CN1651470A - 用作局部给药的抗血栓形成治疗剂的低分子量肝素三乙醇胺盐其制法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了可用作局部给药的抗血栓形成治疗剂的低分子量肝素三乙醇胺盐，其中其总量的至少60％具有低于8000Da的分子量且平均分子量介于4000－6000Da，所述盐还含有重量百分比为6.1－7.5％(理论值为6.8％)的有机硫和重量百分比为42.6－52.1％(理论值为47.4％)的三乙醇胺。本发明也公开了制备所述肝素盐和消除所述盐的吸湿性的方法，以及在局部抗血栓形成治疗中使用的药物组合物及其应用。

Description

用作局部给药的抗血栓形成治疗剂的低分子量肝素三乙醇胺盐其制法和用途
技术领域
本发明涉及通过解聚合的酸性多糖，尤其是低分子量肝素，与有机碱三乙醇胺的成盐作用获得的一种新的化学物质。此外，本发明描述了用于通过局部途径治疗性给药的包含所述低分子量肝素(LMWH)三乙醇胺(TEA)盐的药物剂型。此外，本发明涉及制备所述低分子量肝素三乙醇胺盐的新方法。还描述了消除肝素盐吸湿性的方法以及在抗血栓形成治疗中局部使用的药物组合物及其使用。
背景技术
通常，酸性多糖(尤其是肝素)可以通过美国专利4977250/欧洲专利268885中所充分报道的方法解聚合。
所述文献描述了一种多糖，尤其是包括肝素、硫酸类肝素和硫酸皮肤素在内的硫酸氨基葡聚糖的化学解聚合作用过程，以及所获得的产物作为抗血栓形成剂的使用。
虽然所述解聚合反应必须在非常特殊的条件下进行，所述过程在工艺放大的实践中是可以重复的，由此获得无疑具有作为抗血栓形成剂价值并经医学实践所证实的解聚合的化合物(尤其是低分子量肝素)。
所提及的文献有助于获得(从获得注射用USP(美国药典)级肝素开始)符合欧洲药典规范的用作注射用抗血栓形成剂的低分子量肝素。
在阿根廷专利243540、西班牙专利2007373、意大利专利1224260、专利BE8700861和其他许可中，详细描述了从作为原料的美国药典/欧洲药典(USP/EP)级注射用肝素开始，酸性多糖(尤其是硫酸氨基葡聚糖)化学解聚合作用以获得低分子量肝素的其他方法。
在任何情况下，通过上述方法获得的解聚合产物是低分子量肝素钠盐，由于它是一种具有强离子特性、显著分子量(平均4000-6000Da)、通常对脂肪和脂质低亲和力的并在水-辛醇中无相分配的物质，因而不能通过表皮给药。
低分子肝素(甚至最初的肝素，由于其较高的分子量)的强离子特征已经严重限制了该物质作为局部给药的抗血栓形成剂的使用，实际上，迄今还没有已知局部使用的包含低分子量肝素的用于缓解或防止静脉曲张、痔疮、创伤性水肿或术后血肿(整形外科或整容外科)的药物制剂。
发明内容
本发明详细描述了一种新型化合物-低分子量肝素三乙醇胺盐，以及可供选择的其制备方法，其中三乙醇胺通过取代一个始终与肝素成盐并优选自钠离子、钾离子、钙离子、镁离子和铵离子的无机平衡离子，从而显著降低其亲水性并提高其亲脂性的方式与酸性多糖形成稳定的盐用以提高所述酸性多糖的亲脂性。最优选使用的所述无机平衡离子是钠离子。
由此推断，所述低分子量肝素结构本身没有被与三乙醇胺(TEA)成盐过程所改变，从而在其可测量的生物学性质(抗Xa凝血因子活性，抗IIa凝血因子活性)上没有发生任何变异，如没有成为相应的化学计量变异体。
出于研究目的，制备并测试了所述低分子量肝素盐，尤其是二乙胺盐、三乙胺盐、三丁胺盐、单乙醇胺盐、二乙醇胺盐和胆碱盐。
由于三乙醇胺不会对皮肤产生刺激而在药品与化妆品(以及护发产品中)中普遍使用，并且其与酸性多糖成盐能极大地促进皮肤渗透，在所有情况下，选择了三乙醇胺(TEA)作为实现本发明的有机碱。
通过三乙醇胺(TEA)与低分子量肝素(LMWH)反应得到的盐是一种蜡状琥珀色物质，由于其高吸湿性而极其难以操作。低分子量肝素三乙醇胺(LMWH-TEA)盐的这些特征使其在制备药物成品(乳膏、凝胶、软膏)中非常困以精确控制剂量。
因此，本发明的另一个特征是在甘露醇或山梨醇存在的条件下所述LMWH-TEA盐(正如通过其获得方法所获得的，存在于水溶液中)的冻干方法。上述两种单糖多元醇对于所述LMWH-TEA盐而言在化学上是没有区别的，因为它们均不含可能与如席夫碱等TEA提供物质的胺基反应或发生其他类型寄生反应的醛基(潜在的或存在的)，均不具有皮肤刺激性，它们是生物学上相容的且化学上稳定的，并均可通过商业获得。
尤其是通过实验发现，在最终的冻干粉末中，恰当的LMWH-TEA/甘露醇的比例是60∶40(重量比)，在这种情况下，提供了一种不吸水的冻干固体，它在药物制备中易于操作、稳定并通过称重便于准确确定剂量。
因此，本发明的特征包括通过在化学上等同的并且生物学上相容的惰性载体(优选甘露醇或山梨醇)上冻干以降低所述LMWH-TEA盐的吸湿性的概念与方法。
附图说明
图1.显示了LMWH-TEA的核磁共振(NMR)谱(13C)。
图2.显示了注射κ-角叉胶24小时后实验大鼠的尾巴。
图3.代表注射κ-角叉胶24小时后用0.5克下文详细说明的乳膏I处理过的实验大鼠的尾巴。
图4.代表注射κ-角叉胶24小时后用0.5克下文详细说明的乳膏II处理过的实验大鼠的尾巴。
图5.代表注射κ-角叉胶24小时后用0.5克下文详细说明的乳膏III处理过的实验大鼠的尾巴。
下列实施例描述了方法及获得的产品，不是对本申请通用性的限制。
具体实施方案
实施例1
肝素的解聚
100克USP/EP级注射用肝素溶于足量的蒸馏水中获得500毫升20％的溶液。
将所述溶液置于配有搅拌器、pH计电极、加热和回流冷却装置的4口球形瓶中。将水溶液加热至94-96℃，随后在温度为0/5℃时加入1M次氯酸溶液(通过用盐酸将预冷的80克/升的次氯酸钠溶液的pH值调至6进行制备)。在60分钟的反应时间内添加290毫升1M的HClO溶液，同时按需要在水溶液中添加HCl或NaOH以保持pH值稳定在5.0-6.0。
60分钟的反应结束后，添加3％的氯化钠并边剧烈搅拌边添加2倍体积的乙醇使反应产物快速沉淀，从而导致解聚反应的立即终止。
与TEA的成盐作用
倒出水醇上清液，将沉淀的多糖(LMWH钠盐)溶于足量的蒸馏水以得到5％(重量/体积)的溶液。用乙酸将pH调至5.0-5.5，并用5％的TEA水溶液(pH值调至5.0-5.5)对此溶液进行渗滤(截留值5000Da)。使用了20倍体积的三乙醇醋酸铵。
随后，经渗滤的溶液用10倍体积的蒸馏水渗滤，以从溶液中去除游离的TEA残余。
所述溶液从过超滤器中排出并冻干，得到140克蜡状、浅琥珀色、高吸湿性产物，这是低分子量肝素与三乙醇胺形成的盐，对其进行了如下的比较分析：
               注射用肝素          LMWH-TEA
EP活性         182国际单位/毫克    -
抗Xa活性       -                   51国际单位/毫克
抗IIa活性      -                   24国际单位/毫克
硫(S)          11.7％              6.8％
S/COO-比率    2.1                 2.1
三乙醇胺       -                   49％
钠(Na)         11.0％              19ppm
WM(HPSEC)      13500Da             5400Da
＜8000Da       -                   82％
3000-8000Da    -                   53％
＜3000Da       -                   25％
注释：抗Xa因子和抗IIa因子生物学活性按照欧洲药典EP2002；“低分子量肝素(Low Molecular Mass Heparin)”测量，同时测量了平均分子量(重均平均分子量Mw)和分子量分布。此外，标准品和计量器均严格按照所引用的文献。应当注意，通过HPLC进行色谱检测中的移动相缓冲液(Na2SO4，0.2M pH5.0)中TEA被Na+取代，由此公布的值是多糖钠盐组分的值而不是LMWH-TEA盐的值。
实施例2
肝素的解聚
将100克USP/EP级的注射用肝素溶于足量的蒸馏水以获得500毫升20％(重量体积比)的溶液并将其转移至提供加热、搅拌和回流冷却的球形瓶中。
将由20毫升30％H2O2和1毫升1.5％FeSO4·7H2O组成的试剂加热到80℃，并边搅拌边加入。
加热并搅拌过程持续40分钟后，添加2％NaCl并通过添加2倍体积乙醇使解聚合的多糖沉淀立即终止反应。
将获得的沉淀溶于足量的蒸馏水以得到10％的溶液，并将该溶液加样于1升柱容量(φ5.2厘米×50厘米高度)含离子交换树脂(AmberliteIR-120(Rohm Haas)(phaseH+)的色谱柱，流速0.42厘米3/厘米2×分钟。将酸性洗脱液收集于冰浴容器并通过滴加NF级三乙醇胺将其pH调至5.0-5.5。完成这一步骤以后，色谱柱用蒸馏水清洗直至获得中性洗脱液。收集洗液和洗脱液并通过添加三乙醇胺将pH调至5.0-5.5。
将其冻干，获得156克高吸湿性、蜡状琥珀色的低分子量肝素三乙醇胺盐(LMWH-TEA盐)。
以下是其比较分析：
               注射用肝素          LMWH-TEA
EP活性         180国际单位/毫克    -
抗Xa活性       -                   50国际单位/毫克
抗IIa活性      -                   24国际单位/毫克
硫(S)          11.9％              6.8％
S/COO-比率    2.1                 2.1
三乙醇胺       -                   50％
钠(Na)         12.0％              280ppm
Mw(HPSEC)      12000Da             4800Da
＜8000Da       -                   81％
3000-8000Da    -                   46％
＜3000Da       -                   35％
与实施例1中相同的注释适用于本实施例。
实施例3
在存在甘露醇时冻干：解决LMWH-TEA固有的吸湿性问题
将实施例2中获得的18.6克LMWH-TEA溶于足量的蒸馏水以得到125毫升15％(重量体积比)的溶液。边搅拌边加入12.40克USP级甘露醇，如本例中的情况，当初始溶液浓度不高于15％，甘露醇非常易于在室温下溶解。
将所述溶液冻干以获得极大地降低了吸湿性的晶体干粉，所述粉末可进行研磨。碾碎的粉末是流动的且不会凝结。
为了比较提供了以下分析表：
              LMWH-TEA           LMWH-TEA/甘露醇
抗Xa活性      50国际单位/毫克    30国际单位/毫克
抗IIa活性     24国际单位/毫克    14国际单位/毫克
硫(S)         6.8％              4.2％
S/COO-比率   2.1                2.1
三乙醇胺           50％           30％
钠(Na)             280ppm         170ppm
Mw(HPSEC)          4800Da         4800Da
＜8000Da           81％           81％
3000-8000Da        46％           46％
＜3000Da           35％           35％
甘露醇             -              40％
实施例4
低活性肝素组分的解聚合作用
在制备注射用肝素过程中，可以获得包括低抗凝血活性的肝素以及不同浓度的硫酸皮肤素和硫酸软骨素在内的副产品。这些副产品的解聚合产物可以与三乙醇胺成盐并用作局部抗血栓形成剂。
本实施例从其特征通过以下分析(0213409IIA)描述的低活性肝素组分开始，并不作为所述情况通用性的限制。
USP活性：   45国际单位
特定旋光度：+41°
成分(电泳)：12％“慢移”(SM)组分
            77％“快移”(FM)组分
            11％硫酸皮肤素
电泳按照Cappelletti.R等的描述(Anal.Biochem.99 311-315(1979)进行。
将50克上述组分溶于足量的蒸馏水以得到250毫升20％的溶液。将所述溶液置于500毫升容量配有温度计、加热、搅拌和回流冷却装置的球形瓶中。将其加热至95-98℃，随后在60分钟内添加580毫升1M的次氯酸溶液(通过在0-5℃时用次氯酸将80克/升的NaClO溶液pH调至6获得)，在此期间按照需要通过添加盐酸或氢氧化钠保持pH稳定在5.0-6.0。一旦添加溶液结束，就加入2倍体积的乙醇使之沉淀。将组成沉淀的解聚合多糖溶于足量的蒸馏水以得到5％的溶液，并用乙酸溶液调节pH值至5.0-5.5。将由此得到的澄清溶液在适当的超滤器中相对5％的三乙醇胺水溶液(pH用乙酸调至5.0-5.5)进行渗滤处理，所述超滤器配置了截留值为1000Da的超滤盒。
20倍体积的渗透液由此通过超滤器，该步骤一完成，用10倍体积蒸馏水流经超滤器继续渗滤，以从浓缩液中去除被超滤膜保留的游离的TEA。所述溶液从超滤器中排出并冻干，得到42克蜡状粘稠的、琥珀色、高吸湿性的产物，这是所述最初解聚合的肝素组分的三乙醇胺盐。
所述产物表现出下列比较分析结果：
抗Xa活性                73国际单位/毫克(EP方法)
抗IIa活性               13国际单位/毫克(EP方法)
硫(S)                   4.8％
S/COO-比率             1.7
电泳                    90％“快移”(FM)组分
10％硫酸皮肤素
三乙醇胺                49.0％
MW(HPSEC)               5060Da
＜8000Da                82.0％
＜3000Da                30.0％
＜2000Da                14.0％
特异性旋光度            +20°
LMWH-TEA物质的定性
1)LWMH-TEA盐中TEA的理论含量
肝素定义为一个多糖家族，长链通过糖醛酸和D-氨基葡萄糖残基交替通过1-4键结合形成并具有多种程度的硫酸化。所述糖醛酸残基是L-艾杜糖醛酸或D-葡萄糖醛酸，氨基葡萄糖残基可以是N端硫酸化的或N端乙酰化的(Casu，B所著《结构分析方法》(“Methods of Structural Analysis”)，见Lane，D和Lindhal，U主编的《肝素，化学和生物学性质，临床应用》(“Heparin，Chemical and BiologicalProperties，Clinical Applications”)，E.Arnold(1989)一书25-49页)。
因此，只能得到所述二糖单元的近似公式(由于肝素的分子微异质性，所述二糖单元并不真实存在)。下列公式与符合USP-EP规范的注射用肝素的实验分析数据良好吻合：
Figure A20051000915200111
其中：R＝NaSO3或H
m＝1且n≥4
m+n约等于9
所述二糖单元(R＝H时)的分子式是C12H15O16NS2Na3
所述二糖单元(R＝H时)的分子量是562。
所述能从注射用肝素获得低分子量肝素的解聚合反应除了分子量降低以及与其相关的性质改变(如粘性)外，没有对整个多糖链产生显著改变。
因此，在所述的LMWH-TEA中TEA理论含量的计算中，我们认为除了Na+改变为三乙醇铵离子这一唯一改变，所述二糖单元保持完整。
因而，按照上述示意分子式，100克LMWH钠盐包含了在三乙醇胺盐组合物中将被0.52摩尔三乙醇胺(以0.52摩尔三乙醇铵离子的形式)取代的12.1克Na+(0.527克Na+原子)。
三乙醇铵离子的分子量是150.2，因此0.527摩尔三乙醇铵离子＝150.2×0.527＝79.15克。
在离子交换中：
100克LMWH钠盐失去12.1克Na+并获得79.15克三乙醇铵，产生167.0克LMWH-TEA。
因此，
2)LMWH-TEA中硫元素(S)的理论含量
按照所述作为起始点接受的二糖单元，S％＝11.4％，这一数据与符合USP-EP规范的注射用肝素所表现出的分析数据良好吻合。
在所述注射用肝素的解聚合作用以及随后解聚合产物与TEA的成盐作用中，没有丢失硫元素(S)，所以在LMWH-TEA中硫含量的理论数据应该是：
Figure A20051000915200113
3)LMWH-TEA中生物学活性的理论计算
通过注射用肝素的自由基裂解方法(如欧洲专利268885和美国专利4977250中所引用的)获得的低分子量肝素(钠盐)具有抗Xa活性
Figure A20051000915200121
90国际单位/毫克和抗IIa活性
Figure A20051000915200122
40国际单位/毫克。
考虑到由于在去除Na+以及与三乙醇胺成盐时所述二糖单元分子量的提高对这些值的稀释，我们得到以下结果：
100克LMWH-Na＝167克LMWH-TEA
因此，
Figure A20051000915200123
4)理论分析数据与所述二糖单元的公式的比较
 注射用肝素 低分子量肝素钠盐 LMWH-TEA
硫S/COO-Na+三乙醇胺分子量(HPSEC)所述二糖残基分子式所述二糖残基分子量  11.4％2.112.1％-12000-13500C12H15O16NS2Na3563 11.4％2.112.1％-4000-6000C12H15O16NS2Na3563 6.8％2.1-47.4％4000-6000C12H15O16NS2[NH(CH2CH2OH)3]944
5)LMWH-TEA理论与实验数据的比较
            理论数据           实验数据
三乙醇胺    47.4％             48-50％硫          6.8％              6.8％S/COO-     2.1                2.1抗Xa活性    54国际单位/毫克    50-51国际单位/毫克抗IIa活性   24国际单位/毫克    24国际单位/毫克
6)LMWH-TEA的光谱特征(13C-NMR)
LMWH-TEA样品以180毫克/毫升的浓度溶于1∶1的H2O∶D2O中。如图1所表示的，核磁共振谱用分光计BRUCKER AM-500(13C-125MHz)记录。
在56.1和56.3ppm处观察到三乙醇胺的信号，随后在对100.1ppm和102.6ppm处C1信号(相应地是硫酸化的和游离的)的相对积分的基础上，测定2硫酸艾杜糖醛酸(Idu 20S)相对于全部糖醛酸的相对浓度。通过相同的方式，测定了全部N-硫酸氨基葡萄糖(Glu NS)/氨基葡萄糖(59；54.6 y 53ppm)。获得的数据绘制在下表中：
             Idu 20S  Glu NS  Glu 60S  Glu N/Idu H
 LMWH-TEA    75％     85％    77％     1∶1.67
7)采用的分析技术
注射用肝素的抗凝血剂活性按照欧洲药典2002(EP活性)和美国药典26(USP活性)测定。
抗Xa活性和抗IIa活性按照低分子量肝素的文献(欧洲药典2002)测定。
分子量分布以及平均分子量按照低分子量肝素的文献(欧洲药典2002)测定，因此在移动相缓冲液中TEA被Na+取代，随后获得的数据属于多糖钠盐而不是三乙醇胺盐。
三乙醇胺通过电势滴定定量。
8药理学实验：功效检验
如本发明所述的LMWH-TEA化合物用于药理学检测以检验其功效。
用这样的标准，实验室培养的洁净Wister大鼠(雌性)用作测试用的哺乳动物。
具体地说，所述建立的血栓模型包括通过诸如κ-角叉胶的促血栓性物质的静脉注射(右尾部静脉)在实验大鼠的尾巴中产生实验用血栓。未经其他处理的情况下，实验动物的尾巴完全形成不随时间缓解的血栓，并在3-4天后坏死。
然而，用局部使用的含LMWH-TEA(比率为1000单位抗Xa活性/克乳膏)的乳膏局部处理表现出非常显著的恢复活性，该活性远高于相同条件下通过局部使用的肝素和LMWH钠盐给药所表现出的活性。
具体地说，所述测试按照Beckmeier等人著作(《物质与作用》(“Agents andActions”)，16，446(1985)中的基本要点如下进行：
a. 动物：体重200-300克的雌性大鼠。
b. 血栓形成溶液：无菌生理液中的1毫克/毫升的III型κ-角叉胶溶液(Sigma C1263)。按1毫升/公斤体重的量注射大鼠(右尾部静脉，0.25毫升)。
c. 血栓诱导：在预先剃去毛发的尾巴根部附近(从尾巴末端起15厘米)放置一个压脉器。一分钟后注射血栓形成溶液并将所述动物尾巴立即浸入冰水中30秒，将水移去后将尾巴干燥并保持压脉器附加30秒。随后，所述动物在10℃的环境中保持2分钟。
d. 功效检验：随后，用相应地包含1000抗Xa活性单位/克LMWH-TEA、LMWH钠盐和1000国际单位/克局部用肝素的实验乳膏沿着遭梗塞的尾巴对每组实验动物(每种乳膏制剂对应3只实验大鼠)用药。另外三只实验动物未经上述处理并作为对照组。
通过在κ-角叉胶注射后2、4、18、24和72小时检测每个病例中遭梗塞(用毫米为单位)的尾巴的一部分对所述动物进行控制。
获得的结果表示在下表中：
时间  2小时  4小时  18小时  24小时  72小时
对照  134  134  134  134  133
乳膏I  18  13  (*)  -  -
乳膏II  44  44  43  40  39
乳膏III  110  100  92  92  86
乳膏I：1000抗Xa活性国际单位/克的LMWH-TEA
乳膏II：1000抗Xa活性国际单位/克的LMWH钠盐
乳膏III：1000国际单位/克的局部用肝素
(*)：非常微小的斑点
为了清楚地说明问题，在每个实验组和对照组中选取注射后24小时的动物尾巴在图2至图5中表示。
在本项测试中，局部使用的乳膏按照下列公式制备，所述公式不是对所述方法的限制：
乳膏I 乳膏II 乳膏III
单硬脂酸甘油酯 100克 100克 100克
十二烷基油酸 60克 60克 60克
十八烷酮醇(ketostearyl alcohol) 60克 60克 60克
聚乙二醇酮(ketomacrogol) 30克 30克 30克
LMWH-TEA盐 106抗Xa活性 - -
LMWH钠盐 - 106抗Xa活性 -
局部用肝素 - - 106国际单位
羟苯甲酯 1.6克 1.6克 1.6克
羟苯丙酯 0.4克 0.4克 0.4克
足量无菌蒸馏水 1000克 1000克 1000克
使用标识为乳膏I(LMWH-TEA盐)的皮肤用制剂18个小时后，观察到血栓症状的完全消除，这一测试为乳膏I相对于其他两种乳膏所具有的显著功效提供了书面证据。

Claims (15)

1.用作供局部施用的抗血栓形成治疗剂的低分子量肝素三乙醇胺盐，其特征在于，所述盐总量的至少60％具有小于8000Da的分子量且平均分子量介于4000-6000Da，所述盐还含有重量百分比为6.1-7.5％的有机硫(理论含量6.8％)和重量百分比为42.6-52.1％的三乙醇胺(理论含量47.4％)。
2.制备如权利要求1所述的肝素盐的方法，其特征在于，所述方法包括通过渗滤，在pH介于5.0到5.5时用水溶液从4-6％的三乙醇胺中去除低分子量肝素的无机平衡离子。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述无机平衡离子优选自钠离子、钾离子、钙离子、镁离子和铵离子。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述低分子量肝素是通过热分解pH为4-7的15-25％的注射用肝素水溶液上的温度为0-5℃的1M次氯酸水溶液，并在70-100℃下回流获得的。
5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述低分子量肝素是通过在亚铁离子浓度为10到-100ppm，过氧化氢浓度为H2O2/多糖的摩尔比达到6-15，pH为4-7，且温度为60-120℃的条件下，由亚铁离子催化的过氧化氢在注射用肝素上的自由基分解反应获得的。
6.制备如权利要求1所述的肝素盐的方法，其特征在于，所述方法包括去除低分子量肝素的无机平衡离子，具体是在酸性相中用离子交换树脂处理，随后在15-25℃的温度用碱性三乙醇胺(99％)中和洗提的酸性多糖，将洗脱物的pH调至5.0-5.5。以
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述无机平衡离子优选自钠离子、钾离子、钙离子、镁离子和铵离子。
8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述低分子量肝素是通过热分解pH为4-7的15-25％的注射用肝素水溶液上的温度为0-5℃的次氯酸水溶液，并在70-100℃下回流获得的。
9.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述低分子量肝素是通过在亚铁离子浓度为10到-100ppm，过氧化氢浓度为H2O2/多糖的摩尔比达到6-15，pH为4-7，且反应温度为60-120℃的条件下，由亚铁离子催化的过氧化氢在注射用肝素上的自由基分解反应获得的。
10.消除如权利要求1所述的低分子量肝素三乙醇胺盐的吸湿性的方法，其特征在于，所述方法包括将所述盐溶于水使其浓度达到13-17％，按照每60份所述盐对应30-50份甘露醇或山梨醇的等价量添加甘露醇或山梨醇，全部溶于水溶液并冻干。
11.包括如权利要求1所述的低分子量肝素三乙醇胺盐的、在抗血栓形成治疗中局部使用的药物组合物，其特征在于，所述盐以药物活性量存在，即每克稀释在适当赋形剂中的局部使用的成分中含有100-2000国际单位抗XA。
12.如权利要求11所述的药物组合物，其特征在于，所述赋形剂选自糖类聚合物的含水凝胶、水包油型乳膏或乳剂、或水性碱或水醇性碱的软膏()。
13.低分子量肝素三乙醇胺盐作为局部用药的抗血栓形成治疗剂的应用，其特征在于，所述盐用于静脉曲张、痔疮、创伤性水肿或术后血肿或静脉炎的治疗、缓解或预防。
14.如权利要求13所述的应用，其特征在于，所述术后血肿是由整形手术或整容手术引起的。
15.如权利要求14所述的应用，其特征在于，所述静脉炎是由化疗剂的静脉内灌输引起的。
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