロセスに付す。

かくして、２０体積のダイアライザー溶液を通過させ、このステップがひとたび完了した時点で、ダイアフィルトレーションを１０体積の蒸留水を通過させながら続行して、ＵＦ膜により保持された濃縮物から遊離ＴＥＡを除去する。ＵＦから溶液を放出させ、凍結乾燥させて、初期解重合ヘパリン画分のトリエタノールアミン塩である吸湿性の高いコハク色でろう質のコンシステンシーをもつ生成物４２ｇを提供する。
該生成物は、以下の比較分析を提示している。

ＬＭＷＨ−ＴＥＡ物質の特性決定
１） ＬＭＷＨ−ＴＥＡ塩中のＴＥＡの理論的含有量
ヘパリンは、複数の硫酸化グレードをもち、１−４結合により互いに結合したＤ−グルサミンとウロン酸の交互の残基により鎖が形成されている多糖類の一系統群として定義づけされる。ウロン酸残基は、Ｌ−イズロン酸又はＤ−グルクロン酸残基であり、グルコサミン残基は、Ｎ−硫酸化又はＮ−アセチル化されていてよい。（Casu, Bi.「ヘパリン、化学的及び生物学的特性、臨床的応用」中の「構造分析方法」Lane, D : Lindhal, U., Eds : E. Arnold (1989) 25-49）。
従って（ヘパリンの分子微小不均一性に起因して実際には存在しない）二糖類単位について、１つの近似構造式しか得ることができない。以下の構造式は、ＵＳＰ−ＥＰ仕様を満たす注射用ヘパリンの実験的分析データとかなり一致している：
（式中： Ｒ＝ＮａＳＯ₃又はＨ
ｍ＝１ 及び ｎ≧４，ｍ＋ｎ＝約９
− 単位二糖類の分子式（Ｒ＝Ｈについて）
Ｃ₁₂Ｈ₁₅Ｏ₁₆ＮＳ₂Ｎａ₃
− 単位二糖類の分子量（Ｒ＝Ｈについて）：５６２。

注射用ヘパリンから出発して低分子量ヘパリンを得ることを可能にする解重合反応は、分子量の低減及びそれに関連する物性（例えば粘度）を除いて、多糖類鎖全体を通して極立った修飾を導入するものではない。

従って、ＬＭＷＨ−ＴＥＡ中のＴＥＡ含有量の当該理論的計算において、我々は、イオントリエタノールアンモニウムについてのＮａ⁺の唯一の変化しか伴わずに単位二糖類がそのままの状態にとどまるということを受諾することになる。
かくして、１００ｇのＬＭＷＨナトリウムは、上述のスキームに従うと、（０．５２モルのイオントリエタノールアンモニウムの形で）０．５２モルのトリエタノールアミンによりトリエタノールアミン塩の組成内で置換されることになる１２．１ｇのＮａ⁺（０．５２７グラムのＮａ⁺原子）を含有する。

トリエタノールアンモニウムイオンの分子量は１５０．２であり、従って、０．５２７モルのトリエタノールアンモニウム＝１５０．２×０．５２７＝７９．１５ｇである。
イオン交換において：
１００ｇのＬＭＷＨ Ｎａは１２．１ｇのＮａ⁺を失ない、７９．１５ｇのトリエタノールアンモニウムを得、１６７．０ｇのＬＭＷＨ−ＴＥＡを生成する。
従って、ＴＥＡの理論的含有量は以下の通りである：

２） ＬＭＷＨ−ＴＥＡ内のＳの理論的含有量
出発点として受諾された単位二糖類に従うと、ＵＳＰ−ＥＰ仕様を満たす注射用ヘパリンを提示する分析データとかなり一致して、Ｓ％＝１１．４％である。
注射用ヘパリンの解重合及びその後のＴＥＡでの解重合生成物の塩形成においては、Ｓは失なわれず、従って、ＬＭＷＨ−ＴＥＡ中のＳの理論的データは以下のようになるはずである：

３） ＬＭＷＨ−ＴＥＡ中の生物学的強度の理論的計算
欧州特許第２６８８８５号、米国特許第４９７７２５０号に引用されているような注射用ヘパリンのラジカル断片化方法によって得られた低分子量ヘパリン（ナトリウム塩）は、約９０ｉｕ／ｍｇの抗Ｘａ強度と約４０ｉｕ／ｍｇの抗ＩＩａ強度を提示する。
Ｎａ⁺を除去しトリエタノールアミンで塩形成する場合の単位二糖類の分子量増加のためにこれらの値が受ける希釈を考慮に入れると、次のようになる：
従って、理論的抗Ｘａ強度及び抗ＩＩａ強度は以下の通りとなる：

４） 単位二糖類の理論的分析データ及び構造式の比較

５） ＬＭＷＨ−ＴＥＡにおける理論データ及び実験データの比較

６） ＬＭＷＨ−ＴＥＡの分光法による特徴づけ（１３Ｃ−ＮＭＲ）
低分子量ヘパリン、トリエタノールアミン塩の標本を１８０ｍｇ／ｍｌの濃度でＨ₂Ｏ：Ｄ₂Ｏ １：１の割合で溶解させた。図１に例示されているように、核磁気共鳴（１３Ｃ）のスペクトルを、分光計（１３Ｃ）ＢＲＵＣＫＥＲ ＡＭ−５００（１３Ｃ−１２５ＭＨｚ）上で記録した。
５６．１及び５６．３ｐｐｍでトリエタノールアミンのシグナルを観察し、その後（それぞれ硫酸化された及び遊離した）１００．１及び１０２．６ｐｐｍに対するＣ１のシグナルの相対的積分に基づいて総ウロン酸との関係におけるイズロン酸２硫酸塩の相対的濃度を決定する。同じ要領で、総グルコサミンＮ−硫酸塩／グルコサミン（５９；５４．６ｙ ５３ｐｐｍ）を決定した。得られたデータは以下のようにプロットされる。

７） 使用された分析技術
− 注射用ヘパリンの抗凝固強度は、ヨーロッパ薬局方２００２及びＵＳＰ２６（ＵＳＰ強度）に従って決定された。
− 抗Ｘａ及び抗ＩＩａ強度は、低分子量ヘパリンに関する文献（ヨーロッパ薬局方２００２）に従って決定された。
− 分子量分布及び平均重量分子量は、低分子量ヘパリンの文献（ヨーロッパ薬局方２００２）に従って決定され、従って泳動緩衝液中でＴＥＡはＮａ⁺により置換され、このとき得られたデータは、ＴＥＡ塩ではなく多糖類ナトリウム塩に関するものである。
− トリエタノールアミンは電位差滴定によって用量決定される。

８−実験薬理学：効率試験
本発明に従った化合物ＬＭＷＨ−ＴＥＡを、薬理学試験に付してその効率を確認した。
かかる基準で、テスト用哺乳動物として、実験室で飼育され衛生管理されたウィスタラット（雌）を使用した。
特に、発達させた血栓症モデルは、κ−カラギナンといったような血栓形成物質の静脈内注射（右尾静脈）によりテスト用ラットの尾部の中に実験用血栓症を生成させることから成る。処置が無い場合、動物の尾部は、回復することのない血栓を経時的に全体的に形成し、最終的に３〜４日後壊死する。

しかしながら、１０００ｕ抗Ｘａ／グラムという割合でＬＭＷＨ−ＴＥＡを含有する局所用クリームでの局所的処置は、同じ条件下で投与された場合に局所的ヘパリン及びＬＭＷＨナトリウム塩により実証されたものよりもはるかに高い、きわめて有意な再生活性を示す。

特に、このテストは、以下のとおり、Beckmeier et al, Agents and Actions, 16, 446 (1985) の中の一般的指針に従って実施された：
ａ． 動物：体重２００〜３００グラムの雌のラット。
ｂ． 血栓症発生溶液：無菌生理溶液中のκカラゲナンＩＩＩ型溶液（Ｓｉｇｍａ Ｃ１２６３）１ｍｇ／ｍｌ。動物の体重１ｋｇにつき１ｍｌ（尾部の右尾静脈）が注射される（０．２５ｍｌ）。
ｃ． 血栓誘発：予め毛をそり落した尾の基部の近く（その先端から１５ｃｍ）に止血帯を置く。１分後に、血栓症発生溶液を注射し、動物の尾部を直ちに氷水中に３０秒間浸漬し、水を除去し、それを乾燥し、さらに３０秒間止血帯を保つ。その後、動物を１０℃でチャンバ内に２分間保つ。
ｄ． 効率試験：次に、それぞれ、１０００単位抗Ｘａ１グラムのＬＭＷＨ ＴＥＡ、ナトリウムＬＭＷＨ及び１０００ＩＵ／グラムの局所的ヘパリンを含有する実験用クリーム（０．５ｇ）を、各動物グループ（１つのクリーム調製物につき三匹）の梗塞を患った尾部に沿って投与する。さらに３匹の動物は処置を受けず、対照とみなされる。
動物を、Ｋ−カラゲナンの注射から２、４、１８、２４及び７２時間後に検査し、ミリメートル単位（ｍｍ）で硬塞を患った尾部を測定した。
得られた結果は、以下の通りであった：

クリームＩ：ＬＭＷＨ−ＴＥＡ １０００ＩＵ抗Ｘａ／グラム
クリームＩＩ：ＬＭＷＨ Ｎａ １０００ＩＵ抗Ｘａ／グラム
クリームＩＩＩ：局所的ヘパリン １０００ＩＵ／グラム
（*）非常にわずかな染色

明白性を期して、各々の処置済みグループ及び対照において注射から２４時間後に撮った図２〜５を添付する。
この試験では、局所使用のためのクリームを以下の処方に従って調製したが、これらは該方法を制限するものではない。

該試験により、その他の２つのクリームに比べクリームＩ（ＬＭＷＨ−ＴＥＡ）として識別された皮膚用調製物の顕著な効力の実証が可能となり、血栓症の症候の完全な軽減は１８時間後に観察されている。

ＬＭＷＨ−ＴＥＡのＮＭＲスペクトル（１３Ｃ）を示す。 ｋカラギナンの注射を２４時間適用した後の標本ラットの尾部を示している。 本明細書実施例に定義されている０．５ｇのクリームＩで処置されたｋカラギナンの注射を２４時間適用した後のラットの尾部を示している。 本明細実施例に定義づけされている０．５ｇのクリームＩＩで処置されたｋカラギナンの注射を２４時間適用した後のラットの尾部を示している。 本明細実施例に定義づけされている０．５ｇのクリームＩＩＩで処置されたｋカラギナンの注射を２４時間適用した後のラットの尾部を示している。

Claims (15)

1. 局所投与のための治療用抗血栓剤として有用であるトリエタノールアミンを伴う低分子量のヘパリン塩において、その合計質量の少なくとも６０％が８０００Ｄａ未満の分子量及び４０００〜６０００Ｄａの平均分子量をもつ塩であって、６．１〜７．５重量％の有機硫黄含有量（理論値６．８重量％）及び４２．６〜５２．１重量％のトリエタノールアミン含有量（理論値４７．４重量％）も有する塩。
2. ５〜５．５のｐＨで４〜６％のトリエタノールアミンの水溶液による低分子量ヘパリンの無機対イオンのダイアフィルトレーションによる除去を含むことを特徴とする請求項１に記載のヘパリン塩調製プロセス。
3. 無機対イオンがナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム及びアンモニウムの中から選択されていることを特徴とする請求項２に記載のプロセス。
4. 低分子量ヘパリンが、０°〜５℃の温度の注射用ヘパリンの１５〜２５％の水溶液を１Ｍの次亜塩素酸塩水溶液中で７０〜１００℃の還流温度及び４〜７のｐＨ加熱分解することによって得られることを特徴とする請求項２に記載のプロセス。
5. 第一鉄イオンの濃度が１０〜１００ｐｐｍで、Ｈ₂Ｏ₂／多糖類のモル比での過酸化水素の濃度が６〜１５であり、ｐＨが４〜７であり、濃度が６０〜１２０℃である状態で、注射用ヘパリン全体にわたる第一鉄イオンを触媒とした過酸化水素のラジカル分解を通して、低分子量ヘパリンが得られることを特徴とする請求項２に記載のプロセス。
6. 低分子量ヘパリンの無機対イオンを除去する段階、酸性相でイオン交換樹脂で処理する段階及びその後塩基トリエタノールアミン（９９％）で溶出された酸性多糖類を中和させて、１５〜２５℃の温度で溶出液のｐＨを５．０〜５．５まで調整する段階を含んで成ることを特徴とする請求項１に記載のヘパリン塩の調製プロセス。
7. 無機対イオンが好ましくはナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム及びアンモニウムの中から選択されていることを特徴とする請求項６に記載のプロセス。
8. 低分子量ヘパリンが、０°〜５℃の注射用ヘパリンの１５〜２５％濃度の水溶液を次亜塩素酸塩水溶液中で７０〜１００℃の還流温度及び４〜７のｐＨで加熱分解することによって得られることを特徴とする請求項６に記載のプロセス。
9. 第一鉄イオンの濃度が１０〜１００ｐｐｍで、Ｈ₂Ｏ₂／多糖類のモル比での過酸化水素の濃度が６〜１５であり、ｐＨが４〜７であり、温度が６０〜１２０℃である状態で、注射用ヘパリンを第一鉄イオンを触媒とした過酸化水素のラジカル分解にかけることにより、低分子量ヘパリンが得られることを特徴とする請求項６に記載のプロセス。
10. 請求項１に記載のトリエタノールアミンを伴う低分子量ヘパリン塩の吸湿性を除去するためのプロセスにおいて、１３〜１７％の濃度に達するまで水中に前記塩を溶解させる段階、前記塩６０部毎に３０〜５０部に相当する量でマンニトール又はソルビトールを添加する段階、全てを水溶液中に溶解させる段階及び凍結乾燥させる段階を含んで成ることを特徴とするプロセス。
11. 請求項１に記載のトリエタノールアミンを伴う低分子量ヘパリン塩を含む抗血栓療法で局所使用するための医薬組成物において、適切な賦形剤中に希釈させた局所使用組成物の１ｇあたり１００〜２０００国際単位抗Ｘ_Aの医薬的に活性な量で前記塩が存在することを特徴とする医薬組成物。
12. 賦形剤が、カルボポリマーの水性ジェル、水中油型のもしくはクリームエマルジョン、又は水性もしくは含水アルコールベースの軟こうの中から選択されていることを特徴とする請求項１１に記載の医薬組成物。
13. 局所投与の抗血栓治療薬としてのトリエタノールアミンを伴う低分子量ヘパリン塩の使用において、静脈瘤、痔、外傷性又は術後の血腫又は静脈炎の治療、緩和又は予防に用いられることを特徴とする使用。
14. 術後血腫が形成外科手術又は顔面再生術に由来していることを特徴とする請求項１３に記載の使用。
15. 静脈炎が化学療法剤の静脈内輸液によってひき起こされることを特徴とする請求項１３に記載の使用。