JP2005218444A - 細胞培養容器 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 本発明の細胞培養容器は、ポリマーシートで成型された容器において、ポリマーを構成する炭素原子に結合する水素原子の一部がフッ素原子に置換された細胞培養容器、とりわけポリマーシートで成型された容器の表面、例えば内表面において、ポリマーを構成する炭素原子に結合する水素原子の一部がフッ素原子に置換された細胞培養容器は、培地への異物の混入が抑制され、しかも優れた細胞増殖能を有し、より効率的な大量細胞培養が可能である。
Description
(1)ポリマーシートで成型された容器において、ポリマーを構成する炭素原子に結合する水素原子の一部がフッ素原子に置換された細胞培養容器、
(2)ポリマーシートで成型された容器の表面において、ポリマーを構成する炭素原子に結合する水素原子の一部がフッ素原子に置換された上記(1)項に記載の細胞培養容器、
(3)ポリマーシートで成型された容器の内表面において、ポリマーを構成する炭素原子に結合する水素原子の一部がフッ素原子に置換された上記(1)項に記載の細胞培養容器、
(4)ポリマーが、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、ポリエステル、シリカ系ポリマーまたはポリオレフィンである上記(1)項に記載の細胞培養容器、
(5)ポリマーが、ポリエチレンである上記(1)項に記載の細胞培養容器、
(6)酸素透過係数が、約100〜5000cm3/m2・24hr・atmである上記(1)項に記載の細胞培養容器、
(7)二酸化炭素透過係数が、約1000〜20000cm3/m2・24hr・atmである上記(1)項に記載の細胞培養容器、
(8)ポリマーシートで成型された容器と、フッ素ガスとを、不活性ガス存在下で反応させることにより得られる、ポリマーを構成する炭素原子に結合する水素原子の一部がフッ素原子に置換されたポリマーシートで成型されてなる細胞培養容器、
(9)フッ素ガスの含有量が不活性ガスに対して約0.1〜20.0容量%である上記(8)項に記載の細胞培養容器、
(10)ポリマーシートで成型された容器の内表面とフッ素ガスとを、不活性ガス存在下で反応させる上記(8)項に記載の細胞培養容器、
(11)ポリマーシートで成型された容器と、フッ素ガスとを不活性ガス存在下で反応させることを特徴とするポリマーを構成する炭素原子に結合する水素原子の一部がフッ素原子に置換されたポリマーシートで成型された細胞培養容器の製造方法、及び
(12)ポリマーシートで成型された容器の内表面とフッ素ガスとを、不活性ガス存在下で反応させる上記(11)項に記載の細胞培養容器の製造方法に関する。
直鎖状低密度ポリエチレン(三井化学社製)をTダイ法によりシート(厚み:100μm)を作成した。Tダイ法における条件は、溶融温度170℃、引っ張り速度25m/minとした。このシートを6×10センチ四方にカットし、2枚のポリエチレンシートの間に細胞懸濁液の流入ポートおよび流出ポートを設けた状態で重ね、縁部をヒートシール法によりバッグ状に成型することでポリエチレンバッグの細胞培養容器を作成した。この細胞培養容器の流入ポートおよび流出ポートからバッグ内部に、大気圧下、30℃でフッ素ガス10容量%を含有した窒素ガスを1分間流すことにより、細胞培養容器を製造した。
直鎖状低密度ポリエチレン(三井化学社製)をTダイ法によりシート(厚み:100μm)を作成した。Tダイ法における条件は、溶融温度170℃、引っ張り速度25m/minとした。このシートを6×10センチ四方にカットし、2枚のポリエチレンシートの間に細胞懸濁液の流入ポートおよび流出ポートを設けた状態で重ね、縁部をヒートシール法によりバッグ状に成型することでポリエチレンバッグの細胞培養容器を作成した。この細胞培養容器の流入ポートおよび流出ポートからバッグ内部に、大気圧下、30℃でフッ素ガス10容量%を含有した窒素ガスを1分または180分間流すことにより、細胞培養容器(2種類)を製造した。
直鎖状低密度ポリエチレン(三井化学社製)をインフレーション法によりシート(厚み:100μm)を作成した。インフレーション法における条件は、溶融温度170℃、引っ張り速度25m/minとした。このシートを10センチ四方にカットし、2枚のポリエチレンシートの間に細胞懸濁液の流入ポートおよび流出ポートを設けた状態で重ね、縁部をヒートシール法によりバッグ状に成型することでポリエチレンバッグの細胞培養容器を作成した。この細胞培養容器の流入ポートおよび流出ポートからバッグ内部に、大気圧下、25℃でフッ素ガス15容量%を含有した窒素ガスを1分間流すことにより、細胞培養容器を製造した。
直鎖状低密度ポリエチレン(三井化学社製)をインフレーション法によりシート(厚み:100μm)を作成した。インフレーション法における条件は、溶融温度170℃、引っ張り速度25m/minとした。このシートを10センチ四方にカットし、2枚のポリエチレンシートの間に細胞懸濁液の流入ポートおよび流出ポートを設けた状態で重ね、縁部をヒートシール法によりバッグ状に成型することでポリエチレンバッグの細胞培養容器を作成した。この細胞培養容器の流入ポートおよび流出ポートからバッグ内部に、大気圧下、25℃でフッ素ガス5容量%を含有した窒素ガスを5分間流すことにより、細胞培養容器を製造した。
直鎖状低密度ポリエチレン(三井化学社製)をインフレーション法によりシート(厚み:100μm)を作成した。インフレーション法における条件は、溶融温度170℃、引っ張り速度25m/minとした。このシートを10センチ四方にカットし、2枚のポリエチレンシートの間に細胞懸濁液の流入ポートおよび流出ポートを設けた状態で重ね、縁部をヒートシール法によりバッグ状に成型することでポリエチレンバッグの細胞培養容器を作成した。この細胞培養容器の流入ポートおよび流出ポートからバッグ内部に、大気圧下、25℃でフッ素ガス10容量%を含有した窒素ガスを10分間流すことにより、細胞培養容器を製造した。
実施例1で得られた細胞培養容器、比較対照として、(1)実施例1に記載のフッ素ガスで処理する前のポリエチレン容器(PE)、(2)フッ素ガスで処理されていないポリテトラフルオロエチレン(厚み:100μm)容器(PTFE)及び(3)フッ素ガスで処理されていないテトラフルオロエチレン・ヘキサフルオロプロピレン共重合体(厚み:100μm)容器(FEP)の内表面の元素分析値並びに容器の酸素ガス及び二酸化炭素(炭酸ガス)の透過性を測定した。
元素分析値は、蛍光X線分析(島津蛍光X線分析装置XRF―1700)を用いて測定した。酸素及び二酸化炭素のガス透過性はJIS K 7126法(ISO 2556に記載の方法)に準拠し、ガス透過性測定装置(MT−C3、東洋精機製作所)を用いて測定した。
結果を表1に示す。
表1 内表面ポリマーの元素分析値及びガス透過性
供試サンプル(実施例1)は比較対照(1)とほぼ同等のガス透過性を示した。比較対照(3)の酸素透過性は、供試サンプル(実施例1)の約80%であるが、培養液のpH値維持に必要な二酸化炭素透過性は、供試サンプル(実施例1)の約40%と低い値であった。
供試サンプル(実施例1)のバッグ状容器の外表面では、フッ素原子が検出限界以下であり、バッグ状容器のフッ素ガス処理によりフッ素原子で置換されている部分は、バッグ状容器の内表面のごく浅い部分であることが示された。
実施例1で得られた細胞培養容器、及び比較対照として実施例1に記載のフッ素ガス処理前の直鎖状低密度ポリエチレン容器に、ヒト白血病細胞株のMOLT−4細胞を懸濁した10%牛胎児血清を含んだRPMI1640培地(MOLT−4細胞株の播種濃度:1.0×104cells/ml)5mlをそれぞれ加え、37℃/5%二酸化炭素/99%RH(相対湿度)で10日間培養を行った。培養5日目より、バッグ状容器から培養液の一部をサンプリングし、ヘモサイトメーターによりバッグ状容器内の細胞濃度を算出した。
結果を表2に示す。
表2 MOLT−4細胞濃度(×104cells/ml)
本発明の実施例1の細胞培養容器は、比較対照のフッ素置換されていないポリエチレン容器より優れた細胞増殖能を示すことは明らかである。
実施例2で得られた2種類の細胞培養容器〔フッ素ガス処理時間が1分間で製造された容器(本発明(1))及びフッ素ガス処理時間が180分間で製造された容器(本発明(2))〕、及び比較対照として市販のポリスチレン製の培養フラスコ(25cm2フラスコ、カタログ番号430639、コーニング社製、米国)に、ヒト白血病細胞株のMOLT−4細胞を懸濁した10%牛胎児血清を含んだRPMI1640培地(MOLT−4細胞株の播種濃度;1.0×105cells/ml)5mlを加え、37℃/5%二酸化炭素/99%RH(相対湿度)で、6日間培養を行った。バッグ状容器から培養液の一部をサンプリングし、実験例2に記載の方法と同様な方法によりバッグ状容器内の細胞濃度を算出した。
結果を表3に示す。
表3 MOLT−4細胞濃度
本発明の細胞培養容器(フッ素ガス処理時間が1分間)は、明らかに比較対照の容器より優れた細胞増殖倍率を示す。
実施例2で得られた2種類の細胞培養容器〔フッ素ガス処理時間が1分間で製造された容器(本発明(1))及びフッ素ガス処理時間が180分間で製造された容器(本発明(2))〕、及び比較対照として市販のポリスチレン製の培養フラスコ(25cm2フラスコ、カタログ番号430639、コーニング社製、米国)の内表面ポリマーの元素分析値(炭素原子及びフッ素原子)及び水接触角を表4に示す。
元素分析は、実験例1に記載の方法と同様に行い、水接触角はJIS K 6768 (ISO 8296)に記載の方法で測定した。
表4 元素分析値及び水接触角
水接触角度から、本発明の細胞培養容器(フッ素ガス処理時間が1分間)の内表面は、やや親水性を示すことが明らかとなった。
Claims (12)
- ポリマーシートで成型された容器において、ポリマーを構成する炭素原子に結合する水素原子の一部がフッ素原子に置換された細胞培養容器。
- ポリマーシートで成型された容器の表面において、ポリマーを構成する炭素原子に結合する水素原子の一部がフッ素原子に置換された請求項1に記載の細胞培養容器。
- ポリマーシートで成型された容器の内表面において、ポリマーを構成する炭素原子に結合する水素原子の一部がフッ素原子に置換された請求項1に記載の細胞培養容器。
- ポリマーが、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、ポリエステル、シリカ系ポリマーまたはポリオレフィンである請求項1に記載の細胞培養容器。
- ポリマーが、ポリエチレンである請求項1に記載の細胞培養容器。
- 酸素透過係数が、約100〜5000cm3/m2・24hr・atmである請求項1に記載の細胞培養容器。
- 二酸化炭素透過係数が、約1000〜20000cm3/m2・24hr・atmである請求項1に記載の細胞培養容器。
- ポリマーシートで成型された容器とフッ素ガスとを、不活性ガス存在下で反応させることにより得られる、ポリマーを構成する炭素原子に結合する水素原子の一部がフッ素原子に置換されたポリマーシートで成型されてなる細胞培養容器。
- フッ素ガスの含有量が不活性ガスに対して約0.1〜20.0容量%である請求項8に記載の細胞培養容器。
- ポリマーシートで成型された容器の内表面とフッ素ガスとを、不活性ガス存在下で反応させる請求項8に記載の細胞培養容器。
- ポリマーシートで成型された容器と、フッ素ガスとを不活性ガス存在下で反応させることを特徴とするポリマーを構成する炭素原子に結合する水素原子の一部がフッ素原子に置換されたポリマーシートで成型された細胞培養容器の製造方法。
- ポリマーシートで成型された容器の内表面とフッ素ガスとを、不活性ガス存在下で反応させる請求項11に記載の細胞培養容器の製造方法。
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